JPH0819150B2 - Novel antibiotic RK-286D, production method thereof, and antitumor agent and antiinflammatory agent - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、新規抗生物質、その製
造法並びにそれを有効成分とする抗腫瘍剤及び抗炎症剤
に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a novel antibiotic, a method for producing the same, an antitumor agent and an antiinflammatory agent containing the same.

【０００２】[0002]

【従来の技術】リン脂質・カルシウム（Ca²⁺) 依存性の
蛋白質リン酸化酵素プロテインキナーゼＣは、動物細胞
中で、情報の受容・伝達等に重要な役割を担っている。
また、腫瘍プロモーターであるホルボールエステルやテ
レオシジンの受容体であることも知られている。2. Description of the ^Related Art Phospholipid / calcium (Ca ²⁺ ) -dependent protein phosphatase protein kinase C plays an important role in the reception and transmission of information in animal cells.
It is also known to be a receptor for phorbol ester and tereosidine, which are tumor promoters.

【０００３】プロテインキナーゼＣの阻害物質は、抗腫
瘍プロモーター、細胞増殖抑制（抗ガン剤）、抗血小板
凝集（抗炎症）などの効果が期待されるため、プロテイ
ンキナーゼＣに対する阻害作用を有する新規な抗腫瘍剤
及び抗炎症剤の開発が強く望まれている。Since protein kinase C inhibitors are expected to have effects such as anti-tumor promoter, cell growth suppression (anti-cancer agent), anti-platelet aggregation (anti-inflammatory), etc., they have novel inhibitory effects on protein kinase C. The development of anti-tumor agents and anti-inflammatory agents is strongly desired.

【０００４】[0004]

【発明の解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
抗生物質とその製造法を提供することにある。更に、本
発明の目的は、上記抗生物質を有効成分とする抗腫瘍剤
及び抗炎症剤を提供することにある。SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide a new antibiotic and a method for producing the same. Further, an object of the present invention is to provide an antitumor agent and an antiinflammatory agent containing the above antibiotic as an active ingredient.

【０００５】[0005]

【課題を解決するための手段】本発明の抗生物質は、後
述の理化学的性質を有する文献未載の新規な抗生物質で
あり、ＲＫ−２８６Ｄと命名された。抗生物質ＲＫ−２
８６Ｄは公知の抗生物質ＲＫ−２８６Ｃ（特願平２−２
５８７２４号公報参照）と同様にプロテインキナーゼＣ
に対して阻害活性を示すため、抗腫瘍プロモーターある
いは抗血小板凝集を示す有用な抗腫瘍剤及び抗炎症剤と
して利用できる。The antibiotic of the present invention is a novel antibiotic which has not been described in the literature and has the physicochemical properties described below, and is named RK-286D. Antibiotic RK-2
86D is a known antibiotic RK-286C (Japanese Patent Application No. 2-2
(See Japanese Patent No. 58724), protein kinase C
Since it exhibits an inhibitory activity against, it can be used as a useful antitumor agent or antiinflammatory agent showing an antitumor promoter or antiplatelet aggregation.

【０００６】以下に、本発明を詳細に説明する。 ＜抗生物質ＲＫ−２８６Ｄの製造＞ （使用する微生物）本発明の抗生物質ＲＫ−２８６Ｄを
生産する微生物は、ストレプトミセス（Streptomyces）
属に属する抗生物質ＲＫ−２８６Ｄの生産能を有する菌
種である。The present invention will be described in detail below. <Production of Antibiotic RK-286D> (Microorganism used) The microorganism producing the antibiotic RK-286D of the present invention is Streptomyces.
It is a bacterial species capable of producing the antibiotic RK-286D belonging to the genus.

