JPH0789901B2 - Method for producing sake or miscellaneous sake with high glycerol content - Google Patents

Method for producing sake or miscellaneous sake with high glycerol content

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JPH0789901B2 JP23220690A JP23220690A JPH0789901B2 JP H0789901 B2 JPH0789901 B2 JP H0789901B2 JP 23220690 A JP23220690 A JP 23220690A JP 23220690 A JP23220690 A JP 23220690A JP H0789901 B2 JPH0789901 B2 JP H0789901B2
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Description

【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は、変異酵母を用いて0.5%(重量/容量%、以
下同じ)以上ものグリセロール含量の高い清酒または雑
酒の製造方法に関する。
Description: TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing sake or miscellaneous sake having a glycerol content as high as 0.5% (weight / volume%, the same applies hereinafter) using mutant yeast.

(従来の技術) グリセロールは酵母による醗酵における副産物として生
成され、各種の酒に含有されるもので、例えば、清酒で
は、一般に、0.2〜0.4%程度含まれ、「照り」、「さ
え」、「コク」と表現される官能に寄与しているといわ
れている。しかしながら、従来、清酒、果実酒、雑酒に
おいては、グリセロール量を制御または増強する手段は
なかった。また、果実酒においては、いわゆる「貴腐ワ
イン」などのグリセロール含有量の高い酒が存在する
が、このグリセロールは、原料とする葡萄自体または、
それに付着したボトリティス・シネリア(Botrytiscine
rea)などのカビによってグリセロール量が増した葡萄
に由来するものであり、人為的にグリセロール量の増大
を図っているものではない。また、ノイベルグ(Neuber
g)[ビオヘキシエ・ツアイトシュリフト(Biochem.Zei
tschr.),58,158(1913);78,224(1916);52,1677(19
19)]によって、エタノール生産の前駆体であるアセト
アルデヒドを固定するために亜硫酸を添加したり、培養
液をアルカリ性にするとグリセロールを多量生成するこ
とが示されている。しかし、この方法は、第一次世界大
戦時のグリセロール生産のごとく、単に、グリセロール
を得るためには有用であるが、飲用に供するには不適当
である。また、低アルコール酒を製造する際には、醸造
後、加水することによってアルコール分を薄めること
が、製造および貯蔵上経済的であるが、他の成分も薄ま
ってしまうため、「薄い」、「水っぽい」などと官能上
不適当なことが多く、水以外の成分を添加しないで製造
する方法の開発が望まれていた。
(Prior Art) Glycerol is produced as a by-product in fermentation by yeast and is contained in various kinds of liquor. For example, in sake, it is generally contained in an amount of about 0.2 to 0.4%. It is said that it contributes to the sensuality expressed as "body". However, heretofore, there has been no means for controlling or enhancing the amount of glycerol in sake, fruit wine and miscellaneous sake. In addition, in fruit liquor, there are liquors with a high glycerol content such as so-called "precious wine", but this glycerol is the grape itself or the raw material.
Botrytis cinerea attached to it
rea) is derived from the grapes whose glycerol content has increased due to mold, and is not intended to artificially increase the glycerol content. In addition, Neuber
g) [Biochem.Zeit Schrift (Biochem.Zei
tschr.), 58,158 (1913); 78,224 (1916); 52,1677 (19
19)] have shown that glycerol is produced in large amounts when sulfite is added to fix acetaldehyde, which is a precursor for ethanol production, or when the culture is made alkaline. However, this method is useful for merely obtaining glycerol as in the case of glycerol production during World War I, but is not suitable for drinking. In addition, when producing low-alcoholic liquor, it is economical to manufacture and store it by diluting the alcohol content by adding water after brewing, but since other ingredients also dilute, "thin", " It is often functionally unsuitable as "watery" and the development of a method for producing without adding components other than water has been desired.

一方、ビールにおいては、多量のグリセロールを生産す
るアルコールデヒドロゲナーゼ陰性の酵母変異株を用い
て低アルコールまたは無アルコールの、グリセロール含
量の高いビールを得る方法が提案されている(特開昭62
−272965号)。
On the other hand, for beer, a method has been proposed in which a low-alcohol or alcohol-free beer having a high glycerol content is obtained using an alcohol dehydrogenase-negative yeast mutant that produces a large amount of glycerol (JP-A-62-62).
-272965).

