JPH0912462A - Ｔ４リンパ球へのｌａｖウイルス感染を防止する方法 - Google Patents

Ｔ４リンパ球へのｌａｖウイルス感染を防止する方法

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JPH0912462A
JPH0912462A JP8137176A JP13717696A JPH0912462A JP H0912462 A JPH0912462 A JP H0912462A JP 8137176 A JP8137176 A JP 8137176A JP 13717696 A JP13717696 A JP 13717696A JP H0912462 A JPH0912462 A JP H0912462A
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lymphocyte
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ダヴイド・クラツツマン
Jean-Claude Gluckman
ジヤン−クロード・グリユツクマン
Luc Montagnier
リユツク・モンテニエ
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Universite Pierre et Marie Curie Paris 6
Institut Pasteur de Lille
Universite de Paris
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Universite Pierre et Marie Curie Paris 6
Institut Pasteur de Lille
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 Ｔ４リンパ球がＬＡＶウイルスに感染するこ
とを防止する。 【解決手段】 Ｔ４リンパ球をＴ４蛋白質又はその断片
に接触させる方法。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、リンパ節疾患及び後天性免疫不
全症候群の病因物質からＴリンパ球を保護する方法及び
組成物に係る。
【０００２】上記疾患の病因物質が最近同定された。こ
れはＬＡＶと指称されるウイルスである。このウイルス
及びこのウイルスの種々の変異株は、１９８４年９月１
４日出願のパスツール研究所(Institut Pasteur)の欧州
特許出願（優先権：１９８３年９月１５日付の英国特許
出願第８３ ２４８００号）、「リンパ節疾患及び後天
性免疫不全症候群を診断するための抗原、媒体及び方
法」、に於いて完全に同定済みである。更に米国に於い
ても同型ウイルスが単離され、ＨＴＬＬＶ−IIIと命名
された（サイエンス（ＳＣＩＥＮＣＥ）、１９８４，２
２４巻、４６４８，４９７）。
【０００３】説明の便宜上、以後の記載では後者をもＬ
ＡＶウイルスと指称する。この指称が均等な特性をもつ
全てのウイルスを包含することは言う迄もない。
【０００４】現在の定説では、Ｔ−ヘルパーリンパ球、
特に、抗原決定基を担持するＯＫＴ４+ 細胞即ち「Ｔ４
+ リンパ球」（３Ｌｅｕ細胞）（以後の記載ではこの指
称を用いる）がウイルスの主な標的であるらしい。
【０００５】これらリンパ球は、オルト・ファーマシュ
ーティカル・コーポレーション（ORTHO PHARMACEUTICAL
CORPORATION）から商品名ＯＫＴ４として市販されてい
る別のモノクローナル抗体によって認識され得る特性を
もつ。該モノクローナル抗体に関しては１９８０年４月
２５日の欧州特許出願第１８，７９４号に詳細に記載さ
れている。また、このモノクローナル抗体が分子量６２
０００ダルトンのタンパクを特に認識することも確認済
である。このことは、低濃度の過ヨウ素酸ナトリウムの
存在中で穏やかに酸化させてからトリチウム化水素化ホ
ウ素ナトリウムでラベルしたヒト胸線細胞のライゼート
を免疫沈降させる方法で発見された（シー・ターホース
