JPH08291124A - New physiologically active substance hydrostatin a and its production and use - Google Patents
New physiologically active substance hydrostatin a and its production and useInfo
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- JPH08291124A JPH08291124A JP7094023A JP9402395A JPH08291124A JP H08291124 A JPH08291124 A JP H08291124A JP 7094023 A JP7094023 A JP 7094023A JP 9402395 A JP9402395 A JP 9402395A JP H08291124 A JPH08291124 A JP H08291124A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明はロイシンアミノペプチダ
ーゼに対する阻害活性を有する新規な生理活性物質であ
るヒドロスタチンＡに関し、またそれの製造法およびそ
の用途に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to hydrostatin A which is a novel physiologically active substance having an inhibitory activity against leucine aminopeptidase, and a production method thereof and its use.
【０００２】[0002]
【従来の技術】ロイシンアミノペプチダーゼは哺乳動物
の細胞質などに存在する酵素である。また、ロイシンア
ミノペプチダーゼは、鎮痛作用を有するニューロメジン
Ｎを基質としてこれを分解することが報告されている
（文献：B.Vincent, J.Vincent,F.Checler 「European
Journal of Biochemistry」 221巻、 297頁、1994
年）。したがって、ロイシンアミノペプチダーゼに対す
る酵素阻害活性を有する物質は、鎮痛作用ならびに降圧
作用などに関与する生体内におけるペプチドホルモンの
分解を阻害して、ペプチドホルモンを調節する作用を示
すことが期待される。Leucine aminopeptidase is an enzyme existing in the cytoplasm of mammals. In addition, leucine aminopeptidase has been reported to decompose neuromedin N, which has an analgesic effect, as a substrate (Reference: B. Vincent, J. Vincent, F. Checler “European”).
Journal of Biochemistry "221, 297, 1994
Year). Therefore, a substance having an enzyme inhibitory activity against leucine aminopeptidase is expected to exhibit an action of regulating the peptide hormone by inhibiting the degradation of the peptide hormone in the body involved in the analgesic action and the hypotensive action.
【０００３】ロイシンアミノペプチダーゼを阻害する物
質としてはベスタチンおよびアクチノニン等が知られて
いる。Bestatin and actinonine are known as substances that inhibit leucine aminopeptidase.
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】ベスタチンおよびアク
チノニン等の酵素阻害物質はロイシンアミノペプチダー
ゼに対する作用の特異性が低い。したがって、ロイシン
アミノペプチダーゼに対する作用の特異性の高い酵素阻
害物質が望まれている。本発明の目的は、そのような特
異性の高いロイシンアミノペプチダーゼ阻害作用を有す
る新規な生理活性物質、その製造法およびその用途を提
供することにある。Enzyme inhibitors such as bestatin and actinonine have low specificity of action on leucine aminopeptidase. Therefore, an enzyme inhibitor having a high specificity of action on leucine aminopeptidase is desired. An object of the present invention is to provide a novel physiologically active substance having such a highly specific leucine aminopeptidase inhibitory action, a method for producing the same, and a use thereof.
【０００５】[0005]
【課題を解決するための手段】上記の目的のために、本
発明者らは研究を行った。その結果、東京都小笠原村、
父島の土壌試料から分離されたＭＫ７−ＮＦ１株と菌株
番号を付された放線菌菌株の培養液中にロイシンアミノ
ペプチダーゼに対する阻害活性を有する物質が産生され
ていることを発見した。さらにこの物質を単離すること
に成功して、ロイシンアミノペプチダーゼ阻害活性を有
することを確認した。そして、本発明者らは、この物質
の化学構造を決定して新規な化合物であることを認め、
ヒドロスタチンＡ（hydrostatin Ａ）と命名した。更
に、ヒドロスタチンＡはそのカルボキシル基においてア
ルカリ金属またはアルカリ土類金属との塩を形成できる
こと、およびそのアミノ基において各種の無機酸または
有機酸との酸付加塩を形成できることも見出した。For the above-mentioned purpose, the present inventors have conducted research. As a result, Ogasawara Village, Tokyo,
It was discovered that a substance having inhibitory activity against leucine aminopeptidase was produced in the culture solution of the MK7-NF1 strain isolated from a soil sample of Chichijima and the actinomycete strain with the strain number. Furthermore, we succeeded in isolating this substance and confirmed that it has leucine aminopeptidase inhibitory activity. And the present inventors have determined that the chemical structure of this substance is a novel compound,
It was named hydrostatin A. Furthermore, it was also found that hydrostatin A can form a salt with an alkali metal or an alkaline earth metal at its carboxyl group, and can form an acid addition salt with various inorganic or organic acids at its amino group.
【０００６】従って、第１の本発明においては、次の一
般式（Ｉ）： で表わされる化合物である生理活性物質ヒドロスタチン
Ａおよびその薬学的に許容し得る塩を提供するものであ
る。Therefore, in the first aspect of the present invention, the following general formula (I): The present invention provides a physiologically active substance, hydrostatin A, which is a compound represented by: and pharmaceutically acceptable salts thereof.
【０００７】ヒドロスタチンＡはその薬学的に許容し得
る塩の形態であってもよく、このような塩としては、例
えばナトリウム、カリウム、リチウムなどのアルカリ金
属およびカルシウムなどのアルカリ土類金属またはアン
モニウム基等との塩が挙げられる。また、ヒドロスタチ
ンＡの塩は、塩酸、硫酸のような無機酸、あるいは酢
酸、プロピオン酸、クエン酸、メタンスルホン酸のよう
な有機酸との酸付加塩も包含する。Hydrostatin A may be in the form of its pharmaceutically acceptable salts, such salts including, for example, alkali metals such as sodium, potassium, lithium and alkaline earth metals such as calcium or ammonium. Examples thereof include salts with groups and the like. The salt of hydrostatin A also includes an acid addition salt with an inorganic acid such as hydrochloric acid or sulfuric acid, or an organic acid such as acetic acid, propionic acid, citric acid or methanesulfonic acid.
