JPH07508014A - クローン病，潰瘍性大腸炎，慢性炎症の進行の治療のため，及び抗増殖剤としての，縮合ビス−（３，４−ジヒドロ−１−ピリジニル）メタン類の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 クローン病、潰瘍性大腸炎、慢性炎症の進行の治療のため、及び抗増殖剤本発明 は、縮合ビス−（３，４−ジヒドロ−１−ピリジニル）メタン類、並びに慢性炎 症の進行、潰瘍性大腸炎及びクローン病の治療のための薬剤を製造し、がっ抗増 殖作用を有する薬剤を製造するためのそれらの使用に関する。

前述の化合物は、下記一般式１に対応している；（式中、Ａは、ベンゾ又はチェ ノ基を意味し；Ｒ８及びＲ１は、それぞれ独立に水素又は（Ｃ１−ｓ）アルキル を意味する、もしくはそれらが結合した炭素原子と共に、５−又は６−員炭素環 状基を形成する；Ｒｏは、（Ｃ，−、）アルキル、ハロゲン（Ｆ、　ＣＩ、　Ｂ ｒ、　Ｉ）、ヒドロキシ、（ＣＩ−、）アルコキシ、アミノ、チオメチル、メタ ンスルホニルオキシ又はメタンスルホンアミドを意味するか、もしくは２個の隣 接するＲ１１置換基は一緒に、−ｏ−ｃｏ＊−ｏ−１−０−Ｃ）ｌ＊−ＣＨＩ− ０−を意味する；論は、Ａがベンゾ基の場合は、０．１．２又は３を、及びＡが チェノ基の場合は、０、ｌ又は２を意味する； 並びに、Ｄは、下記式１ａを有する基を意味する；（式１ａを有する基において 、Ｂは、ベンゾ又はチェノ基を意味し；Ｒ１は、水素、（Ｃ１−＋−）アルキル 、フェニル、フェニル（ＣＩ−Ｓ）アルキル、（Ｃ，−、）アルコキシ又は−Ｎ ＨＣＯＸ　（式中、Ｘは（Ｃ１−＋）アルキル）を意味する：Ｒ６は、水素、（ ＣＩ−、）アルキル又はヒドロキシメチルを意味する；Ｒ１及びＲ１は、それぞ れ独立に、水素又は（ＣＩ−Ｓ）アルキルを意味する、もしくはそれらが結合し た炭素原子と共に、５−又は６−員炭素環状基を意味する；１１＋ｔは、（Ｃ， −、）アルキル、ハロゲン（Ｆ、　ＣＩ、　Ｂｒ、　ｌ）、ヒドロキシ、（Ｃ１ −、）アルコキシ、アミノ、チオメチル、メタンスルホニルオキシ又はメタンス ルホンアミドを意味するか、もしくは隣接する２個のＲ１，置換基は一緒に、− ０−Ｃ）ｌ＊−０−、又は−０−ＣＨ，−ＣＨｌ−０−を意味する；並びにｎは 、Ｂがベンゾ基の場合は、０．１，２又は３、及びＢがチェノ基の場合はＯｌｌ 又は２を意味する。）： 並びに無機酸又は有機酸との、それらの医薬として許容できる塩である。

用語“炭素環状基”は、Ｒ３及びＲｓ、又はＲ，及びＲ１、並びにそれらが結合 した連結炭素原子によって形成され、好ましくは飽和した５−又は６−員炭素環 状基を意味する。

Ｄが式１ａの基であるような式Ｉを有する化合物は、以後、式Ｖｌ１１を有する 化合物とする。

Ｒ３が水素である、式Ｖｌ１１を有する化合物は、式Ｖｌｌｌａ及びＶｌｌｌｂ を有する互変異性体を形成する： （式中、同じ＜Ｒ１は水素を意味する。）。式Ｉ及びＶｌｌｌの定義も、前述の 互変異性体を含む。

コーパー（Ｋｏｂｏｒ）及びジェノ（Ｊｅｎｏ）の論文、Ｓｚｅｇｅｄｉ　Ｔｏ ｎａｒｋｅｐｚｏ　ＦｏｉｓｋｏｌａＴｕｄ、　Ｋｏｚｌ、１４５−１５３頁（ １９７５ＸｃｈｅＩＩＬＡｂｓけ、　、８７．１３４９８０Ｚと比較）は、下記 一般式Ｖｌ＋＋を有する化合物及びそれらの製法を記載している。

（式中、Ｒ５、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ１、Ｒ１及びＲ７は、水素を、並びに置換された 島及びＢは、下記の基を意味する。）； この文献は、この化合物の生理的作用に関する情報は、−切含んでいない。欧州 特許出願第２８８．０４８号において、一般式■を有する化合物は、心臓保護作 用及び脳保護作用を有する化合物として記載されている。