しかしながら、そのような酵母を用いて実際に商品価値
のある清酒、果実酒あるいは雑酒を得られるか否かは全
く予測しえないところである。
However, it is completely unpredictable whether such yeast can be used to obtain sake, fruit liquor or miscellaneous liquor with commercial value.

(発明が解決しようとする課題) 本発明者らは、グリセロール含量の高い清酒または雑酒
を得るべく鋭意研究を重ねた結果、これらの酒類に適し
たグリセロールを多量生産する酵母の育種に成功し、本
発明を完成するに至った。
(Problems to be Solved by the Invention) As a result of intensive studies to obtain sake or miscellaneous sake having a high glycerol content, the present inventors have succeeded in breeding yeasts that produce large amounts of glycerol suitable for these alcoholic beverages. The present invention has been completed.

(課題を解決するための手段) 本発明は、アルコールデヒドロゲナーゼ(E.C.1.1.1.
1)(以下、ADHと略す)遺伝子の少なくとも一部を欠損
または欠落させた、かつアルコール醗酵能を保持してい
る酵母で醗酵を行うことを特徴とするグリセロール含量
の高い清酒または雑酒(特許第1110146号)のごとき雑
酒の製造方法を提供するものである。
(Means for Solving the Problems) The present invention provides an alcohol dehydrogenase (EC 1.1.1.
1) Sake or miscellaneous sake with a high glycerol content, characterized in that fermentation is carried out with a yeast in which at least a part of the gene (hereinafter abbreviated as ADH) is deleted or deleted, and which has an alcohol fermentation ability (patent) No. 1110146) is provided.

すなわち、本発明は、酒のコクを改善するものであり、
ADHアイソザイムの欠損度合により、例えば、〈1〉ア
ルコール濃度は従来と比較適差がない清酒または雑酒
と、〈2〉薄めても比較的「水っぽさ」を軽減できる清
酒または雑酒と、〈3〉濃醇で低アルコールの清酒また
は雑酒を製造することができる。
That is, the present invention improves the richness of sake,
Depending on the degree of ADH isozyme deficiency, for example, <1> Sake or miscellaneous sake, which has no difference in alcohol concentration compared to the conventional one, and <2> Sake or miscellaneous sake, which can reduce the “wateriness” relatively even when diluted. , <3> It is possible to produce concentrated or low-alcoholic sake or miscellaneous sake.

本発明に用いる酵母は、サッカロミセス・セレジセエ
(Saccharomyces cerevisiae)に属し、ADHアイソザイ
ムの一部または全てを備え、アルコール醗酵能を保持し
ているものである。
The yeast used in the present invention belongs to Saccharomyces cerevisiae, is equipped with a part or all of ADH isozyme, and retains alcohol fermentation ability.

かかる酵母は、ADHアイソザイムの一部、または全てを
欠損することにより、そのエネルギー補填のためグリセ
ロールを多量に生産するようになる。また、電子伝達系
を含むミトコンドリア形成に異常を持つか、グリセロー
ルキナーゼ欠損のためグリセロールを利用できなくなる
と効果的である。特に、ADH I欠損変異株が適してい
る。
By deficient in a part or all of the ADH isozyme, such yeast becomes able to produce a large amount of glycerol to supplement its energy. It is also effective if glycerol cannot be used due to abnormalities in mitochondrial formation including electron transfer system or deficiency of glycerol kinase. Particularly, the ADH I-deficient mutant strain is suitable.

