JPH07501525A - Treatment of melanoma with antisense oligonucleotides against the c-myb proto-oncogene - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】 ｃ−ｍｙｂプロトオンコジーンに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドによる 黒色腫の処置発明の技術分野 本発明は、プロトオンコジーンに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド、特に ｃ−ｍｙｂ遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド、並びに腫瘍形成防 止剤としてのこれらオリゴヌクレオチドの使用に関するものである。[Detailed description of the invention] by antisense oligonucleotide against the c-myb proto-oncogene Treatment of Melanoma Technical Field of the Invention The present invention provides antisense oligonucleotides against proto-oncogenes, particularly Antisense oligonucleotides against the c-myb gene and tumorigenic prevention The present invention relates to the use of these oligonucleotides as inhibitors.

政府認可に関する説明 ここに開示する発明は、ナショナル・インスチチュート・オブ・ヘルス認可ＣＡ ４６７８号により部分的に政府支援された。政府は本発明につきある権利を有す る。Explanation regarding government approval The invention disclosed herein has been approved by the National Institute of Health Partially supported by the government under No. 4678. The government has certain rights in this invention. Ru.

発明の背景 プロトオンコジーンｃ　−ｍ　ｙ　ｂは、鳥類骨髄白血病ウィルス形質転換遺伝 子ｖ−ｍｙｂの通常の細胞同族体である。ｃ−ｍｙｂは、主として造血細胞で発 現される核蛋白質をコードする。これはプロトオンコジーンであり、すなわち正 常な非腫瘍細胞の生存に必要とされる蛋白質をコートする。遺伝子が適当に変化 すると、これはガン遺伝子になる可能性を有する。ガン遺伝子は、細胞内での発 現が正常細胞から腫瘍細胞への形質転換において成る種の機能を果す遺伝子であ る。Background of the invention Proto-oncogene c-myb is an avian myeloid leukemia virus transforming gene. It is the normal cellular homologue of the child v-myb. c-myb is primarily expressed in hematopoietic cells. encodes the expressed nuclear protein. This is a proto-oncogene, i.e. a positive coats proteins required for normal, non-tumor cell survival. Genes change appropriately This then has the potential to become an oncogene. Oncogenes are This is a gene that plays a role in the transformation of normal cells into tumor cells. Ru.

ヒトｃ−ｍｙｂ遺伝子は分離、クローン化および配列決定されている［マジュロ 等、プロシーディング・ナショナル・アカデミ−・サイエンス、ＵＳＡ、第８３ 巻、第９６３６〜９６４０頁（１９８６）］。ヒトｃ　−ｍ　ｙ的なヌクレオチ ド配列を有するオリゴヌクレオチドは本出願人に係る１９８９年１０月２７日付 は出願の米国特許出願第４２７，６５９号および対応の国際特許出願Ｗ０　９０ １０５４４５号に開示されており、その全開示を参考のためここに引用する。そ こには、Ｃ−ｍｙｂアンチセンスオリゴヌクレオチドが血液学的腫瘍の処置およ び免疫抑制に有用であると開示されている。The human c-myb gene has been isolated, cloned and sequenced [Majuro et al., Proceedings National Academy of Sciences, USA, No. 83 Vol., pp. 9636-9640 (1986)]. Human c-m-y nucleus The oligonucleotide having the code sequence was published by the applicant on October 27, 1989. filed in U.S. Patent Application No. 427,659 and corresponding International Patent Application No. WO 90 No. 105,445, the entire disclosure of which is hereby incorporated by reference. So Here, C-myb antisense oligonucleotides have been shown to be useful in the treatment of hematological tumors and It is disclosed that it is useful for immunosuppression and immunosuppression.

「悪性黒色腫」もしくは「皮膚黒色腫」としても知られる黒色腫は、浸襲および 転移の可能性を有する黒色球の腫瘍である。黒色球はメラノソーム含有細胞であ って、メラミン色素の生合成および輸送に関与する。黒色球は表皮の基礎層にて 皮膚中に存在する。各種の刺激の下で、これらはメラミン色素を生成する。メラ ミン合成はメラノソーム、すなわちメラノソーム内の明確な細胞内小器管にて生 ずる。Melanoma, also known as “malignant melanoma” or “cutaneous melanoma”, is an aggressive and It is a melanocytic tumor with metastatic potential. Melanospheres are melanosome-containing cells. It is involved in the biosynthesis and transport of melamine pigment. Black spheres are found in the basal layer of the epidermis. Present in the skin. Under various stimuli, they produce melamine pigments. Mela Min synthesis occurs in melanosomes, distinct intracellular organelles within the melanosome. Cheating.

かつては稀であると考えられていたが、黒色腫の発生増加割合は気管支性癌を除 き他の如何なる癌よりも大である。黒色腫の発生はコーカサス人種で最も大であ り、紫外光露出、並びに地理的および職業的因子によって影ンが最もよく知られ ている。ニトロソ尿素はＤＴＩＣよ響を受ける。黒色腫の発生は米国および他の どこでも急速に増大しつつあり、１０〜１７年毎に明らかに倍加している。現在 、黒色腫は米国において癌の大凡１％を占め、はぼ同じ割合の癌死亡者が存在す る。これは皮膚腫瘍の僅か約３％を占めるに過ぎないか、黒色腫は全皮膚癌死亡 者の２／３を占める。Once thought to be rare, the incidence of melanoma is increasing, excluding bronchial cancer. It is bigger than any other cancer. The incidence of melanoma is highest in Caucasian peoples. shadows are most commonly caused by exposure to ultraviolet light, as well as geographic and occupational factors. ing. Nitrosoureas are affected by DTIC. The incidence of melanoma is increasing in the United States and other countries. It is increasing rapidly everywhere, apparently doubling every 10 to 17 years. the current , melanoma accounts for approximately 1% of cancer cases in the United States, and approximately the same proportion of cancer deaths occur. Ru. This only accounts for about 3% of skin tumors, and melanoma is the killer of all skin cancers. They account for two-thirds of the total population.

大抵の場合、黒色腫は最初に一次病巣の部位にて半径方向増殖期を介して進行す る。この初期期間は、殆ど又は全（転移に対する能力がないことを特徴とする。In most cases, melanoma initially progresses through a radial growth phase at the site of the primary lesion. Ru. This initial period is characterized by little or no capacity for metastasis.

この期間における黒色腫は一般に外科手術により処置することができる。より深 い皮膚組織への浸入を特徴とする垂直方向増殖期において、−次黒色腫は転移す る能力を獲得する。転移が生ずると、手術のみでは黒色腫を処置するのに効果的 でない。Melanoma during this period can generally be treated by surgery. deeper During the vertical growth phase, which is characterized by invasion of deep skin tissue, melanomas are unable to metastasize. acquire the ability to Once metastases occur, surgery alone is not effective in treating melanoma. Not.

黒色腫の処置には化学療法が単独で或いは手術と組合せて用いられている。ジメ チルトリアゼノーイミダゾール（ＤＴ　Ｉ　Ｃ）が転移性黒色腫の処置につき最 も活性な唯一の薬剤であるが、僅か２１％しか全体的な客観的反応割合を持たな い。ＤＴＩＣは肝臓機能の障害をもたらしうる。これは僅かながら血液学的毒性 を有する。Chemotherapy alone or in combination with surgery has been used to treat melanoma. Jime Tiltriazenoimidazole (DTIC) is the most popular treatment for metastatic melanoma. is the only active drug, but has an overall objective response rate of only 21%. stomach. DTIC can lead to impairment of liver function. This is a slight hematological toxicity. has.

悪性黒色腫の処置に若干低い効果を有するものは合成ニトロソ尿素であり、その うち１．３〜ビス（２−クロルエチル）−１−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）　、１ −　（２−クロルエチル）−３−シクロへキンルー１−二トロ尿素（ＣＣＮＵ） 　、メチル−ＣＣＮＵおよびクロロゾトシ異的作用とをもたらしうる。好ましく は、オリゴヌクレりも若干高い重大な血液学的毒性を示す。反応割合は１０〜１ ８％の範囲である。Slightly less effective in treating malignant melanoma are synthetic nitrosoureas; Of these, 1.3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea (BCNU), 1 -(2-Chlorethyl)-3-cyclohequinru-1-ditrourea (CCNU) , methyl-CCNU and chlorozotoxyisotopy. preferably shows significant hematological toxicity with slightly higher oligonucleotide levels. The reaction ratio is 10-1 The range is 8%.

残念ながら、黒色腫患者における相当数の完全回復をもたらす単一の薬剤または 組合せ処方は存在しない。より効果的な薬剤を開発する緊急のニーズが存在する 。Unfortunately, no single drug or There are no combination prescriptions. There is an urgent need to develop more effective drugs .

発明の要点 本発明は黒色腫の処置方法を提供する。この種の処置を必要とする個人に対し、 有効量の１種もしくはそれ息子のｍ　ＲＮ　Ａ転写物の少なくとも１部に相補的 なヌクレオチド配列を有する。このオリゴヌクレオチドはｍＲＮＡ転写物にハイ ブリダイズすることができる。好ましくは、オリゴヌクレオチドは少なくとも１ ２ｍ体オリゴヌクレオチドであり、すなわち少なくとも１２個のヌクレオチド残 基を有するオリゴマーである。特に、オリゴマーは有利には１２〜４部量体の好 ましくはオリゴデオキシヌクレオチドである。１部量体よりも小さいオリゴヌク レオチドも使用しうるか、これらは非標的配列とハイブリダイズする傾向が統計 的に高く、この理由で特異性が低い。さらに、単一のミスマツチはハイブリッド を不安定化させる。４部承体より大きいオリゴヌクレオチドも使用しうるが、そ の吸収はより困難である。さらに、長い配列の部分的整列は非特異的ハイブリッ ド化と非特オチドは１５〜３部量体オリゴデオキシヌクレオチドであり、より有 利には１８〜２部量体である。Key points of the invention The present invention provides methods for treating melanoma. For individuals who require this type of treatment, an effective amount complementary to at least a portion of one or its progeny mRNA transcripts; It has a unique nucleotide sequence. This oligonucleotide binds to the mRNA transcript. Can be bridized. Preferably, the oligonucleotide contains at least one 2m oligonucleotide, i.e. at least 12 nucleotide residues. It is an oligomer having a group. In particular, the oligomer is preferably a 12- to 4-mer oligomer. Preferably, it is an oligodeoxynucleotide. Oligonucleus smaller than monomer Reotides may also be used; their statistical tendency to hybridize to non-target sequences is for this reason, the specificity is low. In addition, a single mismatch is a hybrid destabilizes. Oligonucleotides larger than a four-part structure may also be used; absorption is more difficult. Furthermore, partial alignment of long sequences can lead to non-specific hybridization. The oligodeoxynucleotides and nonspecific oligodeoxynucleotides are 15-trimeric oligodeoxynucleotides, and are more abundant. It is preferably a 18 to 2 parter.

原理的にｃ−ｍｙｂ遺伝子の任意の領域に相補的な配列を有するオリゴヌクレオ チドを本発明に用いうるが、翻訳開始コドンを含むｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡ転写物 の１部に相補的なオリゴデオキシヌクレオチドが特に好適である。さらに、翻訳 開始コドンから約４０ヌクレオチド上流（５′方向）または約４０ヌクレオチド 下流（３′方向）以内に位置するｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡ転写物の１部に対し相補 的なオリゴヌクレオチドも好適である。In principle, an oligonucleotide having a sequence complementary to any region of the c-myb gene c-myb mRNA transcripts containing the translation initiation codon can be used in the present invention. Particularly preferred are oligodeoxynucleotides that are complementary to a portion of. Additionally, translation Approximately 40 nucleotides upstream (5' direction) or approximately 40 nucleotides from the start codon Complementary to part of the c-myb mRNA transcript located downstream (3' direction) Also suitable are oligonucleotides.

さらに本発明は、転移した黒色細胞の骨髄の浄化方法をも提供する。黒色腫罹患 個人から吸引した骨髄を有効量のｃ−ｍｙｂアンチセンスオリゴヌクレオチドで 処置し、次いて処置された細胞を罹患個人の身体に戻す。骨髄浄化技術は、高投 与隈の化学療法の過程と組合せて自己骨髄修復（移植）にも用いることができる 。Additionally, the present invention provides a method for purifying bone marrow of metastatic melanocytes. Melanoma Bone marrow aspirated from an individual is treated with an effective amount of c-myb antisense oligonucleotide. treatment and then returning the treated cells to the body of the affected individual. Bone marrow purification technology is a high It can also be used for autologous bone marrow repair (transplant) in combination with Yokuma's chemotherapy process. .

さらに本発明は、医薬上許容しうるキャリヤとｃ　−ｍｙｂアンチセンスオリゴ ヌクレオチドとからなる黒色腫を処置するための組成物にも関する。Furthermore, the present invention provides pharmaceutically acceptable carriers and c-myb antisense oligos. The present invention also relates to a composition for treating melanoma comprising a nucleotide.

本明細書に使用する場合、特記しない限り、「オリゴヌクレオチドＪと言う用語 はりボヌクレオチドのオリゴマー、すなわちオリゴリボヌクレオチドおよびデオ キシリボヌクレオチドのオリゴマー、すなわちオリゴデオキシリボヌクレオチド （ここでは「オリゴデオキシヌクレオチド」とも称する）の両者を包含する。オ リゴデオキシヌクレオチドが好適である。As used herein, unless otherwise specified, the term "oligonucleotide J" Oligomers of ribonucleotides, i.e. oligoribonucleotides and oligoribonucleotides Oligomers of xyribonucleotides, i.e. oligodeoxyribonucleotides (herein also referred to as "oligodeoxynucleotides"). O Rigodeoxynucleotides are preferred.

ここで用いる場合、特記しない限り、「オリゴヌクレオチド」と言う用語はさら に「ポリヌクレオチド」と称するのに充分な大きさを有するオリゴマーをも包含 する。As used herein, unless otherwise specified, the term "oligonucleotide" It also includes oligomers that are large enough to be called "polynucleotides". do.

［オリゴヌクレオチド」および「オリゴデオキシヌクレオチド」と言う用語は、 一般的な生物学上重要なヌクレオチド、すなわちヌクレオチド・アデニン（ｒＡ Ｊ　’）、デオキシアデニン（ｒｄΔ」）、グアニン（ｒＧＪ　）、デオキシグ アニン（「ｄＧ」）、シトシン（「Ｃ」）、デオキシシトシン（ｒｄｃＪ）、チ ミン（ｒＴＪ）およびウラシル（ｒＵＪ　）のオリゴマーおよびポリマーだけで なく、他のヌクレオチドを含有しうるｃ−ｍｙｂｍＲＮＡ転写物にハイブリダイ ズしうるオリゴマーおよびポリマーをも包含する。同様に、「オリゴヌクレオチ ド」および「オリゴデオキシヌクレオチド」と言う用語は、１種もしくはそれ以 上のプリンもしくはピリミジン部分、糖部分もしくはヌクレオチド間結合が化学 改変されたオリゴマーおよびポリマーをも包含する。「オリゴヌクレオチド」と 言う用語はしたがって、ヌクレオチド間ホスホジエステル結合の改変により「オ リゴヌクレオシド」と称してもよいオリゴマーをも包含すると理解される。The terms "oligonucleotide" and "oligodeoxynucleotide" refer to A common biologically important nucleotide, namely the nucleotide adenine (rA J’), deoxyadenine (rdΔ”), guanine (rGJ), deoxyg anine (“dG”), cytosine (“C”), deoxycytosine (rdcJ), chi Only oligomers and polymers of min (rTJ) and uracil (rUJ) hybridizes to the c-myb mRNA transcript, which may contain other nucleotides. It also includes oligomers and polymers that can be mixed. Similarly, “oligonucleotide The terms "deoxynucleotide" and "oligodeoxynucleotide" refer to one or more The purine or pyrimidine moiety, sugar moiety or internucleotide bond on Also included are modified oligomers and polymers. "oligonucleotide" Therefore, the term ``optional It is understood that oligomers, which may also be referred to as "ligonucleosides", are also included.