【０００７】その一例として、ストレプトミセス・エス
ピー・ＲＫ−２８６（Streptomycessp. RK-286)（以下
“ＲＫ−２８６株”と称する。）を挙げることができ
る。該微生物は、上記の特性を有し、本発明の抗生物質
ＲＫ−２８６Ｄを有利に生産するものであり、本発明の
製造法に有効に利用し得るものである。また、上記ＲＫ
−２８６株の自然的及び人工的変異株は勿論、ストレプ
トミセス属に属する菌種で後述の抗生物質ＲＫ−２８６
Ｄの生産能を有する微生物はすべて本発明方法において
使用することができる。[0007] One example thereof is Streptomyces sp. RK-286 (Streptomycessp. RK-286) (hereinafter referred to as "RK-286 strain"). The microorganism has the above-mentioned characteristics, advantageously produces the antibiotic RK-286D of the present invention, and can be effectively used in the production method of the present invention. Also, the above RK
-286 strain is a natural and artificial mutant strain, as well as a bacterial species belonging to the genus Streptomyces and the antibiotic RK-286 described below.
Any microorganism capable of producing D can be used in the method of the present invention.

【０００８】上記ＲＫ−２８６株は、石川県七尾市で採
取された土壌中より分離された土壌放線菌であり、工業
技術院微生物工業技術研究所に平成元年３月２７日付寄
託され、その微生物受託番号は、微工研菌寄第１０６３
４号（ＦＥＲＭＰ−１０６３４）である。 （培養法及び精製法）本発明の抗生物質ＲＫ−２８６Ｄ
を得るに当っては、ストレプトミセス属に属する上記抗
生物質生産菌を、抗生物質を生産する通常の方法に従っ
て培養する。培養の形態は、液体培養でも固体培養でも
よく、工業的に有利に培養するためには、前記生産菌の
胞子懸濁液又は培養液を培地に接種し、通気撹拌培養を
行えばよい。The RK-286 strain is a soil actinomycete isolated from the soil collected in Nanao City, Ishikawa Prefecture, and has been deposited with the Institute of Microbial Science and Technology of the Agency of Industrial Science on March 27, 1989. The microorganism accession number is MICROLAB.
No. 4 (FERMP-10634). (Culturing method and purification method) Antibiotic RK-286D of the present invention
To obtain, the above-mentioned antibiotic-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces is cultured according to a usual method for producing an antibiotic. The form of the culture may be liquid culture or solid culture, and for industrially advantageous culture, a spore suspension or culture solution of the above-mentioned production strain may be inoculated into the medium and aerated stirring culture may be performed.