式Ｖｌｌ＋を有する化合物の下記のものを、本発明の特に興味深い点として挙げ ることができるニ ー）化合物Ｖｌ１１　（式中、Ｒ１は、水素、（ＣＩ−１＠）　７／ｌ／キル、 フｚニル（ＣＩ−５）ｙルキル又バーＮＨＣＯｘ（式中、Ｘは（Ｃ，−１）アル キル）を意味する；Ｒ１１及びＲ１１は、それぞれ独立に（ＣＩ−＋）アルキル 、ヒドロキシ、（Ｃｔ−４）アルコキシ、メタンスルホニルオキシ又はメタンス ルホンアミドを意味する、もしくは２個の隣接する置換基Ｒ０及びＲａｔは一緒 に、−０−ＣＨＩ−０−又は−０−Ｃｕｔ−ＣＩ（＊−０−を意味する。）； −）化合物Ｖｌｌ＋　（式中、Ｒ１ハ、水素、（ＣＩ−ｕ）フルキル又は−ＮＨ ＣＯＸ　（式中、Ｘは（Ｃ１−ｓ）アルキル）を意味する： Ｒ，，Ｒ，、Ｒ１及びＲ１は、それぞれ独立に水素を意味する、もしくはＲ１は Ｒ５と共に及び／又はＲ６はＲ１と共に、並びにそれらが結合した連結炭素原子 との、５−又は６−員炭素環状基を意味する； Ｒ１１及びＲ１！は、それぞれ独立に、ヒドロキシ、（Ｃ，−４）アルコキシ、 メタンスルホニルオキシ又はメタンスルホンアミドを意味する、もしくは２個の 隣接する置換基Ｒ１１及びＲｕは一緒に、−０−ＣＨＩ−０−又は−〇−ＣＨｌ −ＣＨｌ−０−を意味する。）；−）特に、化合物（式中、Ｒ１が、水素、（Ｃ Ｉ−＊）アルキル又は−洲αにＲ３、及び／又はＲｓが、水素、メチル又はヒド ロキシメチル、及び／又はＲ１、Ｒ３、Ｒ６及びＲ１が、それぞれ独立に水素を 意味する、もしくはＲ１はＲ３と共に及び／又はＲ６はＲ，と共に、並びにそれ らが結合した連結炭素原子との、５−員炭素環状基を意味し、及び／又はＲ１１ 及びＲＩ！はそれぞれ独立に、ヒドロキシ、メトキシ、メタンスルホニルオキシ 又はメタンスルホンアミドを意味する、もしくは２個の隣接する置換基Ｒ１１及 びＲ１１は一緒に、−０−ＣＨ，−０−を表す。）。

特記すべき化合物は； −）式中、Ｒ１及びＲｓは、水素を意味し、及び／又はＲ１，、Ｒ，、Ｒ１及び Ｒ１は、水素を意味する、もしくはＲ２及びＲ１、又はＲ６及びＲ７は、−緒に −（ＣＨＩ）、−を意味する；特に、Ａ及びＢは、それぞれ独立にチェノ基、好 ましくは２．３−チェノ基、好ましくは未置換のチェノ基を表す化合物： もしくは、化合物； −）式中Ａ及び／又はＢは、ベンゾ基で、膳又はｎは２を表し、好ましくはベン ゾ基の２個の置換基、Ｒ＋＋及び／又はＲＩＷは、Ａ又はＢの縮合点に対し、そ れぞれメタ−又はパラ−の位置であり、好ましくはこれらの置換基Ｒ＋＋及びＲ ｌｔは、それぞれ独立にヒドロキシ、（Ｃ，、）アルコキシ（好ましくはメトキ シ）を表す、もしくは２個の隣接する置換基Ｒ１１及びＲ１８は一緒に、−０− ＣＨＩ−Ｃ）Ｉｔ−０−又は−０−ＣＨＩ−０−を表す。

特記すべき化合物は、Ｒ１１及びＲｌｆがメトキシである化合物である。

本発明の効果的な化合物の例を下記表に列記するが、特記すべき化合物は；化合 物Ｂ； 化合物Ｃ： 化合物Ｄ： 並びにそれらの医薬として許容できる塩である。

これらの化合物は、それ自体、公知の方法によって、製造することができる（例 えば、欧州特許第２８８．０４８号に従って）。

塩の形成に適している酸は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、 酢酸、プロピオン酸、ラフ酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フ マル酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、安息香酸、ケイ皮酸、アスコルビ ン酸及びメタンスルホン酸を含む。

本発明は、慢性炎症の進行、潰瘍性大腸炎及びクローン病の治療薬の製造、並び に抗増殖作用を有する薬剤の製造のために、前述の化合物を使用することに関す る。該化合物の活性は、それらによる非選択的陽イオンチャンネル（ＵＣのの阻 害によって説明することができる。

慢性気管支喘息の病態生理は、炎症細胞の活性化によって仲介された炎症の進行 に基づいている（バーレス（ＢＡＲＮＩＩ！Ｓ）　（１９８７）、サイフェルト （ＳＥＩＦＥＲＴ）及びシュルツ（ＳＣＨＵＬＴＳ）　（１９９１））。

炎症細胞（例えば、好中球及びマスト細胞、又は永久細胞株ＨＬ−６０細胞、又 は感作されたＲＢＬ細胞、すなわちγグロブリンＥで負荷されたもの）のレセプ ターによって調節された活性化は、刺激性作用物質（例えば、エンドセリン、Ｐ ＡＦ、ロイコトリエン、走化性ペプチドであるｆＭＬＰ、又は感作されたマスト 細胞に対する抗原）の性質とは関係なく、非選択性陽イオンチャンネル（ＵＣの 遮断薬によって、阻害される（リンク（ＲＩＮＫ）、（１９９０））。これらの チャンネルを介して、レセプターが仲介した細胞の活性化を持続する原因となる 細胞外カルシウムが、細胞へと流入する（プツトニー（ＰＵＴＮＥＹ））。この カルシウム供給が遮断された場合は、炎症細胞の活性化の阻害が生じる。