この種の改変オリゴヌクレオチドはたとえば下記するメチルホスホネートオリゴ ヌクレオシドを包含する。Modified oligonucleotides of this type include, for example, the methylphosphonate oligonucleotides described below. Includes nucleosides.

［ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド」と言う用語は、ヌクレオチド間結合 の１つもしくはそれ以上が式％式％ のホスホロチオエート基であるオリゴヌクレオチドを意味し、これは未改変オリ ゴヌクレオチドの特徴である式％式％ のホスホジエステル基とは異なる。The term "phosphorothioate oligonucleotide" refers to one or more of the expression % expression % refers to an oligonucleotide with a phosphorothioate group, which refers to an unmodified oligonucleotide. Formula% which is a characteristic of gonucleotides is different from the phosphodiester group of

「メチルホスホレートオリゴヌクレオシド」と言う用語は、ヌクレオチド間結合 の１つもしくはそれ以上がメチルホスホネート基 〜ｏ−ｐ−ｏ〜 　Ｈ３ であるオリゴヌクレオチドを意味する。The term "methylphosphorate oligonucleoside" refers to the internucleotide bond one or more of the methylphosphonate groups ~o-po-o~ H3 means an oligonucleotide that is

ヌクレオチド配列に沿った方向に関して用いる「下流」と言う用語は５’−３’ 方向を意味する。同様に、「上流」と言う用語は３’−５’方向を意味する。The term "downstream" as used with respect to the direction along a nucleotide sequence is 5'-3' means direction. Similarly, the term "upstream" refers to the 3'-5' direction.

明しつる他の任意の転写物を意味する。means any other transcript that is specified.

図面の簡単な説明 第１図はインヒドロでのヒト黒色腫細胞（ＣＩＩ　Ｐ　）に対するｃ−ｍｙｂセ ンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を示すグラフであり、細胞は （ｉ）オリゴマーて処置せず（「比較」）、（ｉｉ）ｃ−ｍｙｂｍＲＮ転写物の 翻訳位置のコドン費２〜７に相補的な１日間体オリゴデオキシヌクレオチドの示 した濃度で処置しく「アンチセンス」）、または（ｉ　ｉ　ｉ）対応のセンス１ 日間体で処置した（「センス」）。Brief description of the drawing Figure 1 shows c-myb activation of human melanoma cells (CIIP) in hydrotherapy. is a graph showing the effect of antisense and antisense oligonucleotides on cells. (i) no oligomer treatment (“comparison”), (ii) c-myb mRNA transcript Indication of one-day body oligodeoxynucleotides complementary to codon cost 2-7 of translation position. ``antisense'') or (ii) the corresponding sense 1 Treated in the body for days ("Sense").

第２図は第１図と同様であるが、ただしオリゴヌクレオチド処置を２日間に延長 した。オリゴヌクレオチド濃度は２日間の処置期間にわたる積算である。Figure 2 is similar to Figure 1, but oligonucleotide treatment is extended to 2 days. did. Oligonucleotide concentrations are integrated over the 2-day treatment period.

第３図は第２図と同様であるが、ただし処置は連続５日間に延長した。オリゴヌ クレオチド濃度は積算である。Figure 3 is similar to Figure 2, except that the treatment was extended to 5 consecutive days. origone Creotide concentration is cumulative.

第４図は第１図と同様であるが、ただし他のヒト黒色腫細胞ライン（ＳＫ　ＭＥ Ｌ−３７）をＣＨＰ細胞の代わりに用いた。Figure 4 is similar to Figure 1, except that other human melanoma cell lines (SKME L-37) was used instead of CHP cells.

第５図は、重大な合併免疫不全症マウスに移植したヒト黒色Ｎ（ＳＫ　ＭＥＬ− ３７）細胞の生長に対すルｃ−ｍｙｂセンスおよびアンチセンスオリゴマーの効 果を示すプロットである。マウスは７日間にわたり（ｉ）　ｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮ Ａ転写物の翻訳部分のコドン２〜９に相補的な２４量体ホスホロチオエートオリ ゴデオキシヌクレオチド（「アンチセンス」；マウス２匹）、（ｉｉ）対応のセ ンス２４量体ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（「センス」；マ ウス１匹）、または（ｉ　ｉ　ｉ）オリゴマーなしく・「比較」　；マウス１匹 ）を毎日１００μｇ摂取した。Figure 5 shows human black N (SKMEL-) transplanted into mice with severe combined immunodeficiency. 37) Effect of luc-myb sense and antisense oligomers on cell growth This is a plot showing the results. For 7 days, mice (i) c-myb mRNA A 24-mer phosphorothioate oligonucleotide complementary to codons 2-9 of the translated portion of the A transcript. Godeoxynucleotide (“antisense”; 2 mice), (ii) corresponding serum sense 24-mer phosphorothioate oligodeoxynucleotide (“sense”; (1 mouse) or (ii) without oligomer/“comparison”; 1 mouse ) was taken daily at 100 μg.

殖に重要であることが突き止められた。細胞増殖におけるこのプロトオンコジー ンの役割は、従来考えられたような造血源の細胞に限定されない。上皮の腫瘍形 成細胞は従来考えられたよりも大である。It was determined that it is important for reproduction. This proto-oncology in cell proliferation The role of these cells is not limited to cells of hematopoietic origin, as previously thought. epithelial tumor form Adult cells are larger than previously thought.

ヒトｃ−ｍｙｂ遺伝子のｍＲＮＡ転写物に対し相補的な推定ＤＮＡ配列はマジュ ロ等、プロシーディング・ナショナル・アカデミ−・サイエンス、ＵＳＡ、第８ ３巻、第９６３６〜９６４０頁（１９８６）に報告されている。The deduced DNA sequence complementary to the mRNA transcript of the human c-myb gene is B et al., Proceedings National Academy of Sciences, USA, No. 8 3, pp. 9636-9640 (1986).

さらにマジュロ等は、推定ｃ−ｍｙｂ蛋白質の予想される６４０アミノ酸配列を 開示している。開始コドンＡＴＧが位置１１４に存在し、その前に５′　−未翻 訳領域が存在する。位置２０３４における停止コドンＴＧＡに続き約１２００ヌ クレオチドの間隔て３′−未翻訳領域が存在し、その後に約１４０ヌクレオチド のポリ（Ａ）末端が続く。Furthermore, Majuro et al. Disclosed. The initiation codon ATG is present at position 114, preceded by a 5'-untranslated There is a translation area. Approximately 1200 nucleotides following the stop codon TGA at position 2034 There is a 3'-untranslated region spaced between cleotides followed by approximately 140 nucleotides. followed by a poly(A) terminus.

本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、任意公知の化学的オリゴヌクレオ チド合成法により合成することができる。この種の方法は一般に、たとえばウィ ンナツカ−１「遺伝子からクローンまで：遺伝子工学の序論」、■ＣＨフエアラ ークスゲゼルシャフトｍｂＨ社（アイベルガラフッ・トランスレーション、１． ９８７）に記載されている。アンチセンスオリゴヌクレオチドは最も有利には、 任意の市販自動化核酸合成装置を用いて作成される。この種の１つの装置、すな わちアプライド・バイオシステムス３８０Ｂ型　ＤＮＡ合成装置はβ−シアノエ チルホスホルアミダイト化学を用いる。The antisense oligonucleotides of the present invention may be any known chemical oligonucleotide. It can be synthesized by the tide synthesis method. This kind of method is generally used for example Nnatuka-1 “From genes to clones: Introduction to genetic engineering”, ■CH Fuera Eibergarach Translation, 1. 987). Antisense oligonucleotides are most advantageously Created using any commercially available automated nucleic acid synthesizer. One device of this kind, The Applied Biosystems 380B DNA synthesizer is β-cyanoe. Using tylphosphoramidite chemistry.

ｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡ転写物に対し相補的なりＮＡの完全ヌクレオチド合成は公 知であるのて、ｍＲＮＡ転写物の任意の部分に対しハイブリダイズしうるアンチ センスオリゴヌクレオチドは当業者に公知のオリゴヌクレオチド合成法により作 成することができる。The complete nucleotide synthesis of NA complementary to the c-myb mRNA transcript is not publicly available. Since it is known that antibodies that can hybridize to any part of the mRNA transcript Sense oligonucleotides are produced by oligonucleotide synthesis methods known to those skilled in the art. can be achieved.

任意長さのオリゴヌクレオチドを本発明の実施に用いうるが、１２塩基よりも短 い配列は標的ｃ−ｍｙｂｍＲＮＡに対しハイブリダイズする特異性が低く、酵素 切断によって容易に破壊され、さらに酵素切断によって不安定化されうる。した がって、１２もしくはそれ以上のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチドが好 適である。Although oligonucleotides of any length can be used in the practice of the invention, oligonucleotides shorter than 12 bases A dark sequence has low specificity for hybridizing to the target c-myb mRNA, and the enzyme It is easily destroyed by cleavage and can be further destabilized by enzymatic cleavage. did Therefore, oligonucleotides with 12 or more nucleotides are preferred. suitable.

長い配列、特に約４０ヌクレオチドよりも長い配列は、標的細胞による吸収が低 下するためｃ−ｍｙｂ翻訳の抑制において若干効果が低い。したがって１２〜４ ０ヌクレオチドのオリゴマーが好適であり、より好ましくは１５〜３０ヌクレオ チド、特に好ましくは１８〜２６ヌクレオチドである。未改変オリゴヌクレオチ ドについては１８〜２１ヌクレオチドの配列が最も好適であるが、改変オリゴヌ クレオチド（たとえばホスホロチオエートオリゴヌクレオチド）については約２ ６ヌクレオチドまでの若干長い連鎖が好適であり、未改変オリゴヌクレオチドよ りも低い強さてｍＲＮＡにハイブリダイズする。Long sequences, especially sequences longer than about 40 nucleotides, have low uptake by target cells. It is slightly less effective in suppressing c-myb translation. Therefore 12-4 Oligomers of 0 nucleotides are preferred, more preferably 15-30 nucleotides. nucleotides, particularly preferably 18 to 26 nucleotides. Unmodified oligonucleotide Sequences of 18 to 21 nucleotides are most preferred for oligonucleotides, but For cleotides (e.g. phosphorothioate oligonucleotides) about 2 Slightly longer chains of up to 6 nucleotides are preferred and are less likely than unmodified oligonucleotides. It also hybridizes to mRNA with low intensity.

ｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡ転写物の任意の部分に対し相補的かつハイブリダイズしう るオリゴヌクレオチドは、原理的に転写物の翻訳抑制に有効であると共にここに 記載した作用を誘発することができる。翻訳は開始コドンの部位またはそれに近 い部位にてｍＲＮＡを封鎖することにより最も効果的に抑制されると思われる。Complementary and hybridizable to any part of the c-myb mRNA transcript In principle, these oligonucleotides are effective in suppressing the translation of transcripts, and The described effects can be induced. Translation begins at or near the start codon. It is thought that the most effective suppression is achieved by blocking the mRNA at the desired site.

したがって、ｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡ転写物の５′−末端領域に対し相補的なオリ ゴヌクレオチドが好適である。ハイブリッド化を妨げるような二次もしくは三次 構造はこの領域にて最小であると思われる。さらに、開始部位から３′方向にて 離れ過ぎる配列は「リードスルー」現象のためｍＲＮＡ転写物のハイブリッド化 において効果が低いことも示唆されており、したがってリボリゾームはアンチセ ンス／センスデユープレックスを解きほぐしてメツセージの翻訳を可能にすると 思われる［たとえばシェーキン、ジャーナル・バイオケミストリー、第２６１巻 、第１６０１８頁（１９８６）参照］。Therefore, an origin complementary to the 5'-terminal region of the c-myb mRNA transcript Gonucleotides are preferred. Secondary or tertiary that impedes hybridization Structure appears to be minimal in this region. Furthermore, in the 3′ direction from the starting site Sequences that are too far apart may cause hybridization of mRNA transcripts due to the “read-through” phenomenon. It has also been suggested that ribosomes are less effective in Unraveling the sense/sense duplex to enable message translation [For example, Shakin, Journal Biochemistry, Vol. 261] , p. 16018 (1986)].

好ましくはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、蛋白質合成のための開始コドン の部位またはその近くに指向する。開始コドン（完全転写物のヌクレオチド１１ ４〜対し相補的なオリゴヌクレオチドが好適である。Preferably the antisense oligonucleotide targets the initiation codon for protein synthesis. Directed at or near the area of Start codon (nucleotide 11 of complete transcript) Oligonucleotides complementary to 4~ are preferred.

ｃ−ｍｙｂ転写物の５′−末端領域、特に開始コドンを含む領域に対し相補的な アンチセンスオリゴマーが好適であるが、有用なアンチセンスオリゴマーはｍＲ ＮＡの翻訳部分（ヌクレオチド１１４〜２０３１）に存在する配列に対し相補的 なものに限定されず、５′−および３′　−未翻訳領域に含まれ或いはそこまで 延びるヌクレオチド配列に対し相補的なオリゴマーをも包含する。相ると思われ る。complementary to the 5'-terminal region of the c-myb transcript, particularly the region containing the initiation codon. Although antisense oligomers are preferred, useful antisense oligomers include mR Complementary to the sequence present in the translated portion of NA (nucleotides 114-2031) including, but not limited to, the 5′- and 3′-untranslated regions or extending thereto. Also included are oligomers that are complementary to the extending nucleotide sequence. Seems to be compatible Ru.

転写物の５′−未翻訳領域に対し相補的な好適オリゴヌクレオチドは、キャップ ヌクレオチド（すなわち転写物の５′−最末端におけるヌクレオチド）を含むＣ −ｍｙｂｍＲＮＡ転写物の１部に対し相補的なヌクレオチド配列を有する分子を 包含する。モレキュラ・クローニング、第２版［サムプルツク等編（１９８９） 、第７゜６６〜７．７０頁、参考のためここに引用する］の３１ヌクレア一ゼ分 析法に実質的にシタ力ってｃ　−ｍ　ｙ　ｂ−キャップ部位の位置を決定し、そ の際高レベルのｃ−ｍｙＥＭから分離されたｍＲＮＡを用いた。最長の明瞭に見 えるバンドが、公表されたｃ−ｍｙｂ　ｃＤＮＡの９０塩基対上流に位置し［マ ジュロ等、プロシーディング・ナショナＪし・アカデミ−・サイエンス、ＵＳＡ 、第８３巻、第９５３６〜９６４０頁（１９８６）］、推定の原則キャップ部位 を示す。この部位の位置は、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞からクローン化されたｃ−ｍ ｙｂ　ｃＤＮＡの長さと完全に一致する［クラーケ等、モレキュラ・セルラー・ バイオロジー、第８巻、第８８４〜８９２頁（１９８８）］。さらにＳ１保護分 析は、キャップ部位に対応する主バンドの他に薄いバンドをも示した。これらの 他のバンドは希な或いは不安定なｃ−ｍｙｂｍＲＮＡ転写物を示しつる。転写開 始の複数部位は、たとえば完全ＴＡＴＡＡ枠を欠如するｃ−ｍｙｂのような遺伝 子において希でない。キャップヌクレオチドで始まるｍＲＮＡ転写物５′−末端 のヌクレオチド配列は容易に確認することができ、これに対し相補的かつノーイ ブリダイズしうるアンチセンスオリゴヌクレオチドを作成することができる。Preferred oligonucleotides complementary to the 5'-untranslated region of the transcript include cap C containing nucleotides (i.e. the nucleotides at the 5'-most end of the transcript) - a molecule with a nucleotide sequence complementary to a portion of the myb mRNA transcript; include. Molecular Cloning, 2nd edition [edited by Samprutsuk et al. (1989)] , pp. 7゜66-7.70, cited here for reference], 31 nucleases Determine the position of the c-m-y-b-cap region by applying substantial force to the analysis method, and mRNA isolated from high levels of c-myEM was used. longest clear view The band that appears is located 90 base pairs upstream of the published c-myb cDNA [map Juro et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, USA. , Vol. 83, pp. 9536-9640 (1986)], Principles of Estimation of Cap Site shows. The location of this site was determined by c-m cloned from CCRF-CEM cells. yb completely matches the length of cDNA [Clarke et al., Molecular Cellular Biology, Vol. 8, pp. 884-892 (1988)]. In addition, S1 protection The analysis also showed a thin band in addition to the main band corresponding to the cap site. these Other bands indicate rare or unstable c-myb mRNA transcripts. transcription opening The first multiple sites are found in genes such as c-myb, which lacks a complete TATAA frame. Not rare in children. 5'-end of mRNA transcript starting with cap nucleotide The nucleotide sequence of Antisense oligonucleotides can be created that can hybridize.

