JPH08248028A - 生理活性物質測定用液状試薬 - Google Patents
生理活性物質測定用液状試薬Info
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- JPH08248028A JPH08248028A JP8198195A JP8198195A JPH08248028A JP H08248028 A JPH08248028 A JP H08248028A JP 8198195 A JP8198195 A JP 8198195A JP 8198195 A JP8198195 A JP 8198195A JP H08248028 A JPH08248028 A JP H08248028A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 溶液状態で長期間保存しても、生理活性物質
を正確に測定することができる液状試薬を提供する。 【構成】 ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨを含む生理活性物質
測定用液状試薬において、ＮＡＤ又はＮＡＤＰを補酵素
とする脱水素酵素及びこの脱水素酵素の基質を含む。 【効果】 ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの量を長期間定常的
に維持することができる。
を正確に測定することができる液状試薬を提供する。 【構成】 ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨを含む生理活性物質
測定用液状試薬において、ＮＡＤ又はＮＡＤＰを補酵素
とする脱水素酵素及びこの脱水素酵素の基質を含む。 【効果】 ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの量を長期間定常的
に維持することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、還元型ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド又は還元型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチドリン酸を含む生理活性物質測定用液
状試薬に関する。詳細には、還元型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド又は還元型ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドリン酸が溶液状態で長期間安定である改
良された生理活性物質測定用液状試薬に関する。
アデニンジヌクレオチド又は還元型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチドリン酸を含む生理活性物質測定用液
状試薬に関する。詳細には、還元型ニコチンアミドアデ
ニンジヌクレオチド又は還元型ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドリン酸が溶液状態で長期間安定である改
良された生理活性物質測定用液状試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】病院の検査室や検査センターで使用され
ている臨床検査薬は、不安定な酵素や基質などを使用し
ている試薬が多く、一般的にはそれらの安定化を考慮し
て凍結乾燥品として供給され、使用時に精製水や特定の
緩衝液で溶解して使用するものが主流となっている。し
かしながら、多くの項目を測定し、また検体数も多くな
ると、凍結乾燥品の溶解作業が負担になることが多い。
また、凍結乾燥品を溶解した後の試薬の安定性も不十分
であり、使用時に試薬を調製する必要のない、溶液状態
で長期間安定な液状試薬の開発が望まれている。
ている臨床検査薬は、不安定な酵素や基質などを使用し
ている試薬が多く、一般的にはそれらの安定化を考慮し
て凍結乾燥品として供給され、使用時に精製水や特定の
緩衝液で溶解して使用するものが主流となっている。し
かしながら、多くの項目を測定し、また検体数も多くな
ると、凍結乾燥品の溶解作業が負担になることが多い。
また、凍結乾燥品を溶解した後の試薬の安定性も不十分
であり、使用時に試薬を調製する必要のない、溶液状態
で長期間安定な液状試薬の開発が望まれている。
【０００３】特に、生体試料液中のアスパラギン酸アミ
ノトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）、アラニンアミノトラ
ンスフェラーゼ（ＧＰＴ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤ
Ｈ）、α−オキシ酪酸脱水素酵素（ＨＢＤ）、遊離脂肪
酸（ＮＥＦＡ）、尿素窒素（ＵＮ）、又はクレアチニン
（ＣＲＥ）などの生理活性物質は、各種疾病診断の重要
な指標として、日常的に測定されている項目である。前
記の生体試料液中の生理活性物質を測定するための試薬
は、共通成分として還元型ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（以下、ＮＡＤＨと略称する）又は還元型ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（以下、Ｎ
ＡＤＰＨと略称する）を含んでいる。従って、前記の各
種生理活性物質測定用の液状試薬を調製する場合には、
これらＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ〔以下、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
