JPH07330770A - Purine derivative and treating agent containing the derivative as active component - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain a new purine derivative suitable for continuous or long-term oral administration, exhibiting the action to inhibit the adhesion of leukocyte such as mature granulocyte to a tissue cell and effective especially for the treatment of inflammatory diseases such as rheumatism, autoimmune diseases and graft versus host diseases. CONSTITUTION:This purine derivative(salt) is expressed by formula I (R1 and R2 are each H or a 1-4C alkyl), e.g. 6-amino-9-benzyl-8bromopurine. The derivative can be produced e.g. by reacting 9-benzyl-6-chloropurine of formula II with an amine of the formula R1-NH-R2 in a solvent such as ethanol, dissolving the obtained 6-(alkyl)amino-9-benzyl-purine in sodium acetate and dropping bromine water to the solution.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、新規なプリン誘導体及
びそれを有効成分とする治療剤に関する。特に本発明の
プリン誘導体は、白血球接着阻害剤、或は炎症性疾患治
療剤として有用である。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel purine derivative and a therapeutic agent containing the same as an active ingredient. Particularly, the purine derivatives of the present invention are useful as leukocyte adhesion inhibitors or therapeutic agents for inflammatory diseases.

【０００２】[0002]

【従来の技術】リウマチ、腎炎、全身性エリテマトーデ
ス〔Systemic lupus erythematosus (SLE)〕などの自己
免疫疾患、臓器移植時の拒絶反応として知られる移植片
対宿主病（ＧＶＨＤ）、喘息や皮膚炎などのアレルギ−
疾患、変形性膝関節症などの慢性炎症、更には心筋梗塞
後の血液再潅流時の傷害など、これらの疾患は、何れも
患部組織における白血球、特には好中球が炎症の主因と
なる炎症性疾患である。種々の炎症の場においては、Ｐ
ＡＦ、ＬＴＢ₄ などの好中球遊走因子の刺激により、血
液中の好中球が炎症部位へと遊走することが知られてい
る。次に、炎症部位において、標的細胞への好中球の接
着が起こる。この好中球が標的細胞へ接着する過程で
は、好中球細胞上のＬＦＡ-1などの接着分子と、標的細
胞となる内皮細胞上のＩＣＡＭ-1などのリガンドとが結
合することで接着が起こることが報告されている（Dust
in et al., J. Immunology, 137, 245-254 (1986) また
はRothlein et al., J. Immunology, 137, 1270-1274
(1986) 等を参照）。炎症は、この接着した好中球が放
出する活性酸素、プロテア−ゼなどの起炎物質により、
炎症部位の細胞が損傷を受け起こると考えられている。BACKGROUND OF THE INVENTION Autoimmune diseases such as rheumatism, nephritis, and systemic lupus erythematosus (SLE), graft-versus-host disease (GVHD) known as rejection during organ transplantation, asthma and dermatitis. Allergic
Diseases, chronic inflammation such as osteoarthritis, and further injury during blood reperfusion after myocardial infarction, all of these diseases are caused by leukocytes in affected tissues, especially neutrophils. It is a sexually transmitted disease. In various inflammation sites, P
It is known that neutrophils in blood migrate to an inflammation site by stimulation of neutrophil chemotactic factors such as AF and LTB ₄ . Adhesion of neutrophils to target cells then occurs at the site of inflammation. In the process of adhesion of neutrophils to target cells, adhesion molecules are bonded by binding of adhesion molecules such as LFA-1 on neutrophil cells with ligands such as ICAM-1 on endothelial cells that are target cells. It has been reported to happen (Dust
in et al., J. Immunology, 137, 245-254 (1986) or Rothlein et al., J. Immunology, 137, 1270-1274.
(1986) etc.). Inflammation is caused by active oxygen released by the adhered neutrophils, inflammatory substances such as protease,
It is believed that the cells at the site of inflammation are damaged and occur.

【０００３】なお、好中球の接着は、上記の接着分子が
ＰＡＦ、ＩＬ-8などの刺激物質により変化を受けると
き、その活性が増強されることが報告されている（玉谷
卓也ほか、実験医学、9, 318 (1991) を参照）。更に
は、好中球の接着活性は、ヒスタミン、トロンビンなど
の刺激によっても増強を受ける。It has been reported that the activity of neutrophil adhesion is enhanced when the above adhesion molecules are changed by stimulating substances such as PAF and IL-8 (Takuya Tamaya et al., Experimental Medicine, 9, 318 (1991)). Furthermore, the adhesive activity of neutrophils is also enhanced by stimulation with histamine, thrombin and the like.

【０００４】炎症の最初の過程である好中球の組織細胞
への接着を阻害することにより、炎症を抑制することが
可能であることは既に知られている。例えば、接着分子
ＬＦＡ-1やＩＣＡＭ-1に対する抗体は、リウマチなど
の自己免疫疾患の治療剤として研究開発されており、そ
れらの炎症を有効に抑制することが報告されている (J.
Immunology,147, 4167-4171 (1991) を参照) 。しかし
ながら、前記のＬＦＡ-1に対する抗体、或はＩＣＡＭ-1
に対する抗体は、治療剤として5 mg/kg 程度の高い用量
が必要であることが報告されている。これらの抗体は、
ポリペプチドであるため代謝による半減期が短く、薬効
を維持するに必要な用量を経口投与することは容易でな
い。また、特にリウマチの治療剤に限ると、経口投与が
可能な低分子量の化合物、例えばインドメタシンなどの
シクロオキシゲナ−ゼ阻害剤が有効で汎用されている
が、このインドメタシンなどは炎症患部のみならず消化
管のシクロオキシゲナ−ゼをも阻害してしまい、継続的
に服用するとき、高頻度で消化管に潰瘍をおこしてしま
う欠点を有するものである。It is already known that inflammation can be suppressed by inhibiting the adhesion of neutrophils to tissue cells, which is the first step of inflammation. For example, antibodies against the adhesion molecules LFA-1 and ICAM-1 have been researched and developed as therapeutic agents for autoimmune diseases such as rheumatism, and it has been reported that they effectively suppress inflammation (J.
Immunology, 147, 4167-4171 (1991)). However, the above-mentioned antibody against LFA-1, or ICAM-1
It has been reported that the antibody against E. coli requires a high dose of about 5 mg / kg as a therapeutic agent. These antibodies are
Since it is a polypeptide, it has a short half-life due to metabolism, and it is not easy to orally administer the dose required for maintaining drug efficacy. In addition, especially for therapeutic agents for rheumatism, orally administrable low molecular weight compounds, for example, cyclooxygenase inhibitors such as indomethacin are effective and widely used, but this indomethacin is not only in the affected area but also in the digestive tract. It also inhibits cyclooxygenase, and when it is continuously taken, it has a drawback that it frequently causes ulcers in the digestive tract.