以下の４０量体オリゴデオキシヌクレオチドは、転写物の開始コドンから始まっ てその下流（３′方向）に延びるｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡ転写物に対し相補的であ るＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｉ。The following 40-mer oligodeoxynucleotides begin at the start codon of the transcript. is complementary to the c-myb mRNA transcript extending downstream (in the 3' direction). SEQ ID NO:I.

上記配列に基づく小さいオリゴマー（特に開始コドンを有するｃ−ｍｙｂメツセ ージのセグメントに対しハイブリダイズしうるオリゴマー）を用いることができ る。Small oligomers based on the above sequences (especially c-myb oligomers with start codons) oligomers that can hybridize to the segment of the page. Ru.

次の２６〜１５全体が特に好適である・ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３、 ＳＥＱ　ＴＤ　ＮＯ：４、 ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・５、 ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・６、 ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１Ｏ１ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：］Ｉ、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：］２および ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・１３゜ 転写物の翻訳部分（完全転写物のヌクレオチド１１７〜１１９）の第２コドンて 始まるｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡ転写物に対し相捕的なオリゴデオキシヌクレオチド が他の好適オリゴマー群である。この種のオリゴマーはたとえば次の２６〜１５ １を体を包含する：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：ｉ４、 ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・１５、 ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・１６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８　、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９　、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２’０１ ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１　、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２、 ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ　・　２３、 ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・２４および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５゜ 用いるオリゴヌクレオチドは未改変オリゴヌクレオチドまたは改変オリゴヌクレ オチドを示すことができる。The following 26 to 15 as a whole are particularly suitable SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ TD NO: 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO+9, SEQ ID NO: 1O1 SEQ ID NO:]I, SEQ ID NO:]2 and SEQ ID No. 13゜ The second codon of the translated portion of the transcript (nucleotides 117-119 of the complete transcript) Complementary oligodeoxynucleotides to the starting c-myb mRNA transcript are other preferred oligomer groups. Examples of this type of oligomer are the following 26-15 1 including the body: SEQ ID NO: i4, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:2’01 SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID No. 23, SEQ ID No. 24 and SEQ ID NO: 25゜ The oligonucleotides used may be unmodified or modified. Can show the punch line.

すなわち、本発明による用途を有するｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡ転写物に対しハイブ リダイズしうるオリゴヌクレオチドは生物学上重要な天然ヌクレオチド、すなわ ちＡｌｄＡ、Ｇ、ｄＧ、Ｃ，ｄＣＳＴおよびＵのオリゴマーだけてなく、向上し た安定性および／または脂質可溶性につき改変されたオリゴヌクレオチド種類を も包含する。That is, hybridization for c-myb mRNA transcripts that have uses according to the present invention. Redizable oligonucleotides are biologically important natural nucleotides, i.e. AldA, G, dG, C, dCST and U oligomers as well as improved oligonucleotide types modified for stability and/or lipid solubility. Also includes.

たとえば、向上した脂質可溶性および／またはヌクレアーゼ切断に対する耐性は 、ヌクレオチド間ホスホジエステル結合におけるホスフェート酸素の代わりにア ルキル基もしくはアルコキシ基を用いてアルキルホスホネートオリゴヌクレオシ ドもしくはアルキルホスホトリエステルオリゴヌクレオチドを生成させることに より生ずることが知られている。たとえば、これらの非イオン型オリゴヌクレオ チドはヌクレアーゼ加水分解に対する向上した耐性および／または向上した細胞 吸収を特徴とすると共に、相補的核酸配列との安定な複合体を形成する能力を保 持する。特にアルキルホスホネートはヌクレアーゼ切断に対し安定であり、かつ 脂質に可溶性である。アルキルホスホネートオリゴヌクレオシドの製造について は米国特許第４，４６９，８６３号公報に開示されている。For example, improved lipid solubility and/or resistance to nuclease cleavage , a substitute for the phosphate oxygen in the internucleotide phosphodiester bond. Alkylphosphonate oligonucleosylation using alkyl or alkoxy groups In order to generate oligonucleotides or alkyl phosphotriester oligonucleotides, It is known that this occurs more frequently. For example, these nonionic oligonucleotides improved resistance to nuclease hydrolysis and/or increased cellular resistance to nuclease hydrolysis. characterized by absorption and retains the ability to form stable complexes with complementary nucleic acid sequences. hold In particular, alkylphosphonates are stable against nuclease cleavage and Soluble in lipids. About the production of alkylphosphonate oligonucleosides is disclosed in US Pat. No. 4,469,863.

メチルホスホネートオリゴマーは、溶液中および不溶性ポリマー支持体上の両者 にて各種の方法により作成することができる［アグローワルおよびリフチナ、ヌ クレイツク・アシッズ・リサーチ、第６巻、第３００９〜３０２４頁（１９７９ ）；ミラー等、バイオケミストリー、第１８巻、第５１３４〜５１４２頁（１， ９７９）、ミラー等、ジャーナル・バイオロジカル・ケミストリー、第２５５巻 、第９６５９〜９６６５頁（１９８０）；ミラー等、ヌクレイツク・アシッズ・ リサーチ、第１１巻、第５１８９〜５２０４頁（１９８３）、ミラー等、ヌクレ イツク・アシソズ・リサーチ、第１１巻、第６２２５〜６２４２頁（１，９８３ ）、ミラー等、バイオケミストリー、第２５巻、第５０９２〜５０９７頁（１９ ８６）；エンゲルスおよびジャガー、アンゲバンテ・ヘミ−・サブルメント、第 ９１２頁（１９８２）；シン７１等、テトラヘドロン・レタース、第２４巻、第 ８７７〜８８０頁（１９８３）；　トルマン等、テトラヘドロン、第４０巻、第 ９５〜１．０２頁（１９８４）：シャガーおよびエンゲルス、テトラヘドロン・ レタース、第２５巻、第１４３７〜１４４０頁（１９８４）：ノープル等、ヌク レイツク・アシッズ・リサーチ、第１２巻、第３３８７〜３４０４頁（１９８４ ）；キャラハン等、プロシーディング・ナショナル・アカデミ−・サイエンス、 ＵＳＡ、第８３巻、第１６１７〜１６２１頁（１９８６）；コジオルキエウィッ ツ等、ケミ力・スクリブタ、第２６巻、第２５１〜２６０頁（１９８６）　ニア グローワルおよびグ・ソトチャイルド、テトラヘドロン・レタース、第３８巻、 第３５３９〜３５４２頁（１，９８７）、レスニコウスキー等、テトラヘドロン ・レタース、第２８巻、第５５３５〜５５３８頁（１９８７）；サリン等、プロ シーディング・ナショナル・アカデミ−・サイエンス、ＵＳＡ。Methylphosphonate oligomers can be produced both in solution and on an insoluble polymer support. can be created by various methods [Agrawal and Liftina, Kraitsk Acids Research, Vol. 6, pp. 3009-3024 (1979) ); Miller et al., Biochemistry, Vol. 18, pp. 5134-5142 (1, 979), Miller et al., Journal Biological Chemistry, Vol. 255 , pp. 9659-9665 (1980); Miller et al. Research, Vol. 11, pp. 5189-5204 (1983), Miller et al., Nucle. Itsuk Assos Research, Vol. 11, pp. 6225-6242 (1,983 ), Miller et al., Biochemistry, Vol. 25, pp. 5092-5097 (19 86); Engels and Jaeger, Angewante hemi-sublument, no. 912 pages (1982); Shin 71 et al., Tetrahedron Letters, Vol. 24, No. pp. 877-880 (1983); Tolman et al., Tetrahedron, Vol. 40, No. pp. 95-1.02 (1984): Schagger and Engels, Tetrahedron. Letters, Vol. 25, pp. 1437-1440 (1984): Nople et al., Nuku. Reitzk Acids Research, Vol. 12, pp. 3387-3404 (1984) ); Callahan et al., Proceedings National Academy of Sciences; USA, Vol. 83, pp. 1617-1621 (1986); Tsu et al., Chemi-Riki Scribta, Vol. 26, pp. 251-260 (1986) Near Growal and Gu Sotchild, Tetrahedron Letters, Volume 38, pp. 3539-3542 (1,987), Lesnikowski et al., Tetrahedron ・Letters, Vol. 28, pp. 5535-5538 (1987); Sarin et al., Pro. Seeding National Academy of Sciences, USA.

第８５巻、第７４４８〜７４５１頁（１９８８）］。Vol. 85, pp. 7448-7451 (1988)].

メチルホスホネートオリゴヌクレオシドの最も効率的な製造方法は、オリゴチオ キシリホヌクレオチドを作成するために使用されるメトキンもしくはβ−シアノ エチルホスホルアミダイト試薬と同様である５′　−〇−ジメトキシトリチルチ オキンヌクレオシド−３′　−〇−ジイソプロピルメチルホスホルアミダイト中 間体の使用を含む。メチルホスホネートオリゴマーは、自動化ＤＮＡ合成装置を 用い調節気孔のガラスポリマー支持体にて作成することができる［サリン等、プ ロシーディング・ナショナル・アカデミ−・サイエンス、ＵＳＡ、第８５巻、第 ７４４８〜７４５１頁（１９８８）］。The most efficient method for producing methylphosphonate oligonucleosides is Metquin or β-cyano used to make xyliphonucleotides 5'-　-　-dimethoxytritylthi, which is similar to the ethylphosphoramidite reagent. Oquine nucleoside-3'-　-　-diisopropylmethylphosphoramidite Including the use of interbody. Methylphosphonate oligomers can be used in automated DNA synthesis equipment. can be made from glass polymer supports with controlled porosity [Sarin, etc.] Rossing National Academy of Sciences, USA, Volume 85, No. 7448-7451 (1988)].

さらに、ヌクレアーゼ切断に対する耐性も５′末端と３′末端との両者における ヌクレオチド間結合をダグル等の方法［ヌクレイツク・アシッズ・リサーチ、第 １８巻、第４７５１〜４７５７頁（１９９０）］に従いホスホロアミダイトで改 変して達成することができる。Furthermore, resistance to nuclease cleavage is also present at both the 5' and 3' ends. Internucleotide bonds were determined by the method of Dagle et al. 18, pp. 4751-4757 (1990)]. can be achieved by changing.

ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド間ホスホジエステル結 合に硫黄と酸素との置換を有する。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、 デユープレックス形成のための効果的ハイブリッド化の性質と実質的なヌクレア ーゼ耐性とを兼備すると共に帯電したホスフェート同族体の水溶性を保持する。Phosphorothioate oligonucleotides contain internucleotide phosphodiester bonds. In some cases, there is a substitution of sulfur and oxygen. Phosphorothioate oligonucleotides are Effective hybridization properties and substantial nuclei for duplex formation It has both anti-seizure resistance and water solubility of charged phosphate congeners.

帯電は、リセプタを介する細胞吸収の性質を付与すると思われる［ローフ等、プ ロシーディング・ナショナル・アカデミ−・サイエンス、ＵＳＡ、第８６巻、第 ３４７４〜３４７８頁（１９８９）］。Electrostatic charges appear to confer receptor-mediated cellular absorption properties [Roaf et al. Rossing National Academy of Sciences, USA, Volume 86, No. 3474-3478 (1989)].

ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドはラプランシエ等、ヌクレイツ ク・アシッズ・リサーチ、第１４巻、第９０８１頁（１９８６）およびステック 等、ジャーナル・アメリカン・ケミカル・ソサエティ、第１０６巻、第６０７７ 頁（１９８４）に記載されている。Phosphorothioate oligodeoxynucleotides are manufactured by Laplancier et al. Qu Acids Research, Vol. 14, p. 9081 (1986) and Steck. et al., Journal of the American Chemical Society, Volume 106, No. 6077. (1984).

ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの一般的合成法はスタイン等［ヌクレイ ツク・アシッズ・リサーチ、第１６巻、第３２０９〜３２２１頁（１９８８）コ により改変されて、これら化合物をホスホロアミタイト手法により自動合成装置 で容易に合成しうるようにした。A general method for the synthesis of phosphorothioate oligonucleotides is described by Stein et al. Tsuku Acids Research, Vol. 16, pp. 3209-3221 (1988) These compounds were synthesized by automated synthesis equipment using the phosphoroamitite method. made it easy to synthesize.

さらに、オリゴリボヌクレオチド同族体の製造における最近の進歩は、上記目的 で他の試薬、たとえば２′−０−メチルリボヌクレオチド［イノラブ等、ヌクレ イツク・アシッズ・リサーチ、第１５巻、第６１３１頁（１９８７）］および複 合ＲＮＡ−ＤＮＡ同族体であるキメラオリゴヌクレオチド［イノラブ等、ＦＥＢ Ｓレタース、第２１５巻、第３２７頁（１９８７）］をも使用しうろことを意味 する。Furthermore, recent advances in the production of oligoribonucleotide analogues have enabled the above-mentioned purposes. and other reagents, such as 2'-0-methylribonucleotides [Inolab et al. Ituku Acids Research, Vol. 15, p. 6131 (1987)] and Chimeric oligonucleotides that are synthetic RNA-DNA homologs [Inolab et al., FEB S Letters, Vol. 215, p. 327 (1987)] is also used to mean scales. do.

ｃ−町りよｍ　ＲＮ　Ａ翻訳の抑制はアンチセンスオリゴリボヌクレオチドもし くはオリゴデオキシリボヌクレオチドのいずれを用いても可能であるが、遊離オ リゴリボヌクレオチドはオリゴデオキシリボヌクレオチドよりもリボヌクレアー ゼによる酵素攻撃に対し感受性が大である。したがって、本発明の実施にはオリ ゴデオキシリボヌクレオチドが好適である。オリゴデオキシリボヌクレオチドは 、ｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡとのハイブリッド化に際し得られるＤＮＡ−ＲＮＡハイ ブリッドデユーブレックスがＲＮアーゼＨ（これはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド のＲＮＡ部分を特異的に攻撃する）の基質であるため一層好適である。デユープ レックスのｍＲＮＡストランドの減成は、他のｃ−ｍｙｂメツセージとのハイブ リッド化に関しアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドストランドを遊離する 。c-Machi Riyom RN A translation may be suppressed by antisense oligoribonucleotides. Although it is possible to use either oligodeoxyribonucleotides or oligodeoxyribonucleotides, it is possible to Rigoribonucleotides are more ribonucleans than oligodeoxyribonucleotides. It is highly susceptible to enzymatic attack by enzymes. Therefore, the practice of the present invention requires Godeoxyribonucleotides are preferred. Oligodeoxyribonucleotides are , DNA-RNA hybridization obtained during hybridization with c-myb mRNA Hybrid duplex is RNase H (this is a DNA-RNA hybrid) It is more suitable because it is a substrate for (specifically attacks the RNA portion of). Deupe Degradation of the Rex mRNA strand results in hives with other c-myb messages. Releases antisense oligodeoxynucleotide strands for lidding .

