【発明の詳細な説明】
抗腫瘍剤としての３−（７−オキソ−１−アザ−４
−オキサビシクロ［３．２．０］ヘプト−３−イル）
アラニン誘導体
本発明は、抗腫瘍剤としての３−（７−オキソ−１−アザ−４−オキサビシク
ロ［３．２．０］ヘプト−３−イル）アラニン誘導体の使用に関する。
発明の背景
天然のβ−ラクタマーゼ阻害剤であるクラブラン酸（clavulanic acid）の分
離および構造解明以来、多くの
７１８（DE 3727651 A1）、クラバマイシン（Clavamycin）（ジャーナル オブ
アンティバイオティックス（J．of Antibiotic），39，510（1986））、同書3 9
，516（1986））、Ro 22-5417（ジャーナル オブ アンティバイオティックス
（J．of Antibiotic），36，217（1983））が、ストレプトマイセス（streptomy
ces）属の培養株から単離されてきた。こららの代謝産物は、いずれもβ−ラク
タマーゼ阻害活性を示さなかった。しかしながら、多くの場合には、これらの抗
菌活性及び抗真菌活性に注意が払われてきた。
我々は、Ｇ００６９Ａ（JP 61-212587）を抗腫瘍剤とし
て開発することに注目した。しかしながら、この化合物を大量に得ることには多
くの困難があった。例えば、十分にコントロールされた発酵技術および適切な実
験条件下における後であっても、１０Ｌの発酵ブロス（broth）から、わずか２
０ｍｇのＧ００６９Ａが単離できるにすぎなかった。
Ｇ００６９Ａは、化学的に不安定な単離手順であり、非常に複雑で特殊な技術
を必要とした。これは、暗所で低温下に行なわれるべきであった。この様な発酵
ブロスからのＧ００６９Ａの単離における複雑さに加えて、これらが５−不斉炭
素中心およびジペプチド側鎖を有するために、合成的アプローチも極めて困難な
多段工程の方法であるように思われた。従って、比較的合成が容易で、Ｇ００６
９Ａよりも短鎖を有し、化学的に安定であり、且つより強力な抗腫瘍作用を有す
る化合物を得る必要がある。
発明の概要
本発明は、有効量の下記式（Ｉ）で示される３−（７−オキソ−１−アザ−４
−オキサビシクロ［３．２．０］ヘプト−３−イル）アラニン誘導体またはその
薬学的に許容される塩
および薬学的に許容される担体を含む抗腫瘍組成物に関する。
式中、Ｒは：
− 水素、又はＣＯＯＲ2［式中、Ｒ2は、１−３のアリール基で置換されてい
てもよいＣ1−Ｃ3アルキル基である］であり、
式中、Ｒ1は：
− 水素、又は１−３のアリール基で置換されていてもよいＣ1−Ｃ3アルキル
基である。
Ｒ1及びＲ2中の置換基としてのＣ1−Ｃ3アルキル基の例としては、メチル、エ
チル、プロピル又はイソプロピルがある。
より詳細には、一般式（Ｉ）において、Ｒは水素、メトキシカルボニル、エト
キシカルボニル又はベンジルオキシカルボニルから選ばれ、Ｒ1は水素、メチル
、ベンジル、ジフェニルメチル又はトリフェニルメチルから選ば
れる。
薬学的に許容される塩の例は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシ
ウム、塩化水素、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、ク
エン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスル
ホン酸塩等である。
本発明は、腫瘍を有する哺乳動物に有効量の式（Ｉ）の誘導体を投与すること
を含む哺乳動物における腫瘍を治療する方法を提供する。
さらに、本発明は、腫瘍治療のための薬理学的組成物を調製するための、式（
Ｉ）の誘導体の使用を提供する。
上記２環核（bicyclic nucleus）は、３位および５位に、２個の不斉炭素原子
を有し、４−ジアステレオ異性体（diastereoisomers）として存在することがで
きる。一般に、好ましい異性体は、種々の悪性細胞、例えば、Ｐ３８８、ＫＢ、
ＮＵＧＣ４、ＷＩ３８、Ｌ−１２１０、サルコーマ（ｓａｒｃｏｍａ）１８０、
コロン（ｃｏｌｏｎ）２６等に対する優れた毒性のために、（３Ｒ，５Ｓ）及び
（３Ｓ，５Ｒ）又はこれらの混合物である。そのようなジアステレオ異性体およ
びそれらの混合物も、抗腫瘍剤としてのオキサペナム（oxapenam）誘導体の使用
の範囲内に含まれる。
２環核のＣ3位にある鎖状アラニンは、Ｄ及びＬ異性体を有する１個の不斉炭
素原子を有する。異性体（Ｄ及びＬ）の両方が、抗腫瘍剤としてのオキサペナム
（oxapenam）誘導体の使用の範囲内に含まれる。
上述の化合物の抗腫瘍活性は、胃腸管、肺、乳部、肝臓、子宮のような幾つか
の固形癌、白血病などに対して期待される。
好ましい実施態様の説明
本発明は、優れた抗腫瘍活性を有するオキサペナム誘導体の使用に関する。本
発明の化合物は、一般式（Ｉ）
により特徴づけられる。
一般式（Ｉ）の化合物の合成は、出発原料として、ＤＬ−アリル−グリシンを
用いて、下記の合成スキームに従って行なわれた。
TBDMS：ｔ−ブチルジメチルシリル；TBAF：フッ化テトラブチルアンモニウム
。
Ｒ及びＲ1は、上記に同じである。
Ｒ3は、メタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、ベンゼンスルホ
ニル，４−クロロベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル等の置換された
スルホニル基等である。
Ｘは、フッ素、ホウ素、塩素又はヨウ素などのハロゲン原子である。
Ｍは、ナトリウム、カリウム、リチウム等の金属である。
上記記載において、反応物は、溶剤と共に、高温下又は低温下において、反応
が完結するために十分な時間反応させる。反応条件は、反応物の性質及び反応性