と略称する〕を溶液状態で長期間安定的に維持させる必
要がある。
ノトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）、アラニンアミノトラ
ンスフェラーゼ（ＧＰＴ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤ
Ｈ）、α−オキシ酪酸脱水素酵素（ＨＢＤ）、遊離脂肪
酸（ＮＥＦＡ）、尿素窒素（ＵＮ）、又はクレアチニン
（ＣＲＥ）などの生理活性物質は、各種疾病診断の重要
な指標として、日常的に測定されている項目である。前
記の生体試料液中の生理活性物質を測定するための試薬
は、共通成分として還元型ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（以下、ＮＡＤＨと略称する）又は還元型ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（以下、Ｎ
ＡＤＰＨと略称する）を含んでいる。従って、前記の各
種生理活性物質測定用の液状試薬を調製する場合には、
これらＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ〔以下、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
と略称する〕を溶液状態で長期間安定的に維持させる必
要がある。
【０００４】一般的に、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈは、これらをア
ルカリ性液中に保存すれば、ある程度の安定性が保たれ
る。更に、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの安定化法として、特定の塩
基（イミダゾール等のアミン塩基や水酸化ナトリウム等
の強塩基）を共存させる方法（特開昭５５−４２５９９
号公報）、ＥＤＴＡ等のキレート化剤とアジ化ナトリウ
ム等のアジ化物を添加する方法（特開昭５９−８２３９
８号公報）、ほう酸を添加する方法（特開昭６２−１９
８６９７号公報）、アルカリ金属又はアンモニウムビカ
ルボネート緩衝剤を共存させる方法（特開平４−２２９
１９２号公報）等が報告されている。
ルカリ性液中に保存すれば、ある程度の安定性が保たれ
る。更に、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの安定化法として、特定の塩
基（イミダゾール等のアミン塩基や水酸化ナトリウム等
の強塩基）を共存させる方法（特開昭５５−４２５９９
号公報）、ＥＤＴＡ等のキレート化剤とアジ化ナトリウ
ム等のアジ化物を添加する方法（特開昭５９−８２３９
８号公報）、ほう酸を添加する方法（特開昭６２−１９
８６９７号公報）、アルカリ金属又はアンモニウムビカ
ルボネート緩衝剤を共存させる方法（特開平４−２２９
１９２号公報）等が報告されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、生体試
料液中の生理活性物質を測定する試薬には、ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈ以外にも所望の反応を発現させるために必要な
酵素や基質成分といったその他の物質も含まれている。
当然、反応を行う雰囲気の維持（ｐＨ領域等）や他の成
分の安定性を考慮する必要があり、単にＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
に対して至適な安定化法を講じれば良いというものでは
ない。前述の従来の安定化方法は、特に溶液状態におけ
るＮＡＤ（Ｐ）Ｈの長期にわたる安定性が不十分であっ
た。
料液中の生理活性物質を測定する試薬には、ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈ以外にも所望の反応を発現させるために必要な
酵素や基質成分といったその他の物質も含まれている。
当然、反応を行う雰囲気の維持（ｐＨ領域等）や他の成
分の安定性を考慮する必要があり、単にＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
に対して至適な安定化法を講じれば良いというものでは
ない。前述の従来の安定化方法は、特に溶液状態におけ
るＮＡＤ（Ｐ）Ｈの長期にわたる安定性が不十分であっ
た。
【０００６】例えば、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈは、アルカリ性溶
液においてかなり安定であるものの、共存する夾雑物質
〔特にＮＡＤ（Ｐ）Ｈを補酵素とする脱水素酵素〕や緩
衝液濃度、ｐＨの経時的変動等の種々の要因によって、
徐々にではあるが、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（以下、ＮＡＤと略称する）又は還元型ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（以下、ＮＡ
ＤＰと略称する）に酸化される。保存には、ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈの減少速度を考慮して、予めＮＡＤ（Ｐ）Ｈの
添加量を増量しておき、実際の測定時に所望の反応に必
要なＮＡＤ（Ｐ）Ｈ量を確保し得るように調製すること
も可能であるが、このような方法はコストの面で好まし
くない。更に、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの３４０ｎｍにおける吸
光度変化を測定する試薬にとっても不都合である。
液においてかなり安定であるものの、共存する夾雑物質
〔特にＮＡＤ（Ｐ）Ｈを補酵素とする脱水素酵素〕や緩
