JPH08510115A - フェロモン系タンパク質代用物を産生するように操作された酵母細胞、ならびにその利用法 - Google Patents
フェロモン系タンパク質代用物を産生するように操作された酵母細胞、ならびにその利用法Info
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.(a)少なくとも一定の条件下で、酵母細胞のフェロモン系において、相当 する酵母フェロモン系タンパク質が自然に行う機能を行う酵母フェロモン系タン パク質の異種起源代用物と、(b)異種起源のペプチドと、を発現する、フェロ モン系を有する酵母細胞であって、これによって上記ペプチドが上記代用物の上 記フェロモン系との相互反応を調節するとき、その調節が選択可能またはスクリ ーニング可能であることを特徴とする酵母細胞。 2.内因性フェロモン系タンパク質が機能を有する形態で生成されるものでない ことを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞。 3.ペプチドが細胞によってペリプラズム空間中に分泌され、そこからそれが上 記代用物と相互反応することを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞。 4.ペプチドが開裂可能なリーダーペプチドと成熟ペプチドからなる前駆体ペプ チドの形で発現し、リーダーペプチドが上記細胞の野生型フェロモンのリーダー ペプチドに実質的に相同であることを特徴とする請求項3に記載の酵母細胞。 5.野生型リーダーペプチドがサッカロマイセス・セレビシエα因子またはa因 子のペプチドである請求項4に記載の酵母細胞。 6.野生型フェロモンが分泌されないことを特徴とする請求項4に記載の酵母細 胞。 7.ペプチドが非分泌型でも発現されることを特徴とする請求項3に記載の酵母 細胞。 8.細胞が野生型株に比較してそのフェロモンシグナル経路を反復または引伸ば された刺激を通して非感受性にする傾向が減少した突然変異株であることを特徴 とする請求項1に記載の酵母細胞。 9.SST2遺伝子が機能的に発現されないことを特徴とする請求項8に記載の 酵母細胞。 10.FAR1遺伝子が機能的に発現されないことを特徴とする請求項1に記載 の酵母細胞。 11.フェロモンシグナル経路によって活性化される選択可能なマーカーをさら に有することを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞。 12.上記選択可能なマーカーが外来の選択可能な遣伝子に制御可能に連結され た内因性フェロモン応答プロモーターと実質的に相同なフェロモン応答プロモー ターを有していることを特徴とする請求項11に記載の酵母細胞。 13.選択可能な遺伝子がIGPデヒドラターゼ遺伝子であることを特徴とする 請求項12に記載の酵母細胞。 14.相同の野生型プロモーターがFUS1プロモーターであることを特徴とす る請求項12に記載の酵母細胞。 15.細胞がサッカロマイセス・セレビシエ種に属するものであることを特徴と する請求項1に記載の酵母細胞。 16.フェロモン系タンパク質がファルネシルトランスフェラーゼであることを 特徴とする請求項1に記載の酵母細胞。 17.フェロモン系タンパク質がカルボキシメチルトランスフェラーゼであるこ とを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞。 18.フェロモン系タンパク質がキナーゼであることを特徴とする請求項1に記 載の酵母細胞。 19.酵母フェロモン系タンパク質が、前駆体タンパク質の開裂によって酵母フ ェロモンの成熟型の生成に関与するプロテアーゼで、その代用物もまたプロテア ーゼであることを特徴とする請求項1に記載の酵母細胞。 20.細胞中に生成された前駆体タンパク質がそれ自身酵母フェロモン前駆体タ ンパク質の代用物で、該代用物前駆体タンパク質が前記代用物プロテアーゼによ って認識される認識部位を有するアミノ酸配列を有し、上記認識部位が酵母フェ ロモン系プロテアーゼによって認識される部位とは異なるが、上記代用前駆体タ ンパク質は酵母フェロモンの成熟型を生成する代用プロテアーゼによって開裂さ れるものであることを特徴とする請求項19に記載の酵母細胞。 21.野生型酵母フェロモン前駆体タンパク質が生成されないことを特徴とする 請求項20に記載の酵母細胞。 22.酵母フェロモン系タンパク質が酵母フェロモンの膜輸送に関与するABC 輸送体で、その代用物もABC輸送体であることを特徴とする請求項1に記載の 酵母細胞。 23.前記ペプチドが輸送を阻害しない限り、代用物は酵母フェロモンを輸送す るものであることを特徴とする請求項22に記載の酵母細胞。 24.上記ペプチドの助けがあったときだけ代用物が酵母フェロモンを輸送する ものであることを特徴とする請求項22に記載の酵母細胞。 25.酵母フェロモン系タンパク質が酵母フェロモン受容体であることを特徴と する請求項1に記載の酵母細胞。 26.ペプチドが代用物受容体のアゴニストであることを特徴とする請求項25 に記載の酵母細胞。 27.ペプチドが代用物受容体のアンタゴニストであることを特徴とする請求項 25に記載の酵母細胞。 28.Gタンパク質のGαサブユニットがキメラであることを特徴とする請求項 25に記載の酵母細胞。 29.Gαサブユニットのアミノ末端部分が酵母Gタンパク質のGαサブユニッ トと実質的に相同で、その残部が異種起源のGタンパク質のGαサブユニットの 相当部分と実質的に相同であることを特徴とする請求項28に記載の酵母細胞。 30.フェロモン系タンパク質がサイクリンであることを特徴とする請求項30 に記載の酵母細胞。 31.酵母細胞が非フェロモン応答性のスクリーニング可能なマーカーを有して いることを特徴とする請求項30に記載の酵母細胞。 32.酵母細胞が集合的にペプチドライブラリーを発現することを特徴とする複 数の請求項1に記載の酵母細胞からなる酵母培養体。 33.フェロモン系タンパク質の非酵母代用物の活性の調節についてペプチドを 分析する方法であって、上記代用物および上記ペプチドを機能的に発現する請求 項1の酵母細胞を供給し、該ペプチドによってフェロモンシグナル経路が活 性化されたのか阻害されたのかを決定するステップを含むことを特徴とする方法 。 34.細胞がフェロモン応答性選択可能マーカーを有し、該細胞は所望の活性効 果または阻害効果を有するペプチドの発現について選択されるものであることを 特徴とする請求項33に記載のペプチド分析方法。 35.細胞がフェロモン応答性スクリーニング可能マーカーを有し、該細胞は所 望の活性効果または阻害効果を有するペプチドの発現についてスクリーニングさ れるものであることを特徴とする請求項33に記載のペプチド分析方法。 36.非酵母フェロモン系タンパク質代用物の活性についてペプチドライブラリ ーを分析する方法であって、その細胞が各々上記ライブラリーのペプチドおよび 上記代用物を機能的に発現する請求項32に記載の酵母培養体を供給し、該培養 体がペプチドライブラリー全体を集合的に発現し、該培養体の各細胞中で上記ペ プチドによってフェロモンシグナル経路が活性化されたのか阻害されたのかを決 定するステップを含むことを特徴とする方法。 37.代用物がヒトMdr1であって、この代用物がα因子を輸送するときだけ ヒスチジンのない培地で細胞が生育し、代用物がα因子を輸送するときだけ細胞 がガラクトース感受性で、内因性の多面発現性薬物耐性の遺伝子が不活性化され ていることを特徴とする請求項34に記載の方法。
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