JPH08325270A - β−ラクタマーゼに対するポリマープロドラッグおよびその使用 - Google Patents
β−ラクタマーゼに対するポリマープロドラッグおよびその使用Info
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- JPH08325270A JPH08325270A JP8135153A JP13515396A JPH08325270A JP H08325270 A JPH08325270 A JP H08325270A JP 8135153 A JP8135153 A JP 8135153A JP 13515396 A JP13515396 A JP 13515396A JP H08325270 A JPH08325270 A JP H08325270A
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- residue
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- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
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- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
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- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6891—Pre-targeting systems involving an antibody for targeting specific cells
- A61K47/6899—Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapy [ADEPT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
(57)【要約】
【課題】 β−ラクタマーゼに対するポリマープロドラ
ッグおよびその使用を提供する。 【解決手段】 本発明は、腫瘍細胞に結合する腫瘍一選
択的抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲートを投与する
ことにより、そして抗体−β−ラクタマーゼの存在下、
腫瘍部位で活性細胞毒薬物に変換される新規ポリマーセ
ファロスポリンプロドラッグを追加的に投与することに
より、抗腫瘍薬を腫瘍細胞にデリバリーする方法に関す
る。本発明の好ましい態様によれば、ポリマーセファロ
スポリンプロドラッグは、ポリエチレングリコール又は
分枝ポリエチレングリコール部分を有する。本発明のこ
の方法、抗体−酵素コンジュゲート、プロドラッグ、医
薬組成物およびこれらの組合せは腸瘍を選択的に殺す高
められた方法を提供し、従って癌および他の腫瘍の治療
において有用である。
ッグおよびその使用を提供する。 【解決手段】 本発明は、腫瘍細胞に結合する腫瘍一選
択的抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲートを投与する
ことにより、そして抗体−β−ラクタマーゼの存在下、
腫瘍部位で活性細胞毒薬物に変換される新規ポリマーセ
ファロスポリンプロドラッグを追加的に投与することに
より、抗腫瘍薬を腫瘍細胞にデリバリーする方法に関す
る。本発明の好ましい態様によれば、ポリマーセファロ
スポリンプロドラッグは、ポリエチレングリコール又は
分枝ポリエチレングリコール部分を有する。本発明のこ
の方法、抗体−酵素コンジュゲート、プロドラッグ、医
薬組成物およびこれらの組合せは腸瘍を選択的に殺す高
められた方法を提供し、従って癌および他の腫瘍の治療
において有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、一般に新規なプロ
ドラッグおよびプロドラッグが活性化細胞毒物質に変換
される腫瘍細胞部位に該プロドラッグをデリバリー（供
給）する方法に関する。より特異的には、本発明はポリ
マーセファロスポリンプロドラッグに関し、これは腫瘍
−特異的−β−ラクタマーゼコンジュゲートと共に投与
されるとき、腫瘍部位で活性化細胞毒医薬に変換され
る。
ドラッグおよびプロドラッグが活性化細胞毒物質に変換
される腫瘍細胞部位に該プロドラッグをデリバリー（供
給）する方法に関する。より特異的には、本発明はポリ
マーセファロスポリンプロドラッグに関し、これは腫瘍
−特異的−β−ラクタマーゼコンジュゲートと共に投与
されるとき、腫瘍部位で活性化細胞毒医薬に変換され
る。
【０００２】
【従来の技術】標識化したドラッグデリバリーシステム
は、腫瘍細胞に細胞毒物質を直接デリバリーする。腫瘍
細胞への細胞毒物質の選択的デリバリーは、望ましい：
何故なら、これらの物質の全身投与により体内の正常細
胞並びに排除されるべきであると考えられている腫瘍細
胞がしばしば殺される。今回典型的に使用されている抗
腫瘍薬デリバリーシステムは、イムノコンジュゲートを
形成するため腫瘍−特異的抗体にコンジュゲートした細
胞毒物質を利用する。このイムノコンジュゲートは、腫
瘍細胞に結合しそしてこれにより細胞毒物質を腫瘍部位
にデリバリーする。これらの標的システムにおいて利用
されるイムノコンジュゲートには、抗体−医薬コンジュ
ゲートが含まれる（例えば、Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，ｐｐ．６０３−６０５，Ｍａｒｃ
ｈ １５，１９８６参照）および抗体−要素コンジュゲ
ート（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎ
ａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏ
ｎｓ，Ａ．Ｏｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ
ｓ．，ｐｐ ４７５−５０６，１９８５参照）。
は、腫瘍細胞に細胞毒物質を直接デリバリーする。腫瘍
細胞への細胞毒物質の選択的デリバリーは、望ましい：
何故なら、これらの物質の全身投与により体内の正常細
胞並びに排除されるべきであると考えられている腫瘍細
胞がしばしば殺される。今回典型的に使用されている抗
腫瘍薬デリバリーシステムは、イムノコンジュゲートを
形成するため腫瘍−特異的抗体にコンジュゲートした細
胞毒物質を利用する。このイムノコンジュゲートは、腫
瘍細胞に結合しそしてこれにより細胞毒物質を腫瘍部位
にデリバリーする。これらの標的システムにおいて利用
されるイムノコンジュゲートには、抗体−医薬コンジュ
ゲートが含まれる（例えば、Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，ｐｐ．６０３−６０５，Ｍａｒｃ
ｈ １５，１９８６参照）および抗体−要素コンジュゲ
ート（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎ
ａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏ
ｎｓ，Ａ．Ｏｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ
ｓ．，ｐｐ ４７５−５０６，１９８５参照）。
【０００３】ポリクローナル抗体およびモノクローナル
抗体の双方が、これらのイムノコンジュゲートに利用さ
れた（例えば、Ｏｈｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃ
ｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２３：８
１，１９８６；Ｒｏｗｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２
１：１８３，１９８６参照）。これらのイムノコンジュ
ゲートにおいて用いられる医薬には、ダウロマイシン
（例えば、Ｇａｌｌｅｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．
Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３３：７３７，１９８４；Ａｒｎｏ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅ
ｖ．，６２：５，１９８２；メキソトレキサレート（Ｅ
ｎｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ，４７：１０７６，１９８７），マイトマイシンＣ
（Ｏｈｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａ），ａｎｄ
ビンデシン（Ｒｏｗｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，同上）
が含まれる。
抗体の双方が、これらのイムノコンジュゲートに利用さ
れた（例えば、Ｏｈｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃ
ｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２３：８
１，１９８６；Ｒｏｗｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２
１：１８３，１９８６参照）。これらのイムノコンジュ
ゲートにおいて用いられる医薬には、ダウロマイシン
（例えば、Ｇａｌｌｅｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．
Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３３：７３７，１９８４；Ａｒｎｏ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅ
ｖ．，６２：５，１９８２；メキソトレキサレート（Ｅ
ｎｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ，４７：１０７６，１９８７），マイトマイシンＣ
（Ｏｈｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａ），ａｎｄ
ビンデシン（Ｒｏｗｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，同上）
が含まれる。
【０００４】抗体−毒素コンジュゲートにおいて用いら
れる要素には、細菌毒素例えばリシンが含まれる（例え
ば、Ｍｏｏｌｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．
Ｒｅｖ．，６２：４７，１９８２参照）。治療目的に対
してのイムノコンジュゲートの使用に対して向けられた
研究の量にかかわらず、これらのデリバリー方法におい
て含まれる幾つかの制限が明らかになった（例えば、Ｅ
ｍｂｌｅｔｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔ
ｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４：３９３，６１５ｔｈ
Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｂｅｌｆａｓｔ，１９８６参照）。例
えば、細胞を有効に殺すため標的腫瘍細胞に供給される
のに必要な多量の医薬は、しばしば得がたい；何故な
ら、細胞の表面上の腫瘍−関連抗原の数および与えられ
た抗体分子に結合し得る医薬分子の数により課せられた
制限のためである。この制限は、これらのコンジュゲー
トにおけるより強力な細胞毒物質例えば植物毒素の使用
並びに非常に高い医薬の多数割合を有するポリマー結合
抗体−医薬コンジュゲートの開発をもたらした（例え
ば、Ｔｈｏｒｐｅ，ｓｕｐｒａ，ｐｐ．４７５−５０
６，ａｎｄ Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔａｌ．，ｉｎ Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｐ．２１５−２３１，
Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８５参照）。
しかし、たとえ多量の医薬担持割合又は強力な毒素を用
いたとしても、多くのイムノコンジュゲートは未だ次善
の細胞毒活性を示しそして全ての利用できる抗原部位が
飽和されている用量で完全に殺すことはできない。
れる要素には、細菌毒素例えばリシンが含まれる（例え
ば、Ｍｏｏｌｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．
Ｒｅｖ．，６２：４７，１９８２参照）。治療目的に対
してのイムノコンジュゲートの使用に対して向けられた
研究の量にかかわらず、これらのデリバリー方法におい
て含まれる幾つかの制限が明らかになった（例えば、Ｅ
ｍｂｌｅｔｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔ
ｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４：３９３，６１５ｔｈ
Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｂｅｌｆａｓｔ，１９８６参照）。例
えば、細胞を有効に殺すため標的腫瘍細胞に供給される
のに必要な多量の医薬は、しばしば得がたい；何故な
ら、細胞の表面上の腫瘍−関連抗原の数および与えられ
た抗体分子に結合し得る医薬分子の数により課せられた
制限のためである。この制限は、これらのコンジュゲー
トにおけるより強力な細胞毒物質例えば植物毒素の使用
並びに非常に高い医薬の多数割合を有するポリマー結合
抗体−医薬コンジュゲートの開発をもたらした（例え
ば、Ｔｈｏｒｐｅ，ｓｕｐｒａ，ｐｐ．４７５−５０
６，ａｎｄ Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔａｌ．，ｉｎ Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｐ．２１５−２３１，
Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８５参照）。
しかし、たとえ多量の医薬担持割合又は強力な毒素を用
いたとしても、多くのイムノコンジュゲートは未だ次善
の細胞毒活性を示しそして全ての利用できる抗原部位が
飽和されている用量で完全に殺すことはできない。
【０００５】また、以下の内容が認められた；すなわち
イムノコンジュゲートの細胞毒活性は、その取り込みに
しばしば依存し、腫瘍細胞へのコンジュゲートの抗体成
分により介在される（例えば、Ｊ．Ｍ．Ｌａｍｂｅｒｔ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０：
１２０３５，１９８５参照）。医薬が作用の細胞内部位
を有する抗体−医薬コンジュゲートを用いるとき又は抗
体−毒素コンジュゲートを用いるとき、この内在化はき
わめて重大である。しかし、多量の腫瘍−関連抗原およ
び従ってこれらの抗原に結合した抗体−医薬又は抗体−
毒素コンジュゲートは内在化されない。内在化されるこ
れらのコンジュゲートは、医薬又は毒素が分解する細胞
のリソソームにしばしば殺される（Ｖｉｔｅｔｔａ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８，１９
８７参照）。従って、抗原−医薬又は抗体毒素コンジュ
ゲートは秀れた腫瘍−結合特性を有しているけれども、
抗体はそれにもかかわらず、細胞内でその作用部位に達
する不能力のため、制限された細胞毒利用性を有するで
あろう。
イムノコンジュゲートの細胞毒活性は、その取り込みに
しばしば依存し、腫瘍細胞へのコンジュゲートの抗体成
分により介在される（例えば、Ｊ．Ｍ．Ｌａｍｂｅｒｔ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０：
１２０３５，１９８５参照）。医薬が作用の細胞内部位
を有する抗体−医薬コンジュゲートを用いるとき又は抗
体−毒素コンジュゲートを用いるとき、この内在化はき
わめて重大である。しかし、多量の腫瘍−関連抗原およ
び従ってこれらの抗原に結合した抗体−医薬又は抗体−
毒素コンジュゲートは内在化されない。内在化されるこ
れらのコンジュゲートは、医薬又は毒素が分解する細胞
のリソソームにしばしば殺される（Ｖｉｔｅｔｔａ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８，１９
８７参照）。従って、抗原−医薬又は抗体毒素コンジュ
ゲートは秀れた腫瘍−結合特性を有しているけれども、
抗体はそれにもかかわらず、細胞内でその作用部位に達
する不能力のため、制限された細胞毒利用性を有するで
あろう。
【０００６】加えて、以下の内容は十分に確立されてい
る；すなわち腫瘍細胞母集団は、抗原発現に対してしば
しば均質である（例えば、Ａｌｂｉｎｏ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５４：１７６１，１９８
１参照）。更に、以下の内容が実証された；すなわち抗
原−陽性腫瘍細胞は抗原−陰性の子孫を生ぜしめるかも
しれない（例えば、Ｙｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ，１２６：１３１２，１９８１参照）。従っ
て、腫瘍細胞のいかなる母集団において、抗原に対し特
定のイムノコンジュゲートが特異的である抗原を有しな
い一定数の細胞が存在するであろう。従って、イムノコ
ンジュゲートはこれらの細胞に結合することができずそ
してそれらの殺死を取り持つだろう。
る；すなわち腫瘍細胞母集団は、抗原発現に対してしば
しば均質である（例えば、Ａｌｂｉｎｏ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５４：１７６１，１９８
１参照）。更に、以下の内容が実証された；すなわち抗
原−陽性腫瘍細胞は抗原−陰性の子孫を生ぜしめるかも
しれない（例えば、Ｙｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ，１２６：１３１２，１９８１参照）。従っ
て、腫瘍細胞のいかなる母集団において、抗原に対し特
定のイムノコンジュゲートが特異的である抗原を有しな
い一定数の細胞が存在するであろう。従って、イムノコ
ンジュゲートはこれらの細胞に結合することができずそ
してそれらの殺死を取り持つだろう。
【０００７】これらの欠点のため、今日利用されている
抗腫瘍薬又は毒素デリバリーシステムは、特に生体内治
療に対して用いられるとき、その成功が制限されてい
る。上記のイムノコンジュゲートに加えて、抗体−酵素
コンジュゲートは抗体−介在細胞毒性を増大するためヨ
ウ化物又はアルスフェナミンをそれらの毒素形に変換す
るため、第二の未標的酵素と組合せて試験管内で研究さ
れた（例えば、Ｐａｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７２：３３
８，１９７５；Ｐｈｉｌｐｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３４：２１５９，１９７
４参照）。
抗腫瘍薬又は毒素デリバリーシステムは、特に生体内治
療に対して用いられるとき、その成功が制限されてい
る。上記のイムノコンジュゲートに加えて、抗体−酵素
コンジュゲートは抗体−介在細胞毒性を増大するためヨ
ウ化物又はアルスフェナミンをそれらの毒素形に変換す
るため、第二の未標的酵素と組合せて試験管内で研究さ
れた（例えば、Ｐａｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７２：３３
８，１９７５；Ｐｈｉｌｐｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａ
ｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３４：２１５９，１９７
４参照）。
【０００８】試験管内研究のこれらに従い、酵素、グリ
コースオキシダーゼが抗体に結合しそしてヨウ化物又は
アスフェナミンを細胞毒素ヨウ素又はアルスニカルにそ
れぞれ変換するために未標的ペルオキシダーゼ酵素と組
合せて用いられる。従って、この方法は抗体に関して腫
瘍細胞に対しグルコースオキシダーゼを処理することの
みならず、２種の他の未処理物の腫瘍部位での存在を必
要とする、全ての３種のこれらの試剤が、同時に腫瘍部
位に生体内に存在する可能性は小さい。
コースオキシダーゼが抗体に結合しそしてヨウ化物又は
アスフェナミンを細胞毒素ヨウ素又はアルスニカルにそ
れぞれ変換するために未標的ペルオキシダーゼ酵素と組
合せて用いられる。従って、この方法は抗体に関して腫
瘍細胞に対しグルコースオキシダーゼを処理することの
みならず、２種の他の未処理物の腫瘍部位での存在を必
要とする、全ての３種のこれらの試剤が、同時に腫瘍部
位に生体内に存在する可能性は小さい。
【０００９】カナダ特許第１，２１６，７９１号は、基
質からアンモニウムイオンを放出し得る酵素の抗体への
コンジュゲーションを開示する。次いで、アンモニウム
イオンは、腫瘍部位に対し標的された一定の免疫毒素作
用を強化すると言われる。ヨーロッパ特許出願第８４３
０２２１８．７号は、腫瘍の如き疾患細胞集団を治療す
る方法を開示し、ここにおいて抗体は腫瘍細胞に対し非
代謝性抗原を標的するために用いられる。抗原は腫瘍細
胞の少なくとも％内に集められ、次いでこれは溶解し、
腫瘍部位で形成される偏在するフィブロネクチン補促マ
トリックス内に抗原を放出する。細胞毒性のヨウ素は、
その部位で腫瘍細胞を作用して殺す。また腫瘍部位に対
する標的酵素の抗体−コンジュゲートの使用並びに酵素
が細胞毒物質に変換し得る非−致死物質の使用並びに酵
素が細胞毒物質に変換できる非−致死物質の添加が提案
されている（ヨーロッパ特許出願第８４３６２２１８．
７号、３４〜３５頁参照）。しかし、この出願のいずこ
にもこの態様がいかになされたか記載されていない。同
様にＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒ
ｙ（２版）、Ｒｏｈｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｌｅｅ（ｅｄ
ｓ）ｐ．６３９，１９８７において、Ｈｅｌｌｓｔｒｏ
ｍ ｅｔ ａｌは、「腫瘍に局在化する物質（例えば酵
素）により活性化されるまで非毒性である薬物は他の方
法であろう」と提案している。
質からアンモニウムイオンを放出し得る酵素の抗体への
コンジュゲーションを開示する。次いで、アンモニウム
イオンは、腫瘍部位に対し標的された一定の免疫毒素作
用を強化すると言われる。ヨーロッパ特許出願第８４３
０２２１８．７号は、腫瘍の如き疾患細胞集団を治療す
る方法を開示し、ここにおいて抗体は腫瘍細胞に対し非
代謝性抗原を標的するために用いられる。抗原は腫瘍細
胞の少なくとも％内に集められ、次いでこれは溶解し、
腫瘍部位で形成される偏在するフィブロネクチン補促マ
トリックス内に抗原を放出する。細胞毒性のヨウ素は、
その部位で腫瘍細胞を作用して殺す。また腫瘍部位に対
する標的酵素の抗体−コンジュゲートの使用並びに酵素
が細胞毒物質に変換し得る非−致死物質の使用並びに酵
素が細胞毒物質に変換できる非−致死物質の添加が提案
されている（ヨーロッパ特許出願第８４３６２２１８．
７号、３４〜３５頁参照）。しかし、この出願のいずこ
にもこの態様がいかになされたか記載されていない。同
様にＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒ
ｙ（２版）、Ｒｏｈｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｌｅｅ（ｅｄ
ｓ）ｐ．６３９，１９８７において、Ｈｅｌｌｓｔｒｏ
ｍ ｅｔ ａｌは、「腫瘍に局在化する物質（例えば酵
素）により活性化されるまで非毒性である薬物は他の方
法であろう」と提案している。
【００１０】米国特許４，９７５，２７８（これはその
番号を引用して本明細書に加えられる）は、抗体−酵素
コンジュゲートおよびプロドラッグの併用により腫瘍細
胞に細胞毒物質をデリバリーする方法を提供する。この
発明によれば、劣った又は非細胞毒プロドラッグを活性
細胞毒医薬に変換できる酵素が腫瘍−特異性抗抗体にコ
ンジュゲートされる。この抗体−酵素コンジュゲートは
腫瘍−担持哺乳動物宿主動物に投与されそして、抗体特
異性に因り、これらの腫瘍細胞表面に結合しそしてその
細胞は抗体が特異体である腫瘍抗原を有する。次いでプ
ロドラッグを宿主に投与しそして抗体−結合酵素の作用
により腫瘍部位でより活性の細胞毒性薬に変換される。
番号を引用して本明細書に加えられる）は、抗体−酵素
コンジュゲートおよびプロドラッグの併用により腫瘍細
胞に細胞毒物質をデリバリーする方法を提供する。この
発明によれば、劣った又は非細胞毒プロドラッグを活性
細胞毒医薬に変換できる酵素が腫瘍−特異性抗抗体にコ
ンジュゲートされる。この抗体−酵素コンジュゲートは
腫瘍−担持哺乳動物宿主動物に投与されそして、抗体特
異性に因り、これらの腫瘍細胞表面に結合しそしてその
細胞は抗体が特異体である腫瘍抗原を有する。次いでプ
ロドラッグを宿主に投与しそして抗体−結合酵素の作用
により腫瘍部位でより活性の細胞毒性薬に変換される。
【００１１】ナイトロジエンマスタードは、細胞毒物質
として認められてきた（例えば、Ｓｔｏｃｋ，ｉｎ Ｄ
ｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｅ．Ｊ．，Ａｒｉｅｎｓ，ｅ
ｄ．，Ｖｏｌ．ＩＩ．ｐｐ．５３２−５７１，Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７１参
照）Ｂｅｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，２３６５は、Ｎ，Ｎ−ジ−２′−クロロエチル−
パラ−フェニレンジアミンから、ウレタンおよび尿素を
含む多様のアミドを製造したが、該フェニレンジアミン
は多様の他のユニットにナイトロジエンマスタードの結
合に対し潜在力のある価値を有する種々の官能基との反
応に有用である。電子−引吸性ウレタン基の結合は、高
い毒性のナイトロジエンマスタードを失活させる。もし
もウレタンがエステル又はペプチド結合の開裂によって
分解されるなら腫瘍部位でのナイトロジエンマスタード
の活性化が生じるであろう。
として認められてきた（例えば、Ｓｔｏｃｋ，ｉｎ Ｄ
ｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｅ．Ｊ．，Ａｒｉｅｎｓ，ｅ
ｄ．，Ｖｏｌ．ＩＩ．ｐｐ．５３２−５７１，Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７１参
照）Ｂｅｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，２３６５は、Ｎ，Ｎ−ジ−２′−クロロエチル−
パラ−フェニレンジアミンから、ウレタンおよび尿素を
含む多様のアミドを製造したが、該フェニレンジアミン
は多様の他のユニットにナイトロジエンマスタードの結
合に対し潜在力のある価値を有する種々の官能基との反
応に有用である。電子−引吸性ウレタン基の結合は、高
い毒性のナイトロジエンマスタードを失活させる。もし
もウレタンがエステル又はペプチド結合の開裂によって
分解されるなら腫瘍部位でのナイトロジエンマスタード
の活性化が生じるであろう。
【００１２】Ｍｏｂａｓｈｅｒｙ，ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ａ
ｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０８：１６８５，１９８
６）は、細胞内に毒素族の放出を行うため、セファロス
ポリン−毒素族誘導体を加水分解するため、β−ラクタ
ム抗生物質に抗抵する細胞内でのβ−ラクタマーゼ耐性
の使用を教示する。Ｍｏｂａｓｈｅｒｙ ｅｔ ａ
ｌ．，（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１：７８７
９，１９８６）は、セファロスポリンのセフェム分子に
対しＣ10エステルを介して結合した抗生物質ペプチドβ
Ｃｌ−Ｌｌａ−βＣｌ−ＬＡｌａから成る抗菌性物質を
合成した。細胞中に存するβ−ラクタマーゼによるβ−
ラクタム環の加水分解開裂は、ヘテロ原子−結合Ｃ10置
換基を放出する。
ｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０８：１６８５，１９８
６）は、細胞内に毒素族の放出を行うため、セファロス
ポリン−毒素族誘導体を加水分解するため、β−ラクタ
ム抗生物質に抗抵する細胞内でのβ−ラクタマーゼ耐性
の使用を教示する。Ｍｏｂａｓｈｅｒｙ ｅｔ ａ
ｌ．，（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１：７８７
９，１９８６）は、セファロスポリンのセフェム分子に
対しＣ10エステルを介して結合した抗生物質ペプチドβ
Ｃｌ−Ｌｌａ−βＣｌ−ＬＡｌａから成る抗菌性物質を
合成した。細胞中に存するβ−ラクタマーゼによるβ−
ラクタム環の加水分解開裂は、ヘテロ原子−結合Ｃ10置
換基を放出する。
【００１３】セファロスポリンの化学の一般的論議は、
Ａｂｒａｈａｍ，Ｏｕａｒｔｅｒｌｙｒｅｖｉｅｗｓ−
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２１：２３１，１
９６７、およびＡｂｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．、におい
てＣｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｎｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ，Ｅ．Ｈ．Ｆｌｙｎｎ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９７２，ｐｐ １−２６
によって与えられている。
Ａｂｒａｈａｍ，Ｏｕａｒｔｅｒｌｙｒｅｖｉｅｗｓ−
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２１：２３１，１
９６７、およびＡｂｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．、におい
てＣｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｎｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ，Ｅ．Ｈ．Ｆｌｙｎｎ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９７２，ｐｐ １−２６
によって与えられている。
【００１４】米国特許第３，４８４，４３７号は、カル
バメートを形成するため脱アシル化セファロスポリン塩
とイソシアネートとの反応により得られるセファロスポ
ラン酸の誘導体を教示する。米国特許第３，３５５，４
５２号は、７−アミノ−セファロスポラン酸のＯ−デス
アセチル−Ｏ−カルバモイル−７−アシルアミノ−セフ
ァロスポラン酸誘導体を教示し、ここで７−Ｎ−アシル
基はカルボン酸基でありそしてＣＯ基は炭素原子に結合
している。
バメートを形成するため脱アシル化セファロスポリン塩
とイソシアネートとの反応により得られるセファロスポ
ラン酸の誘導体を教示する。米国特許第３，３５５，４
５２号は、７−アミノ−セファロスポラン酸のＯ−デス
アセチル−Ｏ−カルバモイル−７−アシルアミノ−セフ
ァロスポラン酸誘導体を教示し、ここで７−Ｎ−アシル
基はカルボン酸基でありそしてＣＯ基は炭素原子に結合
している。
【００１５】抗癌薬の抗体としてのポリマーの使用に関
し多大の研究がなされてきた（Ｍａｅｄａ，Ｈ．，ｅｔ
ａｌ．（１９９２），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃ
ｈｅｍ．３，３５１−３６２；Ｄｕｎｃａｎ，Ｒ．（１
９９２），Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ３，１
７５−２１０）。分子量担体は、全身系毒性、体内での
長期保持時間、生物学的分布における変更および治療効
率の改善における変更を導くことができる。ポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ1 ，Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｓ．，ｅ
ｔ ａｌ．，（１９８３）Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．１
２，１１７７−１１８３；Ｏｕｃｈｉ，Ｔ．，ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９２），Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ Ｄｉｓ
ｃｏｖｅｒｙ ９，９３−１０５）；Ｃａｌｉｃｅｔ
ｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９３），Ｉｌ Ｆａｒ
ｍａｃｏ ４８，９１９−９３２；Ｐａｎａｒｉｎ，
Ｅ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，（１９８９），Ｊ．Ｃｏｎｔ
ｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌ．１０，１１９−１２９），ＰＥ
Ｇ コポリマー（Ｐｏｉａｎｉ，Ｇ．Ｊ．，ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈ
ｅｍ．５，６２１−６３０）、デキストラン（Ｍｕｎｅ
ｃｈｉｋａ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９４），Ｂｉ
ｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１７，１１９３−１１９
８）、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（Ｓｅｙｍ
ｏｒｅ，Ｌ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９４），Ｂ
ｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７０，６３６−６４１）、およ
びポリ（スチレン−コ−マレイン酸）（Ｍａｅｄａ，
Ｈ，（１９９２），Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅ
ｌ．，１９，３１５−３２４）は、抗癌薬および他の生
物学的に活性な分子を標的組織に供給するために用いら
れた二，三の例のポリマーである。
し多大の研究がなされてきた（Ｍａｅｄａ，Ｈ．，ｅｔ
ａｌ．（１９９２），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃ
ｈｅｍ．３，３５１−３６２；Ｄｕｎｃａｎ，Ｒ．（１
９９２），Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ３，１
７５−２１０）。分子量担体は、全身系毒性、体内での
長期保持時間、生物学的分布における変更および治療効
率の改善における変更を導くことができる。ポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ1 ，Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｓ．，ｅ
ｔ ａｌ．，（１９８３）Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．１
２，１１７７−１１８３；Ｏｕｃｈｉ，Ｔ．，ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９２），Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ Ｄｉｓ
ｃｏｖｅｒｙ ９，９３−１０５）；Ｃａｌｉｃｅｔ
ｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９３），Ｉｌ Ｆａｒ
ｍａｃｏ ４８，９１９−９３２；Ｐａｎａｒｉｎ，
Ｅ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，（１９８９），Ｊ．Ｃｏｎｔ
ｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌ．１０，１１９−１２９），ＰＥ
Ｇ コポリマー（Ｐｏｉａｎｉ，Ｇ．Ｊ．，ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈ
ｅｍ．５，６２１−６３０）、デキストラン（Ｍｕｎｅ
ｃｈｉｋａ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９４），Ｂｉ
ｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１７，１１９３−１１９
８）、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（Ｓｅｙｍ
ｏｒｅ，Ｌ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９４），Ｂ
ｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７０，６３６−６４１）、およ
びポリ（スチレン−コ−マレイン酸）（Ｍａｅｄａ，
Ｈ，（１９９２），Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅ
ｌ．，１９，３１５−３２４）は、抗癌薬および他の生
物学的に活性な分子を標的組織に供給するために用いら
れた二，三の例のポリマーである。
【００１６】大抵の場合、ポリマー支持体から活性抗癌
薬の放出は、簡単な水性加水分解により又はタンパク質
分解もしくはエステラーゼ酵素により実現される（Ｍａ
ｅｄａ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．（１９９２），Ｂｉｏｃｏ
ｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．３，３５１−３６２；Ｄｕ
ｎｃａｎ，Ｒ．（１９９２），ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＤ
ｒｕｇｓ ３，１７５−２１０）。これらの反応に対す
る条件は、腫瘍組織に優先的に限定されないので、ある
非特異的薬物放出は避けられない。従って、新生物生お
よび正常組織間で幾つかの生理学的および生化学的差異
を利用する薬物放出のための戦略を開発する利点が存在
し得る。そのような差異は、固有であるか、又は腫瘍関
連抗原を認識するｍＡｂ−酵素コンジュゲートの形で腫
瘍細胞表面に酵素を標的化することにより確立され得
る。多くの低分子量の抗癌プロドラッグの活性化に成功
裏に適用されてきたこの標的戦略（Ｂａｇｓｈａｗｅ，
Ｋ．Ｄ．（１９９４），Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋ
ｉｎｅｔ．２７，３６８−３７６；Ｄｅｏｎａｒａｉ
ｎ，Ｍ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４），Ｂｒ．Ｊ．
Ｃａｎｃｅｒ ７０，７８６−７９４；Ｓｅｎｔｅｒ，
Ｐ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｂｉｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．４，３−９）は、ポリマー支持
体に共有結合した活性薬物の放出に適用できるできであ
る。
薬の放出は、簡単な水性加水分解により又はタンパク質
分解もしくはエステラーゼ酵素により実現される（Ｍａ
ｅｄａ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．（１９９２），Ｂｉｏｃｏ
ｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．３，３５１−３６２；Ｄｕ
ｎｃａｎ，Ｒ．（１９９２），ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＤ
ｒｕｇｓ ３，１７５−２１０）。これらの反応に対す
る条件は、腫瘍組織に優先的に限定されないので、ある
非特異的薬物放出は避けられない。従って、新生物生お
よび正常組織間で幾つかの生理学的および生化学的差異
を利用する薬物放出のための戦略を開発する利点が存在
し得る。そのような差異は、固有であるか、又は腫瘍関
連抗原を認識するｍＡｂ−酵素コンジュゲートの形で腫
瘍細胞表面に酵素を標的化することにより確立され得
る。多くの低分子量の抗癌プロドラッグの活性化に成功
裏に適用されてきたこの標的戦略（Ｂａｇｓｈａｗｅ，
Ｋ．Ｄ．（１９９４），Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋ
ｉｎｅｔ．２７，３６８−３７６；Ｄｅｏｎａｒａｉ
ｎ，Ｍ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４），Ｂｒ．Ｊ．
Ｃａｎｃｅｒ ７０，７８６−７９４；Ｓｅｎｔｅｒ，
Ｐ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｂｉｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．４，３−９）は、ポリマー支持
体に共有結合した活性薬物の放出に適用できるできであ
る。
【００１７】プロドラッグ活性化に対し利用される多く
の酵素は、哺乳動物系において通常生じない反応を行な
う。例えばプロドラッグを含有するセファロスポリン
は、β−ラクタマーゼにより加水分解されるとき医薬の
排出を受ける（Ｖｒｕｄｈｕｌａ，Ｖ．Ｍ．，ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９３），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈ
ｅｍ．４，３３４−３４０；Ｍｅｙｅｒ，Ｄ．Ｌ．，ｅ
ｔ ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５
３，３９５６−３９６３）。
の酵素は、哺乳動物系において通常生じない反応を行な
う。例えばプロドラッグを含有するセファロスポリン
は、β−ラクタマーゼにより加水分解されるとき医薬の
排出を受ける（Ｖｒｕｄｈｕｌａ，Ｖ．Ｍ．，ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９３），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈ
ｅｍ．４，３３４−３４０；Ｍｅｙｅｒ，Ｄ．Ｌ．，ｅ
ｔ ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５
３，３９５６−３９６３）。
【００１８】
【発明が解決しようとする課題】これまで、ポリマーセ
ファロスポリンプロドラッグは未知であった。本発明
は、β−ラクタマーゼ−抗体コンジュゲートを用い、腫
瘍部位で抗癌剤に変換できる、新規ポリマーセファロス
ポリン−関連プロドラッグを見出したことに基づく。抗
体は、標的化された特異的腫瘍タイプの表面上に存在す
る腫瘍抗原に対して企図されている。
ファロスポリンプロドラッグは未知であった。本発明
は、β−ラクタマーゼ−抗体コンジュゲートを用い、腫
瘍部位で抗癌剤に変換できる、新規ポリマーセファロス
ポリン−関連プロドラッグを見出したことに基づく。抗
体は、標的化された特異的腫瘍タイプの表面上に存在す
る腫瘍抗原に対して企図されている。
【００１９】
【課題を解決するための手段】本発明は、次式（Ｉ）：
【００２０】
【化３０】
【００２１】｛式中、Ｑは医薬として許容され得るポリ
マー部分であり、Ｇは−ＮＨ−であるか又は次式
マー部分であり、Ｇは−ＮＨ−であるか又は次式
【００２２】
【化３１】
【００２３】（式中、Ｌは直接結合又は−Ｓ−（Ｃ
Ｈ2 ）n −であり、ｎは２，３又は４であり；そしてｍ
は０又は１であり、但しＬが直接結合であるとき、ｍは
１である）から成り、Ｒはセファロスポリンプロドラッ
グから放出されるとき腫瘍細胞に対して細胞毒作用を発
現することのできる物質である｝を有するポリマーセフ
ァロスポリンプロドラッグ、又はその医薬として許容し
得る塩を提供する。
Ｈ2 ）n −であり、ｎは２，３又は４であり；そしてｍ
は０又は１であり、但しＬが直接結合であるとき、ｍは
１である）から成り、Ｒはセファロスポリンプロドラッ
グから放出されるとき腫瘍細胞に対して細胞毒作用を発
現することのできる物質である｝を有するポリマーセフ
ァロスポリンプロドラッグ、又はその医薬として許容し
得る塩を提供する。
【００２４】ポリマー部分、すなわち、“Ｑ”はポリエ
チレングリコール又は分枝鎖ポリエチレングリコールの
残基である。細胞毒化合物は、セファロスポリンプロド
ラッグを提供するため化学的修飾を受けやすい少なくと
も１個の官能基を有する化合物である。一般に、そのよ
うな官能基は、細胞毒物質とセファロスポリン成分間の
結合がカルバメート、アミド、エステル、およびカーボ
ネートタイプから成るそのようなアミノ、カルボキシ
ル、およびヒドロキシル基から選ばれる。
チレングリコール又は分枝鎖ポリエチレングリコールの
残基である。細胞毒化合物は、セファロスポリンプロド
ラッグを提供するため化学的修飾を受けやすい少なくと
も１個の官能基を有する化合物である。一般に、そのよ
うな官能基は、細胞毒物質とセファロスポリン成分間の
結合がカルバメート、アミド、エステル、およびカーボ
ネートタイプから成るそのようなアミノ、カルボキシ
ル、およびヒドロキシル基から選ばれる。
【００２５】一つの面において、本発明は一般式（Ｉ）
の一つのサブクラスとして、細胞毒物質がカルバメート
又はアミド基を介してセファロスポリン核に結合してい
る一般式（II）：
の一つのサブクラスとして、細胞毒物質がカルバメート
又はアミド基を介してセファロスポリン核に結合してい
る一般式（II）：
【００２６】
【化３２】
【００２７】（式中、Ｑ，Ｌおよびｍは式（Ｉ）で定義
された意味と同じであり；そしてＮＲ2 は窒素含有細胞
毒医薬である）で表わされるセファロスポリンプロドラ
ッグ、又はその医薬として許容され得る塩を提供する。
別の面において、本発明は次式IIａ
された意味と同じであり；そしてＮＲ2 は窒素含有細胞
毒医薬である）で表わされるセファロスポリンプロドラ
ッグ、又はその医薬として許容され得る塩を提供する。
別の面において、本発明は次式IIａ
【００２８】
【化３３】
【００２９】（式中、Ｑは式（Ｉ）で定義された意味で
ありそしてＲd は水素又はＣ1-3 アルキルである）を有
するセファロスポリンマイトマイシンプロドラッグの如
きアミン基を介して結合したセファロスポリン−細胞毒
物質プロドラッグを提供する。本発明の別の態様は、腫
瘍細胞の表面で抗原と反応性のある抗体を含んでなる少
なくとも１個の抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲート
の医薬として有効な量を投与することにより腫瘍細胞に
細胞毒物質を供給する方法に関する。ポリマーセファロ
スポリンプロドラッグの医薬として有効な量も投与さ
れ、ここでポリマーセファロスポリンプロドラッグは、
一方では細胞毒物質に結合しているセファロスポリンに
おいて結合されたポリマー部分を含んでなる。
ありそしてＲd は水素又はＣ1-3 アルキルである）を有
するセファロスポリンマイトマイシンプロドラッグの如
きアミン基を介して結合したセファロスポリン−細胞毒
物質プロドラッグを提供する。本発明の別の態様は、腫
瘍細胞の表面で抗原と反応性のある抗体を含んでなる少
なくとも１個の抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲート
の医薬として有効な量を投与することにより腫瘍細胞に
細胞毒物質を供給する方法に関する。ポリマーセファロ
スポリンプロドラッグの医薬として有効な量も投与さ
れ、ここでポリマーセファロスポリンプロドラッグは、
一方では細胞毒物質に結合しているセファロスポリンに
おいて結合されたポリマー部分を含んでなる。
【００３０】択一的態様において、本発明は腫瘍細胞に
細胞毒物質を供給する方法に関し、ここに関し腫瘍−関
連抗原と反応性のある抗体の抗原結合領域は、β−ラク
タマーゼの少なくとも官能的に活性な部分に結合し、そ
してポリマーセファロスポリンプロドラッグの医薬的に
有効量でもって投与される。別の態様において、本発明
は哺乳動物腫瘍の治療方法に関し、この方法は少なくと
も１個の抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲートの医薬
として有効な量および少なくとも１個のポリマーセファ
ロスポリンプロドラッグの医薬として有効な量を哺乳動
物に投与する工程を含む。
細胞毒物質を供給する方法に関し、ここに関し腫瘍−関
連抗原と反応性のある抗体の抗原結合領域は、β−ラク
タマーゼの少なくとも官能的に活性な部分に結合し、そ
してポリマーセファロスポリンプロドラッグの医薬的に
有効量でもって投与される。別の態様において、本発明
は哺乳動物腫瘍の治療方法に関し、この方法は少なくと
も１個の抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲートの医薬
として有効な量および少なくとも１個のポリマーセファ
ロスポリンプロドラッグの医薬として有効な量を哺乳動
物に投与する工程を含む。
【００３１】本発明のこれらのおよび他の態様は、本明
細書の開示を考慮すると当業者に容易に思い浮かぶであ
ろう。本発明の実施は、特に他を示さない限り、合成有
機化学、タンパク質化学、分子生物学、微生物学および
組換えＤＮＡ工学（これらは当業者の技術内である）の
通常の技術を用いるであろう。そのような技術は文献中
に十分に説明されている。例えば、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｒ．
Ｋ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐ
ｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ，２
ｄ ｅｄ．（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９８
７），Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