に依存する。塩基（base）が反応に用いられる場合には、それらは、トリエチル
アミン、ピリジン、４−ジアミノピリジン、ジイソプロピルエチルアミン、２，
６−コリジン（colidine）、イミダゾール、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジ
ン、モルホリン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０．］ウンデカ−７−エン
、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン、炭酸ナトリウム、炭
酸カリウム、炭酸リチウム、炭酸セシウム、炭酸水素ナトリ
ウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素リチウム、炭酸水素セシウム等から選ばれる
。
反応の為に選ばれる溶剤は、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、エタノー
ル、メタノール、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、塩化メチレ
ン、水、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサメチルリン酸ト
リアミド等の非反応性溶媒である。また、溶媒混合物も使用できる。
反応温度は、通常、−２０℃〜１４０℃の範囲であろう。反応物の好ましいモ
ル比は、１：１〜５．０である。反応時間の範囲は、反応物に応じて、０．５〜
７２時間である。
酸化剤は、二重結合のジヒドロキシル化のために使用され、四酸化オスミウム
、オスミウム酸カリウム、過マンガン酸カリウム、ｔ−ブチル ヒドロペルオキ
シド、過酸化水素、ＡＤミックス−α（ＡＤ mix-α）、又はＡＤミックス−β
（ＡＤ mix-β）から選ばれる。ＡＤミックス−α及びβは、キラルジオール（c
hiral diol）３の製造に使用できる（ジャーナル オブ オーガニックケミスト
リー（J.org.chem．57，2768（1992）；テトラヘドロン レター（Tetrahedron
Lett.）34，2267（1993））。
Ｎ及びＣ保護基の脱保護は、水素化、又はメタノール、
エタノール、プロパノール、酢酸エチル等の溶剤中での塩酸などの鉱酸を用いた
加水分解のいずれかによって行なわれる。水素化反応は、通常、Ｐｄ、Ｐｔ、Ｒ
ｈ等の金属触媒の存在下に、常圧から高圧の水素下で行われる。
化合物の構造は、合成方法及び広い高磁場核磁気共鳴スペクトル方法（extens
ive high field nuclear magnetic resonance spectral technique）によって確
認された。化合物11のＮＭＲスペクトルは、デ ベルナルド（De Bernardo）他
により示されたもの（ジャーナル オブ オーガニック ケミストリー（J.Org.
Chem．50,3457（1985））と同一であった。
本発明の化合物は、ヒトを含む哺乳動物の悪性腫瘍を治療するための薬剤とし
て使用されるときには、注射剤、坐剤、エアロゾールなどの非経口製剤、および
錠剤、被覆された錠剤、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤などの経口製剤を含
む医薬的投与形態をとり得る。注射剤が、一般に好ましい。上記の製剤は、当分
野の公知の方法で製剤化される。
経口投与のための固形製剤を製剤化するには、本発明の化合物に、賦形剤、お
よび、必要に応じて、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、着色剤、矯正剤、矯味矯臭剤な
どを添加し、次いで、錠剤、被覆された錠剤、顆粒剤、粉末剤、
カプセル剤などを慣用されている方法により調製する。
注射剤を製剤化するには、本発明の有効成分に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定剤
、等張化剤、局所麻酔剤などを添加し、皮下的、筋肉内または静脈内投与用の注
射剤を慣用されている方法により調製できる。
坐剤を調製するには、本発明の有効成分に、基剤（base）、および、必要に応
じて、界面活性剤を添加し、慣用されている方法により坐剤を調製する。
経口投与のための固体製剤に有用な賦形剤は、一般に当分野で使用されている
ものであり、有用な例は、ラクトース、スクロース、塩化ナトリウム、スターチ
、炭酸カルシウム、カオリン、結晶性セルロース、メチルセルロース、グリセリ
ン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴムなどの賦形剤、ポリビニルアルコール
、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、エチルセルロース、アラビアゴ
ム、シェラック（schellac）、スクロース、水、エタノール、プロパノール、カ
ルボキシメチルセルロース、リン酸カリウムなどの結合剤、ステアリン酸マグネ
シウム、タルクなどの潤滑剤等であり、さらに、通常公知の着色剤、崩壊剤など
の添加剤も含まれる。坐剤の製剤化に有用な基剤（base）の例としては、カカオ
バター、ポリエチレングリコール、ラノリン、脂肪酸トリグリセ
リド、ウィテプゾル（Witepsol）［商標、ダイナマイトノーベル社（Dynamite N
obel Co.，Ltd.）］等のような油性の基剤がある。液体製剤は、水性または油性
の懸濁剤、液剤、シロップ、エリキシル剤などの形態であって良く、それらは、
通常の添加剤を用いて慣用されている方法により調製することができる。
本発明の医薬組成物中に含有される本発明の化合物（Ｉ）の量は、投与形態、