ADH Iを欠損すると、アルコール生産能が低下し、グリ
セロール生産量が高まるが、他のADHアイソザイムによ
り、ある程度のアルコール生産が行われる。したがっ
て、本発明では、糖原料をそのままアルコール変換した
場合と比べ、低アルコールではあるが、グリセロールに
よりコクのある清酒または雑酒を製造することができ
る。ただし、高い糖濃度のモロミや、並行複醗酵に適用
した場合、アルコール濃度は、通常とさほど差がないも
のができる場合があり、この場合、酒質は、やや濃醇な
ものとなる。アルコール濃度をさらに低下させる必要が
ある場合、他のADHアイソザイムの欠損株を用いればよ
く、グリセロール濃度はさらに高くなる。また、バッチ
醗酵の場合、糖基質が消費されたとき、アルコールやグ
リセロールを再度利用し、アルコールまたはグリセロー
ルの濃度が低下することがある。これを防ぐためには、
ADHアイソザイムであるADH IIおよびミトコンドリアのA
DH欠損株または、グリセロールを利用できない変異株を
用いることが望ましい。
When ADH I is deficient, the ability to produce alcohol is reduced and the amount of glycerol produced is increased, but other ADH isozymes produce alcohol to some extent. Therefore, in the present invention, compared with the case where the sugar raw material is directly converted to alcohol, it is possible to produce sake or miscellaneous sake which is low in alcohol but rich in glycerol. However, when applied to moromi with a high sugar concentration and parallel double fermentation, the alcohol concentration may be not so different from normal, and in this case, the quality of liquor is slightly rich. When it is necessary to further reduce the alcohol concentration, other ADH isozyme-deficient strains may be used, and the glycerol concentration is further increased. Further, in the case of batch fermentation, when the sugar substrate is consumed, alcohol or glycerol may be reused, and the concentration of alcohol or glycerol may decrease. To prevent this,
ADH isozyme ADH II and mitochondrial A
It is desirable to use a DH-deficient strain or a mutant strain that cannot utilize glycerol.

これらの酵母は通常の醸造用酵母から自体公知の方法に
よって誘導できる。
These yeasts can be derived from ordinary brewing yeasts by a method known per se.

つぎに、本発明に用いる酵母の取得方法の一例を説明す
る。
Next, an example of the method for obtaining yeast used in the present invention will be described.

(1)醸造用酵母またはその半数体株を、例えば、YPGC
(酵母エキス0.5%、バクトペプトン0.5%、グルコース
2%、MgSO40.05%、KN2PO40.1%)などの液体天然培地
に植菌し、対数増殖期まで培養する。菌体を集め、エム
・シリアシー、ミューテーション・リサーチ(M.Ciriac
y,Mutation Res.),29,315(1975)の方法、すなわち、
1mM〜10mMのアリルアルコールを含んだYPGC寒天培地ま
たは、シー・ウィルスおよびディ・ホム、ジェネティッ
クス(C.Wills & D.Hom,Genetics),119,791(1988)
の方法、すなわち、1mg/のアンチマイシンAおよび2m
M〜70mMのピラゾールを含んだYPGC寒天培地に塗布し、
耐性株を得る。これら酵母菌株のグリセロール生産量を
測定し、所望の酵母を選抜する。
(1) Yeast for brewing or a haploid strain thereof, for example, YPGC
It is inoculated into a liquid natural medium such as (yeast extract 0.5%, bactopeptone 0.5%, glucose 2%, MgSO 4 0.05%, KN 2 PO 4 0.1%) and cultured until the logarithmic growth phase. Collected cells, M Serialization, Mutation Research (M.Ciriac
y, Mutation Res.), 29,315 (1975), that is,
YPGC agar medium containing 1 mM to 10 mM allyl alcohol, or C virus and Di Hom, Genetics (C.Wills & D.Hom, Genetics), 119, 791 (1988)
Method, ie 1 mg / antimycin A and 2 m
Apply to YPGC agar medium containing M-70 mM pyrazole,
Obtain resistant strains. The desired yeast is selected by measuring the amount of glycerol produced by these yeast strains.

(2)醸造用酵母またはその半数体を、YPGC培地のグル
コースをグリセロールなどのカタボライトレプレッショ
ンのかからない炭素源に替えた培地に1mM〜10mMのアリ
ルアルコールを含ませ、(1)と同様に出現したコロニ
ーを拾いグリセロール高生産株を取得する。
(2) Appeared in the same manner as (1) when brewing yeast or its haploid was added to a medium in which glucose in a YPGC medium was replaced with a carbon source such as glycerol which does not cause repression of catabolite repression, and 1 mM to 10 mM allyl alcohol was added. Pick up colonies to obtain high-glycerol-producing strains.

(3)醸造用酵母またはその半数体を通常の呼吸欠損株
の取得方法(例えば、100mg/の臭化エチジュウムまた
は、20mg/のアクリフラビンを含むYPGC培地で培養
し、グリセロールを含む培地で生育せず、塩化2,3,5−
トリフェニルテトラゾリウムで染色されない酵母を選択
する)に従って、呼吸欠損株を取得する。
(3) Yeast for brewing or its haploid are cultured in a usual method for obtaining a respiratory-deficient strain (for example, by culturing in YPGC medium containing 100 mg / ethidium bromide or 20 mg / acryflavin, and growing in a medium containing glycerol. No, chloride 2,3,5-
Respiratory deficient strains are obtained according to (selecting yeast not stained with triphenyltetrazolium).