【０００９】培地の栄養源としては特に限定されること
はなく、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源
その他を培地中に含有させることができる。炭素源とし
ては、澱粉、デキストリン、グリセリン、グルコース、
シュークロース、ガラクトース、トノシトール、マンニ
トールなどが、また窒素源としては、ペプトン、大豆
粉、肉エキス、米ぬか、麸、尿素、コーンスティープリ
カー、アンモニウム塩、硝酸塩、その他の有機又は無機
の窒素化合物が用いられる。その他、無機塩類、たとえ
ば食塩、燐酸塩類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マン
ガン、鉄等の金属塩類等を適宜に添加してもよく必要に
応じて消泡剤として、動、植、鉱物油等を添加してもよ
い。培養温度、培養時間等の培養条件は使用菌の発育に
適し、しかもＲＫ−２８６Ｄの生産が最高となるような
条件が選ばれる。たとえば、培地のpHは４〜９、特に中
性付近がよく、培養の適温は２５〜３５℃程度がよい。
しかし、これらの培養組成物、培地の水素イオン濃度、
培養温度、撹拌条件などの培養条件は使用する菌株の種
類や、外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節されるべきであることはいうまでもな
い。このようにして得られる培養物から、代謝産物を採
取するのに通常用いられる手段を適宜に利用してＲＫ−
２８６Ｄを採取して得る。たとえばＲＫ−２８６Ｄと不
純物との溶解度差を利用する手段、イオン結合力の差を
利用する手段、吸着親和力の差を利用する手段、分子量
の差を利用する手段のいずれも、それぞれ単独、又は、
適宜組合せて、あるいは反復して使用される。具体的に
は、ＲＫ−２８６Ｄは、培養菌体にその大部分が存在す
る。その培養菌体抽出物を各種のイオン交換クロマトグ
ラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、吸着クロマト
グラフィー、液体クロマトグラフィー、セルロース分配
クロマトグラフィー等を組合せて精製すると、ＲＫ−２
８６Ｄ及びその他の活性成分を含む画分が得られる。こ
の画分を凍結乾燥して得られた粉末を更に高速液体クロ
マトグラフィー（たとえばカプセルパックカラムを用
い、８０％メタノール0.１％アンモニアの系）で展開に
より精製し、ＲＫ−２８６Ｄの精製淡黄色粉末を得る。The nutrient source of the medium is not particularly limited, and the medium may contain a carbon source, a nitrogen source and the like which are usually used for culturing microorganisms. Carbon sources include starch, dextrin, glycerin, glucose,
Sucrose, galactose, tonositol, mannitol, etc., and as the nitrogen source, peptone, soybean flour, meat extract, rice bran, malt, urea, corn steep liquor, ammonium salt, nitrate, and other organic or inorganic nitrogen compounds are used. To be In addition, inorganic salts such as salt, phosphates, metal salts such as potassium, calcium, zinc, manganese, iron, etc. may be appropriately added, and if necessary, an antifoaming agent such as animal, plant or mineral oil can be added. You may add. The culturing conditions such as culturing temperature and culturing time are selected so as to be suitable for the growth of the bacteria used and maximize the production of RK-286D. For example, the pH of the medium is preferably 4 to 9, particularly around neutral, and the suitable temperature for culturing is preferably about 25 to 35 ° C.
However, these culture compositions, the hydrogen ion concentration of the medium,
It goes without saying that the culture conditions such as the culture temperature and the stirring conditions should be appropriately adjusted depending on the type of strain to be used, external conditions and the like so as to obtain preferable results. From the culture thus obtained, RK-
Obtained by collecting 286D. For example, any of the means utilizing the difference in solubility between RK-286D and impurities, the means utilizing the difference in ionic binding force, the means utilizing the difference in adsorption affinity, and the means utilizing the difference in molecular weight are each alone or
They are used in appropriate combination or repeatedly. Specifically, most of RK-286D is present in cultured bacterial cells. The cultured bacterial cell extract is purified by combining various kinds of ion exchange chromatography, gel filtration chromatography, adsorption chromatography, liquid chromatography, cellulose partition chromatography and the like to give RK-2.
A fraction containing 86D and other active ingredients is obtained. The powder obtained by freeze-drying this fraction was further purified by development by high performance liquid chromatography (for example, using a capsule pack column, 80% methanol 0.1% ammonia system), and purified by RK-286D. Get a powder.

【００１０】こうして得られたＲＫ−２８６Ｄの理化学
的性質及び生物学的性質は次のとおりである。 溶解性 ：ジメチルスルホキシド、酢酸エチルメタノー
ルに易溶、水に不溶 分子量 ：４４1.１６９１（ＨＲ−ＥＩＭＳ） 呈色反応：ライドン−スミス、アニスアルデヒド・硫酸
反応に陽性、ニンヒドリン、FeCl₃ 反応に陰性 物質の色：淡黄色 薄層クロマトグラフィー：米国メルク社製シリカゲル
TLC プレート 溶媒 クロロホルム：メタノール＝１０：１ Rf値 0.６ 以上の諸性質から抗生物質ＲＫ−２８６Ｄは、以下の式
で示される新規物質であることが明らかとなった。The physicochemical and biological properties of RK-286D thus obtained are as follows. Solubility: Dimethylsulfoxide, Ethyl acetate Easily soluble in methanol, insoluble in water Molecular weight: 441.1691 (HR-EIMS) Color reaction: Rydon-Smith, positive for anisaldehyde-sulfuric acid reaction, negative for ninhydrin, FeCl ₃ reaction Color: Light yellow Thin layer chromatography: Silica gel manufactured by Merck & Co., Inc.
TLC plate solvent Chloroform: Methanol = 10: 1 Rf value 0.6 From the above properties, it was revealed that the antibiotic RK-286D is a novel substance represented by the following formula.

