JPH09118632A - Medicine composition for curing and preventing of disease mediated by interleukin-1 - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain a medical composition effective for curing and prevention, etc., of an inflammatory disease such as arthritis transmitted by interleukin-1 by using a polypeptide having a specific amino acid sequence and an active component. SOLUTION: The objective medical composition effective for curing and prevention, etc., of arthritis, inflammatory enteric disease, septic shock and ischemic damage, etc., transmitted by interleukin-1 is obtained by making a formulation in a solid dosage shape by capsuling, etc., with using or not using a usually used carrier, by using an antagonist (IL-1ra) to interleukin-1 receptor as a polypeptide having an amino acid sequence which is at least 70% homologous to the amino acid sequence of the formula [(V) is M or nothing; (X) is R or P] which is sufficiently pure to the degree of determinable of at least a part of the amino acid as an active component.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は種々の疾患および医
学的状態の治療および予防のための医薬組成物に関す
る。本明細書記載の医薬組成物による治療に適する疾患
および医学的状態の共通の要素はインターロイキン−１
の関与である。本発明はインターロイキン−１により媒
介された疾患および医学的状態の治療および予防のため
の医薬組成物に関する。The present invention relates to pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of various diseases and medical conditions. The common component of diseases and medical conditions suitable for treatment with the pharmaceutical compositions described herein is interleukin-1.
Is involved. The present invention relates to pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of diseases and medical conditions mediated by interleukin-1.

【０００２】サイトカインは細胞、特にサイトカインの
合成および放出の領域に存在する細胞の挙動を改変する
細胞外タンパク質である。今までに発見された最も強力
な炎症性のサイトカインの１つで、多くの疾患および医
学的状態において鍵となるメジエーターであると考えら
れているサイトカインはインターロイキン−１ (ＩＬ−
１) である。インターロイキン−１は、それに限定され
るものではないが、マクロファージ／単球系の細胞によ
り生産されるものであり、ＩＬ−１アルファ (ＩＬ−１
ａ) およびＩＬ−１ベータ (ＩＬ−１ｂ) の２つの形態
で生産されうる。[0002] Cytokines are extracellular proteins that modify the behavior of cells, especially in the area of cytokine synthesis and release. One of the most potent inflammatory cytokines discovered to date, and considered to be a key mediator in many diseases and medical conditions, is interleukin-1 (IL-
1). Interleukin-1 can be, but is not limited to, produced by cells of the macrophage / monocyte lineage, and IL-1alpha (IL-1
a) and IL-1 beta (IL-1b) can be produced in two forms.

【０００３】もし、自然発生的なまたは実験による疾患
もしくは医学的状態が体液または組織中のＩＬ−１レベ
ル上昇と関連するか、または身体より採取された細胞ま
たは組織が培養時に高まったレベルのＩＬ−１を生産す
る場合は、その疾患または医学的状態は「インターロイ
キン−１により媒介された疾患」であると考えられる。
多くの場合かかるインターロイキン−１により媒介され
た疾患はまた以下の付加的な２つの条件によっても認識
される： (1)その疾患または医学的状態に関連する病的
所見がＩＬ−１の投与により動物で実験的に模擬できる
こと；および (2)その疾患または医学的状態の実験的動
物モデルで引き起こされた病状がＩＬ−１の作用を阻害
する薬剤での治療によって阻止または消失されうること
である。ほとんどの「インターロイキン−１により媒介
された疾患」においては、３つの条件のうちの少くとも
２つがあてはまり、そして多くの「インターロイキン−
１により媒介された疾患」においては３つの条件すべて
があてはまる。インターロイキン−１により媒介された
疾患または医学的状態を掲げると、それらに限定される
わけではないが、以下のとおりである。[0003] If a spontaneous or experimental disease or medical condition is associated with increased levels of IL-1 in body fluids or tissues, or cells or tissues taken from the body have elevated levels of IL in culture. If it produces -1, the disease or medical condition is considered to be an "interleukin-1 mediated disease."
In many cases, such interleukin-1 mediated diseases are also recognized by the following two additional conditions: (1) the pathology associated with the disease or medical condition is the administration of IL-1; (2) that the condition caused in an experimental animal model of the disease or medical condition can be prevented or eliminated by treatment with an agent that inhibits the action of IL-1; is there. In most “interleukin-1 mediated diseases”, at least two of the three conditions apply, and many “interleukin-1 mediated diseases”.
In "1-mediated diseases" all three conditions apply. Listed, but not limited to, diseases or medical conditions mediated by interleukin-1 are:

【０００４】 １) 関節炎 ２) 炎症性腸疾患 ３) 敗血症性ショック ４) 虚血性損傷 ５) 再灌流損傷 ６) 骨粗鬆症 ７) 喘息 ８) インシュリン糖尿病 ９) 骨髄性および他の白血病 10) 乾癬 11) 悪液質／食欲不良 関節炎は程度の違いはあるが世界中で何百万もの人を苦
しめ不具にしている慢性の関節疾患である。この病気は
代表的には顕微鏡レベルにおける滑液組織の炎症によっ
て、および関節軟骨および骨を構成する分子成分の進行
性退化によって特徴づけられる。関節の持続的な炎症と
腐食により、しばしば相当な苦痛、腫脹および機能の喪
失に至る。1) Arthritis 2) Inflammatory bowel disease 3) Septic shock 4) Ischemic injury 5) Reperfusion injury 6) Osteoporosis 7) Asthma 8) Insulin diabetes 9) Myelogenous and other leukemia 10) Psoriasis 11) Cachexia / Inappetence Arthritis is a chronic joint disease that, to varying degrees, afflicts and cripples millions of people worldwide. The disease is typically characterized by inflammation of synovial tissue at the microscopic level and by progressive degeneration of the molecular components that make up articular cartilage and bone. Persistent inflammation and erosion of the joint often leads to considerable pain, swelling and loss of function.

【０００５】[0005]

【従来の技術】関節炎の原因はほとんど理解されていな
いが、最近になり炎症の分子面に関してかなりの量の情
報が得られている。この研究により或る種のサイトカイ
ン類が同定され、これらは炎症の媒介に突出した意味を
もつと考えられる。関節炎におけるインターロイキン−
１の関与は別個の２系統の証拠によって示される。第１
に、インターロイキン−１のおよびこれをコードするｍ
ＲＮＡレベルの増大が関節の滑液組織および滑液中に見
出されている。関連文献には G. Buchan等、Third Annu
al General Meeting of the British Society for Rheu
matology, London, England, November 19-21, 1988, P
R. J. Rheumatol 25 (補遺 2) 1986; A. Fontanaら、Rh
eumatology Int., 2, pp. 49-53 (1982); および G. Du
ffら、Monokines and Other Non-Lymphocytic Cytokine
s, M. Powanda ら編、pp. 387-392,1988 Alan R. Liss,
Inc. が含まれる。BACKGROUND OF THE INVENTION Although the causes of arthritis are poorly understood, a considerable amount of information has recently been obtained on the molecular aspects of inflammation. This study identified certain cytokines that may have prominent implications in mediating inflammation. Interleukin in arthritis
One involvement is indicated by two separate lines of evidence. First
The interleukin-1 and m encoding it
Increased RNA levels have been found in synovial fluid tissue and synovial fluid. Related publications include G. Buchan et al., Third Annu
al General Meeting of the British Society for Rheu
matology, London, England, November 19-21, 1988, P
RJ Rheumatol 25 (Addendum 2) 1986; A. Fontana et al., Rh
eumatology Int., 2, pp. 49-53 (1982); and G. Du
ff et al., Monokines and Other Non-Lymphocytic Cytokine
s, M. Powanda et al., pp. 387-392, 1988 Alan R. Liss,
Inc. is included.

【０００６】第２に、健康な関節組織へのインターロイ
キン−１の投与により、多数の場合に軟骨および骨の腐
食を生ずることが示されている。 E. Pettipher らの P
roc.Natl. Acad. Sci. USA, 第83巻, 第8749〜8753頁,
11月, 1986に記載されるように、或る実験においてはＩ
Ｌ−１をウサギに関節内注射すると、インビボで軟骨の
破壊を生ずることが示された。他の研究では、ＩＬ−１
は組織の外植片における軟骨および骨の両方の退化を生
ずることが示された。関連する文献には J. Saklataval
a ら、Development of Diseases of Cartilage and Bon
e Matrix, AlanR. Liss, Inc., pp. 291-298, および
P. Stashenko ら、The American Association of Immun
ologists, Vol. 138, pp. 1464-1468, No.5, March 1,
1987,が包含される。Second, administration of interleukin-1 to healthy joint tissue has been shown to result in cartilage and bone erosion in many cases. E. Pettipher et al. P
roc.Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 83, pp. 8749-8753,
In some experiments, as described in November, 1986, I
Intra-articular injection of L-1 into rabbits has been shown to cause cartilage destruction in vivo. In other studies, IL-1
Has been shown to cause both cartilage and bone degeneration in tissue explants. Related literature includes J. Saklataval
a et al., Development of Diseases of Cartilage and Bon
e Matrix, AlanR. Liss, Inc., pp. 291-298, and
P. Stashenko et al., The American Association of Immun
ologists, Vol. 138, pp. 1464-1468, No. 5, March 1,
1987, is included.

【０００７】ＩＬ−１と炎症の間の因果関係を説明する
のに用いられる一般的に受け入れられている説は、ＩＬ
−１が繊維芽細胞および軟骨細胞のような種々の種類の
細胞を刺激して、プロスタグランジンＥ２およびコラゲ
ナーゼのような前炎症性または退化性化合物を生産およ
び分泌するということである。従って、本発明者らはイ
ンターロイキン−１の活性を妨害する物質が出現して関
節炎のような炎症性疾患の治療に使用するためのすぐれ
た候補になるであろうと想定している。[0007] A generally accepted theory used to explain the causal relationship between IL-1 and inflammation is that IL
-1 stimulates various types of cells such as fibroblasts and chondrocytes to produce and secrete pro-inflammatory or degenerating compounds such as prostaglandin E2 and collagenase. Thus, the inventors hypothesize that substances that interfere with the activity of interleukin-1 will emerge and will be excellent candidates for use in treating inflammatory diseases such as arthritis.

【０００８】炎症性腸疾患 (「ＩＢＤ」) は腸管組織の
急性および慢性の炎症性状態の両方について述べるのに
用いられる用語であって、潰瘍性大腸炎およびクローン
病として知られる２つの一般的に別個の病気を包含す
る。潰瘍性大腸炎は結腸粘膜の潰瘍である。回腸炎、回
結腸炎および結腸炎ともよばれるクローン病は、一般的
に腸管全体にわたり見出されうる経壁的炎症である。[0008] Inflammatory bowel disease ("IBD") is a term used to describe both acute and chronic inflammatory conditions of intestinal tissue and is a common term for ulcerative colitis and Crohn's disease. Include separate diseases. Ulcerative colitis is an ulcer of the colonic mucosa. Crohn's disease, also called ileitis, ileocolitis and colitis, is a transmural inflammation that can generally be found throughout the intestinal tract.

【０００９】ＩＢＤは潰瘍、陰窩 (crypt abbesses) お
よび著しい繊維症を伴う経壁の急性および慢性の肉芽腫
性炎症を含む種々の組織学的特性によって特徴づけられ
る。これらの指標すべてが全部のＩＢＤの症例において
見られるわけではない。自然発生的な再活性化、腸外炎
症および貧血がしばしばＩＢＤと関連する。大関節の関
節炎は一般にクローン病患者において見られる。[0009] IBD is characterized by a variety of histological characteristics including acute and chronic granulomatous inflammation of the transmural with ulcers, crypt abbesses and marked fibrosis. Not all of these indicators are found in all IBD cases. Spontaneous reactivation, extraintestinal inflammation and anemia are often associated with IBD. Large joint arthritis is commonly found in Crohn's disease patients.

【００１０】関節炎に関連する炎症の分子的進行に見ら
れるように、種々のサイトカインがＩＢＤの状況を媒介
すると思われることが研究により見出されている。特
に、ＩＬ−１はＩＢＤにおける媒介物質として関係して
いる。再び、明確な２系統の証拠によりこの結論が導か
れた。ＩＬ−１のレベル増大がＩＢＤ患者の冒された腸
領域で見出されている。活性な潰瘍性大腸炎患者の組織
は、対照試料に比べて約15倍のＩＬ−１レベルを示し
た。活性クローン病の組織は対照の約６倍のＩＬ−１レ
ベルを示し、そして不活性クローン病の組織は対照組織
試料のそれの約３倍であった。(Sartor ら、Gastroente
rology, 94, Pg. A399)(Abstract of paper)参照。Sats
angiら、Clin. Exp. Immunol., 67, Pp. 594-605 (198
7); Rachmilewitz ら、Gastroenterolgy, 97, Pg. 326
(1989) も参照されたい (ここでＩＬ−１濃度レベルを
測定するために用いられているバイオアッセイは非選択
的にＩＬ−２, ＩＬ−４, ＩＬ−６およびＩＬ−７をも
検出することが知られている) 。Studies have found that various cytokines appear to mediate the IBD context, as seen in the molecular progression of inflammation associated with arthritis. In particular, IL-1 has been implicated as a mediator in IBD. Again, two distinct lines of evidence led to this conclusion. Increased levels of IL-1 have been found in affected intestinal regions of IBD patients. Tissue from patients with active ulcerative colitis showed about 15-fold IL-1 levels compared to control samples. Active Crohn's disease tissue showed about 6 times the level of IL-1 as control, and inactive Crohn's disease tissue was about 3 times that of control tissue samples. (Sartor et al., Gastroente
rology, 94, Pg. A399) (Abstract of paper). Sats
Angi et al., Clin. Exp. Immunol., 67, Pp. 594-605 (198
7); Rachmilewitz et al., Gastroenterolgy, 97, Pg. 326
(1989) (the bioassay used to measure IL-1 concentration levels also non-selectively detects IL-2, IL-4, IL-6 and IL-7 as well. It is known) .

【００１１】ＩＢＤにおけるＩＬ−１の役割はまた、ウ
サギの結腸をＩＬ−１で灌流するとプロスタグランジン
およびトロンボキサンの生産を誘発することを示してい
る研究によっても示されている。Comminelli等、Gastro
enterology, 97, 1400-1405(1989)。このことは、ＩＬ
−１は、それが前炎症性のまたは退化性化合物の生産を
刺激するゆえに組織の炎症に連関しているという上述の
仮説と一致する。従って、全身的および局所的ＩＬ−１
生産はＩＢＤにおける炎症性応答を開始させるかまたは
これに寄与し、そして病気の発病において活性な役割を
果たす可能性がある。この全身的なＩＬ−１生産はまた
クローン病に関連する腸管外炎症の部分的原因である可
能性がある。The role of IL-1 in IBD has also been shown by studies showing that perfusion of rabbit colon with IL-1 induces the production of prostaglandins and thromboxanes. Comminelli et al., Gastro
enterology, 97, 1400-1405 (1989). This means that IL
-1 is consistent with the above hypothesis that it is associated with tissue inflammation because it stimulates the production of pro-inflammatory or degenerating compounds. Thus, systemic and local IL-1
Production initiates or contributes to the inflammatory response in IBD and may play an active role in the pathogenesis of the disease. This systemic IL-1 production may also be a partial cause of extraintestinal inflammation associated with Crohn's disease.

【００１２】[0012]

【発明が解決しようとする課題】これらの結果から、本
発明者らはインターロイキン−１の活性を妨害する物質
はＩＢＤの治療に有効な化合物となりえようことを提案
した。敗血症性ショックは多量の細菌の侵入に関連した
状態である。このショックは、少くとも一部分は、細菌
性毒素 (例えば、リポポリサッカライド) の存在により
もたらされると一般に信じられている。敗血症性ショッ
クは病院環境における死亡の比較的共通の原因である。
現在のところ、敗血症性ショック患者に対する治療選択
肢はほとんどなく、利用しうる治療法は一般的に患者の
体力を保持させるのに有効であるといった性質のもので
ある。Based on these results, the present inventors have proposed that a substance that interferes with the activity of interleukin-1 could be a compound that is effective in treating IBD. Septic shock is a condition associated with the invasion of large numbers of bacteria. It is generally believed that this shock is caused, at least in part, by the presence of a bacterial toxin (eg, lipopolysaccharide). Septic shock is a relatively common cause of death in hospital settings.
At present, there are few treatment options for patients with septic shock, and the available treatments are generally of a nature that is effective in maintaining the patient's strength.

【００１３】敗血症性ショックは平均動脈血圧 (ＭＡ
Ｐ) の低下、心拍出量の減少、頻脈、頻呼吸、乳酸血症
および白血球減少を含む種々の症状によって特徴付けら
れる。この病気の特定の原因は未だ完全には理解されて
いないものの、インターロイキン−１を含む種々のサイ
トカインが、敗血症性ショックの媒介に関与している。
ＩＬ−１が敗血症性ショックの媒介に役割を有する可能
性があることは、２系統の証拠により示唆されている。
一つの研究においては、グラム陰性の敗血症に罹患した
小児の血清をＩＬ−１濃度に関して分析した。この研究
によれば、検査した患者の21％でＩＬ−１レベルの増大
が見出されることが示された。加えて、ＩＬ−１の血清
レベルは生存者よりも死んだ患者において有意に高いこ
とが示された。Girardin等、New England J. of Medici
ne 319, 第397-400頁 (1988)。また、Cannon等の Criti
cal Care Medicine, 第S58頁 (アブストラクト) ４月,
1989 (increased IL-1 levels in patients suffering
from sepsis syndrome)も参照のこと。[0013] Septic shock is the mean arterial blood pressure (MA
It is characterized by a variety of symptoms including decreased P), decreased cardiac output, tachycardia, tachypnea, lactic acidemia and leukopenia. Although the specific causes of the disease are not yet fully understood, various cytokines, including interleukin-1, are involved in mediating septic shock.
Two lines of evidence suggest that IL-1 may have a role in mediating septic shock.
In one study, sera of children with Gram-negative sepsis were analyzed for IL-1 levels. This study showed that increased IL-1 levels were found in 21% of the patients examined. In addition, serum levels of IL-1 were shown to be significantly higher in patients who died than in survivors. Girardin et al., New England J. of Medici
ne 319, pp. 397-400 (1988). Also, Crinon of Cannon et al.
cal Care Medicine, Page S58 (Abstract) April,
1989 (increased IL-1 levels in patients suffering
See also from sepsis syndrome).