当該化合物の溶解性および化学的特性、投与経路、投与計両などによって変化す
る。好ましくは、その量は、経口製剤の場合、約１〜２５ｗ／ｗ％、非経口製剤
である注射剤の場合は、約０．１〜約５ｗ／ｗ％である。
本発明の化合物（Ｉ）の薬用量（dosage）は、被験体の症状、年齢および性別
などを考慮に入れ、個々の場合に応じて、適宜決定される。通常、経口投与の場
合の薬用量は、成人（adult）に対しては２〜４回に分けて１日当たり約５０〜
約１０００ｍｇであり、注射剤の場合の薬用量は、例えば、静脈投与によれば、
成人（adult）に対しては、１日に１回、２ｍｌ（約１〜約５０ｍｇ）を投与し
、その際、注射剤は、必要に応じて、生理食塩水またはグルコース注射液で希釈
しても良く、少なくとも５分間かけてゆっくりと投与される。坐剤の場合の薬用
量
（dosage）は、約１〜約５００ｍｇであり、１日に１回または６〜１２時間の間
隔をおいて２回投与され、その際、坐剤は直腸に挿入することにより投与される
。
下記に製剤例を示す。以下の製剤例において、化合物番号は、後記参考例にお
いて使用される化合物番号に一致する。
化合物１１、ラクトース、コーンスターチおよび加水分解されたスターチを混
合し、水を加えることにより顆粒化して、活性なペーストを調製した。４５℃で
一晩乾燥させた後、顆粒を篩にかけた。これに、ステアリン酸カリウムを加え、
錠剤機（tabletting machine）を用いて３６０ｍｇの重量で１０ｍｍの直径を有
する錠剤を製造した。
化合物１１、ラクトースおよびコーンスターチを混合し、粉砕した。タルクを
添加した後、該混合物を、硬ゼラチンカプセル内に入れた。
製剤例３：注射剤
化合物１１（５０ｇ）および４００ｇのグルコースに、全体積が１０リットル
になるまで、撹拌しながら、注射剤用蒸留水を添加した。該混合物を滅菌濾過し
、アンプル中に入れ、窒素ガスをその中に通気し、その後密封し、これにより各
アンプルについて、それぞれ１０ｍｌの体積を有する注射用製剤を製造した。
製剤例４：坐剤形態
「ウィテプゾル Ｗ−３５」（”Witepsol W-35”）［商標、ダイナマイトノ
ーベル社（Dynamite Nobel Co.Ltd.,）（西ドイツ）の製品］を、約６０℃で溶
融し、この溶液を約４５℃で維持した。該溶液および化合物６を、下記の割合で
混合し、適当な坐剤製造装置（suppository-forming device）を使用して、各１
ｇずつの重量を有する坐剤形態に成形した。
抗腫瘍作用として利用するために必要とされる、一般式（Ｉ）の化合物は、文
献記載の方法、または当業者の知識範囲内にある方法のいずれかにより調製され
た。本発明において抗腫瘍剤として使用されている化合物を、参考例として報告
する。
参考例１
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−（ＤＬ）−（アリルグリシン）（１）
ＴＨＦ−Ｈ2Ｏ（１：３）混合物（８０ｍｌ）中にアリルグリシン（５．２ｇ
、４５ミリモル）を入れた懸濁液に、ＮａＨＣＯ3（３７．９５ｇ）４５０ミリ
モル）を添加した。この混合物を−１０℃に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液の
添加によりｐＨを約８に維持しながら、ベンジルクロロホルマート（benzylchlo
roformate）（１１．６ｇ、６７ミリモル）を滴下した。この混合物を一晩攪拌
し、エーテル（１００ｍｌ）で希釈した。エーテル部
分を分離し、水部分を氷浴中で冷却した。濃ＨＣｌで酸性化し、次いで酢酸エチ
ル（３×１５０ｍｌ）で抽出した。酢酸エチル溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶
剤を減圧除去して、濃厚な油状物として、純粋な１（７．９ｇ、７０％）を得た
。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）δ：２．５６（２Ｈ、ｍ）；４．４８
（１Ｈ、ｍ）；５．１２（２Ｈ、ｓ）；５．１７−５．３４（３Ｈ、ｍ）；５．
７１（１Ｈ、ｍ）；７．３４（５Ｈ、ｓ）；８．２０（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）。
ＩＲ（ニート（Neat））：３３２５、３１８５、３０７５、２９５０、１７１９
、１７０９、１５８２、１５２１ｃｍ-1。
参考例２
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−（ＤＬ）−アリルグリシン ジフェニルメチ ル エステル（２）
ジクロロメタン（５０ｍｌ）中にＮ−ベンジルオキシカルボニル−（ＤＬ）−
アリルグリシン（１．８ｇ、７．２２ミリモル）を入れた溶液に、ジクロロメタ
ン（３０ｍｌ）中にジフェニルジアゾメタン（１．４ｇ、７．２ミリモル）を入
れた溶液を滴下した。添加後、溶剤を濃縮し、ヘキサン−酢酸エチル（４：１）
を溶離液として
使用して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより生成物を精製して、油状
物として２（２．２ｇ、７５％）を得た。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）δ：２．５７（２Ｈ、ｍ）；４．５８
（１Ｈ、ｍ）；４．９６−５．０４（２Ｈ、ｍ）；５．０９（２Ｈ、ｓ）；５．
３１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）；５．４５−５．６５（１Ｈ、ｍ）；６．９
０（１Ｈ、ｓ）；７．３１（１５Ｈ、ｍ）。
ＩＲ（ニート）：３３４５、３１７５、３０３５、１７２８、１７１９ ｃｍ-1
。
参考例３