衝液濃度、ｐＨの経時的変動等の種々の要因によって、
徐々にではあるが、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌ
クレオチド（以下、ＮＡＤと略称する）又は還元型ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（以下、ＮＡ
ＤＰと略称する）に酸化される。保存には、ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈの減少速度を考慮して、予めＮＡＤ（Ｐ）Ｈの
添加量を増量しておき、実際の測定時に所望の反応に必
要なＮＡＤ（Ｐ）Ｈ量を確保し得るように調製すること
も可能であるが、このような方法はコストの面で好まし
くない。更に、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの３４０ｎｍにおける吸
光度変化を測定する試薬にとっても不都合である。
【０００７】従って、本発明の目的は、生理活性物質測
定用試薬中に含まれるＮＡＤ（Ｐ）Ｈを安定化すること
により、溶液状態で長期間保存しても、疾病等の診断の
指標となる生理活性物質を正確に測定することができる
生理活性物質測定用液状試薬を提供することにある。
定用試薬中に含まれるＮＡＤ（Ｐ）Ｈを安定化すること
により、溶液状態で長期間保存しても、疾病等の診断の
指標となる生理活性物質を正確に測定することができる
生理活性物質測定用液状試薬を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】前記の目的は、本発明に
よる、少なくとも還元型ニコチンアミドアデニンジヌク
レオチド又は還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チドリン酸を含む生理活性物質測定用液状試薬におい
て、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド又は
酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を
補酵素とする脱水素酵素及びこの脱水素酵素の基質を含
むことを特徴とする液状試薬によって達成することがで
きる。
よる、少なくとも還元型ニコチンアミドアデニンジヌク
レオチド又は還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チドリン酸を含む生理活性物質測定用液状試薬におい
て、酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド又は
酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を
補酵素とする脱水素酵素及びこの脱水素酵素の基質を含
むことを特徴とする液状試薬によって達成することがで
きる。
【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。ＮＡＤ又
はＮＡＤＰ〔以下、ＮＡＤ（Ｐ）と略称する〕を補酵素
とする脱水素酵素及びその基質の組合せとしては、特に
限定されないが、脱水素酵素及びその基質はｐＨ８．５
〜１１の間で安定なものが好ましく、測定系に応じて選
択することが可能である。このような組合せとしては、
例えば、グルコース−６−リン酸脱水素酵素（以下、Ｇ
６ＰＤＨと略称する）及びグルコース−６−リン酸（以
下、Ｇ６Ｐと略称する）若しくはその塩、グルタミン酸
脱水素酵素（以下、ＧｌＤＨと略称する）及びＬ−グル
タミン酸若しくはその塩、又はイソクエン酸脱水素酵素
（以下、ＩＣＤＨと略称する）及びイソクエン酸若しく
はその塩等を用いることができる。ＮＡＤ（Ｐ）を補酵
素とする脱水素酵素及び基質は、微量でＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
の減少を抑制することができる。具体的な添加量は、使
用する個々の測定系に応じて適宜決定することができ
る。
はＮＡＤＰ〔以下、ＮＡＤ（Ｐ）と略称する〕を補酵素
とする脱水素酵素及びその基質の組合せとしては、特に
限定されないが、脱水素酵素及びその基質はｐＨ８．５
〜１１の間で安定なものが好ましく、測定系に応じて選
択することが可能である。このような組合せとしては、
例えば、グルコース−６−リン酸脱水素酵素（以下、Ｇ
６ＰＤＨと略称する）及びグルコース−６−リン酸（以
下、Ｇ６Ｐと略称する）若しくはその塩、グルタミン酸
脱水素酵素（以下、ＧｌＤＨと略称する）及びＬ−グル
タミン酸若しくはその塩、又はイソクエン酸脱水素酵素
（以下、ＩＣＤＨと略称する）及びイソクエン酸若しく
はその塩等を用いることができる。ＮＡＤ（Ｐ）を補酵
素とする脱水素酵素及び基質は、微量でＮＡＤ（Ｐ）Ｈ
の減少を抑制することができる。具体的な添加量は、使
用する個々の測定系に応じて適宜決定することができ
る。
【００１０】例えば、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水
素酵素及びその基質としてＧ６ＰＤＨ及びＧ６Ｐ又はそ
の塩（例えば、カリウム塩、ナトリウム塩、バリウム
塩）を用いる場合、Ｇ６ＰＤＨ活性は、０．００１Ｕ／
ｌ以上でＮＡＤ（Ｐ）Ｈの減少を抑える効果があり、特
に０．０１Ｕ／ｌ〜１．０Ｕ／ｌが好ましい。Ｇ６Ｐ又
はその塩は、０．０５ｍＭ以上で効果があり、特に０．
１ｍＭ〜１０ｍＭが好ましい。Ｇ６ＰＤＨ活性が１．０
Ｕ／ｌを越えるか、又はＧ６Ｐの濃度が１０ｍＭを越え
ると、検体試料中の尿素にウレアーゼが接触するとアン
モニアが生成され、アンモニアの生成速度に対するＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈの減少速度を遅らせることがある。なお、Ｇ