【００１４】また、ヒトＩＬ−１はウサギにショック様
状態を引き起こすことも示されている。ヒトのＩＬ−１
ｂを１回ボーラス注射すると血圧低下、および敗血症性
ショックに特徴的な幾つかの血行力学的および血液学的
なパラメーターがもたらされた。例えば、ＩＬ−１を注
射したウサギのＭＡＰは最小で19.1％低下した。Okusaw
a 等、J. Clin. Invest., 81, 第1162-1171頁 (1988)。It has also been shown that human IL-1 causes a shock-like state in rabbits. Human IL-1
A single bolus injection of b resulted in decreased blood pressure and several hemodynamic and hematological parameters characteristic of septic shock. For example, MAP in rabbits injected with IL-1 was reduced by a minimum of 19.1%. Okusaw
a. et al., J. Clin. Invest., 81, pp. 1162-1171 (1988).

【００１５】本発明者らはこれらの結果から、インター
ロイキン−１の活性を妨害する物質は敗血症性ショック
の治療に有効な化合物となりえようことを提案した。虚
血性損傷は組織または器官がその正常な血流を奪われた
時はいつでも組織または器官において生じうる。酸素に
富んだ血液流がその組織に復旧した場合はさらに損傷が
生じうる。生じた損傷の程度および回復性は部分的には
もとの障害のひどさの如何による。しかしながら、種々
の治療的な介入により再灌流から生ずる組織損傷の度合
を軽減することは可能である。 Simpson PJ 等、 Halli
well B. (編) Oxygen Radicals and Tissue Injury, B
rook Lodge Symp-Upjohn (1988) 。Based on these results, the present inventors have proposed that a substance that interferes with the activity of interleukin-1 may be an effective compound for treating septic shock. Ischemic damage can occur in a tissue or organ whenever the tissue or organ has been deprived of its normal blood flow. Further damage can occur if oxygen-rich blood flow is restored to the tissue. The extent and resilience of the damage caused depends in part on the severity of the original failure. However, various therapeutic interventions can reduce the degree of tissue damage resulting from reperfusion. Simpson PJ, Halli
well B. (ed.) Oxygen Radicals and Tissue Injury, B
rook Lodge Symp-Upjohn (1988).

【００１６】再灌流損傷は心臓、腸、腎臓、肝臓および
他の臓器における虚血性の発現の後遺症として十分に文
献に記載されている。 Simpson PJ ら、Halliwell B.
(編)Oxygen Radicals and Tissue Injury, Brook Lodge
Symp-Upjohn (1988); Herman B.ら、FASEB J. 2: 1460
151 (1988); McDougal WS. The J. of Urology, 140:13
25-1330 (1988); Finn WF. Kidney Int., 7:171-182 (1
990); Schrier RW. Klin Wochenschr, 66: 800-807 (19
88); および Winchel RJ. Transplantation 48: 393-39
6 (1989) 。再灌流損傷の正確な病因は冒された組織の
如何に応じて変動する。例えば心臓においては、再灌流
損傷は好中球の劇的な流入を伴ない、そしてこれらの細
胞は再灌流損傷に影響する主要な役割を果していると考
えられる。Lucchesi BR 等、Ann Rev Pharmacol Toxico
l 26: 201-224 (1988)。一方、腎虚血および再灌流損傷
は、管状細胞膜の透過性の増大、細胞内カルシウムレベ
ル増大、ミトコンドリア呼吸機能変化、およびフリーラ
ジカルの発生に関与していると思われる。腎臓にあって
は、管外に遊出する好中球が再灌流損傷に影響する役割
はあまり確かではない。McDougal WS. The J. Urology,
140: 1325-1330 (1988); Finn WF. Kidney Int., 37:
171-182 (1990); Schrier RW. Klin Wochenschr, 66:80
0-807 (1988); および Winchel RJ. Transplantation 4
8:393-396 (1989)。[0016] Reperfusion injury is well documented as a sequela of ischemic manifestations in the heart, intestines, kidneys, liver and other organs. Simpson PJ et al., Halliwell B.
(Edit) Oxygen Radicals and Tissue Injury, Brook Lodge
Symp-Upjohn (1988); Herman B. et al., FASEB J. 2: 1460.
151 (1988); McDougal WS.The J. of Urology, 140: 13
25-1330 (1988); Finn WF.Kidney Int., 7: 171-182 (1
990); Schrier RW.Klin Wochenschr, 66: 800-807 (19
88); and Winchel RJ. Transplantation 48: 393-39
6 (1989). The exact etiology of reperfusion injury varies depending on the tissue affected. For example, in the heart, reperfusion injury involves a dramatic influx of neutrophils, and these cells are thought to play a major role in affecting reperfusion injury. Lucchesi BR, etc., Ann Rev Pharmacol Toxico
l 26: 201-224 (1988). On the other hand, renal ischemia and reperfusion injury appear to be involved in increased permeability of tubular cell membranes, increased intracellular calcium levels, altered mitochondrial respiratory function, and generation of free radicals. In the kidney, the role of extravasated neutrophils in affecting reperfusion injury is less certain. McDougal WS. The J. Urology,
140: 1325-1330 (1988); Finn WF. Kidney Int., 37:
171-182 (1990); Schrier RW. Klin Wochenschr, 66:80
0-807 (1988); and Winchel RJ. Transplantation 4
8: 393-396 (1989).

【００１７】虚血および再灌流損傷の期間中の細胞の関
与の差異にもかかわらず、土台となるメカニズムには類
似性がある。インターロイキン−１は臓器損傷の初期段
階メジエーターとして認識され、そして滞留性のまたは
新たに侵入した炎症性細胞によって生成されて器官特異
的組織の病状を生ずる。かかる場合、ＩＬ−１の生物学
的活性を阻害する能力は、組織損傷の度合を限定する場
合に目的とされる新規な治療上の介入を表わすであろ
う。Despite the differences in cellular involvement during ischemia and reperfusion injury, there are similarities in the underlying mechanisms. Interleukin-1 is recognized as an early stage mediator of organ damage, and is produced by stagnant or newly invaded inflammatory cells, resulting in organ-specific tissue pathology. In such cases, the ability to inhibit the biological activity of IL-1 would represent a novel therapeutic intervention aimed at limiting the degree of tissue damage.

【００１８】この情報から本発明者らは、インターロイ
キン−１の活性を妨害する物質は虚血および再灌流によ
る損傷を最小限に抑えるのに有効な化合物であり得ると
いうことを提案した。今日まで、有効でしかも選択的な
ＩＬ−１インヒビターは、ＩＬ−１が関節炎、ＩＢＤ、
敗血症性ショック、虚血性損傷または再灌流損傷の治療
における医薬による介入の標的でありかつ炎症の治療に
おける治療剤として使用するための標的であるというこ
とを証明できるに十分な量または純度では入手できてい
ない。From this information, the present inventors have proposed that substances that interfere with the activity of interleukin-1 may be compounds that are effective in minimizing ischemia and reperfusion injury. To date, effective and selective IL-1 inhibitors are those in which IL-1 is arthritis, IBD,
Available in sufficient quantity or purity to prove to be a target for pharmaceutical intervention in the treatment of septic shock, ischemic injury or reperfusion injury and for use as a therapeutic in the treatment of inflammation Not.

【００１９】この従来技術にもかかわらず、本発明者ら
はインターロイキン−１インヒビターと呼ばれる、イン
ターロイキン−１により媒介される疾患を予防および治
療する一群の化合物を同定した。さらに、本発明の治療
的介入は、患者が良い状態で存在するのに必須な正常の
生理学的過程 (例えば、免疫能力) に受容し難い傷害を
及ぼすことなく実施できる。Despite this prior art, the inventors have identified a group of compounds called interleukin-1 inhibitors, which prevent and treat diseases mediated by interleukin-1. In addition, the therapeutic interventions of the present invention can be performed without impairing the normal physiological processes (eg, immune competence) essential for the patient to be in good standing.

【００２０】本明細書で参考文献としてとり込まれる現
在継続中の1990年４月６日出願の米国特許出願第07/50
6.522号には、天然に存在するタンパク質性インターロ
イキン−１インヒビターおよび高純度のこのものをかな
りの量で製造する方法が記載されている。特に上記出願
はインターロイキン−１レセプターの拮抗体 (ＩＬ−１
ra )、即ちＩＬ−１ｉアルファ (ＩＬ−１ia )、ＩＬ−
１ｉベータ (ＩＬ−１ｉＢ) およびＩＬ−１ixの３種の
インターロイキン−１インヒビターを詳細に記載してい
る。本出願においては、これらＩＬ−１raはそれぞれＩ
Ｌ−１raa , ＩＬ−１rab およびＩＬ−１rax と呼ばれ
よう。US patent application Ser. No. 07/50, filed Apr. 6, 1990, which is hereby incorporated by reference in its entirety.
No. 6.522 describes a naturally occurring proteinaceous interleukin-1 inhibitor and a method of producing highly pure this in significant quantities. In particular, the above-mentioned application discloses an interleukin-1 receptor antagonist (IL-1
ra), that is, IL-1i alpha (IL-1ia), IL-
Three interleukin-1 inhibitors of 1ibeta (IL-1iB) and IL-1ix have been described in detail. In the present application, each of these IL-1ra is I
Will be called L-1raa, IL-1rab and IL-1rax.

【００２１】[0021]

【課題を解決するための手段】発明の要約 本発明はインターロイキン−１により媒介される疾患を
治療および予防するための医薬組成物について記載す
る。本発明の目的は、それを必要とする患者に治療剤を
投与することによる、インターロイキン−１媒介関節
炎、インターロイキン−１媒介炎症性腸疾患 (「ＩＢ
Ｄ」) 、インターロイキン−１媒介敗血症性ショック、
インターロイキン−１媒介虚血性損傷およびインターロ
イキン−１媒介再灌流損傷を治療および予防するための
医薬組成物を提供することである。 Summary of the Invention The present SUMMARY OF THE INVENTION The invention describes a pharmaceutical composition for the treatment and prevention of diseases mediated by interleukin-1. It is an object of the present invention to administer a therapeutic agent to a patient in need thereof, whereby interleukin-1 mediated arthritis, interleukin-1 mediated inflammatory bowel disease (“IB
D "), interleukin-1 mediated septic shock,
It is intended to provide a pharmaceutical composition for treating and preventing interleukin-1-mediated ischemic injury and interleukin-1-mediated reperfusion injury.

【００２２】本発明の付加的な目的および利点は、一部
は以下の明細書中に記載されており、一部はこの記載か
ら明らかとなるかまたは本発明の実施より知ることがで
きよう。これら目的および利点は特に添付の特許請求の
範囲およびその組み合わせによって実現および達成でき
る。本発明の目的に従って、その目的を達成するため
に、インターロイキン−１媒介関節炎、インターロイキ
ン−１媒介炎症性腸疾患、インターロイキン−１媒介敗
血症性ショック、インターロイキン−１媒介虚血性損傷
およびインターロイキン−１媒介再灌流損傷を含む、イ
ンターロイキン−１により媒介された疾患を治療および
予防するための医薬組成物が開示される。これらの組成
物は、治療上有効な量のインターロイキン−１インヒビ
ターを含有する。好ましい態様において、本発明の医薬
組成物は、そのアミノ酸の少なくとも一部を決定しうる
程度にまで十分純粋であり、アミノ酸の１文字表記で表
される以下のアミノ酸配列Additional objects and advantages of the invention will be set forth in part in the description which follows, and in part will be obvious from the description, or may be learned by practice of the invention. These objects and advantages may be particularly realized and attained by the appended claims and combinations thereof. In accordance with the objects of the present invention, interleukin-1-mediated arthritis, interleukin-1-mediated inflammatory bowel disease, interleukin-1-mediated septic shock, interleukin-1-mediated ischemic injury and Disclosed are pharmaceutical compositions for treating and preventing interleukin-1-mediated diseases, including leukin-1-mediated reperfusion injury. These compositions contain a therapeutically effective amount of an interleukin-1 inhibitor. In a preferred embodiment, the pharmaceutical composition of the present invention is sufficiently pure to the extent that at least a portion of its amino acids can be determined and has the following amino acid sequence represented by the one letter code for the amino acid:

【００２３】 [0023]

【００２４】（上記配列中で（Ｕ）はＭ又はなしを表
し、（Ｘ）はＲ又はＰを表す。）に少なくとも７０％相
同であるアミノ酸配列を有するポリペプチドであるイン
ターロイキン−１レセプターの拮抗体（ＩＬ−１ｒａ）
を有効成分として含有する。本発明の好ましいインター
ロイキン−１インヒビターはタンパク質であり、より詳
細には天然に存在するタンパク質である。天然に存在す
るタンパク質は、それで治療される患者において予見し
得ない副作用を生ずる危険性が比較的低いので好まし
い。Of the interleukin-1 receptor which is a polypeptide having an amino acid sequence which is at least 70% homologous to (U in the above sequence represents M or none and (X) represents R or P). Antagonist (IL-1ra)
Is contained as an active ingredient. Preferred interleukin-1 inhibitors of the present invention are proteins, and more particularly naturally occurring proteins. Naturally occurring proteins are preferred because of the relatively low risk of unforeseen side effects in patients treated therewith.

【００２５】好ましいクラスのインターロイキン−１イ
ンヒビターは当然インターロイキン−１レセプター拮抗
体 (ＩＬ−１ra )として作用するヒトタンパク質であ
る。好ましくは、本発明の実施において好ましいＩＬ−
１raはＩＬ−１raa , ＩＬ−１raＢ, ＩＬ−１rax 、ま
たはＩＬ−１rax のＮ末端メチオニル誘導体から成る群
より選ばれる。例えば還流半減期を増大させ、そして／
またはその免疫原性を減ずるためにポリエチレングリコ
ール (ＰＥＧ) または任意の他の反復ポリマーを添加す
ることにより修飾したタンパク質も好ましい。A preferred class of interleukin-1 inhibitors are naturally human proteins that act as interleukin-1 receptor antagonists (IL-1ra). Preferably IL- which is preferred in the practice of the present invention
1ra is selected from the group consisting of IL-1raa, IL-1raB, IL-1rax, or an N-terminal methionyl derivative of IL-1rax. For example increase the reflux half-life, and /
Also preferred are proteins modified by adding polyethylene glycol (PEG) or any other repeating polymer to reduce its immunogenicity.

【００２６】ＩＬ−１raは、培養ヒト単球の馴化培地か
らの単離によるような、天然に入手しうる供給源からの
抽出により生産できるが、ＩＬ−１raの好ましい生産方
法は組み換えＤＮＡ技法による。組み換えＤＮＡ技法
は、部分的には比較的多量のＩＬ−１raを比較的高純度
で生産できるゆえに好ましい。 前記した一般的記載お
よび後記詳細な記載はともに単に例示かつ説明のための
ものであり、特許請求された本発明を限定するものでは
ないことが理解されるべきである。図面の簡単な説明 図１は漸増量のＩＬ−１Ｂに応答する、ウシ鼻軟骨から
のグリコサミノグリカン (ＧＡＧ) の放出を示す。Although IL-1ra can be produced by extraction from naturally available sources, such as by isolation of cultured human monocytes from conditioned medium, the preferred method of producing IL-1ra is by recombinant DNA techniques. . Recombinant DNA techniques are preferred, in part because they can produce relatively large amounts of IL-1ra in relatively high purity. It is to be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and explanatory only and are not restrictive of the invention as claimed. BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 shows the release of glycosaminoglycan (GAG) from bovine nasal cartilage in response to increasing amounts of IL-1B.

【００２７】図２はウシ鼻軟骨からの、ＩＬ−１Ｂ誘導
ＧＡＧ放出に及ぼす漸増量のＩＬ−１raの阻害作用を示
す。図３および４はマウスにおけるタイプIIコラーゲン
誘導関節炎の発病に及ぼすＩＬ−１raの阻害作用を示
す。図５はラットにおけるＳＣＷ誘導関節炎のＳＣＷ再
活性化に及ぼすＩＬ−１raの阻害作用を示す。FIG. 2 shows the inhibitory effect of increasing doses of IL-1ra on IL-1B-induced GAG release from bovine nasal cartilage. 3 and 4 show the inhibitory effect of IL-1ra on the onset of type II collagen-induced arthritis in mice. FIG. 5 shows the inhibitory effect of IL-1ra on SCW reactivation of SCW-induced arthritis in rats.

【００２８】図６はインターロイキン−１媒介ＩＢＤの
種々の症状に及ぼすＩＬ−１raの治療効果を示す。図７
はインドメタシンと一緒の、関節炎症のＰＧ−ＡＰＳ再
活性化に及ぼすＩＬ−１raの作用を示す。図８はエンド
トキシン誘導ショックでのウサギの生存率に及ぼすＩＬ
−１raの作用を示す。好ましい態様の詳細な説明 本発明の好ましい態様について詳細に記載する。これら
は以下の実施例とともに本発明の原理を説明するのに役
立てられる。FIG. 6 shows the therapeutic effect of IL-1ra on various symptoms of interleukin-1 mediated IBD. FIG.
Shows the effect of IL-1ra on PG-APS reactivation of joint inflammation, together with indomethacin. FIG. 8 shows the effect of IL on the survival of rabbits with endotoxin-induced shock.
-1ra action. It described in detail preferred embodiments of the Detailed Description of the Invention The preferred embodiments. These, together with the following examples, serve to illustrate the principles of the present invention.

【００２９】上述したとおり、本発明はインターロイキ
ン−１媒介関節炎、インターロイキン−１媒介炎症性腸
疾患、インターロイキン−１媒介敗血症性ショック、イ
ンターロイキン−１媒介虚血性損傷およびインターロイ
キン−１媒介再灌流損傷を含むインターロイキン−１媒
介疾患を治療および予防するための医薬組成物に関す
る。この組成物は、治療上有効な量のインターロイキン
−１インヒビターを含有する。一態様においては、本発
明の好ましいインターロイキン−１インヒビターはＩＬ
−１レセプターの拮抗体 (ＩＬ−１ra )として作用する
天然に存在するタンパク質である。As mentioned above, the present invention provides interleukin-1 mediated arthritis, interleukin-1 mediated inflammatory bowel disease, interleukin-1 mediated septic shock, interleukin-1 mediated ischemic injury and interleukin-1 mediated. It relates to a pharmaceutical composition for treating and preventing interleukin-1 mediated diseases including reperfusion injury. The composition contains a therapeutically effective amount of an interleukin-1 inhibitor. In one aspect, the preferred interleukin-1 inhibitors of the invention are ILs.
It is a naturally occurring protein that acts as an antagonist of the -1 receptor (IL-1ra).