【０００８】ヒドロスタチンＡの理化学的性質は下記の
通りである。 (1) 色及び形状：白色粉末 (2) 分子式：Ｃ13Ｈ26Ｎ2 Ｏ4 (3) 分子量：274〔FAB-MS：ｍ/ｚ 275（Ｍ+Ｈ）+、ｍ/
ｚ 273（Ｍ-Ｈ）-〕 (4) 融点： 215〜 217℃ (5) 紫外線吸収スペクトル：添付図面の図１に示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：添付図面の図２に示す。 (7) 水素核磁気共鳴スペクトル：添付図面の図３に示
す。 (8) 炭素核磁気共鳴スペクトル：添付図面の図４に示
す。The physicochemical properties of hydrostatin A are as follows. (1) Color and shape: white powder (2) Molecular formula: C 13 H 26 N 2 O 4 (3) Molecular weight: 274 [FAB-MS: m / z 275 (M + H) + , m /
z 273 (M−H) − ] (4) Melting point: 215 to 217 ° C. (5) Ultraviolet absorption spectrum: shown in FIG. 1 of the accompanying drawings. (6) Infrared absorption spectrum: shown in FIG. 2 of the accompanying drawings. (7) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum: shown in FIG. 3 of the accompanying drawings. (8) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum: shown in FIG. 4 of the accompanying drawings.
【０００９】(9) 溶解性：メタノール、水に可溶であ
り、ジメチスルスルホキシドに不溶である。 (10) 薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：0.53 シリカゲル（メルク社製Art.5715）薄層を用い、展開溶
媒としてブタノール−酢酸−水（２：１：１）を用いて
測定した。(9) Solubility: Soluble in methanol and water, but insoluble in dimethisyl sulfoxide. (10) Rf value of thin layer chromatography: 0.53 It was measured using a silica gel (Art.5715, manufactured by Merck & Co., Inc.) thin layer and butanol-acetic acid-water (2: 1: 1) as a developing solvent.
【００１０】更に、本発明のヒドロスタチンＡまたはそ
の薬学的に許容し得る塩は、後記の試験例１に示すよう
にロイシンアミノペプチダーゼを阻害する活性を有す
る。このことにより生体内の基質であるニューロメジン
Ｎの分解を阻害することが知見された。ニューロメジン
Ｎがロイシンアミノペプチダーゼで分解されるのを阻害
することは、ニューロメジンＮのもつ鎮痛作用を持続お
よび増強させる効果を有する。従って、ヒドロスタチン
Ａまたはその薬学的に許容し得る塩は鎮痛剤、あるいは
ニューロメジンＮの鎮痛作用増強剤として利用できると
期待される。Further, the hydrostatin A of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof has an activity of inhibiting leucine aminopeptidase as shown in Test Example 1 described later. This has been found to inhibit the degradation of neuromedin N, which is a substrate in the body. Inhibiting the degradation of neuromedin N by leucine aminopeptidase has the effect of sustaining and enhancing the analgesic effect of neuromedin N. Therefore, it is expected that hydrostatin A or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used as an analgesic agent or a neuromedin N analgesic effect enhancer.
【００１１】ヒドロスタチンＡは細菌、酵母およびカビ
に対する抗菌活性を殆んど示さない。また、ヒドロスタ
チンＡの急性毒性は低く、ヒドロスタチンＡをマウスに
腹腔内投与してその毒性を調べたところ、 100mg／kg投
与でも毒性を示さなかった。Hydrostatin A shows little antibacterial activity against bacteria, yeasts and molds. Further, the acute toxicity of hydrostatin A was low, and when the toxicity of hydrostatin A was intraperitoneally administered to mice and examined, the toxicity was not shown even at 100 mg / kg.
【００１２】以下に、ヒドロスタチンＡがロイシンアミ
ノペプチダーゼ阻害活性を有することを試験例１により
示し、また抗菌活性を殆んどもたないことを試験例２に
より示す。Test Example 1 shows that Hydrostatin A has leucine aminopeptidase inhibitory activity, and Test Example 2 shows that it has almost no antibacterial activity.
【００１３】試験例１ ヒドロスタチンＡのロイシンアミノペプチダーゼ阻害活
性 ロイシンアミノペプチダーゼ阻害活性は、 Hopusらの方
法（文献：V.K.Hopus,Makinen, G.G.Glenner,「Archive
s of Biochmistry and Biophysics」 114巻、557頁、19
66年）を改良して用いた。即ち、２ｍＭ ロイシル−β
−ナフチルアミド 0.050ml、 0.1Ｍ トリス−塩酸緩衝
液(pH7.5)0.1ml、検体としてヒドロスタチンＡを含む水
溶液 0.035mlを加えた混合溶液を37℃、５分間加温した
後、ブタ腎臓由来のロイシンアミノペプチダーゼ（シグ
マ社製）溶液 0.015mlを加え、37℃、１時間反応させ
た。反応後、10％ポリオキシエチレン(20)ソルビターン
モノウレート（和光純薬工業製）及び 0.2％ファースト
ガーネットＧＢＣ塩（シグマ社製）を含む 0.5Ｍクエン
酸ナトリウム緩衝液(pH3.75)を 0.1ml加えて反応を停止
し、525 nmにおける吸光度(a) を測定した。同時に検体
を含まない緩衝液のみを用いた盲検の吸光度(b) を測定
し、ロイシンアミノペプチダーゼ阻害率を計算式〔（ｂ
−ａ）／ｂ〕×100 により計算した。50％阻害率を示す
検体の濃度をIC50の値とした。この定量法によると、純
粋なヒドロスタチンＡは 0.1μｇ／mlの濃度でロイシン
アミノペプチダーゼを50％阻害した。 Test Example 1 Leucine aminopeptidase inhibitory activity of hydrostatin A The leucine aminopeptidase inhibitory activity was determined by the method of Hopus et al. (Reference: VKHopus, Makinen, GG Glenner, “Archive”).
s of Biochmistry and Biophysics "114, 557, 19
66) was used after being modified. That is, 2 mM leucyl-β
-Naphthylamide 0.050 ml, 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 7.5) 0.1 ml, and a mixed solution containing 0.035 ml of an aqueous solution containing hydrostatin A as a specimen were heated at 37 ° C for 5 minutes and then derived from pig kidney. 0.015 ml of a leucine aminopeptidase (manufactured by Sigma) solution was added, and the mixture was reacted at 37 ° C. for 1 hour. After the reaction, 0.5M sodium citrate buffer (pH 3.75) containing 10% polyoxyethylene (20) sorbitan monoureate (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) and 0.2% fast garnet GBC salt (manufactured by Sigma) was used. The reaction was stopped by adding 0.1 ml, and the absorbance (a) at 525 nm was measured. At the same time, the absorbance (b) of the blind test using only the buffer solution containing no sample was measured, and the leucine aminopeptidase inhibition rate was calculated by the formula [(b
-A) / b] × 100. The concentration of the sample showing a 50% inhibition rate was defined as the value of IC 50 . According to this assay, pure hydrostatin A inhibited leucine aminopeptidase by 50% at a concentration of 0.1 μg / ml.