一般に本発明の方法に用いるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｃ　−ｍ　シ 顎メツセージの標的部分に対し完全に相補的な配列を有する。しかしながら、特 に大型オリゴマーでは絶対的相補性を必要としない。したがって、ｃ−ｍｙｂ（ ７）ｒｍＲＮＡ転写物の少なくとも１部に対し相補的なヌクレオチド配列」と言 う表現は、必ずしも転写物に対し１００％の相補性を有する配列を意味しない。Generally, the antisense oligonucleotide used in the method of the present invention is a c-m sequence. It has a sequence that is completely complementary to the target portion of the jaw message. However, especially Absolute complementarity is not required for large oligomers. Therefore, c-myb( 7) a nucleotide sequence complementary to at least a portion of the rmRNA transcript. The expression does not necessarily imply a sequence with 100% complementarity to the transcript.

一般に、ｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡとの安定なデユープレックスを形成するのに充分 な相補性を有するオリゴヌクレオチドが適している。安定な゛デユープレックス 形成は、ハイブリッド化するオリゴヌクレオチドの配列および長さ並びにｃ−ｍ ｙｂメツセージの標的領域に対する相補性の程度に依存する。一般に、ノ飄イブ リ・ソト化するオリゴマーが大きい程、より大きいミスマ・ソチを許容すること ができる。２個以上のミスマツチは恐らく約２１ヌクレオチド未満のアンチセン スオリゴマーについては許容されない。当業者は、任意所定のアンチセンスオリ ゴマーと標的ｃ−ｍｙｂメツセージ配列との間で許容しうるミスマツチの程度を 融点に基づき（し７たがって得られるデユープレックスの安定性に基づき）容易 に決定することができる。所定塩基対の組成を有するデユーブレ・ソクスの融点 は標準的文献［たとえばモレキュラ・クローニング、ラボラトリ−・マニューア ル（第２版、１９８９）、Ｊ、サムプルツク等編］から容易に決定することがて しうるオリゴヌクレオチドが本発明の範囲内であるが、開始コドンを含む領域に 対し相補的なオリゴヌクレオチドが特に効果的であると思われる。開始コドンの ４０ヌクレオチド上流（５′方向）まで或いは開始コドンの４０ヌクレオチド下 流（３′方向）までのｃ−ｍｙｂｍＲＮＡの領域に対しハイブリダイズしうるオ リゴヌクレオチドが特に好適である。generally sufficient to form a stable duplex with c-myb mRNA. Oligonucleotides with high complementarity are suitable. stable duplex Formation depends on the sequence and length of the hybridizing oligonucleotide and the c-m It depends on the degree of complementarity of the yb message to the target region. In general, Note Eve The larger the oligomer that undergoes re-soto, the larger the misma-sochi is tolerated. Can be done. Two or more mismatches probably result in an antisense of less than about 21 nucleotides. It is not allowed for oligomers. Those skilled in the art will recognize any given antisense origin. The degree of mismatch that can be tolerated between the target c-myb message sequence and the target c-myb message sequence Based on the melting point (and therefore the stability of the resulting duplex) can be determined. Melting point of Deubre Socs with a given base pair composition standard literature [e.g. molecular cloning, laboratory manuals] (2nd ed., 1989), edited by Sampurczuk et al.]. Within the scope of the invention are oligonucleotides that can Oligonucleotides that are complementary to this appear to be particularly effective. start codon Up to 40 nucleotides upstream (5' direction) or 40 nucleotides below the start codon Oxygen that can hybridize to the region of c-myb mRNA up to the stream (3' direction) Particularly preferred are oligonucleotides.

治療用途には、アンチセンスオリゴヌクレオチドをたとえば適する液体ビークル もしくは賦形薬のような医薬キャリヤおよび適宜の補助添加剤と組合せることが できる。液体ビークルおよび賦形薬は慣用のものであって、市販されている。そ の例は蒸留水、生理食塩水、デキストロース水溶液なとである。ｃ−ｍｙｂ　ｍ ＲＮＡアンチセンスオリゴヌクレオチドは好ましくは非経［１的、特に好ましく は静脈内に投与される。それに応じてビークルか設計される。或いは、オリゴヌ クレオチドは調節放出投与形態物を介し皮下投与することもできる。For therapeutic applications, antisense oligonucleotides may be packaged, e.g., in a suitable liquid vehicle. or in combination with pharmaceutical carriers such as excipients and appropriate auxiliary additives. can. Liquid vehicles and excipients are conventional and commercially available. So Examples are distilled water, saline, and dextrose solutions. c-myb m RNA antisense oligonucleotides are preferably parenteral [1, particularly preferably is administered intravenously. The vehicle is designed accordingly. Or Origonu Creotide can also be administered subcutaneously via modified release dosage forms.

オリゴヌクレオチドは細胞浸透性を増大させるためポリ　（Ｌ−リジン）に結合 させることができる。この種の結合体はレマトワ等、プロシーディング・ナショ ナル・アカデミ−・サイエンス、ＵＳＡ、第８４巻、第６４８〜６５２頁（１９ ８７）に記載されている。この方法は、３′　−末端ヌクレオチドがりボヌクレ オチドであることを必要とする。生じたアルデヒド基を次いてポリ（Ｌ−リジン ）のりジン残基におけるε−アミノ基に対しシッフ塩基生成によりランダム結合 させ、次いてシアノ硼水素化ナトリウムで還元する。この方法は、３′　−末端 リボース環をモルホリン構造のアンチセンスオリゴマーに変換させる。Oligonucleotides are conjugated to poly(L-lysine) to increase cell permeability can be done. This type of conjugate is described in Lematowa et al. Null Academy Science, USA, Vol. 84, pp. 648-652 (19 87). This method uses a 3′-terminal nucleotide It needs to be a punch line. The resulting aldehyde group is then converted into poly(L-lysine) ) Random bonding to the ε-amino group in the Norizine residue by Schiff base generation and then reduced with sodium cyanoborohydride. This method uses the 3'-terminal The ribose ring is converted into an antisense oligomer with a morpholine structure.

慣用のキャリヤによる投与の他に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは各種の特 殊なオリゴヌクレオチド供給技術によって投与することもできる。たとえば、オ リゴヌクレオチドを治療的供給のためカプセル化することもてきる。オリゴヌク レオチドはその溶解度に応じ水層および脂質層の両者に存在させることができ、 或いは一般にリポソーム懸濁物と称するものに存在させることもできる。疎水性 層は一般に、■定はしないがたとえばレシチンおよびスフィンゴミエリンのよう な燐脂質：たとえばコレステロールのようなステロイド：たとえばジアセチルホ スフェート、ステアリルアミンもしくはホスファチジン酸のようなイオン性表面 活性剤；および／または疎水性を有する他の物質を包含する。オリゴヌクレオチ ドはユニラメラリポソームにカプセル化することに成功している。In addition to administration through conventional carriers, antisense oligonucleotides can be Administration can also be by special oligonucleotide delivery techniques. For example, Ligonucleotides can also be encapsulated for therapeutic delivery. Oligonuku Reotide can be present in both the aqueous layer and the lipid layer depending on its solubility. Alternatively, they may be present in what is commonly referred to as a liposome suspension. hydrophobic The layer generally contains, but is not limited to, lecithin and sphingomyelin. Phospholipids: for example cholesterol Steroids: for example diacetyl phosphatide Ionic surfaces such as sphate, stearylamine or phosphatidic acid active agents; and/or other substances with hydrophobic properties. oligonucleotide has been successfully encapsulated in unilamellar liposomes.

再編成されたセンダイ・ウィルス・エンベロツブを用いて、ＲＮＡおよびＤＮＡ を細胞に供給することに成功している［アラド等、バイオケミカル・バイオフィ ジカル・アクタ、第８５９巻、第８８〜９４頁（１９８６）］に主療法として投 与することができる。或いはオリゴヌクレオチドは、病気を持たないが再発の高 い危険性を有する患者に対し黒色腫の手術除去の後に補助手段とじて投与するこ ともてきる。RNA and DNA using reassembled Sendai virus envelopes have been successfully supplied to cells [Arad et al. 859, pp. 88-94 (1986)] as the main therapy. can be given. Alternatively, oligonucleotides may be used to treat patients who do not have the disease but have a high recurrence rate. It may be given as an adjunctive measure after surgical removal of melanoma in patients at high risk. It comes with me.

黒色腫を処置するためのオリゴヌクレオチドの好適投与方法は必要に応し局部的 または全身性の潅流のいずれかとすることができる。局部的潅流法によれば、病 巣を有する領域に供給する輸入管および輸出管を分離すると共に、オキシジェネ ータおよび熱交換器と連続して低流量の潅流ポンプに接続する。腸骨血管により 下（ＩＩＩ　ｆ＋頁域に潅流可能である・上側部病巣に対して番士腋下血ＩＢＨ ｔ＝ヨリ腋下の高位置で潅流する。オリゴヌクレオチドを潅流回、路に添加し、 潅流を適する時間（たとえば１時間）にわたり持続する。１００〜１５０ｍ１／ ｍｉｎの潅流速度を下側領域病巣につき用いる一方、その半分の速度を上側領域 病巣につき用いることができる。全身性のヘパリン処理を潅流の間に用い、潅流 が完了した後に逆転させる。A preferred method of administering oligonucleotides to treat melanoma is localized administration as needed. or systemic perfusion. According to local perfusion method, disease Separate the import and export pipes that supply the area with the nest, and connected to a low flow perfusion pump in series with the water heater and heat exchanger. by iliac vessels Lower (III) Possible to perfuse the f+ page area・Banshi axillary blood IBH for upper lesions t = Irrigation is performed at a high position in the armpit. adding oligonucleotides to the perfusion circuit, tract; Perfusion is continued for a suitable period of time (eg, 1 hour). 100-150m1/ A perfusion rate of min is used for the lower area lesions, while half that rate is used for the upper areas It can be used on lesions. Systemic heparinization is used during perfusion, Reverse after completion.

この分離潅流技術は、動脈もしくは静脈全身性循環に対する注入に際し耐えうる よりも高い投与量の化学療法剤の投与を可能にする。This isolated perfusion technique tolerates injection into the arterial or venous systemic circulation. allows the administration of higher doses of chemotherapeutic agents.

全身性注入については、好ましくはオリゴヌクレオチドを、適する連続注入装置 に接続された中心静脈カテーテルを介して供給する。体内設置したカテーテルは 、長時間にわたる頻繁な薬剤投与につき静脈内循環に対する長時間の投与を可能 にする。一般に、カテーテルは一般的もしくは局部的麻酔下で外側頭部静脈もし くは内側動部静脈に手術挿入される。カテーテル挿入の他の一般的部位は鎖骨静 脈である。注入ポンプは外部とすることができ、或いはたとえばインフユセイト ・コーポレーション社、ノーウッド、マサチューセッツ州から入手しうるインフ ユーザボート・システムおよびファルマシア・ラボラドリース社、ビス力タウエ イ、ニューシャーシー州から入手しつるＰＯＲＴ−Ａ−ＣＡＴＨシステムのよう な全体的に移植しうる中心静脈システムの１部を構成することもてきる。これら 装置を局部麻酔下で皮下ポケットに移植する。ポンプの注出ボートに接続された カテーテルを鎖骨静脈を介し上部大静脈に取付ける。移植体は貯槽内にオリゴヌ クレオチドの供給部を有し、これには必要に応しさらに薬剤を貯槽内の自封性ダ イヤフラムを介し皮下注射針からさらに注入して補充することができる。完全移 植しうる注入装置が好適である。何故なら、これらは装置の便ｆｌ＋さ、保守の 容易さ、および化粧上の利点のため、患者により良好に受け入れられるからであ る。For systemic injection, the oligonucleotide is preferably injected into a suitable continuous infusion device. Supplied via a central venous catheter connected to the The catheter placed inside the body , allows for long-term administration into the intravenous circulation for frequent drug administration over long periods of time. Make it. Generally, the catheter is inserted into the lateral cephalic vein under general or local anesthesia. The tube is surgically inserted into the medial artery and vein. Other common sites for catheter insertion are the clavicular region. It is the pulse. The infusion pump can be external or e.g. -Inflation available from Corporation, Norwood, Massachusetts. User boat system and Pharmacia Laboratories, Bisryotaue B. Like the PORT-A-CATH system obtained from New Chassis. It may also form part of a completely implantable central venous system. these The device is implanted into a subcutaneous pocket under local anesthesia. connected to the pump pouring boat A catheter is attached to the superior vena cava via the clavicular vein. The graft is placed in an oligomer in the reservoir. The cleotide supply section includes a self-sealing container in the reservoir, which can also contain the drug if necessary. It can be refilled by further injections through the eaphragm and through the hypodermic needle. complete transfer Implantable injection devices are preferred. This is because these devices are easy to use and easy to maintain. because it is better accepted by patients because of its ease and cosmetic benefits. Ru.

高投与量の化学療法は、黒色腫を処置する試みにて自己骨髄回復（移植）と組合 わせられている。高投与量の化学療法は顕著に高い治療反応を与えているが、患 者の生存率は一般に長期間でない［ジョーンズ等、キャンサー・ケモテラビー・ ）７−マコロジー、第２６巻、第１５５〜６頁（１，９９０）（カルボプラチン 、シクロホスファミドおよびＢＣＮＵ）；ラクハー二等、ブリティッシュ・ジャ ーナル・キャンサー、第６１巻、第３３０〜４頁（１９９０）（メルフ７ラン） ；ケプラー等、オンコロジー、第１２巻、第２７７〜９頁（１９８９）　（メル フアランおよびＢＣＮＵ）；サラチャー等、キャンサー、第６３巻、第１２９６ 〜３０２頁（１９８９）（ＤＴＩＣ）；つ十ルフ等、ジャーナル・クリニカル・ オンコロジー、第７巻、第２４５〜９頁（１９８９）（チオテパ）：シア等、ア ーキテクチャ−・ダーマトロジー、第１２４巻、第８７８〜８４頁（１９８８） 　（シクロホスファミド、シスプラチンおよびカルムスチン）；チェクメジアン 等、ジャーナル・クリニカル・オンコロジー、第４巻、第１８１１〜８頁（１９ ８６）（ＢＣＮＵ、メルフアランまたはその両者）；トーマス等、オンコロジー 、第４３巻、第２７３〜７頁（１９８ｔ３）（ＢＣＮＵおよびメルフアラン）。High-dose chemotherapy combined with autologous bone marrow recovery (transplant) in attempts to treat melanoma I'm being forced to. Although high-dose chemotherapy has given a significantly higher therapeutic response, The survival rate for patients is generally not long-term [Jones et al. ) 7-Macology, Vol. 26, pp. 155-6 (1,990) (Carboplatin , cyclophosphamide and BCNU); Null Cancer, Vol. 61, pp. 330-4 (1990) (Melf 7 runs) Kepler et al., Oncology, Vol. 12, pp. 277-9 (1989) (Mel. Hualan and BCNU); Sarachar et al., Cancer, Vol. 63, No. 1296 ~302 pages (1989) (DTIC); Tsuruf et al., Journal Clinical Oncology, Vol. 7, pp. 245-9 (1989) (thiotepa): Shea et al., A. Architecture Dermatology, Volume 124, Pages 878-84 (1988) (cyclophosphamide, cisplatin and carmustine); Chekmezian et al., Journal Clinical Oncology, Volume 4, pp. 1811-8 (19 86) (BCNU, Melphalan or both); Thomas et al., Oncology , Vol. 43, pp. 273-7 (198t3) (BCNU and Melphalan).