【００３０】もし、自然発生によるか、または実験的な
疾患または医学的状態が体液あるいは組織中のＩＬ−１
レベル増大と関連するか、またはもし身体から採取した
細胞または組織が培養において増加したレベルのＩＬ−
１を生成する場合には、その疾患または医学的状態は
「インターロイキン−１媒介疾患」であると考えられ
る。多くの場合、かかるインターロイキン−１により媒
介された疾患はまた以下の付加的な２つの条件によって
も認識される： (1)その疾患または医学的状態に関連す
る病的所見がＩＬ−１の投与により動物で実験的に模擬
できること；および(2)実験動物モデルにおいて誘発さ
れたこの疾患または医学的状態の病状が、ＩＬ−１の作
用を阻害する薬剤での治療によって阻止または消失でき
ることである。大部分の「インターロイキン−１により
媒介された疾患」においては３種の条件のうちの少くと
も２種があてはまり、そして多くの「インターロイキン
−１により媒介された疾患」においては３つの条件すべ
てがあてはまる。IL-1 in body fluids or tissues, whether naturally occurring or due to experimental disease or medical condition
Levels of IL- associated with increased levels or increased in culture if cells or tissue taken from the body
If it produces 1, the disease or medical condition is considered to be an "interleukin-1 mediated disease". In many cases, such interleukin-1 mediated diseases are also recognized by the following two additional conditions: (1) the pathological findings associated with the disease or medical condition are IL-1 Can be simulated experimentally in animals by administration; and (2) the pathology of the disease or medical condition induced in an experimental animal model can be prevented or eliminated by treatment with an agent that inhibits the action of IL-1. . In most “interleukin-1-mediated diseases”, at least two of the three conditions apply, and in many “interleukin-1-mediated diseases” all three conditions Is true.

【００３１】インターロイキン−１により媒介される疾
患または医学的状態の一覧表は、それらに限定されるわ
けではないが、以下のとおりである： １) 関節炎 ２) 炎症性腸疾患 ３) 敗血症性ショック ４) 虚血性損傷 ５) 再灌流損傷 ６) 骨粗鬆症 ７) 喘息 ８) インシュリン糖尿病 ９) 骨髄性および他の白血病 10) 乾癬 11) 悪液質／食欲不良 天然に存在するタンパク質は、部分的にはそれで治療さ
れる患者に予期し得ない、かつ望ましからぬ生理学的副
作用を生ずる危険が比較的低いので、好ましい。A list of diseases or medical conditions mediated by interleukin-1 includes, but is not limited to: 1) arthritis 2) inflammatory bowel disease 3) septic Shock 4) Ischemic injury 5) Reperfusion injury 6) Osteoporosis 7) Asthma 8) Insulin diabetes 9) Myelogenous and other leukemias 10) Psoriasis 11) Cachexia / appetite Naturally occurring proteins are partially Is preferred because it has a relatively low risk of unforeseen and unwanted physiological side effects in the patient being treated.

【００３２】明細書および特許請求の範囲の目的にとっ
て、もしタンパク質または実質的に均等なタンパク質が
健康なヒトにおいて通常存在することが見出されうる場
合は、そのタンパク質は「天然に存在する」とみなされ
る。「天然に存在する」タンパク質は組み換えＤＮＡ技
法によるかおよび通常これを生産する細胞から分離する
ことにより得ることができる。「天然に存在する」とは
イー・コリ(E. coli)における発現の結果としてのＮ末
端メチオニル基を含有するタンパク質を包含する。For purposes of the specification and claims, a protein or "substantially equivalent protein" is said to be "naturally occurring" if it can be found to be normally present in healthy humans. It is regarded. "Naturally occurring" proteins can be obtained by recombinant DNA techniques and usually by isolation from the cells producing them. "Naturally occurring" includes proteins containing an N-terminal methionyl group as a result of expression in E. coli.

【００３３】明細書および特許請求の範囲を通じて使用
されている「実質的に均等な」とは、比較しうる生物学
的活性のみならず、非常に高度のアミノ酸残基相同性を
有することを意味するものと定義される (一般的には、
M. Dayhoff, Atlas of Protein Sequence and Structur
e, 第５巻, 第124頁 (1972), National BiochemicalRe
search Foundation, Washington, D. C., を参照のこ
と。このものは参考文献として本明細書にとり込まれ
る。) 。As used throughout the specification and claims, "substantially equivalent" means having not only a comparable biological activity, but also a very high degree of amino acid residue homology. Is defined as
M. Dayhoff, Atlas of Protein Sequence and Structur
e, Volume 5, Page 124 (1972), National Biochemical Re
See search Foundation, Washington, DC. This is incorporated herein by reference. ).

【００３４】本発明の特に好ましいＩＬ−１raは、現在
係属中の米国特許出願にすでに記載されている、インタ
ーロイキン−１の調節剤としてインビボで存在する天然
に存在するタンパク質である。この出願は、「インター
ロイキン−１インヒビター」という名称でHannumらによ
り1988年11月３日に出願された米国出願第07/266.531号
である。この米国特許出願は参考文献として詳細に本明
細書にとり込まれる。A particularly preferred IL-1ra of the present invention is the naturally occurring protein present in vivo as a modulator of interleukin-1, which has already been described in the currently pending US patent application. This application is US application Ser. No. 07 / 266.531 filed November 3, 1988 by Hannum et al. Under the name "Interleukin-1 Inhibitor". This US patent application is specifically incorporated herein by reference.

【００３５】いずれも同一のＤＮＡコード配列に由来す
る３種の好ましい形態のＩＬ−１raは前述のHannumらの
明細書に開示され記載されている。これらの最初のもの
であるＩＬ−１raは、等電点約4.８のＳＤＳ−ＰＡＧＥ
上22〜23kDの分子として挙動し、トリス緩衝液、pH7.６
中約52mM NaCl で Mono Q ＦＰＬＣから溶出するものと
して特徴づけられる。第２のＩＬ−１raＢは、22〜23kD
のタンパク質で、 p.I＝4.8として挙動し、60mM NaClで
Mono Q カラムから溶出するものとして特徴付けられ
る。第三のＩＬ−１rax は、20kDのタンパク質として挙
動し、48mM NaClで Mono Q カラムから溶出するものと
して特徴付けられる。Hannum等の３種すべてのインター
ロイキン−１インヒビターは同様な機能的および免疫学
的活性を有することが示された。本発明はまた修飾され
たＩＬ−１raをも包含する。一つの態様においては、Ｉ
Ｌ−１raは１種またはそれ以上のポリエチレングリコー
ル (ＰＥＧ) または他の反復性重合体部分の付加により
修飾される。もう一つの態様においては、ＩＬ−１raは
E. coliにおける発現の結果としてＮ−末端メチオニル
基を含有する。Three preferred forms of IL-1ra, all derived from the same DNA coding sequence, are disclosed and described in the aforementioned Hannum et al. Specification. The first of these, IL-1ra, has an SDS-PAGE with an isoelectric point of about 4.8.
Behaves as a 22-23 kD molecule in Tris buffer, pH 7.6
It is characterized as eluted from Mono Q FPLC at about 52 mM NaCl. The second IL-1raB is 22-23 kD
Protein with a pI of 4.8 and 60 mM NaCl
Characterized as eluting from a Mono Q column. The third IL-1rax behaves as a 20 kD protein and is characterized as eluting from a Mono Q column with 48 mM NaCl. All three interleukin-1 inhibitors, such as Hannum, have been shown to have similar functional and immunological activities. The present invention also includes modified IL-1ra. In one embodiment, I
L-1ra is modified by the addition of one or more polyethylene glycol (PEG) or other repeatable polymer moieties. In another embodiment, IL-1ra is
Contains an N-terminal methionyl group as a result of expression in E. coli.

【００３６】Hannumらのインヒビターを製造する方法も
上述の出願中に開示されている。開示された一つの方法
は、ヒトの単球からインヒビターを単離する (ここでこ
れらは天然に生産される) ことから成る。開示された第
２の方法は、インヒビターをコードする遺伝子を単離
し、この遺伝子を適当なベクターおよび細胞型中でクロ
ーン化し、この遺伝子を発現させてインヒビターを生成
させそしてこのインヒビターを収穫することより成る。
後者の方法は一般に組み換えＤＮＡ法の例であるが、こ
れは本発明の好ましい方法である。組み換えＤＮＡ法
は、部分的には比較的高純度で比較的多量に製造しうる
ゆえに好ましい。A method of making the inhibitors of Hannum et al. Is also disclosed in the above-referenced application. One disclosed method involves isolating inhibitors from human monocytes, where they are produced naturally. A second method disclosed involves isolating the gene encoding the inhibitor, cloning the gene in a suitable vector and cell type, expressing the gene to produce the inhibitor, and harvesting the inhibitor. Become.
The latter method is generally an example of a recombinant DNA method, which is the preferred method of the present invention. Recombinant DNA methods are preferred, in part because they can be produced in relatively high purity and in relatively large quantities.

【００３７】付加的なインターロイキン−１インヒビタ
ーには、ＩＬ−１に対する細胞性レセプターの活性化を
特異的に阻止しうる化合物が包含される。かかる化合物
には可溶性レセプターおよびモノクローナル抗体のよう
なＩＬ−１結合性タンパク質が包含される。かかる化合
物にはまたレセプターの拮抗体およびレセプターに対す
るモノクローナル抗体も包含される。Additional interleukin-1 inhibitors include compounds which can specifically block activation of cellular receptors for IL-1. Such compounds include soluble receptors and IL-1 binding proteins such as monoclonal antibodies. Such compounds also include antagonists of the receptor and monoclonal antibodies to the receptor.

【００３８】第２のＩＬ−１raのクラスには、ＩＬ−１
のインビボ合成および／または細胞外放出を阻止する化
合物およびタンパク質も包含される。かかる化合物に
は、ＩＬ−１遺伝子の転写またはＩＬ−１タンパク質前
駆体のプロセッシングに影響する薬剤も包含される。特
定の条件下においてはＩＬ−１raはＩＬ−１誘導ＩＬ−
１生産を阻止しよう。The second class of IL-1ra is IL-1
Compounds and proteins that inhibit the in vivo synthesis and / or extracellular release of are also included. Such compounds also include agents that affect transcription of the IL-1 gene or processing of an IL-1 protein precursor. Under certain conditions, IL-1ra is IL-1 induced IL-
Let's stop one production.

【００３９】好ましくは、前記ＩＬ−１raは「実質的に
純粋」な形態で前述の方法により生産される。「実質的
に純粋な」なる用語は、未修飾形におけるインヒビター
が比較的高い比活性、好ましくはHannumら、 Nature 34
3: 336-340 (1990) および Eisenbergら、 Nature 343:
341-346 (1990)(これらは両方とも参考文献として詳細
に本明細書にとり込まれる) により定義して約 150,000
から 500,000レセプター単位／mgの範囲を有することを
意味する。しかしながら、ＩＬ−１raの誘導体は異なっ
た比活性を有しうることは理解されるべきである。本発
明の好ましい態様においては、ＩＬ−１raa , ＩＬ−１
raＢおよびＩＬ−１rax の少くとも１種を含有する治療
用組成物が、インターロイキン−１媒介疾患患者に有効
量で投与される。Preferably, the IL-1ra is produced in the "substantially pure" form by the method described above. The term "substantially pure" means that the inhibitor in the unmodified form has a relatively high specific activity, preferably Hannum et al., Nature 34
3: 336-340 (1990) and Eisenberg et al., Nature 343:
341-346 (1990), both of which are specifically incorporated herein by reference.
From 500,000 receptor units / mg. However, it should be understood that derivatives of IL-1ra may have different specific activities. In a preferred embodiment of the present invention, IL-1raa, IL-1
A therapeutic composition containing at least one of raB and IL-1rax is administered to an interleukin-1-mediated disease patient in an effective amount.

【００４０】好ましいインヒビターの阻害機能は１また
はそれ以上の別個の分離しうる部分により付与されるこ
とが可能であるから、本発明の組成物は、その活性成分
としてインターロイキン−１の阻害を制御するインヒビ
ターの一部を含むように処方され得ることも想定され
る。本発明の治療用組成物は、動脈内注射、吸入ミス
ト、経***性製剤または坐剤のような他の有効な投与形
態も想定されるが、注射による非経口投与が好ましい。
好ましい担体の一つは生理食塩溶液であるが、他の製剤
上の許容しうる担体も使用しうることが意図される。好
ましい態様の一つにおいては、担体とＩＬ−１raが生理
学的に適合する徐放性製剤を構成することも想定され
る。かかる担体における主要な溶媒は水または本質的に
非水性のもののいずれかである。加えて、担体は製剤の
pH、浸透性、粘度、透明度、色、滅菌性、安定性、溶解
速度または香りを修飾または維持するための他の薬理学
的に許容しうる付形剤をも含有し得る。同様に、担体は
さらに、ＩＬ−１raの安定性、溶解速度、放出または吸
収を修飾または維持するための他の薬理学的に許容しう
る付形剤をも含有しうる。かかる付形剤は、一回量また
は複数回量の形態における非経口投与用薬量を製剤化す
るのに通常一般的に使用される物質である。Since the inhibitory function of the preferred inhibitors can be conferred by one or more distinct and separable moieties, the compositions of the present invention control the inhibition of interleukin-1 as their active ingredient. It is also envisioned that it may be formulated to include some of the inhibitors that Therapeutic compositions of the present invention may envisage other effective modes of administration, such as intraarterial injection, inhalation mist, orally active formulations or suppositories, but parenteral administration by injection is preferred.
One preferred carrier is a saline solution, but it is contemplated that other pharmaceutically acceptable carriers may be used. In one preferred embodiment, it is envisioned that the carrier and IL-1ra constitute a physiologically compatible sustained release formulation. The primary solvent in such carriers is either water or essentially non-aqueous. In addition, the carrier
It may also contain other pharmacologically acceptable excipients for modifying or maintaining pH, permeability, viscosity, clarity, color, sterility, stability, dissolution rate or odor. Similarly, the carrier may also contain other pharmacologically acceptable excipients for modifying or maintaining the stability, dissolution rate, release or absorption of IL-1ra. Such excipients are substances commonly used to formulate parenteral dosages in single or multiple dose form.

【００４１】治療用組成物が製剤化されると、これは溶
液、懸濁液、ゲル、乳濁液、固体または脱水もしくは凍
結乾燥粉末として滅菌バイアル中に貯蔵できる。かかる
製剤はすぐ使用しうる形態で、または投与直前に再構成
を必要とする形態のいずれかで貯蔵しうる。かかる製剤
の好ましい貯蔵は、少くとも４℃以下、好ましくは−70
℃の温度でなされる。ＩＬ−１raを含有するかかる製剤
はまた、生理学的pHまたはその付近で貯蔵され投与され
るのが好ましい。高pH (即ち、８より大きい)または低p
H (即ち、５より小さい) での製剤の貯蔵および投与は
望ましいことではないと現在考えられている。Once the therapeutic composition is formulated, it can be stored in sterile vials as a solution, suspension, gel, emulsion, solid or dehydrated or lyophilized powder. Such formulations may be stored either in a ready-to-use form or in a form requiring reconstitution immediately prior to administration. Preferred storage of such formulations is at least 4 ° C or less, preferably -70 ° C.
Made at a temperature of ° C. Such formulations containing IL-1ra are also preferably stored and administered at or near physiological pH. High pH (ie greater than 8) or low p
It is presently believed that storage and administration of the formulation at H (ie, less than 5) is not desirable.

【００４２】ＩＬ−１raを含有する製剤の投与様式は、
関節内、皮下または筋肉内経路によるのが好ましい。好
ましくは、ＩＬ−１raを含有する製剤を投与する様式は
関節内、皮下、筋肉内または静脈内注射、坐剤、浣腸、
吸入エアゾールまたは経口もしくは局所経路である。Ｉ
Ｌ−１raの所望量を達成し維持するには、皮下または筋
肉内注射が反復投与される。これらの方法は両方とも患
者の血流中にあらかじめ選択した濃度範囲のＩＬ−１ra
を生成させることを意図する。血漿１ml当たり0.01ng以
下のＩＬ−１ra循環濃度を維持しても有効な組成物では
ないし、一方１ml当たり１00μg 以上の循環レベルを長
期に維持することは望ましくない副作用を生ずる可能性
があると考えられている。The administration mode of the preparation containing IL-1ra is as follows.
Preferably by the intra-articular, subcutaneous or intramuscular route. Preferably, the mode of administering the formulation containing IL-1ra is intra-articular, subcutaneous, intramuscular or intravenous injection, suppository, enema,
Inhalation aerosol or oral or topical route. I
Subcutaneous or intramuscular injections are repeated to achieve and maintain the desired amount of L-1ra. Both of these methods involve IL-1ra in a preselected concentration range in the patient's bloodstream.
Is intended to be generated. Maintaining a circulating concentration of IL-1ra of less than 0.01 ng / ml of plasma is not an effective composition, while maintaining a circulating level of more than 100 μg / ml for a long time may cause undesirable side effects. Have been.

【００４３】インターロイキン−１媒介関節炎を治療す
るための好ましい用量範囲は１から１00ng／mlである。
したがって、最初に血漿１ml当たり10ngをこえるＩＬ−
１ra循環レベルを生ずる量を投与し、そしてその後血漿
１ml当たり約10ngまたはそれ以上のＩＬ−１ra循環レベ
ルを保持するに適する頻度で投与がなされるのが好まし
い。投与頻度は用いられる製剤中のＩＬ−１raの薬動学
的パラメーターの如何によろう。The preferred dose range for treating interleukin-1 mediated arthritis is 1 to 100 ng / ml.
Thus, initially more than 10 ng of IL-
Preferably, an amount that produces a circulating level of 1 ra is administered, and then administration is carried out at a frequency suitable to maintain circulating levels of IL-1ra of about 10 ng or more per ml of plasma. The frequency of administration will depend on the pharmacokinetic parameters of IL-1ra in the formulation used.