ジフェニルメチル ２−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４，５−ジヒ ドロキシペンタノアート（３）
水（３０ｍｌ）−アセトン（２４０ｍｌ）中に（ＤＬ）−Ｎ−（ベンジルオキ
シカルボニル）−アリルグリシン ジフェニルメチル エステル（２５．５７ｇ
）６１．５ミリモル）を入れた溶液に、Ｎ−メチルモルホリンＮ−オキシド（１
２．６ｍｌ）及び四酸化オスミウム（４重量％水溶液）（５ｍｌ）を添加した。
この混合物を一晩攪拌し、飽和重亜硫酸ナトリウム溶液（５０ｍｌ）
で失活させた。１０分間攪拌した後、該混合物を酢酸エチル（３×１５０ｍｌ）
で抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、溶剤を減圧除去した。ヘ
キサン−酢酸エチル（１：４）を溶離液として使用して、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにより精製して、油状物として３（２０．７４ｇ、７０％）を得
た。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）δ：（立体異性体の混合物）１．９３
（２Ｈ、ｍ）；２．３５−２．５６（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）；３．３０−３．９６（
４Ｈ、ｍ）；４．５０−４．８２（１Ｈ、ｍ）；５．１５（２Ｈ、ｓ）；５．８
９（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）、６．９６（１Ｈ、ｓ）；７．３０（１５Ｈ、ｍ）。
ＩＲ（ニート）：３３９０、３３４０、２９３５、１７７２、１７３７、１７１
２ ｃｍ-1。
参考例４
ジフェニルメチル ２−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−５−（ｔ− ブチルジメチルシリル）オキシ−４−ヒドロキシペンタノアート（４）
ジクロロメタン（１００ｍｌ）中にジオール３（４．５９ｇ、１０．２ミリモ
ル）を加えた氷***液に、イミダゾール（０．９０３ｇ、１３．２ミリモル）及
びtert−ブチルジメチルシリル クロライド（２．３１ｇ、１５．
３ミリモル）を添加した。添加後、該混合物を室温下に一晩攪拌し、ジクロロメ
タン（５０ｍｌ）で希釈した。このジクロロメタン溶液を水（２×１００ｍｌ）
、ブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶剤を減圧除
去した。ヘキサン−酢酸エチル（３：２）を溶離液として使用して、シリカゲル
カラムにより精製して、油状物として４（４．１ｇ、７５％）を得た。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）δ：０．０３（６Ｈ、ｓ）；０．８７
（９Ｈ、ｓ）；１．９２（２Ｈ、ｍ）；３．０８（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）；３．４３
（２Ｈ、ｍ）；３．５５（１Ｈ、ｍ）；４．７０（１Ｈ、ｍ）；５．１７（２Ｈ
、ｓ）；５．９０（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）；６．９０（１Ｈ、ｓ）；７．３３（１５
Ｈ、ｍ）。
ＩＲ（ニート）：３３９５、３０６５、２９５５、１７８２、１７２２ ｃｍ-1
。
参考例５
ジフェニルメチル ２−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−（アゼ チジン−２−オン−４−イル）オキシ−５−（ｔ−ブチル−ジメチルシリル）オ キシペンタノアート（５）
ベンゼン（５００ｍｌ）中に４−アセトキシアゼチジノン（１０．５２ｇ、８
１ミリモル）及びアルコール４
（２１．８３ｇ、４１ミリモル）を入れた溶液に、トリエチルアミン（８．１９
ｇ、８１ミリモル）及び酢酸パラジウム（II）（１．８２ｇ、８．１ミリモル）
を添加した。この混合物を窒素雰囲気下に室温で２０時間攪拌し、セライト（ce
lite）のパッド（pad）を通過させて濾過した。このセライトを酢酸エチル（３
００ｍｌ）で洗浄し、一緒にした有機層をブライン（３×１５０ｍｌ）で洗浄し
、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶剤を減圧除去した。溶離液としてヘキサン−酢酸エ
チル（１：１）を使用して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し
て、発泡物として５（１６．７６ｇ、６５％）を得た。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）δ：（ジアステレオマーの３：１混合
物）０．０３（６Ｈ、ｓ）；０．８７（９Ｈ、ｓ）；１．７５−１．９４（２Ｈ
、ｍ）；２．７９−３．０７（２Ｈ、ｍ）；３．４６−３．６９（３Ｈ、ｍ）；
４．５３−４．７６（１Ｈ、ｍ）；４．９６（１Ｈ、ｍ）；５．０９（２Ｈ、ｓ
）；５．５２−５．６０（１Ｈ、ｂｒ）；６．３０−６．４５（１Ｈ、ｂｒ．ｓ
）；６．８８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ；７．３２（１５Ｈ、ｍ）。
ＩＲ（ニート）：３３２５、３０６５、３０４４、２９５５、１７７６、１７３
７ｍ １５２１ ｃｍ-1。
参考例６
ジフェニルメチル ２−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−５−ヒドロ キシ−４−（アゼチジン−２−オン−４−イル）オキシペンタノアート（６）