【０００５】上記する炎症性疾患、例えば自己免疫疾
患、臓器移植時の拒絶反応として知られる移植片対宿主
病（ＧＶＨＤ）、アレルギー疾患、変形性膝関節症など
の慢性炎症などにおいては、治療剤の投与は継続的、或
は長期にわたるため、経口投与が可能な低分子量の化合
物を有効成分とする薬剤が望まれており、更には、炎症
の初期の過程において中心的な役割を果たす、好中球の
組織細胞への接着を主として阻害することにより薬効が
生ずる新たな薬剤が望まれている。即ち、継続的、或は
長期にわたる経口投与に適し、且つ主たる薬理効果が好
中球の組織細胞への接着阻害に起因する炎症性疾患の新
規な治療剤が要望されている。In the above-mentioned inflammatory diseases such as autoimmune diseases, graft-versus-host disease (GVHD) known as rejection at the time of organ transplantation, allergic diseases, and chronic inflammation such as osteoarthritis, etc., a therapeutic agent Since the administration of the drug is continuous or long-term, an orally administrable drug containing a low molecular weight compound as an active ingredient is desired, and further, it plays a central role in the early stage of inflammation. There is a need for new drugs that produce a medicinal effect mainly by inhibiting the adhesion of neutrophils to tissue cells. That is, a novel therapeutic agent for inflammatory diseases, which is suitable for continuous or long-term oral administration and whose main pharmacological effect is inhibition of adhesion of neutrophils to tissue cells, is desired.

【０００６】[0006]

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の課題を
解決するもので、本発明の目的は、継続的、或は長期に
わたる経口投与に適し、且つ主たる薬理効果として好中
球など白血球の組織細胞への接着阻害作用を有する新規
な化合物、特には低分子量の化合物を提供することにあ
る。更には、このような白血球の組成細胞への接着阻害
作用を有する新規な化合物、特に低分子量の化合物を有
効成分とする炎症性疾患の治療剤を提供することにあ
る。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention is to solve the above-mentioned problems, and an object of the present invention is to be suitable for continuous or long-term oral administration, and to obtain leukocytes such as neutrophils as a main pharmacological effect. It is an object of the present invention to provide a novel compound having an action of inhibiting adhesion to tissue cells, particularly a low molecular weight compound. Further, it is to provide a therapeutic agent for inflammatory diseases, which comprises a novel compound having an action of inhibiting the adhesion of leukocytes to the constituent cells, particularly a low molecular weight compound, as an active ingredient.

【０００７】[0007]

【課題を解決するための手段】かかる背景より、本発明
者らは接着阻害作用を有する低分子量の新規な化合物を
創製するべく鋭意研究を進めた結果、本発明を完成する
に至った。本発明の化合物は、下記の一般式（１）Against this background, the present inventors have completed the present invention as a result of intensive research to create a novel low molecular weight compound having an adhesion-inhibiting effect. The compound of the present invention has the following general formula (1):

【化２】 （式中、Ｒ₁ 及びＲ₂ は、それぞれ独立に水素原子、炭
素数１〜４の直鎖アルキル基、及び炭素数３又は４の分
枝状アルキル基からなる群より選ばれる基を示す。）で
表される化合物又はその医薬上許容可能な塩であるプリ
ン誘導体である。[Chemical 2] (In the formula, R ₁ and R ₂ each independently represent a group selected from the group consisting of a hydrogen atom, a linear alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and a branched alkyl group having 3 or 4 carbon atoms. And a purine derivative which is a pharmaceutically acceptable salt thereof.

【０００８】本発明における炭素数１〜４の直鎖アルキ
ルには、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基を
挙げることができる。また炭素数３又は４の分枝状アル
キル基には、イソプロピル基、セカンダリーブチル基、
ターシャルブチル基を挙げることができる。本発明にお
いて好ましい化合物として、前記の一般式（１）で表さ
れ、Ｒ₁ 及びＲ₂ のいずれかは水素原子であり、他は水
素原子又はメチル基であるプリン誘導体を挙げることが
できる。特に好ましい化合物として、６−アミノ−９−
ベンジル−８−ブロモプリン、６−メチルアミノ−９−
ベンジル−８−ブロモプリンを例示することができる。Examples of the straight-chain alkyl having 1 to 4 carbon atoms in the present invention include methyl group, ethyl group, propyl group and butyl group. Further, a branched alkyl group having 3 or 4 carbon atoms includes an isopropyl group, a secondary butyl group,
A tertiary butyl group can be mentioned. As a preferred compound in the present invention, a purine derivative represented by the above general formula (1) in which either R ₁ or R ₂ is a hydrogen atom and the other is a hydrogen atom or a methyl group can be mentioned. A particularly preferred compound is 6-amino-9-
Benzyl-8-bromopurine, 6-methylamino-9-
Benzyl-8-bromopurine can be exemplified.

