JPH075636B2 - peptide - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、新しいペプチド、詳しくは抗菌活性を示す新
規なペプチドに関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a new peptide, in particular, a novel peptide having antibacterial activity.

従来の技術 正常蚕に非経口的に不活性化大腸菌等の異物を投与する
ことにより蚕体液中にある種の抗菌活性物質が誘導され
ることが知られている〔蚕における生体防禦機構１・死
菌ワクチン接種による抗菌物質の誘導、肥山良之他、日
本動物学会第49回大会、一般講演集、379（1978）；同I
II・蚕体液中の抗菌活性物質の精製とその生物学的性
状、大森和則他同、380（1978）参照〕。2. Description of the Related Art It is known that a certain antibacterial active substance is induced in silkworm body fluid by parenterally administering a foreign substance such as inactivated Escherichia coli to normal silkworms [biological protection mechanism in silkworm 1. Induction of antibacterial substances by killed bacteria vaccination, Yoshiyuki Hiyama et al., 49th Annual Meeting of the Zoological Society of Japan, Proc. 379 (1978); I
II. Purification and biological properties of antibacterial active substances in silkworm body fluid, see Kazunori Omori et al., 380 (1978)].

本発明者らは、上記蚕由来の抗菌活性物質について更に
研究を重ねた結果、該物質の単離に成功し、これがアミ
ノ酸35個からなるペプチドであることを確認し、先に該
ペプチドに係る発明を完成した〔特開昭60-75498号公
報〕。As a result of further research on the silkworm-derived antibacterial active substance, the present inventors have succeeded in isolating the substance, confirmed that this is a peptide consisting of 35 amino acids, and related to the peptide previously. The invention was completed [Japanese Patent Laid-Open No. 60-75498].

発明が解決しようとする問題点 本発明者は、引き続く研究において、上記ペプチドの化
学合成過程で得られるある種の新規なオリゴペプチド
が、抗菌活性を有することを見い出した。本発明は、こ
の知見に基づいて完成されたものである。Problems to be Solved by the Invention In the subsequent research, the present inventor found that certain novel oligopeptides obtained in the chemical synthesis process of the above peptides have antibacterial activity. The present invention has been completed based on this finding.

問題点を解決するための手段 本発明によれば式 Ｈ−Arg−Trp−Lys−Ile−Phe−Lys−OH （１） で表わされるアミノ酸配列を有するペプチドが提供され
る。Means for Solving the Problems According to the present invention, there is provided a peptide having an amino acid sequence represented by the formula: H-Arg-Trp-Lys-Ile-Phe-Lys-OH (1).

本明細書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、活性
基、その他に関して略号で表示する場合はIUPAC、IUBの
規定或いは当該分野における慣用記号に従うものとし、
その例を次に挙げる。またアミノ酸等に関して光学異性
体がありうる場合は、特に明記しなければＬ体を示すも
のとする。In the present specification, amino acids, peptides, protecting groups, active groups, and the like, when expressed by abbreviations, shall follow the provisions of IUPAC, IUB or the conventional symbols in the field,
An example is given below. When amino acids and the like may have optical isomers, the L form is shown unless otherwise specified.

Arg;アルギニン Trp;トリプトファン Lys;リジン Il
e;イソロイシン Phe;フェニルアラニン Z;ベンジルオキシカルボニル基 ClZ;2−クロロベンジルオキシカルボニル基 Boc;第３級ブトキシカルボニル基 ONp;p−ニトロフエニルオキシ基 Bzl;ベンジル基 OBzl;ベンジルオキシ基 OSu;N−ヒドロキシスクシンイミド基 OPac;ベンゾイルメトキシ（フエナシル）基 OPcp;ペンタクロロフエノキシ基 本発明の上記式（１）で表わされるペプチドは、グラム
陽性菌及びグラム陰性菌に対して抗菌活性を有し、ヒト
及び動物用の抗菌剤として有用である。Arg; Arginine Trp; Tryptophan Lys; Lysine Il
e; isoleucine Phe; phenylalanine Z; benzyloxycarbonyl group ClZ; 2-chlorobenzyloxycarbonyl group Boc; tertiary butoxycarbonyl group ONp; p-nitrophenyloxy group Bzl; benzyl group OBzl; benzyloxy group OSu; N -Hydroxysuccinimide group OPac; benzoylmethoxy (phenacyl) group OPcp; pentachlorophenoxy group The peptide represented by the above formula (1) of the present invention has antibacterial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria and It is also useful as an antibacterial agent for animals.

上記式（１）で表わされるペプチドは、入手容易な市販
のアミノ酸を利用して、簡単な操作で容易に合成するこ
とができる。The peptide represented by the above formula (1) can be easily synthesized by a simple operation using a commercially available amino acid that is easily available.

以下、本発明ペプチドの化学合成法につき詳述する。The chemical synthesis method of the peptide of the present invention will be described in detail below.

本発明ペプチドは、通常のペプチド合成法、具体的には
「ザ ペプチド（The Peptides）」第１巻（1966年）
〔Schroder and Luhke著、Academic Press,New York,US
A〕或いは「ペプチド合成」〔泉屋ら著、丸善株式会社
（1975年）〕に記載されるごとき方法に従い、例えばア
ジド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無水物法、ジ
シロヘキシルカルボジイミド（DCC）法、活性エステル
法（ｐ−ニトロフエニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコ
ハク酸イミドエステル法、シアノメチルエステル法
等）、ウツドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボジイミ
ダゾール法、酸化還元法、DCC/アデイテイブ（Ｎ−ヒド
ロキシ−５−ノルボルネン−2,3−ジカルボキシイミド;
HONB、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール;HOBt、Ｎ−
ヒドロキシコハク酸イミド;HOSu）法等により製造でき
る。上記方法においては、固相合成法及び液相合成法の
いずれをも適用できる。通常本発明のペプチドは、上記
した一般のポリペプチドの合成法に従い、例えば末端ア
ミノ酸に順次１個づつアミノ酸を縮合させる所謂ステツ
プワイズ法により、又は数個のフラグメントに分けてカ
ツプリングさせていく方法により製造される。The peptide of the present invention can be synthesized by a conventional peptide synthesis method, specifically, "The Peptides", Volume 1 (1966).
(Schroder and Luhke, Academic Press, New York, US
A] or "peptide synthesis" [Izumiya et al., Maruzen Co., Ltd. (1975)], for example, according to a method such as azide method, chloride method, acid anhydride method, mixed acid anhydride method, disirohexyl carbodiimide ( DCC) method, active ester method (p-nitrophenyl ester method, N-hydroxysuccinimide ester method, cyanomethyl ester method, etc.), method using Woodward reagent K, carbodiimidazole method, redox method, DCC / Additive (N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide;
HONB, 1-hydroxybenzotriazole; HOBt, N-
Hydroxysuccinimide; HOSu) method or the like. In the above method, either a solid phase synthesis method or a liquid phase synthesis method can be applied. Usually, the peptide of the present invention is prepared by the above-mentioned general method for synthesizing a polypeptide, for example, by the so-called stepwise method of sequentially condensing one amino acid at a terminal amino acid one by one, or by splitting into several fragments and coupling. Manufactured.