６ＰＤＨとしては、Ｇ６Ｐ又はその塩を基質とし、ＮＡ
Ｄ（Ｐ）を補酵素とするものである限り特に限定されな
いが、例えば、酵母やロイコノストク・メセンテロイデ
ス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄ
ｅｓ）由来のＧ６ＰＤＨを好適に使用できる。
素酵素及びその基質としてＧ６ＰＤＨ及びＧ６Ｐ又はそ
の塩（例えば、カリウム塩、ナトリウム塩、バリウム
塩）を用いる場合、Ｇ６ＰＤＨ活性は、０．００１Ｕ／
ｌ以上でＮＡＤ（Ｐ）Ｈの減少を抑える効果があり、特
に０．０１Ｕ／ｌ〜１．０Ｕ／ｌが好ましい。Ｇ６Ｐ又
はその塩は、０．０５ｍＭ以上で効果があり、特に０．
１ｍＭ〜１０ｍＭが好ましい。Ｇ６ＰＤＨ活性が１．０
Ｕ／ｌを越えるか、又はＧ６Ｐの濃度が１０ｍＭを越え
ると、検体試料中の尿素にウレアーゼが接触するとアン
モニアが生成され、アンモニアの生成速度に対するＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈの減少速度を遅らせることがある。なお、Ｇ
６ＰＤＨとしては、Ｇ６Ｐ又はその塩を基質とし、ＮＡ
Ｄ（Ｐ）を補酵素とするものである限り特に限定されな
いが、例えば、酵母やロイコノストク・メセンテロイデ
ス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄ
ｅｓ）由来のＧ６ＰＤＨを好適に使用できる。
【００１１】また、例えば、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とす
る脱水素酵素及びその基質としてＧｌＤＨ及びＬ−グル
タミン酸又はその塩（例えば、カリウム塩、ナトリウム
塩）を用いる場合、ＧｌＤＨ活性は、０．００５Ｕ／ｌ
以上でＮＡＤ（Ｐ）Ｈの減少を抑える効果があり、特に
０．０５Ｕ／ｌ〜５０Ｕ／ｌが好ましい。Ｌ−グルタミ
ン酸又はその塩は、０．１ｍＭ以上で効果がみられ、特
に５ｍＭ〜５０ｍＭが好ましい。ＧｌＤＨ活性が５０Ｕ
／ｌを越えると、プロテアーゼや他の脱水素酵素のコン
タミネーションによる、組成成分の劣化が起こることが
あり、Ｌ−グルタミン酸又はその塩が５０ｍＭを越える
と溶解性が悪くなる。なお、ＧｌＤＨとしては、ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈを補酵素とし、α−ケトグルタル酸とアンモニ
アを基質とするものであれば、由来は特に限定されな
い。具体的には、例えば、酵母やプロテウス属（Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ）に属する微生物由来のＧｌＤＨを好適に使用
できる。
る脱水素酵素及びその基質としてＧｌＤＨ及びＬ−グル
タミン酸又はその塩（例えば、カリウム塩、ナトリウム
塩）を用いる場合、ＧｌＤＨ活性は、０．００５Ｕ／ｌ
以上でＮＡＤ（Ｐ）Ｈの減少を抑える効果があり、特に
０．０５Ｕ／ｌ〜５０Ｕ／ｌが好ましい。Ｌ−グルタミ
ン酸又はその塩は、０．１ｍＭ以上で効果がみられ、特
に５ｍＭ〜５０ｍＭが好ましい。ＧｌＤＨ活性が５０Ｕ
／ｌを越えると、プロテアーゼや他の脱水素酵素のコン
タミネーションによる、組成成分の劣化が起こることが
あり、Ｌ−グルタミン酸又はその塩が５０ｍＭを越える
と溶解性が悪くなる。なお、ＧｌＤＨとしては、ＮＡＤ
（Ｐ）Ｈを補酵素とし、α−ケトグルタル酸とアンモニ
アを基質とするものであれば、由来は特に限定されな
い。具体的には、例えば、酵母やプロテウス属（Ｐｒｏ
ｔｅｕｓ）に属する微生物由来のＧｌＤＨを好適に使用
できる。
【００１２】また、例えば、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とす
る脱水素酵素及びその基質としてＩＣＤＨ及びイソクエ
ン酸又はその塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）
を用いる場合、マグネシウムイオン又はマンガンイオン
などの金属イオンを添加することが好ましい。この場
合、ＩＣＤＨ活性は、０．００１Ｕ／ｌ以上でＮＡＤ
（Ｐ）Ｈの減少を抑える効果があり、特に０．１Ｕ／ｌ
〜１００Ｕ／ｌが好ましい。イソクエン酸又はその塩
は、０．０１ｍＭ以上で効果がみられ、特に０．１ｍＭ
〜１０ｍＭが好ましい。金属イオンとして塩化マグネシ
ウムを用いる場合、０．１ｍＭ以上で効果がみられ、特
に０．５ｍＭ〜５０ｍＭが好ましい。イソクエン酸又は
その塩は、０．０５ｍＭ以上で効果がみられ、特に０．
５ｍＭ〜５０ｍＭが好ましい。ＩＣＤＨ活性が５０Ｕ／
ｌを越えると、プロテアーゼや他の脱水素酵素のコンタ
ミネーションによる、組成成分の劣化が起こることがあ
り、塩化マグネシウムが５０ｍＭを越えると溶解性が悪
くなり、イソクエン酸又はその塩が５０ｍＭを越えると
溶解性が悪くなる。
る脱水素酵素及びその基質としてＩＣＤＨ及びイソクエ
ン酸又はその塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）
を用いる場合、マグネシウムイオン又はマンガンイオン
などの金属イオンを添加することが好ましい。この場
合、ＩＣＤＨ活性は、０．００１Ｕ／ｌ以上でＮＡＤ
（Ｐ）Ｈの減少を抑える効果があり、特に０．１Ｕ／ｌ
〜１００Ｕ／ｌが好ましい。イソクエン酸又はその塩
は、０．０１ｍＭ以上で効果がみられ、特に０．１ｍＭ
〜１０ｍＭが好ましい。金属イオンとして塩化マグネシ
ウムを用いる場合、０．１ｍＭ以上で効果がみられ、特
に０．５ｍＭ〜５０ｍＭが好ましい。イソクエン酸又は
その塩は、０．０５ｍＭ以上で効果がみられ、特に０．
５ｍＭ〜５０ｍＭが好ましい。ＩＣＤＨ活性が５０Ｕ／
ｌを越えると、プロテアーゼや他の脱水素酵素のコンタ
ミネーションによる、組成成分の劣化が起こることがあ
り、塩化マグネシウムが５０ｍＭを越えると溶解性が悪
