JPH08506812A - 抗腫瘍剤としてのアシルフルベン類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 被検者における腫瘍細胞増殖を阻害する方法であって、構造（Ｉ）を有するアシルフルベン類似体の治療量と前記腫瘍を接触させ、ここで前記類似体は前記被検者に対する過剰な毒性を伴わずに腫瘍細胞増殖を阻害することができ、そしてＲは（a）である（Ｒ₁＝アルキル、アリール、ＮＨ₂、ＮＨＲまたはＮＲ₂）、腫瘍細胞増殖を阻害する方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】 抗腫瘍剤としてのアシルフルベン類似体 この研究は、National Institutes of Healthからの研究助成金CA-37641によ り部分援助された。米国政府は本発明に関して権利を有する。 発明の背景 多剤化学療法は、或る種の血液学的悪性疾患や進行した増殖性固形腫瘍におい て治癒力を有する。治癒的化学療法は、新しい比較的非交差耐性剤の開発と現存 の薬剤の一層効果的な利用から恩恵を得てきた。従来の薬剤の効能を高める介入 としては、より効果的な多剤投与方法、薬剤毒性の最小化、および補助薬療法、 外科療法または放射線療法の使用の増加が挙げられる。 近年の進歩にもかかわらず、多数の型の悪性疾患を有する患者は再発や死亡の 危険がかなり残っている。再発後、初期の治療法を使って患者を緩解に再誘導す ることができる。しかし、より高用量の初期化学療法剤または追加の薬剤の使用 をしばしば必要とし、これは少なくとも部分的な薬剤耐性の発生を示す。最近の 証拠は、患者に暴露しなかったものを含む数種類の薬剤に対して薬剤耐性が同時 に発生し得ることを指摘している。多剤耐性（mdr）腫瘍の発生は腫瘍塊の機能 であるかもしれず、治療の失敗の主な原因となり得る。この薬剤耐性を克服する ために、放射線療法や同種異系または自己骨髄移植を伴ってまたは伴わずに、高 用量化学療法が使われる。高用量化学療法は元の薬剤を使うこともできるし、ま たは追加の薬剤を含むように変更することもできる。造血系腫瘍と固形腫瘍に対 し てこのアプローチが実行できることは証明されている。mdr表現型と非交差耐性 である新規薬剤の開発には、現在の養生法の治癒可能性を促進すること、および 以前に治療した患者における治癒的介入を容易にすることが必要である。 最近、イルジンと呼ばれる新規分類の天然物質の試験管内抗腫瘍活性がKelner ，M．他、Cancer Res．47:3186（1987）において調べられた。この文献は参考と して本明細書中に組み込まれる。イルジンＳおよびＭは存在が知られているイル ジンの２つの型である。イルジンは他の化学療法剤と全く異なる化学構造を有す る。イルジン化合物は既に精製され、評価のためNational Cancer Institute Di vision of Cancer Treatment（NCI DCT）の生体内薬剤スクリーニングプログラ ムに提出されたが、NCI研究に従った別の実験的腫瘍系において低い治療指数を 有した。イルジンの極度の毒性がヒト腫瘍療法への応用を妨害している。 従って、腫瘍、特にmdr腫瘍に対して毒性であり、且つ生体内処置に有効であ るような適切な治療指数を有する化学療法剤への要求が存在する。本発明はこの 要求を満たし、関連する利点も提供する。 発明の要約 被検者における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、次の構造： または を有するイルジンＳまたはイルジンＭ類似体の治療量と腫瘍を接触させることを 含んで成り、ここで前記類似体は前記被検者に対して過剰の毒性を有することな く腫瘍細胞増殖を阻害することができ、そして上式中、 Ｒ₁はアルキルまたは水素であり； Ｒ₂はアルキルであり；そして Ｒ₃はアルコールまたはエステルである 腫瘍細胞の増殖を阻害する方法が提供される。 図面の簡単な説明 図１は、イルジンＳに対する他の腫瘍細胞と比較した乳癌および骨髄性白血病 細胞の感受性を示す。 図２は、イルジンＳの活性部位を示す。 図３は、酸の中で短命な中間体の存在を証明するＮＭＲスペクトルを示す。シ グナルＡは５員環の中の二重結合上の水素からのものである（イルジンＭ）。シ グナルＢは、シクロプロパン環の開環（しかし二重結合が反応する前）から生じ る短命中間体上の水素原子からのものである。Ｃで表示したシグナルは、二重結 合が反応した時に生じる生成物からのものである。時間と共に、イルジンＭから のシグナルピークが消失し、位置Ｃのところのピークが優性なシグナルとなるで あろう。シグナルＢはシグナルＡと同時に消失するので、それはイルジンＭから 生じた短命中間体であることを確証する。 図４は、無胸腺症マウス（Balb/c）におけるMolt-4腫瘍増殖に対するイルジン Ｓの効果を示す。 図５は、腫瘍増殖に対するデヒドロイルジンＭの効果を示す。 図６は、デヒドロイルジンＭに対するHL60/MRI異種移植片の応答を示す。 図７は、比較的感受性のHL60細胞と耐性Ｂ細胞を使ったイルジンＳ取込みを示 す。 図８は、HL60細胞によるイルジンＳの急速な細胞内蓄積が高濃度で飽和された ことを示す。 図９は、ミカエリス−メンテン飽和定数に従った様々な濃度でのHL60によるイ ルジンＳの初期取込みの分析を示す。 図10は、ヒト肺腺癌MV522に対する６−ヒドロキシメチルアシルフルベンおよ び他の常用の抗癌剤の効果を示す。 図11は、ヒト肺腺癌MV522に対する異なる用量の６−ヒドロキシメチルアシル フルベンの効果を示す。 発明の詳細な説明 被検者における腫瘍細胞増殖を阻害する方法であって、次の構造： を有するイルジンＳまたはイルジンＭ類似体の治療量と前記腫瘍を接触させるこ とを含んで成り、ここで前記類似体は被検者に対して過剰の毒性を有することな く腫瘍細胞増殖を阻害することができ、そして上式中、 Ｒ₁はアルキルまたは水素であり； Ｒ₂はアルキルであり；そして Ｒ₃はアルコールまたはエステルである 方法が提供される。 前記類似体は上述の構造を有する任意の化合物であることができる。