上記いずれの方法においても反応に関与しない官能基は
通常保護され、又側鎖官能基を有するアミノ酸もその側
鎖官能基を保護しておくのが好ましく、これらは通常の
保護基により保護され、反応終了後該保護基は必要に応
じ説離される。また反応に関与する官能基は、通常活性
化される。之等各反応方法は、公知であり、それらに用
いられる試薬等も公知のものから適宜選択し得る。In any of the above methods, functional groups not involved in the reaction are usually protected, and it is preferable that amino acids having a side chain functional group also have their side chain functional groups protected, and these are protected by a usual protecting group, After completion of the reaction, the protecting group is separated as needed. Also, the functional groups involved in the reaction are usually activated. Each reaction method is publicly known, and reagents and the like used therein can be appropriately selected from publicly known ones.

アミノ基の保護基としては、例えばＺ、ClZ、Boc、tert
−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボ
ニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、アダマ
ンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタ
リル、ホルミル、ｏ−ニトロフエニルスルフエニル、ジ
フエニルホスフイノチオイル基等が挙げられる。Examples of the amino-protecting group include Z, ClZ, Boc and tert.
Examples include -amyloxycarbonyl, isobornyloxycarbonyl, p-methoxybenzyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, trifluoroacetyl, phthalyl, formyl, o-nitrophenylsulfenyl, and diphenylphosphinothioyl groups.

カルボキシル基の保護基としては、例えばアルキルエス
テル（例メチル、エチル、プロピル、ブチル、tert−ブ
チルなどのアルキルエステル）、Bzlエステル、ベンゾ
イルメチルエステル、ｐ−ニトロベンジルエステル、ｐ
−メトキシベンジルエステル、ｐ−クロルベンジルエス
テル、ベンズヒドリルエステル、カルボベンゾキシヒド
ラジド、tert−ブチルオキシカルボニルヒドラジド、ト
リチルヒドラジド等を形成し得る基を例示できる。Examples of the protective group for the carboxyl group include alkyl ester (eg, alkyl ester such as methyl, ethyl, propyl, butyl, tert-butyl), Bzl ester, benzoylmethyl ester, p-nitrobenzyl ester, p
Examples thereof include groups capable of forming -methoxybenzyl ester, p-chlorobenzyl ester, benzhydryl ester, carbobenzoxyhydrazide, tert-butyloxycarbonylhydrazide, tritylhydrazide and the like.

Lysのアミノ基の保護基としては、例えばＺ、ClZ、Bo
c、ｐ−トルエンスルホニル基等が挙げられる。Examples of the protecting group for the amino group of Lys include Z, ClZ, and Bo.
Examples thereof include c and p-toluenesulfonyl groups.

Argのグアニジノ基の保護基としては、例えばTos、ニト
ロ、ベンジルオキシカルボニル、アミルオキシカルボニ
ル基等が挙げられる。Examples of the guanidino group-protecting group for Arg include Tos, nitro, benzyloxycarbonyl, and amyloxycarbonyl groups.

カルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば対
応する酸クロライド、酸無水物又は混合酸無水物、アジ
ド、活性エステル（ペンタクロロフエノール、ｐ−ニト
ロフエノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、Ｎ−ヒ
ドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノ
ルボルネン−2,3−ジカルボキシイミド等とのエステ
ル）等が挙げられる。Examples of activated carboxyl groups include corresponding acid chlorides, acid anhydrides or mixed acid anhydrides, azides, active esters (pentachlorophenol, p-nitrophenol, N-hydroxysuccinimide, N-hydroxybenzes). Examples thereof include triazole and N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide.

上記方法において反応性アミノ基と反応性カルボキシル
基との縮合反応（ペプチド結合形成反応）は、溶媒の存
在下に行ない得る。溶媒としては、ペプチド結合形成に
使用し得ることが知られている各種のもの、例えば無水
または含水のジメチルホルムアミド（DMF）、ジメチル
スルホキシド（DMSO）、ピリジン、クロロホルム、ジオ
キサン、ジクロルメタン、テトラヒドロフラン（TH
F）、酢酸エチル、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチ
ルリン酸トリアミド（HMPA）或いはこれらの混合溶媒等
を用い得る。両原料化合物の使用割合としては、特に限
定はないが、通常一方に対して他方を等モル量〜５倍モ
ル量、好ましくは等モル量〜1.5倍モル量とするのがよ
い。反応温度はペプチド結合形成反応に使用される通常
の範囲、一般には約−40℃〜約60℃、好ましくは約−20
℃〜約40℃の範囲から適宜選択される。反応時間は一般
に数分〜30時間程度である。In the above method, the condensation reaction (peptide bond forming reaction) between the reactive amino group and the reactive carboxyl group can be carried out in the presence of a solvent. As the solvent, various solvents known to be usable for peptide bond formation, for example, anhydrous or hydrous dimethylformamide (DMF), dimethylsulfoxide (DMSO), pyridine, chloroform, dioxane, dichloromethane, tetrahydrofuran (TH
F), ethyl acetate, N-methylpyrrolidone, hexamethylphosphoric triamide (HMPA), a mixed solvent thereof or the like can be used. The ratio of both raw material compounds to be used is not particularly limited, but it is usually preferable that the other is in an equimolar amount to 5 times the molar amount, preferably in the equimolar amount to 1.5 times the molar amount. The reaction temperature is in the usual range used for peptide bond formation reactions, generally about -40 ° C to about 60 ° C, preferably about -20 ° C.
The temperature is appropriately selected from the range of ℃ to about 40 ℃. The reaction time is generally several minutes to 30 hours.