くなり、イソクエン酸又はその塩が５０ｍＭを越えると
溶解性が悪くなる。
【００１３】本発明の測定用液状試薬は、ＮＡＤ（Ｐ）
Ｈの安定性を維持するために、好ましくはｐＨ７〜１
２、より好ましくは８．５〜１１の範囲内で、測定系に
応じて調整する。本明細書において『生理活性物質』は
特に限定されるものではないが、特に生体試料（例え
ば、血液、血清、血漿、尿、髄液、細胞若しくは組織抽
出液、唾液、汗）に存在する臨床検査の対象となる任意
の物質、例えば、各種の酵素を意味する。例えば、アス
パラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）、アラ
ニンアミノトランスフェラーゼ（ＧＰＴ）、乳酸脱水素
酵素（ＬＤＨ）、α−オキシ酪酸脱水素酵素（ＨＢ
Ｄ）、遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）、尿素窒素（ＵＮ）、又
はクレアチニン（ＣＲＥ）などを挙げることができる。
Ｈの安定性を維持するために、好ましくはｐＨ７〜１
２、より好ましくは８．５〜１１の範囲内で、測定系に
応じて調整する。本明細書において『生理活性物質』は
特に限定されるものではないが、特に生体試料（例え
ば、血液、血清、血漿、尿、髄液、細胞若しくは組織抽
出液、唾液、汗）に存在する臨床検査の対象となる任意
の物質、例えば、各種の酵素を意味する。例えば、アス
パラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）、アラ
ニンアミノトランスフェラーゼ（ＧＰＴ）、乳酸脱水素
酵素（ＬＤＨ）、α−オキシ酪酸脱水素酵素（ＨＢ
Ｄ）、遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）、尿素窒素（ＵＮ）、又
はクレアチニン（ＣＲＥ）などを挙げることができる。
【００１４】先に述べた従来法においては、液性や添加
物を調整することによって、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの分解を最
小限に留めることを主眼においている。それに対して、
本発明は、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈから発生したＮＡＤ（Ｐ）に
対して、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びこ
の酵素の基質を共存させ、強制的にＮＡＤ（Ｐ）Ｈに戻
すことによって、長期間にわたってＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量
を定常的に維持している。これは、特に本発明の対象で
ある生体試料液中の生理活性物質測定用試薬が、溶液状
態であるからこそ達成されるもので、このような発想自
体従来法にはみられないものである。
物を調整することによって、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈの分解を最
小限に留めることを主眼においている。それに対して、
本発明は、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈから発生したＮＡＤ（Ｐ）に
対して、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びこ
の酵素の基質を共存させ、強制的にＮＡＤ（Ｐ）Ｈに戻
すことによって、長期間にわたってＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量
を定常的に維持している。これは、特に本発明の対象で
ある生体試料液中の生理活性物質測定用試薬が、溶液状
態であるからこそ達成されるもので、このような発想自
体従来法にはみられないものである。
【００１５】本発明の生理活性物質測定用液状試薬は、
生体液中の生理活性物質を測定するための液状試薬にお
いて、長期間にわたってＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量を定常的に
維持することが可能となる。特に、本発明を好適に適用
することのできる測定系の具体例を以下に示す。
生体液中の生理活性物質を測定するための液状試薬にお
いて、長期間にわたってＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量を定常的に
維持することが可能となる。特に、本発明を好適に適用
することのできる測定系の具体例を以下に示す。
【００１６】（１）アスパラギン酸アミノトランスフェ
ラーゼ（ＧＯＴ）測定用試薬 この測定用試薬の必須構成成分は、Ｌ−アスパラギン
酸、α−ケトグルタル酸、リンゴ酸脱水素酵素及びＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２試薬系に構成し、少
なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ（Ｐ）を
補酵素とする脱水素酵素及びその基質を共存させる。
ラーゼ（ＧＯＴ）測定用試薬 この測定用試薬の必須構成成分は、Ｌ−アスパラギン
酸、α−ケトグルタル酸、リンゴ酸脱水素酵素及びＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２試薬系に構成し、少
なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ（Ｐ）を
補酵素とする脱水素酵素及びその基質を共存させる。
【００１７】（２）乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）測定用試