ジヒドロピリジン型又はフェニルアルキルアミン型の、通常のカルシウム拮抗薬 は、ＵＣＣｓ又は炎症の進行のいずれも阻害しない（ウェルス（ＷＥＬＬＳ）ら の論文、（１９８６））。

細胞活性化の測定として、又はそれらのりＣＣ遮断薬による阻害の測定として、 フラー２を負荷された細胞における細胞質のカルシウムイオン濃度の動態が、グ リンキエウィッツ（ＧＲＹＮＫＩＥＷＩＣＺ）らによって著された方法（１９８ ５）を用いて、蛍光的に定量される。この方法は、本発明の範囲において、ＵＣ Ｃ遮断薬を測定するための、信頼できる判別法であることが証明されている。

いわゆる機能的サブシガルギン（ＴＨＡＰＳＩＧＡＲＧＩＮ）阻害が、非選択性 陽イオンチャンネル遮断薬に特異的な特徴として適していることが証明されてい る。サブシガルギンは、サストラップ（ＴＩ（ＡＳＴＲＵＰ）らによって明らか になった、発がんプロモーターであり（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ 、　（ＵＳＡ）　、８７：２４６６−２４７０（１９９０））　、これは細胞内 のＩＰ、−感受性Ｃ，Ｊ＋−貯蔵のＣａ”−ＡＴＰアーゼを、選択的かつ不可逆 的に阻害する。

その結果、Ｃａ”−貯蔵は、迅速に枯渇する。プツトニー（Ｊ、　ＰＵＴＮ［！ Ｙ）によって明細胞へ、Ｎａ′″及びＣａ　ｌ　＋が大量に流入する。これらの 特性から、サブシガルギンは、非選択性陽イオンチャンネルの作用物質−及びＩ Ｐ、−非依存性の開口の間接的刺激剤として適している。

本発明の範囲において、非選択性陽イオンチャンネルのサブシガルギンによる刺 激は、ＨＬ６０細胞（ヒト白血病細胞）、海馬及び皮質の神経細胞、並びにＲＢ Ｌ−細胞（ラット好塩基球性白血病細胞）において成功していて、この方法で、 特定の細胞株に、これらのチャンネルが存在することが証明された。

細胞質のＣａ’＋濃度（［Ｃａ”］□）は、細胞増殖及び腫瘍増殖において、重 要な役割を果たしている（要約はザチャルスキ（Ｌ、　Ｒ，ＺＡＣＨＡＲ３ＫＩ ）、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１９：Ｉ４５−１７７（１９８ ８）参照）。特に、連続的にイノシトール三リン酸（ＩＰＩ）が介在するレセプ ターの活性化によって刺激された細胞への（ａ１＋−流人は、がん細胞の増殖に おいて極めて重要であることは明らかであろう（Ｕ、キラカワ及び■ニシズカ、 “多種薬剤耐性”においても役割を果たしている（要約は前述のザチャルスキの 論文、Ｊ、　ＭＥＤ、す：　１４５−１７７（１９８０）参照）。

この仮説は、非選択性陽イオンチャンネル（ＵＣＣ）の間接的刺激剤としてのサ ブシガルギンが、細胞内でのＣａ１４＝過剰をもたらすだけでなく、非常に効果 的な発がんプロモーターであるという事実によって、裏付けられている（サスト ラップ（Ｖ、　ＴＨＡＳＴＲＵＰ）ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ　１．　Ａｃａｄ、 　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）、８７：２４６６−２４７０（１９９０）j。

ＵＣＣによるＣａ　２　＋−流人の遮断は、細胞内のカルシウムイオン濃度の正 常化をもたらし、従って腫瘍増殖などを抑制する。

通常のカルシウム拮抗薬は、これらのＵＣＣを阻害しない。驚くべきことに、本 発明の化合物は、ＵＣＣを介して細胞へのカルシウム流入を阻害することが判っ ている。

ムルヒ（Ｓ、　Ｈ，ＭＬＩＲＣ）ｌ）らが示した（Ｌａｎｃｅｔ　、　３３訂３ ８１−３８５（１９９２，２，１５））ように、エンドセリンＩは、潰瘍性大腸 炎及びクローン病のような炎症性腸疾患において、重要な病態生理学的役割を果 たしている。免疫組織化学的手法を用いて、粘膜下組織にクローン病を発症した 患者、及び大腸の内皮基底膜に潰瘍性大腸炎を発症した患者は、健常者と比較し て、著しく非常に上昇した濃度のエンドセリンＩを示すことが判っている。エン ドセリンの局所的分泌は、前述の疾患の実際の原因と考えられる微小な梗塞を伴 う連続的散在性虚血状態での強力な血管章縮を生じると仮定される。エンドセリ ンの血管筆線の作用は、血管ミオサイトのＣａ”−過剰によって、説明される。

エンドセリンは、ジヒドロピリジン非感受性チャンネルを介しての強力な軽層的 Ｃａ　１　＋−取り込みへと続く、ＩＰ、が介在した細胞内のＣａ”放出を最初 に誘発する（サイモンフン（Ｋ　Ｓ、　ＳＩＭＯＮＳＯＮ）らの論文、ＣＩ　ｉ ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ。

３９２（１９９０））。これらのチャンネルは、非選択性陽イオンチャンネルで あり、大腸粘膜の細胞に存在することも簡潔に記載されている（シーメル（Ｃｈ ｒ、　Ｓｉｅｍｅｒ）及びゴージライン（１１，Ｇｏｇｅｌｅｉｎ　、　Ｅｕｒ ｏｐ、　Ｊ、　Ｐｈｙｓｉ吐、４２０：３１９−３２８（１９９２））、。