【０００９】なお、本発明のプリン誘導体において、そ
の医薬上許容可能な塩の好適な例としては、薬理的に許
容される酸との塩である、塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩、臭
化水素塩、リン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマ
ル酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、メタンスルホン酸
塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩など、及び薬理的に許容
されるカチオンを含む塩である、ナトリウム塩、カリウ
ム塩、カルシウム塩などを例示できる。また、上記する
医薬上許容可能な塩は、該誘導体と、対応する酸、或は
対応するカチオンを含む塩基とを混合し、再結晶等の手
段により調製することができる。In the purine derivative of the present invention, preferable examples of the pharmaceutically acceptable salt thereof include salts with pharmacologically acceptable acids such as hydrochloride, sulfate, acetate and bromide. Includes hydrogen salts, phosphates, succinates, maleates, fumarates, citrates, gluconates, methanesulfonates, p-toluenesulfonates, and the like, and pharmacologically acceptable cations. Examples of salts include sodium salt, potassium salt, calcium salt and the like. The above-mentioned pharmaceutically acceptable salt can be prepared by a method such as recrystallization by mixing the derivative with a corresponding acid or a base containing a corresponding cation.

【００１０】また、本発明は、上記するプリン誘導体を
有効成分とする白血球接着阻害剤であり、更には、上記
するプリン誘導体を有効成分とする炎症性疾患の治療
剤、特には、リウマチ、腎炎、自己免疫疾患、又は移植
片対宿主病の何れかの炎症性疾患の治療剤である。な
お、本発明の治療剤は、静注、筋注、坐剤、貼付剤等の
非経口製剤とすることもできるが、経口投与製剤に調製
するのが最も合目的であり、錠剤、カプセル剤、散剤な
どの剤形とすることが好ましい。そして経口投与製剤に
汎用されるラクト−ス、グルコ−スなどの賦形剤、ステ
アリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤などととも
に慣用の手段によって製剤とすることができる。更に
は、経口投与に適するその他の形態、例えば液剤などと
して、投与してもよい。また、上記するプリン誘導体の
有効用量ならびに投与回数は、患者の体重、年令、症状
に応じて適宜定めるものであるが、通常１日当たり１〜
１００ｍｇ／ｋｇを１回〜数回に分けて投与するのが望
ましい。The present invention is also a leukocyte adhesion inhibitor containing the above purine derivative as an active ingredient, and further a therapeutic agent for inflammatory diseases containing the above purine derivative as an active ingredient, particularly rheumatism and nephritis. , An autoimmune disease or a graft-versus-host disease inflammatory disease. The therapeutic agent of the present invention can be a parenteral preparation such as an intravenous injection, an intramuscular injection, a suppository, and a patch, but it is most purposeful to prepare an oral administration preparation, and tablets and capsules. It is preferable to use a dosage form such as a powder. Then, it can be prepared into a preparation by a conventional means together with an excipient such as lactose or glucose commonly used for orally administered preparations, and a lubricant such as magnesium stearate or talc. Furthermore, it may be administered in other forms suitable for oral administration, such as a liquid preparation. The effective dose of the above-mentioned purine derivative and the number of administrations are appropriately determined depending on the body weight, age, and symptoms of the patient, but usually 1 to 1 times per day.
It is desirable to administer 100 mg / kg in one to several divided doses.

【００１１】上記の一般式（１）で表される化合物は、
下記の合成方法により調製することができる。先ず、６
−（アルキルアミノ）−９−ベンジルプリン類の公知の
合成方法（J. Heterocyclic Chem., 23, 1189-1193 (19
86) 或は J. Med. Chem., 31, 616-612 (1988) 並びに
前記文献に記載する参照文献 を参照）に準じて、一
旦、中間原料として式（２）に示す９−ベンジル−６−
クロロプリンを合成し、該中間原料と一般式（３）に示
すアミンとを反応させ、６位のクロル原子がアミノ基と
置換してなる６−アミノ置換体、一般式（４）に示すプ
リン誘導体である、６−（アルキルアミノ）−９−ベン
ジル−プリン類或は６−アミノ−９−ベンジル−プリン
を合成する。次に、一般式（４）に示すプリン誘導体を
臭素水と処理し、８位に臭素原子が置換してなる、一般
式（１）で表されるプリン誘導体を合成することができ
る。The compound represented by the above general formula (1) is
It can be prepared by the following synthetic method. First, 6
Known synthesis method of-(alkylamino) -9-benzylpurines (J. Heterocyclic Chem., 23, 1189-1193 (19
86) or J. Med. Chem., 31, 616-612 (1988) and the references described in the above document)), and once used as an intermediate material, 9-benzyl-6 represented by the formula (2). −
Chloropurine is synthesized, the intermediate raw material is reacted with the amine represented by the general formula (3), and the 6-amino substitution product obtained by substituting the chloro atom at the 6-position with an amino group, the purine represented by the general formula (4). A derivative, 6- (alkylamino) -9-benzyl-purine or 6-amino-9-benzyl-purine, is synthesized. Then, the purine derivative represented by the general formula (4) is treated with bromine water to synthesize a purine derivative represented by the general formula (1) in which a bromine atom is substituted at the 8-position.

【００１２】[0012]

【化３】 [Chemical 3]

【００１３】[0013]

【化４】 式中、Ｒ₁ 及びＲ₂ は、それぞれ上記の一般式（１）と
同じ基を示す。）[Chemical 4] In the formula, R ₁ and R ₂ each represent the same group as in the above general formula (1). )

【００１４】[0014]

【化５】 （式中、Ｒ₁ 及びＲ₂ は、それぞれ上記の一般式（１）
と同じ基を示す。）[Chemical 5] (In the formula, R ₁ and R ₂ are each represented by the general formula (1) above.
Shows the same group as. )

【００１５】次に合成工程の要点を簡単に述べる。工程１ 〔５−アミノ−６−ベンジルアミノ−４−クロロピリミ
ジンの調製〕５−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン
の１量、等モル量のベンジルアミン、及びトリエチルア
ミンなどのトリアルキルアミンを等モル量より若干過剰
の量を１−ブタノ−ルに溶解し、得られる溶液を加熱還
流する。所定の時間経過後、該溶液を放冷し、反応生成
物５−アミノ−６−ベンジルアミノ−４−クロロピリミ
ジンの結晶を析出させる。この結晶を濾別し、適宜洗浄
した後、乾燥し回収する。Next, the main points of the synthesis process will be briefly described. Step 1 [Preparation of 5-amino-6-benzylamino-4-chloropyrimidine] One amount of 5-amino-4,6-dichloropyrimidine, an equimolar amount of benzylamine, and an equimolar amount of a trialkylamine such as triethylamine. A slight excess of the amount is dissolved in 1-butanol, and the resulting solution is heated to reflux. After a lapse of a predetermined time, the solution is allowed to cool to precipitate crystals of the reaction product 5-amino-6-benzylamino-4-chloropyrimidine. The crystals are separated by filtration, washed appropriately, dried and collected.