薬 この測定用試薬の必須構成成分は、ピルビン酸及びＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈであり、これらを１試薬系又は適宜２試薬系
に構成し、少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、Ｎ
ＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びその基質を共
存させる。
薬 この測定用試薬の必須構成成分は、ピルビン酸及びＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈであり、これらを１試薬系又は適宜２試薬系
に構成し、少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、Ｎ
ＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びその基質を共
存させる。
【００１８】（３）アラニンアミノトランスフェラーゼ
（ＧＰＴ）測定用試薬 この測定用試薬の必須構成成分は、Ｌ−アラニン、α−
ケトグルタル酸、乳酸脱水素酵素及びＮＡＤ（Ｐ）Ｈで
あり、これらを適宜２試薬系に構成し、少なくともＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする
脱水素酵素及びその基質を共存させる。
（ＧＰＴ）測定用試薬 この測定用試薬の必須構成成分は、Ｌ−アラニン、α−
ケトグルタル酸、乳酸脱水素酵素及びＮＡＤ（Ｐ）Ｈで
あり、これらを適宜２試薬系に構成し、少なくともＮＡ
Ｄ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする
脱水素酵素及びその基質を共存させる。
【００１９】（４）α−オキシ酪酸脱水素酵素（ＨＢ
Ｄ）測定用試薬 この測定用試薬の必須構成成分は、α−ケト酪酸及びＮ
ＡＤ（Ｐ）Ｈであり、これらを１試薬系又は適宜２試薬
系に構成し、少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、
ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びその基質を
共存させる。
Ｄ）測定用試薬 この測定用試薬の必須構成成分は、α−ケト酪酸及びＮ
ＡＤ（Ｐ）Ｈであり、これらを１試薬系又は適宜２試薬
系に構成し、少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、
ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びその基質を
共存させる。
【００２０】（５）遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）測定用試薬 この測定用試薬の必須構成成分は、ＡＴＰ、ＣｏＡ（コ
エンザエムＡ）、アシルＣｏＡシンセターゼ、ミオキナ
ーゼ、ホスホエノールピルビン酸、ピルビン酸キナー
ゼ、ＬＤＨ及びＮＡＤ（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２
試薬系に構成し、少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬
に、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びその基
質を共存させる。
エンザエムＡ）、アシルＣｏＡシンセターゼ、ミオキナ
ーゼ、ホスホエノールピルビン酸、ピルビン酸キナー
ゼ、ＬＤＨ及びＮＡＤ（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２
試薬系に構成し、少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬
に、ＮＡＤ（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びその基
質を共存させる。
【００２１】（６）尿素窒素（ＵＮ）測定用試薬 この測定用試薬の必須構成成分は、グルタミン酸脱水素
酵素（ＧｌＤＨ）、α−ケトグルタル酸、ウレアーゼ及
びＮＡＤ（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２試薬系に構成
し、少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ
（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びその基質を共存さ
せる。
酵素（ＧｌＤＨ）、α−ケトグルタル酸、ウレアーゼ及
びＮＡＤ（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２試薬系に構成
し、少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ
（Ｐ）を補酵素とする脱水素酵素及びその基質を共存さ
せる。
【００２２】（７）クレアチニン（ＣＲＥ）測定用試薬
−１ この測定用試薬の必須構成成分は、クレアチニンアミド
ヒドロラーゼ、クレアチンキナーゼ、ＡＴＰ、ピルビン
酸キナーゼ、ホスホエノールピルビン酸、ＬＤＨ及びＮ
ＡＤ（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２試薬系に構成し、
少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ（Ｐ）
を補酵素とする脱水素酵素及びその基質を共存させる。
−１ この測定用試薬の必須構成成分は、クレアチニンアミド
ヒドロラーゼ、クレアチンキナーゼ、ＡＴＰ、ピルビン
酸キナーゼ、ホスホエノールピルビン酸、ＬＤＨ及びＮ