尚混合酸無水物法を採用する場合は、適当な溶媒中、塩
基性化合物の存在下、アルキルハロカルボン酸、例えば
クロロ蟻酸メチル、ブロモ蟻酸メチル、クロロ蟻酸エチ
ル、ブロモ蟻酸エチル、クロロ蟻酸イソブチル等を用い
て行なわれる。塩基性化合物としては、例えばトリエチ
ルアミン、トリメチルアミン、ジイソプロピルエチルア
ミン、ピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ−メチルモルホ
リル、1,5−ジアザビシクロ〔4,3,0〕ノネン−５（DB
N）、1,5−ジアザビシクロ〔5,4,0〕ウンデセン−５（D
BU）、1,4−ジアザビシクロ〔2,2,2〕オクタン（DABC
O）等の有機塩基や炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭
酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基を使
用できる。また溶媒としては、混合酸無水物法に慣用の
各種溶媒、具体的には塩化メチレン、クロロホルム、ジ
クロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、ト
ルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジエチルエー
テル、THF、ジメトキシエタン等のエーテル類、酢酸メ
チル、酢酸エチル等のエステル類、DMF、DMSO、HMPA等
の非プロトン性極性溶媒などを使用できる。反応は通常
−20〜100℃、好ましくは−20〜50℃において行なわ
れ、反応時間は一般に５分〜10時間、好ましくは５分〜
２時間である。When the mixed acid anhydride method is adopted, an alkylhalocarboxylic acid, such as methyl chloroformate, methyl bromoformate, ethyl chloroformate, ethyl bromoformate, isobutyl chloroformate, etc., in the presence of a basic compound, in a suitable solvent. Is performed using. Examples of the basic compound include triethylamine, trimethylamine, diisopropylethylamine, pyridine, dimethylaniline, N-methylmorpholyl, 1,5-diazabicyclo [4,3,0] nonene-5 (DB
N), 1,5-diazabicyclo [5,4,0] undecene-5 (D
BU), 1,4-diazabicyclo [2,2,2] octane (DABC
Organic bases such as O) and inorganic bases such as potassium carbonate, sodium carbonate, potassium hydrogen carbonate and sodium hydrogen carbonate can be used. As the solvent, various solvents commonly used in the mixed acid anhydride method, specifically, methylene chloride, chloroform, halogenated hydrocarbons such as dichloroethane, benzene, toluene, aromatic hydrocarbons such as xylene, diethyl ether, Ethers such as THF and dimethoxyethane, esters such as methyl acetate and ethyl acetate, aprotic polar solvents such as DMF, DMSO and HMPA can be used. The reaction is usually carried out at -20 to 100 ° C, preferably -20 to 50 ° C, and the reaction time is generally 5 minutes to 10 hours, preferably 5 minutes to
2 hours.

またアジド化法を採用する場合、まず活性化されたカル
ボキシル基、例えばメチルアルコール、エチルアルコー
ル、ベンジルアルコール等のアルコールで活性化された
カルボキシル基にヒドラジン水和物を適当な溶媒中にて
反応させることにより行なわれる。溶媒としては例えば
ジオキサン、DMF、DMSO又はこれらの混合溶媒等を使用
できる。ヒドラジン水和物の使用量は、活性化されたカ
ルボキシル基に対して通常５〜20倍モル量、好ましくは
５〜10倍モル量とするのがよい。反応は通常50℃以下、
好ましくは−20〜30℃にて行なわれる。斯くしてカルボ
キシル基部分がヒドラジンで置換された化合物（ヒドラ
ジン誘導体）を製造し得る。When the azidation method is adopted, first, a hydrazine hydrate is reacted with an activated carboxyl group, for example, a carboxyl group activated with an alcohol such as methyl alcohol, ethyl alcohol or benzyl alcohol in a suitable solvent. It is done by As the solvent, for example, dioxane, DMF, DMSO, a mixed solvent thereof or the like can be used. The amount of hydrazine hydrate used is usually 5 to 20 times, preferably 5 to 10 times the molar amount of the activated carboxyl group. The reaction is usually below 50 ℃,
It is preferably carried out at -20 to 30 ° C. Thus, a compound (hydrazine derivative) in which the carboxyl group moiety is substituted with hydrazine can be produced.

カルボキシル基部分がアジドで置換された化合物は、酸
の存在下、適当な溶媒中、上記で得られるヒドラジン誘
導体と亜硝酸化合物を反応させることにより製造され
る。酸としては通常塩酸が用いられる。溶媒としては例
えばジオキサン、DMF、DMSO又はこれらの混合溶媒等を
使用できる。また亜硝酸化合物としては、例えば亜硝酸
ナトリウム、亜硝酸イソアミル、塩化ニトロシル等を使
用することができる。斯かる亜硝酸化合物は、ヒドラジ
ン誘導体に対して通常等モル〜２倍モル量、好ましくは
等モル〜1.5倍モル量用いられる。反応は通常−20〜０
℃、好ましくは−20〜−10℃にて行なわれ、一般に５〜
10分程度で終了する。The compound in which the carboxyl group moiety is substituted with azide is produced by reacting the hydrazine derivative obtained above with a nitrite compound in the presence of an acid in a suitable solvent. Hydrochloric acid is usually used as the acid. As the solvent, for example, dioxane, DMF, DMSO, a mixed solvent thereof or the like can be used. Further, as the nitrite compound, for example, sodium nitrite, isoamyl nitrite, nitrosyl chloride or the like can be used. Such a nitrite compound is usually used in an equimolar to 2-fold molar amount, preferably equimolar to 1.5-fold molar amount, relative to the hydrazine derivative. Reaction is usually -20 to 0
℃, preferably -20 to -10 ℃, generally 5 ~
It takes about 10 minutes.

尚、ペプチド結合形成反応は、縮合剤例えばジシクロヘ
キシルカルボジイミド（DCC）、カルボジイミダゾール
等のカルボジイミド試薬やテトラエチルピロホスフイン
等の存在下に実施することもできる。The peptide bond-forming reaction can also be carried out in the presence of a condensing agent, for example, a carbodiimide reagent such as dicyclohexylcarbodiimide (DCC) or carbodiimidazole, or tetraethylpyrophosphine.

また、アミノ酸アミドは、対応するアミノ酸エステル
を、通常メタノール性アンモニア、アンモニア水あるい
は液体アンモニアと室温に数日程度放置することにより
容易に得ることができる。The amino acid amide can be easily obtained by allowing the corresponding amino acid ester to stand at room temperature for several days, usually with methanolic ammonia, aqueous ammonia or liquid ammonia.