ト（Ｃ．ＴＥＲＨＯＲＳＴ）等、サイエンス、（１９８
０），２０９，５２０−５２１）。このタンパクは上記
の発見者等によって「Ｔ４抗原」と命名された。以後の
記載では該抗原を「Ｔ４タンパク」とも指称する。
【０００６】本発明は、（以後ＬＡＶと総称される）上
記ウイルスがＴリンパ球に感染する過程に於いてＴ４タ
ンパクが主要な役割を果すらしいという知見に基く。よ
り詳細にはＴリンパ球の感染過程はウイルスとＴ４分子
との相互作用に依存しており、Ｔ４分子が膜表面でのウ
イルス受容体の機能を果すと考えられる。Ｔ４+ リンパ
球の細胞培養物をＬＡＶウイルスで感染させる実験に於
いて、普通にはこの感染が生じるような実験条件を用い
抗−Ｔ４モノクローナル抗体を存在させて実験すると感
染が生じないことが確認され、これによって上記の如き
ウイルスとＴ４+ 分子との相互作用が認識されたのであ
る。特に、イー・エル・ラインハーツ（Ｅ．Ｌ．Ｒｅｉ
ｎｈｅｒｚ）等、プロシーディング・オブ・ナショナル
・アカデミック・サイエンス（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ）、米国（１９７９）、７６巻、４０６
１−４０６５、に記載の培養条件を用い、同時に抗−Ｔ
４モノクローナル抗体を含有する培地を使用すると感染
に特有の免疫ケイ光は検出されない。対照的に、Ｔリン
パ球に存在するＴ４タンパク以外の抗原に対応するモノ
クローナル抗体は、同じ条件下でのＬＡＶウイルスによ
るＴリンパ球の感染を全く阻害しない。
【０００７】全般的には本発明は、ＬＡＶウイルスのＴ
リンパ球侵入のレベル及び感染Ｔリンパ球内部の感染性
ウイルスの阻害又は破壊のレベル双方を含む感染過程に
於いてウイルスを干渉阻害する方法及び組成物に係る。
【０００８】組成物の特徴成分は勿論抗−Ｔ４抗体、よ
り一般的には、受容体たるＴ４タンパクを封鎖し得る全
ての分子から成り、組成物とＴリンパ球とのインビトロ
又はインビボの接触を容易にするための任意のベヒクル
が配合されている。
【０００９】方法の特徴は、Ｔリンパ球と抗−Ｔ４抗体
とをインビトロ又はインビボで接触させることである。
【００１０】この抗−Ｔ４抗体は好ましくは、欧州特許
出願第１８，７９４号に記載の抗体の本質的特性を備え
たモノクローナル抗体から成る。即ちより詳細には、
「アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Am
erican Type Culture Collecttion 」、１２３０１、パ
ークローン・ドライブ（Parklawn Drive）、ロックヴィ
ル（ＲＯＣＫＶＩＬＬＥ）、ＭＤ２０ ８５２、米国、
に１９７９年４月２８日寄託されたオルト・ファーマシ
ューティカル・コーポレーションのハイブリドーマによ
って分泌されたモノクローナル抗体から成る。このハイ
ブリドーマは受託番号ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８００２であ
る。
【００１１】類似特性を備えた全ての抗体が、前記ハイ
ブリドーマによって分泌される抗体に代替し得ることは
自明である。
【００１２】特に本発明の組成物は、Ｔ４+ リンパ球に
対応して予め形成されたポリクローナル抗体を含有して
もよい。但し、これらポリクローナル抗体のうちのいく
つかは特にＴ４タンパクに有効に結合し得ることが判明
していなければならない。
【００１３】本発明組成物は、上記以外にも、Ｔ４タン
パクに対して同様のアフィニティを有し得るいかなる物
質を含有してもよい。特に適当な物質は、ＯＫＴ４抗体
よりも小さいサイズを有するが、Ｔ４タンパクとの結合
部位にＯＫＴ４抗体との共通部分をもつポリぺプチドか
ら成る。
【００１４】従って、本発明の実施態様の１つの例によ
れば、前記の如き抗−Ｔ４抗体又はこれと均等な特性を
備えた分子と薬学的に許容できる賦形剤との配合から成
る薬剤好ましくは注射用薬剤、特に、好ましくは等張性
の無菌注射用水溶液が提供される。勿論該組成物は、予
想されるＴ４リンパ球のＬＡＶウイルス感染をインビボ
で防止又は阻止するだけの薬効を確保する用量で投与さ