特に進行した段階における黒色腫は実質的に転移状態である。したがって黒色腫 を処置する際の高投与量化学療法および自己骨髄浄化の成功率が低い１つの可能 な理由は、骨髄まで転移した悪性細胞の回収骨髄を適切に浄化しえないことであ る。本発明によれば、ｃ−ｍｙｂアンチセンスオリゴヌクレオチドを黒色腫細胞 における骨髄のインビトロ清浄のための骨髄浄化剤として高投与量の慣用の化学 療法と組合せて用いることができる。通常の造血性細胞はｃ−ｍｙｂアンチセン スに対し感受性であるが、これらは本出願人による同時米国特許出願筒４２７． ６５９号および対応の国際特許出願ＷＯ９０／悪性細胞よりも感受性が低い。こ の感受性の差は、腫瘍細胞の骨髄を浄化する際のｃ−ｍｙｂアンチセンスオリゴ ヌクレオチドの使用を可能にする。Melanoma, especially in advanced stages, is essentially metastatic. Therefore melanoma One possibility is that high-dose chemotherapy and autologous bone marrow cleansing have a low success rate when treating The reason for this is that the recovered bone marrow of malignant cells that have metastasized to the bone marrow cannot be properly purified. Ru. According to the present invention, c-myb antisense oligonucleotides can be used in melanoma cells. High doses of conventional chemicals as bone marrow purifiers for in vitro purification of bone marrow in Can be used in combination with therapy. Normal hematopoietic cells are c-myb antisene These are commonly filed in co-pending U.S. patent application No. 427. No. 659 and the corresponding international patent application WO 90/malignant cells. child Differences in susceptibility to c-myb antisense oligos in clearing the bone marrow of tumor cells Allows the use of nucleotides.

骨髄浄化法によれば、骨髄をドナーの腸骨から標準的手術室手順でドナーから集 める。ドナーから骨髄を吸引する方法は当業界で周知されている。ドナーから骨 髄を吸引する装置および方法の例は米国特許第４，４８１゜９４６号および第４ ．４８６，１８８号（参考のためここに引用する）に開示されている。ドナー（ 自己移植）または他の個人（同族移植）のいずれかであるレシピエンドが約４× １０〜約８×１０８個の処理骨髄細胞を体重１ｋｇ当りに受入れるのに充分な骨 髄を抜取る。これは一般に約７５０〜約１０１００Ｏの骨髄の吸引を必要とする 。吸引された骨髄を、当業者に「バフィーコート」調製物として知られた単一の 細胞懸濁物が得られるまで濾過する。この白血球の懸濁物をｃ−ｍｙｂアンチセ ンスオリゴヌクレオチドにより適するキャリヤ中で有利には約８　ｍ　ｇ　／　 ｍ　Ｉの濃度にて処理する。或いは、白血球懸濁物を当業者に知られた標準法を 用い浄化を行うまで液体窒素中に貯蔵することができる。浄化された骨髄は、使 用するまで液体窒素中に凍結貯蔵することができる。骨髄および生物学的物質を 凍結させる方法は、たとえば米国特許第４．１．０７，９３７号および第４，１ １７．８８１号公報に開示されている。According to bone marrow purification, bone marrow is collected from the donor's ilium using standard operating room procedures. Melt. Methods for aspirating bone marrow from donors are well known in the art. bone from donor Examples of devices and methods for aspirating marrow are U.S. Pat. ．． No. 486,188 (incorporated herein by reference). donor( Recipe ends that are either autografts) or other individuals (allografts) are approximately 4 Sufficient bone to receive 10 to about 8 x 10 treated bone marrow cells per kg body weight Remove the pith. This generally requires aspiration of about 750 to about 10,100 O of bone marrow. . The aspirated bone marrow is combined into a single Filter until a cell suspension is obtained. This suspension of leukocytes was mixed with c-myb antibody. Advantageously about 8 mg/g in a carrier more suitable for oligonucleotides. Treat at a concentration of mI. Alternatively, leukocyte suspensions can be prepared using standard methods known to those skilled in the art. It can be stored in liquid nitrogen until used and purified. Purified bone marrow is used It can be stored frozen in liquid nitrogen until used. bone marrow and biological materials Freezing methods are described, for example, in U.S. Pat. It is disclosed in the publication No. 17.881.

作成方法を用いることもでき、この方法は前記バフィコート調製物よりもずっと 精製された造血性細胞の調製物を与えることができる。A method of making the buffy coat may also be used, which is much more effective than the buffy coat preparation described above. A preparation of purified hematopoietic cells can be provided.

１種もしくはそれ以上の生長因子を吸引骨髄もしくはバフィコート調製物に添加 して腫瘍の生長を刺激し、これによりｃ−ｍｙｂアンチセンスオリゴヌクレオチ ドの毒性に対する感受性を増大させることができる。Adding one or more growth factors to the aspirated bone marrow or buffy coat preparation and stimulate tumor growth, thereby inhibiting c-myb antisense oligonucleotides. can increase susceptibility to toxicity.

アンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した後、移すべき細胞を自己血漿もしく は緩衝液で洗浄して、組込まれなかったオリゴマーを除去する。次いで、洗浄さ れた細胞を患者に注入して戻す。After treatment with antisense oligonucleotides, cells to be transferred are transferred to autologous plasma or is washed with buffer to remove unincorporated oligomers. Then washed The cells are then injected back into the patient.

ｃ−ｍｙｂアンチセンスオリゴヌクレオチドは、罹患した個人における黒色腫細 胞の増殖を抑制すると共に正常細胞の生存を維持するのに有効な投与量にて投与 することができる。この量は腫瘍の性質および程度、用いる特定のオリゴヌクレ オチドおよび他の因子に応じて変化することができる。投与される実際の投与量 は、処置の性質が予防もしくは治療のいずれであっても患者の体格および体重、 患者の年齢、健康状態および性別、処置が局部的もしくは全身性のいずれであっ ても投与経路、および他の因子を考虜することができる。黒色細胞の増殖抑制は １０μｇ／ｍ１程度に低いアンチセンス濃度にて観察されている。２０μｇ　／ 　ｍ　ｌにて抑制は顕著であった。約１〜約１００μｇ　／　ｍ　ｌの濃度、好 ましくは約１０〜約１００μｇ　／　ｍ　ｌ　、特に好ましくは約２０〜約６０ μｇ／ｍｌの濃度を用いることができる。患者は、これら細胞間の薬物濃度を得 るのに充分なＩＩ］のアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与量を摂取せねばな らない。c-myb antisense oligonucleotides can be used to treat melanoma tumors in affected individuals. Administered at a dose effective to suppress cell proliferation and maintain normal cell survival. can do. This amount depends on the nature and extent of the tumor and the particular oligonucleotide used. Can vary depending on location and other factors. Actual dose administered the size and weight of the patient, whether the treatment is preventive or therapeutic in nature; The patient's age, health status, and gender; whether the procedure is local or systemic; However, the route of administration, and other factors can be taken into account. Suppression of black cell proliferation It has been observed at antisense concentrations as low as 10 μg/ml. 20 μg / The suppression was remarkable in ml. Concentrations of about 1 to about 100 μg/ml, preferred Preferably about 10 to about 100 μg/ml, particularly preferably about 20 to about 60 μg/ml Concentrations of μg/ml can be used. The patient obtains drug concentrations between these cells. A dose of antisense oligonucleotide II sufficient to No.

１０投与隈は毎［１約０．１〜１．０００’ｍｇのオリゴヌクレオチド、好まし くは毎日約１０〜約７００ｍｇの範囲とすることができる。それより多い或いは 少ない暖のオリゴヌクレオチドも必要に応し投与することができる。10 doses per dose [1 about 0.1 to 1.000'mg of oligonucleotide, preferably The dosage may range from about 10 to about 700 mg daily. more or Less warm oligonucleotides can also be administered if desired.

当業者は、患者の特定状況および必要性に適する投与量および投与スケジュール を容易に得ることができる。ここに説明したインビボ試験に基づき、有利には処 置過程は約３〜約２８日間、より好ましくは約７〜約１０日間にわたるオリゴヌ クレオチドの推奨された１日投与量の注入で構成することができる。当業者は、 それぞれの場合につき最適投与量を容易に決定することができる。Those skilled in the art will be able to determine dosages and dosing schedules appropriate to a patient's particular circumstances and needs. can be easily obtained. Based on the in vivo studies described herein, treatment is advantageous. The aging process is for about 3 to about 28 days, more preferably about 7 to about 10 days. It can consist of an infusion of the recommended daily dose of cleotide. Those skilled in the art should The optimum dosage can be easily determined in each case.

成人につき、２０μｇの有効な細胞間濃度を得るには、約３５０ｍｇのオリゴヌ クレオチドの１１１没与暖にて充分であると思われる。Approximately 350 mg of oligonucleotide per adult is required to obtain an effective intercellular concentration of 20 μg. It seems that the 111 temperature of cleotide is sufficient.

たとえば骨髄浄化におけるような生体外での腫瘍防止用途には、ｃ−ｍｙｂアン チセンスオリゴヌクレオチドを、腫瘍細胞を死滅させると共に正常な造血細胞の 生存を維持するのに有効な量で投与するこ七ができる。この量は、黒色細胞が骨 髄まで転移した程度、用いる特定のオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドに 対する腫瘍細胞の相対的感受性、並びに他の因子に応じて変化することができる 。１０５細胞当り約１０〜２００μｇ　／′ｍｌ、好ましくは１０５細胞当り約 ４０〜１５０μｇ／ｍｌの濃度を用いることができる。処置を最適化するには、 同量もしくはそれより少量のオリゴヌクレオチドの追加投与が有利である。した がって、たとえば骨髄１．　ｍ　Ｉ当り２Ｘ１０’細胞を含有する骨髄を浄化す るには、骨髄１ｍｌ当り２〜４０ｍｇのアンチセンス、好ましくは約８〜２４ｍ ｇ／ｍｌの投与量を効果的に用いることができる。それより多量もしくは少量の オリゴヌクレオチドを用いることもできる。For ex vivo tumor prevention applications, e.g. in bone marrow purification, c-myb Thisense oligonucleotide kills tumor cells and kills normal hematopoietic cells. This can be administered in an amount effective to maintain survival. This amount is the amount that black cells The degree of metastasis to the spinal cord, the specific oligonucleotide used, and the oligonucleotide can vary depending on the relative susceptibility of tumor cells to, as well as other factors . Approximately 10 to 200 μg/'ml per 105 cells, preferably approximately Concentrations of 40-150 μg/ml can be used. To optimize treatment, Additional administration of the same or smaller amount of oligonucleotide is advantageous. did Therefore, for example, bone marrow 1. Purify bone marrow containing 2X10' cells per mI 2 to 40 mg of antisense per ml of bone marrow, preferably about 8 to 24 mg of antisense per ml of bone marrow. Doses of g/ml can be effectively used. more or less than that Oligonucleotides can also be used.

以下、限定はしないが実施例により本発明を一層詳細に説明する。Hereinafter, the present invention will be explained in more detail by way of non-limiting examples.

ＣＨＰ黒色腫細胞（フィラデルフィア小児科病院、フィラデルフィア、ペンシル バニア州）を、２％のオキサロホスフエートと５％の子牛血清とを含有するＲＰ ＭＩ培地にて３７℃で５％ＣＯ２下に生長させた。細胞（５゜０００個／　ｍ　 ｌ　）を２００μｌの容積にて９６穴コスクープレートの個々の穴に３日前に接 種し、次いで３日間にわたり生長させた。この時点（０日）にてｃ−ｍｙｂｍＲ ＮＡの翻訳部分のコドン２〜７に相捕的な未改変アンチセンス１８量体オリゴデ オキシヌクレオチド（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２）または対応のセンス１８量体 （ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２６）を０１１０．２０．５０および１００μｇ　／　 ｍ　１の濃度で１日、２日もしくは５日間にわたり連続して培養物に添加した。CHP melanoma cells (Children's Hospital of Philadelphia, Philadelphia, Pencil) RP containing 2% oxalophosphate and 5% calf serum The cells were grown in MI medium at 37°C and 5% CO2. Cells (5゜000 cells/　m　 1) in a volume of 200 μl into individual wells of a 96-well Coscuk plate 3 days in advance. Seed was then allowed to grow for 3 days. At this point (day 0), c-mybmR An unmodified antisense 18-mer oligodeline complementary to codons 2-7 of the translated portion of NA. Oxynucleotide (SEQ ID NO: 22) or corresponding sense 18-mer (SEQ ID NO: 26) at 0110.20.50 and 100μg/ It was added to the culture continuously for 1, 2 or 5 days at a concentration of ml.

７日目に１゜０μｍの新たな培地を培養物に添加した。細胞の生存率／増殖を、 市販のキット（セルタイター９６（登録商標）プロメガ、マジソン、ウィスコン シン州）を用いて８日目に測定した。分析はテトラゾリウム塩を青色ホルモザン 生成物まで変換する生存細胞の能力に基づき、このホルモザン生成物は慣用の微 小プレート測定器で５７０ｎｍの吸光度を測定して定量することができる。５７ ０ｎｍにおける吸光度の程度は、生成したホルモザンの量およびしたがって残存 する生存細胞の個数に比例する。したがって、１０μｌの臭化３−（４，５−ジ メチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム溶液（５ｍ ｇ／ｍｌ）を１１０μｍの細胞懸濁物に添加し、３７℃にて４時間培養した。次 いて１５０μｍの酸性化されたイソプロパツール（２５ｍｌのイソプロパツール ＋０．１ｍｌの１２Ｎ　ＨＣＩ）を添加し、溶液を混合した。光学密度を５７０ ｎｍにて測定した。細胞残骸からのパックグランドを、６３０ｎｍての基準測定 値を差し引いて除去した。On day 7, 1°0 μm of fresh medium was added to the culture. cell viability/proliferation, Commercially available kits (CellTiter 96 (registered trademark) Promega, Madison, Wisconsin The measurement was carried out on the 8th day using the following method (Sin State). Analysis of tetrazolium salts as blue formosan Based on the ability of living cells to convert the formozan product into a Quantification can be performed by measuring absorbance at 570 nm with a small plate meter. 57 The degree of absorbance at 0 nm is a measure of the amount of formosan produced and therefore remaining. is proportional to the number of viable cells. Therefore, 10 μl of 3-(4,5-dibromide) Methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium solution (5 m g/ml) was added to a 110 μm cell suspension and cultured at 37° C. for 4 hours. Next 150 μm acidified isopropanol (25 ml isopropanol) +0.1 ml of 12N HCI) was added and the solution was mixed. Optical density 570 Measured in nm. Standard measurement of pack ground from cell debris at 630 nm The value was subtracted and removed.

生存率分析の結果を第１図（１日処理）、第２図（２日処理）及び第３図（５日 処理）に示す。第２図および第３図に示したオリゴヌクレオチド濃度は、それぞ れ２日処理および５日処理に関する積算投与量である。図面から判るように、ア ンチセンスオリゴマーての黒色腫細胞の処置は配列特異性の死滅をもたらした。The results of survival rate analysis are shown in Figure 1 (1-day treatment), Figure 2 (2-day treatment), and Figure 3 (5-day treatment). processing). The oligonucleotide concentrations shown in Figures 2 and 3 are These are the cumulative doses for the 2-day and 5-day treatments. As you can see from the drawing, Treatment of melanoma cells with antisense oligomers resulted in sequence-specific killing.

この作用は、黒色腫細胞を少なくとも５０μｇ　／　ｍ　Ｉのアンチセンスオリ ゴマー濃度で１日処理した際、または細胞を２０μｇ　／　ｍ　１種度の少ない オリゴマーで連続した日数で処理した際に最も顕著であった。This effect is effective against melanoma cells with at least 50 μg/ml of antisense oligonucleotide. When treated with sesame concentration for 1 day, or cells were treated with 20 μg/m of 1 species. It was most pronounced when treated with oligomers on consecutive days.