上記の各反応行程及び最終行程において、保護基の脱離
を要する場合、これは通常の脱離反応に従つて行なわれ
る。該方法としては例えばパラジウム、パラジウム黒等
の触媒を用いる水素添加、液体アンモニア中金属ナトリ
ウムによる還元等の還元的方法、トリフルオロ酢酸、塩
化水素酸、弗化水素、メタンスルホン酸、臭化水素酸等
の強酸によるアシドリシス等を例示することができる。
上記触媒を用いる水素添加は、例えば水素圧１気圧、０
〜40℃にて行ない得る。触媒の使用量としては通常100m
g〜1g程度とするのがよく、一般に１〜48時間程度で反
応は終了する。また上記アシドリシスは、無溶媒下、通
常０〜30℃程度、好ましくは０〜20℃程度で約15分〜１
時間程度を要して行なわれる。酸の使用量は原料化合物
に対し通常５〜10倍量程度とするのがよい。該アシドリ
シスにおいてアミノ基の保護基のみを脱離する場合は、
酸としてトリフルオロ酢酸又は塩化水素酸を使用するの
が好ましい。更に上記液体アンモニア中金属ナトリウム
による還元は、反応液がパーマネントブルーに30秒〜10
分間程度呈色しているような量の金属ナトリウムを用
い、通常−40℃〜−70℃程度にて行ない得る。When elimination of the protecting group is required in each of the above reaction steps and final steps, this is carried out according to a usual elimination reaction. Examples of the method include hydrogenation using a catalyst such as palladium and palladium black, reductive methods such as reduction with sodium metal in liquid ammonia, trifluoroacetic acid, hydrochloric acid, hydrogen fluoride, methanesulfonic acid, hydrobromic acid. Acidolysis and the like due to strong acids such as
Hydrogenation using the above catalyst is carried out, for example, at a hydrogen pressure of 1 atm,
It can be done at ~ 40 ° C. The amount of catalyst used is usually 100 m
The amount is preferably about g to 1 g, and the reaction is generally completed in about 1 to 48 hours. The above acidolysis is carried out in the absence of solvent, usually at about 0 to 30 ° C, preferably at about 0 to 20 ° C for about 15 minutes to 1
It takes about time. The amount of the acid used is usually about 5 to 10 times the amount of the raw material compound. In the case of removing only the amino-protecting group in the acidolysis,
Preference is given to using trifluoroacetic acid or hydrochloric acid as acid. Furthermore, the reduction with metallic sodium in liquid ammonia described above causes the reaction solution to turn into permanent blue for 30 seconds to 10 seconds.
It is possible to use sodium metal in an amount such that the color develops for about a minute, usually at about -40 ° C to -70 ° C.

上記のようにして製造された式（１）のペプチドは反応
混合物からペプチドの分離手段、例えば抽出、分配、カ
ラムクロマトグラフイー等により単離精製される。The peptide of formula (1) produced as described above is isolated and purified from the reaction mixture by means of peptide separation means such as extraction, partitioning, column chromatography and the like.

かくして本発明のペプチドを得る。Thus, the peptide of the present invention is obtained.

本発明の上記式（１）で表わされる各ペプチドは、これ
らに通常の医薬として許容される酸性化合物又は塩基性
化合物を反応させて、容易に塩を形成されることができ
る。該酸性化合物としては例えば、塩酸、硫酸、リン
酸、臭化水素酸等の無機酸、シユウ酸、マレイン酸、フ
マール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸等の
有機酸を挙げることができ、また該塩基性化合物として
は、例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化
カリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸リ
チウム、炭酸カリウム等の水酸化物及び炭酸化物及びア
ンモニア、エチルアミン、ジエチルアミン等のアミン類
を例示できる。Each peptide represented by the above formula (1) of the present invention can be easily formed into a salt by reacting it with a usual pharmaceutically acceptable acidic compound or basic compound. Examples of the acidic compound include inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and hydrobromic acid, and organic acids such as oxalic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, citric acid and benzoic acid. Examples of the basic compound include hydroxides and carbonates of sodium hydroxide, lithium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide, sodium carbonate, lithium carbonate, potassium carbonate and the like, and ammonia, ethylamine, diethylamine and the like. The amines can be exemplified.

本発明の式（１）で表わされるペプチド及びそれらの塩
は、これを抗菌剤として用いるに当り、そのままで又は
これを有効成分として慣用の製剤担体と共に、ヒト及び
動物に投与することができる。その際、投与経路及び投
与単位形態は、特に制限されず、例えば錠剤、顆粒剤、
経口用溶液剤等の経口剤、クリーム、軟膏剤等の非経口
局所投与剤や注射剤等の非経口剤等として、経口的もし
くは非経口的に投与できる。有効成分の投与量は、投与
経路、投与単位形態、所望の薬理効果等に応じて適宜決
定される。通常１日当り体重1kg当りの有効成分投与量
は、約0.1〜50mgとすればよく、これは１日１回乃至３
回に分けて投与できる。また単位形態中に配合される有
効成分量は約１〜500mgとするのが適当である。上記の
投与単位形態は、常法に従い容易に製造され、その際用
い得る担体も通常のものでよい。例えば錠剤は、有効成
分を、ゼラチン、澱粉、乳糖、ステアリン酸マグネシウ
ム、滑石、アラビアゴム等の賦形剤と混合して賦形され
る。カプセル剤は有効成分を不活性の製剤充填剤もしく
は希釈剤と混合し、硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセ
ル等に充填される。また注射剤等の非経口用投与薬剤は
有効成分を減菌した液体担体に溶解又は懸濁して製造さ
れる。好ましい担体は水又は生理食塩水である。When using the peptide represented by the formula (1) of the present invention and a salt thereof as an antibacterial agent, it can be administered to humans or animals as it is or as an active ingredient together with a conventional pharmaceutical carrier. At that time, the administration route and dosage unit form are not particularly limited, and examples thereof include tablets, granules,
It can be orally or parenterally administered as an oral preparation such as an oral solution, a parenteral topical preparation such as cream and ointment, a parenteral preparation such as injection. The dose of the active ingredient is appropriately determined depending on the administration route, dosage unit form, desired pharmacological effect and the like. Usually, the dose of the active ingredient per 1 kg of body weight per day may be about 0.1 to 50 mg, which is once to 3 times a day.
It can be administered in divided doses. Further, it is appropriate that the amount of the active ingredient blended in the unit form is about 1 to 500 mg. The above-mentioned dosage unit form can be easily produced by a conventional method, and the carrier that can be used at that time may be a usual carrier. For example, tablets are shaped by mixing the active ingredient with excipients such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, gum arabic and the like. Capsules are prepared by mixing the active ingredient with an inert formulation filler or diluent and filling into hard gelatin capsules, soft capsules or the like. Parenteral drugs such as injections are produced by dissolving or suspending the active ingredient in a sterilized liquid carrier. The preferred carrier is water or saline.

実施例 以下、本発明ペプチドの製造例を実施例として挙げる
が、本発明はこれに限定されるものではない。Examples Hereinafter, production examples of the peptide of the present invention will be described as Examples, but the present invention is not limited thereto.