(4)前記(1)、(2)および(3)の方法を単独ま
たは、併用することによって、高グリセロール生産株を
取得する。
(4) A high glycerol-producing strain is obtained by using the methods of (1), (2) and (3) alone or in combination.

本発明の製造方法を実施するには、通常の原料を用い、
通常の清酒または雑酒の製造方法に従い、前記で得られ
た酵母を用いて醗酵を行う。醗酵条件等も特に限定する
ものではなく、通常の条件が採用できる。
In order to carry out the production method of the present invention, using ordinary raw materials,
Fermentation is performed using the yeast obtained above according to the usual method for producing sake or miscellaneous sake. Fermentation conditions are not particularly limited, and ordinary conditions can be adopted.

(実施例) つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。(Example) Next, an Example is given and this invention is demonstrated in more detail.

アリルアルコール耐性かつ呼吸欠損株CA1−29の取得 対数増殖期の協会K−7号株を、5mMのアリルアルコー
ルを含むYPGC寒天培地に塗布し、30℃で1週間保温し
た。コロニーが出現したプレートに、0.5%グルコー
ス、0.05%塩化2,3,5−トリフェニルテトラゾリウムを
含む、1%寒天液を上層し、30℃で2時間保温後、赤く
染まらないコロニーを選択し、10%グルコースに替えた
YPGC液体培地でのグリセロール生産量の高い株を取得し
た。得られた株をCA1−29と命名した。この株は平成2
年8月24日に通産省工業技術院微生物工業技術研究所
(微工研)に微工研菌寄第11677号として寄託した。
Acquisition of Allyl Alcohol-Resistant and Respiratory-Deficient Strain CA1-29 The K-7 strain in the logarithmic growth phase was applied to YPGC agar medium containing 5 mM allyl alcohol, and kept at 30 ° C. for 1 week. On the plate on which colonies appeared, overlay 1% agar solution containing 0.5% glucose and 0.05% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride, and after incubating at 30 ° C for 2 hours, select colonies that did not stain red, Replaced with 10% glucose
A strain with high glycerol production in YPGC liquid medium was obtained. The obtained strain was named CA1-29. This strain is Heisei 2
On August 24, 2014, it was deposited at the Institute of Microbial Science and Technology (Ministry of Industrial Science and Technology) of the Ministry of International Trade and Industry as the No. 11677 No.

ピラゾール耐性株CAP−4の取得 対数増殖期の協会K−7号株を、1mg/のアンチマイシ
ンAおよび50mMピラゾール、0.75%イースト・ナイトロ
ジェン・ベース[Yeast Nitrogen Base(Difco)]、
2%グルコースおよび2%寒天を含む培地に塗布後、ビ
ニールテープで密封し、30℃で1週間保温した。出現し
たコロニーを10%グルコースに替えたYPGC液体培地に植
菌し、グリセロール生産量の高い株を選択した。得られ
た株をCAP−4と命名した。この株は平成2年8月24日
に微工研に微工研菌寄第11678号として寄託した。
Acquisition of Pyrazole-Resistant Strain CAP-4 A logarithmic growth stage association K-7 strain was treated with 1 mg / antimycin A and 50 mM pyrazole, 0.75% yeast nitrogen base [Yeast Nitrogen Base (Difco)],
After application to a medium containing 2% glucose and 2% agar, the medium was sealed with vinyl tape and kept at 30 ° C. for 1 week. The colonies that appeared were inoculated into a YPGC liquid medium in which 10% glucose was replaced, and a strain with high glycerol production was selected. The obtained strain was named CAP-4. This strain was deposited on August 24, 1990, at Microindustrial Research Institute as Microindustrial Research Institute No. 11678.

実施例1 前記で得られたアリルアルコール耐性かつ呼吸欠損株CA
1−29と、ピラゾール耐性株CAP−4および対照としての
協会K−7号株を用い、第1表の仕込配合表により、常
法に従って清酒仕込み試験を行った。
Example 1 Allyl alcohol-resistant and respiratory-deficient strain CA obtained above
Using 1-29, the pyrazole-resistant strain CAP-4 and the association K-7 strain as a control, a sake preparation test was conducted according to a conventional method according to the preparation recipe in Table 1.