（Ｓ．Ｃｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅ
ｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．），
Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆＥ
ｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏ
ｌｓ．Ｉ−IV（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂ
ｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅ
ｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ
ｓ）；Ｈｏｕｓｅ，Ｍｏｄｅｒｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｂｅｎｊａｍ
ｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，Ｃａ
ｌ．，１９７２を参照のこと。
細書の開示を考慮すると当業者に容易に思い浮かぶであ
ろう。本発明の実施は、特に他を示さない限り、合成有
機化学、タンパク質化学、分子生物学、微生物学および
組換えＤＮＡ工学（これらは当業者の技術内である）の
通常の技術を用いるであろう。そのような技術は文献中
に十分に説明されている。例えば、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｒ．
Ｋ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐ
ｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ，２
ｄ ｅｄ．（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９８
７），Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
（Ｓ．Ｃｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ，ｅ
ｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．），
Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆＥ
ｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏ
ｌｓ．Ｉ−IV（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂ
ｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅ
ｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ
ｓ）；Ｈｏｕｓｅ，Ｍｏｄｅｒｎ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｂｅｎｊａｍ
ｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，Ｃａ
ｌ．，１９７２を参照のこと。
【００３２】全ての特許、特許出願および本明細書で言
及した出版物は、上記又は下記においてそれを引用して
本明細書に加入される。 Ａ．定義 本発明を定義するに際し、次の語句が用いられ、そして
下記に示す如く定義されるものと意図される。
及した出版物は、上記又は下記においてそれを引用して
本明細書に加入される。 Ａ．定義 本発明を定義するに際し、次の語句が用いられ、そして
下記に示す如く定義されるものと意図される。
【００３３】本出願で用いられる如き語句「プロドラッ
グ」は、医薬的に活性な物質の前駆体又は誘導体を意味
しそしてこの活性物質は親薬物と比較して細胞に対し細
胞毒性が少なくそして酵素的に活性化できあるいは又よ
り活性な親形に変換できる。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏ
ｎｓ，１４：３７５（６１５ｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｂ
ｅｌｆａｓｔ，１９８６）；Ｓｔｅｌｌａ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒ
ｙ，Ｒ．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，
２４７−２６７（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９８
５）を参照のこと。
グ」は、医薬的に活性な物質の前駆体又は誘導体を意味
しそしてこの活性物質は親薬物と比較して細胞に対し細
胞毒性が少なくそして酵素的に活性化できあるいは又よ
り活性な親形に変換できる。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏ
ｎｓ，１４：３７５（６１５ｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｂ
ｅｌｆａｓｔ，１９８６）；Ｓｔｅｌｌａ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒ
ｙ，Ｒ．Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，
２４７−２６７（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９８
５）を参照のこと。
【００３４】語句「親薬物」、「薬物」および「細胞毒
物質」は、本発明において互いに交換して使用できる。
本発明で用いられる如き語句「β−ラクタマーゼ」は、
β−ラクタム環のＣＯ−Ｎ結合を加水分解できるあらゆ
る酵素を言う。β−ラクタマーゼは、Ｂｕｓｈ，Ａｎｔ
ｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈ
ｅｒ．，３３：２５９，１９８９において検討されてい
る。
物質」は、本発明において互いに交換して使用できる。
本発明で用いられる如き語句「β−ラクタマーゼ」は、
β−ラクタム環のＣＯ−Ｎ結合を加水分解できるあらゆ
る酵素を言う。β−ラクタマーゼは、Ｂｕｓｈ，Ａｎｔ
ｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈ
ｅｒ．，３３：２５９，１９８９において検討されてい
る。
【００３５】本発明で用いられる語句「ナイトロジエン
マスタード」は一般式ＲＮ（ＣＨ2ＣＨ2 Ｃｌ）2 （式
中、Ｒは更に化学修飾に応じやすい官能基例えばアミノ
又はカルボキシル基で置換されたアルキル、アリール、
又はアルキル基であってよい）で表わされる化合物を意
味する。１個以上の窒素原子を有するナイトロジエンマ
スタードも含まれ、双方のクロロエチル基は同じ窒素原
子に結合する必要はない。幾つかのナイトロジエンマス
タードにおいて、塩素原子は他のハロゲン原子、特に臭
素又はメシレートによって置換され得る。例えば、Ｓｔ
ｏｃｋ，ｉｎＤｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｅ．Ｊ．，Ａｒ
ｉｅｎｓ，ｅｄ．，Ｖｏｌ．II，ｐｐ．５３２−５７
１，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，１９７１参照。
マスタード」は一般式ＲＮ（ＣＨ2ＣＨ2 Ｃｌ）2 （式
中、Ｒは更に化学修飾に応じやすい官能基例えばアミノ
又はカルボキシル基で置換されたアルキル、アリール、
又はアルキル基であってよい）で表わされる化合物を意
味する。１個以上の窒素原子を有するナイトロジエンマ
スタードも含まれ、双方のクロロエチル基は同じ窒素原
子に結合する必要はない。幾つかのナイトロジエンマス
タードにおいて、塩素原子は他のハロゲン原子、特に臭
素又はメシレートによって置換され得る。例えば、Ｓｔ
ｏｃｋ，ｉｎＤｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｅ．Ｊ．，Ａｒ
ｉｅｎｓ，ｅｄ．，Ｖｏｌ．II，ｐｐ．５３２−５７
１，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，１９７１参照。
【００３６】本発明で用いられる語句「セファロスポリ
ン」は、天然又は合成的に生じる、セファロスポリンＣ
の特徴的β−ラクタムジヒドロチアジン環を有する７−
アミノセファロスポラン酸の誘導体を意味する。これら
の誘導体の例およびセファロスポリン化学の検討は、Ａ
ｂｒａｈａｍ，Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ ｒｅｖｉｅｗｓ−
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２１：２３１，１
９６７において与えられる。語句「セフェム」は時とし
て本明細書でセファロスポリンを言及するため用いられ
る。
ン」は、天然又は合成的に生じる、セファロスポリンＣ
の特徴的β−ラクタムジヒドロチアジン環を有する７−
アミノセファロスポラン酸の誘導体を意味する。これら
の誘導体の例およびセファロスポリン化学の検討は、Ａ
ｂｒａｈａｍ，Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ ｒｅｖｉｅｗｓ−
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，２１：２３１，１
９６７において与えられる。語句「セフェム」は時とし
て本明細書でセファロスポリンを言及するため用いられ
る。
【００３７】セファロスポリンＣの構造を下記に示す：
【００３８】
【化３４】
【００３９】本明細書で用いられる語句「セファロスポ
リンマスタード」は、前記の如きセファロスポリンを言
及し、ここにおいてセファロスポリンは前記の如きナイ
トロジエンマスタードで誘導化される。本明細書で用い
られる語句「明細書」は、特にコロニー阻害分析又は 3
Ｈ−チミジン取り込み分析（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏ
ｍ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ ＩｎＶｉｔｒｏ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｍｍｕｎ
ｉｔｙ，Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｇｌａｄｅ，ｅｄｓ．，
１９７１、およびその中の実施例参照）により測定され
る如く、細胞増殖阻止又は細胞死をもたらす性質を意味
する。
リンマスタード」は、前記の如きセファロスポリンを言
及し、ここにおいてセファロスポリンは前記の如きナイ
トロジエンマスタードで誘導化される。本明細書で用い
られる語句「明細書」は、特にコロニー阻害分析又は 3
Ｈ−チミジン取り込み分析（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏ
ｍ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ ＩｎＶｉｔｒｏ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｍｍｕｎ
ｉｔｙ，Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｇｌａｄｅ，ｅｄｓ．，
１９７１、およびその中の実施例参照）により測定され
る如く、細胞増殖阻止又は細胞死をもたらす性質を意味
する。
【００４０】語句「医薬として許容し得るポリマー部
分」は、セファロスポリン又はセファロスポリンプロド
ラッグとポリマーとの反応で見出されるポリマーのポリ
マー残基を意味し、ここにおいてポリマー部分は実質的
副作用をもたらさずそして細胞毒物質の有効性を実質的
に防害しない。語句「ポリマー残基」は、セファロスポ
リン環の７−窒素に共有結合しているポリマーの部分を
意味する。 Ｂ．一般方法 本発明は、癌、例えば癌腫および黒色腫並びに他の腫瘍
の治療において、腫瘍細胞に細胞毒物質を供給する新規
方法に関し更に腫瘍細胞の高められた選択的殺死を提供
する。
分」は、セファロスポリン又はセファロスポリンプロド
ラッグとポリマーとの反応で見出されるポリマーのポリ
マー残基を意味し、ここにおいてポリマー部分は実質的
副作用をもたらさずそして細胞毒物質の有効性を実質的
に防害しない。語句「ポリマー残基」は、セファロスポ
リン環の７−窒素に共有結合しているポリマーの部分を
意味する。 Ｂ．一般方法 本発明は、癌、例えば癌腫および黒色腫並びに他の腫瘍
の治療において、腫瘍細胞に細胞毒物質を供給する新規
方法に関し更に腫瘍細胞の高められた選択的殺死を提供
する。
【００４１】本発明によれば、抗体−酵素コンジュゲー
トが腫瘍−担持哺乳動物宿主に投与される。この抗体−
酵素コンジュゲートは、親ドラッグよりも細胞に対しよ
り少ない細胞毒のプロドラッグをより活性な親ドラッグ
に変換できるβ−ラクタマーゼに結合する腫瘍−選択的
抗体から成る。宿主に導入するとき、コンジュゲートの
抗体成分（これは腫瘍細胞上に見出される抗体と反応性
である）は、コンジュゲートを腫瘍部位に導びそして腫
瘍細胞に結合する。β−ラクタマーゼに対する基質であ
るプロドラッグは、また宿主に導入されそして腫瘍部位
で酵素により活性細胞毒薬物に変換される。かくして薬
物は細胞外的に活性化されそしてその部位で腫瘍細胞、
すなわちコンジュゲートの抗体が特異的でありそして抗
体が結合している特定の腫瘍抗原を有するこれらの細胞
並びに抗原に対し陰性であるがそれにもかかわらず腫瘍
部位に存在するこれらの細胞の全てに拡散し得る。かく
して本発明方法は腫瘍抗原異質の今日の問題および通常
のイムノコンジュゲートドラッグデリバリー手法に関連
する抗原／コンジュゲート内在化の要求を克服する。
トが腫瘍−担持哺乳動物宿主に投与される。この抗体−
酵素コンジュゲートは、親ドラッグよりも細胞に対しよ
り少ない細胞毒のプロドラッグをより活性な親ドラッグ
に変換できるβ−ラクタマーゼに結合する腫瘍−選択的
抗体から成る。宿主に導入するとき、コンジュゲートの
抗体成分（これは腫瘍細胞上に見出される抗体と反応性
である）は、コンジュゲートを腫瘍部位に導びそして腫
瘍細胞に結合する。β−ラクタマーゼに対する基質であ
るプロドラッグは、また宿主に導入されそして腫瘍部位
で酵素により活性細胞毒薬物に変換される。かくして薬
物は細胞外的に活性化されそしてその部位で腫瘍細胞、
すなわちコンジュゲートの抗体が特異的でありそして抗
体が結合している特定の腫瘍抗原を有するこれらの細胞
並びに抗原に対し陰性であるがそれにもかかわらず腫瘍
部位に存在するこれらの細胞の全てに拡散し得る。かく
して本発明方法は腫瘍抗原異質の今日の問題および通常
のイムノコンジュゲートドラッグデリバリー手法に関連
する抗原／コンジュゲート内在化の要求を克服する。
【００４２】更に、本発明方法は薬物が抗体に直接結合
されることを要求せずそしてこれにより送り込まれ得る
薬物の量を制限するので、腫瘍部位での薬物性能の普通
の問題は生じない。実際、本発明方法は腫瘍部位に存在
する活性薬物分子の数を増大させる；何故ならコンジュ
ゲートの抗体−結合酵素は、くりかえしプロドラッグを
活性薬物に変換しながら、多数の基質の交代を受けう
る。更に、本発明方法は、他の組織への放出に対立して
腫瘍部位で活性薬物を特異的に放出できる。これは、腫
瘍部位での酵素の濃度が、抗体−酵素コンジュゲートに
よる腫瘍細胞のコーチングのため他の組織でその濃度よ
りもより高いためである。
されることを要求せずそしてこれにより送り込まれ得る
薬物の量を制限するので、腫瘍部位での薬物性能の普通
の問題は生じない。実際、本発明方法は腫瘍部位に存在
する活性薬物分子の数を増大させる；何故ならコンジュ
ゲートの抗体−結合酵素は、くりかえしプロドラッグを
活性薬物に変換しながら、多数の基質の交代を受けう
る。更に、本発明方法は、他の組織への放出に対立して
腫瘍部位で活性薬物を特異的に放出できる。これは、腫
瘍部位での酵素の濃度が、抗体−酵素コンジュゲートに
よる腫瘍細胞のコーチングのため他の組織でその濃度よ
りもより高いためである。
【００４３】本発明のイムノコンジュゲートの抗体に
は、腫瘍−関連抗原に特異的に結合する全ての抗体、癌
腫、黒色腫、リンパ腫および骨および軟組織肉腫並びに
他の腫瘍上に見出される抗原に特異的に見出される抗体
が含まれる。長期間細胞表面に結合したままである抗体
又は極めてゆっくり取り入れられる抗体は好ましい。こ
れらの抗体はポリクローナル又は好ましくはモノクロー
ナルであってよく、完全な抗体分子又は抗体の活性結合
領域、例えばＦａｂ又はＦ（ａｂ′）2 を含有するフラ
グメントであってよく、そして当業者に確立された技術
を用いて生産できる。例えば、Ｒ．Ａ．ＤｅＷｅｇｅｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅ
ｖ．，６２：２９−４５，１９８２（ｔｕｍｏｒ−ｓｐ
ｅｃｉｆｉｃｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ａｎｄｕｓｅｄ ｉｎ ｃｏ
ｎｊｕｇａｔｅｓ）：Ｙｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：２９
２７，１９７９：Ｂｒｏｗｎｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎ．，１２７：５３９，１９８１（ｔｕｍｏｒｓｐｅ
ｃｉｆｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ）；ａｎｄ Ｍａｃｈ ｅｔ
ａｌ．，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒ．Ｗ．Ｂａｌｄｗｉｎ ｅ
ｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，ｐｐ ５３−６４，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８５（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆ
ｒａｇｍｅｎｔｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ａｎｄ ｕｓｅ
ｄ ｔｏ ｌｏｃａｌｉｚｅｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ）
参照のこと。加えて、もしもモノクローナル抗体が用い
られる場合、抗体はマウス又はヒト起源又はキメラ抗体
由来のものであってよい（例えば、Ｏｉ，Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ，４：２１４，１９８６参照）。
は、腫瘍−関連抗原に特異的に結合する全ての抗体、癌
腫、黒色腫、リンパ腫および骨および軟組織肉腫並びに
他の腫瘍上に見出される抗原に特異的に見出される抗体
が含まれる。長期間細胞表面に結合したままである抗体
又は極めてゆっくり取り入れられる抗体は好ましい。こ
れらの抗体はポリクローナル又は好ましくはモノクロー
ナルであってよく、完全な抗体分子又は抗体の活性結合
領域、例えばＦａｂ又はＦ（ａｂ′）2 を含有するフラ
グメントであってよく、そして当業者に確立された技術
を用いて生産できる。例えば、Ｒ．Ａ．ＤｅＷｅｇｅｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅ
ｖ．，６２：２９−４５，１９８２（ｔｕｍｏｒ−ｓｐ
ｅｃｉｆｉｃｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ａｎｄｕｓｅｄ ｉｎ ｃｏ
ｎｊｕｇａｔｅｓ）：Ｙｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７６：２９
２７，１９７９：Ｂｒｏｗｎｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎ．，１２７：５３９，１９８１（ｔｕｍｏｒｓｐｅ
ｃｉｆｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ）；ａｎｄ Ｍａｃｈ ｅｔ
ａｌ．，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒ．Ｗ．Ｂａｌｄｗｉｎ ｅ
ｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，ｐｐ ５３−６４，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８５（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆ
ｒａｇｍｅｎｔｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ａｎｄ ｕｓｅ
ｄ ｔｏ ｌｏｃａｌｉｚｅｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ）
参照のこと。加えて、もしもモノクローナル抗体が用い
られる場合、抗体はマウス又はヒト起源又はキメラ抗体
由来のものであってよい（例えば、Ｏｉ，Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ，４：２１４，１９８６参照）。
【００４４】腫瘍部位にβ−ラクタマーゼを送り込むた
めに使用できる抗体の例には、制限されないが、Ｌ６，
ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体（これはヒト肺癌細胞上
で糖タンパク質に結合している（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，８３：７０５９，１９８６）；９６．５，
ｐ９７に対し特異的であるＩｇＧ２ａモノクローナル抗
体（Ｂｒｏｗｎ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
２７：５３９，１９８１）；ＩＦ５、正常および腫瘍性
のＢ細胞上でＣＤ−２０抗原に特異的であるＩｇＧ２ａ
モノクローナル抗体（ハイブリドーマ寄託番号ＡＴＣＣ
ＨＢ９６４５）（Ｃｌａｒｋ ｅｔａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：１７
６６，１９８５）が含まれる。
めに使用できる抗体の例には、制限されないが、Ｌ６，
ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体（これはヒト肺癌細胞上
で糖タンパク質に結合している（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，８３：７０５９，１９８６）；９６．５，
ｐ９７に対し特異的であるＩｇＧ２ａモノクローナル抗
体（Ｂｒｏｗｎ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
２７：５３９，１９８１）；ＩＦ５、正常および腫瘍性
のＢ細胞上でＣＤ−２０抗原に特異的であるＩｇＧ２ａ
モノクローナル抗体（ハイブリドーマ寄託番号ＡＴＣＣ
ＨＢ９６４５）（Ｃｌａｒｋ ｅｔａｌ．，Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：１７
６６，１９８５）が含まれる。
【００４５】択一的方法は、プロドラッグがまた取込む
ことができることを条件に、取り込む抗体、又は十分な
量の抗体が細胞の表面上に残る抗体を利用することであ
る。そのような抗体の例は、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ ５６：２１８３（１９９０）に見出される。本
発明のイムノコンジュゲートの酵素成分には、β−ラク
タムのＣＯ−Ｎ結合を加水分解できる酵素が含まれる。
これらの酵素の幾つかは、商業的に入手可能であり、例
えばＥ．コリ−又はＢ．セレウスβ−ラクタマーゼであ
る。これらのおよび他のβ−ラクタマーゼは、周知の組
換えＤＮＡ工学を用いてクローン化できそして発現でき
る。
ことができることを条件に、取り込む抗体、又は十分な
量の抗体が細胞の表面上に残る抗体を利用することであ
る。そのような抗体の例は、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ ５６：２１８３（１９９０）に見出される。本
発明のイムノコンジュゲートの酵素成分には、β−ラク
タムのＣＯ−Ｎ結合を加水分解できる酵素が含まれる。
これらの酵素の幾つかは、商業的に入手可能であり、例
えばＥ．コリ−又はＢ．セレウスβ−ラクタマーゼであ
る。これらのおよび他のβ−ラクタマーゼは、周知の組
換えＤＮＡ工学を用いてクローン化できそして発現でき
る。
【００４６】本発明のβ−ラクタマーゼは、ヘテロニ官
能性架橋剤ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２
−ピリジルジチオ）プロピオネート）又はＳＭＣＣ（ス
クシンイミジル４−（Ｎ−マイミドメチル）シクロヘキ
サン−１−カルボキシレートの使用の如き周知の技術に
より抗体に共有結合できる（例えば、Ｔｈｏｒｐｅｅｔ
ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９，