フラー２で負荷されたヒト白血病細胞（ＨＬ６０　ｍ胞）のエンドセリンで刺激 された活性化は、エンドセリン拮抗薬の機能を調べるための適切なスクリーニン グモデルであることがわかっている。グリンキエウィッッ（Ｇ、　ＧＲＹＮＫＩ ＥＷＩＣＺ）らの方法（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｉ　、　２６虹３４０−３４５０ （１９８５））に従って、ＨＬ６０細胞（懸濁液）の細胞質の細胞内Ｃａ’＋濃 度を、分光蛍光法によってモニターし、カリエンドセリンによる細胞の活性化量 を定量することができる。この刺激は、エンドセリン０．１μＭを添加すること によって作用し、本発明の物質によって用量依存的に阻害された。

本発明の物質の機能的エンドセリン拮抗作用は、非選択性陽イオンチャンネルの 遮断によって仲介される。その結果、ＲＢＬ−１ｍｌ細胞における機能的サブシ ガルギン拮抗作用の検出も、同様に機能的エンドセリン拮抗薬に適しているスク リーニング法である。

試験の実施ニ スクリーニングのために、フラー２を負荷した接着性ＲＢＬ−ｈｍｌ細胞を、カ ルシラムラ含マないインキュベーション媒体中で、サブシガルギン０．１μＭで 刺激スる。

４分後、細胞外Ｃａ”＋濃度を１．５ｆｆ１Ｍに戻し、フラー２の蛍光を用いて 、非選択性陽イオンチャンネルを介した、大量の軽層的Ｃａ″＋−取り込みによ って引き起こされた、細胞質のＣａ″＋濃度の過度の上昇が記録される。

この取り込みは、非選択性陽イオンチャンネル遮断剤によってのみ、用量依存的 に阻害される。通常のカルシウム拮抗薬だけではなく、ＩＰｓの代謝回転を刺激 する作用物質の特異的拮抗薬も、サブシガルギンによって間接的に引き起こされ た軽層的Ｃａ”−取り込みを阻害することができる。本発明の化合物は、それら の持つＵＣＣ阻害で区別される。

個々の接着性ＲＢＬ−ｈｍｌ細胞の細胞質における、蛍光的カルシウム測定は、 クドウ及びオグラによる神経細胞を対象とした方法（１９８６）と類似の方法で 行う。ツァイス社のアキジオフェルト（ＡＸ　ｌ０ＶＥＲＴ）３５蛍光顕微鏡を 、ＩＣＭＳ−画像処理装置、コントロールユニット付きの残光カメラ、及び画像 増強装置ＤＶＳ３０００からなる、浜松社が製造した造影システムと共に用いる 。

細胞質のＣａ”＋濃度の動態は、サブシガルギン（０，１μＭ）によって刺激さ れた細胞の活性化後、濃度／時間曲線として、連続的に記録する。２種類の活性 化された細胞培養液についてのこれらの曲線は、ＩＯμＭの試験物質が存在する ものとしないものとで比較する。これらの曲線の下側の面積（ａｒｅａ　ｕｎｄ ｅｒ　ｔｈｅ　ｃｕｒｖｅ＝ＡＵｃ）を積分し、細胞活性化量として記録する。

試験したＵＣＣ−遮断薬の阻害能は、下記式を用いて決定する： ％Ｈ＝１００−（ＡＵＣｌ、ｋ　Ｘ１００）／（ＡＵＣ，、Ｉｌ＠＋　）％Ｈ＝ 試験物質ＩＯμＭによって刺激されたもしくは阻害された非選択性陽イオンチャ ンネルを介した、カルシウム取り込みの阻害の割合。