ＴＨＦ（２００ｍｌ）中にシリルオキシ化合物５（１９．５ｇ、３０．８ミリ
モル）を入れた氷***液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中の１Ｍ
溶液）（４０ｍｌ、４６．２ミリモル）及び氷酢酸（５ｍｌ）を添加した。添加
後、該混合物を室温で４時間攪拌した。溶剤を濃縮し、残査をシリカゲルカラム
に供給した。ヘキサン−酢酸エチル（１：１）で溶離して、不純物を除去した。
酢酸エチル−アセトン（４：１）による溶離後、目的のアルコール６（１０．１
g、６３％）を発泡物として得た。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）（ジアステレオマーの混合物）δ：１
．８５−１．９９（２Ｈ、ｍ）；２．６１−２．９２（２Ｈ、ｍ）；３．４６−
３．６９（３Ｈ、ｍ）；４．２９（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）；４．７８（１Ｈ、ｍ）；
４．９８−５．０７（３Ｈ、ｍ）；６．７８（１Ｈ、ｓ）；７．３６（１５Ｈ、
ｓ）；７．８１（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）；８．３８（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）。
ＩＲ（ニート）：３３８５、３０６５、２９３０、１７
４３、１７３６、１５８３、１５１４ ｃｍ-1。
参考例７
ジフェニルメチル ２−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−（アゼ チジン−２−オン−４−イル）オキシ−５−（ｐ−トルエンスルホニルオキシ） ペンタノアート（７）
−１０℃に冷却したピリジン（４２ｍｌ）中にアルコール６（９．０ｇ、１７
．３ミリモル）を入れた溶液に、塩化ｐ−トルエンスルホニル（４．９６ｇ）２
６ミリモル）を添加した。得られた混合物を４時間混合して、２Ｎ ＨＣｌの冷
却溶液（６００ｍｌ）に注入した。この混合物を酢酸エチル（３×２００ｍｌ）
で抽出し、酢酸エチル部分を水（１００ｍｌ）、ブラインで洗浄し、乾燥して（
ＭｇＳＯ4）、溶剤を減圧除去した。溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：
１）を使用して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色の
発泡物として７（９．９２ｇ、８５％）を得た。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）（ジアステレオマーの混合物）δ：１
．７５−１．９８（２Ｈ、ｍ）；２．４０（３Ｈ）；２．５０（１Ｈ、ｍ）；２
．８５（１Ｈ、ｍ）；３．７６（１Ｈ、ｍ）；３．９９−４．２２（３Ｈ、ｍ）
；４．９６−５．０６（３Ｈ、ｍ）；
６．７８（１Ｈ、ｓ）；７．３５（１７Ｈ、ｍ）；７．７７（３Ｈ、ｍ）；８．
３９（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）。
参考例８
ジフェニルメチル ２−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−５−ブロモ −４−ヒドロキシペンタノアート（８）
ジクロロメタン（１０ｍｌ）中にトリフェニルホスフィン（２．０ｇ、７．５
ミリモル）を入れた溶液を、ジクロロメタン（１５ｍｌ）中にジオール３（２．
２５g）５．０ミリモル）及び四臭化炭素（２．４９ｇ、７．５ミリモル）を入
れた氷***液に添加した。添加後、この混合物を室温で一晩攪拌し、次いで、水
（６０ｍｌ）、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶剤を減圧除去した
。溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（３：１）を使用して、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーにより精製して、油状物として８（１．２９ｇ）５０％）を
得た。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）δ：１．７５−２．０５（２Ｈ、ｍ）
；３．４０（２Ｈ、ｍ）；３．６３−３．９０（２Ｈ、ｍ）；４．６５（１Ｈ、
ｍ）；５．１５（２Ｈ、ｓ），５．９０（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）；６．９０（１Ｈ、
ｓ），７．３２（１５Ｈ、ｍ）。
参考例９
ジフェニルメチル ２−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−５−ブロモ −４−（アゼチジン−２−オン−４−イル）オキシペンタノアート（８） 方法Ａ：
ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）（２０ｍｌ）にトシル化物７（１
．９ｇ）２．８２ミリモル）を入れた溶液に、臭化リチウムを添加し、この混合
物を窒素雰囲気下に６０℃で３時間加熱した。この溶液を冷水（２５０ｍｌ）に
注入し、酢酸エチル（３×１５０ｍｌ）で抽出した。酢酸エチル部分を水（３×
１００ｍｌ）、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶剤を減圧除去した
。溶離液としてヘキサン−酢酸エチルを使用して、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーにより精製して、白色の発泡物として９（１．０２ｇ、６２％）を得た