他のヒト黒色腫ラインＳＫ　ＭＥＬ−３７（スローン・ケタリング・インスチチ ュート、ニューヨーク、ニューヨーク州）に対するｃ−ｍｙｂアンチセンス牙リ ゴすクレオチドの作用を測定した。細胞を０日間に実施例１の手順にしたがい同 しセンスおよびアンチセンスオリゴマーにより同じ濃度で処理した。細胞生存率 を５０目に分析した。結果を第４図に示す。Other human melanoma lines SK MEL-37 (Sloan Kettering Inst. c-myb antisense receptors against The effect of goscleotide was measured. Cells were grown on day 0 according to the procedure of Example 1. were treated with sense and antisense oligomers at the same concentration. Cell viability was analyzed on the 50th day. The results are shown in Figure 4.

ここでも単一の５０μｇ　／　ｍ　ｌ投与量のアンチセンスオリゴマーによる黒 色腫細胞の処理は、センス処理もしくは未処理細胞と比較して、実質的な細胞死 滅を誘発させるのに充分てあった。Again, black with a single 50 μg/ml dose of antisense oligomer. Treatment of chromoma cells results in substantial cell death compared to sense-treated or untreated cells. It was enough to induce extinction.

２５０．０００個の黒色腫細胞（ＳＫ　ＭＥＬ−３７）を４匹の重大な合併免疫 不全症マウス（Ｃ，Ｂ−１７／ＬＣＲＴＡＣ−３ＣＩＤ　ＤＦ、フォックス・チ ェイス・キャンサーφインスチチュート、フィラデルフィア、ペンシルバニア州 ）のそれぞれに２１［１前に皮下注射した。腫瘍を直径約５ｍｍの寸法まで生長 させた。１日間に、７日間にわたり７００μｇのオリゴマーの全投与量を供給す るＡＬＺＥＴ一定注入ポンプ（アルザ・コーポレーション針、パロ・アルド、カ リホルニア州）をマウスに外科移植した。腫瘍領域を次いて毎１１監視した。１ 匹のマウスにはオリゴマーを与えなかった。他のマウスには２４量体「センス」 ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（翻訳ｃ−ｍｙｂ　ｍＲＮＡのコドン２ 〜９に対応）を与えた。２匹のマウスには、ｃ−ｍｙｂｍＲＮＡコドン２〜９に 相補的なＳＥＱ　ＩＩ）　ＮＯ＋１６ＣＴＡＴＧＣＴＧＴＧＣＣＧＧＧＧＧＴＣ ＴＴＣＧＧＧＣ）のヌクレオチド配列を有する２４量体アンチセンスホスホロチ オエートオリゴヌクレオチドを与えた。250,000 melanoma cells (SK MEL-37) in 4 animals with significant combined immunity deficiency mouse (C, B-17/LCRTAC-3CID DF, Fox Chi Ace Cancer Institute, Philadelphia, Pennsylvania ) was injected subcutaneously 21[1 days ago. Growth of tumor to approximately 5mm in diameter I let it happen. Deliver a total dose of 700 μg of oligomer in one day over 7 days. ALZET constant infusion pump (Alza Corporation needle, Palo Aldo, CA) Lihornia) were surgically transplanted into mice. The tumor area was then monitored every 11 days. 1 One mouse received no oligomer. Other mice have 24-mer “Sense” Phosphorothioate oligonucleotide (translated c-myb mRNA codon 2 ~9) was given. Two mice had a c-myb mRNA codon 2-9. Complementary SEQ II) NO+16CTATGCTGTGCCGGGGGGTC A 24-mer antisense phosphorotinase having the nucleotide sequence of oate oligonucleotide was given.

結果を第５図に示す。各曲線は１匹の動物を示す。２匹のアンチセンス処理され た動物において、腫瘍寸法は同一レベルに留まり或いは退化した。これに対し、 センス処理および比較動物では腫瘍が生長し続けた。The results are shown in Figure 5. Each curve represents one animal. Two animals were treated with antisense. In animals treated, tumor size remained at the same level or regressed. On the other hand, Tumors continued to grow in sense-treated and comparison animals.

これら動物を１９９日間殺し、腫瘍を除去すると共に秤殴した。比較およびセン ス処理の動物における腫瘍の重量はそれぞれ９，９ｇおよび９．６ｇであった。The animals were sacrificed for 199 days, the tumors removed and weighed. Compare and Sen Tumor weights in the S-treated animals were 9,9 g and 9.6 g, respectively.

２匹のアンチセンス処理された動物における腫瘍の重量は僅か０，１ｇおよび０ ．２ｇであったつ 限定はしないが以下の実施例は、転移黒色腫の骨髄を浄化するための１つの方法 を例示する。Tumor weights in two antisense-treated animals were only 0,1 g and 0. ．． It was 2g The following non-limiting example describes one method for purifying the bone marrow of metastatic melanoma. exemplify.

骨髄を、一般的な麻酔下でのドナーの腸骨から手術室にて標準技術により集めた 。複数の吸引物をヘパリン処理された注射器に入れた。骨髄レシピエンドが体重 １ｋｇ当り約４Ｘ１０８〜約８×１０８個の処理骨髄細胞を受けるのに充分な骨 髄を抜取った。したがって、約７５０〜１０１００Ｏの骨髄を抜取った。吸引さ れた骨髄を直ちに、１０，０００単位の保存料フリーのヘパリンを媒体１００ｍ １当りに含有する輸送媒体（ＴＣ−１９９、ギブコ社、グランド・アイランド、 ニューヨーク）に移した。吸引した骨髄を３種の順次に微細となるメツシュによ り単一の細胞懸濁物が生ずるまで、すなわち細胞の凝集物、残骸および骨粒子の ない懸濁物が生ずるまで濾過したっ次いて濾過骨髄をさらに自動化細胞分離器（ たとえばコウゾ２９９１型細胞処理装置）で処理して、「パックコート」生成物 （すなわち赤血球および血小板を含まない白血球）を作成した。次いでバフィー コート調製物を移送包装物に入れて、さらに処理および貯蔵した。これを浄化す るまで液体窒素中に標準法により貯蔵することができる。或いは直ちに浄化を行 い、次いで浄化された骨髄を移植の準備ができるまで液体窒素中に凍結貯蔵する こともできる。Bone marrow was collected by standard techniques in the operating room from the donor's ilium under general anesthesia. . Multiple aspirates were placed into heparinized syringes. Bone marrow recipe end is weight Sufficient bone to receive about 4 x 108 to about 8 x 108 treated bone marrow cells per kg The pith was removed. Therefore, approximately 750-10100 O of bone marrow was extracted. sucked Immediately add 10,000 units of preservative-free heparin to 100ml of medium. Transport medium (TC-199, Gibco, Grand Island, moved to New York). The aspirated bone marrow is passed through three sequentially fine meshes. until a single cell suspension results, i.e., cell aggregates, debris and bone particles. Once filtered until no suspension occurs, the filtered bone marrow is further passed through an automated cell separator ( For example, Kozo 2991 cell processing equipment) to produce a “Packcoat” product. (i.e., white blood cells without red blood cells and platelets). Then Buffy The coat preparation was placed in transport packages for further processing and storage. purify this It can be stored by standard methods in liquid nitrogen until it reaches its maximum capacity. Or clean it immediately. The purified bone marrow is then stored frozen in liquid nitrogen until ready for transplantation. You can also do that.

浄化法は次のように行うことができる。バフィーコート調製物における細胞を、 約２０％自己血漿を含有するＴＣ−１９９における約２Ｘ１０７個／ｍｌの細胞 濃度に調整する。たとえば約８　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌの濃度におけるＣ−ｍｙｂ アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドを、細胞懸濁物を含有する移送用包装 物に添加する。組換ヒト造血生長因子（たとえばｒＨＩＬ−３もしくはｒ　ＩＩ ＧＭ−Ｃ３Ｆ）を懸濁物に添加して腫瘍の生長を刺激し、これによ＃）ｃ−ｍｙ ｂアンチセンスオリゴヌクレオチド毒性に対する感受性を増大させることができ る。移送用包装物を次いで３７℃の水浴に入れ、緩和に振とうしながら１８〜２ ４時間にわたり培養する。次いて細胞を液体窒素中で凍結させたり或いは約２０ ％自己血漿を含有するＴＣ−１９９にて４℃で１回洗浄して、組込まれないオリ ゴマーを除去することがてきる。次いで、洗浄された細胞をレシピエンドに注入 する。可能であれば無菌条件下で作業すると共に慎重な無菌技術を常に維持する よう注意を払わねばならない。The purification method can be carried out as follows. Cells in buffy coat preparation Approximately 2X107 cells/ml in TC-199 containing approximately 20% autologous plasma Adjust to concentration. For example, C-myb at a concentration of about 8 mg/ml Transport packaging containing antisense oligodeoxynucleotides and cell suspensions add to something Recombinant human hematopoietic growth factors (e.g. rHIL-3 or rII) GM-C3F) was added to the suspension to stimulate tumor growth, which b Can increase susceptibility to antisense oligonucleotide toxicity Ru. The transport package was then placed in a 37°C water bath and heated for 18 to 2 hours with gentle shaking. Incubate for 4 hours. Cells are then frozen in liquid nitrogen or frozen for about 20 minutes. Wash once at 4°C with TC-199 containing % autologous plasma to remove any unincorporated orifices. Sesame can be removed. Then, inject the washed cells into the recipe end do. Work under aseptic conditions when possible and maintain careful aseptic technique at all times You have to be careful.

本発明はその思想または実質的な特徴から逸脱することなく他の特定態様で実現 することもでき、したがって本発明の範囲を示すには上記説明だけでなく請求の 範囲をも参照すべきである。The invention may be embodied in other specific forms without departing from its spirit or substantial characteristics. Therefore, in order to indicate the scope of the invention, it is necessary to refer not only to the above description but also to the claims. You should also refer to range.

合成、調製および分析の各手順に関し本明細書で引用した刊行物を全てここに参 考のため引用する。All publications cited herein with respect to synthetic, preparative and analytical procedures are incorporated herein by reference. I quote it for consideration.

配ノ［λ里−り上 （１）一般的情報： （ｉ）出願人：テンプル　ユニバーシティー−オブ　ザ　コモンウエルス　シス テム　オブハイヤー　エデュケーション （ａ）発明者；ゲヴイルツ、アラン　エムカラプレツタ、ブルーノ （ｉｆ）発明の名称：ｃ−１Ｌ上プロトオンコジーンに対するアンチセンスオリ ゴヌクレオチドによる黒色腫の処置 （ｉ　ｉ　ｉ）配列の数：２６ （ｉ　ｖ）通信宛先； （Ａ）宛先：テンプル　ユニバージティー　−オブ　ザ　コモンウエルス　シス テム　オブハイヤー　エデュケーション （Ｂ）街名＝４０６　ユニバージティー　サービスビルディング （Ｃ）書名：フィラデルフィア （Ｄ）州名：ペンシルバニア （Ｅ）国名：アメリカ合衆国 （Ｆ）ＺＩＰ：　１９１２２ （ｖ）コンピュータ解読フオーム： （Ａ）メディア種類：ディスケット、３．５０インチ、７２０Ｋｂ　’ （Ｂ）コンピュータ：ＩＢＭ　ＰＳ／２（Ｃ）作動システム：ＭＳ−ＤＯ３ （Ｄ）ソフトウエアー：ワードパーフェクト５．　１（ｖｉ）出願データ： （Ａ）出願番号・ （Ｂ）出願日 （Ｃ）分類・ （ｖｉｉ）先行出願データ： （Ａ）出願番号：米国特許出願第７９２，９９９号（Ｂ）出願日・１９９１年１ １月１５日（ｖｉｉｉ）代理人の情報。Arino [λri-riage] (1) General information: (i) Applicant: Temple University of the Commonwealth TEM OF HIRE EDUCATION (a) Inventors: Gewirtz, Alain Mkaraprecta, Bruno (if) Title of the invention: antisense ori against proto-oncogene on c-1L Treatment of melanoma with gonucleotides (i　i　i) Number of arrays: 26 (iv) Communication destination; (A) Address: Temple University-of-the-Commonwealth Sith TEM OF HIRE EDUCATION (B) Street name = 406 University Service Building (C) Book title: Philadelphia (D) State name: Pennsylvania (E) Country name: United States of America (F)ZIP: 19122 (v) Computer-deciphered form: (A) Media type: Diskette, 3.50 inches, 720Kb (B) Computer: IBM PS/2 (C) Operating system: MS-DO3 (D) Software: Word Perfect 5. 1(vi) Application data: (A) Application number/ (B) Application date (C) Classification/ (vii) Prior application data: (A) Application number: U.S. Patent Application No. 792,999 (B) Filing date: January 1991 January 15th (viii) Agent information.

（Ａ）氏名：モナコ、ダニエル　エイ （Ｂ）登録番号：３０．４８０ （Ｃ）参照番号：６０５６−１５９　ｐｃＴ　１（ｉｘ）電信情報・ （Ａ）電話・　（２１５）５６８−８３８３（Ｂ）テレファックス・ （２］５）５６８−５５４９ （Ｃ）テレックス　なし く２）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・１の情報 （ｉ）配列特性。(A) Name: Monaco, Daniel A (B) Registration number: 30.480 (C) Reference number: 6056-159 pcT 1 (ix) Telegraphic information (A) Telephone・(215)568-8383(B) Telefax・ (2]5)568-5549 (C) Telex None 2) SEQ ID No. 1 information (i) Sequence characteristics.

（Ａ）長さ　４０ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖車・一本鎖 （Ｄ）トポロジー・線状 （ｘｉ）配列説明　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：ＩＣＧＴＣＡＣＴＧＣＴ　ＡＴＡＴＡ ＴＧＣＴＧ　ＴＧＣＣＧＧＧＧＴＣＴＴＣＧＧＧＣＣＡＴ　４０（２）ＳＥＱ　 ＩＤ　ＮＯ：２の情報。(A) Length: 40 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Chain wheel/single chain (D) Topology/linearity (xi) Sequence description SEQ ID NO: ICGTCACTGCT ATATA TGCTG　TGCCGGGGGTCTTCGGGCCAT　40(2)SEQ　 Information on ID NO:2.

（ｉ）配列特性： （Ａ）長さ：２６ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖車ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：線状・ （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２：ＡＴＧＣＴＧＴＧＣＣＧＧＧＧＴ Ｃ’ＩＴＣＧ　ＧＧＣＣＡＴ　２６（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３の情報・（ｉ ）配列特性： （Ａ）長さ・２５ヌクレオチド （Ｂ）種類・核酸 （Ｃ）鎖車ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｘｉ）配列説明　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３：ＴＧＣＴＧＴＧＣＣＧ　ＧＧＧＴ ＣＴＴＣＧＧ　ＧＣＣＡＴ　２５（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４の情報。(i) Sequence characteristics: (A) Length: 26 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Chain wheel single strand (D) Topology: Linear (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 2: ATGCTGTGCCGGGGT C’ITCG GGCCAT 26(2) SEQ ID NO:3 information (i ) Array characteristics: (A) Length/25 nucleotides (B) Type/nucleic acid (C) Chain wheel single strand (D) Topology: Linear (xi) Sequence explanation SEQ ID NO:3:TGCTGTGCCG GGGT CTTCGG GCCAT 25 (2) SEQ ID NO: 4 information.