ＡＵＧ　、、、　＝刺激剤及び阻害性試験物質ｌＯμＭの存在下で記録された曲 線の下側の面積。

ＡＵＧ　、。□、。１＝刺激剤のみを添加後に記録された曲線の下側の面積。

前述の説明に関連する文献： バーレス（Ｐ、　Ｊ、　ＢＡＲＮＥＳ）　、ロジャー（＋、Ｗ、ＲＯＤＧ［！Ｒ ）及びトムソン（Ｎ。

Ｃ，ＴＨＯＭＳＯＮ　） “喘息、基本的機序及び臨床管理”の中の、喘息の病因バーンス著の、ＡＣＡＤ ＥＭＩＣＰＲＥＳＳ、ロンドン（１９８８）グリンキエウイッツ（Ｇ、ＧＲＹＦ ＪＫＩＥＷＩＣＺ）　、ボー’−−−（ｌｔＰＯＥＮｌｌりおよびライエン（Ｒ ，Ｙ、　ＴＳＩＥＮ　） 著しく改善された蛍光特性を有する新しいＣａ’！指示薬Ｊ、　Ｂ　ＩＯＬ、　 ＣＩ（Ｅ隨、２６０：３４４０−３４５０（１９８５）ハイド（！ｔＨＩＤＥ） 及びベーフェン（Ｍ、んＨＥＡＶＥＮ）ラットのマスト細胞（ＲＢＬ−２１１３ ）株におけるカルシウム流入Ｊ、　ＢＩＯＬ、　ＣＨＥ！ｔ、２６８：１５２２ １−１５２２９（１９９１）クドウ（Ｙ、　ＫＵＤＯ）及びオグラ（九〇ＧＵＲ Ａ　’）単離された海馬神経における細胞内Ｃａ’＋濃度のグルタミン酸によっ て誘導された上昇 ＢＲ，Ｊ、ＰＩ（ＡＲＭＡＣＯＬ、　、８９：１９１−１９８（１９８６）プツ トニー（Ｊ、　Ｗ、　Ｊｒ、　ＰＵＴＮＥＹ　）改められた、カルシウム取り込 み能力 ＣＥＬＬ　ＣＡＬＣＩ園、１１：６１１−６２４（１９９０）リンク（Ｔ、　Ｊ 、　ＲＩＮＫ） レセプターが仲介したカルシウム取り込みＦＥＢＳ　ＬＥＴｒ、、２６糺３８１ −３８５（１９９０）サイフェルト（Ｒ，５ＥＩＦＥＲＴ　）及びシュルツ（Ｇ 、５ＣＨＵＬＴＺ　）食細胞のＮＡＤＰＨオキシダーゼを形成するスーパーオキ シド：複数の機能で調節された酵素系 ＲＥＶ、　ＰＨＹＳ　ＩＯＬ、　Ｂ　ｌ０ｃＨＥｌｔ　ＰＩＩＡＲＭＡＣＯＬ、 、＋１７：５ＰＲＩＮＧＥＲＶＥＲＬ（１９９１）つｚｈス（Ｅ、ＷＥＬＬＳ　 ）　、’）ヘクフン（Ｃ，Ｇ、ＪＡＣＫＳＯＮ　）　、／’−バー　（Ｓ、Ｔ。

ＨＡＲＰＥＲ）　、ｖン（Ｊ、ＭＡＮＮ）及びエーオイ（Ｒ，Ｐ、　ＥＡＯＹ） 霊長類の気管支肺胞のマスト細胞Ｉ＋の特徴、霊長類の気管支肺胞のマスト細胞 からのヒスタミン、ＬＴＣ，及びＰＧＦｔａの放出の阻害、並びにラット腹膜の マスト細胞との比較 Ｊ、　ＩＭＩＡＩＮＯＬ、、匹３９４１−３９４５（１９８６）測定結果： ＲＢＬ−ｈｍｌ細胞における、サブシガルギンの刺激（０，１μＭサプシガルギ ン）後の、ＵＣＣ阻害の割合が得られる。試験物質は、一定濃度、１０”ｎｏｌ である。

ＲＢＬ−）ｕ＋＋１細胞−サブシガルギン（０，１μＭ）−刺激化合物Ｃ％Ｈニ ア３．Ｏ１ 機能的抗炎症効果は、下記の試験によって示すことができるニガラススライドに 接着している個々のＲＢＬ−２１（３−細胞（マスト細胞に関連した腫瘍細胞株 ）を使用する。

ＲＢＬ−２８３−細胞の培養及び付着は、ハイド（）ＩＩＤ［り及びべ−７ｚ　 ン（ＢＥＡＶＥＮ）ｌ：よって記載された方法（１９９１）に従って行う。接着 性ＲＢＬ−２１１３−細胞を感作するために、この細胞を、ジニトロフェノール −ウシ血清アルブミン複合体（ＤＮＰ−ＢＳＡ−抗原）で、１　：２０００に希 釈された市販されているγグロブリンＥ溶液を用いて、室温で、２時間インキュ ベートする。その後、この細胞を洗浄する。ＤＮＰ−ＢＳＡ−溶液（１０μｇ／ ｍｌ）を０．１ｍｌ加えることによって、細胞質の（ａ　ｆ　＋−過剰によって 仲介された強力な免疫細胞の活性化が起こる。個々の接着性ＲＢＬ−２Ｈ３−細 胞の細胞質内の蛍光的カルシウム測定は、クドウ及びオグラによって記載された 神経細胞での方法（１９８６）に類似の方法で行い、これは同様に本出願の上記 において明らかにされている。

これらの試験で使用した比較例は、抗原が誘発した細胞活性化を約５０％阻害す る、クロモグリケート（ｌＯμＭ）である。

本試験において、前述の化合物類は、上記で述べた値に匹敵する％Ｈを示してい る。

本発明の物質の抗増殖作用を測定するための、テトラゾリウムアッセイを用いる 、様々なヒト腫瘍細胞株のミクロ培養試験は、驚いたことに、試験した該化合物 が、比較物質ベラパミルよりも、５〜１００倍強力であることを示した。