【００４４】インターロイキン−１媒介ＩＢＤの治療に
好ましい用量範囲は患者の体重１kg当たり約０.5〜50mg
であり、１日約１〜10回投与される。より好ましい態様
においては、投与量は患者の体重１kg当たり約１〜10mg
であり、１日約３〜５回投与される。投与の頻度は用い
られる製剤中のＩＬ−１raの薬動学的パラメーターの如
何によろう。A preferred dose range for the treatment of interleukin-1 mediated IBD is about 0.5-50 mg / kg of patient weight.
And is administered about 1 to 10 times a day. In a more preferred embodiment, the dosage is about 1-10 mg / kg of the patient's body weight.
And is administered about 3 to 5 times a day. The frequency of administration will depend on the pharmacokinetic parameters of IL-1ra in the formulation used.

【００４５】インターロイキン−１媒介敗血症性ショッ
クの治療に好ましい用量範囲は24時間当たり患者の体重
１kg当たり１日約１.0〜２00mgであり、24時間当たり約
４〜15回の間で等量づつ投与される。さらに好ましい態
様においては、投与量は１日当たり患者の体重１kgにつ
いて約10〜120mg であり、２時間毎に等量づつ投与され
る。最も好ましい態様においては、患者の体重１kgあた
り24時間について１00mgが２時間毎に等量づつ投与され
る。投与頻度は用いられる製剤におけるＩＬ−１raの薬
動学的パラメーターの如何によろう。A preferred dose range for the treatment of interleukin-1 mediated septic shock is about 1.0-200 mg / kg of patient body weight per 24 hours per day, with an equivalent dose between about 4-15 doses per 24 hours. Administered one by one. In a more preferred embodiment, the dosage is about 10-120 mg / kg of patient body weight per day, administered in equal doses every 2 hours. In the most preferred embodiment, 100 mg is administered every 2 hours in equal doses every 2 hours for 24 hours per kg of patient weight. The frequency of administration will depend on the pharmacokinetic parameters of IL-1ra in the formulation used.

【００４６】インターロイキン−１媒介敗血症性ショッ
クの治療に好ましいもう一つの様式においては、最初に
ＩＬ−１raがボーラス注射され、続いて循環ＩＬ−１レ
ベルがもはや上昇しなくなる迄、ＩＬ−１raが連続的に
注入される。治療の目的は血清ＩＬ−１raレベルをこの
期間中２〜20μg ／mlに維持することである。この様式
の好ましい態様においては、最初に患者の体重１kg当た
り約10〜20mgのＩＬ−１raをボーラス投与し、続いて患
者体重１kg当たり毎分約５〜20μg のＩＬ−１raを循環
ＩＬ−１レベルがそれ以上増大しなくなる迄連続的投与
する。血清ＩＬ−１ｂレベルは市販で入手しうるイムノ
アッセイ試験キットにより確認できる。ＩＬ−１媒介敗
血症性ショックの治療の開始は治療のいずれの様式にお
いても、敗血症または敗血症の可能性が診断されたら可
能な限り速やかに開始しなければならない。例えば、治
療は敗血症性ショックを生ずる危険性がある手術または
事故または他の出来事の後、速やかに開始しうる。In another preferred mode for the treatment of interleukin-1 mediated septic shock, IL-1ra is first bolus injected, followed by IL-1ra until circulating IL-1 levels are no longer elevated. It is injected continuously. The goal of treatment is to maintain serum IL-1ra levels between 2 and 20 μg / ml during this period. In a preferred embodiment of this mode, a bolus dose of about 10-20 mg of IL-1ra per kg of patient weight is first administered, followed by a bolus of about 5-20 μg of IL-1ra / kg patient weight per minute Dosing until no further increase occurs. Serum IL-1b levels can be confirmed by commercially available immunoassay test kits. Initiation of treatment for IL-1 mediated septic shock, in any mode of treatment, must begin as soon as possible once sepsis or the potential for sepsis has been diagnosed. For example, treatment may begin promptly after surgery or an accident or other event that could result in septic shock.

【００４７】インターロイキン−１媒介虚血性および再
灌流損傷の治療のための好ましい用量範囲は、患者の体
重１kg当たり約１〜50mgであり、毎時間ごとに投与され
る。好ましい態様においては、最初に約15〜50mg／kgの
ＩＬ−１raがボーラス投与され、続いて約５〜20mg／kg
が毎時注射される。投与頻度は用いられる製剤中のＩＬ
−１raの薬動学的パラメーターの如何によろう。A preferred dose range for the treatment of interleukin-1 mediated ischemic and reperfusion injury is about 1 to 50 mg / kg of patient weight, administered hourly. In a preferred embodiment, about 15-50 mg / kg of IL-1ra is administered as a bolus, followed by about 5-20 mg / kg.
Is injected every hour. The frequency of administration depends on the IL in the formulation used.
It depends on the pharmacokinetic parameters of -1ra.

【００４８】ＩＬ−１raを含有するある種の製剤は経口
投与することも意図される。この様式で投与されるＩＬ
−１raはカプセル化されるのが好ましい。カプセル化さ
れるＩＬ−１raは固形投薬形の製剤化に通常使用される
担体を用いてまたは用いずして製剤化できる。バイオア
ベイラビリティーが最大となりそして全身に行きわたる
以前の分解が最小となる時点で製剤中の活性部分が胃腸
管に放出されるように、カプセルが設計されるのが好ま
しい。ＩＬ−１raの吸収を促進するために付加的な付形
剤を包含できる。希釈剤、芳香剤、低融点ワックス、植
物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤、崩解剤および結合剤も使
用し得る。Certain formulations containing IL-1ra are also intended for oral administration. IL administered in this manner
-1ra is preferably encapsulated. The encapsulated IL-1ra can be formulated with or without carriers commonly used for formulating solid dosage forms. The capsules are preferably designed so that the active moiety in the formulation is released into the gastrointestinal tract at the point where bioavailability is maximized and degradation prior to systemic distribution is minimized. Additional excipients may be included to facilitate absorption of IL-1ra. Diluents, fragrances, low melting waxes, vegetable oils, lubricants, suspending agents, tablets, disintegrants and binders may also be used.

【００４９】インターロイキン−１媒介ＩＢＤの治療に
用いられる場合は、ＩＬ−１raの投与は適当に製剤化さ
れた浣腸によっても達成できる。投与様式の如何にかか
わらず、詳細な投与量は、患者のおよその体重または表
面積に従って計算される。さらに、前記各製剤に関する
治療のためのおよその投与量を決定するのに必要な計算
の改善は、当業者ならばルーチン的に行うことができ、
そしてこれは莫大な実験を行うことなく、特に本明細書
に開示された投与量の情報およびアッセイに照らして、
ルーチン的になし得る業務の範囲内にある。これらの投
与量は適切な用量−応答データと一緒に用いられる、投
与量決定のための確立されたアッセイを使用することに
より確認できる。When used in the treatment of interleukin-1 mediated IBD, the administration of IL-1ra can also be accomplished by an appropriately formulated enema. Regardless of the mode of administration, the precise dosage will be calculated according to the approximate weight or surface area of the patient. In addition, the calculations required to determine the approximate dosage for treatment for each of the above formulations can be routinely made by those skilled in the art,
And this can be done without undue experimentation, especially in light of the dosage information and assays disclosed herein.
It is within the work that can be done routinely. These dosages can be ascertained by using established assays for determining doses, used in conjunction with appropriate dose-response data.

【００５０】本明細書で記載されているＩＬ−１ra製剤
はヒトへの使用のみならず獣医用にも使用しうること、
および「患者」なる用語は限定された態様に解釈される
べきでないことに留意すべきである。獣医用の場合、投
与量は上記で特定したのと同じである。本発明の教示を
特定の問題または環境に応用することはここに含まれる
教示に照らして当業者の能力の範囲内にあろうことが理
解される。本発明の代表的な使用例は以下の実施例にみ
られる。The IL-1ra formulations described herein may be used for veterinary as well as human use,
It should be noted that the terms "patient" and "patient" should not be interpreted in a limiting manner. For veterinary use, the dosage is the same as specified above. It is understood that adapting the teachings of the present invention to a particular problem or environment will be within the capabilities of those skilled in the art in light of the teachings contained herein. Representative examples of the use of the present invention are found in the following examples.

【００５１】[0051]

【発明の実施の形態】実施例１−３においては、ＩＬ−
１raが既知の関節炎モデル例えば Wilder, R. L., "Exp
erimental Animal Models of Chronic Arthritis," Goo
dacre, J. A.および W. C. Dick(編）、Immunopathogen
ic Mechanisms of Arthritis, KluwerAcademic Publish
ers; Dordrecht, Netherlands; Boston, Mass. (1988)
( これは参考文献として本明細書に詳細にとり込まれ
る）記載のものにおけるＩＬ−１の作用を完全にまたは
部分的に阻止および／または中和することが示される。
実施例で注目されるように、各モデルにおいて試験され
たＩＬ−１raは有益な結果を示した。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION In Examples 1-3, IL-
1ra is a known arthritis model eg Wilder, RL, "Exp
erimental Animal Models of Chronic Arthritis, "Goo
dacre, JA and WC Dick (ed.), Immunopathogen
ic Mechanisms of Arthritis, KluwerAcademic Publish
ers; Dordrecht, Netherlands; Boston, Mass. (1988)
It has been shown to completely and partially block and / or neutralize the action of IL-1 in those described (which are hereby incorporated by reference in detail).
As noted in the examples, IL-1ra tested in each model showed beneficial results.

【００５２】実施例４−６においては、ＩＬ−１raは Z
ipser ら、Gastroenterology, 92,第33〜39頁（1987)
(本明細書に参考文献としてとり込まれる）および Sart
or ら、Gastroenterology, 89, 第587〜95頁（1985)(本
明細書に詳細にとり込まれる）に記載されているような
既知ＩＢＤモデルにおいて、ＩＬ−１の作用を完全にま
たは部分的に阻止および／または中和することが示され
る。実施例で注目されるように、各モデルにおいて試験
されたＩＬ−１raは有益な結果を示した。In Examples 4-6, IL-1ra is Z
ipser et al., Gastroenterology, 92, pp. 33-39 (1987).
(Incorporated herein by reference) and Sart
or et al., completely or partially block the action of IL-1 in a known IBD model as described in Gastroenterology, 89, 587-95 (1985) (incorporated in detail herein). And / or neutralization. As noted in the examples, IL-1ra tested in each model showed beneficial results.

【００５３】実施例５においては、ＩＬ−１raは Sarto
r ＩＢＤモデルに関連した腸外炎症に対して有益な結果
を有することが示される。実施例６においては、ＮＳＡ
ＩＤ--インドメタシン--の投与から起こる腸の炎症もＩ
Ｌ−１raでの治療により中和される。実施例７では、Ｉ
Ｌ−１raは既知敗血症性ショックのモデルにおいて、部
分的にＩＬ−１の作用を阻止および／または中和するこ
とが示される。敗血症性ショックを引き起こすために、
敗血症性ショックの主原因であると信じられているエン
ドトキシンをウサギに静脈注射する。異なる量のＩＬ−
１raを投与したウサギ群の死亡率を検査した。実施例で
見られうるように、ＩＬ−１raでの処置は有益な結果を
示した。In Example 5, IL-1ra was Sarto
r It has been shown to have beneficial results on extraintestinal inflammation associated with the IBD model. In Example 6, the NSA
Intestinal inflammation resulting from administration of ID-indomethacin-I
Neutralized by treatment with L-1ra. In the seventh embodiment, I
L-1ra has been shown to partially block and / or neutralize the effects of IL-1 in a model of known septic shock. To cause septic shock,
Rabbits are injected intravenously with endotoxin, which is believed to be the major cause of septic shock. Different amounts of IL-
The mortality of the rabbit group that received 1ra was examined. As can be seen in the examples, treatment with IL-1ra has shown beneficial results.

【００５４】実施例８では、虚血および再灌流損傷実験
においてＩＬ−１raが部分的にＩＬ−１の作用を中和す
ることが示される。犬を２時間局所的な心筋虚血状態に
し次いで４時間再灌流させる。梗塞のサイズを室の大き
さのパーセントとして、および危険にさらされた部分の
パーセントとして測定した。ＩＬ−１raでの処置は有益
な結果を示した。Example 8 shows that IL-1ra partially neutralizes the action of IL-1 in ischemia and reperfusion injury experiments. Dogs are placed in focal myocardial ischemia for 2 hours and then reperfused for 4 hours. Infarct size was measured as a percentage of the size of the chamber and as a percentage of the area at risk. Treatment with IL-1ra has shown beneficial results.

【００５５】[0055]

【実施例】【Example】

実施例１：培養したウシ鼻軟骨外植片におけるヒトイン
ターロイキン−１インヒビターの作用の証明 関節炎の進行を研究するために、多くのインビトロおよ
びインビボの方法が用いられている。この点で特に有用
であることが判明しているインビトロモデルの一つは、
培養した軟骨性組織外植片である。実際に、このモデル
はＩＬ−１が軟骨破壊の強力なメジエータであり、それ
ゆえ関節炎性関節腐食における介入にとって好都合なタ
ーゲットであることを示すために過去において使用され
てきた（一般的には G. Buchanら、Third Annual Gener
al Meeting of the British Society for Rheumatolog
y, London, England, November 19-21, 1988, PR. J. R
heumatol 25 (Supplement 2) 1986; Fontana ら、Rheum
atol Int (1982) 2: 49-53;J. Saklatvala ら、Develop
ment of Diseases of Cartilage and Bone Matrix,Alan
R. Liss, Inc., pp. 291-298; P. Stashenko ら、The
American Association of Immunologists, Vol. 138, p
p. 1464-1468, No. 5, March 1, 1987; G. Dodgeら、J.
Clin. Invest., 83:647-661; J. Sandyら、Journal of
OrthopedicResearch 4:263-272, J. Saklatavalaら、T
he Control of Tissue Damage, Glauert, 編、Elsevier
Science Publishers, pp. 97-108; I. Cambellら、Bio
chem.J. 237: 117-122; J. Tyler, Biochem. J., 225:
493-507;およびJ. Eastgateら、Sixth International L
ymphokine Workshop, 7(3): 338, これらは全て参考文
献として詳細にとり込まれる、を参照のこと）。Example 1 Demonstration of the Effect of Human Interleukin-1 Inhibitor on Cultured Bovine Nasal Cartilage Explants A number of in vitro and in vivo methods have been used to study the progression of arthritis. One in vitro model that has proven particularly useful in this regard is
Cultured cartilage explants. Indeed, this model has been used in the past to show that IL-1 is a potent mediator of cartilage destruction and therefore a convenient target for intervention in arthritic joint erosion (generally G . Buchan et al., Third Annual Gener
al Meeting of the British Society for Rheumatolog
y, London, England, November 19-21, 1988, PR.J.R
heumatol 25 (Supplement 2) 1986; Fontana et al., Rheum
atol Int (1982) 2: 49-53; J. Saklatvala et al., Develop
ment of Diseases of Cartilage and Bone Matrix, Alan
R. Liss, Inc., pp. 291-298; P. Stashenko et al., The
American Association of Immunologists, Vol. 138, p
p. 1464-1468, No. 5, March 1, 1987; G. Dodge et al., J.
Clin. Invest., 83: 647-661; J. Sandy et al., Journal of
OrthopedicResearch 4: 263-272, J. Saklatavala et al., T
he Control of Tissue Damage, Glauert, ed., Elsevier
Science Publishers, pp. 97-108; I. Cambell et al., Bio.
chem. J. 237: 117-122; J. Tyler, Biochem. J., 225:
493-507; and J. Eastgate et al., Sixth International L
ymphokine Workshop, 7 (3): 338, all of which are incorporated by reference in detail).

【００５６】Steinberg らの Biochem. J. 180: 403-41
2(本明細書に参考文献としてとり込まれる）に実質的に
記載されている軟骨外植片モデルが、ＩＬ−１媒介軟骨
の破壊に及ぼすＩＬ−１raの軽減作用を示すためにこの
実施例で使用された。ここでは、軟骨組織の出所として
ウシ鼻中隔を使用したが、J. Tylerらの Br. J. Theuma
tol. 24(補遣 1): 150-155（ここに参考文献としてとり
込まれる）記載の種類の関節軟骨も使用できた。軟骨の調製 新たに屠殺された１才の雄の子牛からウシ鼻中隔をとり
出し、氷上に置いた。この組織を次にポビドン／ヨウ素
の準備試液（１−エタノール−２−ピロリジノンホモポ
リマーおよびヨウ素、Medline Industries, Mundelein,
I11から入手）で洗った。次いで、粘膜および軟骨膜を
除去した。残った軟骨中隔をポビドン／ヨウ素の５％(V
/V) 溶液に室温で１時間浸した。Steinberg et al. Biochem. J. 180: 403-41.
2 (incorporated herein by reference), the cartilage explant model described in this example was used to demonstrate the alleviating effect of IL-1ra on IL-1-mediated cartilage destruction. Used in Here we used the bovine nasal septum as the source of cartilage tissue, but J. Tyler et al. Br. J. Theuma
tol. 24 (supplement 1): Articular cartilage of the type described in 150-155 (incorporated herein by reference) could also be used. Preparation of cartilage Bovine septum was removed from a freshly sacrificed 1-year-old male calf and placed on ice. The tissue was then prepared with a povidone / iodine preparation (1-ethanol-2-pyrrolidinone homopolymer and iodine, Medline Industries, Mundelein,
(Obtained from I11). The mucosa and perichondrium were then removed. The remaining cartilage septum was replaced with 5% of povidone / iodine (V
/ V) dipped in the solution for 1 hour at room temperature.