【００１６】工程２ 〔９−ベンジル−６−クロロプリンの調製〕５−アミノ
−６−ベンジルアミノ−４−クロロピリミジンの１量、
大過剰量のオルトギ酸エチル（HC(OEt)₃）、及び触媒量
のエタンスルホン酸（EtSO₃H）を混合し、得られる液を
室温で所定の時間撹拌する。その後、減圧濃縮し、残留
する反応生成物を酢酸エチルに溶解し、５％ 炭酸水素
ナトリウム水溶液、水、食塩水を順次用いて洗浄する。
この反応生成物を溶解する酢酸エチル溶液を減圧蒸留
し、残渣として得られる反応生成物９−ベンジル−６−
クロロプリンを適宜洗浄した後、乾燥し回収する。 Step 2 [Preparation of 9-benzyl-6-chloropurine] One amount of 5-amino-6-benzylamino-4-chloropyrimidine,
A large excess of ethyl orthoformate (HC (OEt) ₃ ) and a catalytic amount of ethanesulfonic acid (EtSO ₃ H) are mixed, and the resulting solution is stirred at room temperature for a given time. Then, the reaction mixture is concentrated under reduced pressure, the remaining reaction product is dissolved in ethyl acetate, and the mixture is washed successively with 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution, water and brine.
An ethyl acetate solution in which this reaction product is dissolved is distilled under reduced pressure to obtain a reaction product 9-benzyl-6-
After washing chloropurine appropriately, it is dried and collected.

【００１７】工程３ 〔６−（アルキルアミノ）−９−ベンジルプリンの調
製〕式（２）に示す９−ベンジル−６−クロロプリンの
１量と、一般式（３）に示すアミンの過剰量をエタノ−
ルに溶解し、得られる液を室温で所定の時間撹拌する。
その後、溶媒エタノ−ルを減圧留去し、次に残渣に水を
加えた後、酢酸エチルなどで反応生成物を溶媒抽出す
る。減圧留去などの汎用の手段により、反応生成物を単
離し、必要に応じて洗浄乾燥して、反応生成物の一般式
（４）に示す６−（アルキルアミノ）−９−ベンジルプ
リンを回収する。 Step 3 [Preparation of 6- (alkylamino) -9-benzylpurine] One amount of 9-benzyl-6-chloropurine represented by the formula (2) and an excess amount of the amine represented by the general formula (3). Etano
The resulting solution is stirred at room temperature for a predetermined time.
Then, the solvent ethanol is distilled off under reduced pressure, water is added to the residue, and then the reaction product is subjected to solvent extraction with ethyl acetate or the like. The reaction product is isolated by a general-purpose means such as distillation under reduced pressure, and if necessary, washed and dried to recover 6- (alkylamino) -9-benzylpurine represented by the general formula (4) as the reaction product. To do.

【００１８】なお、一般式（４）において、Ｒ₁ 及びＲ
₂ がともに水素原子である６−アミノ−９−ベンジルプ
リンは、一般式（３）に示すアミンとしてアンモニアを
用いて、反応液を、例えば１２０℃のオ−トクレ−ブ中
で加熱し、塩素原子をアミノ基と置き換えることができ
る。In the general formula (4), R ₁ and R
6-Amino-9-benzylpurine in which ₂ is both hydrogen atoms is prepared by heating the reaction solution in an autoclave at 120 ° C. using ammonia as the amine represented by the general formula (3). Atoms can be replaced with amino groups.

【００１９】工程４ 〔６−（アルキルアミノ）−９−ベンジル−８−ブロモ
プリンの調製〕一般式（４）に示す６−（アルキルアミ
ノ）−９−ベンジルプリンの１量と過剰量の酢酸ナトリ
ウムとを溶解する酢酸溶液に、氷冷下過剰量の臭素水を
滴下混合する。次に、この液を加熱撹拌する。所定の時
間経過後、該溶液を放冷し、溶媒酢酸を減圧留去し、次
に残渣に酢酸エチルなどで反応生成物を溶解し、濾過し
た濾液を回収する。この濾液を飽和炭酸水素ナトリウム
水溶液、水を順次用いて洗浄し、溶媒酢酸エチルを減圧
留去し、更に乾燥して目的とする一般式（１）に示す６
−（アルキルアミノ）−９−ベンジル−８−ブロモプリ
ンを回収する。 Step 4 [Preparation of 6- (alkylamino) -9-benzyl-8-bromopurine] One amount of 6- (alkylamino) -9-benzylpurine represented by the general formula (4) and an excess amount of acetic acid. An excess amount of bromine water is added dropwise to an acetic acid solution that dissolves sodium under ice cooling. Next, this liquid is heated and stirred. After a lapse of a predetermined time, the solution is allowed to cool, the solvent acetic acid is distilled off under reduced pressure, then the reaction product is dissolved in ethyl acetate or the like, and the filtered filtrate is recovered. The filtrate is washed successively with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and water, the solvent ethyl acetate is distilled off under reduced pressure, and dried to give the desired compound represented by the general formula (1) 6
The-(alkylamino) -9-benzyl-8-bromopurine is recovered.