載されたＭＩＴ試験を用いて測定したＣＩＩｒＴ＝　［３−（４，５−ジメチル チアゾール−２−イル）２．５−ジフェニル−テトラゾリウムプロミド］、ケミ コン（ＣＨＥＭＩＣＯＮ）社（エルセグンド、Ｃａ、　ＵＳＡ）製造）。この指 示薬は、損傷を受けていないミトコンドリアを有する生存細胞によってのみ、青 色のホルマザン生成物に代謝される。下記のヒト腫瘍細胞株を、本試験において 使用した：＾５４９（肺の腺がん”）　、Ａ　４３１（外陰部の表皮ｂ＜Ａ、） 、ＰＣ３（前立腺の腺がＡ、）、ＳＫ　ＯＲ３（***の腺がん）　、ＨＴ　２９ （ＣＸＩ　１）（結腸の腺がん）及びＫ　５６２（慢性骨髄性白血病細胞）。本 試験は、ミクロ滴定用プレート上で行った。それぞれの窪みには、細胞懸濁液（ ０，２Ｘ１０’細胞数／ｍｌ）が１００μｌはいっていた。使用したインキュベ ーション媒体は、熱で不活性化された胎児子牛の血清ｌＯ％及びゲンタマイシン ５０μｇ／ｗ＋１を含む、ＲＰＭｆ　１６４０であった。この細胞懸濁液は、３ ７℃でｃｏｔ（ｓ％）／空気（９５％）混合物で、飽和点の湿度を有する気体中 で、様々な濃度の抗増殖性の試験物質が存在する及びしない状態で、０．２４． ４８又は７２時間インキュベートした。これらの試験物質は、ＣＨＩＯ中に溶解 した（最終濃度：０．１％）。その後、■ゴー液（３Ｉ１ｇ／ｍｌ）をｌＯμｌ 加え、その３時間後に、０．０８Ｎ　ＨＣｌを含むイソプロパツール溶液１００ μｌを加えた。さらに１時間後、ミクロプレート読み機で、５７０ｒｕａの光吸 収を測定した（比較波長は６３０ｎｍ）。この光吸収は、生存細胞数と直接比例 している。この物質の最大阻害濃度の半値は、ｌμｇ／＋＋１であった。

前述の機能的エンドセリン及びサブシガルギン拮抗薬の血管章縮消散作用は、単 離された血管調製物において確認された二冠動脈の潅流は、逆行するように潅流 された、自発的に拍動する、ラットから採取したランゲンドルフ心臓において、 電磁法の測定によって、連続的に定量した（装置はヒューゴサックスエレクトロ ニツク社（ＭＡＲＣＨ）によって提供された）。この測定装置は、非常に正確に 血管章縮の程度、持続時間及びパターンを記録するために使用することができる 。潅流をエンドセリン濃度１１００ｎで行う場合は、冠動脈潅流の流速は、１１ ｍ１１分から５ｍ１１分へ下げる。潅流における制限は、本発明の物質によって 、逆方向に働くことができる。フラー２で負荷されたＲＢＬ−ｈｍ　１細胞にお けるサブシガルキン阻害、又はフラー２で負荷されたＨＬ　６０細胞におけるエ ンドセリン阻害の効果に関する、本発明の化合物の効能は、ランゲンドルフ調製 物において検出された本試験物質の血管零線消散作用と明らかに相関している。

このことから、試験物質の血管牽縮を消散するエンドセリン拮抗作用を基に、非 選択性陽イオンチャンネルの遮断作用があると結論することができる。

この化合物は、腸内及び非経口的の両方で投与することができる。経口投与の推 奨量は、ｌ用量につき活性物質０．１〜５０ｋｇであり、静脈投与は、ｌ用量に つき０．０５〜１５（ｍｇである。所望の治療量は、適応症及び投与剤形によっ て決まり、かつ経験的に決定することができる。