ＡＤ（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２試薬系に構成し、
少なくともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ（Ｐ）
を補酵素とする脱水素酵素及びその基質を共存させる。
【００２３】（８）クレアチニン（ＣＲＥ）測定用試薬
−２ この測定用試薬の必須構成成分は、クレアチニンデイミ
ナーゼ、α−ケトグルタル酸、ウレアーゼ及びＮＡＤ
（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２試薬系に構成し、少な
くともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ（Ｐ）を補
酵素とする脱水素酵素及びその基質を共存させる。
−２ この測定用試薬の必須構成成分は、クレアチニンデイミ
ナーゼ、α−ケトグルタル酸、ウレアーゼ及びＮＡＤ
（Ｐ）Ｈであり、これらを適宜２試薬系に構成し、少な
くともＮＡＤ（Ｐ）Ｈを含む試薬に、ＮＡＤ（Ｐ）を補
酵素とする脱水素酵素及びその基質を共存させる。
【００２４】
【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：ＮＡＤＰＨの残存率測定 表１に示した組成の液状試薬（以下、対照用試薬１と称
する）、表１に示した組成からα−ケトグルタル酸及び
ＧｌＤＨを除いた組成の液状試薬（以下、対照用試薬２
と称する）、表１に示した組成に０．０１Ｕ／ｌ−Ｇ６
ＰＤＨ及び０．１ｍＭ−Ｇ６Ｐを加えた組成の本発明の
液状試薬（以下、本発明試薬１と称する）、表１に示し
た組成に１０ｍＭ−Ｌ−グルタミン酸を加えた組成の本
発明の液状試薬（以下、本発明試薬２と称する）、表１
に示した組成に１０Ｕ／ｌ−ＩＣＤＨ、１．０ｍＭイソ
クエン酸及び１．０ｍＭ塩化マグネシウムを加えた組成
の本発明の液状試薬（以下、本発明試薬３と称する）を
調製した。調製直後、更にそれぞれの液状試薬を溶液状
態で１０℃で保存し、１月後、２月後、４月後及び６月
後に、３４０ｎｍでの吸光度を測定し、ＮＡＤＰＨの残
存量を求めた。調製日当日の吸光度を１００％とし、１
月後、２月後、４月後及び６月後の残存率を表２に示
す。
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：ＮＡＤＰＨの残存率測定 表１に示した組成の液状試薬（以下、対照用試薬１と称
する）、表１に示した組成からα−ケトグルタル酸及び
ＧｌＤＨを除いた組成の液状試薬（以下、対照用試薬２
と称する）、表１に示した組成に０．０１Ｕ／ｌ−Ｇ６
ＰＤＨ及び０．１ｍＭ−Ｇ６Ｐを加えた組成の本発明の
液状試薬（以下、本発明試薬１と称する）、表１に示し
た組成に１０ｍＭ−Ｌ−グルタミン酸を加えた組成の本
発明の液状試薬（以下、本発明試薬２と称する）、表１
に示した組成に１０Ｕ／ｌ−ＩＣＤＨ、１．０ｍＭイソ
クエン酸及び１．０ｍＭ塩化マグネシウムを加えた組成
の本発明の液状試薬（以下、本発明試薬３と称する）を
調製した。調製直後、更にそれぞれの液状試薬を溶液状
態で１０℃で保存し、１月後、２月後、４月後及び６月
後に、３４０ｎｍでの吸光度を測定し、ＮＡＤＰＨの残
存量を求めた。調製日当日の吸光度を１００％とし、１
月後、２月後、４月後及び６月後の残存率を表２に示
す。
【００２５】
【表１】 トリエタノールアミン塩酸塩緩衝液（ｐＨ９．０） ５０ｍＭ ＮＡＤＰＨ ０．３ｍＭ α−ケトグルタル酸 ５．０ｍＭ ＧｌＤＨ ２０Ｕ／ｌ
【００２６】
【表２】 保存期間（月） ０ １ ２ ４ ６ 対照用試薬１ １００ ９６ ９２ ８５ ７８ 対照用試薬２ １００ ９４ ８８ ８２ ７３ 本発明試薬１ １００ ９８ ９６ ９０ ８５ 本発明試薬２ １００ ９６ ９４ ８６ ８２ 本発明試薬３ １００ ９７ ９４ ８８ ８４
【００２７】実施例２：ＵＮ量測定値の残存率 表３に示した組成の溶液（以下、第二試薬と称する）を
調製した。この第二試薬及び実施例１で調製した各液状
試薬を１０℃で保存し、保存前（調製直後）、１月後、
２月後、４月後及び６月後のそれぞれの試薬を、以下に
示すＵＮ量測定に用いた。尿素窒素量が１５０ｍｇ／ｄ
ｌである尿素水溶液を調製し、被検試料として用いた。
実施例１で調製した各液状試薬３２０μｌに被検試料４
μｌを加え、撹拌混合し、３７℃で５分間加温した後、
第二試薬８０μｌを加え、撹拌混合し、３７℃で５分間
加温した。第二試薬を添加してから、１分後から３分後
までの３４０ｎｍにおける１分間当たりの吸光度変化量
を測定した。調製直後の吸光度変化量を１００％とし、
１月後、２月後、４月後及び６月後の吸光度変化量の残
存率を表４に示す。
調製した。この第二試薬及び実施例１で調製した各液状
試薬を１０℃で保存し、保存前（調製直後）、１月後、
２月後、４月後及び６月後のそれぞれの試薬を、以下に
示すＵＮ量測定に用いた。尿素窒素量が１５０ｍｇ／ｄ
ｌである尿素水溶液を調製し、被検試料として用いた。
実施例１で調製した各液状試薬３２０μｌに被検試料４
μｌを加え、撹拌混合し、３７℃で５分間加温した後、
第二試薬８０μｌを加え、撹拌混合し、３７℃で５分間
加温した。第二試薬を添加してから、１分後から３分後
までの３４０ｎｍにおける１分間当たりの吸光度変化量
を測定した。調製直後の吸光度変化量を１００％とし、
１月後、２月後、４月後及び６月後の吸光度変化量の残
存率を表４に示す。
【００２８】
【表３】 トリエタノールアミン塩酸緩衝液（ｐＨ７．８０） １００ｍＭ ウレアーゼ １．３Ｕ／ｍｌ アセトヒドロキサム酸 ０．４ｍＭ
【００２９】
【表４】 保存期間（月） ０ １ ２ ４ ６ 対照用試薬１ １００ ９５ ９１ ７８ ４４ 本発明試薬１ １００ ９７ ９５ ９４ ９１ 本発明試薬２ １００ ９４ ９３ ８６ ７７ 本発明試薬３ １００ ９６ ９４ ９２ ８９