【００１４】試験例２ ヒドロスタチンＡの抗菌活性 寒天培地を用いて標準の倍数希釈法で測定したときの本
発明のヒドロスタチンＡの細菌、酵母およびカビに対す
る最小発育阻止濃度（ＭＩＣ，μｇ／ml）を表１に示し
た。 Test Example 2 Antibacterial activity of hydrostatin A The minimum inhibitory concentration (MIC, μg / ml) of hydrostatin A of the present invention on bacteria, yeast and mold when measured by a standard multiple dilution method using agar medium. ) Is shown in Table 1.
【００１５】 [0015]
【００１６】更にまた、第２の本発明では、ストレプト
ミセス属に属するヒドロスタチンＡ生産菌を栄養培地中
で培養し、その培養物から上記一般式（Ｉ）で表わされ
る生理活性物質ヒドロスタチンＡを採取することを特徴
とする、新規生理活性物質ヒドロスタチンＡの製造法が
提供される。Furthermore, in the second aspect of the present invention, a hydrostatin A-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces is cultured in a nutrient medium, and the physiologically active substance hydrostatin A represented by the above general formula (I) is cultured from the culture. A method for producing a novel physiologically active substance, hydrostatin A, is provided, which comprises:
【００１７】本発明の方法に使用されるヒドロスタチン
Ａ生産菌の一例としては、本発明者らにより微生物化学
研究所において東京都小笠原村、父島の土壌より平成５
年８月に分離された放線菌であるストレプトミセス属 s
p.ＭＫ７−ＮＦ１（Streptomyces sp.ＭＫ７−ＮＦ１）
株がある。As an example of the hydrostatin A-producing bacterium used in the method of the present invention, the inventors of the present invention have conducted research on the soil of Chichijima, Ogasawara-mura, Tokyo at the Institute for Microbial Chemistry.
Genus Streptomyces sp.
p.MK7-NF1 (Streptomyces sp. MK7-NF1)
There are strains.
【００１８】ＭＫ７−ＮＦ１株の菌学的性状は次の通り
である。 １．形態 本ＭＫ７−ＮＦ１株は分枝した基生菌糸より気菌糸を伸
長する。また、胞子鎖の絡まった塊（直径 1.3〜 4.0ミ
クロン）が認められる。らせん形成、輪生枝及び胞子の
うは認められない。成熟した胞子鎖には50個以上の円筒
形の胞子の連鎖を認め、胞子の大きさは約 0.4〜 0.5×
0.7〜 0.8ミクロンであった。なお、胞子の平面は平滑
である。The mycological properties of the MK7-NF1 strain are as follows. 1. Morphology This MK7-NF1 strain extends aerial hyphae from branched basal hyphae. In addition, a entangled mass of spore chains (diameter 1.3 to 4.0 microns) is observed. No helix formation, limbal branch or sporangium is observed. The mature spore chain has a chain of more than 50 cylindrical spores, and the spore size is about 0.4 to 0.5 ×
It was 0.7 to 0.8 micron. The plane of spores is smooth.
【００１９】２．各種培地における生育状態 色の記載について〔 〕内に示す標準は、コンティナー
・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモ
ニー・マニュアル（Container Corporation ofAmerica
のcolor harmony manual）を用いた。2. Regarding the description of the growth state color in various media, the standard shown in [] is the Container Harmony Manual (Container Corporation of America).
Color harmony manual).
【００２０】(1) シュクロース・硝酸塩寒天培地（27℃
培養） 無色〜うす黄〔1 1/2ca, Cream〕の発育上に、白の気菌
糸をうっすらと着生し、溶解性色素は認められない。 (2) グルコース・アスパラギン寒天培地（27℃培養） 黄色〔1 1/2na, Dandelion〜1 1/2pa, Brite Yellow 〕
の発育上に、白の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素
は黄色味を帯びる。 (3) グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培地
５、27℃培養） うす黄〔1 1/2ca, Cream〜1 1/2ea, Lt Yellow〕〜明る
い黄茶〔２ic, HoneyGold〜２ne, Mustard Gold〕の発
育上に、白の粉状の気菌糸を着生する。溶解性色素は茶
色味を帯びる。 (4) スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、27℃
培養） うす黄〔1 1/2ga, Butter Yellow〜1 1/2ia, Sunlight
Yellow〕の発育上に、白〜黄味白の粉状〜綿状の気菌糸
を豊富に着生し、溶解性色素は認められない。(1) Sucrose / nitrate agar medium (27 ° C
(Culture) On the development of colorless to light yellow [1 1 / 2ca, Cream], white aerial hyphae were slightly settled and no soluble pigment was observed. (2) Glucose / asparagine agar medium (27 ° C culture) Yellow [1 1 / 2na, Dandelion ~ 1 1 / 2pa, Brite Yellow]
During development, white aerial mycelium slightly colonized, and the soluble pigment became yellowish. (3) Glycerin / asparagine agar medium (ISP-medium 5, 27 ° C culture) light yellow [1 1 / 2ca, Cream ~ 1 1 / 2ea, Lt Yellow] ~ bright yellow tea [2ic, HoneyGold ~ 2ne, Mustard Gold] White powdery aerial mycelium grows on the growth of. Soluble dyes have a brownish tinge. (4) Starch / inorganic salt agar medium (ISP-medium 4, 27 ° C)
(Culture) Light yellow (1 1 / 2ga, Butter Yellow ~ 1 1 / 2ia, Sunlight
In the development of [Yellow], white to yellowish white powdery to cottony aerial hyphae are abundantly settled, and no soluble pigment is observed.