（ｉ）配列特性・ （Ａ）長さ　２４ヌクレオチド （Ｂ）種類　核酸 （Ｃ）鎖車ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー　線状 （ｘ　ｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４：ＧＣＴＧＴＧＣＣＧＧ　ＧＧＴ ＣＴＴＣＧＧＧ　ＣＣＡＴ　２４（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５の情報・（ｉ） 配列特性 （Ａ）長さ、２３ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎧型、一本鎖 （Ｄ）トポロジー　線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５：ＣＴＧＴＧＣＣＧＧＧ　ＧＴＣＴ ＴＣＧＧＧＣＣＡＴ　２３（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６のｆｔｌ報（ｌ配列特 性 （Ａ）長さ　２２ヌクレオチド （Ｂ）種類・核酸 （Ｃ）鏡型ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー　線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋６：ＴＧＴＧＣＣＧＧＧＧ　ＴＣＴＴ ＣＧＧＧＣＣＡＴ　２２（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニアの情報：（ｉ）配列特性 。(i) Sequence characteristics・ (A) Length: 24 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Chain wheel single strand (D) Topology Linear (x i) Sequence description: SEQ ID NO: 4: GCTGTGCCGG GGT CTTCGGG CCAT 24(2) SEQ ID NO:5 information (i) Array characteristics (A) Length, 23 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Armor type, single chain (D) Topology Linear (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 5: CTGTGCCGGG GTCT TCGGGCCAT 23 (2) SEQ ID NO:6 ftl information (l array special sex (A) Length: 22 nucleotides (B) Type/nucleic acid (C) Mirror-shaped double strand (D) Topology Linear (xi) Sequence description: SEQ ID NO+6: TGTGCCGGGGG TCTT CGGGCCAT 22(2) SEQ ID NO Near information: (i) Sequence characteristics .

（Ａ）長さ：２１ヌクレオチド （Ｂ）種類　核酸 （Ｃ）鎧型・一本鎖 （Ｄ）トポロジー、線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニア：ＧＴＧＣＣＧＧＧＧＴ　ＣＴＴＣ ＧＧＧＣＣＡ　Ｔ　２／１（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８の情報・（ｉ）配列特 性： （Ａ）長さ・２０ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー・線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８゜’ｒｃｃｃｃｃｃｃＴｃ　ＴＴＣ ＧＧＧＣＣＡＴ　２０（２）ＳＥＱ　Ｉｆ）　ＮＯ：９の情報・（ｉ）配列特性 （Ａ）長さ、１９ヌクレオチド （Ｂ）種類、核酸 （Ｃ）鏡型ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｘｌ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９ＧＣＣＧＧＧＧＴＣＴ　ＴＣＧＧＧ ＣＣＡＴ　１９（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０の情報（ｉ）配列特性： （Ａ）長さ・１８ヌクレオチド （Ｂ）種類・核酸 （Ｃ）鎧型　一本鎖 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｘ　ｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０：ＣＣＧＧＧＧＴＣＴＴ　ＣＧ ＧＧＣＣＡＴ　１Ｂ（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１の情報（ｉ）配列特性・ （Ａ）長さ・１７ヌクレオチド （Ｂ）種類　核酸 （Ｃ）鎧型、−木鎖 （Ｄ）トポロジー・線状 （ｘｉ）配列説明　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１ＩＣＧＧＧＧＴＣＴＴＣＧＧＧＣＣ ＡＴ　１７（２）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・１２の情報（夏）配列特性 （Ａ）長さ°１６ヌクレオチド （Ｂ）種類　核酸 （Ｃ）鎧型　一本鎖 （Ｄ）トポロン−線状 （ｘｉ）配列説明　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２：ＧＧＧＧＴＣＴＴＣＧ　ＧＧＣ ＣＡＴ　１６（２）ＳＥＱ　［Ｄ　ＮＯ：１３の情報（ｉ）配列特性 （Ａ）長さ・１５ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎧型・一本鎖 （Ｄ）トポロジー・線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ’ｌＤ　ＮＯ：１３：ＧＧＧＴＣＴＴＣＧＧ　ＧＣＣ ＡＴ　１５（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４の情報。(A) Length: 21 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Armor type/single chain (D) Topology, linear (xi) Sequence description: SEQ ID NO Near: GTGCCGGGGT CTTC GGGCCA T 2/1 (2) SEQ ID NO:8 information/(i) Array characteristics sex: (A) Length/20 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror-shaped double strand (D) Topology/linearity (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 8゜’rcccccccTc TTC GGGCCAT 20 (2) SEQ If) Information on NO:9 (i) Sequence characteristics (A) Length, 19 nucleotides (B) Type, nucleic acid (C) Mirror-shaped double strand (D) Topology bilinear (xl) Sequence description: SEQ ID NO: 9GCCGGGGTCT TCGGG CCAT 19(2) SEQ ID NO:10 information (i) Sequence characteristics: (A) Length/18 nucleotides (B) Type/nucleic acid (C) Armor type single strand (D) Topology: Linear (x i) Sequence description: SEQ ID NO: 10: CCGGGGTCTT CG GGCCAT 1B (2) SEQ ID NO: 11 information (i) Sequence characteristics・ (A) Length: 17 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Armor type, - wooden chain (D) Topology/linearity (xi) Sequence description SEQ ID NO: 1ICGGGGTCTTCGGGCC AT 17 (2) SEQ ID No. 12 information (summer) sequence characteristics (A) Length °16 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Armor type single strand (D) Topolon-linear (xi) Sequence explanation SEQ ID NO: 12:GGGGTCTTCG GGC CAT 16(2) SEQ [D NO:13 information (i) Sequence characteristics (A) Length/15 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Armor type/single chain (D) Topology/linearity (xi) Sequence description: SEQ’ID NO: 13:GGGTCTTCGG GCC AT 15 (2) SEQ ID NO: 14 information.

（ｉ）配列特性： （Ａ）長さ、２６ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー・線状 （ｘｉ）配列説明　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４：ＴＡＴＡＴＧＣＴＧＴ　ＧＣＣ ＧＧＧＧＴＣＴ　ＴＣＧＧＧＣ２６（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋１５の情報：（ １）配列特性・ （Ａ）長さ、２５ヌクレオチド （Ｂ）種類　核酸 （Ｃ）鎧型・一本鎖 （Ｄ）トポロジー　線状 （Ｘｌ）配列説明・ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５：ＡＴＡＴＧＣＴＧＴＧ　ＣＣＧ ＧＧＧＴＣＴｒ　ＣＧＧＧＣ２５（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６の情報：（ｉ ）配列特性： （Ａ）長さ：２４ヌクレオチド （Ｂ）種類・核酸 （Ｃ）鏡型ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｘ　ｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６：ＴＡＴＧＣＴＧＴＧＣＣＧＧ ＧＧＴＣ’Ｉ’ｒＣＧＧＧＣ２４（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７の情報・（ｉ ）配列特性 （Ａ）長さ・２３ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー　線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７ＡＴＧＣＴＧＴＧＣＣＧＧＧＧＴ ＣＴＴＣＧ　ＧＧＣ２３（２）ＳＥＱ　１０　ＮＯ：１８の情報（ｉ）配列特性 ・ （Ａ）長さ：２２ヌクレオチド （Ｂ）種類　核酸 （Ｃ）鏡型ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー　線状 （ｘｉ）配列説明　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８・ＴＧＣＴＧＴＧＣＣＧ　ＧＧＧ ＴＣ？ＴＣＧＧ　ＧＣ２２（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９の情報：（ｉ）配列 特性： （Ａ）長さ：２１ヌクレオチド （Ｂ）種類、核酸 （Ｃ）鏡型ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ｒＤ　ＮＯ：１９：ＧＣＴＧＴＧＣＣＧＧ　ＧＧＴ ＣＴＴＣＧＧＧ　Ｃ２１（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０の情報：（ｉ）配列特 性： （Ａ）長さ＝２０ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型　−重鎖 （Ｄ）トポロジー・線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０：ＣＴＧＴＧＣＣＧＧＧ　ＧＴＣ ＴＴＣＧＧＧＣ２０（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１の情報（ｉ）配列特性： （Ａ）長さ：１９ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー、線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１：（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２ ２の情報：（ｉ）配列特性： （Ａ）長さ：１８ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２：ＧＴＧＣＣＧＧＧＧＴ　ＣＴＴ ＣＧＧＧＣ：Ｌ８（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３の情報。(i) Sequence characteristics: (A) Length, 26 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror-shaped double strand (D) Topology/linearity (xi) Sequence explanation SEQ ID NO: 14: TATATGCTGT GCC GGGGTCT TCGGGC26 (2) SEQ ID NO+15 information: ( 1) Array characteristics・ (A) Length, 25 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Armor type/single chain (D) Topology Linear (Xl) Sequence explanation/SEQ ID NO: 15:ATATGCTGTG CCG GGGTCTr CGGGC25 (2) SEQ ID NO:16 information: (i ) Array characteristics: (A) Length: 24 nucleotides (B) Type/nucleic acid (C) Mirror-shaped knee heavy chain (D) Topology: Linear (x i) Sequence description: SEQ ID NO: 16: TATGCTGTGCCGG GGTC’I’rCGGGC24(2) SEQ ID NO:17 information・(i ) array characteristics (A) Length: 23 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror-shaped knee heavy chain (D) Topology Linear (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 17ATGCTGTGCCGGGGT CTTCG GGC23(2) SEQ 10 NO:18 information (i) Sequence characteristics ・ (A) Length: 22 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror-shaped knee heavy chain (D) Topology Linear (xi) Sequence explanation SEQ ID NO: 18・TGCTGTGCCG GGG TC? TCGG GC22 (2) SEQ ID NO:19 information: (i) Array Characteristic: (A) Length: 21 nucleotides (B) Type, nucleic acid (C) Mirror-shaped knee heavy chain (D) Topology bilinear (xi) Sequence description: SEQ rD NO: 19: GCTGTGCCGG GGT CTTCGGG C21 (2) SEQ ID NO:20 information: (i) Array special sex: (A) Length = 20 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror type - heavy chain (D) Topology/linearity (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 20: CTGTGCCGGG GTC TTCGGGC20(2) SEQ ID NO:21 information (i) Sequence characteristics: (A) Length: 19 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror-shaped knee heavy chain (D) Topology, linear (xi) Sequence explanation: SEQ ID NO: 21: (2) SEQ ID NO: 2 Information in 2: (i) Sequence characteristics: (A) Length: 18 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror-shaped knee heavy chain (D) Topology: Linear (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 22: GTGCCGGGGT CTT CGGGC:L8(2) SEQ ID NO:23 information.

（ｉ）配列特性・ （Ａ）長さ＝１７ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型；−重鎖 （Ｄ）トポロジー・線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３ＴＧＣＣＧＧＧＧＴＣＴｒＣＧＧ ＧＣ１７（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４の情報：（ｉ）配列特性： （Ａ）長さ：１６ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー、線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４：ＧＣＣＧＧＧＧＴＣＴ　ＴＣＧ ＧＧＣ１６（２）ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５の情報：（ｉ）配列特性： （Ａ）長さ＝１５ヌクレオチド （Ｂ）種類；核酸 （Ｃ）鏡型ニー重鎖 （Ｄ）トポロジー　線状 （ｘｉ）配列説明　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５：ＣＣＧＧＧＧＴＣＴＴ　ＣＧＧ ＧＣ１５（２）ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ・２６の情報：（ｉ）配列特性： （Ａ）長さ＝１８ヌクレオチド （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鏡型　−重鎖 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｘｉ）配列説明：ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２６：ＧＣＣＣＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧ ＧＣＡＣ１８ＦＩＧ、　ｌ　濃　度　（ｐｇ／ｍ１）ＦＩＧ、２　ａ　度　（ｐ ｇ／ｍ１） ＦＩＧ、３　１度（Ｊｕｇ／ｍ１） ＦＩＧ、４　１　度　（ｌｏＪＪｇ／ｍｌ）ＦＩＧ、５　日　数 フロントページの続き （７２）発明者　ゲヴイルツ、アラン　エムアメリカ合衆国　ペンシルバニア　 １９１３０フイラデルフイア　ノース　トウニンティフォース　ストリート８３ ７ （７２）発明者　カラプレツタ、ブルーノアメリカ合衆国　ペンシルバニア　１ ９１０３フイラデルフイア　パイン　ストリート(i) Sequence characteristics・ (A) Length = 17 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror type; - heavy chain (D) Topology/linearity (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 23TGCCGGGGTCTrCGG GC17(2) SEQ ID NO:24 information: (i) Sequence characteristics: (A) Length: 16 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror-shaped knee heavy chain (D) Topology, linear (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 24: GCCGGGGTCT TCG GGC16(2) SEQ ID NO:25 information: (i) Sequence characteristics: (A) Length = 15 nucleotides (B) Type; Nucleic acid (C) Mirror-shaped knee heavy chain (D) Topology Linear (xi) Sequence explanation SEQ ID NO: 25: CCGGGGTCTT CGG GC15(2) SEQ ID No. 26 information: (i) Sequence characteristics: (A) Length = 18 nucleotides (B) Type: Nucleic acid (C) Mirror type - heavy chain (D) Topology bilinear (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 26:GCCCGAAGACCCCG GCAC18FIG, l concentration (pg/m1) FIG, 2a degree (p g/m1) FIG, 3 1 degree (Jug/m1) FIG, 4 1 degree (loJJg/ml) FIG, 5 days Continuation of front page (72) Inventor: Gewirtz, Alan M. Pennsylvania, United States of America 19130 Philadelphia North Touninty Fourth Street 83 7 (72) Inventor Karaprecta, Bruno United States Pennsylvania 1 9103 Philadelphia Pine Street

Claims (59)