れる必要がある。即ち、感染阻止とは、活性物質対ウイ
ルスの前記受容体に対する競合に於いて活性物質に有利
な結果が得られることを意味する。
【００１５】組成物は、単独使用、特に予防薬として単
独使用されてもよく、又は、別の薬剤と配合もしくは併
用されてもよい。
【００１６】例えば組成物が、抗−Ｔ４抗体（又は均等
分子）と健常提供者のリンパ球とを配合した組成物であ
ってもよい。複数種の併用成分が同時に投与されてもよ
く、又は、所望の結果を得るために時間的にずらして投
与されてもよい。このような組成物は重態患者の治療法
に於いて特に重要である。即ちこの治療には健常提供者
のリンパ球又は骨髄の移植が含まれるからである。例え
ば移植の際に、抗−Ｔ４抗体（又は類似物質）を併用す
ると、患者体内の感染リンパ球による健常リンパ球のウ
イルス感染が阻止される。また、抗体投与を隔時的に繰
返してもよい。特に、移植後に本発明組成物の活性成分
の補充注射を繰返すと移植リンパ球のウイルス感染を恒
常的に阻止し得る。
【００１７】これまでは本発明の組成物に使用される有
効成分が類似又は修飾抗−Ｔ４抗体からなる場合につい
てのみ言及してきたが、本発明はこれら抗体、特にＯＫ
Ｔ４タイプのモノクローナル抗体が、ウイルスに直接
作用し得る別の物質を細胞のエンドサイト−シスにより
浸透させる構造体に共有結合を介して結合されているよ
うな組成物にも係る。前記別の物質はウイルス、ウイル
スのエンベロープ又はウイルス溶解時に分離し得る或る
種のタンパク質に対する別の抗体で構成し得る。特定的
には１９８４年６月のランセ（ＬＡＮＣＥＴ）１２５３
〜１２５６に記載の如き抗−ＬＡＶ抗体を使用し得る。
前記の別の物質はまた、ウイルスを抑制し更には破壊さ
えする抗ウイルス物質でも構成し得る。使用可能な抗ウ
イルス物質の一例としては仏国特許第７３ ２７５３６
／２２４５３ ７４号に記載のヘテロポリアニオン化合
物、リバベリン（ｒｉｂａｖｅｒｉｎｅ）もしくはリン
コマイシン（リンコシン（ＬＹＮＣＯＣＹＮＥ）の商品
名で市販）又はウィリー・アンド・サンズ（Ｗｉｌｅｙ
ａｎｄ Ｓｏｎｓ）社、ゲール（Ｇａｌｅ）他著「抗
生物質作用の分子基盤（Molecular Basis of Antibioti
c Action）」第２版（１９７２年）、ｐ．６７８に記載
のクリンダマイシンが挙げられる。
【００１８】従って本発明はより特定的には抗−Ｔ４モ
ノクローナル抗体と前述の如き別の物質との間の直接的
又は間接的共有結合によって形成し得る抗毒素に係る。
いずれの場合も抗−Ｔ４抗体は、これに結合した前記物
質の感染Ｔ４リンパ球内でのエンドサイト−シスを促進
する役割を果し、その結果取込まれた前記物質はこれら
Ｔリンパ球内の感染ウイルスの増殖に直接作用し得るよ
うになる。
【００１９】前記抗体及び抗ウイルス物質は各々の性
質、特に化学的特性に適した任意の方法で結合し得る。
一例として、少なくとも１つの直接的共有結合又は架橋
基（治療上許容し得るもの）を介して抗体と抗ウイルス
物質もしくは別の抗体とを結合させる方法がある。
【００２０】このような結合は抗−Ｔ４モノクローナル
抗体が有する相補反応基と抗ウイルス物質もしくは別の
抗体が有する相補反応基とをこれら反応基各々の化学的
性質に応じて選択した縮合剤の存在下で縮合反応させる
ことにより実現し得る。
【００２１】一例として、前記相補反応基が夫々カルボ
キシル基及びアミノ基またはその逆で構成される場合に
は縮合剤をカルボジイミド、例えばｐ−トルエンスルホ
ン酸Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ′−β−（Ｎ−メチル−モ
ルホリノ−エチル）−カルボジイミド及び（３−メチ
ル）−アミノプロピル−カルボジイミド塩酸塩もしくは
ジシクロヘキシル−カルボジイミドで構成し得る。この
場合反応はタンパク質化学で通常使用される条件下で生
起する。
【００２２】縮合剤はまた、前記相補反応基が最初に夫
々メルカプト基及びアミノ基又はその逆である場合には
６−マレイミド−カプロイク−アシル−Ｎ−ヒドロキシ
−サクシンイミドエステル又はＮ−サクシンイミジル−