１９８２；Ｌａｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒ
ａ，ａｔ ｐ．１２０３８；Ｒｏｗｌａｎｄｅｔ ａ
ｌ．，ｓｕｐｒａ，ａｔ ｐｐ １８３−１８４；Ｇａ
ｌｌｅｇｏ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａ，ａｔ ｐｐ．
７３７−７１３８参照）。
能性架橋剤ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２
−ピリジルジチオ）プロピオネート）又はＳＭＣＣ（ス
クシンイミジル４−（Ｎ−マイミドメチル）シクロヘキ
サン−１−カルボキシレートの使用の如き周知の技術に
より抗体に共有結合できる（例えば、Ｔｈｏｒｐｅｅｔ
ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９，
１９８２；Ｌａｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒ
ａ，ａｔ ｐ．１２０３８；Ｒｏｗｌａｎｄｅｔ ａ
ｌ．，ｓｕｐｒａ，ａｔ ｐｐ １８３−１８４；Ｇａ
ｌｌｅｇｏ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａ，ａｔ ｐｐ．
７３７−７１３８参照）。
【００４７】択一的に、β−ラクタマーゼの少なくとも
官能的に活性部分に結合した抗体の少なくとも抗原結合
領域を含んでなる融合タンパク質は、周知の組換えＤＮ
Ａ工学を用いて構築できる（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅ
ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１２：６０４（１
９８４）参照）。これらの融合タンパク質は、本発明で
記載した抗体−酵素コンジュゲートと本質的に同じ方法
で作用する。
官能的に活性部分に結合した抗体の少なくとも抗原結合
領域を含んでなる融合タンパク質は、周知の組換えＤＮ
Ａ工学を用いて構築できる（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅ
ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３１２：６０４（１
９８４）参照）。これらの融合タンパク質は、本発明で
記載した抗体−酵素コンジュゲートと本質的に同じ方法
で作用する。
【００４８】本発明のプロドラッグは、ポリマーセファ
ロスポリン又はポリマーセファロスポリン誘導体に結合
した抗腫瘍剤を含有する。抗腫瘍剤は活性化されるか又
はさもなければβ−ラクタマーゼによるプロドラッグの
開裂によりより活性形に変換される。好ましい態様にお
いて、抗腫瘍剤は前記の如きナイトロジエンマスタード
である。代表的にナイトロジエンマスタードは次式で示
される：
ロスポリン又はポリマーセファロスポリン誘導体に結合
した抗腫瘍剤を含有する。抗腫瘍剤は活性化されるか又
はさもなければβ−ラクタマーゼによるプロドラッグの
開裂によりより活性形に変換される。好ましい態様にお
いて、抗腫瘍剤は前記の如きナイトロジエンマスタード
である。代表的にナイトロジエンマスタードは次式で示
される：
【００４９】
【化３５】
【００５０】他の好ましい抗腫瘍剤には、次の一般式：
【００５１】
【化３６】
【００５２】を有するドキソルビシンおよび次の一般
式：
式：
【００５３】
【化３７】
【００５４】を有するマイトマイシンＣが含まれる。本
発明のプロドラッグは、これらの化合物に制限されず、
そしてセファロスポリンコンジュゲートにおいて使用す
るためプロドラッグ形に誘導化できる他の抗腫瘍剤を含
むことができる。そのような抗腫瘍剤には、エトポシ
ド、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、
アミノプテリン、ダクチノマイシン、シス−プラチナム
およびシス−プラチナム類似体、ブレオマイシン、エス
ペラミシン（米国特許４，６７５，１８７参照）および
５−フルオロウラシルが含まれる。
発明のプロドラッグは、これらの化合物に制限されず、
そしてセファロスポリンコンジュゲートにおいて使用す
るためプロドラッグ形に誘導化できる他の抗腫瘍剤を含
むことができる。そのような抗腫瘍剤には、エトポシ
ド、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、
アミノプテリン、ダクチノマイシン、シス−プラチナム
およびシス−プラチナム類似体、ブレオマイシン、エス
ペラミシン（米国特許４，６７５，１８７参照）および
５−フルオロウラシルが含まれる。
【００５５】本発明の一つの好ましい態様において、ア
ントラサイクリン−セファロスポリンプロドラッグが、
アントラマイシンと、カルボキシ保護３−〔（カルボニ
ルオキシ）メチル〕セフェム例えば３−〔〔（ｐ−ニト
ロフェニル）カルボニルオキシ〕メチル〕セフェムおよ
び３−（１，２，２，２−テトラクロロエトキシ）カル
ボニルオキシ〕メチル〕セフェムとの反応により合成さ
れる。生成プロドラッグは、カルバメート結合を介して
前者のアミノ基によりセファロスポリンに結合したアン
トラサイクリンを含有する。
ントラサイクリン−セファロスポリンプロドラッグが、
アントラマイシンと、カルボキシ保護３−〔（カルボニ
ルオキシ）メチル〕セフェム例えば３−〔〔（ｐ−ニト
ロフェニル）カルボニルオキシ〕メチル〕セフェムおよ
び３−（１，２，２，２−テトラクロロエトキシ）カル
ボニルオキシ〕メチル〕セフェムとの反応により合成さ
れる。生成プロドラッグは、カルバメート結合を介して
前者のアミノ基によりセファロスポリンに結合したアン
トラサイクリンを含有する。
【００５６】本発明の別の好ましい態様において、セフ
ァロスポリンマスタードは、米国特許３，３５５，４５
２および３，４８４，４３７およびベルギー特許７４
１，３８１（これらはその番号を引用して本明細書に加
入される）において記載される如く、３−ヒドロキシメ
チルセファロスポリン塩をイソシアネートと反応させる
ことによって合成される。そのような反応はまた実施例
において詳細に記載される。より一般的には、本発明は
次の一般式：
ァロスポリンマスタードは、米国特許３，３５５，４５
２および３，４８４，４３７およびベルギー特許７４
１，３８１（これらはその番号を引用して本明細書に加
入される）において記載される如く、３−ヒドロキシメ
チルセファロスポリン塩をイソシアネートと反応させる
ことによって合成される。そのような反応はまた実施例
において詳細に記載される。より一般的には、本発明は
次の一般式：
【００５７】
【化３８】
【００５８】｛式中、Ｑは医薬として許容し得るポリマ
ー部分であり；Ｌは直接結合又は−Ｓ−（ＣＨ2 ）n −
（式中、ｎは２，３又は４である）であり；Ｒは該セフ
ァロスポリン−プロドラッグから放出されるとき腫瘍細
胞に対し細胞毒作用を発現し得る物質であり；そしてｍ
は０又は１であり、但しＬが直接結合であるときｍは１
である｝で表わされるセファロスポリンプロドラッグ又
はその医薬として許容し得る塩を提供する。医薬として
許容し得るポリマー部分は、セファロスポリンに結合さ
れ得ることが知られている、当業者に公知のいかなるポ
リマー部分であってもよい。その例としてポリエチレン
グリコール、分枝鎖ポリエチレングリコール、ポリエチ
レングリコールコポリマー、デキストラン、ヒドロキシ
プロピルメタアクリルアミド、ポリ（スチレン−コ−マ
レイン酸）、ポリガラクトロン酸、カルボキシメチル化
β−Ｄ−グルカン、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メ
タアクリルアミドコポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシエ
チル）メタアクリレートビニルピロリドンコポリマー、
ポリ（ヒドロキシエチル−Ｌ−グルタミン），ポリ（α
−マレイン酸）、ポリアミノ酸、およびポリ（エチレン
イミン）とパルミチン酸のブロックコポリマーが挙げら
れる。そのような部分は、例えばＳ．Ｚａｌｉｐｓｋ
ｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．，１９
（１２）：１１７７−１１８３，１９８３；Ｄ．Ｃａｌ
ｉｃｅｔｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ，４
８（７）：９１９−９３２，１９９３；Ｒ．Ｄｕｎｃａ
ｎ，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ，３：１７５
−２１０，１９９２；ａｎｄ Ｅ．Ｆ．Ｐａｎａｒｉｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒ
ｅｌｅａｓｅ，１０：１１９−１２９，１９８９に開示
されている。
ー部分であり；Ｌは直接結合又は−Ｓ−（ＣＨ2 ）n −
（式中、ｎは２，３又は４である）であり；Ｒは該セフ
ァロスポリン−プロドラッグから放出されるとき腫瘍細
胞に対し細胞毒作用を発現し得る物質であり；そしてｍ
は０又は１であり、但しＬが直接結合であるときｍは１
である｝で表わされるセファロスポリンプロドラッグ又
はその医薬として許容し得る塩を提供する。医薬として
許容し得るポリマー部分は、セファロスポリンに結合さ
れ得ることが知られている、当業者に公知のいかなるポ
リマー部分であってもよい。その例としてポリエチレン
グリコール、分枝鎖ポリエチレングリコール、ポリエチ
レングリコールコポリマー、デキストラン、ヒドロキシ
プロピルメタアクリルアミド、ポリ（スチレン−コ−マ
レイン酸）、ポリガラクトロン酸、カルボキシメチル化
β−Ｄ−グルカン、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メ
タアクリルアミドコポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシエ
チル）メタアクリレートビニルピロリドンコポリマー、
ポリ（ヒドロキシエチル−Ｌ−グルタミン），ポリ（α
−マレイン酸）、ポリアミノ酸、およびポリ（エチレン
イミン）とパルミチン酸のブロックコポリマーが挙げら
れる。そのような部分は、例えばＳ．Ｚａｌｉｐｓｋ
ｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．，１９
（１２）：１１７７−１１８３，１９８３；Ｄ．Ｃａｌ
ｉｃｅｔｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ，４
８（７）：９１９−９３２，１９９３；Ｒ．Ｄｕｎｃａ
ｎ，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ，３：１７５
−２１０，１９９２；ａｎｄ Ｅ．Ｆ．Ｐａｎａｒｉｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒ
ｅｌｅａｓｅ，１０：１１９−１２９，１９８９に開示
されている。
【００５９】置換基Ｑは、好ましくはポリエチレングリ
コール又は分枝鎖ポリエチレングリコールの残基であ
る。ポリエチレングリコールの例は、構造式
コール又は分枝鎖ポリエチレングリコールの残基であ
る。ポリエチレングリコールの例は、構造式
【００６０】
【化３９】
【００６１】（式中、Ｒ′はＨ又はＣ1 −Ｃ4 アルキル
でありそしてｎは４〜２００の整数である）を有する。
Ｒ′がＨ又はメチルであることが好ましくそしてｎは１
０〜４００であることが好ましく、最も好ましくは５０
〜２００である。そのようなポリエチレングリコールは
商業的に入手可能でありそしてシェルフォーターポリマ
ー社（ハントビレ、アラバマ州）から購入できる。
でありそしてｎは４〜２００の整数である）を有する。
Ｒ′がＨ又はメチルであることが好ましくそしてｎは１
０〜４００であることが好ましく、最も好ましくは５０
〜２００である。そのようなポリエチレングリコールは
商業的に入手可能でありそしてシェルフォーターポリマ
ー社（ハントビレ、アラバマ州）から購入できる。
【００６２】分枝鎖ポリエチレングリコールの例は、構
造式
造式
【００６３】
【化４０】
【００６４】（式中、Ｒ″はポリアルコールの残基であ
る２〜１２個の炭素原子を含有する炭化水素骨格であ
り、ｎは４〜５００の整数であり、そしてｘは２〜１２
の整数である）を有する。ｎが１０〜４００の整数であ
ることが好ましく、より好ましくは５０〜２００であ
る。ｘが４〜１０の整数であることが好ましい。本発明
のポリマーセファロスポリンプロドラッグを製造するた
めに用いられる分枝鎖ポリエチレングリコールはマルチ
ポリエチレングリコール部分がそこに結合した、炭素−
含有骨格又はコア、例えばジビニルベンゼンとして記載
できる。
る２〜１２個の炭素原子を含有する炭化水素骨格であ
り、ｎは４〜５００の整数であり、そしてｘは２〜１２
の整数である）を有する。ｎが１０〜４００の整数であ
ることが好ましく、より好ましくは５０〜２００であ
る。ｘが４〜１０の整数であることが好ましい。本発明
のポリマーセファロスポリンプロドラッグを製造するた
めに用いられる分枝鎖ポリエチレングリコールはマルチ
ポリエチレングリコール部分がそこに結合した、炭素−
含有骨格又はコア、例えばジビニルベンゼンとして記載
できる。
【００６５】そのような分枝ポリエチレングリコール
は、商業的に入手可能でありそしてシェアウォーターポ
リマー社（ハントビレ、アラバマ州）から購入できる。
前記ポリエチレングリコール又は分枝ポリエチレングリ
コールは、アミン（すなわち、β−ラクタムの７−窒
素）との反応を促進せしめる方法で所望により好ましく
は修飾される。ポリエチレングリコール又は分枝ポリエ
チレングリコールは、ヒドロキシ基又はそのように修飾
されたヒドロキシ基を介してセファロスポリンに結合し
ている。アミンとの反応を容易にするためのポリエチレ
ングリコール又は分枝ポリエチレングリコールの修飾
は、当業者に周知である。例えば、ポリエチレングリコ
ール又は分枝ポリエチレングリコールは、酸塩化物、ポ
リエチレングリコール又は分枝ポリエチレングリコール
の混合アルデヒド又は反応性エステル（例えば、Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンアミドエステル）を調製することによ
り修飾できる（例えば、Ｚａｌｉｐｓｋｙ Ｓ．ｅｔ
ａｌ．，（１９８３）Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．１２，
１１７７−１１８３参照）。そのような修飾は時として
「活性」と呼ばれる。例えば、プロピオン酸エステル
は、実施例部分で記載された如く製造できる。第一のＰ
ＥＧのプロピオン誘導体は次式
は、商業的に入手可能でありそしてシェアウォーターポ
リマー社（ハントビレ、アラバマ州）から購入できる。
前記ポリエチレングリコール又は分枝ポリエチレングリ
コールは、アミン（すなわち、β−ラクタムの７−窒
素）との反応を促進せしめる方法で所望により好ましく
は修飾される。ポリエチレングリコール又は分枝ポリエ
チレングリコールは、ヒドロキシ基又はそのように修飾
されたヒドロキシ基を介してセファロスポリンに結合し
ている。アミンとの反応を容易にするためのポリエチレ
ングリコール又は分枝ポリエチレングリコールの修飾
は、当業者に周知である。例えば、ポリエチレングリコ
ール又は分枝ポリエチレングリコールは、酸塩化物、ポ
リエチレングリコール又は分枝ポリエチレングリコール
の混合アルデヒド又は反応性エステル（例えば、Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンアミドエステル）を調製することによ
り修飾できる（例えば、Ｚａｌｉｐｓｋｙ Ｓ．ｅｔ
ａｌ．，（１９８３）Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．１２，
１１７７−１１８３参照）。そのような修飾は時として
「活性」と呼ばれる。例えば、プロピオン酸エステル
は、実施例部分で記載された如く製造できる。第一のＰ
ＥＧのプロピオン誘導体は次式
【００６６】
【化４１】
【００６７】（式中、ＰＥＧは反応せしめられるヒドロ
キシ部分を有しない残りのポリエチレングリコール又は
分枝ポリエチレングリコールである）を有して製造され
る。前記修飾ＰＥＧポリマーは、次いでセファロスポリ
ン部分のアミン（７−窒素）にエステル結合で結合され
得るＰＥＧスクシンイミジルプロピオネート化合物を形
成するため、例えばジシクロヘキシルカルボジイミドお
よびＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させることに
より更に修飾できる。本発明で有用なＰＥＧスクシンイ
ミジルプロピオネート化合物の例には、次の構造式：
キシ部分を有しない残りのポリエチレングリコール又は
分枝ポリエチレングリコールである）を有して製造され
る。前記修飾ＰＥＧポリマーは、次いでセファロスポリ
ン部分のアミン（７−窒素）にエステル結合で結合され
得るＰＥＧスクシンイミジルプロピオネート化合物を形
成するため、例えばジシクロヘキシルカルボジイミドお
よびＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させることに
より更に修飾できる。本発明で有用なＰＥＧスクシンイ
ミジルプロピオネート化合物の例には、次の構造式：
【００６８】
【化４２】
【００６９】
【化４３】
【００７０】が含まれる。修飾又は活性化ＰＥＧの別の
例は、カルボニルジイミダゾール−活性化ＰＥＧ（ＣＤ
Ｉ−ＰＥＧ）である。このようなＣＤＩ−ＰＥＧの例は
次式
例は、カルボニルジイミダゾール−活性化ＰＥＧ（ＣＤ
Ｉ−ＰＥＧ）である。このようなＣＤＩ−ＰＥＧの例は
次式
【００７１】
【化４４】
【００７２】を有する。ＣＤＩ−ＰＥＧS は、下記に示
される如くウレタン結合を介してセファロスポリンのア
ミノ基（７−窒素）に結合している： ＣＤＩ−ＰＥＧ＋ＮＨ2 −セファロスポリン／薬物→ ＰＥＧ−Ｏ2 −Ｃ−ＮＨ−セファロスポリン／薬物 （Ｂｅａｕｃｈａｍｐ，Ｃ．Ｏ．ｅｔ ａｌ．（１９８
３）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３１：２５；Ａｌｌ
ｅｎ，Ｔ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１０６６：２９参
照）。修飾ＰＥＧの別の例は、次式のようなＰＥＧトレ
シレートである：
される如くウレタン結合を介してセファロスポリンのア
ミノ基（７−窒素）に結合している： ＣＤＩ−ＰＥＧ＋ＮＨ2 −セファロスポリン／薬物→ ＰＥＧ−Ｏ2 −Ｃ−ＮＨ−セファロスポリン／薬物 （Ｂｅａｕｃｈａｍｐ，Ｃ．Ｏ．ｅｔ ａｌ．（１９８
３）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３１：２５；Ａｌｌ
ｅｎ，Ｔ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１０６６：２９参
照）。修飾ＰＥＧの別の例は、次式のようなＰＥＧトレ
シレートである：
【００７３】
【化４５】
【００７４】このような求電子的に活性なＰＥＧは下記
に示されるようにセファロスポリン／薬物コンジュゲー
トに結合できる：
に示されるようにセファロスポリン／薬物コンジュゲー
トに結合できる：
【００７５】
【化４６】
【００７６】（Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（１
９８４）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ，１０４：５−６；Ｋｌｉｂａｎｏｖ，Ａ．Ｌ．，ｅ
ｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ａｃｔａ，１０６２：１４７参照）。別の求電子的
に活性なＰＥＧはエポキシドであり、その例は次の構造
式を有する：
９８４）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ，１０４：５−６；Ｋｌｉｂａｎｏｖ，Ａ．Ｌ．，ｅ
ｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ａｃｔａ，１０６２：１４７参照）。別の求電子的
に活性なＰＥＧはエポキシドであり、その例は次の構造
式を有する：
【００７７】
【化４７】
【００７８】このようなエポキシドは、以下に示すよう
にセファロスポリン／薬物コンジュゲートに結合でき
る：
にセファロスポリン／薬物コンジュゲートに結合でき
る：
【００７９】
【化４８】
【００８０】（Ｐｉｔｈａ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（１９
７９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９４：１１；Ｂｅ
ｒｇｓｔｒｏｅｍ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（１９９２），
Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｍａｔ．Ｒｅｓ．２６：７７９参
照）。本発明で有用な修飾ＰＥＧの他の例は、次の構造
式
７９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９４：１１；Ｂｅ
ｒｇｓｔｒｏｅｍ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（１９９２），
Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｍａｔ．Ｒｅｓ．２６：７７９参
照）。本発明で有用な修飾ＰＥＧの他の例は、次の構造
式
【００８１】
【化４９】
【００８２】（式中、Ｚはアミノ酸の側鎖である）
【００８３】
【化５０】
【００８４】を有する。細胞毒化合物は、セファロスポ
リンプロドラッグを与えるため化学修飾を受けやすい少
なくとも１つの官能基を有する化合物である。一般に、
そのような官能基は細胞毒物質とセファロスポリン成分
間の結合がカルバメート、アミド、エステルおよびカル
ボネートタイプから成るようにアミノ、カルボキシルお
よびヒドロキシル基から選ばれる。
リンプロドラッグを与えるため化学修飾を受けやすい少
なくとも１つの官能基を有する化合物である。一般に、
そのような官能基は細胞毒物質とセファロスポリン成分
間の結合がカルバメート、アミド、エステルおよびカル
ボネートタイプから成るようにアミノ、カルボキシルお
よびヒドロキシル基から選ばれる。
【００８５】一つの面において、本発明は式（Ｉ）の化
合物のサブクラスとして、一般式（II）（式中、細胞毒
物質はカルバメート又はアミド基を介してセファロスポ
リン核に結合している）。
合物のサブクラスとして、一般式（II）（式中、細胞毒
物質はカルバメート又はアミド基を介してセファロスポ
リン核に結合している）。
【００８６】
【化５１】
【００８７】（式中、Ｑ，Ｌおよびｍは式Ｉで定義され
た意味であり、そしてＮＲa は窒素含有細胞毒薬物であ
る）のポリマーセファロスポリンプロドラッグ、又はそ
の医薬として許容し得る塩を提供する。ポリマー部分の
結合前の式（II）（ここでＬは直接結合である）の化合
物は、図式Ｉで示される反応式によって製造できる。従
って、好ましくはナトリウム又はカリウム塩の如きアル
カリ金属塩の３−ヒドロキシメチルセファロスポリン
（III ）を、非プロトン性溶剤中第三アミン塩基の存在
下、細胞毒物質のイソシアネート誘導体と反応させ式
（Ｖ）の化合物を得る。
た意味であり、そしてＮＲa は窒素含有細胞毒薬物であ
る）のポリマーセファロスポリンプロドラッグ、又はそ
の医薬として許容し得る塩を提供する。ポリマー部分の
結合前の式（II）（ここでＬは直接結合である）の化合
物は、図式Ｉで示される反応式によって製造できる。従
って、好ましくはナトリウム又はカリウム塩の如きアル
カリ金属塩の３−ヒドロキシメチルセファロスポリン
（III ）を、非プロトン性溶剤中第三アミン塩基の存在
下、細胞毒物質のイソシアネート誘導体と反応させ式
（Ｖ）の化合物を得る。
【００８８】択一的に、式（IV）のカルボキシ−保護セ
ファロスポリンカルボネートを、窒素含有細胞毒物質で
処理し、次いでカルボキシル基を脱保護し目的のセファ
ロスポリンプロドラッグ（Ｖ）を得る。一方、セファロ
スポリンカルボネート（IV）は、クロロホルメート、例
えば４−ニトロフェニルクロロホルメートおよび１，
２，２，２−テトラクロロエチルクロロホルメートとの
反応により、カルボキシル−保護３−ヒドロキシメチル
セファロスポリンから製造できる。図式Ｉにおいて、そ
してＮＲa は式（Ｉ）および（II）で定義された意味と
同じ意味を有し、Ｒ′はエステル活性基、好ましくは４
−ニトロフェニル、又は１，２，２，２−テトラクロロ
エチルであり、そしてＲ2 はカルボキシル保護基、例え
ばベンジル、ｔ−ブチル、ジフェニルメチル、アリル等
である。カルボキシ保護基は、通常の技術例えば触媒加
水分解および還元パラジウム触媒反応を用いて除去でき
る。
ファロスポリンカルボネートを、窒素含有細胞毒物質で
処理し、次いでカルボキシル基を脱保護し目的のセファ
ロスポリンプロドラッグ（Ｖ）を得る。一方、セファロ
スポリンカルボネート（IV）は、クロロホルメート、例
えば４−ニトロフェニルクロロホルメートおよび１，
２，２，２−テトラクロロエチルクロロホルメートとの
反応により、カルボキシル−保護３−ヒドロキシメチル
セファロスポリンから製造できる。図式Ｉにおいて、そ
してＮＲa は式（Ｉ）および（II）で定義された意味と
同じ意味を有し、Ｒ′はエステル活性基、好ましくは４
−ニトロフェニル、又は１，２，２，２−テトラクロロ
エチルであり、そしてＲ2 はカルボキシル保護基、例え