実施例１ （１）Boc−Phe−Lys（ClZ）−OPacの製造 HCl・Ｈ−Lys（ClZ）−OPac（14.1g、30mmol）とBoc−P
he−OSu（10.9g、30mmol）をDMF（140ml）に懸濁し氷冷
下、トリエチルアミン（2.21ml、15.7mmol）を加え攪拌
した。30分後、トリエチルアミン（1.0ml、7.12mmol）
を加えた。更に１時間後、トリエチルアミン（1.0ml、
7.12mmol）を加え室温で終夜攪拌した。Ｎ−（２−アミ
ノエチル）−ピペラジン（0.79ml、6mmol）を加え氷冷
下30分攪拌した。減圧濃縮した後、残渣を酢酸エチルと
水に溶かし、酢酸エチル層を10％クエン酸、飽和炭酸水
素ナトリウム水溶液、次いで飽和塩化ナトリウム水溶液
で洗浄しMgSO₄で乾燥した。減圧濃縮して得られた結晶
をメタノール−酢酸エチル−ヘキサンで再結晶した。Example 1 (1) Production of Boc-Phe-Lys (ClZ) -OPac HCl.H-Lys (ClZ) -OPac (14.1 g, 30 mmol) and Boc-P
he-OSu (10.9 g, 30 mmol) was suspended in DMF (140 ml), triethylamine (2.21 ml, 15.7 mmol) was added under ice cooling, and the mixture was stirred. After 30 minutes, triethylamine (1.0 ml, 7.12 mmol)
Was added. After another hour, triethylamine (1.0 ml,
7.12 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature overnight. N- (2-aminoethyl) -piperazine (0.79 ml, 6 mmol) was added, and the mixture was stirred under ice cooling for 30 minutes. After concentration under reduced pressure, the residue was dissolved in ethyl acetate and water, and the ethyl acetate layer was washed with 10% citric acid, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, then saturated aqueous sodium chloride solution, and dried over MgSO ₄ . The crystals obtained by concentration under reduced pressure were recrystallized from methanol-ethyl acetate-hexane.

収量:16.9g（82.6％） mp:140-142℃ ▲〔α〕^16.5 _D▼＝−8.7°（c1.02、DMF） 実測値（％）：C 63.43;H 6.20; N 6.18;Cl 5.26 計算値（％）(C₃₆H₄₂N₃O₈Cl)： C 63.57:H 6.22; N 6.18;Cl 5.21 （２）HCl・Ｈ−Phe−Lys（Clz）−OPacの製造 Boc−Phe−Lys（ClZ）−OPac（14.0g、20.6mmol）を1N
−Hcl/酢酸（400ml）に溶かし室温で１時間半攪拌し
た。減圧濃縮して得られた固体をエーテルを加えて取
した。これをメタノール−エーテル−ヘキサンで再結晶
した。Yield: 16.9g (82.6%) mp: 140-142 ° C ▲ [α] ^16.5 _D ▼ = -8.7 ° (c1.02, DMF) Actual value (%): C 63.43; H 6.20; N 6.18; Cl 5.26 Calculation Value (%) (C ₃₆ H ₄₂ N ₃ O ₈ Cl): C 63.57: H 6.22; N 6.18; Cl 5.21 (2) Preparation of HCl.H-Phe-Lys (Clz) -OPac Boc-Phe-Lys ( ClZ) -OPac (14.0 g, 20.6 mmol) in 1N
-Dissolved in Hcl / acetic acid (400 ml) and stirred at room temperature for 1.5 hours. The solid obtained by concentration under reduced pressure was taken by adding ether. This was recrystallized from methanol-ether-hexane.

収量:11.8g（93.2％） mp:193-195℃（分解） ▲〔α〕^16.5 _D▼＝−11.2°（c1.00、DMF） 実測値（％）：C 60.26;H 5.68; N 6.86;Cl 11.61 計算値（％）(C₃₁H₃₅N₃O₆Cl₂)： C 60.39;H 5.72; N 6.82;Cl 11.50 （３）Boc−Ile−Phe−Lys（ClZ）−OPacの製造 HCl・Ｈ−Phe−Lys（ClZ）−OPac（10.5g、17mmol）をD
MF（90ml）に溶かし、氷冷下トリエチルアミン（2.39m
l、17mmol）を加えた後、Boc−Ile−OSu（5.59g、17mmo
l）を加え室温で終夜攪拌した。Ｎ−（２−アミノエチ
ル）−ピペラジン（0.45ml、3.4mmol）を加え氷冷下30
分攪拌した。これに飽和塩化ナトリウム水溶液を加え生
じた沈澱を取し、10％クエン酸、飽和炭酸水素ナトリ
ウム水溶液及び水で洗浄し乾燥した。これをメタノール
−エーテル−ヘキサンより再結晶した。Yield: 11.8g (93.2%) mp: 193-195 ℃ ( decomposition) ▲ [α] _{^{16.5 D ▼ = -11.2 ° (c1.00}} , DMF) Found (%): C 60.26; H 5.68; N 6.86; Cl 11.61 Calculated value (%) (C ₃₁ H ₃₅ N ₃ O ₆ Cl ₂ ): C 60.39; H 5.72; N 6.82; Cl 11.50 (3) Production of Boc-Ile-Phe-Lys (ClZ) -OPac HCl ・H-Phe-Lys (ClZ) -OPac (10.5 g, 17 mmol) was added to D
Dissolve in MF (90 ml), and under ice cooling, triethylamine (2.39 m
l, 17 mmol) was added, followed by Boc-Ile-OSu (5.59 g, 17 mmo
l) was added and the mixture was stirred at room temperature overnight. N- (2-aminoethyl) -piperazine (0.45 ml, 3.4 mmol) was added, and the mixture was cooled with ice.
Stir for minutes. A saturated sodium chloride aqueous solution was added to this, and the resulting precipitate was collected, washed with 10% citric acid, a saturated sodium hydrogen carbonate aqueous solution and water, and dried. This was recrystallized from methanol-ether-hexane.

収量:9.15g（67.8％） mp:178-179℃ ▲〔α〕^17.0 _D▼＝−14.4°（c0.98、DMF） 実測値（％）：C 63.50;H 6.75; N 7.02;Cl 4.44 計算値（％）(C₄₂H₅₃N₄O₉Cl)： C 63.59;H 6.73; N 7.06;Cl 4.47 （４）HCl・Ｈ−Ile−Phe−Lys（ClZ）−OPacの製造 Boc−Ile−Phe−Lys（ClZ）−OPac（7.93g、10mmol）を
1.15N−HCl/酢酸（175ml）に溶かし室温で40分攪拌し
た。減圧濃縮して得られた固体をエーテルを加え取し
た。これをメタノール−エーテルで再沈澱した。Yield: 9.15g (67.8%) mp: 178-179 ℃ ▲ [α] ^17.0 _D ▼ −14.4 ° (c0.98, DMF) Actual value (%): C 63.50; H 6.75; N 7.02; Cl 4.44 Calculation Value (%) (C ₄₂ H ₅₃ N ₄ O ₉ Cl): C 63.59; H 6.73; N 7.06; Cl 4.47 (4) Preparation of HCl.H-Ile-Phe-Lys (ClZ) -OPac Boc-Ile- Phe-Lys (ClZ) -OPac (7.93g, 10mmol)
It was dissolved in 1.15 N-HCl / acetic acid (175 ml) and stirred at room temperature for 40 minutes. Ether was added to the solid obtained by concentration under reduced pressure, and the solid was collected. This was reprecipitated with methanol-ether.