有効な類 似体の例は次のものである： 被検者における腫瘍細胞増殖を阻害する方法であって、次の構造： を有するイルジンＳまたはイルジンＭ類似体の治療量と前記腫瘍を接触させるこ とを含んで成り、ここで前記類似体は被検者に対して過剰の毒性を有することな く腫瘍細胞増殖を阻害することができ、そして上式中、 Ｒ₁はアルキル、アルコキシルまたは水素であり； Ｒ₂はアルキルであり；そして Ｒ₃はアルコールまたはエステルである 方法も提供される。 前記類似体は、上述の構造を有する任意の化合物であることができる。有効な 類似体の２つの例は次のものである： 前記類似体は下記構造を有するアシルフルベン類似体でもよく、 ここでＲは （Ｒ₁はアルキル、アリール、ＮＨ₂、ＮＨＲまたはＮＲ₂である）である。 「阻害する」とは、治療なしで起こったであろう速度から腫瘍細胞増殖速度を 減少させるかまたは腫瘍細胞塊の大きさを減少させることを意味する。腫瘍の完 全な後退も阻害に含まれる。よって、該類似体は腫瘍細胞に対して細胞増殖抑制 性か細胞毒性のいずれかであることができる。 被検者は腫瘍を有するどんな動物でもよい。該類似体は、生体内 のヒト腫瘍にも試験管内のヒト腫瘍細胞系にも効果的である。 腫瘍は、その多くが当業界において周知である任意の効果的な手段によって前 記類似体と接触させることができる。被検者への投与経路としては、静脈内、経 口、腹腔内および経鼻吸入を挙げることができる。好ましい投与経路は被検者や 遭遇する腫瘍の種類に依存する。 本出願人は、イルジンＳおよびＭよりも毒性が少ないが生休内でより一層効果 的な化学療法剤であるイルジンＳおよびＭ類似体を製造することができるという 驚くべき発見を行った。上述したように、イルジンＳおよびＭは極度の毒性のた め低い治療指数を有し、従ってヒトには療法利用できない。本出願人は、イルジ ンＳおよびＭの様々な修飾が、求核試薬が該化合物と反応するのを阻害すること を発見した。これはシクロプロパン環の開環をより起こりにくくし、そして生体 内での該化合物の毒性を減少させ、高い治療指数をもたらす。本出願人は、アシ ルフルベン類似体である６−ヒドロキシメチルアシルフルベンが既知のＳおよび Ｍイルジン類似体よりも著しく有効であり且つ非毒性であることを更に発見した 。 言及した様々なＲ基は、イルジンまたはそれらの類似体の重大な官能基に影響 を及ぼさない範囲を限定し、従って、広範囲の置換基であることができる。よっ て、本出願人は、言及した様々なＲ基が広範囲に解釈されることを意図する。例 えば、アルキル基は、アルキル基に結合した任意の官能基を包含する（即ち、ア ルキルフルベンまたは官能基それ自体）。Ｒ基としては、ニトロ、ハロゲン、ハ ロゲン化アルキル、アルコール、ペルオキシド、エンドペルオキシド、第一、第 二もしくは第三アミン、エーテル、エステル、スルフヒドリル、チオアルキル、 チオエステル、ジチオエステル、ジスルフィド、カルボン酸、エナミン、イミン またはオキシム基が挙げら れる。 類似体の治療有効量は被検者によって異なる。しかしながら、イルジンＳおよ びＭに比べて減少した毒性のため、比較的高用量の類似体を投与できることがわ かった。30〜112,000μg／kg体重の治療量が静脈内投与には特に有効であり、一 方で腹腔内に投与する時には300〜112,000μg／kg体重が有効であることがわか った。当業者が認識する通り、治療量は投与の方法に依存して異なり得る。更に 、該類似体が毒素に結合される場合、治療量は異なり得る。 該類似体を試薬に付着させ、腫瘍関連抗原に結合する複合体を形成させること ができる。そのような方法は当業界で周知であり、試薬を類似体に連結する働き をするリンカーを含むことができる。そのような付着として任意の化学結合を挙 げることができ、その一例として共有結合を挙げることができる。前記試薬は、 腫瘍細胞上または腫瘍細胞領域中の腫瘍関連抗原に特異的に結合する任意の試薬 であることができる。典型的には、そのような試薬はポリクローナルまたはモノ クローナルのいずれかの抗体である。次いでそれらの複合体を療法に利用するこ とができる。本発明の方法はいずれの腫瘍細胞に対しても実施することができる が、骨髄性腫瘍、類表皮腫、Ｔ細胞性白血病、並びに肺癌、卵巣癌および乳癌の 腫瘍細胞に対して特に有効である。 下記構造： （ここでＲ＝メチル：Ｒ₁，Ｒ₂およびＲ₃＝メチルまたはアルキル）を有する化 合物も開示される。 下記構造： （ここでＲ＝Ｈまたはメチル：Ｒ₁，Ｒ₂およびＲ₃＝メチルまたはアルキル）を 有する化合物も開示される。 実施例Ｉ デヒドロイルジンＭの合成 乾燥ジクロロメタン（60ml）中のイルジンＭ（200mg）とピリジニウムジクロ メート（１ｇ）の混合物を、アルゴン雰囲気が維持されるようにゴム隔膜が取り つけられたフラスコ中で室温で攪拌した。20時間後、反応混合物をジエチルエー テル（20ml）で希釈し、そして短いシリカゲルカラムを通して濾過した。カラム を追加のジエチルエーテルで更に溶出させ、合わせた濾液を濃縮して残渣を与え 、その残渣を、溶離液としてヘキサン／酢酸エチル（10：１）を使ったシリカゲ ル上でのクロマトグラフィーにかけた。このクロマトグラフィーからの早期画分 の中に所望の化合物が得られた。収量は64〜65℃で融解する白色結晶140mgであ った。この化合物のＮＭＲスペクトルデータを記録した。 実施例II フルベンの合成 イルジンＳ（50mg）を水（２ml）に溶かし、その溶液に３Ｎ塩酸（２ml）を加 えた。生じた溶液はすぐに濁り（30分以内）、黄色沈澱物が生成した。この混合 物を冷蔵庫の中に一晩入れておき、次い でそれをクロロホルム（10ml）で抽出した。黄色クロロホルム溶液を乾燥し（Mg SO₄）、溶媒を減圧下で留去すると橙黄色ガムが残った。この物質を、溶離液と してヘキサン／酢酸エチル（６：１）を使ったシリカゲル上でのクロマトグラフ ィーにかけると、フルベン（20mg）とビスフルベン（10mg）が得られた。それら の化合物についてＮＭＲスペクトルデータを記録した。 あるいは、次の方法でフルベンの全合成を達成することもできる： 既知の１，１−ジアセチルシクロプロパンと上記のシクロペンタジエン誘導体 のジアニオンとの反応はジオールを与え、ジオールを穏和な酸処理するとジオー ルケトンを与える。