ばベンジル、ｔ−ブチル、ジフェニルメチル、アリル等
である。カルボキシ保護基は、通常の技術例えば触媒加
水分解および還元パラジウム触媒反応を用いて除去でき
る。
【００８９】
【化５２】
【００９０】上式中、Ｑ′は保護基例えば
【００９１】
【化５３】
【００９２】（式中、Ｐｈはフェニルである）である。
ポリマー部分の結合前の式（II）（式中、Ｌは−Ｓ−
（ＣＨ2 ）n −でありそしてｍは１である）の化合物
は、図式Ｉのルート（ｂ）に類似の方法により製造でき
る。セファロスポリン反応物（VI）の製造および式（VI
I ）のセファロスポリンプロドラッグを得るためのその
後の実施は、図式IIに明らかにされる。図式IIにおい
て、ＮＲ，ｎ，Ｒ1 ，Ｑ′およびＲ2 の全ては先に定義
された意味を有し、ｘはＯＨ又はハロゲン原子例えばク
ロロ、ブロモ又はヨードである。式（VI）の出発セファ
ロスポリンは、式（VIII）のカルボキシ保護３−ハロメ
チルセファロスポリンをメルカプトアルカノールと反応
させることによって得られそして得られた３−ヒドロキ
シアルキルチオメチルセファロスポリンを、第三アミン
塩基の存在下クロロギ酸エステルＣｌＣＯ2 Ｒ1 、例え
ば４−ニトロフェニルクロロギ酸エステルで処理し式
（VI）の化合物を得る。
ポリマー部分の結合前の式（II）（式中、Ｌは−Ｓ−
（ＣＨ2 ）n −でありそしてｍは１である）の化合物
は、図式Ｉのルート（ｂ）に類似の方法により製造でき
る。セファロスポリン反応物（VI）の製造および式（VI
I ）のセファロスポリンプロドラッグを得るためのその
後の実施は、図式IIに明らかにされる。図式IIにおい
て、ＮＲ，ｎ，Ｒ1 ，Ｑ′およびＲ2 の全ては先に定義
された意味を有し、ｘはＯＨ又はハロゲン原子例えばク
ロロ、ブロモ又はヨードである。式（VI）の出発セファ
ロスポリンは、式（VIII）のカルボキシ保護３−ハロメ
チルセファロスポリンをメルカプトアルカノールと反応
させることによって得られそして得られた３−ヒドロキ
シアルキルチオメチルセファロスポリンを、第三アミン
塩基の存在下クロロギ酸エステルＣｌＣＯ2 Ｒ1 、例え
ば４−ニトロフェニルクロロギ酸エステルで処理し式
（VI）の化合物を得る。
【００９３】
【化５４】
【００９４】ポリマー部分の結合の前の式II（式中、Ｌ
は−Ｓ−（ＣＨ2 ）n −でありそしてｍは０である）の
化合物は、図式III で明らかにされる方法によって製造
できる。
は−Ｓ−（ＣＨ2 ）n −でありそしてｍは０である）の
化合物は、図式III で明らかにされる方法によって製造
できる。
【００９５】
【化５５】
【００９６】図式III において、ＮＲa ，ｎ，ｘ，
Ｒ1 ，Ｑ′およびＲ2 はすでに定義された同じ意味を有
する。従って、窒素含有細胞毒物質を３−チオアルキル
カルボキシレート置換セファロスポリン誘導体（IX）と
反応させ、式（XI）の生成カルバメートプロドラッグを
形成する。一方、式（IX）のセファロスポリン誘導体
は、チオアルキルカルボキシレート、ＨＳ（ＣＨ2 ）n
ＣＯ2 Ｒ1 を３−ハロメチルセファロスポリンと反応さ
せることにより、又はカルボキシ保護３−ハロメチルセ
ファロスポリンをチオカルアルカン酸と反応させ引き続
き酸部分を活性化させることによって得ることができ
る。例えば、化合物（IX）のＲ1 はスクシニミドである
か又は基−ＣＯ2 Ｒ1 は混合無水物を表わす。
Ｒ1 ，Ｑ′およびＲ2 はすでに定義された同じ意味を有
する。従って、窒素含有細胞毒物質を３−チオアルキル
カルボキシレート置換セファロスポリン誘導体（IX）と
反応させ、式（XI）の生成カルバメートプロドラッグを
形成する。一方、式（IX）のセファロスポリン誘導体
は、チオアルキルカルボキシレート、ＨＳ（ＣＨ2 ）n
ＣＯ2 Ｒ1 を３−ハロメチルセファロスポリンと反応さ
せることにより、又はカルボキシ保護３−ハロメチルセ
ファロスポリンをチオカルアルカン酸と反応させ引き続
き酸部分を活性化させることによって得ることができ
る。例えば、化合物（IX）のＲ1 はスクシニミドである
か又は基−ＣＯ2 Ｒ1 は混合無水物を表わす。
【００９７】択一的に、細胞毒物質はＮＲa をチオアル
キルカルボキシレート、ＨＳ（ＣＨ 2 ）n ＣＯ2 Ｒ1 と
反応させることにより、式（Ｘ）のＮ−チオアルキルカ
ルボニル化合物を形成するように先ず誘導化される。次
いで、化合物（Ｘ）をカルボキシ−保護３〜ハロメチル
セファロスポリン（VIII）と反応させ目的生成物を得
る。式（XI）の化合物の製造に対し、Ｒ1 は例えばスク
シンイミドであるか、又は−ＣＯ2 Ｒ1 は混合無水物を
表わす。
キルカルボキシレート、ＨＳ（ＣＨ 2 ）n ＣＯ2 Ｒ1 と
反応させることにより、式（Ｘ）のＮ−チオアルキルカ
ルボニル化合物を形成するように先ず誘導化される。次
いで、化合物（Ｘ）をカルボキシ−保護３〜ハロメチル
セファロスポリン（VIII）と反応させ目的生成物を得
る。式（XI）の化合物の製造に対し、Ｒ1 は例えばスク
シンイミドであるか、又は−ＣＯ2 Ｒ1 は混合無水物を
表わす。
【００９８】細胞毒薬物成分ＮＲa は、先に定義した如
くニトロジエンマスタード族の一員であってよい。特に
好ましいマスタードは、メファランおよびＮ，Ｎ−ビス
（２−クロロエチル）−１，４−ベンゼンジアミン（フ
ェニレンジアミンマスタード）である。加えて、細胞毒
成分ＮＲa はアントラサイクリン群の一員であってよ
い。アントラサイトラサイクリンの例には制限されない
が、ドキソルビシン、ダウノマイシン、カルミノマイシ
ン等が含まれここにおいてセファロスポリンに対する結
合は糖アミノ基を介している。好ましくは、アントラサ
イクリンはドキソルビシンである。
くニトロジエンマスタード族の一員であってよい。特に
好ましいマスタードは、メファランおよびＮ，Ｎ−ビス
（２−クロロエチル）−１，４−ベンゼンジアミン（フ
ェニレンジアミンマスタード）である。加えて、細胞毒
成分ＮＲa はアントラサイクリン群の一員であってよ
い。アントラサイトラサイクリンの例には制限されない
が、ドキソルビシン、ダウノマイシン、カルミノマイシ
ン等が含まれここにおいてセファロスポリンに対する結
合は糖アミノ基を介している。好ましくは、アントラサ
イクリンはドキソルビシンである。
【００９９】細胞毒成分ＮＲa はマイトマイシン群の一
員であってもよい。マイトマイシンは次の一般構造式に
よって特徴づけられる：
員であってもよい。マイトマイシンは次の一般構造式に
よって特徴づけられる：
【０１００】
【化５６】
【０１０１】７位に異なる置換基を有する多数のマイト
マイシン類似体が報告された。本発明の目的に対し、７
置換体は重要でない；何故ならセファロスポリンへのマ
イトマイシンの結合はアジリジン窒素原子を介してい
る。プロドラッグに対する好ましいマイトマイシンは、
マイトマイシンＣ、すなわちＹ＝ＮＨ2 である。親プロ
ドラッグに対する適当なマイトマイシン類似体の他の例
は、米国特許４，６９１，６２３，４，８０３，２１
２，４，４８７，７６９，４，８８８，３４１およびヨ
ーロッパ公開出願２９４，８２８（これらはその番号を
引用して本明細書に加えられる）において開示されたも
のである。
マイシン類似体が報告された。本発明の目的に対し、７
置換体は重要でない；何故ならセファロスポリンへのマ
イトマイシンの結合はアジリジン窒素原子を介してい
る。プロドラッグに対する好ましいマイトマイシンは、
マイトマイシンＣ、すなわちＹ＝ＮＨ2 である。親プロ
ドラッグに対する適当なマイトマイシン類似体の他の例
は、米国特許４，６９１，６２３，４，８０３，２１
２，４，４８７，７６９，４，８８８，３４１およびヨ
ーロッパ公開出願２９４，８２８（これらはその番号を
引用して本明細書に加えられる）において開示されたも
のである。
【０１０２】ポリマー部分の結合は、細胞毒物質へのセ
ファロスポリンの結合後に最もすみやかに達成される。
これはペニシリンＧアミダーゼ（例えばＶｒｕｄｈｕｌ
ａ，Ｖ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１
９９５），３８，１３８０−１３８５）を用いセファロ
スポリン／薬物コンジュゲートから保護基（すなわち、
Ｑ′、例えばフェニルアセチル基）の除去次いで生成ア
ミンをポリマーの修飾形（例えば活性エステル形）とを
反応させることによって一般に達成できる。アミン又は
さもなければ官能化セファロスポリンとアミンとの反応
に対する当業者に公知の標準法が用いられる。他のポリ
マーを結合する技術は、Ｓ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ ｅｔ
ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．，１９（１２）：１
１７７−１１８３，１９８３；Ｄ．Ｃａｌｉｃｅｔｉ，
ｅｔ ａｌ．，Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ，４８（７）：９
１９−９３２，１９９３；Ｒ．Ｄｕｎｃａｎ，Ａｎｔｉ
ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ，３：１７５−２１０，１９
９２；ａｎｄ Ｅ．Ｆ．Ｐａｎａｒｉｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓ
ｅ，１０：１１９−１２９，１９８９に開示されてい
る。
ファロスポリンの結合後に最もすみやかに達成される。
これはペニシリンＧアミダーゼ（例えばＶｒｕｄｈｕｌ
ａ，Ｖ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１
９９５），３８，１３８０−１３８５）を用いセファロ
スポリン／薬物コンジュゲートから保護基（すなわち、
Ｑ′、例えばフェニルアセチル基）の除去次いで生成ア
ミンをポリマーの修飾形（例えば活性エステル形）とを
反応させることによって一般に達成できる。アミン又は
さもなければ官能化セファロスポリンとアミンとの反応
に対する当業者に公知の標準法が用いられる。他のポリ
マーを結合する技術は、Ｓ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ ｅｔ
ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．，１９（１２）：１
１７７−１１８３，１９８３；Ｄ．Ｃａｌｉｃｅｔｉ，
ｅｔ ａｌ．，Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ，４８（７）：９
１９−９３２，１９９３；Ｒ．Ｄｕｎｃａｎ，Ａｎｔｉ
ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ，３：１７５−２１０，１９
９２；ａｎｄ Ｅ．Ｆ．Ｐａｎａｒｉｎ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓ
ｅ，１０：１１９−１２９，１９８９に開示されてい
る。
【０１０３】別の面において、本発明は式（Ｉ）の化合
物のサブクラスとして、細胞毒物質がカルボネート又は
エステル基を介してセファロスポリン核に結合している
一般式（ＸII）
物のサブクラスとして、細胞毒物質がカルボネート又は
エステル基を介してセファロスポリン核に結合している
一般式（ＸII）
【０１０４】
【化５７】
【０１０５】（式中、Ｑ，Ｌおよびｍは先に定義した意
味であり、ＯＲb はヒドロキシ含有細胞毒物質である）
のポリマーセファロスポリンプロドラッグ、又はその医
薬として許容し得る塩である。式（ＸII）の化合物は、
本発明で用いたＮＲa の代わりにＯＲb を用い図式Ｉ〜
III （図式Ｉにおけるルート（ａ）を除く）で記載した
一般的方法に従って製造できる。
味であり、ＯＲb はヒドロキシ含有細胞毒物質である）
のポリマーセファロスポリンプロドラッグ、又はその医
薬として許容し得る塩である。式（ＸII）の化合物は、
本発明で用いたＮＲa の代わりにＯＲb を用い図式Ｉ〜
III （図式Ｉにおけるルート（ａ）を除く）で記載した
一般的方法に従って製造できる。
【０１０６】本発明の一つの例として、細胞毒成分ＯＲ
b は次式
b は次式
【０１０７】
【化５８】
【０１０８】（式中、Ｚは公知のエピドフィロトキシン
グルコシドの置換基、例えばアルキル、チエニル、フリ
ルおよびフェニルである）を有するエピドフィロトキシ
ン抗腫瘍剤の群から選ばれる。Ｚがメチル（エトホシ
ド）および２−チエニル（テニポシド）である化合物で
ある。これらの化合物は４′−フェノール基を介してセ
ファロスポリン核に結合できる。
グルコシドの置換基、例えばアルキル、チエニル、フリ
ルおよびフェニルである）を有するエピドフィロトキシ
ン抗腫瘍剤の群から選ばれる。Ｚがメチル（エトホシ
ド）および２−チエニル（テニポシド）である化合物で
ある。これらの化合物は４′−フェノール基を介してセ
ファロスポリン核に結合できる。
【０１０９】別の態様において、サブクラスとして次式
（ＸIII ）
（ＸIII ）
【０１１０】
【化５９】
【０１１１】（式中、Ｑは先に定義した意味であり、そ
してＲc ＣＯＯはカルボニル含有細胞毒化合物である）
のセファロスポリンプロドラッグ又はその医薬として許
容し得る塩を提供する。この例として、細胞毒成分メル
ファレンはカルボニル基を介してセファロスポリン核に
結合できる。メルファレン−セファロスポリンプロドラ
ッグ（ＸIV）は図式IVで示した手順によって製造でき
る。
してＲc ＣＯＯはカルボニル含有細胞毒化合物である）
のセファロスポリンプロドラッグ又はその医薬として許
容し得る塩を提供する。この例として、細胞毒成分メル
ファレンはカルボニル基を介してセファロスポリン核に
結合できる。メルファレン−セファロスポリンプロドラ
ッグ（ＸIV）は図式IVで示した手順によって製造でき
る。
【０１１２】
【化６０】
【０１１３】図式IVにおいて、Ｑ′およびＲ2 は先に定
義した意味である。好ましくは、Ｒ 2 は酸不安定基、例
えばベンジル又はｔ−ブチルである。従って、カルボキ
シ−保護３−ヨードセファロスポリンを、塩基例えば炭
酸水素ナトリウムの存在下、塩基の存在下Ｎ−ｔ−ＢＯ
Ｃ保護メルファレンと反応させ；生成ジ保護中間体を酸
で処理し式（ＸIV）の目的化合物を得次いでＱ′を前記
の如くＱで置換する。
義した意味である。好ましくは、Ｒ 2 は酸不安定基、例
えばベンジル又はｔ−ブチルである。従って、カルボキ
シ−保護３−ヨードセファロスポリンを、塩基例えば炭
酸水素ナトリウムの存在下、塩基の存在下Ｎ−ｔ−ＢＯ
Ｃ保護メルファレンと反応させ；生成ジ保護中間体を酸
で処理し式（ＸIV）の目的化合物を得次いでＱ′を前記
の如くＱで置換する。
【０１１４】本発明の別の面は、次式II（ａ）
【０１１５】
【化６１】
【０１１６】（式中、ＱおよびＲd は先に定義した意味
である）を有するセファロスポリン−マイトマイシンプ
ロドラッグに関する。式（IIａ）の化合物は、３−アミ
ノメチルセファロスポリンをマイトマイシンＡ又はその
Ｎ1a−アルキル誘導体（Ｎ1aはマイトマイシンのアジリ
ジン窒素を意味する）と反応させることにより製造され
る。反応は、有機溶剤例えばエタノール又はメタノール
中で生成物の形成を促す温度、例えば室温で行なわれ
る。反応は一般に不活性雰囲気下で行なわれる。出発物
質の３−アミノメチルセファロスポリンは、対応する３
−アジドメチルセファロスポリンから得られ；３−アミ
ノメチル−および３−アジドメチルセファロスポリンの
双方並びにその製造方法はコッカー、Ｊ．Ｄ．等Ｊ．Ｃ
ｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６５，５０１５ ａｔ ５０２
７−５０２９において開示されており、その関連部分は
その番号を引用して本明細書に挿入される。次いで、ポ
リマー部分を前記の如く結合させる。
である）を有するセファロスポリン−マイトマイシンプ
ロドラッグに関する。式（IIａ）の化合物は、３−アミ
ノメチルセファロスポリンをマイトマイシンＡ又はその
Ｎ1a−アルキル誘導体（Ｎ1aはマイトマイシンのアジリ
ジン窒素を意味する）と反応させることにより製造され
る。反応は、有機溶剤例えばエタノール又はメタノール
中で生成物の形成を促す温度、例えば室温で行なわれ
る。反応は一般に不活性雰囲気下で行なわれる。出発物
質の３−アミノメチルセファロスポリンは、対応する３
−アジドメチルセファロスポリンから得られ；３−アミ
ノメチル−および３−アジドメチルセファロスポリンの
双方並びにその製造方法はコッカー、Ｊ．Ｄ．等Ｊ．Ｃ
ｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６５，５０１５ ａｔ ５０２
７−５０２９において開示されており、その関連部分は
その番号を引用して本明細書に挿入される。次いで、ポ
リマー部分を前記の如く結合させる。
【０１１７】本発明によって包含されるポリマーセファ
ロスポリンプロドラッグの合成は、先に特に記載したこ
れらの手順および試剤に限定されないが、しかし合成化
学の分野に熟練した化学者に周知の他の常法を用いて達
成できる。保護基、エステル活性基（およびもし適用で
きる場合それらの導入および除去）、溶剤および反応条
件の選択は合成化学者の知識の範囲内でありそして不必
要な実験なしで行うことができる。
ロスポリンプロドラッグの合成は、先に特に記載したこ
れらの手順および試剤に限定されないが、しかし合成化
学の分野に熟練した化学者に周知の他の常法を用いて達
成できる。保護基、エステル活性基（およびもし適用で
きる場合それらの導入および除去）、溶剤および反応条
件の選択は合成化学者の知識の範囲内でありそして不必
要な実験なしで行うことができる。
【０１１８】本発明はまた癌および他の腫瘍を治療する
ための医薬組成物および方法をも包含する。より特に、
本発明は抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲートにより
開裂され得るポリマーセファロスポリンプロドラッグを
含んでなる組成物を含んでなる。プロドラッグおよび酵
素コンジュゲートが腫瘍の治療方法において用いられ、
ここにおいて哺乳動物の宿主には、医薬として有効量の
抗体−酵素コンジュゲート又は複数のコンジュゲート並
びに医薬として有効量のプロドラッグ又は複数のプロッ
ドが投与される。本発明の組成物および方法は、ヒト、
犬、猫および馬を含む哺乳動物の治療に有用である。
ための医薬組成物および方法をも包含する。より特に、
本発明は抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲートにより
開裂され得るポリマーセファロスポリンプロドラッグを
含んでなる組成物を含んでなる。プロドラッグおよび酵
素コンジュゲートが腫瘍の治療方法において用いられ、
ここにおいて哺乳動物の宿主には、医薬として有効量の
抗体−酵素コンジュゲート又は複数のコンジュゲート並
びに医薬として有効量のプロドラッグ又は複数のプロッ
ドが投与される。本発明の組成物および方法は、ヒト、
犬、猫および馬を含む哺乳動物の治療に有用である。
【０１１９】好ましい態様によれば、抗体−酵素コンジ
ュゲートは、プロドラッグを宿主に導入する前に投与さ
れる。コンジュゲートの抗体を目標に向けさせそして酵
素を腫瘍部位に局在化せしめるため、コンジュゲートと
プロドラッグ間に十分な時間が与えられるべきである。
その時間は用いられるコンジュゲートに応じ、１２時間
ないし１週間であろう。
ュゲートは、プロドラッグを宿主に導入する前に投与さ
れる。コンジュゲートの抗体を目標に向けさせそして酵
素を腫瘍部位に局在化せしめるため、コンジュゲートと
プロドラッグ間に十分な時間が与えられるべきである。
その時間は用いられるコンジュゲートに応じ、１２時間
ないし１週間であろう。
【０１２０】本発明のコンジュゲートおよびプロドラッ
グは、制限されないが、静脈内、腹腔内、経口、リンパ
内の、又は腫瘍に直接投与することを含めた通常の投与
方法を用いて投与できる。本発明の組成物は、多様の剤
形をとることができ、これには制限されないが液体溶液
又は懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、坐剤又はポリマーミク
ロカプセル又はミクロビヒクル、リポソーム、および注
射可能又は温浸可能溶液が含まれる。
グは、制限されないが、静脈内、腹腔内、経口、リンパ
内の、又は腫瘍に直接投与することを含めた通常の投与
方法を用いて投与できる。本発明の組成物は、多様の剤
形をとることができ、これには制限されないが液体溶液
又は懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、坐剤又はポリマーミク
ロカプセル又はミクロビヒクル、リポソーム、および注
射可能又は温浸可能溶液が含まれる。
【０１２１】好ましい剤形は、投与方法および治療適用
に依存する。例えば、抗体−β−ラクタマーゼコンジュ
ゲートの経口投与は好ましくないであろう、何故ならコ
ンジュゲートタンパク質は例えば錠剤形でもしも経口投
与される場合胃内で分解される傾向にあるからである。
コンジュゲート又はプロドラッグはまた、当業者に周知
の通常の医薬として許容され得る担体および賦形剤、例
えばアルミナ、レシチン、緩衝物質例えばホスフェー
ト、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、およ
び塩又は電解質例えばプロタミンサルフェートを好まし
く含有する。
に依存する。例えば、抗体−β−ラクタマーゼコンジュ
ゲートの経口投与は好ましくないであろう、何故ならコ
ンジュゲートタンパク質は例えば錠剤形でもしも経口投
与される場合胃内で分解される傾向にあるからである。
コンジュゲート又はプロドラッグはまた、当業者に周知
の通常の医薬として許容され得る担体および賦形剤、例
えばアルミナ、レシチン、緩衝物質例えばホスフェー
ト、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、およ
び塩又は電解質例えばプロタミンサルフェートを好まし
く含有する。
【０１２２】本発明のための投与および用量の最も有効
な形式は、疾患の重大さおよび疾患の過程、患者の健康
および治療への応答および医者の判断に依存する。用量
の決定方法は周知である。次の例は本発明を説明する
が、これに限定されるものではない。
な形式は、疾患の重大さおよび疾患の過程、患者の健康
および治療への応答および医者の判断に依存する。用量
の決定方法は周知である。次の例は本発明を説明する
が、これに限定されるものではない。
【０１２３】
例１ １．ポリマーセファロスポリンプロドラッグの製造およ
び生物学的研究 １．１ 実験手順 １．１．１ 物質 Ｍ−ＰＥＧ−プロピオン酸（５kDa 、メトキシ基で一方
端がキャップされた線状ポリエチレングリコールポリマ
ー）およびＢ−ＰＥＧ−プロピオン酸（１０kDa 、炭化
水素コアから突出した８個のアームを有する分枝ポリマ
ー）をシェアフォーターポリー社（ハントビレー、アラ
バマ州）から得た。アミノセファロスポリンドキソルビ
シン（ＡＣ−Ｄｏｘ）を、セファロスポリンドキソルビ
シン（Ｃ−Ｄｏｘ．）から製造し次いで米国特許出願番
号０８／０１６，２０８および０７／６０９，６６３お
よびブルデフラＶ．Ｍ．、等、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．
（１９９５）３８（８），１３８０−１３８５に記載の
如く精製した。Ｌ６およびＰ１．１７ｍＡｂｓ（双方と
もマウスＩｇＧ２ａ）およびエンテロバクタークロアケ
（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）由来の
ｂＬを、ブルドフラ等、（１９９１），Ｂｉｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．４，３３４−３４０において既
に記載の如く得た。Ｌ６はＨ２９８１ヒト肺腺癌細胞
系、ヘルストム、Ｉ等（１９８６），Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．４６．３９１７−３９２３に依存する抗原に結合
する。これらは、ｍＡｂＦ（ａｂ）′フラグメント上の
遊離チオール基を、ｂＬに付加されたマレイミド基と反
応させることによって製造した、スベソン、Ｈ．Ｐ．等
（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．
５，２６２−２６７。３６７７細胞系は、ヒト転移性黒
色腫からブリストル−マイヤーズスクイブ、ワシントン
州で確立された。雌の無胸腺のnu／nuマウス（マーラン
−スプラーグ−ドレー種、インディアポリス、１Ｎ）に
１０7 個の細胞を皮下注射（次いで増殖腫瘍を切り取り
次いでその後のインビトロ実験に用いた。腫瘍片（約２
×２mm）を皮下に植め込んだ。全ての生体内試験は、生
体内継代を１〜３回受けた腫瘍を用いて行った。ホスフ
ェート緩衝化食塩水は、１０mMのリン酸ナトリウム、pH
７．２の１５０mMの塩化ナトリウムから成っている。 １．１．２ Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの製造 ５０mlのＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解したＭ−ＰＥＧプロピオン
酸（１０ｇ，２mmol）の撹拌溶液に、５１６mg（２．５
mmol）のジシクロヘキシルカルボジイミドおよび２８８
mg（２．５mmol）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドを加
えた。約１２時間後、固体を濾別し、次いで濾液を４℃
で急速に撹拌されたエーテル（約２５０ml）に滴下し
た。生成した固体（Ｍ−ＰＥＧ−ＮＨＳエステル）を集
め、高真空下で乾燥し次いで使用するまで４℃で保存し