醪温度は15℃一定留後、17日目に上槽した。上槽酒の分
析結果を第2表に、また、8人のパネル員による官能審
査結果を第3表に示す。
The temperature of the mash was kept constant at 15 ° C, and then the upper tank was placed on the 17th day. Table 2 shows the results of the analysis of Kamitatan sake, and Table 3 shows the results of sensory evaluation by eight panel members.

第2表および第3表に示すごとく、本発明の方法によれ
ば、グリセロール含量の高い、コクのある清酒が得られ
る。
As shown in Tables 2 and 3, according to the method of the present invention, a refined sake having a high glycerol content can be obtained.

実施例2 ピラゾール耐性株CAP−4および対照としての協会7号
株K−7を用い、第4表の仕込配合表により、常法に従
って、雑酒(玄米酒)仕込み試験を行った。
Example 2 Using a pyrazole-resistant strain CAP-4 and an association No. 7 strain K-7 as a control, a miscellaneous sake (brown rice liquor) charging test was conducted in accordance with a conventional method according to the mixing recipe of Table 4.

醪温度は、糖化56℃、一次30℃、二次25℃、以後20℃
で、18日目に三次仕込後、上槽した。上槽した酒の分析
結果を第5表に、また、8人のパネル員による官能審査
結果を第6表に示す。
The melting temperature is 56 ℃ for saccharification, 30 ℃ for primary, 25 ℃ for secondary, and 20 ℃ for subsequent
Then, after the third preparation on the 18th day, it was in the upper tank. Table 5 shows the results of analysis of the sake in the upper tank, and Table 6 shows the results of sensory evaluation by eight panel members.

第5表および第6表に示すごとく、本発明の方法によれ
ば、グリセロール含量の高い、コクのある玄米酒が得ら
れる。
As shown in Tables 5 and 6, according to the method of the present invention, a rich brown rice liquor having a high glycerol content can be obtained.

(発明の効果) 本発明により、清酒または雑酒のグリセロールを増加す
ることにより、コクの改善ができ、また、ADHアイソザ
イムの欠損度合によりアルコール分も、従来と同定度の
ものから低いものまで製造することが可能となる。した
がって、従来と同定度のアルコール度でかつコクのある
製品や、水などで薄めることにより「水っぽくない」低
アルコールの製品、さらに、低アルコールでコクのある
製品など、種々の商品設定に応じた製造が可能となる。
(Effects of the Invention) According to the present invention, it is possible to improve richness by increasing the glycerol content of sake or miscellaneous sake, and the alcohol content is also reduced from the conventional one to the low identification amount due to the degree of ADH isozyme deficiency. It becomes possible to do. Therefore, it is possible to meet various product settings such as a product with an alcoholic degree that is the same as the conventional degree of identification and a rich body, a low alcohol product that is “not watery” by diluting with water, and a product with a low alcohol rich body. It becomes possible to manufacture.

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】アルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子の少な
くとも一部を欠損または欠落させた、かつアルコール醗
酵能を保持している酵母で醗酵を行うことを特徴とする
グリセロール含量の高い清酒または雑酒の製造方法。
1. A method for producing sake or miscellaneous sake having a high glycerol content, which comprises fermenting a yeast having at least a part of an alcohol dehydrogenase gene deficient or deficient and having an alcohol fermentation ability.
【請求項2】該酵母がアリルアルコールまたはピラゾー
ルに耐性を有する請求項(1)記載の清酒または雑酒の
製造方法。
2. The method for producing sake or miscellaneous sake according to claim 1, wherein the yeast is resistant to allyl alcohol or pyrazole.
【請求項3】該酵母が低アルコール生産能の酵母である
請求項(1)記載の清酒または雑酒の製造方法。
3. The method for producing sake or miscellaneous sake according to claim 1, wherein the yeast is a yeast having a low alcohol production ability.
【請求項4】該酵母が呼吸欠損変異株である請求項
(1)記載の清酒または雑酒の製造方法。
4. The method for producing sake or miscellaneous sake according to claim 1, wherein the yeast is a respiratory deficient mutant.
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