第三ヒドロキシル基の選択的脱離が所望のフルベンを与える 。 実施例III 試験管内研究 細胞毒性効果を評価するために、様々な濃度のイルジンを細胞培養物に48時間 添加し、次いでトリパンブルー排除により細胞増殖／生存度を測定した。48時間 連続暴露実験の代替として、細胞を96ウエルプレート中で液体培養において培養 し、様々な濃度のイルジン に２時間暴露し、〔³Ｈ〕−チミジンで１〜２時間標識し、そしてガラスフィル ターの上に収集した。シンチレーション液を含むバイアルに濾紙を加え、ベータ （シンチレーション）カウンター中で残留放射能を測定した。 イルジンＳに対する他の固形腫瘍細胞系の感受性をスクリーニングした時、乳 癌細胞系MCF-7が著しく感受性であると認められた（図１）。我々の研究室で維 持されている別の乳癌細胞系MDA-231もイルジンＳに対して著しく感受性である ことがわかった（図１）。 デヒドロイルジンＭを使った研究から、この類似体も骨髄性白血病細胞並びに 乳癌細胞系MCF-7およびMDA-231に対して選択的な毒性を示すことがわかった（表 １）。 CEM mdr変異体がイルジンＳに対して耐性でないことを以前の研究が示したた め、イルジンＳおよびデヒドロイルジンＭに対する感受性について幾つかの他の mdr細胞型を研究した。それらのmdr娘細胞系は多数の常用の化学療法剤に対して 200〜800倍の耐性の増加を示すが、イルジンＳまたはデヒドロイルジンＭに対す る耐性は最小または無であった（表２）。gp170タンパク質と関連づけられるか または関連づけられないmdr細胞はイルジン毒性に対してまだ感受性であった。 それらの研究は、イルジンの新規構造が多剤耐性造血細胞系の相対的非交差耐性 を付与することを指摘する。イルジンの誘導体であるデヒドロイルジンＭは親の イルジン化合物よりもわずかに低毒性であるが、結果（表２）は種々のmdr細胞 系にこの化合物に対する交差耐性は見られないことを示す。 L1210、マウス骨髄CFU-gm、およびC1498（AML細胞系）に対するイルジンＳと デヒドロイルジンＭの効果を研究した。イルジンＳはこのアッセイにおいて今ま で試験した中で最も有力な薬剤であり、言及するL1210とAML白血病系とCFU-gmの 領域間にこれまで認められた最大の相違効果を示した（表３）。誘導体デヒドロ イルジンＭは、毒性がより低かったが明らかにAML系に対してより選択的であっ た。それはCFU-gm細胞に対して全く効果がない濃度においてAMLのコロニー形成 を阻害した（表４）。 実施例IV 構造−機能研究 イルジンの誘導体を合成しそしてHL60白血病細胞に対するそれらの試験管内毒 性を調べることにより、構造−機能研究を行った（表５）。この研究はイルジン 毒性のための３つの重要な部位を同定した。それらはシクロプロパン環（部位Ａ ）、α／β不飽和結合部位（部位Ｂ）およびケトン基（部位Ｃ）を含んだ（図２ ）。それらの部位のいずれかの変更は４logまでの毒性低下を引き起こした。対 照的に、環置換基でない第一級ヒドロキシル基（図２、部位Ｄ）は毒性に寄与し ない。よって、毒性を変えることなく、この部位に様々な大型化学基を取り付け ることができる。顕著な毒性の低下（イルジンＳまたはＭに比べて）を有する誘 導体の多くは、BCNUやシス プラチンといった従来の化学療法剤よりもまだ有効である（表５）。 実施例Ｖ 構造−機能研究：化学的 イルジンＭは、細胞培養研究で1,000倍以上毒性が低い、安定な 芳香族化合物に容易に変換される（希HClでの処理により）。塩素−炭素結合の 形成、シクロプロパン環の開環および第三級ヒドロキシルの脱離（水として）は 同時に起こる。形成された中間体は反応混合物のＮＭＲ分光法により検出するこ とができる（図３）。しかしながら、この中間体は高度に反応性であり、第二の 求核試薬、即ち水の攻撃により素早くフェノールに変換される。よって、酸性条 件下では、イルジンＭは明らかに二価性である。 上記研究は、イルジンの毒性が、第三級ヒドロキシルを遊離させそしてシクロ プロパン環を開環させることのできる容易さに関連することを示す。イルジン毒 性はシクロプロパン基（部位Ａ、図２）、二重結合（共役ジエン）（部位Ｂ）お よびケトン（部位Ｃ）の複合効果に依存することがわかった。５員環上の第二級 ヒドロキシル基のケトンへの酸化が、該分子内の更なる電子非局在化に寄与する ことにより該分子の力価または選択性を変えたのであろうと仮定された。新しい ケトン基は、シクロプロパンＣ−Ｃ結合の電子が第三級ヒドロキシルを担持して いる炭素原子の方よりもケトンの方に非局在化されるように「電子シンク」とし て働く。これは、炭素−酸素（第三級ヒドロキシルの酸素）結合の裂け目として 生成する初期のカルボカチオンが、イルジンＭの場合ほど安定でないことを意味 する。従って、炭素−酸素結合の開裂はより起こりにくく、反応性が減少する。 デヒドロイルジンＭと命名されたこのケトン誘導体を合成した。この誘導体はイ ルジンＳまたはＭよりも試験管内のHL-60細胞に対して毒性が低かった（表４） 。上述したように、デヒドロイルジンＭの毒性は試験管内の骨髄性癌細胞および 乳癌細胞に対して比較的選択的であるように見えた（図１と表１）。 イルジンＭおよびデヒドロイルジンＭと希塩酸との反応の速度論の結果は上記 仮定と一致する。希HCl中、イルジンＭは擬一次反応 （ｋ＝4.7×10^-3分^-1、ｔ1/2＝148分）を受ける。デヒドロイルジンＭも一次反 応速度論を示したが、反応はかなり遅かった（ｋ＝２×10^-4分^-1、ｔ1/2＝2765 分）。デヒドロイルジンＭとの反応では、ＮＭＲ分光法により全く中間体が検出 できなかった。おそらく、あまりにゆっくり形成され、短命すぎて検出できない ためであろう。デヒドロイルジンＭにより示された低反応性は、それがイルジン Ｍに比較して求核試薬との反応において一層選択的であり、従ってより低い毒性 を有することを暗示している。 天然に存在する求核試薬であるグルタチオンとイルジンとの反応も研究した。 広いpH領域、即ちpH3〜pH9で、グルタチオンはイルジンＭ、イルジンＳまたはデ ヒドロイルジンＭと自然に反応し、イルジンＭとHClとの反応からのものに類似 した生成物を生じる。反応速度は6.