収量:7.29g（100％） mp:210-213℃（分解） ▲〔α〕^14.5 _D▼＝＋11.0°（c 1.01、DMSO） 実測値（％）：C 60.67;H 6.35; N 7.57;Cl 9.76 計算値（％）(C₃₇H₄₆N₄O₇Cl₂)： C 60.90;H 6.35; N 7.68;Cl 9.72 （５）Boc−Lys（ClZ）−Ile−Phe−Lys（ClZ）−OPac
の製造 HCl・Ｈ−Ile−Phe−Lys（ClZ）−OPac（6.51g、8.92mm
ol）をDMF（55ml）に溶かし氷冷下、トリエチルアミン
（1.25ml、8.92mmol）、Boc−Lys（ClZ）−OSu（4.57
g、8.92mmol）を加え室温で終夜攪拌した。Ｎ−（２−
アミノエチル）−ピペラジン（0.23ml、1.78mmol）を加
え氷冷下30分攪拌した。これに飽和塩化ナトリウム水溶
液を加え生じた沈澱を取し、10％クエン酸、飽和炭酸
水素ナトリウム水溶液及び水で洗浄し乾燥した。Yield: 7.29 g (100%) mp: 210-213 ° C (decomposition) ▲ [α] ^14.5 _D ▼ ＝ + 11.0 ° (c 1.01, DMSO) Actual value (%): C 60.67; H 6.35; N 7.57; Cl 9.76 Calculated value (%) (C ₃₇ H ₄₆ N ₄ O ₇ Cl ₂ ): C 60.90; H 6.35; N 7.68; Cl 9.72 (5) Boc-Lys (ClZ) -Ile-Phe-Lys (ClZ)- OPac
Preparation of HCl ・ H-Ile-Phe-Lys (ClZ) -OPac (6.51g, 8.92mm
ol) in DMF (55 ml) and cooled with ice, triethylamine (1.25 ml, 8.92 mmol), Boc-Lys (ClZ) -OSu (4.57).
g, 8.92 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature overnight. N- (2-
Aminoethyl) -piperazine (0.23 ml, 1.78 mmol) was added, and the mixture was stirred for 30 minutes under ice cooling. A saturated sodium chloride aqueous solution was added to this, and the resulting precipitate was collected, washed with 10% citric acid, a saturated sodium hydrogen carbonate aqueous solution and water, and dried.

収量:9.59g（98.6％） mp:188.5-190℃ ▲〔α〕¹⁶ _D▼＝−15.9°（cO.98、DMSO） 実測値（％）：C 61.31;H 6.45; N 7.68;Cl 6.57 計算値（％）(C₅₆H₇₀N₆O₁₂Cl₂・0.5H₂O)： C 61.20;H 6.51; N 7.65;Cl 6.45 （６）Hcl・Ｈ−Lys（ClZ）−Ile−Phe−Lys（ClZ）−O
Pacの製造 Boc−Lys（ClZ）−Ile−Phe−Lys（ClZ）−OPac（9.00
g、8.26mmol）を1.21N−HCl/酢酸（140ml）に溶かし室
温で３時間攪拌した。減圧濃縮して得られたゲル状固体
をエーテルを加え取した。これをメタノール−エーテ
ルで再沈澱した。Yield: 9.59g (98.6%) mp: 188.5-190 ° C ▲ [α] ¹⁶ _D ▼ -15.9 ° (cO.98, DMSO) Actual value (%): C 61.31; H 6.45; N 7.68; Cl 6.57 Calculation Value (%) (C ₅₆ H ₇₀ N ₆ O ₁₂ Cl ₂ · 0.5H ₂ O): C 61.20; H 6.51; N 7.65; Cl 6.45 (6) Hcl · H-Lys (ClZ) -Ile-Phe-Lys (ClZ) -O
Production of Pac Boc-Lys (ClZ) -Ile-Phe-Lys (ClZ) -OPac (9.00
g, 8.26 mmol) was dissolved in 1.21N-HCl / acetic acid (140 ml), and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. Ether was added to the gel-like solid obtained by concentration under reduced pressure and taken. This was reprecipitated with methanol-ether.

収量:8.23g（97.2％） mp:203-205℃ ▲〔α〕¹⁶ _D▼＝−4.4°（c1.o2、DMSO） 実測値（％）：C 58.60;H 6.21; N 8.04;Cl 10.49 計算値（％）(C₅₁H₆₃N₆O₁₀Cl₃・H₂O)： C 58.65;H 6.27; N 8.05;Cl 10.18 （７）Boc−Trp（CHO）−Lys（ClZ）−Ile−Phe−Lys
（ClZ）−OPacの製造 HCl・Ｈ−Lys（ClZ）−Ile−Phe−Lys（ClZ）−OPac
（3.09g、3mmol）をDMF（30ml）に溶かし氷冷下、トリ
エチルアミン（423μｌ、3mmol）及びBoc−Trp（CHO）
−OSu（1.55g、3.6mmol）を加えN₂ガスで置換して２日
間室温で攪拌した。これに飽和塩化ナトリウム水溶液を
加え生じた沈澱を取し、10％クエン酸、水、エーテル
で洗浄し乾燥した。これをDMF−酢酸エチル−エーテル
で再沈澱した。Yield: 8.23g (97.2%) mp: 203-205 ° C ▲ [α] ¹⁶ _D ▼ ＝ -4.4 ° (c1.o2, DMSO) Actual value (%): C 58.60; H 6.21; N 8.04; Cl 10.49 Calculation Value (%) (C ₅₁ H ₆₃ N ₆ O ₁₀ Cl ₃ · H ₂ O): C 58.65; H 6.27; N 8.05; Cl 10.18 (7) Boc-Trp (CHO) -Lys (ClZ) -Ile-Phe -Lys
Production of (ClZ) -OPac HCl.H-Lys (ClZ) -Ile-Phe-Lys (ClZ) -OPac
(3.09 g, 3 mmol) was dissolved in DMF (30 ml), and triethylamine (423 μl, 3 mmol) and Boc-Trp (CHO) were dissolved under ice cooling.
-OSu (1.55 g, 3.6 mmol) was added, the atmosphere was replaced with N ₂ gas, and the mixture was stirred at room temperature for 2 days. A saturated sodium chloride aqueous solution was added to this and the resulting precipitate was collected, washed with 10% citric acid, water and ether and dried. This was reprecipitated with DMF-ethyl acetate-ether.