【００１１】[0011]

【化２】 Embedded image

【００１２】＜他物質との比較＞これらの理化学的及び
生物学的性質を有する抗生物質は、これまでに文献的に
報告されていないが、類似の抗生物質としてＫ−２５２
ｄ（ジャーナル オブアンティバイオテイクス ３９
巻，１０７２頁，１９８６年）が知られている。しかし
抗生物質Ｋ２５２ｄと本発明の抗生物質ＲＫ−２８６Ｄ
とは糖部分の構造が異なっており、分子量、分子式や
〔α〕_D の違いより明白に区別できる。 （ＲＫ−２８６Ｄを有効成分とする抗腫瘍剤及び抗炎症
剤）本発明のＲＫ−２８６Ｄを有効成分とする抗腫瘍剤
及び抗炎症剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用可
能であり、経口投与する場合は軟・硬カプセル剤又は錠
剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与され、非経口投与
する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤などの皮下或は静
脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘稠状として持続
的な経皮吸収が維持できるように坐薬、塗布薬、軟膏の
ような剤型で投与され得る。<Comparison with Other Substances> Antibiotics having these physicochemical and biological properties have not been reported in the literature so far, but similar antibiotics, K-252.
d (Journal of Antibiotics 39
Vol. 1072, 1986). However, the antibiotic K252d and the antibiotic RK-286D of the present invention
The structure of the sugar moiety is different from that of, and can be clearly distinguished by the difference in molecular weight, molecular formula, and [α] _D. (Anti-tumor agent and anti-inflammatory agent containing RK-286D as an active ingredient) The anti-tumor agent and anti-inflammatory agent containing RK-286D of the present invention as an active ingredient can be used either orally or parenterally, When orally administered, it is administered as soft / hard capsules or tablets, granules, fine granules, and powders, and when parenterally administered, subcutaneous or intravenous injections such as aqueous suspensions and oily preparations, drip infusion. The drug and solid or suspension may be administered in a dosage form such as suppository, ointment or ointment so that sustained transdermal absorption can be maintained.

【００１３】本発明の有効成分の製剤化は、界面活性
剤、賦形剤、滑沢剤、佐剤、及び有効成分の性質を考慮
して腸溶性製剤とするために医薬的に許容し得る皮膜形
成物質、コーティング助剤等を用い適宜行うことがで
き、その具体例を挙げれば、次のとおりである。本発明
の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、界面活
性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチレング
リコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類、硫酸
化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加するこ
とができる。また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、
デンプン、結晶セルロース、マンニット、軽質無水珪
酸、アミン酸マグネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネ
シウム、合成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸
水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメ
チルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組合
せて添加することができる。The formulation of the active ingredient of the present invention is pharmaceutically acceptable in order to prepare an enteric-coated preparation in consideration of the properties of the surfactant, the excipient, the lubricant, the adjuvant and the active ingredient. It can be appropriately performed by using a film-forming substance, a coating aid, and the like, and specific examples thereof are as follows. In order to improve the disintegration and elution of the composition of the present invention, one or more surfactants such as alcohols, esters, polyethylene glycol derivatives, fatty acid esters of sorbitan, and sulfated fatty alcohols are used. It can be added. Further, as an excipient, for example, sucrose, lactose,
One or more of starch, crystalline cellulose, mannite, light anhydrous silicic acid, magnesium amine acid, magnesium metasilicate aluminate, synthetic aluminum silicate, calcium carbonate, sodium hydrogen carbonate, calcium hydrogen phosphate, carboxymethyl cellulose calcium, etc. It can be added in combination.