【００２０】なお、上記する一般式（４）に示す６−
（アルキルアミノ）−９−ベンジルプリン及びそのベン
ジル基のベンゼン環に種々の置換を有するプリン誘導体
は、本発明の化合物と類似するものであり、前記の参照
文献 J. Med. Chem., 31, 606-612 (1988)に記載されて
いる。これら８位に臭素原子の置換を有さないプリン誘
導体類は、抗けいれん作用、特には電撃ショックよるけ
いれん（発作）に対する抗けいれん作用を有することが
示されているが、自己免疫疾患などの炎症性疾患に対す
る作用に関する報告は見当らない。It should be noted that 6-in the above general formula (4)
(Alkylamino) -9-benzylpurine and purine derivatives having various substitutions on the benzene ring of the benzyl group are similar to the compounds of the present invention and are described in the above-mentioned reference J. Med. Chem., 31, 606-612 (1988). These purine derivatives having no substitution of the bromine atom at the 8-position have been shown to have anticonvulsant action, particularly anticonvulsant action against convulsions (seizures) caused by electric shock. There are no reports of effects on sexually transmitted diseases.

【００２１】本発明のプリン誘導体は、前記の一般式
（４）に示す６−（アルキルアミノ）−９−ベンジルプ
リン及びそのベンジル基のベンゼン環に種々の置換を有
するプリン誘導体とは、８位に臭素原子の置換を有する
点において明確な構造上の違いを持ち、下記の実施例に
示すように、主たる薬理効果として好中球の組織細胞へ
の接着阻害作用を有するので、広範囲の炎症性疾患の治
療に有用な薬剤となる。特には、リウマチ、腎炎、自己
免疫疾患、又は移植片対宿主病の何れかの炎症性疾患の
治療に用いて好適な、更には、継続的、或は長期にわた
る経口投与に適する治療剤となる。The purine derivative of the present invention is at the 8-position from the 6- (alkylamino) -9-benzylpurine represented by the general formula (4) and the purine derivative having various substitutions on the benzene ring of the benzyl group. Has a clear structural difference in that it has a substitution of a bromine atom, and as shown in the examples below, it has an inhibitory effect on the adhesion of neutrophils to tissue cells as a main pharmacological effect, and thus has a wide range of inflammatory properties. It is a useful drug for treating diseases. In particular, it is a therapeutic agent suitable for use in the treatment of inflammatory disease such as rheumatism, nephritis, autoimmune disease, or graft-versus-host disease, and further suitable for continuous or long-term oral administration. .

【００２２】次に、本発明を実施例を挙げて、具体的に
説明する。Next, the present invention will be specifically described with reference to examples.

【実施例１】 〔６−アミノ−９−ベンジル−８−ブロモプリン〕上記
の一般式（１）において、Ｒ₁ 及びＲ₂ がともに水素原
子である６−アミノ−９−ベンジル−８−ブロモプリン
を、下記する工程に従い合成した。Example 1 [6-Amino-9-benzyl-8-bromopurine] 6-amino-9-benzyl-8-bromo in which, in the general formula (1), R ₁ and R ₂ are both hydrogen atoms. Purines were synthesized according to the steps described below.

【００２３】〔工程１．１〕 ９−ベンジル−６−クロ
ロプリンの調製 中間原料となる９−ベンジル−６−クロロプリンを下記
の手順で合成した。５−アミノ−４，６−ジクロロピリ
ミジン 60.0 g ( 0.36 mol) 、ベンジルアミン 39.1 g
( 0.36 mol) 、及びトリエチルアミン 38.0 g ( 0.38 m
ol) を１−ブタノ−ル 700 ml に溶解し、得られる溶液
を一晩( 約 18 時間 )加熱還流する。その後、該溶液を
放冷し、反応生成物５−アミノ−６−ベンジルアミノ−
４−クロロピリミジンの結晶を析出させた。この結晶を
濾取乾燥し、５−アミノ−６−ベンジルアミノ−４−ク
ロロピリミジンの結晶を回収した。回収した５−アミノ
−６−ベンジルアミノ−４−クロロピリミジンの乾燥後
重量は、 77.8 g であり、原料の５−アミノ−４，６−
ジクロロピリミジンに対する収率は 92 ％ であった。[Step 1.1] 9-benzyl-6-chloro
Preparation of lopurine 9-benzyl-6- chloropurine as an intermediate raw material was synthesized by the following procedure. 5-amino-4,6-dichloropyrimidine 60.0 g (0.36 mol), benzylamine 39.1 g
(0.36 mol), and triethylamine 38.0 g (0.38 m
ol) is dissolved in 700 ml of 1-butanol and the resulting solution is heated to reflux overnight (about 18 hours). Then, the solution is allowed to cool and the reaction product 5-amino-6-benzylamino-
Crystals of 4-chloropyrimidine were precipitated. The crystals were collected by filtration and dried to collect 5-amino-6-benzylamino-4-chloropyrimidine crystals. The weight of the recovered 5-amino-6-benzylamino-4-chloropyrimidine after drying was 77.8 g, and the starting material 5-amino-4,6-
The yield based on dichloropyrimidine was 92%.

【００２４】前記の方法で得られた５−アミノ−６−ベ
ンジルアミノ−４−クロロピリミジン 77.8 g ( 0.33 m
ol) 、オルトギ酸エチル（HC(OEt)₃） 664 ml ( 7.4 mo
l)、及びエタンスルホン酸（EtSO₃H） 602 mg ( 0.6 mm
ol) を混合し、得られる液を室温で一晩( 約 18 時間 )
撹拌した。その後、減圧濃縮し、残留する反応生成物を
酢酸エチルに溶解し、５％ 炭酸水素ナトリウム水溶
液、水、食塩水を順次用いて洗浄した。この酢酸エチル
溶液を減圧蒸留し、残渣として反応生成物９−ベンジル
−６−クロロプリンが得られた。更に乾燥した後、９−
ベンジル−６−クロロプリン 67.8 g が回収でき、原料
の５−アミノ−６−ベンジルアミノ−４−クロロピリミ
ジンに対する収率は 84 ％ であった。5-Amino-6-benzylamino-4-chloropyrimidine obtained by the above method 77.8 g (0.33 m
ol), ethyl orthoformate (HC (OEt) ₃ ) 664 ml (7.4 mo
l) and ethanesulfonic acid (EtSO ₃ H) 602 mg (0.6 mm
ol) and mix the resulting solution at room temperature overnight (about 18 hours).
It was stirred. Then, the mixture was concentrated under reduced pressure, the remaining reaction product was dissolved in ethyl acetate, and the mixture was washed with 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution, water and brine in this order. The ethyl acetate solution was distilled under reduced pressure to obtain a reaction product 9-benzyl-6-chloropurine as a residue. After further drying, 9-
67.8 g of benzyl-6-chloropurine could be recovered, and the yield was 84% based on the starting material 5-amino-6-benzylamino-4-chloropyrimidine.