【００５７】次に以下の操作を層流フード中で無菌的に
実施した。中隔をGey の平衡塩溶液（GIBCO Laboratori
es, Grand Island, NY) で反復してすすいだ。軟骨シー
トを次々に無菌表面に置き、均一の８ミリ栓を標準のコ
ルク穴あけ器を使用してあけた。カミソリの刃を使用し
て、頂部と底部表面を約１〜２ミリ除いた。これら栓を
Gey の平衡塩溶液中に保持した。異なった雄牛からとり
出した栓は別個に保持した。The following operations were then performed aseptically in a laminar flow hood. Separate the septum from Gey's balanced salt solution (GIBCO Laboratori
es, Grand Island, NY). The cartilage sheets were successively placed on a sterile surface and a uniform 8 mm stopper was pierced using a standard cork punch. Using a razor blade, the top and bottom surfaces were removed about 1-2 mm. These stoppers
Gey was kept in a balanced salt solution. Plugs taken from different bulls were kept separately.

【００５８】各栓を次に数個の0.８ミリディスク切片と
した。使用した切断装置は Steinbergら、Biochem. J.
180:403-412 に記載されている種類のアルミニウムブロ
ックであった。得られたディスクは、一貫して湿重量40
〜50mgであった。このディスクを、10％ウシ胎児血清、
ペニシリン、ストレプトマイシン、およびネオマイシン
を補添したダルベッコ改良イーグル培地（すべての試薬
はＧＩＢＣＯから入手、以下、ここでは単に「培地」と
称する）中で培養保持した。培養物は５％CO₂、37℃の
インキュベーター中に維持した。Each stopper was then cut into several 0.8 mm disc sections. The cutting equipment used was Steinberg et al., Biochem.
180: 403-412. The resulting disc consistently has a wet weight of 40
5050 mg. This disc is filled with 10% fetal bovine serum,
Cultures were maintained in Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented with penicillin, streptomycin, and neomycin (all reagents were obtained from GIBCO, hereinafter simply referred to as "medium"). Cultures were maintained in a 5% CO ₂ , 37 ° C. incubator.

【００５９】各雄牛から得た代表的なディスクを次いで
培養培地中へのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の放出
により示される、ＩＬ−１Ｂへの応答能力について試験
した。（グリコサミノグリカンは、細胞マトリックスが
退化すると細胞から放出される。）ＧＡＧの存在は、 F
erndale らの Connective Tissue Research, 9: 247-24
8,（これは参考文献としてここにとり込まれる）に記載
されたようにして1,９−ジメチレンエチレンブルーを使
用して検出した。刺激していない鼻の率に比較して、Ｇ
ＡＧの生成を２倍またはそれ以上に増加させることによ
って５ng／mlのＩＬ−１Ｂに応答したディスクを選択し
て次の実験で使用した。これらのディスクは以下「ＩＬ
−１Ｂ応答性ディスク」と呼ぶ。ＩＬ−１用量応答 この予備実験は、漸増量のＩＬ−１Ｂに対して用量応答
曲線が存在するか否かを判定するために実施した。Representative discs from each bull were then tested for their ability to respond to IL-1B as indicated by the release of glycosaminoglycans (GAG) into the culture medium. (Glycosaminoglycans are released from cells when the cell matrix degrades.) The presence of GAGs
erndale et al. Connective Tissue Research, 9: 247-24
Detected using 1,9-dimethyleneethylene blue as described in 8, which is incorporated herein by reference. G compared to unstimulated nose rate
Disks that responded to 5 ng / ml IL-1B by increasing AG production 2-fold or more were selected for use in the next experiment. These discs are referred to below as "IL
-1B responsive disc ". IL-1 Dose Response This preliminary experiment was performed to determine if a dose response curve exists for increasing amounts of IL-1B.

【００６０】最初に、数個のＩＬ−１Ｂ応答性ディスク
を 1/4の小片に切った（余部は、後の実験のために別に
した）。ＩＬ−１への応答は動物ごとに、ディスクごと
に、そしてスライスごとにしばしば変動があるので、こ
の実験の工程は各切片がその対照として使用されるよう
設計された。第２に、各スライスを一定量の前記培地を
含有する48ウェル組織培養クラスター（Costar, Cambri
dge, MA)の１つのウェル中でインキュベートした。48時
間後、各培養物の上清中に存在するＧＡＧ量を測定し
た。次にこの量を組織の１mg湿重量当たりのＧＡＧのμ
g によって各培養物ごとに標準化した。こうして、ＩＬ
−１の非存在下における基礎的ＧＡＧ放出割合を各スラ
イスごとに確立した。First, several IL-1B responsive discs were cut into 1/4 pieces (the extras were set aside for later experiments). Since the response to IL-1 often varied from animal to animal, from disk to disk, and from slice to slice, the steps of this experiment were designed so that each section was used as its control. Second, each slice was placed in a 48-well tissue culture cluster (Costar, Cambri) containing a fixed amount of the medium.
dge, MA). After 48 hours, the amount of GAG present in the supernatant of each culture was measured. This amount is then used as the μg of GAG per 1 mg wet weight of tissue.
g for each culture. Thus, IL
A basal GAG release rate in the absence of -1 was established for each slice.

【００６１】第３に、すべての培養物からの上清を捨
て、異なる量のＩＬ−１Ｂを含有する新たな培地で置き
換えた。ＩＬ−１Ｂは自家製造し（J. Childs, noteboo
k 935,第49〜52頁）、特性決定後その使用を必要とする
すべての実験で使用した。ＩＬ−１Ｂと48時間培養後、
培養物からの上清を回収し、それぞれ存在するＧＡＧ量
を測定した。これらの量を各培養物につき前記のように
標準化した。次いで、ＩＬ−１Ｂ誘導による割合から基
礎割合を差引いた。その結果を図１に示す（この結果は
また表形式にて表１にも掲げる）。図１に明らかに示さ
れるとおり、軟骨性組織からのＧＡＧの放出は、投与さ
れたＩＬ−１Ｂ量に依存する。Third, the supernatant from all cultures was discarded and replaced with fresh medium containing different amounts of IL-1B. IL-1B is manufactured in house (J. Childs, noteboo
k 935, pp. 49-52), used in all experiments requiring its use after characterization. After culturing with IL-1B for 48 hours,
The supernatant from the culture was collected and the amount of GAG present was measured. These amounts were normalized for each culture as described above. The basal rate was then subtracted from the rate due to IL-1B induction. The results are shown in FIG. 1 (the results are also listed in Table 1 in tabular form). As clearly shown in FIG. 1, the release of GAGs from cartilage tissue depends on the amount of IL-1B administered.

【００６２】48時間の培養期間中に、５ng／mlのＩＬ−
１Ｂは容易に測定しうるＧＡＧ放出増大を起こすゆえ、
この濃度を以下の実験で用いた。ＩＬ−１誘導ＧＡＧ放出に及ぼす rＩＬ−１raの作用 残るＩＬ−１Ｂ応答性ディスクの数個を次に 1/4のスラ
イスに切った。上述のように、各スライスをそれ自体の
対照として用いた。5 ng / ml IL-during the 48 hour culture period
1B causes an easily measurable increase in GAG release,
This concentration was used in the following experiments. Effect of rIL-1ra on IL-1 induced GAG release Several of the remaining IL-1B responsive disks were then cut into quarter slices. As described above, each slice was used as its own control.

【００６３】各スライスは、48ウェル組織培養クラスタ
ー中一定量の前記培地と48時間インキュベートした。各
スライスごとにＧＡＧ放出の基礎割合を測定した。次い
で、培養物からの上清を捨て、５mg／mlのＩＬ−１Ｂお
よび異なる量の組換え的に生産されたＩＬ−１ra ( rＩ
Ｌ−１ra )を含有する新たな培地で置換した。48時間イ
ンキュベート後、上清を回収し、そしてＧＡＧ量を測定
した。これらの量を、rＩＬ−１ra／ＩＬ−１Ｂ刺激Ｇ
ＡＧ放出割合を基礎ＧＡＧ放出割合で割ることにより各
培養物につき標準化した。結果を図２に示す。図２に明
らかに示されるように、軟骨性組織からのＧＡＧ放出
は、ＩＬ−１Ｂに比較して rＩＬ−１raの濃度増大によ
り減少した。例えば、 rＩＬ−１raをＩＬ−１Ｂに比較
して10倍モル過剰にすれば、（ＩＬ−１Ｂと rＩＬ−１
raの分子量はともに約17kD）、ＧＡＧ放出割合を基礎レ
ベルに戻すのに十分であった。同様に、 rＩＬ−１raを
ＩＬ−１Ｂに対して、1.５倍モル過剰にすれば、ＧＡＧ
放出の刺激をＩＬ−１Ｂ単独の存在下に観察された値の
50％に減少させるのに十分であった。Each slice was incubated with a fixed amount of the above medium in a 48-well tissue culture cluster for 48 hours. The basal rate of GAG release was determined for each slice. The supernatant from the culture was then discarded and 5 mg / ml IL-1B and different amounts of recombinantly produced IL-1ra (rI
L-1ra). After incubation for 48 hours, the supernatant was collected and the amount of GAG was measured. These amounts were used as rIL-1ra / IL-1B stimulated G
The AG release rate was normalized for each culture by dividing by the basal GAG release rate. The results are shown in FIG. As clearly shown in FIG. 2, GAG release from cartilaginous tissue was reduced by increasing concentrations of rIL-1ra compared to IL-1B. For example, if a 10-fold molar excess of rIL-1ra compared to IL-1B, (IL-1B and rIL-1
The molecular weight of ra was both about 17 kD), which was sufficient to return the GAG release rate to basal levels. Similarly, if a 1.5-fold molar excess of rIL-1ra over IL-1B, GAG
Stimulation of release was compared to the value observed in the presence of IL-1B alone.
It was enough to reduce to 50%.

【００６４】これらの結果は数頭の異なった雄牛に由来
する軟骨を使用して再現された。rＩＬ−１raの細胞毒性の欠如 rＩＬ−１raが非細胞毒性であることを示すために、本
発明者らは残るＩＬ−１Ｂ応答性ディスクからスライス
をとり、そしてこれをＩＬ−１Ｂの非存在下に種々の量
の rＩＬ−１raに露出させた。 rＩＬ−１raもＩＬ−１
Ｂも存在しない場合にはＧＡＧ放出割合は同一であっ
た。These results were reproduced using cartilage from several different bulls. Lack of cytotoxicity of rIL-1ra To show that rIL-1ra is non-cytotoxic, we took a slice from the remaining IL-1B responsive disc and removed it in the absence of IL-1B. Were exposed to various amounts of rIL-1ra. rIL-1ra also IL-1
When no B was present, the GAG release rate was the same.

【００６５】次いで、ＩＬ−１raの作用が可逆的である
ことを示すために発明者らは培養スライスの上清から r
ＩＬ−１raを除去し、これにＩＬ−１Ｂを投与した。こ
のスライスは、ＩＬ−１Ｂ用量応答実験において応答し
たと全く同様の応答をした。ＩＬ−１Ｂ、およびＩＬ−
１Ｂの作用を完全に阻止するに十分な濃度の rＩＬ−１
raで処理された軟骨を次にＩＬ−１Ｂ単独にさらすと同
様の結果が得られた。 実施例２：マウスにおけるコラーゲン誘導関節炎に及ぼ
すヒトインターロイキン−１インヒビターの作用の証明 マウスのタイプIIコラーゲン誘導関節炎ヒトリウマチ様
関節炎と多くの類似性を有しておりそしてこの数年間こ
の疾患の特定の面を研究するのに使用されてきた。J. S
tuartら、 The FASEB Journal, 第２巻, No.14, 第2950
〜2956頁、November 1988, これは参考文献としてここ
にとり込まれる。リウマチ様関節炎におけるＩＬ−１の
関与の可能性は、S. Stimpson らによって注目されてい
る。TheJournal of Immunology, 第140巻, 第2964〜296
9頁, No.9, May 1, 1988,これも参考文献としてとり込
まれる。Next, in order to show that the action of IL-1ra is reversible, the present inventors extracted r from the supernatant of culture slices.
IL-1ra was removed and IL-1B was administered. This slice responded exactly as it did in the IL-1B dose response experiment. IL-1B, and IL-
RIL-1 at a concentration sufficient to completely block the action of 1B
Similar results were obtained when the cartilage treated with ra was then exposed to IL-1B alone. Example 2 Demonstration of the Effect of Human Interleukin-1 Inhibitor on Collagen-Induced Arthritis in Mice Type II Collagen-Induced Arthritis in Mice Has Many Similarities to Human Rheumatoid Arthritis and Identification of the Disease in the Past Years Has been used to study aspects of J. S
tuart et al., The FASEB Journal, Volume 2, No. 14, 2950
2952956, November 1988, which is incorporated herein by reference. The potential involvement of IL-1 in rheumatoid arthritis has been noted by S. Stimpson et al. The Journal of Immunology, Vol. 140, Nos. 2964-296
Page 9, No. 9, May 1, 1988, also incorporated by reference.

【００６６】この実験の目的は、 rＩＬ−１raの全身投
与がマウスにおけるタイプIIコラーゲン誘導関節炎の発
病に軽減効果を有することを証明することであった。Ja
ckson Laboratoriesから購入した24匹のマウスＤＢＡ／
１マウスをフロインド完全アジュバント中の0.１mgのニ
ワトリタイプIIコラーゲンで免疫した。免疫後14日目
に、それぞれ12匹ずつの２群にランダムに分けた。実験
群には、１日２回、約0.１mgの rＩＬ−１ra／kg／注射
を腹腔内投与した。免疫後47日目に (即ち、投薬34日目
に) 動物を殺すまで注射を続けた。対照動物には同じス
ケジュールで、同量の担体 (10mMリン酸ナトリウム、15
0mM 塩化ナトリウム) を注射した。The purpose of this experiment was to demonstrate that systemic administration of rIL-1ra had a reducing effect on the pathogenesis of type II collagen-induced arthritis in mice. Ja
24 mice DBA / purchased from ckson Laboratories
One mouse was immunized with 0.1 mg of chicken type II collagen in Freund's complete adjuvant. On day 14 after immunization, they were randomly divided into two groups of 12 animals each. The experimental group was intraperitoneally administered about 0.1 mg of rIL-1ra / kg / injection twice a day. Injections continued until the animals were killed on day 47 post immunization (ie, on day 34 of dosing). Control animals have the same schedule and the same amount of vehicle (10 mM sodium phosphate, 15 mM
0 mM sodium chloride).

【００６７】冒された四肢を計測し、そして実験期間
中、１週間に約３回臨床評点した。各動物の臨床評点
は、０〜４点を基礎として、盲検者により評価した各足
部により確認される関節炎のひどさを表わす。臨床的に
観察し得る関節炎の最初の徴候が注目される26日目か
ら、動物を殺す47日目までの各動物の臨床評点を表２に
示す。冒された四肢の得点および各群に対する臨床評点
の合計も表２に示される。これらの結果はそれぞれ図３
および図４に時間の関数としてグラフに示す。明らかに
判るとおり、病気の発生とひどさは rＩＬ−１raの投与
によってかなり低下した。 実施例３：ストレプトコッカス細胞壁 (ＳＣＷ) 誘導ラ
ット関節炎のＳＣＷ誘導再活性化に及ぼすヒトインター
ロイキン−１インヒビターの作用の証明 ストレプトコッカス細胞壁誘導関節炎については、 R.
L. Wilder が Immunopathogenetic Mechanisms of Arth
ritis, 第９章, 標題 "Experimental Animal Models of
Chronic Arthritis"において、 "実験的な関節疾患の
臨床的、組織学的および放射線学的特徴は、成人および
若年者のリウマチ様関節炎で観察されるものと密接に類
似している" と述べている。The affected extremities were measured and clinically scored approximately 3 times per week for the duration of the experiment. The clinical score for each animal represents the severity of arthritis identified by each paw as assessed by a blinder on a 0-4 basis. Table 2 shows the clinical scores of each animal from day 26, when the first clinically observable signs of arthritis are noted, to day 47 when the animals are killed. The scores of affected limbs and the sum of the clinical scores for each group are also shown in Table 2. These results are shown in FIG.
And in FIG. 4 are graphed as a function of time. As can be seen, the incidence and severity of the disease was significantly reduced by administration of rIL-1ra. Example 3: Demonstration of the effect of human interleukin-1 inhibitor on SCW-induced reactivation of Streptococcus cell wall (SCW) -induced rat arthritis.
L. Wilder for Immunopathogenetic Mechanisms of Arth
ritis, Chapter 9, Title "Experimental Animal Models of
"Chronic Arthritis" states, "The clinical, histological, and radiological characteristics of experimental joint disease are closely similar to those observed in adult and young rheumatoid arthritis." .

【００６８】以下の実験では、Esser らの Arthritis a
nd Rheumatism, 28: 1401-1411, 1985 (これは参考文献
としてここにとり込まれる) に開示されているモデルを
使用する。このモデルは簡単に要約すると以下のとおり
である：ストレプトコッカス細胞壁 (ＳＣＷ) をルイス
ラットの足くるぶし関節に関節内注射した。反対側の関
節に食塩水を注射して対照とした。20日後、この間に最
初の炎症は静まったが、ＳＣＷを再びこんどは静脈内注
射により投与した。このＳＣＷ量はそれ自体で関節炎症
を起こすには不十分であり、それゆえ食塩水を注射した
足関節にはほとんどまたは全然影響を与えなかった。し
かしながらこれに対して、この量は予めＳＣＷを注射し
た足くるぶしにおける炎症および関節破壊を再活性させ
ることができる。ＳＣＷの２回目の投与に続いて炎症の
程度を評価するため、足関節の寸法を毎日測定した。In the following experiments, Esser et al., Arthritis a
Use the model disclosed in nd Rheumatism, 28: 1401-1411, 1985, which is incorporated herein by reference. The model is briefly summarized as follows: Streptococcus cell wall (SCW) was injected intra-articularly into the ankle joint of Lewis rats. The contralateral joint was injected with saline to serve as a control. Twenty days later, during this time the initial inflammation subsided, but SCW was again administered again intravenously. This SCW amount was insufficient by itself to cause joint inflammation, and therefore had little or no effect on saline injected ankle joints. In contrast, however, this amount can reactivate inflammation and joint destruction in ankles previously injected with SCW. Ankle dimensions were measured daily to assess the degree of inflammation following the second dose of SCW.