【００１４】滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグ
ネシウム、タルク、硬化油等を１種又は２種以上添加す
ることができ、また嬌味剤及び嬌臭剤として、食塩、サ
ッカリン、糖、マンニット、オレンジ油カンゾウエキ
ス、クエン酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リ
ンゴ酸等の甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有させ
てもよい。As the lubricant, for example, magnesium stearate, talc, hydrogenated oil and the like can be added alone or in combination of two or more, and as the taste and odorant, salt, saccharin, sugar and mannitol. Sweeteners such as orange oil licorice extract, citric acid, glucose, menthol, eucalyptus oil, malic acid, etc., flavors, colorants, preservatives and the like may be contained.

【００１５】懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例え
ばココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸
カルシウム、ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させる
ことができる。また、皮膜形成物質としては、セルロー
ス、糖類等の炭水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロ
ース（ＣＡＰ）、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸
モノエステル類等のポリビニル誘導体としてアクリル酸
メチル・メタクリル酸共重合体、メタアクリル酸メチル
・メタアクリル酸共重合体が挙げられる。Examples of adjuvants such as suspending agents and wetting agents may include coconut oil, olive oil, sesame oil, peanut oil, calcium lactate, safflower oil, soybean phospholipid and the like. As the film-forming substance, cellulose acetate phthalate (CAP) is used as a carbohydrate derivative such as cellulose or saccharide, and methyl acrylate / methacrylic acid copolymer is used as a polyvinyl derivative such as an acrylic acid copolymer or a dibasic acid monoester. Examples thereof include polymers and methyl methacrylate / methacrylic acid copolymers.

【００１６】また、上記皮膜形成物質をコーティングす
るに際し、通常使用されるコーティング助剤、例えば可
塑剤の他、コーティング操作時の薬剤相互の付着防止の
ための各種添加剤を添加することによって皮膜形成剤の
性質を改良したり、コーティング操作をより容易ならし
めることができる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用
いてマイクロカプセル化してから賦形剤等と混合した剤
型としても良い。When coating the above-mentioned film-forming substance, a film-forming agent can be formed by adding a coating aid which is usually used, for example, a plasticizer and various additives for preventing mutual adhesion of chemicals during coating operation. It can improve the properties of the agent and make the coating operation easier. The active ingredient may be microencapsulated using a film-forming substance and then mixed with an excipient or the like to give a dosage form.

【００１７】特に代表的な剤型における配合比は下記の
とおりである。 特に好ましい範囲 有効成分 0.1 〜90 重量％ 0.1 〜15 重量％ 賦形剤 10 〜99.8 〃 85 〜99.4 〃 滑沢剤 0 〜50 〃 0 〜20 〃 界面活性剤 0 〜50 〃 0 〜20 〃 皮膜形成物質 0.1 〜50 重量％ 0.3 〜20 重量％ 特に好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルロース、カルボ
キシメチルセルロースカルシウムである。また、投与量
は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量であり、腫瘍
の症状、投与経路、剤型などによって左右されるが、一
般に、経口投与の場合、大人では１日当り約0.０１〜５
mg/Kg 体重（小人では、約0.０１〜３mg/Kg 体重）の範
囲で、その上限は好ましくは約2.５mg/Kg 体重、更に好
ましくは約0.５mg/Kg 体重程度であり、非経口投与の場
合、その上限は約0.５mg/Kg 体重程度であり、好ましく
は約0.２５mg/Kg 体重、更に好ましくは約0.１mg/Kg 体
重が適当である。The compounding ratios of particularly typical dosage forms are as follows. Particularly preferred range Active ingredient 0.1 to 90% by weight 0.1 to 15% by weight Excipient 10 to 99.8 〃 85 to 99.4 〃 Lubricant 0 to 50 〃 0 to 20 〃 Surfactant 0 to 50 〃 0 to 20 〃 Film formation Substances 0.1-50% by weight 0.3-20% by weight Particularly preferred excipients are lactose, crystalline cellulose, carboxymethylcellulose calcium. Further, the dose is an amount sufficient to effectively treat the target tumor, and depends on the tumor symptom, administration route, dosage form, etc., however, in general, in the case of oral administration, about 0 per day for adults. 01-5
In the range of mg / Kg body weight (in a dwarf, about 0.01 to 3 mg / Kg body weight), the upper limit is preferably about 2.5 mg / Kg body weight, more preferably about 0.5 mg / Kg body weight, In the case of parenteral administration, the upper limit is about 0.5 mg / Kg body weight, preferably about 0.25 mg / Kg body weight, more preferably about 0.1 mg / Kg body weight.