１〜7.0のpHで最適化され、これは該反応が 細胞内で起こり得ることを示す。 次に、乳癌細胞系MCF7-wtおよびそれのMDR耐性娘細胞系に対するイルジンの毒 性を研究した。gp170陰性娘細胞系は、従来の化学療法剤に対する感受性の200〜 500倍増加をもたらすグルタチオントランスフェラーゼの50倍増加を基準にして 薬剤耐性である。この系はグルタチオン含量の4.1倍の増加も示す。この娘細胞 系は、他の薬剤を使った時に観察された200〜800倍の増加に比較して、イルジン Ｓに対する感受性に4.2倍の増加を示した（親のＩＣ₅₀＝0.88ナノモル／ｌ；娘 細胞系＝3.70ナノモル／ｌ）。グルタチオントランスフェラーゼを阻害するイル ジンの能力に関する速度論研究は、酵素活性の直接阻害がないことを示した。そ れらの研究結果は、イルジン毒性が細胞内グルタチオン含量と逆相関するが、グ ルタチオントランスフェラーゼ活性とは相関関係がないを示す。 実施例VI 動物実験 Leonard，J.E．他、Cancer Res．47:2899-02（1987）およびDillman，R.O．他 、Cancer Res．45:5632-36（1985）（両文献は参考として本明細書中に組み込ま れる）に記載された手順を使って、Molt-4（ヒトＴ細胞白血病）異種移植片を第 ４週齢の無胸腺症Balb/c nu/nuマウス中に確立させた。３×週線量の全身照射（ 600cGy）の後、照射した（6000 cGy）HT-1080フィーダー細胞と一緒にMolt-4細 胞の皮下注射をマウスの脇腹に行った。２匹の動物には照射済のHT-1080フィー ダー細胞のみを投与し、それらの細胞が腫瘍を誘導しないことを保証した。動物 をMolt-4腫瘍発達について監視し、腫瘍が触知できた時（５〜７日目におよそ４ ×４mm）、マウスを上述したような５匹のグループに無作為に分けた。対照マウ スには腹腔内に食塩水を投与し、処置マウスには300μg/kgのイルジンＳ、30ま たは300μg/kgのデヒドロイルジンＭのいずれかを週２回腹腔内（IP）投与した 。イルジンＳを投与したマウスでは腫瘍増殖の遅延が見られた（図４）。 対比して、30μg/kgの低用量でデヒドロイルジンＭを投与したヌードマウスで は（該化合物は週２回60,000μg/kg IPにおいてマウスに非毒性であることがそ の後わかった）、５つの腫瘍のうち３つが完全な後退を示したが、２つの腫瘍は 応答しなかった（図５）。２つの明らかに耐性の腫瘍を収得し、イルジンＳおよ びデヒドロイルジンＭに対する耐性について試験管内で試験した。いずれの化合 物に対しても耐性の証拠が得られなかった。完全に応答した動物のうちの２匹を 腫瘍後退の証拠のないまま12週間以上に渡り追跡した。 別の起源の無胸腺症ヌードマウスを使って、それらの実験を繰り返した。それ らの実験では、腫瘍増殖に対するイルジンの効果はほ とんどなかった。Molt-4異種移植片に対する応答のこの変動性の理由は、おそら くデヒドロイルジンの低用量、グルタチオン代謝における動物間の変動、または 薬剤分布に関連するのだろう。 次いで、デヒドロイルジンＭの効力をマウスSL-2細胞を使った同系モデルにお いてスクリーニングした。SL-2白血病／リンパ腫細胞を皮下注射し、リンパ節、 脾臓および肺に転移させ、そしてこのモデルにおける薬剤効力を寿命増加率（Ｉ ＬＳ）により決定した。SL-2細胞を動物あたり2.5×10⁶細胞の割合で投与し、そ して腫瘍が触知できるまで処置を７日間遅らせた。これは、確立された腫瘍に対 する比較的緊縮な試験であり、通常0.5×10⁶細胞を使いそして３日目に薬剤治療 を始めるSL-2モデルでの一般的な薬剤スクリーニングと対照的である。デヒドロ イルジンＭは30mg／kg IP週２回（ＩＬＳ ５％）と、60mg／kg IP週２回（ＩＬ Ｓ 18％）ではあまり効果がなかった。0.03mg／kgで週２回静脈内（IV）投与し た時、ＩＬＳは38％に増加した。これは、IV投与すると該薬剤が肝臓により代謝 されるので一層有効であることを示唆する。 それらの生体内実験の進行中、イルジンの組織特異性が能動的なエネルギー依 存性ポンプの存在に依存することが明らかになった。SL-2とMolt-4細胞を実験す ると、取込み機能が存在しないことが決定づけられた。従って、研究は骨髄系の 細胞を使用する異種移植片モデルに再び向けられた。 動物照射を使わないヌードマウス中で異種移植片として増殖することができる ヒトHL-60細胞をTheodore Brightman博士（NCI）から入手した。HL-60 MRI細胞 と命名されたそれらの細胞は、エネルギー依存性取込みポンプを有すると確認さ れた。これは、それらの親細胞が該ポンプを有するので意外な結果ではない。デ ヒドロイルジンＭは週２回スケジュールにおいて腹腔内（IP）投与すると、用量 依存型腫瘍抑制を誘導した（図６）。週２回IP投薬スケジュールでのこれらの実 験において、デヒドロイルジンＭのMTD IP用量に達した。静脈内（IV）でデヒド ロイルジンＭを使っても同様な腫瘍後退が観察された。 共同して、デヒドロイルジンＭの生体内効果を再研究した。最初に該化合物を L1210細胞に対して実験した。毎日５日間に渡り与えた2.5mg／kg IPの用量は、 わずか９％のＩＬＳをもたらした。次いでデヒドロイルジンＭを24時間点滴注入 （5.0mg／kg）として投与した。ＩＬＳは11％であった。我々がヒト脊髄嚢胞細 胞中にエネルギー依存性取込みの存在を認めるようになった時、C1498細胞を使 った同系マウスAMLモデルに対する生体内効力についてデヒドロイルジンＭをス クリーニングした。すると2.5mg／kg IPのイルジンＳの単一ボーラスは35％のＩ ＬＳを生じた。１日１回、５日間に渡りIP投与した同用量を用いた２回目の試行 は44％のＩＬＳを生じた。動物は体重減少または食物／水摂取量の減少を示すこ となく、週２回スケジュールで60mg／kg IPまたは１mg／kg IV（尾静脈）を寛容 することができるので、用量と治療スケジュールの両方を更に最適化することが 可能である。 実施例VII アシルフルベンとデヒドロイルジンＭ を使ったHL60/MRIマウス実験 30匹のマウスの肩に、500,000個のHL60／MRI細胞（ヒト骨髄性白血病腫瘍細胞 ）を皮下注射した。