【００６９】上述モデルで実施した多くの実験の１つに
おいて、12匹のラットの２つの群を用いた。各動物に
は、右の足くるぶしにＳＣＷ (1.８μg ラムノース等
価) を、左の足くるぶしに同量の発熱物質不含食塩水を
注射した。足くるぶしの寸法を１〜６日目まで測定し
た。20日目に、ラットの１つのグループには１mg／kgの
ＩＬ−１raを水性担体中で腹腔内注射した；他の群には
同量の担体溶液のみを腹腔内注射した。１時間後、各動
物にＳＣＷ(100μg ラムノース等価) を静脈注射した。
10分後に、処理群には１mg／kgのＩＬ−１raを、そして
対照群には担体のみを腹腔内注射したＯＳＣＷ投与２お
よび６時間後、１mg／kgのＩＬ−１raを皮下注射し、そ
の後６時間毎に３日間反復した。In one of the many experiments carried out in the above model, two groups of 12 rats were used. Each animal was injected with SCW (1.8 μg rhamnose equivalent) in the right ankle and the same amount of pyrogen-free saline in the left ankle. The size of the ankle was measured from day 1 to day 6. On day 20, one group of rats was injected intraperitoneally with 1 mg / kg of IL-1ra in an aqueous carrier; the other group was injected intraperitoneally with the same amount of carrier solution only. One hour later, each animal was injected intravenously with SCW (100 μg rhamnose equivalent).
Ten minutes later, the treatment group was injected subcutaneously with 1 mg / kg IL-1ra, and the control group was injected subcutaneously with 1 mg / kg IL-1ra 2 and 6 hours after OSCW injection with vehicle alone. Repeated every 6 hours for 3 days.

【００７０】表３および図５は、実験期間中における処
理群と対照群の二群に関する食塩注射くるぶしおよびＳ
ＣＷ注射くるぶしの寸法を示す。予想したとおり両群の
ＳＣＷ処理くるぶしはＳＣＷの静脈注射に応答して腫脹
した。しかしながら、処理群間で応答は異なっていた。
対照群の足くるぶしは最初の３日でもとの大きさよりも
30％腫脹したのに対して、処置群の足くるぶしは同じ期
間に14％しか腫脹しなかった。加えて、ＳＣＷの静脈注
射後１〜５日目で、ＳＣＷ処置群および反対側の対照く
るぶし群の両群の寸法に統計的に有意の差があった (独
立平均に関する２−テイルｔ−テストでｐ＜0.001)。Table 3 and FIG. 5 show saline injection ankles and S for the two groups, treated and control, during the experimental period.
Shows the dimensions of the CW injection ankle. As expected, both groups of SCW-treated ankles swelled in response to intravenous injection of SCW. However, the responses differed between treatment groups.
The control group's ankles were larger than they were in the first three days
The ankles in the treatment group swelled only 14% over the same period, while 30% had swelled. In addition, there was a statistically significant difference in the size of both the SCW-treated group and the contralateral control ankle group from day 1 to day 5 after intravenous injection of SCW (2-tail t-test for independent means) P <0.001).

【００７１】８日目にラットを殺し、両方の足くるぶし
をホルマリンに固定した。固定した関節から石灰質を除
き、染色しそして検査した。軟骨腐食、滑液のう炎、骨
膜炎および滑膜炎に関して、対照群と処置群の間で有意
差が見られた。これらの差異を表４に示す。 実施例４：ホルマリン−免疫複合体誘導ＩＢＤに及ぼす
ヒトインターロイキン−１インヒビターの作用の証明 アラキドン酸由来炎症性メジエーターの役割を研究する
ため、そしてＩＢＤにおける治療方策を評価するために
ホルマリン−免疫複合体ＩＢＤのウサギモデルが使用さ
れている。Zipser等、前出；Brown 等、1987 Gastroent
erology 92: 54-59; Schumert 等、1988 Prostaglandin
s 36:565-577, これらは参考文献としてここにとり込ま
れる。On day 8, the rats were killed and both ankles were fixed in formalin. The fixed joints were decalcified, stained and examined. There were significant differences between the control and treatment groups for cartilage erosion, synovial cystitis, periosteitis and synovitis. These differences are shown in Table 4. Example 4: Demonstration of the Effect of Human Interleukin-1 Inhibitor on Formalin-Immune Complex-Induced IBD To study the role of arachidonic acid-derived inflammatory mediators and to evaluate therapeutic strategies in IBD A rabbit model of body IBD has been used. Zipser et al., Supra; Brown et al., 1987 Gastroent
erology 92: 54-59; Schumert et al., 1988 Prostaglandin.
s 36: 565-577, which are incorporated herein by reference.

【００７２】後記する実験は、Zipser等の上掲のものの
中に開示されたモデルを使用する。このモデルは活性な
潰瘍性大腸炎に類似の症状を生じ、簡単に述べると以下
のとおりである：ホルムアルデヒドをカテーテルからウ
サギの結腸に投与しそして一定期間後、動物に抗原が過
剰の免疫複合体を注射する。ＩＢＤ誘発に続く経時的研
究は、48時間後に動物を殺して結腸を摘出することによ
って実施した。結腸を組織学的に評価した。ＩＢＤの誘
発前および後での、炎症、浮腫および壊死に及ぼすＩＬ
−１ra処置の効果を非処置対照動物と比較した。ＩＢＤの誘発 Kirsnew 等、1957, Trans. Assoc. Am. Physicians 70:
102-119; Hodgson 等、1978, Gut 19: 225-32 (これら
は参考文献としてここにとり込まれる) の結腸炎の免疫
複合体方法を改変したものを使用して、雄のニュージー
ランドウサギ(2.2〜2.５kg) の遠位結腸に炎症を誘発さ
せた。麻酔したウサギ (キシラジンおよびケタミン) の
遠位結腸に10cm挿入したカテーテルを介して、４mlの0.
45％(V/V) 非緩衝ホルムアルデヒド (Electron Microsc
opy Sciences, Washington, PA)を投与した。２時間
後、動物に耳静脈から抗原過剰の免疫複合体0.85mlを与
えた。この複合体は Zipser ら、前出、に記載されるよ
うにして、ヒト血清アルブミン(500μg/ml) をウサギ抗
ヒト抗血清 (ICN Immunobiologycals, Costa Meas, CA)
とインキュベートし、上清をデカンテーションしそして
沈澱した免疫複合体をアルブミン溶液(6mg/ml)を用いて
再溶解させることにより製造した。The experiments described below use the model disclosed in Zipser et al., Supra. This model produces symptoms similar to active ulcerative colitis and is briefly described as follows: formaldehyde is administered to the rabbit colon via a catheter, and after a period of time, the animal is challenged with an immune complex in excess of antigen. Injection. A time course study following IBD induction was performed by killing the animals and removing the colon 48 hours later. The colon was evaluated histologically. IL on inflammation, edema and necrosis before and after induction of IBD
The effect of -1ra treatment was compared to untreated control animals. Induction of IBD Kirsnew et al., 1957, Trans. Assoc. Am. Physicians 70:
102-119; Hodgson et al., 1978, Gut 19: 225-32 (these are incorporated herein by reference). Inflammation was induced in the distal colon (2.5 kg). Anesthetized rabbits (xylazine and ketamine), 4 ml of 0.4 ml via a catheter inserted 10 cm into the distal colon.
45% (V / V) unbuffered formaldehyde (Electron Microsc
opy Sciences, Washington, PA). Two hours later, the animals received 0.85 ml of antigen-rich immune complex via the ear vein. This complex was prepared as described in Zipser et al., Supra, using human serum albumin (500 μg / ml) as a rabbit anti-human antiserum (ICN Immunobiologycals, Costa Meas, CA).
The supernatant was decanted and the precipitated immunoconjugate was prepared by redissolving with an albumin solution (6 mg / ml).

【００７３】組織学的評価は、各結腸から得られた最低
限２個の長方向切片について行なった。すべての結腸試
料は１人の病理学者が盲検的に検査した。粘膜と粘膜下
組織は急性炎症性細胞の浸潤に関して別々に評価した
(好中球および好酸球) 。検査した各領域に関し次式を
使用して、ハイパワー域 (high power field：HPF)当た
りの白血球 (Ｌ) の半定量的評点をつけた：０＝０また
は１；0.５＝２−９；１＝10−20；1.５＝20−30；２＝
31−40；2.５＝41−50；３＝51−65；3.５＝66−80；４
＝＞81 L/HPF。最小限、各標本からの粘膜と粘膜下組織
の８個のＨＰＦが各切片において別々に評価された。炎
症指数は、粘膜および粘膜下組織の評価に対する平均得
点を加えることによって計算した。浮腫は０〜４のスケ
ールで半定量的に評価した。壊死は関与する粘膜のパー
セントとして表わした。ホルマリンの投与に続く免疫複
合体の投与により、遠位結腸は急性炎症を生ずる。これ
は、好中球の主に粘膜および粘膜下組織への浸潤、粘液
枯渇、陰窩膿瘍、浮腫および粘膜壊死散乱領域により特
徴づけられ、それぞれ 0.3±0.1(０時間) から 4.5±0.
７ (48時間) (p＜0.001)、 0.3±0.1 から 3.6±0.3 (p
＜0.001)および０％から89％(p＜0.001)まで漸進的に増
加した。これらのパラメーターの引き続いての減少は、
ＩＢＤの誘発96時間後に観察された(p＜0.01対 48時間)
。ＩＬ−１raでの処置 一群の動物にＩＬ−１ra (５mg／kg；ｎ＝８) または担
体のみ (ｎ＝10) を下記６時点で静脈処理した、すなわ
ち２時間前および免疫複合体の投与１, ９, 17, 25, 33
時間後。ＩＢＤ誘発48時間後ウサギを殺し、そして結腸
組織の炎症を分析した。Histological evaluation was performed on a minimum of two longitudinal sections obtained from each colon. All colon samples were blindly examined by one pathologist. Mucosa and submucosa were assessed separately for acute inflammatory cell infiltration
(Neutrophils and eosinophils). A semi-quantitative score of white blood cells (L) per high power field (HPF) was scored for each region examined using the formula: 0 = 0 or 1; 0.5 = 2-9 1 = 10-20; 1.5 = 20-30; 2 =
31-40; 2.5 = 41-50; 3 = 51-65; 3.5 = 66-80; 4
=> 81 L / HPF. At a minimum, eight HPFs of mucosa and submucosa from each specimen were evaluated separately in each section. The inflammatory index was calculated by adding the average score for mucosal and submucosal tissue assessment. Edema was evaluated semi-quantitatively on a scale of 0-4. Necrosis was expressed as the percentage of mucosa involved. Administration of the immune complex following administration of formalin results in acute inflammation of the distal colon. It is characterized by neutrophil predominantly infiltrating mucosa and submucosa, mucus depletion, crypt abscess, edema and mucosal necrotic scattering areas, from 0.3 ± 0.1 (0 hours) to 4.5 ± 0.
7 (48 hours) (p <0.001), 0.3 ± 0.1 to 3.6 ± 0.3 (p
<0.001) and gradually increased from 0% to 89% (p <0.001). The subsequent decrease in these parameters is
Observed 96 hours after induction of IBD (p <0.01 vs. 48 hours)
. Treatment with IL-1ra One group of animals was treated intravenously with IL-1ra (5 mg / kg; n = 8) or vehicle alone (n = 10) at the following 6 time points: 2 hours before and administration of immune complex 1 , 9, 17, 25, 33
After hours. Rabbits were sacrificed 48 hours after IBD challenge and colon tissue inflammation was analyzed.

【００７４】ＩＬ−１raでウサギを処置すると担体処置
ＩＢＤ動物に比較して炎症指数を3.2±0.4 から 1.4±
0.3 (p＜0.02) に、浮腫を 2.2±0.4 から 0.6±0.3 (p
＜0.01) に、そして壊死を43±10％から 6.6±3.2 ％(p
＜0.03) に減少させた。６図。この結果は、ＩＢＤの幾
つかの徴候はＩＬ−１raでの処置によって有意に減らし
得ることを示している。 実施例５：ラットにおける細菌細胞誘導ＩＢＤ 他の多くのＩＢＤモデルとは異なり、細菌細胞壁誘導Ｉ
ＢＤモデルは慢性ＩＢＤまたはクローン病の徴候の大部
分を示す。慢性肉芽腫性応答の形成に加えて、このモデ
ルは自発的再活性化、貧血および腸管外炎症を受けやす
い。Treatment of rabbits with IL-1ra resulted in an inflammation index of 3.2 ± 0.4 to 1.4 ± compared to carrier-treated IBD animals.
At 0.3 (p <0.02), the edema increased from 2.2 ± 0.4 to 0.6 ± 0.3 (p
<0.01) and necrosis from 43 ± 10% to 6.6 ± 3.2% (p
<0.03). FIG. The results indicate that some signs of IBD can be significantly reduced by treatment with IL-1ra. Example 5: Bacterial cell induced IBD in rats Unlike many other IBD models, bacterial cell wall induced IBD
The BD model shows most of the signs of chronic IBD or Crohn's disease. In addition to forming a chronic granulomatous response, this model is susceptible to spontaneous reactivation, anemia and parenteral inflammation.

【００７５】ＩＬ−１媒介ＩＢＤに対するＩＬ−１raの
軽減作用を証明するために、Sartorら、上記によって実
質的に記載された細菌細胞壁モデルをこの実施例で用い
た。実験は一般に次のように行った：Ａ群ストレプトコ
ッカスからのペプチドグリカンポリサッカライドの滅菌
音波処理物を静脈内注射することにより、ラットにＩＢ
Ｄを誘導した。結腸の一過性点状出血が注射後２〜３分
以内に現われ、48〜72時間までに解消する。動物のサン
プル群を、ＩＢＤ誘導に続いてＩＬ−１raで処理し、あ
る期間経過後、動物を殺し、結腸を摘出し、全般的病理
を評価した。 ＩＢＤの誘導 細菌細胞壁物質は、Stimpsonら、1986, Infect. Immun.
51: 240-249 (これは参考としてここに組込まれる) に
記載された操作法に従って製造された。Lewisラットに
ストレプトコッカス細胞壁を皮下注射により与える。こ
の注射により局所的および全身的な障害が生じ、これに
は腸の癒着および小結節、肝重量増加および肝小結節、
ヘマトクリットおよびヘモグロビンレベルの低下、白血
球数 (ＷＢＣ) の増加、生長速度の低下および関節炎に
特徴的な関節の腫脹 (添加のStartor ら、Gastroentero
logy, 89: 587-595, 1985 参照、これは参考としてここ
に取込まれる) が含まれる。このモデルを用いて、ＩＬ
−１raによる処置について３つの別個のプロトコルを行
い、小結節および癒着の減少がそのすべてにおいて観察
された；最後の２つのプロトコルにおいては癒着の減少
は統計学的に有意であった。 プロトコルＡ ラット12匹の２つの群を用いた。第１日目に両群にスト
レプトコッカス細胞壁由来のペプチドグリカンポリサッ
カライド (ＳＣＷ ＰＧ−ＡＰＳ) 合計15μgを盲腸で３
箇所、パイエル板で２箇所および管回腸で２箇所の７箇
所に与えた。第11日目に、関節腫脹、下痢および出血性
鼻を含む病気の明白な徴候が現われた。この時点で一方
の群にＩＬ−１ra (８mg／kg) を12時間毎に皮下投与
し、第２群は同じくプラシーボ (ＰＢＳ) で処置した。
足首関節の寸法を毎日測定した。第18日目に動物を殺
し、肉芽腫および癒着の存在に関して０〜４の段階で腸
管を採点した (表５) 。ＩＬ−１ra群は小結節および癒
着がより少なかった。ＩＬ−１ra群は肝もより小さかっ
た。ＩＬ−１ra群は白血球数 (ＷＢＣ) が減少してい
た。 プロトコルＢ このプロトコルは、ＰＧ−ＡＰＳの使用量を12.5μg に
減少させ、そしてＩＬ−１raでの処置を第８日目に開始
した以外はプロトコルＡで用いたと同様であった。プロ
トコルＡにおけるように、盲腸小結節、腸管癒着、肝重
量およびＷＢＣの減少が観察された (表６) 。癒着の減
少はｐ＜0.02レベルで有意であった。 プロトコルＣ ここで用いたプロトコルもまた、ＰＧ−ＡＳＰの量を1
2.5μg に減少させ (プロトコルＢと同様) 、そして処
置群をＰＧ−ＡＰＳ注射の直後にＩＬ−１ra 8mg／kg皮
下および２mg／kg静脈内で始めた以外はプロトコルＡと
同様であった。さらに、第１日目に４、10および18時間
目に、第２日目に８時間毎に、そして実験期間中に12時
間毎にＩＬ−１raの皮下注射 (８mg／kg) を与えた。内
蔵の病変を調べるために各群の動物５匹を第３日目に殺
し、残りを第18日目に殺した (表７) 。第３日目におい
て、内蔵病変を示す広範囲なパラメーターが減少し、そ
して癒着が減少し有意 (ｐ＝0.07) に近づいた。第18日
目に殺した群の結果は、対照群動物のうちの１匹に病気
が現われなかったため混乱したものであった。しかし、
ＩＬ−１ra群における癒着の減少はｐ＜0.02レベルでな
お有意であり、ＩＬ−１ra群では体重増加も有意に大き
かった。 実施例６：ラットにおけるＮＳＡＩＤ誘導ＩＢＤ ＩＬ−１raの抗炎症作用がＮＳＡＩＤの作用と相加的で
あるかどうかを決定する試みにおいて、実施例３に記載
したようにＰＧ−ＡＰＳの静脈内注射ののち、ラットを
インドメタシン (活性化後に、24および36時間での再活
性化時点で、そして６日まで12時間毎に２mg／kg) 、Ｉ
Ｌ−１ra (２および６時間に、次いで36時間まで６時間
毎に、そして７日まで12時間毎に２mg／kg) 、および両
方の薬物の組合せにより処置した (図７) 。To demonstrate the mitigating effect of IL-1ra on IL-1-mediated IBD, the bacterial cell wall model substantially as described by Sartor et al., Supra was used in this example. The experiments were generally performed as follows: Rats were given IB by intravenous injection of a sterile sonicate of peptidoglycan polysaccharide from Group A Streptococcus.
D was induced. Transient petechiae of the colon appear within a few minutes after the injection and resolve by 48-72 hours. A group of animals was treated with IL-1ra following IBD induction, and after a period of time, the animals were sacrificed, the colon was removed and the general pathology was evaluated. Induction of IBD Bacterial cell wall material is described in Stimpson et al., 1986, Infect. Immun.
51: 240-249, which is incorporated herein by reference. Lewis rats are given a streptococcal cell wall by subcutaneous injection. This injection causes local and systemic damage, including intestinal adhesions and nodules, increased liver weight and nodules,
Decreased hematocrit and hemoglobin levels, increased white blood cell count (WBC), decreased growth rate and joint swelling characteristic of arthritis (Startor et al., Gastroentero
logy, 89: 587-595, 1985, which is hereby incorporated by reference). Using this model, IL
Three separate protocols for treatment with -1ra were performed and reduced nodules and adhesions were observed in all of them; in the last two protocols the reduction in adhesions was statistically significant. Protocol A Two groups of 12 rats were used. On day 1, both groups received a total of 15 μg of peptidoglycan polysaccharide (SCW PG-APS) derived from Streptococcus cell wall via cecum.
It was given at seven sites, two on Peyer's patches and two on the ileum. On day 11, obvious signs of illness including joint swelling, diarrhea and bleeding nose appeared. At this point, one group was subcutaneously administered IL-1ra (8 mg / kg) every 12 hours and the second group was also treated with placebo (PBS).
Ankle joint dimensions were measured daily. Animals were sacrificed on day 18 and the intestine was scored on a scale of 0-4 for the presence of granulomas and adhesions (Table 5). The IL-1ra group had less nodules and adhesions. The liver in the IL-1ra group was also smaller. The IL-1ra group had a decreased white blood cell count (WBC). Protocol B This protocol was similar to that used in Protocol A, except that the amount of PG-APS used was reduced to 12.5 μg and treatment with IL-1ra was started on day 8. As in Protocol A, reduced cecal nodules, intestinal adhesions, liver weight and WBC were observed (Table 6). The reduction in adhesions was significant at the p <0.02 level. Protocol C The protocol used here also has an amount of PG-ASP of 1
Reduced to 2.5 μg (similar to protocol B) and similar to protocol A except that the treatment group was started immediately after injection of PG-APS with 8 mg / kg subcutaneous and 2 mg / kg iv of IL-1ra. In addition, subcutaneous injections of IL-1ra (8 mg / kg) were given on days 1, 4, 10 and 18 hours, every 8 hours on day 2, and every 12 hours during the experiment. Five animals from each group were killed on day 3 to check for visceral lesions and the rest on day 18 (Table 7). On day 3, a wide range of parameters indicative of visceral lesions decreased, and adhesions decreased and approached significance (p = 0.07). The results of the group killed on day 18 were confused because one of the control animals did not show any disease. But,
The decrease in adhesion in the IL-1ra group was still significant at the p <0.02 level, and the weight gain was also significantly greater in the IL-1ra group. Example 6: In an attempt to determine whether the anti-inflammatory effect of NSAID-induced IBD IL-1ra in rats is additive to the effect of NSAID, the intravenous injection of PG-APS as described in Example 3 Later, rats were treated with indomethacin (2 mg / kg after activation at reactivation at 24 and 36 hours and every 12 hours until day 6), I
L-1ra (2 mg / kg at 2 and 6 hours, then every 6 hours up to 36 hours, and every 12 hours up to 7 days), and a combination of both drugs (FIG. 7).