【００１８】以下に、本発明を製造例、製剤例及び試験
例によって具体的に説明するが、本発明はこれに何ら限
定されるものではない。なお、「％」は重量％を表わ
す。 製造例 グルコース１ｇ、きな粉１０ｇ、麦芽エキス１０ｇ、オ
ートミール５ｇ、肉エキス2.５ｇ、K₂HPO₄１ｇ、MgSO₄
0.１ｇを水１リットルに溶解後pH7.２に調整した生産培
地に前記ＲＫ−２８６株を接種して、２７℃で１４４時
間通気撹拌培養した。この全培養液を菌体と培養液に分
離して、菌体はアセトン抽出後、培養液は直接に、それ
ぞれ酢酸エチルで抽出した。抽出された活性物質は減圧
濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した
（カラムサイズ7.４×５０cm）。活性画分は、クロロホ
ルム：メタノール＝１０：１で溶出される。得られた活
性画分を再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー（３
×５０cm、クロロホルム：メタノール＝５０：１）にて
精製した。最終的に高速液体クロマトグラフィー（カラ
ム：CAPCELL PAK C₁₈ φ２×２５cm）で８０％ MeOH
、0.１％ NH₄OH（pH8)の溶媒系で単一物質まで精製さ
れた。この時ＲＫ−２８６Ｄの保持時間は約２４分であ
り、ＲＫ−２８６Ｃは約３０分で溶出された。収量は４
mgであった。 製剤例１（注射・点滴剤）ＲＫ−２８６Ｄ、１０mgを含
有するように粉末ぶどう糖５ｇを加えてバイアルに無菌
的に分配し、密封した上、窒素、ヘリウム等の不活性ガ
スを密封して冷暗所に保存する。使用前に0.８５％生理
的食塩水１００ミリリットルを添加して静脈内注射剤と
し、１日、１０〜１００ミリリットルを症状に応じて静
脈内注射又は点滴で投与する。 製剤例２（注射・点滴剤）ＲＫ−２８６Ｄ、２mgを用い
て、製剤例１と同様の方法により軽症用静脈内注射剤と
し、１日、１０〜１００ミリリットルを症状に応じて静
脈内注射又は点滴で投与する。 製剤例３（腸溶性カプセル剤）ＲＫ−２８６Ｄ、0.５
ｇ、乳糖2.４６ｇ及びヒドロキシプロピルセルロース0.
０４ｇを各々とり、よく混合した後、常法に従って粒状
に成形し、これをよく乾燥して篩別してビン、ヒートシ
ール包装などに適した顆粒剤を製造する。次に、酢酸フ
タル酸セルロース0.５ｇ及びヒドロキシプロピルメチル
セルロースフタレート0.５ｇを溶解して被覆基材とな
し、前記顆粒を浮遊流動させつつこの基材を被覆して腸
溶性の顆粒剤とする。この組成物をカプセルに充填して
腸溶性カプセル製剤１００個を製造する。 製剤例４（軟膏剤）プラスチベース７０％及びポリアク
リル酸ナトリウム３０％からなる基剤９9.９重量部に、
ＲＫ−２８６Ｃ0.１重量部を混和して軟膏剤を得た。 試験例 ヒト骨髄性白血病細胞Ｋ５６２を１０％牛胎児血清を含
むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。培養は３７℃、５
％の炭酸ガス培養器にて行った。The present invention will be specifically described below with reference to production examples, formulation examples and test examples, but the present invention is not limited thereto. In addition, "%" represents weight%. Production Example Glucose 1 g, kinako 10 g, malt extract 10 g, oatmeal 5 g, meat extract 2.5 g, K ₂ HPO ₄ 1 g, MgSO ₄
The RK-286 strain was inoculated into a production medium whose pH was adjusted to 7.2 after dissolving 0.1 g in 1 liter of water, followed by aeration and stirring culture at 27 ° C. for 144 hours. The whole culture solution was separated into cells and a culture solution, the cells were extracted with acetone, and then the culture solution was directly extracted with ethyl acetate. The extracted active substance was concentrated under reduced pressure and subjected to silica gel column chromatography (column size 7.4 × 50 cm). The active fraction is eluted with chloroform: methanol = 10: 1. The obtained active fraction was again subjected to silica gel column chromatography (3
It was purified with × 50 cm, chloroform: methanol = 50: 1). Finally, 80% MeOH by high performance liquid chromatography (column: CAPCELL PAK C ₁₈ φ2 × 25 cm).
, 0.1% NH ₄ OH (pH 8) solvent system to single material. At this time, the retention time of RK-286D was about 24 minutes, and RK-286C was eluted in about 30 minutes. Yield is 4
It was mg. Formulation Example 1 (Injection / Drip) RK-286D RK-286D, 5 g of powdered glucose was added to 10 mg, and the mixture was aseptically distributed to a vial and sealed, and then an inert gas such as nitrogen or helium was sealed to cool and dark place. Save to. Before use, 100 ml of 0.85% physiological saline is added to give an intravenous injection, and 10 to 100 ml is administered by intravenous injection or drip infusion depending on the condition every day. Formulation Example 2 (Injection / Drip) RK-286D (2 mg) was used to prepare a mild intravenous injection in the same manner as in Formulation Example 1, and 10 to 100 ml of the drug was intravenously injected daily depending on the symptoms. Administer by infusion. Formulation Example 3 (Enteric coated capsule) RK-286D, 0.5
g, lactose 2.46 g and hydroxypropyl cellulose 0.
After taking 04 g of each, mixing well, it is formed into granules by an ordinary method, well dried and sieved to produce granules suitable for bottles, heat seal packaging and the like. Next, 0.5 g of cellulose acetate phthalate and 0.5 g of hydroxypropylmethyl cellulose phthalate are dissolved to form a coated base material, and the base material is coated while floating and flowing the granules to prepare an enteric-coated granule. This composition is filled into capsules to produce 100 enteric-coated capsule preparations. Formulation Example 4 (Ointment) To 99.9 parts by weight of a base consisting of 70% plastibase and 30% sodium polyacrylate,
Ointment was obtained by mixing 0.1 part by weight of RK-286C. Test Example Human myeloid leukemia cells K562 were cultured in RPMI1640 medium containing 10% fetal calf serum. Culture at 37 ℃, 5
% Carbon dioxide incubator.