治療は即座でなく11日目に開始した。治療開始のこの遅延は 、化合物が効果的であるかどうかを決定するための緊縮試験である。治療を遅ら せることにより、腫瘍細胞はしっかりと確立された状態になる。 マウスを各々５匹から成る６グループに分けた。１グループは対照であり、そ れらの動物にはプラセボ、即ち薬剤を希釈するのに使った溶液を投与した。その 他のグループには次の化合物と用量を投与した：1.0mg／kgのデヒドロイルジン Ｍ、3.0mg／kgのデヒドロイルジンＭ、0.3mg／kgのアシルフルベン、1.0mg／kg のアシルフルベン、3.0mg／kgのアシルフルベン。全ての動物に尾静脈を使った 静脈内注射によりプラセボまたは薬剤を投与した。ブラセボまたは薬剤は週２回 スケジュールで投与した。 結果を下記表６に要約する。デヒドロイルジンＭとアシルフルベン化合物の両 方が腫瘍増殖の阻害に効果的であり、用量依存性阻害を証明した（薬剤を多量に 投与すればするほど、腫瘍増殖が小さくなる）。いずれかの薬剤の最大量を投与 した動物は、餌や水摂取量の減少などの悪影響のいかなる証拠も示さなかったし 、統計学上有意な体重減少も示さなかった。それらの結果は、より高用量の薬剤 を投与できることを証明する。また、薬剤をより有効な投薬スケジュール、例え ば毎日の基準で投与できることを示す。 実施例VIII 一般的な試験管内スクリーニング手順と細胞取込み研究 前の実施例の提言やイルジン作用機構と組織特異性への我々の集中研究と一致 して、迅速なイルジン取込みについて別の骨髄性白血病細胞系（KGl，KGla，HBL ，K562，OCI-Ml，AML-193）をスクリーニングすることができる。 イルジン化合物の試験管内スクリーニング手順は前の実施例に詳述されている 。増殖または半固体コロニー形成アッセイ、およびチミジン取込みの阻害を使っ て、まず細胞系に対する新規類似体の細胞毒性を５log範囲に渡り評価する。チ ミジン取込みの阻害は、チ ミジン取込みがイルジンにより優勢的に阻害されそして細胞死と密接に相関する ことを以前の研究が示したために利用する。正常な骨髄始原細胞並びに様々な白 血病（ＢおよびＴ細胞性）および固形腫瘍（黒色腫、卵巣癌）に関与する多様な 細胞系に対して類似体をスクリーニングする。 MDR系を含む種々の細胞系に対するデヒドロイルジンＭの試験管内テストを、 ＤＮＡ修復欠乏細胞系と正常骨髄始原細胞において実施することもできる。様々 な他の類似体を調製することができる。それらの類似体は既知の活性部位に変更 があるだろうから、それらは同様な腫瘍抑制をもたらすと期待される。それらの 類似体についてのスクリーニング研究は、様々なmdr細胞（交差耐性が起こらな いことを保証するため）およびＤＮＡ修復欠乏細胞系を含むことができる。 試験管内テストは、他の胸部細胞系がイルジンＳ、デヒドロイルジンＭおよび フルベン類似体に対して優勢的に感受性であるかどうかを決定するためにそれら の細胞系の感受性を調べることもできる。 実施例IX 腫瘍細胞におけるイルジン取込みの評価 ヒト骨髄性腫瘍細胞はイルジンに対して感受性であるが、それらの正常始原細 胞である顆粒球／マクロファージ形成単位は1.5〜2.0logまでイルジンに比較的 耐性であり、このことは、幾つかの正常骨髄細胞から輸送系が欠けておりそして 安全治療限界を提供していることを証明する。 特異的イルジンＳ取込みは、比較的感受性HL60細胞と耐性Ｂ細胞を使ってアッ セイした。37℃で、HL60骨髄性白血病細胞はイルジンＳの迅速な取込みを示し、 一方で比較的耐性の8392Ｂ細胞は比較 的少ない薬剤取込みを示した（図７）。Ｂ細胞系中へのイルジンの細胞内蓄積は 遅く、７時間の間直線的であり（ｒ＝0.984）、７時間の時点で細胞内濃度がイ ンキュベーション混合物のそれに到達した。対照的に、HL60細胞は該毒素を迅速 に蓄積し、細胞内濃度は１時間以内にプラトーに達した。10nMのイルジンＳに暴 露されたHL60細胞は該毒素を19倍濃縮したが、Ｂ細胞は該毒素を積極的に濃縮し なかった。HL60細胞によるイルジンＳの迅速な細胞内蓄積は高濃度において飽和 された（図８）。対照的に、8392Ｂ細胞によるイルジンＳ蓄積は濃度依存性のま まであった。様々な濃度におけるHL60細胞によるイルジンＳの初期取込みの分析 は、イルジンＳの流入がミカエリス−メンテン飽和速度論に従うことを明らかに した（図９）。HL60細胞のＶ_maxは27ピコモル／分／mgタンパク質であり、Ｋ_mは 4.2μＭであった。これは、イルジンの場合のＶ_maxが葉酸（細胞に要求されるビ タミン）の場合のＶ_maxの５倍であることから、HL60細胞がイルジンに対して非 常に高い輸送能力を有することを示す。 冷却（４℃）、１％アジド、並びに代謝遮断薬２−デオキシグルコース＋アン チマイシンＡは、いずれもHL60細胞中へのイルジンＳの取込みを阻止するが、耐 性8392Ｂ細胞に対してはほとんど効果がない（表７）。それらの研究は、イルジ ンＳがエネルギー依存性輸送系によってHL60細胞中に輸送され濃縮されるが、一 方で耐性Ｂ細胞中への輸送は拡散（受動輸送またはエネルギー不要輸送）によっ てのみ起こることを示す。MCF-7乳癌細胞も冷却により取込みの阻害を示した。 エネルギー依存性輸送機構の発見は、何故短期暴露時間のイルジンに対して骨髄 性および胸部腫瘍細胞がこれほど感受性であってＢ細胞が感受性でないかを説明 する。 実施例Ｘ ２，５，６，７−テトラメチル−１−インデノンと デヒドロプテロシン化合物の合成および構造 まず、二硫化炭素中に１，２，３−トリメチルベンゼンとメチルマロニルクロ リドの溶液を調製し、２時間に渡り二塩化アルミニウムを滴下添加することによ り、２，４，５，６−テトラメチル−１，３−インダニオンを合成した。該混合 物を２時間還流させ、クラッシュアイスを加え、クロロホルムで３回抽出した。 合わせた抽出液をブラインで洗浄し、乾燥し、そして溶媒を留去し、残った残渣 をベンゼン中１％酢酸エチルを使ったクロマトグラフィーにより精製 した。溶媒の除去と昇華による精製の後、所望の生成物が得られた。 ２，４，５，６−テトラメチル−１，３−インダニオンを亜鉛粉末を使って50 ℃で還元することにより、２，５，６，７−テトラメチル−１−インデノンを調 製した。生成物をベンゼン中１％酢酸エチルを使ったクロマトグラフィーにより 精製し、２つの異性体を得た。主要な方の異性体を10％水酸化カリウムで処理し 、次いで昇華により精製した。該化合物は次の構造を有する： デヒドロプテロシンＯの合成：３−アセトキシ−６−（β−メトキシ）エチル− ２，５，７−トリメチル−１−インダノンをテトラヒドロフランと10％水酸化カ リウム中に溶かし、２時間還流させた。次いで溶液をエーテルで３回抽出し、合 わせた抽出液をベンゼン中２％酢酸エチルを使ったクロマトグラフィーにより精 製し、デヒドロプテロシンＯを得た。該化合物は次の構造を有する： Ｒ＝Ｈ デヒドロプテロシンＢ Ｒ＝CH₃ デヒドロプテロシンＯ 両化合物とも試験管内で細胞毒性であり、抗真菌性を有する。 実施例ＸＩ アシルフルベン類似体の合成 イルジンＳから出発してまたは単純な前駆体からの全合成により、抗腫瘍活性 に要求される重要な構造的特徴を有する多数のアシルフルベン類似体を調製する ことができる。イルジンＳはOmphalotus illudensの醗酵により生産される。こ の化合物を水に溶かし、希硫酸を加えると、55％の収率でアシルフルベン（Ｒ₁ ＝Ｈ、Ｒ₂＝Ｈ、Ｒ₃＝CH₃）に変換される。Ｒ₂置換基を変更することにより、例 えばＲ₂＝ヒドロキシメチル、ブロモ、ヨード、クロロ、フルオロ、ニトロ、ｐ −ヒドロキシベンジル、ｐ−メトキシベンジル等に変更することにより、アシル フルベンから多数の類似体を得ることができる。Ｒ₂は多核式または複素環式芳 香族基であることもできる。 Ｒ₂基はアシルまたはアルキルであってもよい。下記に概略されるような全合 成により、異なるＲ₃基（Ｒ₂基も）を有する類似体を調製することができる。 １，１−ジアセチルシクロプロパンと、適当に置換されたシクロペンタジエン から誘導されたジアニオンとのアルドール縮合は、容易にアシルフルベンに変換 される中間体を与える。Ｒ₂とＲ₃はアルキル、アリールまたは置換されたアルキ ルもしくはアリール基であることができるので、多種多様な化合物が可能である 。 アシルフルベンの合成。２ｇ（9.2ミリモル）のイルジンＳを700mlの水に溶か した後、4M H₂SO₄を加えた。該溶液を一晩攪拌し、酢酸エチルで抽出した。有機 相を飽和NaHCO₃、水およびブラインで洗浄し、MgSO₄上で乾燥し、そして濃縮し た。ヘキサンと酢酸エチルを使ったシリカゲル上でのクロマトグラフィーは、0. 82gのアシルフルベン（50％）を与えた。¹H-NMR δ0.73-1.50（m，4H），1.38（ s，3H），2.00（s，3H），2.15（s，3H），3.93（s，1H），6.43（s，1H）．7.1 6（s，1H）；MS m/Z 216（M⁺），202（M⁺-CH₂），188（M⁺-CH₂CH₂），173（M⁺-2 CH₂-CH₃），170（M⁺-2CH₂-H₂O）。UV325nm（8.3×10³），235nm（16.6×10³）。 該化合物は下記構造を有する： ６−ヒドロキシメチルフルベンの合成。アシルフルベン（550mg、2.5ミリモル ）を40mlのＴＨＦに溶かし、30％ホルムアルデヒド水 溶液（40ml）を加えた。H₂SO₄の最終濃度が１Ｎになるように4N H₂SO₄溶液（26. 4ml）を加えた。生じた溶液を一晩攪拌し、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽 和NaHCO₃溶液、水およびブラインで洗浄し、MgSO₄上で乾燥した。ヘキサンと酢 酸エチルを使ったシリカゲル上でのクロマトグラフィーは、400mgのヒドロキシ メチルフルベン（64％）を与えた。¹H-NMR δ0.72-1.48（m，4H），1.38（s，3H ），2.15（s，3H），2.19（s，3H），3.90（s，1H），4.66（d，J=2.1 Hz，2H） ，7.10（s，1H）。MS m/Z 246（M⁺），228（M⁺-H₂O），218（M⁺-CH₂CH₂），186 （M⁺-CH₃-CH₂-CH₂-OH），185（M⁺-H₂O-CH₂-CH₂-CH₃）。UV233nm（1.0×10⁴），3 25nm（7.7×10³）。該化合物は下記構造を有する： ヨードフルベン。15mlのCH₂Cl₂中のアシルフルベン（60mg、0.28ミリモル）の 溶液にトリフルオロ酢酸銀（63mg、0.29ミリモル）を加えた。次いで８mlのCH₂C l₂中のヨウ素（70.5mg、0.28ミリモル）の溶液を０℃で滴下添加した。混合物を その温度で３時間攪拌し、次いでセライトを通して濾過し、エーテルで溶出させ た。濾液の濃縮により、赤色ガムとしてヨードフルベン（73mg、77％）を得た。¹ H-NMR δ0.76-1.54（m，4H），1.38（s，3H），2.14（s，3H），2.36（s，3H） ，3.87（s，1H），7.16（s，1H）。MS m/Z 342（M⁺），314（M⁺-CH₂CH₂），299 （M⁺-CH₂CH₂-CH₃），296（M⁺-CH₂CH₂-H₂O），215（M⁺-I），187（M⁺-I-CH₂CH₂） ，127（I⁺）。該化合物は下記構造を有する： ブロモフルベン。アシルフルベン（60mg、0.28ミリモル）を０℃にて９mlのア セトニトリル中に溶かした。Ｎ−ブロモスクシンイミド（50mg、0.28ミリモル） を添加し、混合物をその温度で3.5時間攪拌した。水を使って反応を失活させ、 エーテルで生成物を抽出した。エーテル相を水とブラインで洗浄し、そしてMgSO₄ 上で乾燥した。クロマトグラフィーは橙色結晶としてブロモフルベンを与えた （77mg、94％；酢酸エチル−ヘキサンから再結晶したもの、m.p．92-94℃）。¹H -NMR δ0.75-1.55（m，4H），1.40（s，3H），2.12（s，3H），2.33（s，3H）， 3.89（s，1H），7.15（s，1H）。MS m/Z 295（M⁺），293（M⁺-2），267，265（M⁺ -CH₂CH₂），252，250（M⁺-CH₂CH₂-CH₃），249，247（M⁺-CH₂CH₂-H₂O），215（フルベン -1）。