【００３０】
【発明の効果】本発明の生理活性物質測定用液状試薬
は、生体液中の生理活性物質を測定するための液状試薬
において、長期間にわたってＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量を定常
的に維持することが可能である。
は、生体液中の生理活性物質を測定するための液状試薬
において、長期間にわたってＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量を定常
的に維持することが可能である。
Claims (4)
- 【請求項１】 少なくとも還元型ニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチド又は還元型ニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチドリン酸を含む生理活性物質測定用液状試薬
において、 酸化型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド又は酸化
型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸を補酵
素とする脱水素酵素及びこの脱水素酵素の基質を含むこ
とを特徴とする液状試薬。 - 【請求項２】 脱水素酵素がグルコース−６−リン酸脱
水素酵素であり、その基質がグルコース−６−リン酸又
はその塩である請求項１に記載の液状試薬。 - 【請求項３】 脱水素酵素がグルタミン酸脱水酵素であ
り、その基質がグルタミン酸又はその塩である請求項１
に記載の液状試薬。 - 【請求項４】 脱水素酵素がイソクエン酸脱水素酵素で
あり、その基質がイソクエン酸又はその塩であり、更に
金属イオンを含有する請求項１に記載の液状試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8198195A JPH08248028A (ja) | 1995-03-14 | 1995-03-14 | 生理活性物質測定用液状試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8198195A JPH08248028A (ja) | 1995-03-14 | 1995-03-14 | 生理活性物質測定用液状試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08248028A true JPH08248028A (ja) | 1996-09-27 |
Family
ID=13761668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8198195A Pending JPH08248028A (ja) | 1995-03-14 | 1995-03-14 | 生理活性物質測定用液状試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08248028A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2617834A1 (en) | 2012-01-22 | 2013-07-24 | ARKRAY, Inc. | Method for producing dry reagent, dry reagent, and analysis tool using same |
-
1995
- 1995-03-14 JP JP8198195A patent/JPH08248028A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2617834A1 (en) | 2012-01-22 | 2013-07-24 | ARKRAY, Inc. | Method for producing dry reagent, dry reagent, and analysis tool using same |
| US8999662B2 (en) | 2012-01-22 | 2015-04-07 | Arkray, Inc. | Method for producing dry reagent, dry reagent, and analysis tool using same |
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| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20040713 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
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| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20050105 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050307 |
|
| A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20050426 |
|
| A912 | Removal of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20050527 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Effective date: 20051026 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 |