【００１９】細胞密度を１０⁵ 細胞／ミリリットルに合
わせた後、終濃度0.１μg ／ミリリットルとなるように
ホルボールエステル（phorbol 12,13-dibutyrate) を加
えた。３０分後（この間、細胞は炭酸ガス培養器中に静
置）、顕微鏡で観察するとＫ５６２細胞表面に著しい形
態変化（水泡化）が生じた。これは、プロテインキナー
ゼＣの活性化によるものである。図３に、形態変化した
細胞の割合と薬剤のモル濃度との関係を示したが、ＲＫ
−２８６Ｄ物質をホルボールエステルとともに細胞に加
えると、その形態変化を抑制していることがわかる。こ
れは、プロテインキナーゼＣ活性の阻害によるものであ
り、阻害活性(IC₅₀)は、約３1.６μM を示した。After the cell density was adjusted to 10 ⁵ cells / ml, phorbol ester (phorbol 12,13-dibutyrate) was added to give a final concentration of 0.1 μg / ml. After 30 minutes (while the cells were allowed to stand in a carbon dioxide incubator), when observed under a microscope, a significant morphological change (foaming) occurred on the surface of K562 cells. This is due to activation of protein kinase C. Fig. 3 shows the relationship between the ratio of morphologically changed cells and the molar concentration of the drug.
It can be seen that when the -286D substance is added to cells together with phorbol ester, its morphological change is suppressed. This is due to inhibition of protein kinase C activity, and the inhibitory activity (IC ₅₀ ) was about 31.6 μM.