【００２１】(5) チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７、
27℃培養） うす黄〔1 1/2ga, Butter Yellow〜1 1/2gc, Dusty Yel
low 〕〜うす黄茶〔２ia, Squash Yellow 〜２ic, Hone
y Gold〕の発育上に、白の粉状〜綿状の気菌糸を豊富に
着生する。溶解性色素は茶色味を帯びる。 (6) 栄養寒天培地（27℃培養） 無色〜うす黄〔1 1/2ca, Cream〜２ca, Lt Ivory〜１e
a, Canary Yellow 〕の発育上に、白の気菌糸をごくわ
ずかに着生し、溶解性色素は認められない。 (7) イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、27℃培
養） うす黄茶〔２ga, Colonial Yellow 〜２lc, Gold〕のし
わ状の発育上に、白〜黄味白の粉状〜綿状の気菌糸を豊
富に着生し、溶解性色素は認められない。 (8) オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、27℃培
養） 黄色〔１ia, Mimosa Yellow 〜１ 1/2ia, Sunlight Yel
low 〕の発育上に、白の気菌糸をわずかにうっすらと着
生し、溶解性色素は黄色味を帯びる。 (9) グリセリン・硝酸塩寒天培地（27℃培養） 黄色〔１la, Lemon Yellow〜１ 1/2ga, Butter Yellow
〜１ 1/2ia, SunlightYellow 〕の発育上に、白の気菌
糸をごくわずかに着生し、溶解性色素は黄色味を帯び
る。 (10) スターチ寒天培地（27℃培養） 黄色〔１ga, Lt Lemon Yellow 〜１ia, Mimosa Yellow
〜１ 1/2ia, SunlightYellow 〕の発育上に、白の気菌
糸をわずかにうっすらと着生し、溶解性色素は黄色味を
帯びる。(5) Tyrosine agar medium (ISP-medium 7,
27 ° C) Light yellow (1 1 / 2ga, Butter Yellow ~ 1 1 / 2gc, Dusty Yel
low] ~ light yellow tea [2ia, Squash Yellow ~ 2ic, Hone
y Gold] develops abundantly with white powdery to cotton-like aerial mycelia. Soluble dyes have a brownish tinge. (6) Nutrient agar medium (27 ℃ culture) Colorless to pale yellow [1 1 / 2ca, Cream to 2ca, Lt Ivory to 1e
a, Canary Yellow], a white aerial mycelium colonized only slightly and no soluble pigment was observed. (7) Yeast-malt agar medium (ISP-medium 2, 27 ° C. culture) Wrinkle-like growth of light yellow tea [2ga, Colonial Yellow to 2lc, Gold], white to yellowish white powdery to cotton-like texture It has abundant mycelium and no soluble pigment. (8) Oatmeal agar medium (ISP-medium 3, 27 ° C culture) Yellow [1ia, Mimosa Yellow ~ 1 1 / 2ia, Sunlight Yel
low a], white aerial mycelium slightly grows, and the soluble pigment becomes yellowish. (9) Glycerin / nitrate agar medium (27 ° C culture) Yellow [1la, Lemon Yellow ~ 1 1 / 2ga, Butter Yellow
~ 1 1 / 2ia, SunlightYellow], white aerial hyphae grow very slightly, and the soluble pigment takes on a yellowish tinge. (10) Starch agar medium (27 ° C culture) Yellow [1ga, Lt Lemon Yellow ~ 1ia, Mimosa Yellow
〜1 1 / 2ia, SunlightYellow], white aerial hyphae grow slightly faintly, and the soluble pigment takes on a yellowish tinge.
【００２２】３．生理的性質 (1) 生育温度範囲 スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４）を用い、
10℃、20℃、24℃、27℃、30℃、37℃、50℃の各温度で
試験した結果、10℃および50℃を除き、そのいずれの温
度でも生育する。生育至適温度は27℃〜30℃付近と思わ
れる。 (2) スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地、
ＩＳＰ−培地４及びスターチ寒天培地、いずれも27℃培
養） いずれの培地においても培養後３日目頃より水解性が認
められ、その作用は強い方である。 (3) メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・ブ
ロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天培
地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培地、ＩＳＰ−培地
７；いずれも27℃培養） いずれの培地においても陰性である。3. Physiological properties (1) Growth temperature range Using starch / inorganic salt agar medium (ISP-medium 4),
As a result of testing at each temperature of 10 ° C, 20 ° C, 24 ° C, 27 ° C, 30 ° C, 37 ° C and 50 ° C, it grows at any temperature except 10 ° C and 50 ° C. The optimum temperature for growth seems to be around 27 ° C to 30 ° C. (2) Hydrolysis of starch (starch / inorganic salt agar,
Both ISP-medium 4 and starch agar medium were cultured at 27 ° C.) Water-degradability was observed from about 3 days after culturing in any medium, and the action is strong. (3) Production of melanin-like pigment (tryptone yeast broth, ISP-medium 1; peptone yeast iron agar medium, ISP-medium 6; tyrosine agar medium, ISP-medium 7; both cultures at 27 ° C) It is also negative in the medium.
【００２３】(4) 炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリ
ーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９、27℃培養） Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、ラフィノース、Ｄ−
マンニトール、ラムノースを利用して発育し、シュクロ
ースは利用しない。Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトー
スはおそらく利用し、イノシトールの利用の存否は判然
としない。(4) Utilization of carbon source (Pridham-Gotrieve agar medium, ISP-medium 9, 27 ° C. culture) D-glucose, D-xylose, raffinose, D-
It grows using mannitol and rhamnose, but does not use sucrose. L-arabinose and D-fructose are probably used, and it is not clear whether or not inositol is used.
【００２４】(5) 硝酸塩の還元反応(0.1％硝酸カリウム
含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、27℃培養） 陽性である。(5) Nitrate reduction reaction (0.1% potassium nitrate-containing peptone water, ISP-medium 8, 27 ° C. culture) is positive.
【００２５】以上の性状を要約すると、ＭＫ７−ＮＦ１
株はその形態上、分枝した基生菌糸より直状の気菌糸を
伸長し、輪生枝及び胞子のうは認められない。また、胞
子鎖の絡まった塊が認められる。成熟した胞子鎖には50
個以上の円筒形の胞子を連鎖し、その表面は平滑であ
る。種々の培地で、うす黄〜黄色〜うす黄茶の発育上
に、白色の気菌糸を着生し、溶解性色素は黄色味を帯び
る。生育至適温度は27〜30℃付近である。メラニン様色
素の生成は陰性、スターチの水解性は強い方である。な
お、細胞壁に含まれる２，６−ジアミノピメリン酸はＬ
Ｌ−型であった。To summarize the above properties, MK7-NF1
Due to its morphology, the strain extends straight aerial hyphae from branched basal hyphae, and no limbus or sporangia are observed. In addition, entangled masses of spore chains are observed. 50 for mature spore chains
A chain of more than one cylindrical spore, the surface of which is smooth. On various mediums, white aerial mycelium grows on the development of light yellow to yellow to light yellow tea, and the soluble pigment becomes yellowish. The optimum temperature for growth is around 27-30 ° C. The formation of melanin-like pigment is negative, and the starch hydrolyzate is strong. In addition, 2,6-diaminopimelic acid contained in the cell wall is L
It was L-type.