【特許請求の範囲】[Claims] １．処置を必要とする個人に対しヒトｃ−ｍｙｂ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少な くとも１部に相補的なヌクレオチド配列を有するオリゴヌクレオチドの有効量を 投与することからなり、前記オリゴヌクレオチドは前記ｍＲＮＡ転写物にハイブ リダイズしうることを特徴とする黒色腫の処置方法。1. Low levels of human c-myb gene mRNA transcripts for individuals in need of treatment. An effective amount of an oligonucleotide having a nucleotide sequence complementary to at least one part of the the oligonucleotide hybridizes to the mRNA transcript. A method for treating melanoma, which is characterized in that it can be redized. ２．オリゴヌクレオチドが少なくとも１２量体である請求の範囲第１項に記載の 方法。2. Claim 1, wherein the oligonucleotide is at least a dodecamer. Method. ３．オリゴヌクレオチドがメチルホスホネートオリゴヌクレオシドもしくはホス ホロチオエートオリゴヌクレオチドである請求の範囲第２項に記載の方法。3. If the oligonucleotide is a methylphosphonate oligonucleoside or 3. The method according to claim 2, wherein the oligonucleotide is a holotioate oligonucleotide. ４．オリゴヌクレオチドが、翻訳開始コドンの約４０ヌクレオチド内に存在する ｃ−ｍｙｂｍＲＮＡの１部に相補的なヌクレオチド配列を有する請求の範囲第２ 項に記載の方法。4. The oligonucleotide is within approximately 40 nucleotides of the translation initiation codon Claim 2 having a nucleotide sequence complementary to a part of c-myb mRNA The method described in section. ５．オリゴヌクレオチドが、前記転写物の翻訳開始コドンおよび／またはこの開 始コドンから直ぐ下流のコドンを含むｃ−ｍｙｂｍＲＮＡの１部に相補的なデオ キシヌクレオチド配列を有するオリゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲第 ２項に記載の方法。5. The oligonucleotide is located at the translation initiation codon of said transcript and/or its opening codon. A fragment complementary to the part of c-myb mRNA that includes the codon immediately downstream from the start codon. Claim No. 1, which is an oligodeoxynucleotide having a xynucleotide sequence. The method described in Section 2. ６．オリゴヌクレオチドが１２〜４０量体オリゴデオキシヌクレオチドからなる 請求の範囲第２項に記載の方法。6. The oligonucleotide consists of 12- to 40-mer oligodeoxynucleotides The method according to claim 2. ７．オリゴヌクレオチドがメチルホスホネートオリゴヌクレオシドもしくはホス ホロチオエートオリゴヌクレオチドである請求の範囲第６項に記載の方法。7. If the oligonucleotide is a methylphosphonate oligonucleoside or 7. The method according to claim 6, wherein the oligonucleotide is a holotioate oligonucleotide. ８．オリゴヌクレオチドが１５〜３０量体である請求の範囲第６項的記載の方法 。8. The method according to claim 6, wherein the oligonucleotide is a 15-30 mer. . ９．オリゴヌクレオチドが１８〜２６量体である請求の範囲第８項に記載の方法 。9. The method according to claim 8, wherein the oligonucleotide is a 18-26 mer. . １０．オリゴヌクレオチドが１８〜２１量体である請求の範囲第９項に記載の方 法。10. The method according to claim 9, wherein the oligonucleotide is an 18-21 mer. Law. １１．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３ よりなる群から選択されるオリゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲第８項 に記載の方法。11. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 13 Claim 8 which is an oligodeoxynucleotide selected from the group consisting of The method described in. １２．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５ よりなる群から選択されるオリゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲第８項 に記載の方法。12. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 25 Claim 8 which is an oligodeoxynucleotide selected from the group consisting of The method described in. １３．オリゴヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：２２からなる請求の範囲第１２項 に記載の方法。13. Claim 12: The oligonucleotide consists of SEQ ID NO: 22. The method described in. １４．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４もしくは ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５ のいずれかに対応するヌクレオチド／ヌクレオシド配列を有するホスホロチオエ ートオリゴデオキシヌクレオチドもしくはメチルホスホネートオリゴデオキシヌ クレオシドである請求の範囲第８項に記載の方法。14. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 25 Phosphorothioe with a nucleotide/nucleoside sequence corresponding to either oligodeoxynucleotide or methylphosphonate oligodeoxynucleotide 9. The method according to claim 8, wherein the method is a creoside. １５．オリゴヌクレオチドがホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドか らなる請求の範囲第１４項に記載の方法。15. Is the oligonucleotide a phosphorothioate oligodeoxynucleotide? 15. The method according to claim 14, comprising: １６．ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：１６ に対応するヌクレオチド配列を有する請求の範囲第１５項に記載の方法。16. Phosphorothioate oligodeoxynucleotide is SEQ ID NO: 16 16. The method according to claim 15, having a nucleotide sequence corresponding to. １７．転移した黒色腫細胞の骨髄の浄化方法であって、黒色胆罹患個人から吸引 した骨髄細胞を、ヒトｃ−ｍｙｂ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも１部に相 補的なヌクレオチド配列を有し、かつ前記ｍＲＮＡ転写物にハイブリダイズしう るオリゴヌクレオチドの有効量で処理し、 処理された細胞を罹患個人の身体に戻すことを特徴とする骨髄の浄化方法。17. A method of purifying the bone marrow of metastatic melanoma cells, which is aspirated from individuals affected by melanoma. bone marrow cells that are homologous to at least a portion of the human c-myb gene mRNA transcript. has a complementary nucleotide sequence and is capable of hybridizing to said mRNA transcript. treated with an effective amount of oligonucleotide that A method of purification of bone marrow characterized by returning the treated cells to the body of an affected individual. １８．オリゴヌクレオチドが少なくとも１２量体である請求の範囲第１７項に記 載の方法。18. Claim 17, wherein the oligonucleotide is at least a dodecamer. How to put it on. １９．オリゴヌクレオチドがメチルホスホネートオリゴヌクレオシドもしくはホ スホロチオエートオリゴヌクレオチドである請求の範囲第１８項に記載の方法。19. If the oligonucleotide is a methylphosphonate oligonucleoside or 19. The method according to claim 18, which is a sulforthioate oligonucleotide. ２０．オリゴヌクレオチドが、翻訳開始コドンの約４０ヌクレオチド内に存在す るｃ−ｍｙｂｍＲＮＡの１部に相補的なヌクレオチド配列を有する請求の範囲第 １８項に記載の方法。20. The oligonucleotide is within approximately 40 nucleotides of the translation initiation codon. Claim 1, which has a nucleotide sequence complementary to a part of c-myb mRNA. The method described in item 18. ２１．オリゴヌクレオチドが１２〜４０量体オリゴデオキシヌクレオチドからな る請求の範囲第１８項に記載の方法。21. The oligonucleotide is composed of 12- to 40-mer oligodeoxynucleotides. 19. The method according to claim 18. ２２．オリゴヌクレオチドが１５〜３０量体である請求の範囲第２１項に記載の 方法。22. Claim 21, wherein the oligonucleotide is a 15-30 mer. Method. ２３．オリゴヌクレオチドが１８〜２６量体である請求の範囲第２２項に記載の 方法。23. Claim 22, wherein the oligonucleotide is a 18-26 mer. Method. ２４．オリゴヌクレオチドが１８〜２１量体である請求の範囲第２３項に記載の 方法。24. Claim 23, wherein the oligonucleotide is an 18-21 mer. Method. ２５．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５ よりなる群から選択されるヌクレオチド／ヌクレオシド配列を有する未改変オリ ゴデオキシヌクレオチド、ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドもし くはメチルホスホネートオリゴデオキシヌクレオシドである請求の範囲第２２項 に記載の方法。25. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 25 an unmodified oligonucleotide having a nucleotide/nucleoside sequence selected from the group consisting of Godeoxynucleotides, phosphorothioate oligodeoxynucleotides Claim 22 is a methylphosphonate oligodeoxynucleoside. The method described in. ２６．オリゴヌクレオチドがヌクレオチド配列ＳＥＱＩＤＮＯ：２２を有する請 求の範囲第２５項に記載の方法。26. The oligonucleotide has the nucleotide sequence SEQ ID NO: 22. Scope of Claim 25. The method according to item 25. ２７．オリゴヌクレオチドがヌクレオチド配列ＳＥＱＩＤＮＯ：１６を有する請 求の範囲第２５項に記載の方法。27. The oligonucleotide has the nucleotide sequence SEQ ID NO: 16. Scope of Claim 25. The method according to item 25. ２８．ヒトｃ−ｍｙｂ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも１部に相補的なヌク レオチド配列を有し、かつ前記ｍＲＮＡ転写物にハイブリダイズしうるオリゴヌ クレオチドの、黒色腫を処置する薬物を製造するための使用。28. A nucleic acid complementary to at least a portion of the mRNA transcript of the human c-myb gene an oligonucleotide having a leotide sequence and capable of hybridizing to the mRNA transcript; Use of cleotide to manufacture a drug to treat melanoma. ２９．オリゴヌクレオチドが少なくとも１２量体である請求の範囲第２８項に記 載の使用。29. Claim 28, wherein the oligonucleotide is at least a dodecamer. Use of listed. ３０．オリゴヌクレオチドがメチルホスホネートオリゴヌクレオシドもしくはホ スホロチオエートオリゴヌクレオチドである請求の範囲第２９項に記載の使用。30. If the oligonucleotide is a methylphosphonate oligonucleoside or The use according to claim 29, which is a sulforthioate oligonucleotide. ３１．オリゴヌクレオチドが、翻訳開始コドンの約４０ヌクレオチド内に存在す るｃ−ｍｙｂｍＲＮＡの１部に相補的なヌクレオチド配列を有する請求の範囲第 ２９項に記載の使用。31. The oligonucleotide is within approximately 40 nucleotides of the translation initiation codon. Claim 1, which has a nucleotide sequence complementary to a part of c-myb mRNA. Uses as described in Section 29. ３２．オリゴヌクレオチドが、転写物の翻訳開始コドンおよび／またはこの開始 コドンの直ぐ下流のコドンを含むｃ−ｍｙｂｍＲＮＡ転写物の１部に相補的なデ オキシヌクレオチド配列を有するオリゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲 第２９項に記載の使用。32. The oligonucleotide is located at the translation start codon of the transcript and/or at this start codon. A fragment complementary to the portion of the c-myb mRNA transcript containing the codon immediately downstream of the codon. The claim is an oligodeoxynucleotide having an oxynucleotide sequence. Uses as described in Section 29. ３３．オリゴヌクレオチドが１２〜４０量体オリゴデオキシヌクレオチドからな る請求の範囲第２９項に記載の使用。33. The oligonucleotide is composed of 12- to 40-mer oligodeoxynucleotides. The use according to claim 29. ３４．オリゴヌクレオチドがメチルホスホネートオリゴヌクレオシドもしくはホ スホロチオエートオリゴヌクレオチドである請求の範囲第３３項に記載の使用。34. If the oligonucleotide is a methylphosphonate oligonucleoside or 34. The use according to claim 33, which is a sulforothioate oligonucleotide. ３５．オリゴヌクレオチドが１５〜３０量体である請求の範囲第３３項に記載の 使用。35. Claim 33, wherein the oligonucleotide is a 15-30 mer. use. ３６．オリゴヌクレオチドが１８〜２６量体である請求の範囲第３５項に記載の 使用。36. Claim 35, wherein the oligonucleotide is a 18-26 mer. use. ３７．オリゴヌクレオチドが１８〜２１量体である請求の範囲第３６項に記載の 使用。37. Claim 36, wherein the oligonucleotide is an 18-21 mer. use. ３８．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３ よりなる群から選択されるオリゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲第３５ 項に記載の使用。38. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 13 Claim 35 is an oligodeoxynucleotide selected from the group consisting of Uses as described in Section. ３９．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５ よりなる群から選択されるオリゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲第３５ 項に記載の使用。39. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 25 Claim 35 is an oligodeoxynucleotide selected from the group consisting of Uses as described in Section. ４０．オリゴヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：２２からなる請求の範囲第３９項 に記載の使用。40. Claim 39: The oligonucleotide consists of SEQ ID NO: 22. Uses as described in. ４１．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４もしくは ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５ のいずれかに対応するヌクレオチド／ヌクレオシド配列を有するホスホロチオエ ートオリゴデオキシヌクレオチドもしくはメチルホスホネートオリゴデオキシヌ クレオシドである請求の範囲第３５項に記載の使用。41. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 25 Phosphorothioe with a nucleotide/nucleoside sequence corresponding to either oligodeoxynucleotide or methylphosphonate oligodeoxynucleotide The use according to claim 35, which is a creoside. ４２．オリゴヌクレオチドがホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドか らなる請求の範囲第４１項に記載の使用。42. Is the oligonucleotide a phosphorothioate oligodeoxynucleotide? The use according to claim 41 consisting of: ４３．ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：１６ に対応するヌクレオチド配列を有する請求の範囲第４２項に記載の使用。43. Phosphorothioate oligodeoxynucleotide is SEQ ID NO: 16 43. The use according to claim 42, having a nucleotide sequence corresponding to. ４４．医薬上許容しうるキャリヤと、ヒトｃ−ｍｙｂ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の 少なくとも１部に相補的なヌクレオチド配列を有し且つ前記ｍＲＮＡ転写物にハ ィブリダイズしうるオリゴヌクレオチドとからなることを特徴とする、黒色腫を 処置するための組成物。44. a pharmaceutically acceptable carrier and an mRNA transcript of the human c-myb gene. has a nucleotide sequence complementary to at least a portion thereof and has a nucleotide sequence complementary to the mRNA transcript; melanoma, which is characterized by being composed of hybridizable oligonucleotides. Composition for treatment. ４５．オリゴヌクレオチドが少なくとも１２量体である請求の範囲第４４項に記 載の組成物。45. Claim 44, wherein the oligonucleotide is at least a dodecamer. composition. ４６．オリゴヌクレオチドがメチルホスホネートオリゴヌクレオシドもしくはホ スホロチオエートオリゴヌクレオチドである請求の範囲第４５項に記載の組成物 。46. If the oligonucleotide is a methylphosphonate oligonucleoside or The composition according to claim 45, which is a sulforothioate oligonucleotide. . ４７．オリゴヌクレオチドが、翻訳開始コドンの約４０ヌクレオチド内に存在す るｃ−ｍｙｂｍＲＮＡの１部に相補的なヌクレオチド配列を有する請求の範囲第 ４５項に記載の組成物。47. The oligonucleotide is within approximately 40 nucleotides of the translation initiation codon. Claim 1, which has a nucleotide sequence complementary to a part of c-myb mRNA. Composition according to item 45. ４８．オリゴヌクレオチドが、転写物の翻訳開始コドンおよび／またはこの開始 コドンの直ぐ下流のコドンを含むｃ−ｍｙｂｍＲＮＡ転写物の１部に相補的なオ リゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲第４５項に記載の組成物。48. The oligonucleotide is located at the translation start codon of the transcript and/or at this start codon. An oligonucleotide complementary to the portion of the c-myb mRNA transcript containing the codon immediately downstream of the codon 46. The composition of claim 45, which is a oligodeoxynucleotide. ４９．オリゴヌクレオチドが１２〜４０量体オリゴデオキシヌクレオチドからな る請求の範囲第４５項に記載の組成物。49. The oligonucleotide is composed of 12- to 40-mer oligodeoxynucleotides. 46. The composition according to claim 45. ５０．オリゴヌクレオチドがメチルホスホネートオリゴヌクレオシドもしくはホ スホロチオエートオリゴヌクレオチドである請求の範囲第４９項に記載の組成物 。50. If the oligonucleotide is a methylphosphonate oligonucleoside or The composition according to claim 49, which is a sulforothioate oligonucleotide. . ５１．オリゴヌクレオチドが１５〜３０量体である請求の範囲第４９項に記載の 組成物。51. Claim 49, wherein the oligonucleotide is a 15-30 mer. Composition. ５２．オリゴヌクレオチドが１８〜２６量体である請求の範囲第５１項に記載の 組成物。52. Claim 51, wherein the oligonucleotide is an 18-26 mer. Composition. ５３．オリゴヌクレオチドが１８〜２１量体である請求の範囲第５２項に記載の 組成物。53. Claim 52, wherein the oligonucleotide is an 18-21 mer. Composition. ５４．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３ よりなる群から選択されるオリゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲第５１ 項に記載の組成物。54. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 and SEQ ID NO: 13 Claim 51, which is an oligodeoxynucleotide selected from the group consisting of The composition described in Section. ５５．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４および ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５ よりなる群から選択されるオリゴデオキシヌクレオチドである請求の範囲第５１ 項的記載の組成物。55. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 25 Claim 51, which is an oligodeoxynucleotide selected from the group consisting of Composition as described in Section. ５６．オリゴヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：２２からなる請求の範囲第５５項 に記載の組成物。56. Claim 55: The oligonucleotide consists of SEQ ID NO: 22. The composition described in . ５７．オリゴヌクレオチドが： ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１６、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３、 ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４もしくは ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２５ のいずれか的対応するヌクレオチド／ヌクレオシド配列を有するホスホロチオエ ートオリゴデオキシヌクレオチドもしくはメチルホスホネートオリゴデオキシヌ クレオシドである請求の範囲第５１項に記載の組成物。57. The oligonucleotide: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 25 Phosphorothioe with the corresponding nucleotide/nucleoside sequence of either oligodeoxynucleotide or methylphosphonate oligodeoxynucleotide 52. The composition of claim 51, which is a creoside. ５８．オリゴヌクレオチドがホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドか らなる請求の範囲第５７項に記載の組成物。58. Is the oligonucleotide a phosphorothioate oligodeoxynucleotide? 58. The composition of claim 57, comprising: ５９．ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮＯ：１６ に対応するヌクレオチド配列を有する請求の範囲第５８項に記載の組成物。59. Phosphorothioate oligodeoxynucleotide is SEQ ID NO: 16 59. A composition according to claim 58, having a nucleotide sequence corresponding to.