収量:3.21g（81.7％） mp:221.5-222.5℃（分解） ▲〔α〕¹⁷ _D▼＝−11.4°（c0.99、DMSO） 実測値（％）：C 62.47;H 6.16; N 8.63;Cl 5.43 計算値（％）(C₆₈H₈₀N₈O₁₄Cl₂)： C 62.62;H 6.18; N 8.59;Cl 5.44 （８）TFA・Ｈ−Trp（CHO）−Lys（ClZ）−Ile−Phe−L
ys（ClZ）−OPacの製造 Boc−Trp（CHO）−Lys（ClZ）−Ile−Phe−Lys（ClZ）
−OPac（1.50g、1.15mmol）を氷冷下、TFA−ジメチルス
ルフイド−1,2−エタンジチオール（10:10:1（V/V）、3
5ml）に溶かし、アルゴンガスで置換し10分間攪拌し
た。さらに室温で２時間攪拌した。これにエーテルを加
え析出した沈澱を取した。これをDMF−酢酸エチルで
再沈澱した。収量:1.28g（83.9％） （９）Boc−Arg（Tos）−Trp（CHO）−Lys（ClZ）−Ile
−Phe−Lys（ClZ）−OPacの製造 TFA・Ｈ−Trp（CHO）−Lys（ClZ）−Ile−Phe−Lys（Cl
Z）−OPac（1.28g、0.967mmol）をDMF（15ml）に溶かし
氷冷下、トリエチルアミン（136μｌ、0.967mmol）、Bo
c−Arg（Tos）−OSu（1.02g、1.93mmol）を加え室温で
終夜攪拌した。これに飽和塩化ナトリウム水溶液を加え
生じた沈澱を取し、10％クエン酸、水、エーテルで洗
浄し乾燥した。これをDMF−メタノールより再沈澱し
た。Yield: 3.21g (81.7%) mp: 221.5-222.5 ° C (decomposition) ▲ [α] ¹⁷ _D ▼ ＝ -11.4 ° (c0.99, DMSO) Actual value (%): C 62.47; H 6.16; N 8.63; Cl 5.43 Calculated value (%) (C ₆₈ H ₈₀ N ₈ O ₁₄ Cl ₂ ): C 62.62; H 6.18; N 8.59; Cl 5.44 (8) TFA ・ H-Trp (CHO) -Lys (ClZ) -Ile- Phe-L
Production of ys (ClZ) -OPac Boc-Trp (CHO) -Lys (ClZ) -Ile-Phe-Lys (ClZ)
-OPac (1.50 g, 1.15 mmol) was cooled with ice to give TFA-dimethylsulfide-1,2-ethanedithiol (10: 10: 1 (V / V), 3
5 ml), the atmosphere was replaced with argon gas, and the mixture was stirred for 10 minutes. Further, the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Ether was added to this and the deposited precipitate was collected. This was reprecipitated with DMF-ethyl acetate. Yield: 1.28 g (83.9%) (9) Boc-Arg (Tos) -Trp (CHO) -Lys (ClZ) -Ile
-Phe-Lys (ClZ) -OPac production TFA-H-Trp (CHO) -Lys (ClZ) -Ile-Phe-Lys (Cl
Z) -OPac (1.28 g, 0.967 mmol) was dissolved in DMF (15 ml) and triethylamine (136 μl, 0.967 mmol), Bo was added under ice cooling.
c-Arg (Tos) -OSu (1.02 g, 1.93 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature overnight. A saturated sodium chloride aqueous solution was added to this and the resulting precipitate was collected, washed with 10% citric acid, water and ether and dried. This was reprecipitated from DMF-methanol.

収量:1.20g（76.8％） mp:191-194℃（分解） ▲〔α〕¹⁷ _D▼＝−10.5°（c0.99、DMSO） 実測値（％）：C 59.89;H 6.15; N 10.45;S 2.04; Cl 4.23 計算値（％） (C₈₁H₉₈N₁₂O₁₇SCl₂・0.5H₂O)： C 59.92;H 6.15; N 10.35;S 1.97; Cl 4.37 アミノ酸分析値： Ile 0.89（１） Phe 0.91（１） Lys 2.00（２） Trp,N.D.（１） Arg 0.92（１） （10）Boc−Arg（Tos）−Trp（CHO）−Lys（ClZ）−Ile
−Phe−Lys（ClZ）−OHの製造 Boc−Arg（Tos）−Trp（CHO）−Lys（ClZ）−Ile−Phe
−Lys（ClZ）−OPac（1.00g、0.619mmol）をDMSO−酢酸
（4:1（V/V）、30ml）に溶かし亜鉛粉末（2.23g、34.1m
mol）を少量ずつ加え室温で終夜攪拌した。不溶物を
去し水を加えて生じた沈澱を取し、水、エーテルで洗
浄し乾燥した。Yield: 1.20g (76.8%) mp: 191-194 ℃ ( decomposition) ▲ [α] _{^{17 D ▼ = -10.5 ° (c0.99}} , DMSO) Found (%): C 59.89; H 6.15; N 10.45; S 2.04; Cl 4.23 Calculated value (%) (C ₈₁ H ₉₈ N ₁₂ O ₁₇ SCl ₂ · 0.5H ₂ O): C 59.92; H 6.15; N 10.35; S 1.97; Cl 4.37 Amino acid analysis value: Ile 0.89 (1 ) Phe 0.91 (1) Lys 2.00 (2) Trp, ND (1) Arg 0.92 (1) (10) Boc-Arg (Tos) -Trp (CHO) -Lys (ClZ) -Ile
Preparation of -Phe-Lys (ClZ) -OH Boc-Arg (Tos) -Trp (CHO) -Lys (ClZ) -Ile-Phe
-Lys (ClZ) -OPac (1.00 g, 0.619 mmol) was dissolved in DMSO-acetic acid (4: 1 (V / V), 30 ml) to obtain zinc powder (2.23 g, 34.1 m).
mol) was added little by little, and the mixture was stirred at room temperature overnight. The insoluble material was removed, water was added, and the resulting precipitate was collected, washed with water and ether, and dried.