【００２６】これらの性状よりＭＫ７−ＮＦ１株は、ス
トレプトミセス(Streptomyces)属に属すると考えられ
る。そこで近縁の既知菌種を検索したところ、ストレプ
トミセス カナマイセティカス (Streptomyces kanamy
ceticus)〔文献１：Shirling,E.B.およびD.Gottlieb「I
nternational Journal of Systematic Bacteriology」2
2巻、 310頁、1972年、及び文献２：Skerman, V.B.D.,
V.Mcgowan, およびP.H.A.A. Sneath,「International J
ournal of Systematic Bacteriology」30巻、389 頁、1
980年〕があげられた。そこで上記の当研究所保存菌株
とＭＫ７−ＮＦ１株とを実地に比較検討した。その成績
の大要を次の表２に示す。From these properties, the MK7-NF1 strain is considered to belong to the genus Streptomyces . A search for closely related known bacterial strains revealed that Streptomyces kanamyceticus
ceticus) [Reference 1: Shirling, EB and D. Gottlieb "I
nternational Journal of Systematic Bacteriology '' 2
Volume 2, page 310, 1972, and Reference 2: Skerman, VBD,
V. Mcgowan, and PHAA Sneath, `` International J
ournal of Systematic Bacteriology '' Volume 30, 389, 1
980] was given. Therefore, the above-mentioned strains preserved by this institute and the MK7-NF1 strain were actually compared and examined. The outline of the results is shown in Table 2 below.
【００２７】 [0027]
【００２８】表２から明らかなように、ＭＫ７−ＮＦ１
株とストレプトミセス・カナマイセティカスとは、胞子
の形態、メラニン様色素の生成試験、ゼラチンの液化、
硝酸塩の還元反応およびスターチの加水分解試験ではよ
く一致した性状を示した。しかし、気菌糸の色調、脱脂
牛乳の凝固試験、Ｌ−アラビノース、ラムノース、イノ
シトールの利用性が異なっていた。また、ＭＫ７−ＮＦ
１株がカナマイシンを生産しない点でも相違が認められ
る。よって、ＭＫ７−ＮＦ１株はストレプトミセス・カ
ナマイセティカスと同一種であるとは言明できない。As is clear from Table 2, MK7-NF1
Strain and Streptomyces kanamyceticus are spore morphology, melanin-like pigment production test, liquefaction of gelatin,
Nitrate reduction reaction and starch hydrolysis test showed good agreement. However, the color tone of aerial mycelia, the coagulation test of skim milk, and the availability of L-arabinose, rhamnose, and inositol were different. Also, MK7-NF
A difference is also observed in that one strain does not produce kanamycin. Therefore, it cannot be stated that the MK7-NF1 strain is the same species as Streptomyces kanamyceticus.
【００２９】従って、ＭＫ７−ＮＦ１株をストレプトミ
セス・エスピー (Streptomyces sp.) ＭＫ７−ＮＦ１株
とする。Therefore, the MK7-NF1 strain is referred to as Streptomyces sp. MK7-NF1 strain.
【００３０】なお、ＭＫ７−ＮＦ１株を工業技術院 生
命工学工業技術研究所に寄託申請し、平成６年10月20日
に寄託番号FERM P-14595として受託された。The MK7-NF1 strain was applied for deposit at the Institute of Biotechnology, Institute of Industrial Science and Technology, and was deposited on October 20, 1994 under the deposit number FERM P-14595.
【００３１】ＭＫ７−ＮＦ１株は、他の放線菌の場合に
みられるように、その性状が変化しやすい。たとえば、
ＭＫ７−ＮＦ１株に由来する突然変異株（自然発生また
は誘発性）、形質融合体または遺伝子組み換え体であっ
てもヒドロスタチンＡの生産能を有するストレプトミセ
ス属の菌はすべて第２の本発明の方法に使用することが
できる。The MK7-NF1 strain is likely to change its properties as seen in other actinomycetes. For example,
Mutant strains (natural or inducible) derived from the MK7-NF1 strain, Streptomyces bacteria having the ability to produce hydrostatin A even if they are transfusions or gene recombinants are all of the second invention. Can be used in the method.
【００３２】第２の本発明の方法では、前記の菌を通常
の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養す
る。炭素源としては、グルコース、水飴、デキストリ
ン、シュクロース、澱粉、糖蜜、動物・植物油等が使用
できる。また、窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、コ
ーンスティープリカー、綿実かす、肉エキス、ペプト
ン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素
等を利用できる。その他、必要に応じ、ナトリウム、コ
バルト、塩素、硫酸、燐酸およびその他のイオンを生成
することのできる無機塩類を添加することは有効であ
る。また、菌の生育を助け、生理活性物質ヒドロスタチ
ンＡの生産を促進するような有機および無機物質を適当
に添加することができる。In the second method of the present invention, the above-mentioned bacterium is cultivated in a medium containing nutrients that can be utilized by ordinary microorganisms. As the carbon source, glucose, starch syrup, dextrin, sucrose, starch, molasses, animal / vegetable oil and the like can be used. As the nitrogen source, soybean flour, wheat germ, corn steep liquor, cottonseed meal, meat extract, peptone, yeast extract, ammonium sulfate, sodium nitrate, urea and the like can be used. In addition, it is effective to add, if necessary, inorganic salts capable of producing sodium, cobalt, chlorine, sulfuric acid, phosphoric acid and other ions. In addition, organic and inorganic substances that help the growth of bacteria and promote the production of the physiologically active substance hydrostatin A can be added appropriately.
【００３３】培養法としては、好気的条件での培養法、
特に深部培養法が適している。培養に適当な温度は15〜
37℃であるが、多くの場合、26〜30℃付近で培養する。
生理活性物質ヒドロスタチンＡの生産は培地や培養条件
により異なるが、振盪培養、タンク培養とも通常１〜10
日の間でその蓄積が最高に達する。培養物中の生理活性
物質ヒドロスタチンＡの蓄積量が最高になった時に、培
養を停止し、培養液から目的物質を単離精製する。As the culture method, a culture method under aerobic conditions,
The submerged culture method is particularly suitable. Suitable temperature for culture is 15 ~
The temperature is 37 ° C, but in most cases, the culture is performed at around 26 to 30 ° C.
Although the production of the physiologically active substance hydrostatin A varies depending on the medium and culture conditions, it is usually 1-10 in both shaking culture and tank culture
Its accumulation reaches its highest during the day. When the amount of the bioactive substance hydrostatin A accumulated in the culture reaches the maximum, the culture is stopped and the target substance is isolated and purified from the culture medium.