３−（２−ピリジル−ジチオ）−プロピオネート（ＳＰ
ＤＰ）でも構成し得る。
【００２３】適切な反応条件としては、ジェー・カール
ソン（Ｊ．ＣＡＲＬＳＳＯＮ）他著「生化学誌（Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｊ．）（１９７８年）１７３，７２７〜７３
７頁、又はピー・イー・ソープ（Ｐ．Ｅ．ＴＨＯＲＰ
Ｅ）他著「欧州生化学誌（Ｅｕｒｏｐ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．）」（１９８１年）１１６，４４７〜４５４頁の
論文に記載のものも挙げられる。
【００２４】別の抗体間の結合に関しては、エルスバイ
アー・サイエンス・パブリッシャーズ（Ｅｌｓｅｖｉｅ
ｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、アブラ
メアス（Ａｖｒａｍｅａｓ）他編「イムノエンザイマチ
ック・テクニクス（Ｉｍｍｕｎｏｅｎｚｙｍａｔｉｃ
Ｔｅｃｈｎｉｃｓ）」，１９９７ページ及びパスツール
研究所（Ｌ' Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ）のイ
ムノロジー年報（Ａｎｎａｌｅｓ ｄ' Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｉｅ）１９８３年 第１３４Ｃ巻、２６５〜２７４
ページ、ゲドン（Ｇｕｅｓｄｏｎ），ジュアン（Ｊｏｕ
ａｎｅ）及びアブラメアス（Ａｖｒａｍｅａｓ）の論文
に記載の技術も使用し得る。
【００２５】その他欧州特許出願第０ ０６３ ９８８
号に記載の方法も使用できる。
【００２６】本発明の別の実施例では、モノクローナル
抗体と抗ウイルス物質もしくは別の抗体とをリポソーム
を介して結合させる。より詳細にはリポソーム内に前記
別の物質を封入し、特に例えばＳＰＤＰなどを介する共
有結合によってこれらリポソーム自体を抗−Ｔ４モノク
ローナル抗体と結合させる（生物学化学誌（Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．）（１９８０年）２５５，２０１５〜８
０１８；ネーチャー誌（Ｎａｔｕｒｅ），第２９３巻，
第５８２９号，（１９８１年），２２６〜２２８ペー
ジ；及びスープラモレキュラー構造及び細胞生化学誌
（Journal of Supramolecular Structure and Cellular
Biochemistry ），１６，（１９８１年），２４３〜２
５８ページ参照）。
【００２７】抗−Ｔ４抗体又は類似の抗体の用量は、遊
離抗体であれ又は抗ウイルス物質をリンパ球内へ導入せ
しめる媒体に結合した抗体であれ、患者の状態を考慮し
て臨床医が調節する。患者が後で健康な固体からのリン
パ球又は骨髄を移植されることになっている場合は、よ
り自由に調整し得よう。
【００２８】本発明はインビトロでも、例えば患者から
採取した感染細胞を含むリンパ球などに関して使用し得
る。この場合は感染したこれらリンパ球をウイルス又は
感染細胞の破壊に必要な時間だけ本発明の組成物と接触
させ、その後患者に移植する。
【００２９】本発明は更に遊離状の又は別の物質に結合
した前述タイプのモノクローナル抗体にも係る。これら
の抗体はアフィニティクロマトグラフィの実施に適した
樹脂に固定され、得られる生成物は例えば感染細胞を除
去すべく患者の血液を精製する場合などに使用し得る。
この操作は血液の体外循環の一環として実施し得る。
【００３０】これらのタンパク質は当業者に公知の技術
に従い遺伝子操作によって得ることもできる。
【００３１】本発明は前述の疾患に感染した患者の血漿
に含まれるＬＡＶウイルスを除去する方法にも係る。こ
の方法は、Ｔ４分子を担持するアフィニティカラムに前
記血漿を通し、このようにして含有ＬＡＶウイルスを除
去した後の血漿を回収することからなる。Ｔ４分子担持
カラムは時として当該疾患と係りをもつ自己免疫メカニ
ズムの結果生じる抗−Ｔ４抗体も捕捉し得る。
【００３２】このようにして捕捉される抗−Ｔ４抗体は