【００２５】〔工程１．２〕 ６−アミノ−９−ベンジ
ル−８−ブロモプリンの調製 中間原料となる９−ベンジル−６−クロロプリンを用
い、下記の手順で合成した。[Step 1.2] 6-amino-9-benzyl
Preparation of lu-8-bromopurine Using 9-benzyl-6-chloropurine as an intermediate raw material, it was synthesized by the following procedure.

【００２６】中間原料の９−ベンジル−６−クロロプリ
ン 17.0 g ( 70 mmol) を、予めアンモニア 123 g (
7.2 mol) を吹き込み溶解したエタノ−ル 1100 mlに加
え、オ−トクレ−ブ中で１２０℃、４８時間加熱撹拌し
た。その後、室温に冷却し、反応生成物の結晶を析出さ
せた。析出する結晶を濾取し、溶媒メタノ−ルを用いて
再結晶し精製した。精製後、６−アミノ−９−ベンジル
プリンの乾燥重量として、 16.6 g が回収でき、中間原
料の９−ベンジル−６−クロロプリンに対する収率は 9
9 ％であった。17.0 g (70 mmol) of 9-benzyl-6-chloropurine as an intermediate raw material was previously mixed with 123 g of ammonia (
7.2 mol) was blown in and added to 1100 ml of dissolved ethanol, and the mixture was heated and stirred in an autoclave at 120 ° C. for 48 hours. Then, it cooled to room temperature and the crystal | crystallization of the reaction product was deposited. The precipitated crystals were collected by filtration, recrystallized with a solvent methanol and purified. After purification, 16.6 g was recovered as the dry weight of 6-amino-9-benzylpurine, and the yield was 9 based on 9-benzyl-6-chloropurine as an intermediate raw material.
It was 9%.

【００２７】６−アミノ−９−ベンジルプリン 10.0 g
( 42 mmol)と酢酸ナトリウム 67.4g ( 0.80 mol) を酢
酸 385 ml に溶解した。この溶液に氷冷下、臭素水 90.
1 g(Br₂ : 0.56 mol)を滴下混合した。次に、この液を
７０℃、１．５時間加熱撹拌した。その後、該溶液を放
冷し、溶媒酢酸を減圧留去し、次に残渣に酢酸エチルを
加えて反応生成物を溶解し、濾過した濾液を回収した。
この濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水を順次用
いて洗浄した。溶媒酢酸エチルを減圧留去し、更に乾燥
して目的とする６−アミノ−９−ベンジル−８−ブロモ
プリンを回収した。回収した６−アミノ−９−ベンジル
−８−ブロモプリンは、 6.7 gであり、原料の６−アミ
ノ−９−ベンジルプリンに対する収率は 50 ％ であっ
た。6-amino-9-benzylpurine 10.0 g
(42 mmol) and 67.4 g (0.80 mol) of sodium acetate were dissolved in 385 ml of acetic acid. Brominated water 90.
1 g (Br ₂ : 0.56 mol) was added dropwise and mixed. Next, this liquid was heated and stirred at 70 ° C. for 1.5 hours. Then, the solution was allowed to cool, the solvent acetic acid was distilled off under reduced pressure, ethyl acetate was added to the residue to dissolve the reaction product, and the filtered filtrate was recovered.
The filtrate was washed successively with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and water. The solvent ethyl acetate was distilled off under reduced pressure, and the residue was further dried to recover the target 6-amino-9-benzyl-8-bromopurine. The amount of 6-amino-9-benzyl-8-bromopurine recovered was 6.7 g, and the yield based on the starting material 6-amino-9-benzylpurine was 50%.

【００２８】上記の工程に従い調製された６−アミノ−
９−ベンジル−８−ブロモプリンは、下記の物性を示し
た。ＮＭＲスペクトル ¹ H-NMR δ ppm (DMSO-d₆) : 5.28 (2H,s : -CH₂-) ,
7.23 (5H,s : -C₆H₅) ,7.36 (2H,s : -NH₂) , 8.11 (1
H,s)6-amino-prepared according to the above steps
9-benzyl-8-bromopurine exhibited the following physical properties. NMR spectrum ¹ H-NMR δ ppm (DMSO-d ₆ ): 5.28 (2H, s: -CH _2- ),
7.23 (5H, s: -C ₆ H ₅ ), 7.36 (2H, s: -NH ₂ ), 8.11 (1
H, s)

【００２９】[0029]

【実施例２】 〔９−ベンジル−８−ブロモ−６−メチルアミノプリ
ン〕上記の一般式（１）において、Ｒ₁ 及びＲ₂ の一つ
が水素原子で、他の一つがメチル基ある９−ベンジル−
８−ブロモ−６−メチルアミノプリンを、下記する工程
に従い合成した。Example 2 [9-Benzyl-8-bromo-6-methylaminopurine] In the above general formula (1), one of R ₁ and R ₂ is a hydrogen atom and the other is a methyl group 9- Benzyl-
8-Bromo-6-methylaminopurine was synthesized according to the steps described below.