【００３４】本発明によって得られるヒドロスタチンＡ
生産菌の培養液からのヒドロスタチンＡの採取にあたっ
ては、その性状を利用した通常の分離手段を適宜組み合
わせて精製することができる。ヒドロスタチンＡは培養
ろ液に存在する。培養ろ液を水溶性物質の採取に用いら
れる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、ゲル
ろ過クロマトグラフィー、および薄層クロマトグラフィ
ーのかき取り、また高速液体クロマトグラフィー等を適
宜組み合わせ、あるいは繰り返すことによってヒドロス
タチンＡを純粋に単離することができる。Hydrostatin A obtained by the present invention
When collecting hydrostatin A from the culture solution of the producing bacterium, it is possible to purify it by appropriately combining ordinary separating means utilizing its properties. Hydrostatin A is present in the culture filtrate. A known method used for collecting the water-soluble substance from the culture filtrate, such as scraping of adsorption chromatography, gel filtration chromatography, and thin layer chromatography, and high-performance liquid chromatography may be combined or repeated as appropriate to obtain a hydrolyzed product. Statin A can be isolated purely.
【００３５】ヒドロスタチンＡの薬学的に許容し得る塩
は、公知の方法によって製造することができる。例えば
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、
水酸化カルシウムなどを含む溶液でヒドロスタチンを処
理することによって得ることができる。また、酸の水溶
液中で反応させて酸付加塩を得ることができる。The pharmaceutically acceptable salt of hydrostatin A can be produced by a known method. For example, sodium hydroxide, potassium hydroxide, lithium hydroxide,
It can be obtained by treating hydrostatin with a solution containing calcium hydroxide or the like. Further, the acid addition salt can be obtained by reacting in an aqueous solution of an acid.
【００３６】ヒドロスタチンＡは上記の試験例１に示す
ように細胞質に局在する酵素であるロイシンアミノペプ
チダーゼを強く阻害し、毒性は示さない。したがって、
ヒドロスタチンＡはロイシンアミノペプチダーゼ阻害剤
として極めて有用である。Hydrostatin A strongly inhibits leucine aminopeptidase, which is an enzyme localized in the cytoplasm as shown in Test Example 1 above, and shows no toxicity. Therefore,
Hydrostatin A is extremely useful as a leucine aminopeptidase inhibitor.
【００３７】第３の本発明は、ヒドロスタチンＡ、また
はその薬学的に許容し得る塩を有効成分とするロイシン
アミノペプチダーゼの阻害剤である。The third aspect of the present invention is an inhibitor of leucine aminopeptidase containing hydrostatin A or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
【００３８】この阻害剤はヒドロスタチンＡまたはその
塩を担体と混和して組成物の形に調合できる。その有効
成分に混和される薬学的に許容できる液状または固体担
体は特に制限がなく、一般的に使用されるものが使用で
きる。The inhibitor can be formulated into a composition by mixing Hydrostatin A or a salt thereof with a carrier. The pharmaceutically acceptable liquid or solid carrier to be mixed with the active ingredient is not particularly limited, and those commonly used can be used.
【００３９】この酵素阻害剤組成物中の有効成分（ヒド
ロスタチンＡまたはその塩）の割合はその剤形などによ
り異なるので一概にはいえないが、0.05〜99％（重量）
程度まで広範囲に使用することができ、通常、注射剤で
は 0.1〜50％程度であり、それ以外の製剤では１〜60％
程度である。残部は薬学的に許容できる担体である。The ratio of the active ingredient (hydrostatin A or a salt thereof) in this enzyme inhibitor composition varies depending on the dosage form and the like, so it cannot be said unconditionally, but it is 0.05 to 99% (weight).
It can be used in a wide range up to about 0.1 to 50% for injections, and 1 to 60% for other formulations.
It is a degree. The balance is a pharmaceutically acceptable carrier.
【００４０】ヒドロスタチンＡは、通常、経口投与ある
いは静脈、皮内または筋肉内投与などの投与でその有効
量を投与することにより生体内のロイシンアミノペプチ
ダーゼの阻害を行うことができる。従って本発明は場合
によりヒドロスタチンＡまたはその塩を用いるロイシン
アミノペプチダーゼ阻害方法を提供する。投与量は投与
する対象、投与ルートなどによって変動するが通常 0.5
〜 100mg／kg／day 、好ましくは１〜50mg／kg／day で
ある。Hydrostatin A can inhibit leucine aminopeptidase in vivo by administering an effective amount of hydrostatin A usually by oral administration or intravenous, intradermal or intramuscular administration. Accordingly, the present invention provides a method for inhibiting leucine aminopeptidase, optionally using Hydrostatin A or a salt thereof. The dose varies depending on the administration subject, administration route, etc., but is usually 0.5
-100 mg / kg / day, preferably 1-50 mg / kg / day.
【００４１】投与する際の製剤としては慣用的に用いら
れている剤形があげられる。経口投与の場合には、例え
ば賦形剤などとともに成型された錠剤、顆粒剤、カプセ
ル剤などが用いられる。非経口投与の場合には例えば生
理食塩水、溶解剤などを用いて製剤化された通常の注射
剤などが用いられる。The formulation for administration includes conventional dosage forms. In the case of oral administration, tablets, granules, capsules and the like molded with an excipient and the like are used. In the case of parenteral administration, for example, ordinary injections formulated using physiological saline, solubilizers, etc. are used.
【００４２】前記のように、本発明のヒドロスタチンＡ
またはその薬学的に許容し得る塩は、ロイシンアミノペ
プチダーゼを阻害することにより、生体内の基質である
ニューロメジンＮの分解を阻害する作用を示し、この作
用を介してニューロメジンＮによる鎮痛作用を持続およ
び増強させる効果を有する。従って、第４の本発明で
は、ヒドロスタチンＡまたはその薬学的に許容し得る塩
を有効成分とする鎮痛剤あるいはニューロメジンＮの鎮
痛作用増強剤または持続剤が提供される。As mentioned above, the hydrostatin A of the present invention
Alternatively, a pharmaceutically acceptable salt thereof shows an action of inhibiting the decomposition of neuromedin N which is a substrate in the body by inhibiting leucine aminopeptidase, and through this action, the analgesic action of neuromedin N is prolonged and It has an enhancing effect. Therefore, in the fourth aspect of the present invention, there is provided an analgesic or a neuromedin N analgesic potentiator or sustained-acting agent comprising hydrostatin A or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
【００４３】第４の本発明による鎮痛剤またはその他の
剤においても、有効成分化合物を薬学的に許容できる担
体と混和して組成物の形に調合でき、その組成物は第３
の本発明による酵素阻害剤組成物と同様な組成のものと
することができる。Also in the analgesic or other agent according to the fourth aspect of the present invention, the active ingredient compound can be mixed with a pharmaceutically acceptable carrier to prepare a composition.
A composition similar to the enzyme inhibitor composition according to the present invention can be used.