。1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）（ジアステレオマーの混合物）δ：１
．７５−１．９９（２Ｈ、ｍ）；２．５６−２．６３（１Ｈ、ｍ）；２．８０−
２．９８（１Ｈ、ｍ）；３．５３−３．６６（３Ｈ、ｍ）；４．２１（１Ｈ、ｍ
）；４．９１−５．０７（３Ｈ、ｍ）；６．７２（１Ｈ、ｓ）；７．２８（１５
Ｈ、ｓ）；７．８３（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）；８．４５（１Ｈ、ｂｒ．ｓ）。
ＩＲ（ニート）：３３４０、３００５、１７６６、１７４５ ｃｍ-1。方法Ｂ：
ベンゼン（５０ｍｌ）中に４−アセトキシアゼチジノン（０．４８ｇ、３．７
１ミリモル）及びブロモヒドリン８（０．９５ｇ，１．８５ミリモル）を入れた
攪拌溶液に、トリエチルアミン（０．５２ｍｌ、３．７１ミリモル）及び酢酸パ
ラジウム（II）（０．０８３g、０．３７ミリモル）を添加した。この混合物を
窒素雰囲気下に、室温で２０時間攪拌し、セライトのパッドを通過させて濾過し
た。このセライトを酢酸エチル（１００ｍｌ）で洗浄し、一緒にした有機層を水
（４０ｍｌ）、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶剤を減圧除去した
。溶離液としてヘキサン−酢酸エチル（１：１）を使用して、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーにより精製して、発泡物として９（０．３２ｇ、３０％）を
得た。
参考例１０
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−３−［（３ＲＳ，５ＳＲ）−７−オキソ− １−アザ−４−オキサビシクロ［３．２．０］ヘプト−３−イル］−Ｌ−アラニ ン ジフェニルメチル エステル（１０Ａ）及びＮ−（ベンジルオキシカルボニ ル）−３−［（３ＲＳ，５ＳＲ） −７−オキソ−１−アザ−４−オキサ ビシクロ［３．２．０］ヘプト−３−イ ル］−Ｄ−アラニン ジフェニルメチル エステル（１０Ｂ） 方法Ａ：
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２０ｍｌ）中に臭化物９（０．４７ｇ）０
．８１ミリモル）を入れた溶液に、シルバー６，６，７，７，８，８，８−ヘプ
タフルオロ−２，２−ジメチル−３，５−オクタンジオナート（silver 6,6,7,7
,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-octanedionate）（ＦＯＤ）（０．７５
ｇ、１．８６ミリモル）を添加し、この反応混合物を窒素雰囲気下、６０℃で２
０時間加熱した。酢酸エチル（２００ｍｌ）を添加し、この混合物をセライトの
パッドを通過させて濾過した。酢酸エチル溶液をブライン（３×１００ｍｌ）で
洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶剤を減圧除去した。溶離液としてヘキサン−
酢酸エチル（１：１）を使用して、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより
精製して、淡黄色の発泡物として１０（０．１８ｇ、４５％）（異性体の混合物
−方法Ｂ参照）を得た。方法Ｂ：
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（１０ｍｌ）中に臭化物８（０．５７ｇ、
０．９８ミリモル）を入れた弱
***液（４℃）に、炭酸セシウム（０．３２ｇ、０．９８ミリモル）を添加した
。この混合物を窒素雰囲気下に３０分間攪拌し、次いで、水（２００ｍｌ）に注
入した。得られた混合物を酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出し、酢酸エチル
部分をブラインで洗浄し、乾燥して（ＭｇＳＯ4）、溶剤を減圧除去した。溶離
液としてヘキサン−酢酸エチル（２：１）を使用して、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィーにより精製して、合計収量０．２４ｇ（４９％）で主要異性体（ma
jor isomer）及び少量異性体（minor isomer）を得た。主要異性体のプロトンｎ
ｍｒデータは、二保護のクラバラニン（clavalanine）について報告されたもの
（ジャーナルオブ オーガニック ケミストリー（J．Org．Chem.）50，3457（1
985））と同一であった。１０Ａ（主要異性体）： 1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）δ：２．０２（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．
１、６．０Ｈｚ）；２．４７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．０、１１．５Ｈｚ）；２．
６７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．５Ｈｚ）；３．２０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．８、１
６．５Ｈｚ）；３．７９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．１、１１．６Ｈｚ）；３．９９
（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ）；４．７１（１Ｈ、ｍ）；５．１１