た。微細白色粉末の収量は、９．９ｇであった。
び生物学的研究 １．１ 実験手順 １．１．１ 物質 Ｍ−ＰＥＧ−プロピオン酸（５kDa 、メトキシ基で一方
端がキャップされた線状ポリエチレングリコールポリマ
ー）およびＢ−ＰＥＧ−プロピオン酸（１０kDa 、炭化
水素コアから突出した８個のアームを有する分枝ポリマ
ー）をシェアフォーターポリー社（ハントビレー、アラ
バマ州）から得た。アミノセファロスポリンドキソルビ
シン（ＡＣ−Ｄｏｘ）を、セファロスポリンドキソルビ
シン（Ｃ−Ｄｏｘ．）から製造し次いで米国特許出願番
号０８／０１６，２０８および０７／６０９，６６３お
よびブルデフラＶ．Ｍ．、等、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．
（１９９５）３８（８），１３８０−１３８５に記載の
如く精製した。Ｌ６およびＰ１．１７ｍＡｂｓ（双方と
もマウスＩｇＧ２ａ）およびエンテロバクタークロアケ
（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）由来の
ｂＬを、ブルドフラ等、（１９９１），Ｂｉｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．４，３３４−３４０において既
に記載の如く得た。Ｌ６はＨ２９８１ヒト肺腺癌細胞
系、ヘルストム、Ｉ等（１９８６），Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．４６．３９１７−３９２３に依存する抗原に結合
する。これらは、ｍＡｂＦ（ａｂ）′フラグメント上の
遊離チオール基を、ｂＬに付加されたマレイミド基と反
応させることによって製造した、スベソン、Ｈ．Ｐ．等
（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．
５，２６２−２６７。３６７７細胞系は、ヒト転移性黒
色腫からブリストル−マイヤーズスクイブ、ワシントン
州で確立された。雌の無胸腺のnu／nuマウス（マーラン
−スプラーグ−ドレー種、インディアポリス、１Ｎ）に
１０7 個の細胞を皮下注射（次いで増殖腫瘍を切り取り
次いでその後のインビトロ実験に用いた。腫瘍片（約２
×２mm）を皮下に植め込んだ。全ての生体内試験は、生
体内継代を１〜３回受けた腫瘍を用いて行った。ホスフ
ェート緩衝化食塩水は、１０mMのリン酸ナトリウム、pH
７．２の１５０mMの塩化ナトリウムから成っている。 １．１．２ Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの製造 ５０mlのＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解したＭ−ＰＥＧプロピオン
酸（１０ｇ，２mmol）の撹拌溶液に、５１６mg（２．５
mmol）のジシクロヘキシルカルボジイミドおよび２８８
mg（２．５mmol）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドを加
えた。約１２時間後、固体を濾別し、次いで濾液を４℃
で急速に撹拌されたエーテル（約２５０ml）に滴下し
た。生成した固体（Ｍ−ＰＥＧ−ＮＨＳエステル）を集
め、高真空下で乾燥し次いで使用するまで４℃で保存し
た。微細白色粉末の収量は、９．９ｇであった。
【０１２４】Ａｃ−Ｄｏｘ（０．１０７mmol）を、５ml
の５０mMボラート（pH８．０）に溶解したＭ−ＰＥＧ−
ＮＨＳエステル（１．６２ｇ，０．３２mmol）の新たに
調製した溶液に加えた。３７℃で３．７５時間後、ＨＰ
ＬＣ分析はＡＣ−Ｄｏｘの９０％超が消費されているこ
とを示した。反応混合物を、１％酢酸を含有する飽和水
性ＮａＣｌおよび２０％エタノールを含有するＣＨＣｌ
3 間に分配した。そのような数回の抽出後、一緒にした
有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾過し、次いで濃縮乾
固した。残留物をＨ2 Ｏに溶解し次いで上澄みが殆ど無
色になるまでアンバーライトＸＡＤ−７樹脂（シジマケ
ミカル社、ＣＨ3 ＯＨで予備洗浄し次いでＨ2 Ｏで予備
処理した）の約２５ｇと共に撹拌した。樹脂を予備処理
したＸＡＤ−７樹脂の５×１０cm上に注ぎ、次いで得ら
れたカラムを水（０．５ｌ）で洗い、次いで１０％
（０．５ｌ），２０％（０．５ｌ）および８０％ＣＨ3
ＯＨ（０．４ｌ）を含有する水で洗った。
の５０mMボラート（pH８．０）に溶解したＭ−ＰＥＧ−
ＮＨＳエステル（１．６２ｇ，０．３２mmol）の新たに
調製した溶液に加えた。３７℃で３．７５時間後、ＨＰ
ＬＣ分析はＡＣ−Ｄｏｘの９０％超が消費されているこ
とを示した。反応混合物を、１％酢酸を含有する飽和水
性ＮａＣｌおよび２０％エタノールを含有するＣＨＣｌ
3 間に分配した。そのような数回の抽出後、一緒にした
有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ4 ）、濾過し、次いで濃縮乾
固した。残留物をＨ2 Ｏに溶解し次いで上澄みが殆ど無
色になるまでアンバーライトＸＡＤ−７樹脂（シジマケ
ミカル社、ＣＨ3 ＯＨで予備洗浄し次いでＨ2 Ｏで予備
処理した）の約２５ｇと共に撹拌した。樹脂を予備処理
したＸＡＤ−７樹脂の５×１０cm上に注ぎ、次いで得ら
れたカラムを水（０．５ｌ）で洗い、次いで１０％
（０．５ｌ），２０％（０．５ｌ）および８０％ＣＨ3
ＯＨ（０．４ｌ）を含有する水で洗った。
【０１２５】溶剤を８０％ＣＨ3 ＯＨ分画から蒸発さ
せ、次いで微量の水をトルエンを用い残留物から共沸蒸
留した。微細赤色固体（１．２４ｇ）を、ＣＨ2 Ｃｌ2
に溶解した生成物の溶液を急速に撹拌した氷冷エーテル
にゆっくり添加することにより得た。λmax （ホスフェ
ート緩衝化食塩水）４９５nm。 1Ｈ ＮＭＲ（３００Ｍ
Ｈｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6 ，δ３．４０にＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ
に対し一重線のサプレッション（ｓｕｐｐｒｌｓｓｉｏ
ｎ）を伴う）、ｄ ８．８１（ｄ，１Ｈ，ＮＨ，ＪNH，
７＝８．２Ｈｚ），７．９２（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ，Ｊ＝
４．８Ｈｚ），７．６５（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．９
３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６，Ｊ6,7 ＝８．０Ｈｚ），５．６
５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７），５．４６（ｄ，１Ｈ，ＯＨ，
Ｊ＝３．６Ｈｚ），５．２０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，Ｈ−
１″），５．０３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４″，Ｊ＝４．８Ｈ
ｚ），４．８８（ｓ，１Ｈ），４．６０−４．５０
（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１４′），４．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
５″），３．９８（ｓ，３Ｈ，ＡｒＯＣＨ3 ），３．０
３−２．７９（ｍ，２Ｈ），２．６７（ｔ，２Ｈ，ＰＥ
Ｇ−ＣＯＣＨ2 ＣＨ2 ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）２．２０−
２．０５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−８′），１．９０−１．７５
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２″Ａ），１．５０−１．４０（ｍ，
１Ｈ，Ｈ−２″Ｂ），１．１１（ｄ，３Ｈ，Ｈ−６″，
Ｊ5",6" ＝６．４Ｈｚ）。 １．１．３ Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの製造 ジシクロヘキシルカルボジイミド（２０６mg，１mmol）
およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（９２mg，０．８
mmol）を含有する１０mlのＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解したＢ−
ＰＥＧ−プロピオン酸（１ｇ，０．１mmol）の溶液を、
２３℃で４．５時間撹拌した。沈殿物を濾過し次いでＣ
Ｈ2 Ｃｌ2 で洗った。濾液を濃縮乾固し、次いで残留物
を高真空下に置き次いで使用するまで４℃で保存した。
Ｂ−ＰＥＧ−ＮＨＳの収率（半固体オイル）は１ｇであ
った。
せ、次いで微量の水をトルエンを用い残留物から共沸蒸
留した。微細赤色固体（１．２４ｇ）を、ＣＨ2 Ｃｌ2
に溶解した生成物の溶液を急速に撹拌した氷冷エーテル
にゆっくり添加することにより得た。λmax （ホスフェ
ート緩衝化食塩水）４９５nm。 1Ｈ ＮＭＲ（３００Ｍ
Ｈｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6 ，δ３．４０にＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏ
に対し一重線のサプレッション（ｓｕｐｐｒｌｓｓｉｏ
ｎ）を伴う）、ｄ ８．８１（ｄ，１Ｈ，ＮＨ，ＪNH，
７＝８．２Ｈｚ），７．９２（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ，Ｊ＝
４．８Ｈｚ），７．６５（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．９
３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６，Ｊ6,7 ＝８．０Ｈｚ），５．６
５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７），５．４６（ｄ，１Ｈ，ＯＨ，
Ｊ＝３．６Ｈｚ），５．２０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，Ｈ−
１″），５．０３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−４″，Ｊ＝４．８Ｈ
ｚ），４．８８（ｓ，１Ｈ），４．６０−４．５０
（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１４′），４．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
５″），３．９８（ｓ，３Ｈ，ＡｒＯＣＨ3 ），３．０
３−２．７９（ｍ，２Ｈ），２．６７（ｔ，２Ｈ，ＰＥ
Ｇ−ＣＯＣＨ2 ＣＨ2 ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）２．２０−
２．０５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−８′），１．９０−１．７５
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２″Ａ），１．５０−１．４０（ｍ，
１Ｈ，Ｈ−２″Ｂ），１．１１（ｄ，３Ｈ，Ｈ−６″，
Ｊ5",6" ＝６．４Ｈｚ）。 １．１．３ Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの製造 ジシクロヘキシルカルボジイミド（２０６mg，１mmol）
およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（９２mg，０．８
mmol）を含有する１０mlのＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解したＢ−
ＰＥＧ−プロピオン酸（１ｇ，０．１mmol）の溶液を、
２３℃で４．５時間撹拌した。沈殿物を濾過し次いでＣ
Ｈ2 Ｃｌ2 で洗った。濾液を濃縮乾固し、次いで残留物
を高真空下に置き次いで使用するまで４℃で保存した。
Ｂ−ＰＥＧ−ＮＨＳの収率（半固体オイル）は１ｇであ
った。
【０１２６】１０mlの０．２５Ｍのボラート（pH８．
０）に溶解したＡＣ−Ｄｏｘ（０．１２２mmol）の３７
℃溶液に、２４３mg（２４mmol）のＢ−ＰＥＧ−ＮＨＳ
エステルを加えた。Ｂ−ＰＥＧ−ＮＨＳエステルの追加
のアリコート（３５０mgおよび２５０mg）をそれぞれ３
時間および６時間後に加えた。３７℃で合計１０時間
後、残っている活性エステルを冷却するためアミノエタ
ノールを加え（１２０mMの最終濃度）、次いで物質をＸ
ＡＤ−７樹脂に前記の如く結合させた。生成ＸＡＤ−７
カラムをＨ2 Ｏ（１ｌ）で洗い、次いで２５％（０．５
ｌ），３７％（０．５ｌ），５０％（０．２５ｌ）およ
び７５％（０．５ｌ）ＣＨ3 ＯＨを含有するＨ2 Ｏで洗
った。ポリマー結合ドラッグは、７５％ＣＨ3 ＯＨ分画
中に主に含まれていた。この分画を濃縮乾固し、５％Ｃ
Ｈ3 ＯＨを含有するＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解し、次いで１％
酢酸を含有する飽和水性ＮａＣｌで抽出した。両相を数
回逆抽出した後、一緒にした有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ
4 ）、濾過し、次いで濃縮乾固した。赤色残留物をＨ2
Ｏから凍結乾燥（暗赤色粉末として４３９mgのＢ−ＰＥ
Ｇ−ＡＣ−Ｄｏｘを得た。λmax （ホスフェート緩衝化
食塩水）４８５nm。 1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳ
Ｏ−ｄ6 ，ｄ３．４０にＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏに対し一重線
のサプレッションを伴う）、ｄ ８．９０−８．８０
（ｍ，１Ｈ，ＮＨ），８．２７（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ，Ｊ
＝７．８Ｈｚ），７．９７−７．８９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６，Ｊ＝５．７Ｈ
ｚ），６．０２−５．５８（ｍ，１Ｈ），５．４５
（ｄ，１Ｈ，ＯＨ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），５．２１（ｂ
ｒ．ｓ，１Ｈ，Ｈ−１″），４．９２（ｂｒ ｓ．，１
Ｈ），４．６２−４．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１４′），
４．２０−４．０４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５″），３．９８
（ｓ，３Ｈ，ＡｒＯＣＨ3 ），２．９０−２．８２
（ｍ，２Ｈ，ＰＥＧ−ＣＯＣＨ 2 ＣＨ2 ）。 １．１．４ 速度論的研究 ｂＬ（Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し０．２μｇ／m
l，Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し１．０μｇ／ml）
を用いたＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ又はＢ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘ（１２．５mg／mlのウシ血清アルブミンを含
有するホスフェート緩衝化食塩水中）の５〜１００mM溶
液の加水分解に対する速度論的研究を、基質濃度の関数
として反応の初期速度の測定により分光光度的に測定し
た。データのラインウザーバーク（Ｌｉｎｅｗｅａｔｈ
ｅｒ−Ｂｕｒｋ）プロットを用いたＫm およびＶmax 値
を推定した。β−ラクタム環の開裂は、Ｍ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘ（Δε２６０nm＝−７．９×１０-3Ｍ-1c
m-1）およびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ（Δε２６０nm
＝−３．８×１０-3Ｍ-1cm-1）の双方に対し、２６０nm
で吸光度の損失をもたらした。 １．１．５ 試験管内細胞毒分析において １０％（ｖ／ｖ）の胎児のウシ血清、０．１mg／mlのス
トレプトマイシン、および０．０６mg／mlのプニシリン
Ｇを加えた修正ダルベコ培地内で、Ｈ２９８１細胞を単
層培養法により培養し、９６穴プレート（Ｍ−ＰＥＧ−
ＡＣ−Ｄｏｘに対し１０，０００個の細胞／ウェル、Ｂ
−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し５，０００個の細胞／ウ
ェル）に移し、次いで３７℃で１８時間付着させた。プ
レートを、ロスウェルパークメモリアルインスティチュ
ート１６４０培地ＲＰＭＩ（抗生物質フリー）で洗い、
ｍＡｂ−ｂＬコンジュゲートを添加し（Ｍ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘに対し３．１６μｇのｍＡｂ成分／ml，Ｂ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し１μｇ／mlのｍＡｂ成
分）、次いでインキュベーションを４℃で３０分継続し
た。細胞をＲＰＭＩで３回洗浄し、３７℃でプロドラッ
グで処理し（Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し１時間、
Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し２時間）、洗浄し、次
いで３７℃で１時間インキュベートする。〔 3Ｈ〕−チ
ミジン（１μCi）を各ウェルに添加し、次いで細胞を集
めそして５時間後（Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対
し）、又は４時間後（Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対
し）に計数した。結果を、未処理細胞（この細胞はＬ６
（１mg／ml）でコンジュゲート暴露前に飽和されてい
る）と比較し、次いでＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの代わりに
ドキソルビシンを用いて処理された非−コンジュゲート
処理細胞と比較した。 １．１．６ 薬理学 全ての実験を、無胸腺の雌のnu／nuマウス（ハーラン−
スプラーグ−ドーレ、インディアナポリス、インディア
州）において行いそして動物が６〜０個の年令になった
とき開始した。生体内継代からの３６７７個のヒト腫瘍
異移殖片を皮下に植込み次いで約２００mm3 に増殖せし
めた。Ｂ−およびＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ（ホスフェ
ート緩衝化食塩水中で５．２mMに新たに調製）を注入し
（静脈内）、各マウスは体重１kg当たり５２μmol のＰ
ＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘを受けとった。ドキソルビシン（食
塩水中１．５５mM）を注射し各マウスは１kg当たり１
５．５μmol のドキソルビシン（９mg／kg）を受け取っ
た。種々の時間点において、マウス（１群３匹）を麻酔
し、後方−眠窩叢を介して出血させ、液体窒素中で凍結
させ次いで−７０℃で保存化した。ヘパリン化した血液
サンプルを遠心し、次いでプラズマを−７０℃で凍結さ
せた メタノール（０．５ml）を、新たに解かしたプラズマサ
ンプルの５０mlアリコートに添加した。サンプルを音波
破壊し次いで１０，０００ｇで３分間遠心分離した。上
澄みを減圧下で蒸発乾固させ、次いで残留物をＨＰＬＣ
分析に対し５０mMのトリエチルアンモニウムホルメート
（pH２．８）に溶解した２０％アセトニトリルの５０ml
の溶解した。腫瘍サンプル（約２００mg／サンプル）を
急速に解かし、釈量し次いで０．５mlのメタノール中で
均質化した。固体を遠心分離（１０，０００ｇで３分
間）することにより除去し、次いで上澄みを減圧下で蒸
発乾固した。残留物をＨＰＬＣ分析に対し５０mMのトリ
エチルアンモニウムホルメート（pH２．８）に溶解した
２０％アセトニトリルの５０μｌに溶解した。標準曲線
を、公知量のドキソルビシン又はＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ
ポリマーを含有する腫瘍およびプラズマサンプルを抽出
することによって得た。 １．１．７ ＨＰＬＣ分析 ２種の異なるＨＰＬＣ分析システムを、ＰＥＧ−ＡＣ−
Ｄｏｘ調製品に対して用いた。異なる調製品を特徴づけ
るため、ドキソルビシンがｂＬの添加の際放出されるこ
とを確認するためそしてホスフェート緩衝化食塩水およ
びマウスプラズマ中でポリマー調製品の安定性を測定す
るためベックマンＨＰＬＣシステムを用いた。 １．１．８ 安定性の研究 ０．５mMのＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘサンプルの溶液を、ホ
スフェート緩衝化食塩水又はマウスプラズマ中で調製し
次いで３７℃でインキュベーションした。周期的間隔
で、前記の如くサンプルをＨＰＬＣ分析に委ねた。マウ
スプラズマサンプルを１容量のメタノールで希釈し次い
で沈殿したタンパク質を遠心分離により分離した。生成
した上澄みをＨＰＬＣにより分析した。 １．２ 結果 ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ誘導体の製造および特性化 ７−アミノセファロスポリンドキソルビシン（ＡＣ−Ｄ
ｏｘ、チャート１）を、米国特許出願番号０７／６０
９，６６３において既に記載されるようにペニシリン−
Ｇアミダーゼを用い、７−フェニルアセチルセファロス
ポリンドキソルビシン（Ｃ−Ｄｏｘ、ヒューダイマ、
Ｔ．Ｗ．等（１９９３）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ．３，３２３−３２８）の酵素的加
水分解により製造した。逆相クロマトグラフィーを用い
精製を行った。ＡＣ−Ｄｏｘを、モノメトキシ−ＰＥＧ
−プロピオンのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
（ＭＷ５kDa ）又は分枝−ＰＥＧ−プロピオン酸のＮ−
ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＷ １０kDa ）
と縮合させると、それぞれＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘお
よびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘが形成した。分枝−ＰＥ
Ｇ−プロピオン酸は、ポリアルコールのエトキシル化に
より製造されるＰＥＧの八量体形である。２工程精製手
順を用い、未コンジュゲート化ドキソルビシン、ドキソ
ルビシン誘導体およびＰＥＧから目的生成物を分離し
た。未修飾ポリマーを、化合物溶出用のメタノールの段
階的グラジエントを用いポリアクリル酸エステル樹脂
（アンバーライトＸＡＤ−７）のカラムを用いクロマト
グラフィー処理して除去した。これらの条件下、遊離ポ
リマーがＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの前にカラムから溶出し
た。更に、アミン含有不純物を除去するため弱酸を用い
ポリマー溶液を抽出することにより精製を行った。
０）に溶解したＡＣ−Ｄｏｘ（０．１２２mmol）の３７
℃溶液に、２４３mg（２４mmol）のＢ−ＰＥＧ−ＮＨＳ
エステルを加えた。Ｂ−ＰＥＧ−ＮＨＳエステルの追加
のアリコート（３５０mgおよび２５０mg）をそれぞれ３
時間および６時間後に加えた。３７℃で合計１０時間
後、残っている活性エステルを冷却するためアミノエタ
ノールを加え（１２０mMの最終濃度）、次いで物質をＸ
ＡＤ−７樹脂に前記の如く結合させた。生成ＸＡＤ−７
カラムをＨ2 Ｏ（１ｌ）で洗い、次いで２５％（０．５
ｌ），３７％（０．５ｌ），５０％（０．２５ｌ）およ
び７５％（０．５ｌ）ＣＨ3 ＯＨを含有するＨ2 Ｏで洗
った。ポリマー結合ドラッグは、７５％ＣＨ3 ＯＨ分画
中に主に含まれていた。この分画を濃縮乾固し、５％Ｃ
Ｈ3 ＯＨを含有するＣＨ2 Ｃｌ2 に溶解し、次いで１％
酢酸を含有する飽和水性ＮａＣｌで抽出した。両相を数
回逆抽出した後、一緒にした有機相を乾燥し（ＭｇＳＯ
4 ）、濾過し、次いで濃縮乾固した。赤色残留物をＨ2
Ｏから凍結乾燥（暗赤色粉末として４３９mgのＢ−ＰＥ
Ｇ−ＡＣ−Ｄｏｘを得た。λmax （ホスフェート緩衝化
食塩水）４８５nm。 1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳ
Ｏ−ｄ6 ，ｄ３．４０にＯＣＨ2 ＣＨ2 Ｏに対し一重線
のサプレッションを伴う）、ｄ ８．９０−８．８０
（ｍ，１Ｈ，ＮＨ），８．２７（ｄ，１Ｈ，ＡｒＨ，Ｊ
＝７．８Ｈｚ），７．９７−７．８９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６，Ｊ＝５．７Ｈ
ｚ），６．０２−５．５８（ｍ，１Ｈ），５．４５
（ｄ，１Ｈ，ＯＨ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），５．２１（ｂ