【００４４】[0044]
【発明の効果】以上に詳細に説明したように、本発明で
は新規な生理活性物質としてヒドロスタチンＡが提供さ
れ、ヒドロスタチンＡはロイシンアミノペプチダーゼを
強く阻害する。従って、ロイシンアミノペプチダーゼ阻
害剤として極めて有用である。INDUSTRIAL APPLICABILITY As described in detail above, the present invention provides hydrostatin A as a novel physiologically active substance, and hydrostatin A strongly inhibits leucine aminopeptidase. Therefore, it is extremely useful as a leucine aminopeptidase inhibitor.
【００４５】[0045]
次に実施例によって本発明のヒドロスタチンＡの製造例
を示す。実施例１ 種培地として、肉エキス 0.3％、トリプトース 0.5％、
酵母エキス 0.5％、グルコース 0.1％、可溶性デンプン
2.4％、炭酸カルシウム 0.2％を含む培地を用いた。な
お、殺菌前に培地を pH7.4に調整して使用した。Next, examples of producing hydrostatin A of the present invention will be shown by examples. Example 1 As a seed medium, meat extract 0.3%, tryptose 0.5%,
Yeast extract 0.5%, glucose 0.1%, soluble starch
A medium containing 2.4% and calcium carbonate 0.2% was used. The medium was adjusted to pH 7.4 before use.
【００４６】500ミリリットル容三角フラスコに前記種
培地を 110ミリリットル分注し、121℃で20分間滅菌
し、これにストレプトミセス sp. ＭＫ７−ＮＦ１（FE
RMP-14595 ）斜面培養の１白金耳を接種し、30℃で毎分
180回転の回転式振盪機にて３日間培養して種培養とし
た。110 ml of the seed medium was poured into a 500 ml Erlenmeyer flask and sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, and Streptomyces sp. MK7-NF1 (FE
RMP-14595) Inoculate 1 platinum loop of slant culture and incubate at 30 ℃ every minute
Seed culture was carried out by culturing for 3 days on a rotary shaker of 180 revolutions.
【００４７】次いで、生産培地として可溶性デンプン
2.0％、小麦ハイガ 2.5％、炭酸カルシウム 0.3％、塩
化ナトリウム0.15％、塩化コバルト・６水和物 0.00025
％、小麦胚芽油１滴を含む培地を 500ミリリットル容三
角フラスコに 110ミリリットルずつ分注し、 121℃で20
分間滅菌し、前記培養液２ミリリットルずつ移植し、27
℃で４日間振盪培養した。培養終了後、培養液を培養ろ
液と菌体に分別した。Then, soluble starch was used as a production medium.
2.0%, wheat haiga 2.5%, calcium carbonate 0.3%, sodium chloride 0.15%, cobalt chloride hexahydrate 0.00025
%, 1 drop of wheat germ oil was added to a 500 ml Erlenmeyer flask in 110 ml aliquots.
Sterilize for 2 minutes and transplant 2 ml of the above culture solution.
The cells were cultivated with shaking at 4 ° C for 4 days. After the culture was completed, the culture solution was separated into a culture filtrate and cells.
【００４８】培養ろ液の50リットルをあらかじめ脱イオ
ン水で充填したダイアイオンHP−20（三菱化成社製）、
５リットルのカラムにかけ、脱イオン水で洗浄後、有効
成分を50％アセトン水により溶出し、減圧濃縮によりア
セトンを除去した。この濃縮液３リットルをあらかじめ
脱イオン水で充填したダウエックス50Ｗ（×４）（ダウ
ケミカル社製）、１リットルのカラムにかけ、脱イオン
水で洗浄後、有効成分を 2.5％アンモニア水により溶出
し、濃縮乾固して褐色の粗物質（１）52.4ｇを得た。Diaion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei) in which 50 liters of the culture filtrate was previously filled with deionized water,
After applying to a 5 liter column and washing with deionized water, the active ingredient was eluted with 50% acetone water, and acetone was removed by concentration under reduced pressure. Apply 3 liters of this concentrate to a 1 liter column of Dowex 50W (× 4) (manufactured by Dow Chemical Co., Ltd.) pre-filled with deionized water, wash with deionized water, and elute the active ingredient with 2.5% aqueous ammonia. After concentrating to dryness, 52.4 g of a crude brown substance (1) was obtained.
【００４９】この粗物質（１）を10回にわけ、酢酸ブチ
ル−ブタノール−酢酸−水（４：４：１：１）に懸濁
後、あらかじめ同混合溶媒で充填したシリカゲル60（メ
ルク社製、Art.7734）、 500mlのカラムにかけ同混合溶
媒で洗浄した。続いて、有効成分を酢酸ブチル−ブタノ
ール−酢酸−水（２：４：１：１）で溶出し、濃縮乾固
することにより、合計で黄色の粗物質（２）を 2.613ｇ
を得た。This crude material (1) was divided into 10 times, suspended in butyl acetate-butanol-acetic acid-water (4: 4: 1: 1), and pre-filled with the same mixed solvent as silica gel 60 (manufactured by Merck). , Art.7734), and washed with the same mixed solvent. Subsequently, the active ingredient was eluted with butyl acetate-butanol-acetic acid-water (2: 4: 1: 1) and concentrated to dryness to give 2.613 g of a total of crude yellow substance (2).
I got
【００５０】この粗物質（２）を20回にわけ、あらかじ
めトリフルオロ酢酸を 0.1％含む15.0％アセトニトリル
水で平衡化した高速液体クロマトグラフィー (資生堂社
製、カプセルパックＣ18、20φ× 250mm、流速８ml／mi
n)へ通し、前記平衡液で溶出し、活性画分を濃縮乾固す
ることにより合計でヒドロスタチンＡを含む薄い黄色の
粗物質（３）36.2mgを得た。This crude material (2) was divided into 20 times and preliminarily equilibrated with 15.0% acetonitrile water containing 0.1% trifluoroacetic acid (Shiseido Co., Capsule C18 , 20φ × 250 mm, flow rate). 8 ml / mi
The mixture was passed through n), eluted with the equilibrium solution, and the active fraction was concentrated to dryness to obtain 36.2 mg of a pale yellow crude substance (3) containing hydrostatin A in total.
【００５１】この粗物質（３）を少量のメタノールに溶
解後、あらかじめメタノールで平衡化したセファデック
スLH−20（ファルマシア社製）、 200mlのカラムにか
け、メタノールで通過させ、活性画分を濃縮乾固して純
粋な白色の粉末であるヒドロスタチンＡ12.4mgを得た。After dissolving this crude substance (3) in a small amount of methanol, it was applied to a 200 ml column of Sephadex LH-20 (manufactured by Pharmacia) equilibrated with methanol in advance, passed through with methanol, and the active fraction was concentrated to dryness. 12.4 mg of hydrostatin A which was a solid white powder was obtained.