（２Ｈ、ｓ）；５．２４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ）；５．７５（１Ｈ、ｄ、
Ｊ＝８．９Ｈｚ）；６．９１（１Ｈ、ｓ）；７．３３（１５Ｈ、ｂｒ．ｍ）。
ＩＲ（ニート）：３４２０、３０５６、１７８２、１７６５、１５６７、１５０
６ ｃｍ-1。１０Ｂ（少量異性体）： 1
Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）δ：２．０６（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．
７、６．２Ｈｚ）；２．４６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．４、１１．５Ｈｚ）；２．
５３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．３Ｈｚ）；２．９６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．５、１
６．２Ｈｚ）；３．８４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．４、１１．５Ｈｚ）；４．２７
（１Ｈ、ｍ）；４．５５（１Ｈ、ｍ）；４．６６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ）
；５．０３（２Ｈ、ｓ）；５．５５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ）；６．８７（
１Ｈ、ｓ）；７．２５（１５Ｈ、ｂｒ．ｍ）。
ＩＲ（ニート）：３３６０、３０６５、２９６０、１７８１、１７４５、１７１
８、１５６１ ｃｍ-1。
参考例１１
３−［（３ＲＳ，５ＳＲ）−７−オキソ−１−アザ−４−オキサビシクロ［ ３．２．０］ヘプト−３−イル］−Ｌ−アラニン（１１）
メタノール（２５ｍｌ）−酢酸エチル（１０ｍｌ）中に二置換のアラニルク
ラバム（alanyl clavam）１０Ａ（０．０７ｇ、０．１４ミリモル）を入れた溶
液に、活性炭上に担持されたパラジウム（１０％、５３．８％水分）を添加した
。この混合物を５０ｐｓｉで１．５時間水素化分解し、セライトのパッドを通し
て濾過した。このセライトをメタノール（３０ｍｌ）で洗浄し、一緒にしたメタ
ノール溶液を減圧除去した。水（１０ｍｌ）を添加し、その溶液を酢酸エチル（
２０ｍｌ）で洗浄した。水層を凍結乾燥して、灰色の固体として１１（１８ｍｇ
、６７％）を得た。1
Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ、２００ＭＨｚ）δ：２．２１（２Ｈ、ｍ）；２．７８（ｄ
ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．４、１１．７Ｈｚ）；２．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１７．０Ｈ
ｚ）；３．４１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．９、１６．８Ｈｚ）；３．９６（１Ｈ、
ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ）；４．０８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．１、１１．９Ｈｚ）；
４．４３（１Ｈ、ｍ）；５．４８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．７Ｈｚ）。
ＩＲ（ヌジョール（Nujol））：３１７０、１７７５、１７７４、１７１２、１
６６０ ｃｍ-1。
参考例１２
３−［（３ＲＳ，５ＳＲ）−７−オキソ−１−アザ− ４−オキサビシクロ［３．２．０］ヘプト−３−イル］−Ｄ−アラニン（１２）
参考例１１と同様にして、化合物１０Ｂの脱保護により、９２％の収率で標記
の化合物を得た。1
Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）２００ＭＨｚ）δ：２．２１（２Ｈ、ｍ）；２．７８（ｄ
ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．９、１１．３Ｈｚ）；２．９６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１７．１Ｈ
ｚ）；３．４１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．３、１６．５Ｈｚ）；３．８６（１Ｈ、
ｍ）；４．１０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．２、１１．８Ｈｚ）；４．５９（１Ｈ）
ｍ）；５．４６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．７Ｈｚ）。
ＩＲ（ヌジョール）：３３７０、３２８０、１７７２、１６３４ ｃｍ-1。
試験例１
インビトロでのＫＢ細胞の細胞毒性（Cytotoxicity）アッセイ
インビトロでのＫＢ細胞の細胞毒性アッセイを、クリスタルバイオレットアッ
セイ（グリリスら（Grillis et al.,）、アナリティカル バイオケミストリー
（Anal Biochem.）,159,109-113（1986））を改変して行った。
ＫＢ細胞を、１０％仔ウシ血清を加えたイーグル最小必須培地中で培養し、加
湿した５％ＣＯ2雰囲気中３７℃
でインキュベートし、細胞ストック（cell stock）を調製した。細胞をノイバイ
エル血球計算器（neubauer hemocytometer）を用いてカウントし、９６ウェルプ