【００３０】上記の〔工程１．１〕に従い調製した中間
原料の９−ベンジル−６−クロロプリン 17.0 g ( 70 m
mol) と４０％メチルアミン水溶液 36.2 ml (CH₃NH₂ :
0.47 mol)をエタノ−ル 150 ml に溶解し、得られる溶
液を一晩( 約 18 時間 )、室温で撹拌した。この溶液か
ら、溶媒エタノ−ルを減圧留去し、次に水を加えた後、
酢酸エチルを溶媒として反応生成物を溶媒抽出した。抽
出液より溶媒酢酸エチルを減圧留去し、残渣として得ら
れる反応生成物９−ベンジル−６−メチルアミノプリン
をヘキサンで洗浄した。乾燥後、９−ベンジル−６−メ
チルアミノプリン 13.7 g が回収され、中間原料の９−
ベンジル−６−クロロプリンに対する収率は 82 ％ で
あった。17.0 g (70 m) of 9-benzyl-6-chloropurine as an intermediate raw material prepared according to the above [Step 1.1]
mol) and 40% methylamine aqueous solution 36.2 ml (CH ₃ NH ₂ :
0.47 mol) was dissolved in 150 ml of ethanol, and the resulting solution was stirred overnight (about 18 hours) at room temperature. From this solution, the solvent ethanol was distilled off under reduced pressure, and then water was added,
The reaction product was subjected to solvent extraction using ethyl acetate as a solvent. The solvent ethyl acetate was distilled off under reduced pressure from the extract, and the reaction product 9-benzyl-6-methylaminopurine obtained as a residue was washed with hexane. After drying, 13.7 g of 9-benzyl-6-methylaminopurine was recovered, and 9-
The yield based on benzyl-6-chloropurine was 82%.

【００３１】９−ベンジル−６−メチルアミノプリン
7.8 g ( 32.5 mmol) と酢酸ナトリウム 12.7 g ( 0.15
mol) を酢酸 120 ml に溶解した。この溶液に氷冷下、
臭素水17.2 g (Br₂ : 0.10 mol)を滴下混合した。次
に、この液を５０℃、一晩( 約 18 時間 )加熱撹拌し
た。その後、該溶液を放冷し、溶媒酢酸を減圧留去し、
次に残渣に酢酸エチルを加えて反応生成物を溶解し、濾
過した濾液を回収した。この濾液を飽和炭酸水素ナトリ
ウム水溶液、水を順次用いて洗浄した。溶媒酢酸エチル
を減圧留去し、反応生成物の９−ベンジル−８−ブロモ
−６−メチルアミノプリンを回収した。更に、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィ−（溶離液 クロロホルム：
メタノ−ル＝１００容：１容）にて精製を行った。精製
後、目的とする９−ベンジル−８−ブロモ−６−メチル
アミノプリンの回収量は、 6.1 gであり、原料の９−ベ
ンジル−６−メチルアミノプリンに対する収率は 59 ％
であった。9-benzyl-6-methylaminopurine
7.8 g (32.5 mmol) and sodium acetate 12.7 g (0.15
mol) was dissolved in 120 ml of acetic acid. This solution under ice cooling,
Bromine water 17.2 g (Br ₂ : 0.10 mol) was added dropwise to the mixture. Next, this solution was heated and stirred at 50 ° C. overnight (about 18 hours). Then, the solution was allowed to cool, the solvent acetic acid was distilled off under reduced pressure,
Next, ethyl acetate was added to the residue to dissolve the reaction product, and the filtered filtrate was recovered. The filtrate was washed successively with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and water. The solvent ethyl acetate was distilled off under reduced pressure to collect 9-benzyl-8-bromo-6-methylaminopurine as a reaction product. Further, silica gel column chromatography (eluent chloroform:
Purification was carried out with methanol = 100 volumes: 1 volume). After purification, the amount of 9-benzyl-8-bromo-6-methylaminopurine of interest was 6.1 g, and the yield was 59% based on 9-benzyl-6-methylaminopurine as a raw material.
Met.

【００３２】上記の工程に従い調製された９−ベンジル
−８−ブロモ−６−メチルアミノプリンは、下記の物性
を示した。ＮＭＲスペクトル 1H-NMR δ ppm (DMSO-d₆) : 2.95 (3H,d : -CH₃) , 5.
29 (2H,s : -CH₂-) ,7.21 (5H,s : -C₆H₅) , 7.80 (1H,
s : -NH-) , 8.19 (1H,s)The 9-benzyl-8-bromo-6-methylaminopurine prepared according to the above steps had the following physical properties. NMR spectrum 1H-NMR δ ppm (DMSO-d ₆ ): 2.95 (3H, d: -CH ₃ ), 5.
29 (2H, s: -CH _2- ), 7.21 (5H, s: -C ₆ H ₅ ), 7.80 (1H,
s: -NH-), 8.19 (1H, s)

【００３３】[0033]

【実施例３】 〔９−ベンジル−８−ブロモ−６−ジメチルアミノプリ
ン〕上記の一般式（１）において、Ｒ₁ 及びＲ₂ がとも
にメチル基ある９−ベンジル−８−ブロモ−６−ジメチ
ルアミノプリンを、下記する工程に従い合成した。Example 3 [9-Benzyl-8-bromo-6-dimethylaminopurine] In the above general formula (1), 9-benzyl-8-bromo-6-dimethyl in which both R ₁ and R ₂ are methyl groups. Aminopurine was synthesized according to the steps described below.

【００３４】上記の〔工程１．１〕に従い調製した中間
原料の９−ベンジル−６−クロロプリン 22.5 g ( 92 m
mol) と５０％ジメチルアミン水溶液 58.2 ml ( (CH₃)
₂NH: 0.65 mol) をエタノ−ル 300 ml に溶解し、得ら
れる溶液を一晩( 約 18 時間)、室温で撹拌した。この
溶液から、溶媒エタノ−ルを減圧留去し、次に水を加え
た後、酢酸エチルを溶媒として反応生成物を溶媒抽出し
た。抽出液より溶媒酢酸エチルを減圧留去し、残渣とし
て得られる反応生成物９−ベンジル−６−ジメチルアミ
ノプリンをヘキサンで洗浄した。乾燥後、９−ベンジル
−６−ジメチルアミノプリン 20.3 g が回収され、中間
原料の９−ベンジル−６−クロロプリンに対する収率は
87 ％であった。22.5 g (92 m) of the intermediate raw material 9-benzyl-6-chloropurine prepared according to the above [Step 1.1]
mol) and 50% dimethylamine aqueous solution 58.2 ml ((CH ₃ )
₂ NH: 0.65 mol) was dissolved in 300 ml of ethanol, and the resulting solution was stirred overnight (about 18 hours) at room temperature. From this solution, the solvent ethanol was distilled off under reduced pressure, water was added, and then the reaction product was subjected to solvent extraction using ethyl acetate as a solvent. The solvent ethyl acetate was distilled off from the extract under reduced pressure, and the reaction product 9-benzyl-6-dimethylaminopurine obtained as a residue was washed with hexane. After drying, 20.3 g of 9-benzyl-6-dimethylaminopurine was recovered, and the yield based on the intermediate raw material 9-benzyl-6-chloropurine was
It was 87%.