【００７６】インドメタシン単独群はＩＬ−１ra単独群
よりも大きな関節腫脹減少を示した。しかし、インドメ
タシン群は病気であり、実験経過中に２匹の動物が死ん
だ。両方の薬物を与えた群はインドメタシン単独群より
もいっそう良好であり；関節腫脹が少なく、そして２つ
の群間の差は第４日目にｐ＜0.03で、第７および８日目
にｐ＜0.06で統計学的に有意であった。群では病気の動
物はおらず、中部小腸での潰瘍形成が少なかった。中部
小腸での潰瘍形成は慢性的な経口ＮＳＡＩＤ患者におい
て併発する。従ってＩＬ−１raはＮＳＡＩＤのＩＢＤ様
併発のいくつかを軽減するものと思われる。The indomethacin alone group showed a greater reduction in joint swelling than the IL-1ra alone group. However, the indomethacin group was ill and two animals died during the course of the experiment. The group receiving both drugs was much better than the indomethacin alone group; less joint swelling and the difference between the two groups was p <0.03 on day 4 and p <0.0 on days 7 and 8. It was statistically significant at 0.06. There were no diseased animals in the group and less ulceration in the middle small intestine. Ulceration in the middle small intestine is complicated in chronic oral NSAID patients. Thus, IL-1ra appears to reduce some of the IBD-like complications of NSAIDs.

【００７７】表８は、ＩＬ−１raが腸管の症状--潰瘍、
癒着、腸管肥大およびミレロ (mylelo) ペルオキシダー
ゼ (ＭＰＯ) レベル--ならびに全身的症状--ヘマトクリ
ット(ＨＣＴ) 、ヘモグロビン (ＨｇＢ) およびＷＢＣ
レベル--の双方に及ぼす作用を示す。 実施例７：エンドトキシン誘導敗血症性ショックに及ぼ
すヒトインターロイキン−１レセプター拮抗体の作用の
証明 エンドトキシン誘導敗血症性ショックの研究をブルーチ
ンチラウサギにおいて行った。実験プロトコルは群死亡
率以外は誘導された敗血症性ショックの症状には何ら集
中されなかった。エンドトキシンおよび他の細菌産物の
発熱および代謝作用に対するウサギの感受性はヒト患者
のそれと類似しているので、ウサギをこの研究に使用し
た。Table 8 shows that IL-1ra causes intestinal symptoms--ulcer,
Adhesions, intestinal hypertrophy and mylelo peroxidase (MPO) levels--and systemic symptoms--hematocrit (HCT), hemoglobin (HgB) and WBC
The effect on both levels is shown. Example 7: Demonstration of the Effect of a Human Interleukin-1 Receptor Antagonist on Endotoxin-Induced Septic Shock A study of endotoxin-induced septic shock was carried out in Routine rabbits. The experimental protocol was not focused on any symptoms of induced septic shock except for group mortality. Rabbits were used in this study because the sensitivity of rabbits to the fever and metabolic effects of endotoxins and other bacterial products is similar to that of human patients.

【００７８】エンドトキシンを時点ゼロで静脈内に１回
注射することによりショックを誘導した。−10分、時点
ゼロおよびその後24時間の期間中２時間毎にウサギに周
期的静脈内注射を与えた。この研究の結果を表９に示
す。表９において、Ａ群ウサギ (ｎ＝５) には時点ゼロ
でどのエンドトキシンをも与えず、周期的注射時点でＩ
Ｌ−１ra不含食塩水注射を与えた。Ｂ群ウサギ (ｎ＝1
0) には体重１kg当り0.５mgのエンドトキシンを時点ゼ
ロで与え、ここでもまた周期的注射はＩＬ−１ra不含で
あった。７日後にＢ群ウサギの生存率はわずかに20％で
あった。Shock was induced by a single intravenous injection of endotoxin at time zero. Rabbits received periodic intravenous injections at -10 minutes, time zero and every 2 hours for a period of 24 hours thereafter. The results of this study are shown in Table 9. In Table 9, group A rabbits (n = 5) did not receive any endotoxin at time zero and received I at periodic injection time points.
L-1ra-free saline injections were given. Group B rabbits (n = 1
0) received 0.5 mg endotoxin / kg body weight at time zero, where again the periodic injections were free of IL-1ra. After 7 days, the survival of group B rabbits was only 20%.

【００７９】Ｃ〜Ｅ群 (ｎ＝10) においてはエンドトキ
シンを時点ゼロで投与し、食塩水注射は変動量のＩＬ−
１raを含有していた。Ｃ群ウサギには体重１kg当り合計
で10mgのＩＬ−１raを与えた。Ｄ群ウサギには体重１kg
当り合計で30mgのＩＬ−１raを与えた。最後に、Ｅ群ウ
サギには体重１kg当り合計で 100mgのＩＬ−１raを与え
た。７日後にＥ群ウサギの生存率は90％であった。In groups C to E (n = 10) endotoxin was administered at time zero and saline injections were dosed with varying doses of IL-.
1ra. Group C rabbits received a total of 10 mg IL-1ra per kg body weight. Group D rabbits weigh 1 kg
A total of 30 mg IL-1ra was given per dose. Finally, group E rabbits received a total of 100 mg IL-1ra per kg body weight. After 7 days, the survival rate of group E rabbits was 90%.

【００８０】この実験は図８にグラフで示されており、
ＩＬ−１raでの処置がエンドトキシン誘導ショックを有
するウサギの最終死亡率を有意に遅延させかつ低下させ
ることを示す。 実施例８：虚血および再灌流損傷に及ぼすヒトインター
ロイキン−１レセプター拮抗体の作用の証明 次の実施例においては実験用イヌを２時間局部的心筋性
虚血となし次いで４時間再灌流させた。これらの犬を２
つの群に分け、一方の群をＩＬ−１raで処置し、他方を
試験群に用いたのと同じ緩衝液中の血清アルブミンで処
置した。This experiment is shown graphically in FIG.
FIG. 4 shows that treatment with IL-1ra significantly delays and reduces terminal mortality in rabbits with endotoxin-induced shock. Example 8: Demonstration of the Effect of a Human Interleukin-1 Receptor Antagonist on Ischemia and Reperfusion Injury In the following example, experimental dogs were given 2 hours of local myocardial ischemia followed by 4 hours of reperfusion. Was. Two of these dogs
One group was treated with IL-lra and the other was treated with serum albumin in the same buffer used for the test group.

【００８１】動物を１昼夜絶食させ、翌朝５％チアミラ
ールナトリウム10ml、次いで６％ナトリウムペントバル
ビタール２mlの静脈内注射により麻酔した。必要に応じ
追加のナトリウムペントバルビタールを実験中に投与し
た。Harvard レスピレーターにより人工呼吸を維持し
た。第５肋骨内腔を通して左開胸を行い、液体および薬
物投与のために左内側頸静脈中に、そして血圧をモニタ
ーし標準血液サンプルを採血するために左内側頸動脈お
よび大腿動脈中にポリビニルカテーテルを配置した。放
射性小球を注射するために左心房に１本のカテーテルを
配置した。左回旋動脈を切開して周囲の組織を除去し、
電磁流プローブをこの血管上に第１純角境界ブランチの
近位に置いた。リドカイン50mgを静脈内ボーラス注射し
たのち、回旋冠動脈を係蹄遮断子で２時間遮断した。電
磁流プローブにより完全な遮断を確かめた。次いで係蹄
を突然にゆるめ、冠血管床の再灌流を４時間行わせた。The animals were fasted overnight and anesthetized the following morning by intravenous injection of 10 ml of 5% thiamylal sodium and then 2 ml of 6% sodium pentobarbital. Additional sodium pentobarbital was administered during the experiment as needed. Artificial respiration was maintained by a Harvard respirator. Perform a left thoracotomy through the 5th rib lumen and a polyvinyl catheter into the left medial jugular vein for fluid and drug administration and into the left medial carotid and femoral arteries to monitor blood pressure and draw a standard blood sample. Was placed. One catheter was placed in the left atrium for injection of radioactive globules. Incising the left circumflex artery to remove surrounding tissue,
An electromagnetic flow probe was placed over the vessel proximal to the first pure angle boundary branch. After an intravenous bolus injection of lidocaine 50 mg, the circumflex coronary artery was blocked with a snare block for 2 hours. Electromagnetic flow probe confirmed complete interruption. The snare was then suddenly loosened and reperfusion of the coronary vascular bed was performed for 4 hours.

【００８２】２次元超音波心臓検査図および血行動態量
(心拍、血圧および左心房圧) を、遮断の前、遮断の 1
10分後、再灌流の５分後および再灌流の４時間後に測定
した。２次元超音波心臓検査をスキャナーおよび2.25MH
z トランスデューサーを用いて行った。このトランスデ
ューサーを毛をそったクローズド右胸の上に置き、左心
室の円周範囲が短軸投射で充分に見えるようにした。超
音波心臓イメージを中部乳頭筋の位置でソニーレコーダ
を用いてビデオカセットに記録した。ミニコンピュータ
ーを基礎とするビデオデジタル化系を用いて２次元超音
波心臓分析を行った。Two-dimensional echocardiogram and hemodynamic amount
(Heart rate, blood pressure and left atrial pressure)
Measurements were taken after 10 minutes, 5 minutes after reperfusion and 4 hours after reperfusion. Scanner and 2.25MHZ for 2D ultrasonography
Performed using a z transducer. The transducer was placed on the shaved, closed right breast so that the circumferential extent of the left ventricle was fully visible with short axis projection. Ultrasound heart images were recorded on a video cassette using a Sony recorder at the position of the middle papillary muscle. Two-dimensional ultrasound cardiac analysis was performed using a minicomputer-based video digitizing system.

【００８３】エンド−拡張期のマーカーとしてリードII
におけるＱ波の開始およびエンド−収縮期のマーカーと
して最小の左心室腔の大きさを用いて分析するために、
エンド−拡張期およびエンド−収縮期のフレームを選択
した。正常な洞リズム中の３連ビートに関する心内膜お
よび心外膜の境界をビデオディスプレイから直接にデジ
タル化タブレットに注意深くトレースした。ラジアル収
縮モデルおよび完全な左心室円周にわたる22.5度の間隔
でのマスの定められた拡張期中心を用いて定量分析を行
った。Lead II as an Endo-Diastolic Marker
To analyze using the smallest left ventricular chamber size as a marker of Q wave onset and end-systole in
Endo-diastolic and endo-systolic frames were selected. The endocardial and epicardial boundaries for the triple beat during normal sinus rhythm were carefully traced on a digitizing tablet directly from the video display. Quantitative analysis was performed using a radial contraction model and defined diastolic centers of the mass at 22.5 degree intervals over the complete left ventricular circumference.

【００８４】後部乳頭筋の中心点を定められた解剖基準
として選択し、 135度と命名した。22.5度のセクターの
それぞれについて壁の肥大を下記式により計算した： 壁肥大の正常範囲を３つの心周期についての基線イメー
ジの関数マップから決定し、95％耐性限度を各動物にお
いて確立した。これらの限度を遮断および再灌流関数マ
ップとの比較に用いた。異常性は機能不全の円周範囲お
よび機能不全の程度として表わされる。機能不全の範囲
(度) は遮断又は再灌流マップと95％耐性下限との間の
切片において測定した。機能不全の程度 (面積単位) は
95％耐性下限の下方の測定面積である。The central point of the posterior papillary muscle was chosen as the anatomical criterion defined and named 135 degrees. The wall hypertrophy was calculated by the following formula for each of the 22.5 degree sectors: The normal range of wall hypertrophy was determined from a functional map of the baseline image for the three cardiac cycles and a 95% tolerance limit was established in each animal. These limits were used for comparison with the block and reperfusion function maps. Abnormalities are expressed as the circumferential extent of the dysfunction and the degree of dysfunction. Range of malfunction
(Degrees) were measured in sections between the block or reperfusion map and the lower 95% tolerance. The degree of dysfunction (area unit)
Measured area below the lower limit of 95% tolerance.

【００８５】局部的心筋性血流を、左心房に注射される
トレーサーで表にした中心体 (直径15μｍ、Mew Englan
d Nuclear)を用いる参照採血法により評価した。中心体
を注射の前に超音波処理して旋回攪拌した。中心体は遮
断の前、遮断の 110分後、再灌流の５分後および再灌流
の４時間後に６種の利用可能なアイソトープ(¹⁴¹Ce、 ⁵¹
Cr、¹¹³Sn、¹⁰³Ru、⁹⁵Nb、⁴⁶Sc) の１つと共に注射し
た。同時参照動脈サンプルを頸動脈および大腿動脈から
Harvard 採血ポンプを用いて７ml／分の一定速度で、中
心体注射の10秒前から始めて注射完了の 120秒まで連続
して採血した。Localized myocardial blood flow is injected into the left atrium
Centrosomes represented by tracer (diameter 15 μm, Mew Englan
It was evaluated by the reference blood sampling method using d Nuclear). Centrosome
Were sonicated and vortexed prior to injection. The central body is shielded
Before disconnection, 110 minutes after blockade, 5 minutes after reperfusion and reperfusion
6 hours after 6 available isotopes (¹⁴¹Ce, ⁵¹
Cr,¹¹³Sn,¹⁰³Ru,⁹⁵Nb,⁴⁶Sc) with one of
Was. Simultaneous reference artery samples from the carotid and femoral arteries
Harvard blood sampling pump at a constant speed of 7 ml / min, medium
Start 10 seconds before the body injection and continue until 120 seconds after the injection is completed
And blood was taken.

【００８６】超音波心臓検査の短軸スライスに対応する
中部乳頭筋レベルにおける２つの隣接する左心室横スラ
イスを、血流測定のために選択した。各スライスを16個
の全厚22.5度セクターに分割した。次いで各セクターを
さらに心外膜、中央心筋および心内膜サンプルに分割し
た。次いでこれらの組織サンプルを秤量し、カウンティ
ングバイアル中に入れ、ガンマシンチレーションカウン
ターで放射活性についてアッセイした。バックグラウン
ドおよびオーバーラップ補ののち、絶対心筋血流を次式
により計算した。Two adjacent left ventricular transverse slices at the level of the midpapillary muscle corresponding to the short-axis slices of echocardiography were selected for blood flow measurement. Each slice was divided into 16 full thickness 22.5 degree sectors. Each sector was then further divided into epicardial, central myocardial and endocardial samples. These tissue samples were then weighed, placed in counting vials, and assayed for radioactivity in a gamma scintillation counter. After background and overlap supplementation, absolute myocardial blood flow was calculated by the following equation.