該化合物は下記構造を有する： Ｐ−ヒドロキシベンジルフルベン。乾燥CH₂Cl₂（25ml）中のヒドロキシメチル フルベン（70mg、0.28ミリモル）の溶液にフェノール（40mg、0.4ミリモル）を 加え、該混合物を−78℃に冷却し、そして三フッ化ホウ素エーテラート（0.3ml 、2.7ミリモル）を滴下添加した。反応液をその温度で１時間攪拌し、水を加え て反応を失活 させた。有機相をH₂O、NaHCO₃およびブラインで洗浄し、MgSO₄上で乾燥した。ヘ キサン−酢酸エチルを使ったシリカゲル上でのクロマトグラフィーは90mg（98％ ）の赤色結晶（m.p．143-144℃）を与えた。¹H-NMR δ0.59-1.43（m，4H），1.3 6（s，3H），1.76（s，3H），2.07（s，3H），3.95（s，1H），3.97（d，J=7.2H z，2H），4,83（s，1H），6.74（d，J=8.4Hz，2H），6.91（d，J=8.4Hz，2H）， 7.22（s，1H）。MS m/Z 322（M⁺），294（M⁺-2CH₂），279（M⁺-2CH₂-CH₃），251 （M⁺-2CH₂-CH₃-CO），215，107。UV 228nm（1.2×10⁴、243nmと262nmに湾曲があ る），325nm（7.1×10³），410nm（2.6×10³）。該化合物は下記構造を有する： ｐ−メトキシベンジルフルベン。乾燥CH₂Cl₂（５ml）中のヒドロキシメチルフ ルベン（10mg、0.04ミリモル）の溶液にアニソール（0.04ml、0.37ミリモル）を 加え、該混合物を−78℃に冷却し、そして三フッ化ホウ素エーテレート（0.04ml 、0.36ミリモル）を滴下添加した。反応液をその温度で１時間攪拌し、水を加え て反応を失活させた。有機相をH₂O、飽和NaHCO₂およびブラインで洗浄し、MgSO₄ 上で乾燥した。該溶液を濃縮して得られた残渣を真空乾燥した後、定量的収率で 生成物が得られた（14mg）。¹H-NMR δ0.59-1.40（m，4H），1.36（s，3H），1. 76（s，3H），2.07（s，3H），3.78（s，3H），3.95（s，1H），3.99（d，J=16. 12 Hz，2H），6.81（d，J=8.8Hz，2H），6.96（d，J=8.3Hz，2H），7.22（s，1H ）。MS m/Z 336（M⁺），308（M⁺-CH₂CH₂），215，121［（CH₂-Ph-OCH₃）⁺］。UV 410nm（2.7 ×10³），325nm（7.0×10³），267nm（1.0×10⁴），245nm（湾曲），226nm（1.9 ×10⁴），203nm（1.4×10⁴）。該化合物は下記構造を有する： 実施例ＸII アシルフルベン類似体の試験管内細胞培養研究 細胞培養アッセイを使った試験管内実験は、６−ヒドロキシメチルアシルフル ベン、ブロモアシルフルベンおよびヨードアシルフルベン類似体が２時間と48時 間の暴露時間の両方において標的腫瘍細胞HL60とMV522に対して顕著に毒性であ ることを証明した（表８と表９）。相対的毒性比（２時間：４８時間の毒性）は 、それらの類似体が親のイルジンＳ化合物または最初の特許出願明細書中に記載 の類似体のいずれよりも生体内でより有効だろうということを示唆した。 実施例ＸIII 生体内研究 試験管内スクリーニング結果に基づいて、類似体のうちの１つである６−ヒド ロキシメチルアシルフルベンを、該類似体がアシルフルベンよりも実際に有効で あるかどうかを決定するための生体内研究用に選択した。異種移植片は同じくヒ ト肺腺癌MV522であった。というのは、それは従来の抗癌剤に対して非応答性の モデルであり、（局部的腫瘍浸潤によるのではなく）転移により致死させるから である。従来の抗癌剤シスプラチン、タキソール、ミトマイシンＣ、アドリアマ イシン、並びにイルジンＳを薬剤対照として選択した。薬剤を溶解させるのに使 った溶剤、即ちジメチルスルホキシド／生理的食塩水混合物（40％DMSO／NS）の みを投与した対照グループが含まれた。６−ヒドロキシメチルアシルフルベン類 似体は、実際に動物に腫瘍の後退を誘導した。抗癌剤による腫瘍の実際的後退は 、以前にこのモデルにおいて観察されたことがなかった。従来の抗癌剤またはイ ルジンによる腫瘍増殖の抑制は見られなかった（図10）。動物に９用量の６−ヒ ドロキシメチルアシルフルベン類似体を投与した。活動、体重、餌摂取量または 水摂取量の減少により証明されるような毒性副作用の証拠はそれらの動物に１つ も認められなかった。対照（DMSO／NS）処置動物に比較して、シスプラチン、タ キソール、ミトマイシンＣおよびアドリアマイシン処置動物の寿命に有意な増加 は見られなかった。イルジンＳは実際に成熟前致死を引き起こした（薬剤毒性） （表10）。６−ヒドロキシメチルアシルフルベン処置動物は、対照（40％DMSO／ NS処置）、シスプラチン、タキソール、ミトマイシンＣおよびアドリアマイシン 処置動物よりも有意に長く生存した（全グループについてｐ＜0.001）（表10） 。 用量応答パターンが存在するかどうかを決定するために、異なる投与量の６− ヒドロキシメチルアシルフルベン類似体を使って実験を繰り返した。薬剤対照と してタキソールと低用量イルジンＳを再度含めた（表11）。医薬溶剤（40％DMSO ／NS）のみを投与する対照グループも含めた。10mg／kgにおいて再び腫瘍後退が 観察され、そして１mg／kgと５mg／kg処置により腫瘍増殖の抑制が観察された（ 図11）。この第二の実験でも、対照（40％DMSO／NS処置動物）に比べてタキソー ルまたはイルジンＳで処置した動物の寿命に有意な増加は見られなかった。10mg ／kgの６−ヒドロキシメチルアシルフルベンと５mg／kgの６−ヒドロキシメチル アシルフルベンで処置し た動物は、対照（40％DMSO／NS処置）、タキソールまたはイルジンＳ処置動物よ りも有意に長く生存した。対照、タキソール処置またはイルジンＳ処置動物に比 較した、10mg／kgの６−ヒドロキシメチルアシルフルベンで処置した動物の確率 （または有意性）値は、各場合に0.001未満（ｐ＜0.001）であった。