ｒ．ｓ，１Ｈ，Ｈ−１″），４．９２（ｂｒ ｓ．，１
Ｈ），４．６２−４．５０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−１４′），
４．２０−４．０４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５″），３．９８
（ｓ，３Ｈ，ＡｒＯＣＨ3 ），２．９０−２．８２
（ｍ，２Ｈ，ＰＥＧ−ＣＯＣＨ 2 ＣＨ2 ）。 １．１．４ 速度論的研究 ｂＬ（Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し０．２μｇ／m
l，Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し１．０μｇ／ml）
を用いたＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ又はＢ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘ（１２．５mg／mlのウシ血清アルブミンを含
有するホスフェート緩衝化食塩水中）の５〜１００mM溶
液の加水分解に対する速度論的研究を、基質濃度の関数
として反応の初期速度の測定により分光光度的に測定し
た。データのラインウザーバーク（Ｌｉｎｅｗｅａｔｈ
ｅｒ−Ｂｕｒｋ）プロットを用いたＫm およびＶmax 値
を推定した。β−ラクタム環の開裂は、Ｍ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘ（Δε２６０nm＝−７．９×１０-3Ｍ-1c
m-1）およびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ（Δε２６０nm
＝−３．８×１０-3Ｍ-1cm-1）の双方に対し、２６０nm
で吸光度の損失をもたらした。 １．１．５ 試験管内細胞毒分析において １０％（ｖ／ｖ）の胎児のウシ血清、０．１mg／mlのス
トレプトマイシン、および０．０６mg／mlのプニシリン
Ｇを加えた修正ダルベコ培地内で、Ｈ２９８１細胞を単
層培養法により培養し、９６穴プレート（Ｍ−ＰＥＧ−
ＡＣ−Ｄｏｘに対し１０，０００個の細胞／ウェル、Ｂ
−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し５，０００個の細胞／ウ
ェル）に移し、次いで３７℃で１８時間付着させた。プ
レートを、ロスウェルパークメモリアルインスティチュ
ート１６４０培地ＲＰＭＩ（抗生物質フリー）で洗い、
ｍＡｂ−ｂＬコンジュゲートを添加し（Ｍ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘに対し３．１６μｇのｍＡｂ成分／ml，Ｂ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し１μｇ／mlのｍＡｂ成
分）、次いでインキュベーションを４℃で３０分継続し
た。細胞をＲＰＭＩで３回洗浄し、３７℃でプロドラッ
グで処理し（Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し１時間、
Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し２時間）、洗浄し、次
いで３７℃で１時間インキュベートする。〔 3Ｈ〕−チ
ミジン（１μCi）を各ウェルに添加し、次いで細胞を集
めそして５時間後（Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対
し）、又は４時間後（Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対
し）に計数した。結果を、未処理細胞（この細胞はＬ６
（１mg／ml）でコンジュゲート暴露前に飽和されてい
る）と比較し、次いでＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの代わりに
ドキソルビシンを用いて処理された非−コンジュゲート
処理細胞と比較した。 １．１．６ 薬理学 全ての実験を、無胸腺の雌のnu／nuマウス（ハーラン−
スプラーグ−ドーレ、インディアナポリス、インディア
州）において行いそして動物が６〜０個の年令になった
とき開始した。生体内継代からの３６７７個のヒト腫瘍
異移殖片を皮下に植込み次いで約２００mm3 に増殖せし
めた。Ｂ−およびＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ（ホスフェ
ート緩衝化食塩水中で５．２mMに新たに調製）を注入し
（静脈内）、各マウスは体重１kg当たり５２μmol のＰ
ＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘを受けとった。ドキソルビシン（食
塩水中１．５５mM）を注射し各マウスは１kg当たり１
５．５μmol のドキソルビシン（９mg／kg）を受け取っ
た。種々の時間点において、マウス（１群３匹）を麻酔
し、後方−眠窩叢を介して出血させ、液体窒素中で凍結
させ次いで−７０℃で保存化した。ヘパリン化した血液
サンプルを遠心し、次いでプラズマを−７０℃で凍結さ
せた メタノール（０．５ml）を、新たに解かしたプラズマサ
ンプルの５０mlアリコートに添加した。サンプルを音波
破壊し次いで１０，０００ｇで３分間遠心分離した。上
澄みを減圧下で蒸発乾固させ、次いで残留物をＨＰＬＣ
分析に対し５０mMのトリエチルアンモニウムホルメート
（pH２．８）に溶解した２０％アセトニトリルの５０ml
の溶解した。腫瘍サンプル（約２００mg／サンプル）を
急速に解かし、釈量し次いで０．５mlのメタノール中で
均質化した。固体を遠心分離（１０，０００ｇで３分
間）することにより除去し、次いで上澄みを減圧下で蒸
発乾固した。残留物をＨＰＬＣ分析に対し５０mMのトリ
エチルアンモニウムホルメート（pH２．８）に溶解した
２０％アセトニトリルの５０μｌに溶解した。標準曲線
を、公知量のドキソルビシン又はＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ
ポリマーを含有する腫瘍およびプラズマサンプルを抽出
することによって得た。 １．１．７ ＨＰＬＣ分析 ２種の異なるＨＰＬＣ分析システムを、ＰＥＧ−ＡＣ−
Ｄｏｘ調製品に対して用いた。異なる調製品を特徴づけ
るため、ドキソルビシンがｂＬの添加の際放出されるこ
とを確認するためそしてホスフェート緩衝化食塩水およ
びマウスプラズマ中でポリマー調製品の安定性を測定す
るためベックマンＨＰＬＣシステムを用いた。 １．１．８ 安定性の研究 ０．５mMのＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘサンプルの溶液を、ホ
スフェート緩衝化食塩水又はマウスプラズマ中で調製し
次いで３７℃でインキュベーションした。周期的間隔
で、前記の如くサンプルをＨＰＬＣ分析に委ねた。マウ
スプラズマサンプルを１容量のメタノールで希釈し次い
で沈殿したタンパク質を遠心分離により分離した。生成
した上澄みをＨＰＬＣにより分析した。 １．２ 結果 ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ誘導体の製造および特性化 ７−アミノセファロスポリンドキソルビシン（ＡＣ−Ｄ
ｏｘ、チャート１）を、米国特許出願番号０７／６０
９，６６３において既に記載されるようにペニシリン−
Ｇアミダーゼを用い、７−フェニルアセチルセファロス
ポリンドキソルビシン（Ｃ−Ｄｏｘ、ヒューダイマ、
Ｔ．Ｗ．等（１９９３）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ．３，３２３−３２８）の酵素的加
水分解により製造した。逆相クロマトグラフィーを用い
精製を行った。ＡＣ−Ｄｏｘを、モノメトキシ−ＰＥＧ
−プロピオンのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
（ＭＷ５kDa ）又は分枝−ＰＥＧ−プロピオン酸のＮ−
ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＷ １０kDa ）
と縮合させると、それぞれＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘお
よびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘが形成した。分枝−ＰＥ
Ｇ−プロピオン酸は、ポリアルコールのエトキシル化に
より製造されるＰＥＧの八量体形である。２工程精製手
順を用い、未コンジュゲート化ドキソルビシン、ドキソ
ルビシン誘導体およびＰＥＧから目的生成物を分離し
た。未修飾ポリマーを、化合物溶出用のメタノールの段
階的グラジエントを用いポリアクリル酸エステル樹脂
（アンバーライトＸＡＤ−７）のカラムを用いクロマト
グラフィー処理して除去した。これらの条件下、遊離ポ
リマーがＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの前にカラムから溶出し
た。更に、アミン含有不純物を除去するため弱酸を用い
ポリマー溶液を抽出することにより精製を行った。
【０１２７】ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ誘導体に対する 1Ｈ
−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ）は、ＰＥＧ、セフ
ァロスポリンおよびドキソルビシンに対し予期したプロ
トンを示し、そして従って下記のチャート１に示す構造
と一致した。
−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ）は、ＰＥＧ、セフ
ァロスポリンおよびドキソルビシンに対し予期したプロ
トンを示し、そして従って下記のチャート１に示す構造
と一致した。
【０１２８】
【化６２】
【０１２９】ピークの積分は、ドキソルビシンに対する
ＰＥＧのモル比が約１であることを示した。更にポリマ
ーは逆相ＨＰＬＣにより特徴化され、ここにおいてＭ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ（図２Ａ）およびＢ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘ（図２Ｂ）は主に単一ピークとして溶出し
た。ここで報告された研究において用いられたＢ−ＰＥ
Ｇ−ＡＣ−Ｄｏｘに対するＨＰＬＣプロフィルは、幾ら
かの遊離ドキソルビシンの存在を示す（合計積分値の
１．２％）。Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘのより最近の調
製品は、検出可能な未結合ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒ
ｕｂｉｃｉｎ）がなかった（データは示さない）。ポリ
マーとｂＬとの反応は、標品との比較に基づき、ドキソ
ルビシンの形成をもたらした（図２Ｃおよび２Ｄ）。こ
れらの研究は、構造の割りあてに対する証拠を与え、そ
して遊離ドキソルビシンがｂＬ触媒化加水分解によりＰ
ＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘポリマーから解放され得ることを示
す。
ＰＥＧのモル比が約１であることを示した。更にポリマ
ーは逆相ＨＰＬＣにより特徴化され、ここにおいてＭ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ（図２Ａ）およびＢ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘ（図２Ｂ）は主に単一ピークとして溶出し
た。ここで報告された研究において用いられたＢ−ＰＥ
Ｇ−ＡＣ−Ｄｏｘに対するＨＰＬＣプロフィルは、幾ら
かの遊離ドキソルビシンの存在を示す（合計積分値の
１．２％）。Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘのより最近の調
製品は、検出可能な未結合ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒ
ｕｂｉｃｉｎ）がなかった（データは示さない）。ポリ
マーとｂＬとの反応は、標品との比較に基づき、ドキソ
ルビシンの形成をもたらした（図２Ｃおよび２Ｄ）。こ
れらの研究は、構造の割りあてに対する証拠を与え、そ
して遊離ドキソルビシンがｂＬ触媒化加水分解によりＰ
ＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘポリマーから解放され得ることを示
す。
【０１３０】分光光度法を用い、各ポリマーに対するｂ
−ラクタム触媒加水分解の速度を定量化した。ラインウ
イバーバルクプロットから誘導した動力学定数を、Ｃ−
Ｄｏｘの加水分解に対し得られた動力学定数と比較した
（表１）。ｂＬに対し基質としてＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄ
ｏｘおよびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに関する回転率
は、基質としてＣ−Ｄｏｘに関するものよりも８〜１３
倍遅かった。これに対照して、３種の基質に対するKm値
は同様であった。従って、ポリマーおよびＣ−Ｄｏｘは
明らかにｂＬに同等に良好に結合しているが、しかし異
なる率で加水分解を受ける。
−ラクタム触媒加水分解の速度を定量化した。ラインウ
イバーバルクプロットから誘導した動力学定数を、Ｃ−
Ｄｏｘの加水分解に対し得られた動力学定数と比較した
（表１）。ｂＬに対し基質としてＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄ
ｏｘおよびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに関する回転率
は、基質としてＣ−Ｄｏｘに関するものよりも８〜１３
倍遅かった。これに対照して、３種の基質に対するKm値
は同様であった。従って、ポリマーおよびＣ−Ｄｏｘは
明らかにｂＬに同等に良好に結合しているが、しかし異
なる率で加水分解を受ける。
【０１３１】ＨＰＬＣ分析を用い、ホスフェート緩衝化
食塩水およびマウスプラズマ中のＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄ
ｏｘおよびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの安定性を測定し
た。３７℃のホスフェート緩衝化食塩水中で２４時間
後、双方のポリマーは少量の加水分解を受け、約１０％
の結合ドキソルビシンの放出をもたらした。３７℃のマ
ウスプラズマ中でＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−ＤｏｘおよびＢ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘをインキュベーションし、それぞ
れ２６％および７％のドキソルビシンの放出がもたらさ
れた。従って試験条件下、大抵のドキソルビシンは、ポ
リマー支持体に共有結合したままである。
食塩水およびマウスプラズマ中のＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄ
ｏｘおよびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの安定性を測定し
た。３７℃のホスフェート緩衝化食塩水中で２４時間
後、双方のポリマーは少量の加水分解を受け、約１０％
の結合ドキソルビシンの放出をもたらした。３７℃のマ
ウスプラズマ中でＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−ＤｏｘおよびＢ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘをインキュベーションし、それぞ
れ２６％および７％のドキソルビシンの放出がもたらさ
れた。従って試験条件下、大抵のドキソルビシンは、ポ
リマー支持体に共有結合したままである。
【０１３２】
【表１】
【０１３３】ａ値は３〜４回の独立の操作実験から得ら
れた。 １．２．２ 試験管細胞毒活性 Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ，Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏ
ｘ、ドキソルビシン、およびｍＡｂ−ｂＬコンジュゲー
トとポリマー調製品の組合せの細胞毒効果を、Ｈ２９８
１ヒト肺腺癌細胞系について測定した。数回の実験を行
ない、そして記載した条件は、最高度の免疫学的に特異
的プロドラッグ活性並びにプロドラッグとドラッグ間の
細胞毒差異を導く条件を示す。用いた二価〔Ｆ（ａ
ｂ）′〕2 −ｂＬコンジュゲートは、先に記載したスベ
ソン、Ｈ．Ｐ．、等（１９９４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ Ｃｈｅｍ．５，２６２−２６７に記載される如
くマレイミド置換ｂＬとＬ６Ｆ（ａｂ′）−ＳＨとを組
合せることにより製造した。このコンジュゲーション手
順はｍＡｂ結合又はｂＬの酵素活性を変更しない、スベ
ンソン、Ｈ．Ｐ．等（１９９４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ Ｃｈｅｍ．５．，２６２−２６７。
れた。 １．２．２ 試験管細胞毒活性 Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ，Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏ
ｘ、ドキソルビシン、およびｍＡｂ−ｂＬコンジュゲー
トとポリマー調製品の組合せの細胞毒効果を、Ｈ２９８
１ヒト肺腺癌細胞系について測定した。数回の実験を行
ない、そして記載した条件は、最高度の免疫学的に特異
的プロドラッグ活性並びにプロドラッグとドラッグ間の
細胞毒差異を導く条件を示す。用いた二価〔Ｆ（ａ
ｂ）′〕2 −ｂＬコンジュゲートは、先に記載したスベ
ソン、Ｈ．Ｐ．、等（１９９４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ Ｃｈｅｍ．５，２６２−２６７に記載される如
くマレイミド置換ｂＬとＬ６Ｆ（ａｂ′）−ＳＨとを組
合せることにより製造した。このコンジュゲーション手
順はｍＡｂ結合又はｂＬの酵素活性を変更しない、スベ
ンソン、Ｈ．Ｐ．等（１９９４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ Ｃｈｅｍ．５．，２６２−２６７。
【０１３４】Ｈ２９８１細胞をポリマーに暴露し（Ｍ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し１時間、Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ
−Ｄｏｘに対し２時間）、洗浄し、そして更にインキュ
ベーション後、毒性を〔 3Ｈ〕チミジンのＤＮＡへの挿
入を測定することにより決定した。Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−
Ｄｏｘの毒性活性（ＩＣ50＝８μＭ）およびＢ−ＰＥＧ
−ＡＣ−Ｄｏｘの毒性活性（ＩＣ50＝８μＭ）は、ドキ
ソルビシンのそれ（ＩＣ50＝０．１−０．２μＭ、図
３）よりもはるかに低かった。２種のポリマー間でＩＣ
50値の１０倍差異においておそらく意義はない；と言う
のはそれらは異なる条件下で試験されそしてＢ−ＰＥＧ
−ＡＣ−Ｄｏｘは分析の当初で少量の遊離ドキソルビシ
ン（１．２％）を含有した（図２Ｂ）。ポリマー細胞毒
性の著るしい増加が、Ｌ６−ｂＬで予備処理された細胞
に関して得られた。Ｌ６−ｂＬ＋ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ
の組合せはドキソルビシンと同じレベルの細胞毒活性を
生じないことは注目すべきである。これは分析条件下不
完な薬物解放のため最もありそうである；何故ならより
高度の活性が未結合コンジュゲートを洗い出すことによ
り又は高濃度の遊離ｂＬをポリマーサンプルに加えるこ
とによって得られた。
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘに対し１時間、Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ
−Ｄｏｘに対し２時間）、洗浄し、そして更にインキュ
ベーション後、毒性を〔 3Ｈ〕チミジンのＤＮＡへの挿
入を測定することにより決定した。Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−
Ｄｏｘの毒性活性（ＩＣ50＝８μＭ）およびＢ−ＰＥＧ
−ＡＣ−Ｄｏｘの毒性活性（ＩＣ50＝８μＭ）は、ドキ
ソルビシンのそれ（ＩＣ50＝０．１−０．２μＭ、図
３）よりもはるかに低かった。２種のポリマー間でＩＣ
50値の１０倍差異においておそらく意義はない；と言う
のはそれらは異なる条件下で試験されそしてＢ−ＰＥＧ
−ＡＣ−Ｄｏｘは分析の当初で少量の遊離ドキソルビシ
ン（１．２％）を含有した（図２Ｂ）。ポリマー細胞毒
性の著るしい増加が、Ｌ６−ｂＬで予備処理された細胞
に関して得られた。Ｌ６−ｂＬ＋ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ
の組合せはドキソルビシンと同じレベルの細胞毒活性を
生じないことは注目すべきである。これは分析条件下不
完な薬物解放のため最もありそうである；何故ならより
高度の活性が未結合コンジュゲートを洗い出すことによ
り又は高濃度の遊離ｂＬをポリマーサンプルに加えるこ
とによって得られた。
【０１３５】ポリマーの活性は、ポリマーの細胞毒活性
がＬ６−ｂＬに暴露前に未修飾Ｌ６ｍＡｂで飽和された
Ｈ２９８１細胞について増加しないという事実によって
明らかにされるように免疫学的に特異的方法で生起し
た。加えて、Ｐ１．１７−ｂＬはＨ２９８１細胞上でＢ
−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの活性に影響しなかった。共に
考慮すると、これらの研究はＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ
およびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの双方は、比較的非毒
性ドキソルビシンプロドラッグでありこれはＬ６抗原陽
性である細胞上Ｌ６−ｂＬにより活性化され得る。 １．２．３ 生体内研究 裸のマウスにおけるポリマー調製品の細胞毒性を、ドキ
ソルビシンのそれと比較した。単一の静脈内注射後ドキ
ソルビシンの最大耐性用量（２０％未満の体重減少を与
え、そして死を与えない薬物用量として定義され、そし
てこの用量は２０％超の体重減少および／又は死をもた
らす用量の３０％以内である）は１kgの体重当たり１
３．８μmol （８mg／kg）であった。ポリマーに対する
最大耐性用量は決定されていないけれども、体重減少又
は長期毒性なしで５２μmol/kgのＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄ
ｏｘおよびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘを安全に投与する
ことは可能であった。動物によっては、ポリマーで処理
後、直ちに相当の不安を経験した。これは注射される溶
液の非等張性に最も起因するものであった、何故なら同
等の用量の遊離ＰＥＧは同じく直ちの応答を引き出すか
らである。ポリマーの腹腔内注射は、この問題をうまく
処理するが、しかしその後の研究は静脈内投与を用いて
行なわれた；何故ならこれはドキソルビシンの通常の投
与形式だからである。
がＬ６−ｂＬに暴露前に未修飾Ｌ６ｍＡｂで飽和された
Ｈ２９８１細胞について増加しないという事実によって
明らかにされるように免疫学的に特異的方法で生起し
た。加えて、Ｐ１．１７−ｂＬはＨ２９８１細胞上でＢ
−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの活性に影響しなかった。共に
考慮すると、これらの研究はＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ
およびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの双方は、比較的非毒
性ドキソルビシンプロドラッグでありこれはＬ６抗原陽
性である細胞上Ｌ６−ｂＬにより活性化され得る。 １．２．３ 生体内研究 裸のマウスにおけるポリマー調製品の細胞毒性を、ドキ
ソルビシンのそれと比較した。単一の静脈内注射後ドキ
ソルビシンの最大耐性用量（２０％未満の体重減少を与
え、そして死を与えない薬物用量として定義され、そし
てこの用量は２０％超の体重減少および／又は死をもた
らす用量の３０％以内である）は１kgの体重当たり１
３．８μmol （８mg／kg）であった。ポリマーに対する
最大耐性用量は決定されていないけれども、体重減少又
は長期毒性なしで５２μmol/kgのＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄ
ｏｘおよびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘを安全に投与する
ことは可能であった。動物によっては、ポリマーで処理
後、直ちに相当の不安を経験した。これは注射される溶
液の非等張性に最も起因するものであった、何故なら同