効果的化合物の例を、下記の表に示す：表１ ｃｏ３ｏ　ｃｏｓｏ　）Ｉ　−（ｃｏｔ）＋−ＨＣＨ，Ｏｃｔｔｓｏ　−（ＣＩ （ｔ）ａ−１１９／ＢＳＣＨ，５Ｏ１ＮＨＣＨ，ＯＨＨＨ）ｌ　ＣＨＩＯＣＨＩ ＳＯｌＮ）ｌ）ｌ　Ｈ２３３−２３８（Ｚ）／ＢＳＣ）１．ＯＣＲ，Ｏｎ−Ｃ， Ｈ，ＨＨＣＨｓ　Ｃ）１．０　ＣＩ（、ＯＨＨ１３６−１３７／ＣＩＣＨｓＯＣ ＨｊＯｎ−Ｃ，ＨＩ）ｌ　ＨＨＣＨＩＯＣＨｓＯＨＨ１５Ｂ−１５９／ＣＩＣＨ ＋ＯＣＨｓＯＣＨｓ　ＨＨＨＣＨｓＯＣＨｓＯＨＨ１８０／ＣＩＣＨ，ＯＣＨ， ＯＣＨ，ＨＨＣＨｓ　ＣＨＩＯＣＨｓＯＨＨ１７７／ＢＳＣＨＩＯＣＨ，ＯＨＨ ＨＨＣＨｓＳＯｔＯＨＯＨ）ｌ　１８２−１８６／ＢＳＣ）１．ＯＣＲ，０）Ｉ 　ＨＨＣＨ，Ｃ）１．ＯＣｌ５Ｏ）ｌ　Ｈ１３８−１４０１０ＳＣＩ’ｂＯｃｏ ｓｓｏ＊ｕ　ＨＨＣＨ３ＨＯＣＨｓＯＨＨ２２２−２２５１０ＳＣ）１３０　ｃ ｏｓｏ　ｃｕｓ　ＨＨＣＨオｏｏｃｏｓｏ　ＣＨ，Ｏ）ｌ　ｌ（１５５／Ｃ１Ｃ Ｈ３０ＣＨ３０ｎ−Ｃ５Ｈ１１ＨＨＣＨｓ　ＣＨ，ＯＣＨｓＯＨＨ７５−７９（ ａ）１０ＳＣ）１．ＯＣ）１３０　Ｃ，Ｈ，ＨＨＣＨ＋　ＣＨｓＯＣＨｓＯ）Ｉ 　Ｈ８０（ａ）／ＢＳＣ）１．Ｏｃｕｓｏ　ＣＪｓ　ＨＨｌ（ＣＨＩＯＣＨＩＯ ＨＨ９５−１００／ＢＳＣＨｓＯＣＨｓＯＣＨｓ　ＨＨＨ−０−ＣＨｔ−０−Ｈ Ｉ（１５６−１５８／ＣｌＣ１，ＯＣＨｓＯＣ１１（ｌ　ＨＨＨ−０−ＣＨＩ− ０−ＨＨ１４８−１５５／ＣＩＣＨｓＯＣ）１１０　ＣＩＨＩ　ＨＨＨＣ）１１ ０　ＣＨＩＯＨＨ１７７−１７９／ＣＩＣ）１１０　ＣＨ，０）Ｉ　Ｈｌ（ｌ（ （ｌ−ＣＨｌ−０−ＨＨ２５１−２５３／Ｃｌ−０−ＣＨｌ−０−ＨＨＨＨ−０ −ＣＩ（１−０−ＨＨ２５１−２５３（Ｚ）／ＣＩＣＨｓＯＣ）ＩＩＯｃＨＩｃ ＯＮＨＨＨＨＣＨＩＯＣ）Ｉ！ＯＨＨ１７１−１７２／Ｃｌ−０−ＣＨｔ−０− Ｃ，Ｈ，ＨＨＨ−０−ＣＨ，−〇−ＨＨ１９１−１９５／ＢＳＢＳ＝塩基、ＣＩ ＝塩素、２＝分解、ａ＝アモルファスＲ塩の形状　Ｍｐ（’Ｃ） ＣＩ　２３９−２３５ 表３ Ｒ塩の形状　Ｍｐ（”Ｃ） ＣＩ　１６２−１７２ Ｃ１２５０−２５３ ａ）　コーティング錠 錠剤１錠のコアは、下記を含むニ 一般式Ｉを有する活性物質　３０．０＋＋ｇ乳糖　１００．０＋ｎｇ コーンスターチ　７５．０＋＋＋ｇ ゼラチン　３．　Ｏ＋ｎｇ ステアリン酸マグネシウム　２．０ｍｇ２１０、０＋ｎｇ 製剤 乳糖及びコーンスターチと混合した該活性物質を、１０％のゼラチン水溶液を用 い、１ｍのメツシュスクリーンを通して顆粒化し、４０℃で乾燥し、再度スクリ ーンを通して研磨する。こうして得られた顆粒を、ステアリン酸マグネシウムと 混合し、圧縮する。本方法で製造されたコアを、糖、二酸化チタン、タルク及び アラビアゴム水性懸濁液からなるコーティングを用い通常の方法で被覆する。最 後に被覆された錠剤を、みつろうで研磨する。

ｂ）錠剤 一般式■を有する活性物質　３０．　（ｍｇ乳糖　１００．０ｍｇ コーンスターチ　Ｔｏ、　Ｏ＋ｎｇ ２１０、０＋ｎｇ 製剤 該活性物質及びステアリン酸マグネシウムを、可溶性デンプン水溶液で顆粒化し 、この顆粒を、乾燥し、乳糖及びコーンスターチと完全に混合する。その後、こ の混合物を圧縮し、重量２１０＋ｎｇの錠剤とする。

Ｃ）カプセル剤 請求の範囲第１項記載の活性物質　２０．０ＩＩＩｇ乳糖　２３０．０＋ｎｇ コーンスターチ　４０．０＋ｎｇ タルク　１Ｏ１０＋ｎｇ ３００、０ｍｇ 製剤 該活性物質、乳糖及びコーンスターチを、最初にミキサーの中で結合し、かつそ の後粉砕機にかける。この混合物を、前記ミキサーに戻し、タルクと完全に結合 させ、かつ機械的に硬ゼラチンカプセルに充填する。

国際調査報告　。１７，１゜。ｔ／１Ｎｃｔ１１＋ｗｅ＋ｗ、１＾−、、、、、 、ｐｃＴ／ＥＰ　９３１０１５３１（３１）優先権主張番号　Ｐ４２２０３７９ ．１（３２）優先臼　１９９２年６月２２日（３３）優先権主張国　ドイツ（Ｄ Ｅ）（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、ＡＵ、ＢＧ、ＢＹ、ＣＡ、ＣＺ、ＦＩ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＲ，Ｎｏ、ＮＺ、ＰＬ 、ＲｔＪドイツ連邦共和国　デー６５０１　シュヴアーペンハイム　エルスハイ マー　シュトラーセ３６