対照、タキ ソール処置またはイルジンＳ処置動物に比較した、５mg／kgの６−ヒドロキシメ チルアシルフルベンで処置した動物の確率値も、各場合に0.001未満（ｐ＜0.001 ）であった。１mg／kgの６−ヒドロキシメチルアシルフルベンで処置した動物も 対照グループより有意に長く生存した（p＜0.01）。 実験を繰り返して第三の実験を行った（表12）。最大量を示すためにIP投与す るタキソールの量を増加させ、そして皮下経路がより有効かもしれないという報 告のため皮下投与を追加した。アドリアマイシンとミトマイシンＣも含めた。２ つの新たなアシルフルベン 類似体（ヨードアシルフルベンおよびｐ−ヒドロキシベンジルフルベン）をこの 実験に含めた。６−ヒドロキシメチルアシルフルベンの顕著な改善を証明するた めにジケトン類似体も含めた。６−ヒドロキシメチルアシルフルベンは、対照お よび他の全ての薬剤処置動物に比べて寿命を著しく増加させた。対照グループ、 ミトマイシンＣ処置グループ、アドリアマイシン処置グループ、および２つのタ キソール処置グループの全てに比較して、６−ヒドロキシメチルアシルフルベン の確率（有意性）の値は0.0005未満（ｐ＜0.0005）であった。これは非常に有意 な効果である。２匹の特定動物の長命に基づくと、それらは治癒している可能性 があることに注目することは重要である。。ジケトンも対照（ｐ＜0.002）およ び他の薬剤処置動物に比較して顕著に寿命を増加させたけれども、それは６−ヒ ドロキシメチルアシルフルベンほどには効果的でなかった。高用量タキソール処 置動物（６mg／kg IP）の寿命は、前の実験の４mg／kgタキソール処置動物の寿 命よりも減少しただけでなく、未処置の動物または対照動物の寿命よりも短かっ たことに注目されたい。このことは、タキソールの最大量に到達し、薬剤毒性が 動物を致死させていることを示す。別の新たな類似体ブロモアシルフルベンとｐ −ヒドロキシベンジルフルベンもこのモデルにおいて有効であった。 本発明を現時点での好ましい実施態様に関して記載してきたが、本発明の精神 から逸脱することなく様々な変更を行い得ると理解すべきである。従って、本発 明は次の請求の範囲によってのみ限定される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年１２月２１日 【補正内容】 請求の範囲 １．被検者における腫瘍増殖を阻害するのに有効な薬剤を調製するために、式 ： 〔上式中、Ｒは （ここでＲ₁はアルキル、アリール、ＮＨ₂、ＮＨ（アルキル）またはＮ（アルキ ル）₂である） から成る群より選択される〕 により表される化合物を使用する方法。 ２．前記薬剤が静脈内、経口もしくは腹腔内投与または吸引による投与に適当 である、請求項１の方法。 ３．約30〜100mgの前記化合物が医薬上許容される担体と組み合わされる、請 求項１の方法。 ４．前記腫瘍が骨髄性腫瘍、類表皮腫、Ｔ細胞性白血病、または肺癌、卵巣癌 もしくは乳癌である、請求項１の方法。 ５．ＲがCH₂OH、ｐ−ヒドロキシベンジル、ｐ−メトキシベンジル、アセトキ シメチル、ＩまたはBrである、請求項１の方法。 ６．医薬組成物であって、医薬上許容される担体と共に、式： 〔上式中、Ｒは （ここでＲ₁はアルキル、アリール、ＮＨ₂、ＮＨ（アルキル）またはＮ（アルキ ル）₂である） から成る群より選択される〕 により表される化合物の腫瘍阻害有効量を含んで成る医薬組成物。 ７．ＲがCH₂OH、ｐ−ヒドロキシベンジル、ｐ−メトキシベンジル、アセトキ シメチル、ＩまたはBrである、請求項６の医薬組成物。 ８．静脈内、経口もしくは腹腔内投与または吸引による投与に適当である、請 求項６の医薬組成物。 ９．約30〜100mgの前記化合物が医薬上許容される担体と組み合わされる、請 求項６の医薬組成物。 10．前記腫瘍が骨髄性腫瘍、類表皮腫、Ｔ細胞性白血病、または肺癌、卵巣癌 もしくは乳癌である、請求項６の医薬組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ // Ｃ０７Ｃ 49/737 49/747 Ｃ 9049−4Ｈ 49/753 Ｃ 9049−4Ｈ 69/16 69/63 69/732 Ｚ 9546−4Ｈ 69/76 Ｚ 9546−4Ｈ 271/10 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 マクモリス，トレバー シー. アメリカ合衆国，カリフォルニア 92037, ラジョラ，ノッティンガム プレイス 8911 (72)発明者 タエトル，レイモンド アメリカ合衆国，アリゾナ 85718，タス コン，11 パイサノ，イースト カミノ 3160

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．被検者における腫瘍細胞増殖を阻害する方法であって、下記構造： を有するアシルフルベン類似体の治療量と前記腫瘍を接触させることを含んで成 り、ここで前記類似体は被検者に対する過剰な毒性を伴わずに腫瘍増殖を阻害す ることができ、そしてＲは （Ｒ₁＝アルキル、アリール、ＮＨ₂、ＮＨＲまたはＮＲ₂）から成る群より選択 される、腫瘍増殖を阻害する方法。 ２．前記治療量が、静脈内投与で30〜112,000μg／kg体重である、請求項１の 方法。 ３．前記治療量が、腹腔内投与で300〜112,000μg／kg体重である、請求項１ の方法。 ４．前記類似体が静脈内、経口、腹腔内および吸入から選択された任意の手段 により投与される、請求項１の方法。 ５．腫瘍抗原に結合することができる組成物であって、下記構造： 〔ここで、Ｒは （Ｒ₁＝アルキル、アリール、ＮＨ₂、ＮＨＲまたはＮＲ₂）から成る群より選択 される〕 を有するアシルフルベン類似体に取り付けられた試薬を含んで成る組成物。 ６．前記試薬が抗体である、請求項５の複合体。 ７．被検者における腫瘍細胞増殖を阻害する方法であって、腫瘍を請求項６の 組成物と接触させることを含んで成る方法。 ８．30〜100mgの請求項１の化合物と医薬上許容される担体を含んで成る治療 用組成物。 ９．前記腫瘍細胞が骨髄性白血病、類表皮腫およびＴ細胞性白血病、並びに肺 癌、卵巣癌および乳癌から成る群より選択される、請求項１の方法。