【００２０】[0020]

【発明の効果】上記の試験結果より、抗生物質ＲＫ−２
８６Ｄは、プロテインキナーゼＣに対する阻害活性を示
すため、抗腫瘍剤プロモーター、細胞増殖抑制（抗ガン
剤）、抗血小板凝集（抗炎症）などの効果を生じる。From the above test results, the antibiotic RK-2
Since 86D exhibits an inhibitory activity against protein kinase C, it produces an effect such as an antitumor agent promoter, cell growth suppression (anticancer agent), antiplatelet aggregation (anti-inflammatory) and the like.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】本発明の抗生物質ＲＫ−２８６Ｄのメタノール
溶液中（2.５μg ／μl ）での紫外線吸収スペクトルを
示す図である。FIG. 1 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of an antibiotic RK-286D of the present invention in a methanol solution (2.5 μg / μl).

【図２】抗生物質ＲＫ−２８６Ｄの赤外線吸収スペクト
ル（KBr 中）を示す図である。FIG. 2 is a diagram showing an infrared absorption spectrum (in KBr) of antibiotic RK-286D.

【図３】抗生物質ＲＫ−２８６Ｄ及び公知の抗生物質Ｒ
Ｋ−２８６ＣのプロテインキナーゼＣに対する阻害活性
を示す図である。FIG. 3: Antibiotic RK-286D and known antibiotic R
It is a figure which shows the inhibitory activity with respect to the protein kinase C of K-286C.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code Office reference number FI technical display location C12R 1: 465)

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 下記の式で示される抗生物質ＲＫ−２８
６Ｄ。 【化１】 1. An antibiotic RK-28 represented by the following formula:
6D. Embedded image 【請求項２】 ストレプトミセス（Streptomyces）属に
属する抗生物質ＲＫ−２８６Ｄ生産菌を培養し、その培
養物から抗生物質ＲＫ−２８６Ｄを分離採取することを
特徴とする抗生物質ＲＫ−２８６Ｄの製造法。2. A method for producing an antibiotic RK-286D, which comprises culturing an antibiotic RK-286D-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces and separating and collecting the antibiotic RK-286D from the culture. . 【請求項３】 抗生物質ＲＫ−２８６Ｄ生産菌がストレ
プトミセス・エスピー・ＲＫ−２８６（Streptomyces s
p. RK-286)である請求項２に記載の製造法。3. An antibiotic RK-286D producing bacterium is Streptomyces sp. RK-286 (Streptomyces s).
p. RK-286). 【請求項４】 抗生物質ＲＫ−２８６Ｄを有効成分とし
て含有することを特徴とする抗腫瘍剤。4. An antitumor agent comprising the antibiotic RK-286D as an active ingredient. 【請求項５】 抗生物質ＲＫ−２８６Ｄを有効成分とし
て含有することを特徴とする抗炎症剤。5. An anti-inflammatory agent comprising the antibiotic RK-286D as an active ingredient.