【００８７】Ｑm ＝ (Ｃm ×Ｑr ／Ｃr) 式中、Ｑm ＝心筋血流 (ml／分) ; Ｃm ＝組織サンプル
のカウント／分；Ｑr＝参照動脈サンプルの採血速度 (m
l／分) ; ＝Ｃr ＝参照動脈サンプルのカウント／分。
心筋血流は各サンプルについて組織１ｇ当りで表わされ
る。殺す直前に左回旋冠動脈を簡単に遮断し、モナスト
ラルブルー色素 (0.５ml／kg) を危険状態におけるイン
ビボ心筋面積を表わすために左動脈に注射した。次いで
動物にヘパリン3000Ｕを与え、飽和ＫＣＩ溶液の静脈ボ
ーラスにより殺し、心臓を摘出した。 処置群：犬をランダムに２群のうちの１つに割当てた。
試験群において、犬に虚血が始まる直前にＩＬ−１ra 3
0mg のポーラス注射および実験が終了するまで１時間毎
にＩＬ−１raインヒビター15mgを与えた。対照動物に
は、試験群に用いたと同じ緩衝液に溶解した同量のエン
ドトキシン不含ヒトアルブミンを与えた。 梗塞の大きさ：死亡したのち、各犬の心臓を摘出し、左
心室を周囲の組織から分離し、フリーザー中で15分間冷
却し、次いで５mmの横断切片にスライスした。次いでこ
れらのスライスを秤量し、緩衝トリフェニルテトラゾリ
ウムクロリドの温浴中に10分間入れた。この技術におい
て、生存能力のある組織は赤く染まるが生存能力のない
組織は染まらないままである (Am. Heart. J. 101: 59
3) 。梗塞した組織の非染色領域を透明オーバーレイに
アウトラインを描き、マイクロコンピューターを用いる
面積測定により定量し、心臓スライスの重量に関して補
正した。梗塞の大きさは危険状態における心筋の面積の
％として表わされる (梗塞の危険状態における面積はモ
ンストラルブルーを左動脈に注射したのちに染色されな
かった左心筋の面積とする) 。 心臓浮腫のＮＭＲ分析：固定したのち、心臓を約５mm厚
さの５〜７個の横断切片に切断した。非虚血領域 (モン
ストラルブルー染色陽性) および中央の虚血領域 (ブル
ー染色陰性) から２個の壁貫通心筋組織サンプルが得ら
れた。各サンプルについて心外膜を摘出し、ありうる脂
質シグナル干渉を除いた。各片をさらに壁貫通して分割
し (それぞれ約５00mgの重量) 、その一部を乾燥技術に
より H₂Oの％について評価し (湿潤重量−乾燥重量／湿
潤重量) 、他の部分は清潔な乾燥したガラス管中に入れ
た。IBM PC 20 Minispec分光光度計 (IBM Instruments,
Inc., Danbury, CT) により20MHz および40℃で操作し
てＴ１およびＴ１弛緩を得た。マグネットにおけるサン
プルの位置、90°および 180°ラジオ周波数パルス並び
にディテクターフェーズは弛緩量を得る前に各サンプル
について最適化した。Ｔ１値は20の反転データ回復点の
適合によって決定した一方、Ｔ２値は Carr, Purcell,
Meiboon-Gill(ＣＰＭＧ) シーケンスを用いて決定し
た。拡散作用および種々雑多な系の不安定性を最小限に
しようとして、 180°ラジオ周波数インターパルスの間
隔を 180ミリ秒に保った。測定されたエコーサンプルの
フラクションを変数として用いてＣＰＭＧ実験の期間を
調整した。典型的には、エコートレインがその最初の大
きさの15％〜25％に遅延する間に１〜150 のデータポイ
ントを得た。Ｔ２値は多指数適合を用いて決定した。統
計学的分析には指数適合の主要成分だけを用いた。Ｔ１
およびＴ２分析の結果はＮＭＲ技術の精度を確かめるた
めに隣接組織サンプルの水％により補正した。 組織学的および形態学的評価：各試験群について少なく
とも３匹の動物を光学鏡検法により評価した。各心臓か
らのヘマトキシリンおよびエオシンで染色された切片を
生存能力のある組織と梗塞組織との間の範囲内の好中球
の蓄積について評価した。 統計学的分析：すべてのデータは平均−＋標準偏差とし
て表わした。２通りの分散分析により群内の比較を行っ
た。有意Ｆ値が得られた場合には、対ｔテスト (Borfer
roni不等調整との複数の比較について補正される) を用
いて決定し、その測定値は互いに有意に相違する。Qm = (Cm × Qr / Cr) where Qm = myocardial blood flow (ml / min); Cm = tissue sample count / min; Qr = reference arterial sample blood collection rate (m
= Cr = count / min of reference artery sample.
Myocardial blood flow is expressed per gram of tissue for each sample. Immediately before sacrifice, the left circumflex coronary artery was briefly blocked and monastral blue dye (0.5 ml / kg) was injected into the left artery to represent the in vivo myocardial area at risk. The animals were then given 3000 U of heparin, killed by an intravenous bolus of saturated KCI solution, and the heart was removed. Treatment group: Dogs were randomly assigned to one of two groups.
In the test group, IL-1ra3 immediately before the onset of ischemia in the dog.
A 0 mg porous injection and 15 mg of IL-1ra inhibitor were given hourly until the end of the experiment. Control animals received the same amount of endotoxin-free human albumin dissolved in the same buffer used for the test group. Infarct size: After death, the heart of each dog was excised, the left ventricle was separated from surrounding tissue, cooled in a freezer for 15 minutes, and then sliced into 5 mm transverse sections. These slices were then weighed and placed in a warm bath of buffered triphenyltetrazolium chloride for 10 minutes. With this technique, viable tissues stain red, but non-viable tissues remain unstained (Am. Heart. J. 101: 59.
3) The unstained area of the infarcted tissue was outlined on a transparent overlay, quantified by area measurement using a microcomputer, and corrected for heart slice weight. Infarct size is expressed as a percentage of the area of myocardium at risk (the area at risk of infarction is the area of the left myocardium unstained after injection of monstral blue into the left artery). NMR analysis of cardiac edema: After fixation, the heart was cut into 5-7 transverse sections approximately 5 mm thick. Two transmural myocardial tissue samples were obtained from the non-ischemic area (monstral blue staining positive) and the central ischemic area (blue staining negative). The epicardium was excised for each sample to eliminate possible lipid signal interference. Divided by further wall through each piece (weighing approximately 500mg each) were evaluated for percent of H ₂ O by a part of drying techniques (wet weight - dry weight / wet weight), the other part is clean Placed in a dry glass tube. IBM PC 20 Minispec Spectrophotometer (IBM Instruments,
Inc., Danbury, Conn.) Operating at 20 MHz and 40 ° C. to obtain T1 and T1 relaxation. The position of the sample in the magnet, the 90 ° and 180 ° radio frequency pulses and the detector phase were optimized for each sample before obtaining the amount of relaxation. The T1 value was determined by fitting 20 inverted data recovery points, while the T2 value was determined by Carr, Purcell,
Determined using the Meiboon-Gill (CPMG) sequence. In an effort to minimize diffusion effects and instability of miscellaneous systems, the interval between 180 ° radio frequency interpulses was kept at 180 ms. The duration of the CPMG experiment was adjusted using the measured fraction of the echo sample as a variable. Typically, 1 to 150 data points were obtained while the echotrain was lagging to 15% to 25% of its original size. T2 values were determined using a multi-exponential fit. Only the major components of the index fit were used for statistical analysis. T1
And the results of the T2 analysis were corrected for% water in adjacent tissue samples to confirm the accuracy of the NMR technique. Histological and morphological evaluation: At least three animals for each test group were evaluated by light microscopy. Sections stained with hematoxylin and eosin from each heart were evaluated for neutrophil accumulation within the range between viable and infarcted tissue. Statistical analysis: All data were expressed as mean- + standard deviation. Within-group comparisons were made by two different analyzes of variance. If a significant F value is obtained, the paired t test (Borfer
(corrected for multiple comparisons with roni inequality), and their measurements are significantly different from each other.

【００８８】群間比較は非対ｔテストにより行った。指
数回帰を用いて梗塞データを心筋血流に相関させた。遮
断−再灌流損傷からの犬心筋の保護に関するＩＬ−１ra
処置療法の結果を後記の表10に示す。左心室体積の％と
して、処置群における流入梗塞の大きさは、対照動物に
おける18.2％に対して10.3％に減少した。これは梗塞し
た左心室体積の％において40％の減少を表わす。これと
対比して危険状態における％は著しくは変化せず、処置
群における左心室体積の40.5％に対して対照動物におい
ては44.8％であった。梗塞面積を危険状態における全面
積の％として計算する場合には、その数値は同様にＩＬ
−１ra処置動物に有利で24.9％であるのに対して、対照
群では42％である。Comparison between groups was carried out by an unpaired t test. Infarct data was correlated to myocardial blood flow using exponential regression. IL-1ra for protection of canine myocardium from blockade-reperfusion injury
The results of the treatment are shown in Table 10 below. As a percentage of left ventricular volume, the size of the inflowing infarct in the treatment group was reduced to 10.3% versus 18.2% in control animals. This represents a 40% reduction in% infarcted left ventricular volume. In contrast, the% at risk did not change significantly, with 40.5% of left ventricular volume in the treatment group versus 44.8% in control animals. If the infarct area is calculated as a percentage of the total area at risk, the value is similarly IL
It is 24.9%, which is advantageous for -1ra treated animals, compared to 42% in the control group.

【００８９】[0089]

【表１】 [Table 1]

【００９０】[0090]

【表２】 [Table 2]

【００９１】[0091]

【表３】 [Table 3]

【００９２】[0092]

【表４】 [Table 4]

【００９３】[0093]

【表５】 [Table 5]

【００９４】[0094]

【表６】 [Table 6]

【００９５】[0095]

【表７】 [Table 7]

【００９６】[0096]

【表８】 [Table 8]

【００９７】[0097]

【表９】 [Table 9]

【００９８】[0098]

【表１０】 [Table 10]

【００９９】本発明を好ましい態様に関して記載した
が、当業者が本発明の範囲および精神から離れることな
しに修正および変更を行ないうることは言うまでもな
い。従って、好ましい態様の上記の記載は限定の意味と
理解すべきでなく、本発明は特許請求の範囲に記載の請
求項およびそれらの均等によって最も良く特定されるも
のである。While this invention has been described in terms of a preferred embodiment, it will be understood that modifications and alterations can be made by those skilled in the art without departing from the scope and spirit of this invention. Therefore, the above description of the preferred embodiments is not to be taken in a limiting sense, and the present invention is best defined by the appended claims and their equivalents.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】図１は漸増量のＩＬ−１Ｂに応答する、ウシ鼻
軟骨からのグリコサミノグリカン (ＧＡＧ) の放出を示
す。FIG. 1 shows the release of glycosaminoglycan (GAG) from bovine nasal cartilage in response to increasing amounts of IL-1B.

【図２】図２はウシ鼻軟骨からの、ＩＬ−１Ｂ誘導ＧＡ
Ｇ放出に及ぼす漸増量のＩＬ−１raの阻害作用を示す。FIG. 2 shows IL-1B induced GA from bovine nasal cartilage.
Figure 4 shows the inhibitory effect of increasing amounts of IL-1ra on G release.

【図３】図３はマウスにおけるタイプIIコラーゲン誘導
関節炎の発病に及ぼすＩＬ−１raの阻害作用を示す。FIG. 3 shows the inhibitory effect of IL-1ra on the onset of type II collagen-induced arthritis in mice.

【図４】図４はマウスにおけるタイプIIコラーゲン誘導
関節炎の発病に及ぼすＩＬ−１raの阻害作用を示す。FIG. 4 shows the inhibitory effect of IL-1ra on the onset of type II collagen-induced arthritis in mice.

【図５】図５はラットにおけるＳＣＷ誘導関節炎のＳＣ
Ｗ再活性化に及ぼすＩＬ−１raの阻害作用を示す。FIG. 5 shows SCW-induced arthritis SC in rats.
4 shows the inhibitory effect of IL-1ra on W reactivation.

【図６】図６はインターロイキン−１媒介ＩＢＤの種々
の症状に及ぼすＩＬ−１raの治療効果を示す。FIG. 6 shows the therapeutic effect of IL-1ra on various symptoms of interleukin-1-mediated IBD.

【図７】図７はインドメタシンと一緒の、関節炎症のＰ
Ｇ−ＡＰＳ再活性化に及ぼすＩＬ−１raの作用を示す。FIG. 7 shows joint inflammation P together with indomethacin.
Fig. 3 shows the effect of IL-1ra on G-APS reactivation.

【図８】図８はエンドトキシン誘導ショックでのウサギ
の生存率に及ぼすＩＬ−１raの作用を示す。FIG. 8 shows the effect of IL-1ra on rabbit survival with endotoxin-induced shock.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＺ Ｃ０７Ｋ 16/24 39/395 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＥ // Ｃ０７Ｋ 14/545 ＺＮＡ ＡＢＪ 14/715 ＡＢＮ 16/24 ＡＣＪ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＤＺ (72)発明者 スミス，クリストファー，ジー. アメリカ合衆国 コロラド州 80025， エルドラド スプリングス， バルドウィ ン サークル 67 (72)発明者 トンプソン，ロバート，シー. アメリカ合衆国 コロラド州 80303， ボウルダー，ルハイ ストリート 1820─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code Internal reference number FI Technical display location A61K 38/00 ADZ C07K 16/24 39/395 C12P 21/02 C A61K 37/02 ABE // C07K 14/545 ZNA ABJ 14/715 ABN 16/24 ACJ C12P 21/02 ADZ (72) Inventor Smith, Christopher, Gee. Colorado 80025, Eldorado Springs, Baldwin Circle 67 (72) Inventor Thompson, Robert, See. 1820, Boulder, Lehigh Street, Colorado 80303, United States.

Claims (15)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 そのアミノ酸の少なくとも一部を決定し
うる程度にまで十分純粋であり、アミノ酸の１文字表記
で表される以下のアミノ酸配列 （上記配列中で（Ｕ）はＭ又はなしを表し、（Ｘ）はＲ
又はＰを表す。）に少なくとも７０％相同であるアミノ
酸配列を有するポリペプチドであるインターロイキン−
１レセプターの拮抗体（ＩＬ−１ｒａ）を有効成分とし
て含有する、関節炎を治療するための医薬組成物。1. The following amino acid sequence, which is sufficiently pure to such an extent that at least a part of the amino acid can be determined, and is represented by the one-letter code of the amino acid (In the above sequence, (U) represents M or none, (X) represents R
Or P. Interleukin, a polypeptide having an amino acid sequence at least 70% homologous to
A pharmaceutical composition for treating arthritis, which comprises an antagonist of 1 receptor (IL-1ra) as an active ingredient. 【請求項２】 前記ＩＬ−１raがＩＬ−１raa , ＩＬ−
１raＢ, ＩＬ−１raＸおよびメチオニルＩＬ−１raから
成る群より選ばれる少くとも１種の化合物である請求項
１記載の組成物。2. The IL-1ra is IL-1raa, IL-
A composition according to claim 1 which is at least one compound selected from the group consisting of 1raB, IL-1raX and methionyl IL-1ra. 【請求項３】 前記ＩＬ−１raがＩＬ−１raa である請
求項２記載の組成物。3. The composition of claim 2, wherein the IL-1ra is IL-1raa. 【請求項４】 前記ＩＬ−１raがＩＬ−１raＢである請
求項２記載の組成物。4. The composition of claim 2, wherein the IL-1ra is IL-1raB. 【請求項５】 前記ＩＬ−１raがＩＬ−１raＸである請
求項２記載の組成物。5. The composition according to claim 2, wherein the IL-1ra is IL-1raX. 【請求項６】 前記ＩＬ−１raがメチオニルＩＬ−１ra
である請求項２記載の組成物。6. The methionyl IL-1ra, wherein the IL-1ra is methionyl IL-1ra.
The composition according to claim 2, which is: 【請求項７】 前記ＩＬ−１raが組換えＤＮＡ法により
製造されたものである請求項２記載の組成物。7. The composition according to claim 2, wherein the IL-1ra is produced by a recombinant DNA method. 【請求項８】 前記ＩＬ−１raが実質的に純粋な形態で
製造されたものである請求項７記載の組成物。8. The composition of claim 7, wherein the IL-1ra is prepared in a substantially pure form. 【請求項９】 前記組成物が製剤上許容しうる担体中に
前記ＩＬ−１raを含む請求項１記載の組成物。9. The composition of claim 1, wherein said composition comprises said IL-1ra in a pharmaceutically acceptable carrier. 【請求項１０】 前記組成物が液体の剤形である請求項
１記載の組成物。10. The composition of claim 1, wherein said composition is in a liquid dosage form. 【請求項１１】 そのアミノ酸の少なくとも一部を決定
しうる程度にまで十分純粋であり、アミノ酸の１文字表
記で表される以下のアミノ酸配列 （上記配列中で（Ｕ）はＭ又はなしを表し、（Ｘ）はＲ
又はＰを表す。）に少なくとも７０％相同であるアミノ
酸配列を有するポリペプチドであるインターロイキン−
１レセプターの拮抗体（ＩＬ−１ｒａ）を有効成分とし
て含有する、関節炎を予防するための医薬組成物。11. The following amino acid sequence which is sufficiently pure to such an extent that at least a part of the amino acid can be determined, and which is represented by the one-letter code of the amino acid (In the above sequence, (U) represents M or none, (X) represents R
Or P. Interleukin, a polypeptide having an amino acid sequence at least 70% homologous to
A pharmaceutical composition for preventing arthritis, which comprises an antagonist of 1 receptor (IL-1ra) as an active ingredient. 【請求項１２】 前記ＩＬ−１raがＩＬ−１raa , ＩＬ
−１raＢおよびＩＬ−１raＸから成る群より選ばれる請
求項１１記載の組成物。12. The IL-1ra is IL-1raa, IL
12. The composition of claim 11 selected from the group consisting of -1raB and IL-1raX. 【請求項１３】 前記インターロイキン−１インヒビタ
ーがＩＬ−１結合性タンパク質である請求項１１記載の
組成物。13. The composition of claim 11, wherein the interleukin-1 inhibitor is an IL-1 binding protein. 【請求項１４】 前記ＩＬ−１結合性タンパク質が可溶
性レセプターである請求項１３記載の組成物。14. The composition of claim 13, wherein the IL-1 binding protein is a soluble receptor. 【請求項１５】 前記ＩＬ−１結合性タンパク質がモノ
クローナル抗体である請求項１３記載の組成物。15. The composition according to claim 13, wherein the IL-1 binding protein is a monoclonal antibody.