収量:850mg（91.7％） （11）Ｈ−Arg−Trp−Lys−Ile−Phe−Lys−OHの製造 Boc−Arg（Tos）−Trp（CHO）−Lys（ClZ）−Ile−Phe
−Lys（ClZ）−OH100.7mg（67.3μmol）、ジメチルスル
フイド11.8ml、ｐ−クレゾール1.4ml、ｐ−チオクレゾ
ール0.5mlを反応管に加えた後、ドライアイス−エタノ
ール浴で冷却して無水フツ化水素4.5mlを導入した。氷
冷下２時間攪拌した後に、無水フツ化水素とジメチルス
ルフイドを減圧下に留去した。再びドライアイス−エタ
ノール浴で冷却して無水フツ化水素20mlを導入し、氷冷
下１時間攪拌した。無水フツ化水素を氷冷下に減圧留去
し、残渣に水を加え炭酸水素ナトリウムで中和した後に
エーテルで洗い水層を凍結乾燥した。得られた白色粉末
を少量の水に溶解しダイアイオンHP-20（1.4×45cm）の
カラムに通し炎色反応が出なくなるまで水洗した。50％
メタノール水溶液で目的物を溶出し減圧濃縮した。その
残渣を調製用高速液体クロマトグラフイー〔Cosmosil 5
C₁₈ 6mmφ×250mm、12％−45％アセトニトリル−0.01N
塩酸〕で分取し凍結乾燥した。Yield: 850 mg (91.7%) (11) Preparation of H-Arg-Trp-Lys-Ile-Phe-Lys-OH Boc-Arg (Tos) -Trp (CHO) -Lys (ClZ) -Ile-Phe
-Lys (ClZ) -OH 100.7 mg (67.3 μmol), dimethylsulfide 11.8 ml, p-cresol 1.4 ml, p-thiocresol 0.5 ml were added to the reaction tube and then cooled in a dry ice-ethanol bath. 4.5 ml of anhydrous hydrogen fluoride were introduced. After stirring for 2 hours under ice cooling, anhydrous hydrogen fluoride and dimethyl sulfide were distilled off under reduced pressure. The mixture was cooled again in a dry ice-ethanol bath, 20 ml of anhydrous hydrogen fluoride was introduced, and the mixture was stirred under ice cooling for 1 hour. Anhydrous hydrogen fluoride was distilled off under reduced pressure under ice-cooling, water was added to the residue, the mixture was neutralized with sodium hydrogen carbonate, washed with ether, and the aqueous layer was freeze-dried. The white powder obtained was dissolved in a small amount of water, passed through a column of Diaion HP-20 (1.4 × 45 cm), and washed with water until no flame reaction occurred. 50%
The desired product was eluted with an aqueous methanol solution and concentrated under reduced pressure. The residue was used for preparative high performance liquid chromatography [Cosmosil 5
C ₁₈ 6mmφ x 250mm, 12% -45% Acetonitrile-0.01N
Hydrochloric acid] and lyophilized.

白色粉末。White powder.

収量:24.0mg（34.9％） 分析用高速液体クロマトグラフイー〔Cosmosil 5C₁₈ 6m
mφ×250mm、A:0.01N塩酸、B:アセトニトリル、Ｂ％:1
％から50％まで３％/minのグラジエント溶出、2.0ml/mi
n、210nm〕での保持時間:11.6min. mp:180-183℃（分解） ▲〔α〕²⁰ _D▼＝−16.2°（c1.01、５％酢酸水溶液） アミノ酸分析値：（４％チオグリコール酸含有6N塩酸、
110℃、24時間） Ile 0.96（１） Phe 1.00（１） Lys 2.12（２） Trp 0.98（１） Arg 1.07（１） ［抗菌活性試験］ グラム陰性菌及びグラム陽性菌に対する本発明ペプチド
の抗菌作用を調べるため、液体希釈法によつて37℃、５
時間培養による最小増殖阻止濃度（MIC）を求めた
〔「抗生物質の基礎知識」南山堂、1970年１月25日発
行、P45〜55、改定第３版参照〕。尚、供試菌として
は、以下の各菌株を１×10⁶菌数/ml（ハートインフエー
ジヨンブロス）デイフコ社）に調製して用いた。Yield: 24.0 mg (34.9%) Analytical high performance liquid chromatography [Cosmosil 5C ₁₈ 6m
mφ × 250mm, A: 0.01N hydrochloric acid, B: acetonitrile, B%: 1
Gradient elution from 3% / min from 50% to 50%, 2.0 ml / mi
retention time at n, 210 nm]: 11.6 min. mp: 180-183 ° C (decomposition) ▲ [α] ²⁰ _D ▼ = -16.2 ° (c1.01, 5% acetic acid aqueous solution) Amino acid analysis value: (4% thio 6N hydrochloric acid containing glycolic acid,
110 ° C, 24 hours) Ile 0.96 (1) Phe 1.00 (1) Lys 2.12 (2) Trp 0.98 (1) Arg 1.07 (1) [Antibacterial activity test] Antibacterial activity of the peptide of the present invention against Gram-negative bacteria and Gram-positive bacteria Liquid dilution method at 37 ° C for 5
The minimum inhibitory concentration (MIC) by time culture was determined [see "Basic knowledge of antibiotics", Nanzandou, issued January 25, 1970, P45-55, revised 3rd edition]. As test bacteria, the following strains were prepared and used at 1 × 10 ⁶ bacteria / ml (Heart Infusion Broth) Difco).

〈グラム陰性菌〉 P.mirabilis 1287 Sh.sonnei EW-33 Sal.enteritidis IFO3313 Enterobacter aerogenes IFO13534 E.coli NIHJ JC−２ Ps.aeroginosa NCTC10490 〈グラム陽性菌〉 Str.pyogenes IID S−32 B.subtilis ATCC6633 Sta.aureus FDA290P その結果、特に、式（１）のペプチドはB.subtilis ATC
C6633に対して32γ/mlの抗菌活性を示し、この値は本発
明者が先に開発した蚕由来の抗菌活性ペプチドのそれと
同等であるか或はこれをも凌ぐ強力なものであつた。<Gram-negative bacteria> P.mirabilis 1287 Sh.sonnei EW-33 Sal.enteritidis IFO3313 Enterobacter aerogenes IFO13534 E.coli NIHJ JC-2 Ps.aeroginosa NCTC10490 <Gram-positive bacteria> Str.pyogenes IID S-32 B.subtilis ATCC6633 Sta .aureus FDA290P As a result, in particular, the peptide of formula (1) is B. subtilis ATC.
It showed an antibacterial activity of 32γ / ml against C6633, and this value was equivalent to or stronger than that of the silkworm-derived antibacterial active peptide previously developed by the present inventor.

製剤例１ 本発明ペプチド（式（１）） 500mg ブドウ糖 250mg注射容蒸留水 適量 全量 5ml 注射用蒸留水に本発明ペプチド及びブドウ糖を溶解させ
た後、5mlのアンプルに注入する。窒素で置換後減菌し
て注射剤を得る。Formulation Example 1 Peptide of the present invention (Formula (1)) 500 mg Glucose 250 mg Injection volume distilled water Appropriate amount 5 ml The peptide of the present invention and glucose are dissolved in distilled water for injection and then injected into a 5 ml ampoule. After substituting with nitrogen, it is sterilized to obtain an injection.

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】式 Ｈ−Arg−Trp−Lys−Ile−Phe−Lys−OH で表わされるアミノ酸配列を有するペプチド。1. A peptide having an amino acid sequence represented by the formula: H-Arg-Trp-Lys-Ile-Phe-Lys-OH.