レートに、１００μｌの３×１０4細胞／ｍｌを播種し、１日培養した。供試化
合物を希釈し、１００μｌの溶液をトリプリケート ウエル（triplicate wells
）において加え、終濃度が１０、５、１、０．５、０．１、０．０５及び０．０
１μｇ／ｍｌになるようにした。コントロールのウエルは、供試化合物が入って
いない以外は同一にした。これらを３日間培養した。その後、細胞を２０μｌの
２５％グルタルアルデヒドを加えて１５分間固定し、水洗した後乾燥させた。そ
して、１００μｌの０．０５％クリスタルバイオレットで１５分間染色し、水洗
した後乾燥させた。ウエルを１００μｌの０．０５Ｍ ＮａＨ2ＰＯ4／エタノー
ル（１：１ ｖ／ｖ）で溶出し、ＯＤ540をマルチスキャンスペクトロフォトメ
ーター（multiscan spectrophotometer）上で読んだ。細胞成長の阻害率を下記
式を用いて、光学濃度に基づいて算出した。
ＴＤ50値を、ログ−ロジット（log-logit）プロットの直線状の回帰線（regre
ssion line）から算出した。
式（Ｉ）の化合物は、この方法により、ＫＢ細胞系（KB cell lines）に対し
てアッセイされた。これらのＴＤ50値を表１に示す。
試験例２
インビトロでのＬ１２１０細胞の細胞毒性アッセイ
インビトロでのＬ１２１０細胞の細胞毒性アッセイを、マイクロカルチャーテ
トラゾリウムアッセイ（アレイら（Alley et al.,）、キャンサーリサーチ（Can
cer Research）,48,589-601（1988））の方法によって行なった。
Ｌ１２１０細胞を、１０％仔ウシ胎児血清及び５０μｌの２−メルカプトエタ
ノールを加えたＲＰＭＩ１６４０培地中で、加湿した５％ＣＯ2雰囲気中３７℃
で培養し、細胞ストックを調製した。細胞をノイバイエル血球計算器を用いてカ
ウントし、９６ウェルプレートに、１００μｌの０．５×１０4細胞／ｍｌを播
種した。供試化合物を希釈し、１００μｌの溶液をトリプリケート ウエルにお
いて加え、終濃度が１０、５、１、０．５、０．１、０．０５及び０．０１μｇ
／ｍｌになるようにした。コントロールのウエルは、供試化合物が入っていない
以外は同一にした。これらを３日間培養した。結果は、簡単にマイクロカルチャ
ーテトラゾリウムアッセイを利用してアッセイした。各々のウエルに、５０μｌ
のＭＴＴフ
ォルマゾアンワーキング溶液（MTT formazoan working solution）（培養培地中
１：５ ｖ／ｖ）を加え、培養物を３７℃で４時間インキュベートした。培養
プレートを低速で５分間遠心した。１０〜２０μｌの培養培地上清を除くすべて
を、徐々に吸引して除去し、機械的なシェイカーにより置換し、ＯＤ540をマル
チスキャンスペクトロフォトメーターで読んだ。細胞成長の阻害率を下記式を用
いて、光学濃度に基づいて算出した。
ＴＤ50値を、ログ−ロジット（log-logit）プロットの直線状の回帰線から算
出した。
式（Ｉ）の化合物は、この方法により、Ｌ１２１０細胞系に対してアッセイさ
れた。これらのＴＤ50値を表２に示す。
試験例３
サルコーマ１８０に対するインビボでの抗腫瘍活性
マウスにサルコーマ（Sarcoma）１８０を異種移植（xenografted）された腫瘍
に対して、以下に示すように、一般式（Ｉ）の化合物をインビボで試験した。
５×１０6細胞のサルコーマ１８０を、雄のＩＣＲマウス（６週令）に、０日
に皮下投与（Ｓ．Ｃ．）によって接種した。薬物を１、５及び９日に投与した。
移植後１２日に、マウスを殺し、腫瘍の重量を測定した。腫瘍の
増殖（growth）の阻害パーセント（percentage inhibition）を、コントロール
群と比較して処置群の平均の腫瘍の重量から計算した。各々の群で用いたマウス
の数は６〜１０匹であった。式（Ｉ）の化合物による腫瘍サルコーマ１８０群の
阻害パーセントを表２にまとめる。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，
ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，
ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ
Ｎ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ
，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，
ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ
Ｘ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ
，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，
ＶＮ
(72)発明者 山下 智宏
埼玉県日高市武蔵台７―８―５
(72)発明者 フィアクプイ チャールズ
カナダ国 ティー６ジェイ ２エル２ ア
ルバータ エドモントン 3607―106 ス
トリート
(72)発明者 トーマス ジョージ
カナダ国 ティー６エル ２ビー２ アル
バータ エドモントン 1225―56 ストリ
ート
(72)発明者 ハー チャン
カナダ国 ティー５ピー １エー６ アル
バータ エドモントン 15726―108 アベ
ニュー
(72)発明者 松本 宏
徳島県板野郡藍住町乙瀬字中田115―５
(72)発明者 大谷 敏夫
徳島県板野郡松茂町広島字北ノ川57―35
(72)発明者 大家 真治
東京都杉並区西荻南３―７―７
(72)発明者 ミケティシュ ロナルド
カナダ国 ティー８エー ３ヴィ６ アル
バータ シャーウッド パーク ブラエサ
イド テラス 12