等の用量の遊離ＰＥＧは同じく直ちの応答を引き出すか
らである。ポリマーの腹腔内注射は、この問題をうまく
処理するが、しかしその後の研究は静脈内投与を用いて
行なわれた；何故ならこれはドキソルビシンの通常の投
与形式だからである。
【０１３６】腫瘍取込みおよび血液浄化値が皮下３６７
７ヒトメラノーマ腫瘍を有する裸のマウスにおいて行っ
た。腫瘍が約２００mm3 容量である時点において、ドキ
ソルビシン（１５．５μmol/kg）、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−
Ｄｏｘ（５２μmol/kg）、又はＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏ
ｘ（５２μmol/kg）のドキソルビシンの静脈内注射を動
物に与えた。血液および腫瘍を種々の時点で除去し、そ
してＨＰＬＣ分析を用い抽出されたサンプル内の注射さ
れる物質の濃度を測定した。校正曲線は、種々の濃度の
遊離ドキソルビシン、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ、又は
Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘを入れた数種の腫瘍および血
液サンプルから得られた。抽出されたサンプルはどれも
検出可能レベルのＡｃ−Ｄｏｘを含有せず、セファロス
ポリン７−アミノ基とＰＥＧ上の末端カルボキシ基間の
アミド結合は安定であることを示す。
７ヒトメラノーマ腫瘍を有する裸のマウスにおいて行っ
た。腫瘍が約２００mm3 容量である時点において、ドキ
ソルビシン（１５．５μmol/kg）、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−
Ｄｏｘ（５２μmol/kg）、又はＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏ
ｘ（５２μmol/kg）のドキソルビシンの静脈内注射を動
物に与えた。血液および腫瘍を種々の時点で除去し、そ
してＨＰＬＣ分析を用い抽出されたサンプル内の注射さ
れる物質の濃度を測定した。校正曲線は、種々の濃度の
遊離ドキソルビシン、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ、又は
Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘを入れた数種の腫瘍および血
液サンプルから得られた。抽出されたサンプルはどれも
検出可能レベルのＡｃ−Ｄｏｘを含有せず、セファロス
ポリン７−アミノ基とＰＥＧ上の末端カルボキシ基間の
アミド結合は安定であることを示す。
【０１３７】Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの血液レベル
は、試験した全ての時点に対しＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏ
ｘよりより高かった（図４Ａ）。これは、Ｍ−ＰＥＧ−
ＡＣ−Ｄｏｘに比較してＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘのよ
り遅い血液浄化率に大部分起因する。測定されたプラズ
マドキソルビシンの最高レベル、１５分で０．６４nmol
／ｇはポリマーレベルよりも実質的に低かった。図４Ａ
中のドキソルビシンレベルは、既に報告された薬力学的
研究を一致しておりこの研究はドキソルビシンがマウス
において２分の初期半減期を有することを示した、ボス
レット、Ｋ．、等、（１９９４）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．５４，２１５１−２１５９。
は、試験した全ての時点に対しＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏ
ｘよりより高かった（図４Ａ）。これは、Ｍ−ＰＥＧ−
ＡＣ−Ｄｏｘに比較してＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘのよ
り遅い血液浄化率に大部分起因する。測定されたプラズ
マドキソルビシンの最高レベル、１５分で０．６４nmol
／ｇはポリマーレベルよりも実質的に低かった。図４Ａ
中のドキソルビシンレベルは、既に報告された薬力学的
研究を一致しておりこの研究はドキソルビシンがマウス
において２分の初期半減期を有することを示した、ボス
レット、Ｋ．、等、（１９９４）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．５４，２１５１−２１５９。
【０１３８】従って、以下の内容は驚くべきことでなか
った；すなわち遊離ドキソルビシンはＰＥＧ−ＡＣ−Ｄ
ｏｘポリマーで処理されたマウスから得られたプラズマ
において検出されなかった。長期のプラズマの半減期を
有することに加えて、Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘは、Ｍ
−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘよりもより大きい程度まで３６
７７腫瘍において保持された（図４Ｂ）。Ｂ−ＰＥＧ−
ＡＣ−Ｄｏｘの最高の腫瘍内レベルが注射後３０分に得
られ、そして実質的レベルが、注射後４時間に未だ存在
していた。４時間の測定にわたって、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ
−Ｄｏｘに対する曲線下の面積は、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−
Ｄｏｘのそれよりも２．１倍より高かった。以下の内容
は注目すべきである；すなわち腫瘍内ドキソルビシン
は、ドキソルビシンを投与されたマウスにおいて全く低
かった。最大ドキソルビシンレベル、注射後３０分で
１．４１nmol／ｇは、試験した全ての時点でポリマー濃
度よりもはるかに低かった。従って、両ポリマーは全身
ドキソルビシン処理と比較して拡大された期間にわたっ
て腫瘍内ドキソルビシン当量の実質的より多い量を放出
する。
った；すなわち遊離ドキソルビシンはＰＥＧ−ＡＣ−Ｄ
ｏｘポリマーで処理されたマウスから得られたプラズマ
において検出されなかった。長期のプラズマの半減期を
有することに加えて、Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘは、Ｍ
−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘよりもより大きい程度まで３６
７７腫瘍において保持された（図４Ｂ）。Ｂ−ＰＥＧ−
ＡＣ−Ｄｏｘの最高の腫瘍内レベルが注射後３０分に得
られ、そして実質的レベルが、注射後４時間に未だ存在
していた。４時間の測定にわたって、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ
−Ｄｏｘに対する曲線下の面積は、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ−
Ｄｏｘのそれよりも２．１倍より高かった。以下の内容
は注目すべきである；すなわち腫瘍内ドキソルビシン
は、ドキソルビシンを投与されたマウスにおいて全く低
かった。最大ドキソルビシンレベル、注射後３０分で
１．４１nmol／ｇは、試験した全ての時点でポリマー濃
度よりもはるかに低かった。従って、両ポリマーは全身
ドキソルビシン処理と比較して拡大された期間にわたっ
て腫瘍内ドキソルビシン当量の実質的より多い量を放出
する。
【０１３９】従って、新規ポリマーセファロスポリンプ
ロドラッグおよびそれらの使用方法が開示された。本発
明の好ましい態様が詳細に記載されたけれども、添付さ
れた請求の範囲によって定義される如き発明の精神およ
び範囲から離れることなく明らかな変形をなし得ること
は理解されるべきである。
ロドラッグおよびそれらの使用方法が開示された。本発
明の好ましい態様が詳細に記載されたけれども、添付さ
れた請求の範囲によって定義される如き発明の精神およ
び範囲から離れることなく明らかな変形をなし得ること
は理解されるべきである。
【図１】図１は、βラクタマーゼによる薬物放出の機構
である。
である。
【図２】図２は、ＰＥＧ−ＡＣ−ＤｏｘサンプルのＨＰ
ＬＣ分析結果を示すグラフである。ＡはＭ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘについての分析グラフであり、ＢはＢ−ＰＥ
Ｇ−ＡＣ−Ｄｏｘについての分析グラフであり、ＣはＭ
−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ＋ｂＬ（実線）、Ｄｏｘ（点
線）についての分析グラフであり、ＤはＢ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘ＋ｂＬ（実線）、ドキソルビシン（点線）に
ついての分析グラフである。略記号の意味に対して実施
例部分を参照のこと。
ＬＣ分析結果を示すグラフである。ＡはＭ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘについての分析グラフであり、ＢはＢ−ＰＥ
Ｇ−ＡＣ−Ｄｏｘについての分析グラフであり、ＣはＭ
−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ＋ｂＬ（実線）、Ｄｏｘ（点
線）についての分析グラフであり、ＤはＢ−ＰＥＧ−Ａ
Ｃ−Ｄｏｘ＋ｂＬ（実線）、ドキソルビシン（点線）に
ついての分析グラフである。略記号の意味に対して実施
例部分を参照のこと。
【図３】図３は、未処理対照細胞と比較してＤＮＡに〔
3Ｈ〕チミジンを取込ませることにより測定し、Ｈ２９
８１肺腺癌細胞に対するＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘサンプル
±ｍＡｂ−ｂＬコンジュゲートの細胞毒効果を示すグラ
フである。Ａは、細胞がＬ６−ｂＬにさらされ、洗浄さ
れ次いでＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘで１時間処理した。
細胞毒作用を約２４時間後に測定したグラフである。Ｂ
は、細胞をコンジュゲートにさらし、洗浄し次いでＢ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘで２時間処理したグラフである。
3Ｈ〕チミジンを取込ませることにより測定し、Ｈ２９
８１肺腺癌細胞に対するＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘサンプル
±ｍＡｂ−ｂＬコンジュゲートの細胞毒効果を示すグラ
フである。Ａは、細胞がＬ６−ｂＬにさらされ、洗浄さ
れ次いでＭ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘで１時間処理した。
細胞毒作用を約２４時間後に測定したグラフである。Ｂ
は、細胞をコンジュゲートにさらし、洗浄し次いでＢ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘで２時間処理したグラフである。
【図４】図４は、皮下３６７７ヒト腫瘍異種移殖片を有
する裸のマウスにおけるＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘサンプル
およびドキソルビシンの薬力学を示すグラフである。腫
瘍および血液サンプルを抽出し、次いでプロドラッグお
よび薬物の量をＨＰＬＣにより定量した。Ａは、静脈内
プロドラッグ注射（５２μmol/kg後、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ
−ＤｏｘおよびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの血液レベル
を示すグラフである。結果を、１５．５μmol/kgのドキ
ソルビシンの投与を受けた動物におけるドキソルビシン
レベルと比較する。Ｂは、静脈内注射（５２μmol ポリ
マー／kg，１５．５μmol フリーＤｏｘ／kg）後、Ｍ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ，Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘおよ
びドキソルビシンの腫瘍レベルを示すグラフである。
する裸のマウスにおけるＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘサンプル
およびドキソルビシンの薬力学を示すグラフである。腫
瘍および血液サンプルを抽出し、次いでプロドラッグお
よび薬物の量をＨＰＬＣにより定量した。Ａは、静脈内
プロドラッグ注射（５２μmol/kg後、Ｍ−ＰＥＧ−ＡＣ
−ＤｏｘおよびＢ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘの血液レベル
を示すグラフである。結果を、１５．５μmol/kgのドキ
ソルビシンの投与を受けた動物におけるドキソルビシン
レベルと比較する。Ｂは、静脈内注射（５２μmol ポリ
マー／kg，１５．５μmol フリーＤｏｘ／kg）後、Ｍ−
ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘ，Ｂ−ＰＥＧ−ＡＣ−Ｄｏｘおよ
びドキソルビシンの腫瘍レベルを示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 501/18 9164−4Ｃ Ｃ０７Ｄ 501/18 519/06 Ｃ０７Ｈ 15/252 Ｃ０７Ｈ 15/252 Ｃ０７Ｄ 519/00 ３８１
Claims (24)
- 【請求項１】 次式 【化１】 ｛式中、Ｑは医薬として許容され得るポリマー部分であ
り、Ｇは−ＮＨ−であるか又は次式 【化２】 （式中、Ｌは直接結合又は−Ｓ−（ＣＨ2 ）n −であ
り、ｎは２，３又は４であり；そしてｍは０又は１であ
り、但しＬが直接結合であるとき、ｍは１である）から
成り、 Ｒはセファロスポリンプロドラッグから放出されるとき
腫瘍細胞に対して細胞毒作用を発現することのできる物
質である｝を有するポリマーセファロスポリンプロドラ
ッグ、又はその医薬として許容し得る塩。 - 【請求項２】 次式 【化３】 （式中、ＮＲa は窒素含有細胞毒物質であり；Ｑ，Ｌお
よびＭは請求項１で定義された意味と同じである）を有
する請求項１記載のポリマーセファロスポリンプロドラ
ッグ、又はその医薬として許容し得る塩。 - 【請求項３】 Ｒがエトポシド、テニポシド、ドキソル
ビシン、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプ
テリン、ナイトロジエンマスタード、ダクチノマイシ
ン、マイトマイシン、シス−プラチナムおよびシス−プ
ラチナム類似体、ブレオマイシン、エスペラミシンおよ
び５−フルオロウラシルから成る群から選ばれる、請求
項１記載のポリマーセファロスポリンプロドラッグ。 - 【請求項４】 ＮＲa がナイトロジエンマスタード、マ
イトマイシンＣ又はドキソルビシンである、請求項２記
載のポリマーセファロスポリンプロドラッグ。 - 【請求項５】 次式 【化４】 （式中、Ｑは請求項１で定義された意味と同じである）
を有する、請求項１記載のポリマーセファロスポリンプ
ロドラッグ、又はその医薬として許容し得る塩。 - 【請求項６】 Ｑが、ポリエチレングリコール、分枝鎖
ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールコポ
リマー、デキストラン、ヒドロキシプロピルメタクリル
アミド、ポリ（スチレン−コ−マレイン酸）、ポリガラ
クツロン酸、カルボキシメチル化β−Ｄ−グルカン、Ｎ
−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリルアミドコポ
リマー、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）メタアクリレー
トビニルピロリドンコポリマー、ポリ（ヒドロキシエチ
ル−Ｌ−グルタミン），ポリ（α−マレイン酸）、ポリ
アミノ酸、およびポリ（エチレンイミン）とバルミチン
酸のブロックコポリマーである、請求項１記載のポリマ
ーセファロスポリンプロドラッグ。 - 【請求項７】 Ｑが次式 【化５】 （式中、Ｒ′はＨ又はＣ1 −Ｃ4 アルキルでありそして
ｎは４〜１０００の整数である）を有するポリエチレン
グリコール化合物の所望により修飾されたポリマー残基
である、請求項１記載のポリマーセファロスポリンプロ
ドラッグ。 - 【請求項８】 Ｒ′がＨ又はメチルでありそしてｎが１
０〜５００又は５０〜２００の整数である、請求項７記
載のポリマーセファロスポリンプロドラッグ。 - 【請求項９】 Ｑが次式 【化６】 （式中、Ｒ″はポリアルコールの残基である２〜１２個
の炭素原子を含有する炭化水素骨格であり、ｎは４〜５
００の整数でありそしてｘは２〜１２の整数である）を
有する分枝鎖ポリエチレングリコール化合物の所望によ
り修飾されたポリマー残基である、請求項１記載のポリ
マーセファロスポリンプロドラッグ。 - 【請求項１０】 ｎが１０〜４００又は５０〜２００の
整数でありそしてｘが４〜１０の整数である、請求項９
記載のポリマーセファロスポリンプロドラッグ。 - 【請求項１１】 次式 【化７】 （式中、Ｑは所望により修飾されたポリエチレングリコ
ール又は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレングリ
コールのポリマー残基であり；そしてＬおよびｍは請求
項１で定義された意味と同じである）を有する、請求項
２記載のポリマーセファロスポリンプロドラッグ、又は
その医薬として許容し得る塩。 - 【請求項１２】 次式 【化８】 ｛式中、Ｑは所望により修飾されたポリエチレングリコ
ール又は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレングリ
コールのポリマー残基であり、ここにおいて所望により
修飾されたポリエチレングリコールの残基は次式 【化９】 （式中、Ｒ′はＨ又はＣ1 −Ｃ4 アルキルでありそして
ｎは１０〜５００の整数である）を有し、そして所望に
より修飾された分枝鎖ポリエチレングリコールの残基は
次式 【化１０】 （式中、Ｒ″はポリアルコールの残基である２〜１２個
の炭素原子を含有する炭化水素骨格であり、ｎは１０〜
４００の整数であり、そしてｘは４〜１０の整数であ
る）を有する｝を有する、請求項２記載のポリマーセフ
ァロスポリンプロドラッグ、又はその医薬として許容し
得る塩。 - 【請求項１３】 次式 【化１１】 （式中、Ｑは所望により修飾されたポリエチレングリコ
ール又は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレングリ
コールのポリマー残基であり；そしてＬおよびｍは請求
項１で定義された意味と同じであり、ここにおいて所望
により修飾されたポリエチレングリコールの残基は次式 【化１２】 （式中、Ｒ′はＨ又はメチルでありそしてｎは１０〜５
００の整数である）を有し、そして所望により修飾され
た分枝鎖ポリエチレングリコールの残基は次式 【化１３】 （式中、Ｒ″はポリアルコールの残基である２〜１２個
の炭素原子を含有する炭化水素骨格であり、ｎは１０〜
５００の整数であり、そしてｘは４〜１０の整数であ
る）を有する｝を有する、請求項２記載のポリマーセフ
ァロスポリンプロドラッグ、又はその医薬として許容し
得る塩。 - 【請求項１４】 次式 【化１４】 ｛式中、Ｑは所望により修飾されたポリエチレングリコ
ール又は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレングリ
コールのポリマー残基であり、ここにおいて所望により
修飾されたポリエチレングリコールの残基は次式 【化１５】 （式中、Ｒ′はＨ又はメチルでありそしてｎは１０〜５
００の整数である）を有し、そして所望により修飾され
た分枝鎖ポリエチレングリコールの残基は次式 【化１６】 （式中、Ｒ″はポリアルコールの残基である２〜１２個
の炭素原子を含有する炭化水素骨格であり、ｎは１０〜
５００の整数であり、そしてｘは４〜１０の整数であ
る）を有する｝を有する、請求項２記載のポリマーセフ
ァロスポリンプロドラッグ、又はその医薬として許容し
得る塩。 - 【請求項１５】 次式 【化１７】 ｛式中、Ｑは所望により修飾されたポリエチレングリコ
ール又は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレングリ
コールのポリマー残基であり；ここにおいて所望により
修飾されたポリエチレングリコールの残基は次式 【化１８】 （式中、Ｒ′はＨ又はメチルでありそしてｎは１０〜５
００の整数である）を有し、そして所望により修飾され
た分枝鎖ポリエチレングリコールの残基は次式 【化１９】 （式中、Ｒ″はポリアルコールの残基である２〜１２個
の炭素原子を含有する炭化水素骨格であり、ｎは１０〜
５００の整数であり、そしてｘは４〜１０の整数であ
る）を有する｝を有する、請求項２記載のポリマーセフ
ァロスポリンプロドラッグ、又はその医薬として許容し
得る塩。 - 【請求項１６】 次式 【化２０】 （式中、Ｒd は水素又はＣ1 −Ｃ3 アルキルでありそし
てＱは所望により修飾されたポリエチレングリコール又
は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレングリコール
のポリマー残基である）を有する、ポリマーセファロス
ポリンプロドラッグ、又はその医薬として許容し得る
塩。 - 【請求項１７】 Ｒd が水素でありそしてＱは次式： 【化２１】 （式中、Ｒ′は水素又はメチルでありそしてｎは１０〜
５００の整数である）で表わされる所望により修飾され
たポリエチレングリコールの残基であるか、又は次式： 【化２２】 （式中、Ｒ″ポリアルコールの残基である２〜１２個の
炭素原子を含有する炭化水素骨格であり、ｎは１０〜５
００の整数であり、そしてｘは４〜１０の整数である）
で表わされる所望により修飾された分枝鎖ポリエチレン
グリコールの残基である、請求項１６記載のポリマーセ
ファロスポリンプロドラッグ。 - 【請求項１８】 哺乳動物の腫瘍の治療方法であって、
少なくとも１種の抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲー
トの医薬として有効な量および請求項１〜１７のいずれ
か１項に記載の少なくとも１種のプロドラッグの医薬と
して有効な量を、腫瘍の治療を必要とする哺乳動物に投
与する工程を含んでなる、前記方法。 - 【請求項１９】 腫瘍細胞に細胞毒物質をデリバリーす
るための方法であって、 少なくとも１種の抗体−β−ラクタマーゼコンジュゲー
トの医薬として有効な量を投与し（ここで該抗体は該腫
瘍細胞の表面上で抗原と反応する）；次いで請求項１〜
１７のいずれか１項に記載のポリマーセファロスポリン
のプロドラッグの医薬として有効な量を投与し、 これにより該細胞毒物質をデリバリーすることを含んで
なる、前記方法。 - 【請求項２０】 前記抗体が、ポリクローナル、モノク
ローナル、又はキメラ抗体から成る群から選ばれ、そし
て前記細胞毒物質が、ドキソルビシン、マイトマイシン
Ｃ、およびナイトロジエンマスタードから選ばれる、請
求項１９記載の方法。 - 【請求項２１】 前記ポリマーセファロスポリンプロド
ラッグが、次の一般式： 【化２３】 ｛式中、Ｑは所望により修飾されたポリエチレングリコ
ール又は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレングリ
コールの残基であり、ここにおいて所望により修飾され
たポリエチレングリコールの残基は次式 【化２４】 （式中、Ｒ′はＨ又はメチルでありそしてｎは１０〜５
００の整数である）を有し、そして所望により修飾され
た分枝鎖ポリエチレングリコールの残基は次式 【化２５】 （式中、Ｒ″はポリアルコールの残基である２〜１２個
の炭素原子を含有する炭化水素骨格であり、ｎは１０〜
５００の整数であり、そしてｘは４〜１０の整数であ
る）を有する｝を有するか又はその医薬として許容し得
る塩を有する、請求項２０記載の方法。 - 【請求項２２】 前記ポリマーセファロスポリンプロド
ラッグが、 【化２６】 又は 【化２７】 又は 【化２８】 （前記式中、Ｑは所望により修飾されたポリエチレング
リコール又は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレン
グリコールの残基である）であるか、又はその医薬とし
て許容し得る塩である、請求項２０記載の方法。 - 【請求項２３】 前記ポリマーセファロスポリンプロド
ラッグが、次式： 【化２９】 （式中、Ｒd は水素又はＣ1 −Ｃ3 アルキルであり、そ
してＱは所望により修飾されたポリエチレングリコール
又は所望により修飾された分枝鎖ポリエチレングリコー
ルの残基である）を有するか、又はその医薬として許容
し得る塩を有する、請求項２０記載の方法。 - 【請求項２４】 腫瘍細胞に細胞毒物質をデリバリーす
る方法であって、 β−ラクタマーゼの少なくとも官能的に活性な部分に結
合した腫瘍−関連抗原と反応性である抗体の少なくとも
抗原結合領域を含んでなる少なくとも１種の融合タンパ
ク質の医薬的に有効な量を投与し；次いでポリマーセフ
ァロスポリンプロドラッグの医薬として有効な量を投与
することを含んでなる、前記方法。
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-
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