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. １．一般式Ｉを有する化合物、もしくは該化合物と無機酸又は有機酸との、医薬 として許容できる塩の、慢性炎症の進行、潰瘍性大腸炎及びクローン病の治療の ための薬剤の製造、並びに抗増殖作用を有する薬剤を製造するための使用。 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ （式中、Ａは、ベンゾ又はチエノ基を意味し；Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に 水素又は（Ｃ１−６）アルキルを意味する、もしくはそれらが結合した炭素原子 と共に、５−又は６−員炭素環状基を形成する；Ｒ１１は、（Ｃ１−４）アルキ ル、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、（Ｃ１−４）アルコキシ、 アミノ、チオメチル、メタンスルホニルオキシ又はメタンスルホンアミドを意味 するか、もしくは２個の隣接するＲ１１置換基は一緒に、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−、 又は−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−を意味する；ｍは、Ａがベンゾ基の場合は、０ 、１、２又は３を、及びＡがチエノ基の場合は、０、１又は２を意味する； 並びに、Ｄは、下記式Ｉａを有する基を意味する；▲数式、化学式、表等があり ます▼Ｉａ（式Ｉａを有する基において、Ｂは、ベンゾ又はチエノ基を意味し； Ｒ１は、水素、（Ｃ１−１６）アルキル、フェニル、フェニル（Ｃ１−６）アル キル、（Ｃ１−４）アルコキシ又は−ＮＨＣＯＸ（式中、Ｘは（Ｃ１−５）アル キル）を意味する；Ｒ５は、水素、（Ｃ１−４）アルキル又はヒドロキシメチル を意味する；Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に、水素又は（Ｃ１−６）アルキル を意味する、もしくはそれらが結合した炭素原子と共に、５−又は６−員炭素環 状基を意味する；Ｒ１２は、（Ｃ１−４）アルキル、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ 、Ｉ）、ヒドロキシ、（Ｃ１−４）アルコキシ、アミノ、チオメチル、メタンス ルホニルオキシ又はメタンスルホンアミドを意味する、もしくは隣接する２個の Ｒ１２置換基は一緒に、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−、又は−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ− を意味する；並びにｎは、Ｂがベンゾ基の場合は、０、１、２又は３、及びＢが チエノ基の場合は０、１又は２を意味する。）；
2. ２．請求の範囲第１項記載の化合物の使用；（式中、Ｒ１は、水素、（Ｃ１−１ ０）アルキル、フェニル（Ｃ１−５）アルキル又は−ＮＨＣＯＸ（式中、Ｘは（ Ｃ１−６）アルキル）を意味する；Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立に（Ｃ１ −４）アルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−４）アルコキシ、メタンスルホニルオキ シ又はメタンスルホンアミドを意味する、もしくは２個の隣接するＲ１１及びＲ １２置換基は一緒に、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−、又は−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−を 意味する；好ましくは、式中Ｒ１は、水素、（Ｃ１−１０）アルキル又は−ＮＨ ＣＯＸ（式中、Ｘは（Ｃ１−６）アルキル）を意味する； Ｒ２、Ｒ２、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に水素を意味する、もしくはＲ２は Ｒ３と共に、及び／又はＲ６はＲ７と共に、並びにそれらが結合した連結した炭 素原子と共に、５−又は６−員炭素環状基を形成する；Ｒ１１及びＲ１２は、そ れぞれ独立にヒドロキシ、（Ｃ１−４）アルコキシ、メタンスルホニルオキシ又 はメタンスルホンアミドを意味する、もしくは２個の隣接するＲ１１及びＲ１２ 置換基は一緒に、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−、又は−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−を意味 する；特に、式中Ｒ１は、水素、（Ｃ１−６）アルキル又は−ＮＨＣＯＣＨ２を 意味し、及び／又は；Ｒ５は、水素、メチル又はヒドロキシメチルを意味し、及 び／又は；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に水素を意味する、もし くはＲ２はＲ３と共に、及び／又はＲ６はＲ７と共に、並びにそれらが結合した 連結した炭素原子と共に、５−員炭素環状基を形成し、及び／文は；Ｒ１１及び Ｒ１２は、それぞれ独立にヒドロキシ、メトキシ、メタンスルホニルオキシ又は メタンスルホンアミドを意味するか、もしくは２個の隣接するＲ１１及びＲ１２ 置換基は一緒に、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−を意味する。）の使用。
3. ３．式中、Ｒ１及びＲ５が水素である請求の範囲第１又は２項記載の化合物の使 用。
4. ４．式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６及びＲ７が、水素である請求の範囲第１〜３のいず れか１項記載の化合物の使用。
5. ５．式中、Ｒ２及びＲ３、又はＲ６及びＲ７は、共に−（ＣＨ２）４−である請 求の範囲第１〜３のいずれか１項記載の化合物の使用。
6. ６．式中、Ａ及びＢは、それぞれ独立にチエノ基、好ましくは２，３−チエノ基 である請求の範囲第１〜５のいずれか１項記載の化合物の使用。
7. ７．式中、Ａ及びＢは、未置換のチエノ基である請求の範囲第６項記載の化合物 の使用。
8. ８．式中、Ａ及び／又はＢはベンゾ基で、ｍ又はｎは２である請求の範囲第１〜 ５のいずれか１項記載の化合物の使用。
9. ９．式中、Ａ及び／又はＢがベンゾ基の場合、そのベンゾ基の２個の置換基Ｒ１ １及び／又はＲ１２は、Ａ又はＢの縮合点に対し、それぞれメタ−又はパラ−の 位置にある請求の範囲第８項記載の化合物の使用。
10. １０．式中、Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立にヒドロキシ、（Ｃ１−４）ア ルコキシ（好ましくはメトキシ）であり、もしくは２個の隣接するＲ１１及びＲ １２置換基は一緒に、−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−である請求の範囲第１〜５、８及び９ のいずれか１項記載の化合物の使用。
11. １１．下記式を有する、請求の範囲第１項記載の化合物又は該化合物の医薬とし て許容し得る塩の使用； 化合物Ａ ▲数式、化学式、表等があります▼ 化合物Ｂ ▲数式、化学式、表等があります▼ 化合物Ｃ ▲数式、化学式、表等があります▼ 化合物Ｄ ▲数式、化学式、表等があります▼。