通常血漿中に存在する自己抗体で構成される。この操作
はアフィニティカラムを体外循環に組込み、精製すべき
血液を患者から採取し、精製後再び患者に注入すること
で実施し得る。
【００３３】抗−Ｔ４抗体を担持するアフィニティカラ
ムに患者の血漿を通すことにより感染したリンパ球を除
去することもできる。
【００３４】本発明はまた、Ｔ４タンパク自体又はウイ
ルス固定部位を有する該Ｔ４タンパクから得られるペプ
チド断片からなる薬剤組成物にも係る。これらのタンパ
クは例えばシー・ターホースト（Ｃ．ＴＥＲＨＯＲＳ
Ｔ）他、又はイー・エル・ラインヘルツ（Ｅ．Ｌ．ＲＥ
ＩＮＨＥＲＺ）他により前出の文書に記載されている条
件下でＴ４リンパ球培養株から分離し得る。
【００３５】これらのタンパク又はポリペプチドは従っ
てウイルスの固定に関してＴ４リンパ球と競合し得、そ
のためウイルス感染を予防するか又はこの感染が既に進
行している場合にはこれを中断せしめ得る。勿論、使用
するＴ４タンパク（又は同一のウイルス固定部位をもつ
ポリペプチド）はヒトリンパク球に属するものに従うの
が好ましい。この固定部位を有するポリペプチドは、特
に特定結合を識別し得る酵素（例えばアクロマーゼ、ト
リプシン、αキモトリプシン、等々）を用いてＴ４タン
パクを断片化し、且つ得られた断片を抗−Ｔ４モノクロ
ーナル抗体との相互作用により選択することで得られ
る。
【００３６】本発明は更に、所定条件下でのＴ４リンパ
球に対するＬＡＶウイルスの作用を調べるためのインビ
トロ検査用試薬としての前述の如き種々の組成物にも係
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 16/18 Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ // Ｃ１２Ｎ 15/09 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/00 Ａ６１Ｋ 37/02 21/08 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (71)出願人 596076573 ユニヴエルシテ・ピエール・エ・マリー・ キユリー・パリ・シス フランス国、75230・パリ・セデクス・05、 プラス・ジユシユー、４ (72)発明者 ダヴイド・クラツツマン フランス国、75010・パリ、ケ・ドウ・ジ エマツプ、84 (72)発明者 ジヤン−クロード・グリユツクマン フランス国、75005・パリ、ブールヴアー ル・ドウ・ポール・ロワイヤル、70 (72)発明者 リユツク・モンテニエ フランス国、92350・ル・プレシ・ロバン ソン、リユ・ドウ・マラブリ、21

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＬＡＶウイルスと接触する恐れがあるＴ
    ４リンパ球に該ウイルスが固定されるのを防ぎ、かつ該
    リンパ球が該ウイルスに感染するのを防ぐための方法で
    あって、ＬＡＶウイルス固定部位を含有するＴ４タンパ
    ク又は該Ｔ４タンパクの断片に該Ｔ４リンパ球と接触さ
    せることからなっており、該Ｔ４タンパクの量が該タン
    パクおよび該リンパ球の両者と接触するウイルスに対し
    て該リンパ球と競合することができる量であることを特
    徴とする方法。
  2. 【請求項２】 該Ｔ４タンパクまたは該断片がATCC CRL
    8002 というハイブリドーマによって分泌される抗Ｔ４
    抗体によって認識されることを特徴とする請求項１に記
    載の方法。
JP8137176A 1984-09-14 1996-05-30 Ｔ４リンパ球へのｌａｖウイルス感染を防止する方法 Pending JPH0912462A (ja)

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FR8414172 1984-09-14

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