【００５２】純粋なヒドロスタチンＡを用いて、紫外線
吸収スペクトル、赤外線吸収スペクトル、水素核磁気共
鳴スペクトルおよび炭素核磁気共鳴スペクトルを測定し
た。ヒドロスタチンＡの各種のスペクトルは添付図面の
図１、図２、図３および図４に示した通りである。Using pure hydrostatin A, ultraviolet absorption spectrum, infrared absorption spectrum, hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum and carbon nuclear magnetic resonance spectrum were measured. The various spectra of Hydrostatin A are as shown in Figures 1, 2, 3 and 4 of the accompanying drawings.
【００５３】ヒドロスタチンＡの培養工程ならびに精製
工程中での追跡は、培養物または溶液の抗ロイシンアミ
ノペプチダーゼ活性の測定に基づいて行った。Tracking of hydrostatin A during the culture as well as purification steps was based on the measurement of the anti-leucine aminopeptidase activity of the culture or solution.
【００５４】その測定の方法は、前記の試験例１で示す
アミノペプチダーゼ阻害活性の測定法と同様の方法を用
いた。As the method of measurement, the same method as the method of measuring the aminopeptidase inhibitory activity shown in Test Example 1 above was used.
【図１】ヒドロスタチンＡの５μｇ／ml溶液の紫外線吸
収スペクトルを示す。FIG. 1 shows an ultraviolet absorption spectrum of a 5 μg / ml solution of hydrostatin A.
【図２】ヒドロスタチンＡの臭化カリウム錠内での赤外
線吸収スペクトルを示す。FIG. 2 shows an infrared absorption spectrum of hydrostatin A in a potassium bromide tablet.
【図３】ヒドロスタチンＡの重水中で500MHzで測定した
水素核磁気共鳴スペクトルを示す。FIG. 3 shows a hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum of hydrostatin A measured in heavy water at 500 MHz.
【図４】ヒドロスタチンＡの重水中で125MHzで測定した
炭素核磁気共鳴スペクトルを示す。FIG. 4 shows a carbon nuclear magnetic resonance spectrum of Hydrostatin A measured in heavy water at 125 MHz.
─────────────────────────────────────────────────────
─────────────────────────────────────────────────── ───
【手続補正書】[Procedure amendment]
【提出日】平成７年１２月１４日[Submission date] December 14, 1995
【手続補正１】[Procedure Amendment 1]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１５[Name of item to be corrected] 0015
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００１５】 [0015]
【手続補正２】[Procedure Amendment 2]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００２６[Correction target item name] 0026
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００２６】これらの性状よりＭＫ７−ＮＦ１株は、ス
トレプトミセス(Streptomyces)属に属すると考えられ
る。そこで近縁の既知菌種を検索したところ、ストレプ
トミセス カナマイセティカス (Streptomyces kanamy
ceticus)〔文献１：Shirling,E.B.およびD.Gottlieb「I
nternational Journal of Systematic Bacteriology」2
2巻、 310頁、1972年、及び文献２：Skerman, V.B.D.,
V.Mcgowan, およびP.H.A. Sneath,「International Jou
rnal of Systematic Bacteriology」30巻、389頁、1980
年〕があげられた。そこで上記の当研究所保存菌株とＭ
Ｋ７−ＮＦ１株とを実地に比較検討した。その成績の大
要を次の表２に示す。From these properties, the MK7-NF1 strain is considered to belong to the genus Streptomyces . A search for closely related known bacterial strains revealed that Streptomyces kanamyceticus
ceticus) [Reference 1: Shirling, EB and D. Gottlieb "I
nternational Journal of Systematic Bacteriology '' 2
Volume 2, page 310, 1972, and Reference 2: Skerman, VBD,
V. Mcgowan, and PHA Sneath, `` International Jou
rnal of Systematic Bacteriology '' 30, Volume 389, 1980
[Year] was given. Therefore, the strains and M
The K7-NF1 strain was actually compared and examined. The outline of the results is shown in Table 2 below.
【手続補正３】[Procedure 3]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００２７[Name of item to be corrected] 0027
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００２７】 [0027]
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 13/02 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 長縄 博 東京都大田区田園調布本町３番17号 (72)発明者 青山 貴之 東京都北区志茂３丁目17番２−302号 (72)発明者 山口 光峰 神奈川県横浜市金沢区西柴３丁目18番15号─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification number Internal reference number FI technical display location // (C12P 13/02 C12R 1: 465) (72) Inventor Hiroshi Naganawa Denenchofu, Ota-ku, Tokyo Hommachi 3-17 (72) Inventor Takayuki Aoyama 3-17 2-302 Shimo, Kita-ku, Tokyo (72) Inventor Mitsumine Yamaguchi 3--18-15 Nishishiba, Kanazawa-ku, Yokohama-shi, Kanagawa
Claims (4)
Ａおよびその薬学的に許容し得る塩。1. The following general formula (I): The physiologically active substance hydrostatin A which is a compound represented by and its pharmaceutically acceptable salts.
チンＡ生産菌を栄養培地中で培養し、その培養物からヒ
ドロスタチンＡを採取することを特徴とする、生理活性
物質ヒドロスタチンＡの製造法。2. A method for producing the physiologically active substance hydrostatin A, which comprises culturing a hydrostatin A-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces in a nutrient medium and collecting hydrostatin A from the culture.
容し得る塩を有効成分とするロイシンアミノペプチダー
ゼ阻害剤。3. A leucine aminopeptidase inhibitor containing hydrostatin A or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
容し得る塩を有効成分とする鎮痛剤。4. An analgesic containing hydrostatin A or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7094023A JPH08291124A (en) | 1995-04-19 | 1995-04-19 | New physiologically active substance hydrostatin a and its production and use |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7094023A JPH08291124A (en) | 1995-04-19 | 1995-04-19 | New physiologically active substance hydrostatin a and its production and use |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08291124A true JPH08291124A (en) | 1996-11-05 |
Family
ID=14098970
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7094023A Pending JPH08291124A (en) | 1995-04-19 | 1995-04-19 | New physiologically active substance hydrostatin a and its production and use |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08291124A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005016331A1 (en) * | 2003-08-13 | 2005-02-24 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Therapeutic agent for neuropathic pain containing n-(benzoyl)amino acid derivative as active ingredient |
-
1995
- 1995-04-19 JP JP7094023A patent/JPH08291124A/en active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2005016331A1 (en) * | 2003-08-13 | 2005-02-24 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Therapeutic agent for neuropathic pain containing n-(benzoyl)amino acid derivative as active ingredient |
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