【００３５】９−ベンジル−６−ジメチルアミノプリン
14.8 g ( 58 mmol)と酢酸ナトリウム 23.1 g ( 0.28 m
ol) を酢酸 380 ml に溶解した。この溶液に氷冷下、臭
素水23.0 g (Br2 : 0.14 mol)を滴下混合した。次に、
この液を５０℃、１時間加熱撹拌した。その後、該溶液
を放冷し、溶媒酢酸を減圧留去し、次に残渣に酢酸エチ
ルを加えて反応生成物を溶解し、濾過した濾液を回収し
た。この濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水を順
次用いて洗浄した。溶媒酢酸エチルを減圧留去し、反応
生成物の９−ベンジル−８−ブロモ−６−ジメチルアミ
ノプリンを回収した。更に、シリカゲルカラムクロマト
グラフィ−（溶離液 クロロホルム：メタノ−ル＝５０
容：１容）にて精製を行った。精製後、目的とする９−
ベンジル−８−ブロモ−６−ジメチルアミノプリンの回
収量は、 5.1 gであり、原料の９−ベンジル−６−ジメ
チルアミノプリンに対する収率は 26 ％であった。9-benzyl-6-dimethylaminopurine
14.8 g (58 mmol) and sodium acetate 23.1 g (0.28 m
ol) was dissolved in 380 ml of acetic acid. 23.0 g (Br2: 0.14 mol) of bromine water was added dropwise to this solution under ice cooling. next,
This solution was heated and stirred at 50 ° C. for 1 hour. Then, the solution was allowed to cool, the solvent acetic acid was distilled off under reduced pressure, ethyl acetate was added to the residue to dissolve the reaction product, and the filtered filtrate was recovered. The filtrate was washed successively with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and water. The solvent ethyl acetate was distilled off under reduced pressure to collect 9-benzyl-8-bromo-6-dimethylaminopurine as a reaction product. Furthermore, silica gel column chromatography (eluent chloroform: methanol = 50)
Volume: 1 volume) was used for purification. After purification, the desired 9-
The recovered amount of benzyl-8-bromo-6-dimethylaminopurine was 5.1 g, and the yield based on the raw material 9-benzyl-6-dimethylaminopurine was 26%.

【００３６】上記の工程に従い調製された９−ベンジル
−８−ブロモ−６−ジメチルアミノプリンは、下記の物
性を示した。ＮＭＲスペクトル 1H-NMR δ ppm (DMSO-d₆) : 3.47 (6H,s : -N(CH₃)₂)
, 5.33 (2H,s : -CH₂-) , 7.28 (5H,s : -C₆H₅) , 8.2
8 (1H,s)The 9-benzyl-8-bromo-6-dimethylaminopurine prepared according to the above steps had the following physical properties. NMR spectrum 1H-NMR δ ppm (DMSO- d 6): 3.47 (6H, s: -N (CH 3) 2)
, 5.33 (2H, s: -CH _2- ), 7.28 (5H, s: -C ₆ H ₅ ), 8.2
8 (1H, s)

【００３７】[0037]

【実施例４】 （好中球接着阻害作用)本発明のプリン誘導体が、好中
球と内皮細胞との接着を阻害することを検証するため、
下記の方法により血管内皮細胞に対する好中球接着防止
の効果を評価した。Example 4 (Neutrophil adhesion inhibitory action) In order to verify that the purine derivative of the present invention inhibits adhesion between neutrophils and endothelial cells,
The effect of preventing neutrophil adhesion to vascular endothelial cells was evaluated by the following method.

【００３８】本評価法では、好中球としてラット腹腔好
中球を用い、血管内皮細胞としてヒト臍帯静脈血管内皮
細胞を用いた。なお、本評価法は、生物薬科学実験講
座、第１２巻、「炎症とアレルキ− ２」第７章 好中
球 廣川書店 に記載される方法に準じている。該ラッ
ト好中球は、分離精製し、予め１９９培地中で培養し
た。次に⁵¹Ｃｒで標識し、好中球浮遊液は、０．１％
（ｗ／ｖ）ＢＳＡ−１９９培地中に所定の密度（３×１
０⁶ 個／ ５００μｌ）となるべく調製した。ヒト臍帯
静脈血管内皮細胞は、産婦人科より入手したヒト臍帯の
臍帯静脈内より分離回収した。得られる内皮細胞のペレ
ットを２０％ＦＢＳ−１９９培地中で培養し、更に、１
０％ＦＢＳ−１９９培地にて継代培養した。In this evaluation method, rat peritoneal neutrophils were used as neutrophils, and human umbilical vein vascular endothelial cells were used as vascular endothelial cells. In addition, this evaluation method is based on the method described in Biopharmaceutical Science Laboratory, Volume 12, "Inflammation and Allerky-2", Chapter 7, Neutrophil Hirokawa Shoten. The rat neutrophils were separated and purified, and cultured in advance in 199 medium. Next, it was labeled with ⁵¹ Cr, and the neutrophil suspension was 0.1%.
(W / v) BSA-199 medium with a given density (3 x 1
0 ⁶ pieces / 500 μl). Human umbilical vein vascular endothelial cells were separated and collected from the umbilical cord vein of human umbilical cord obtained from obstetrics and gynecology. The obtained endothelial cell pellet was cultured in 20% FBS-199 medium, and further 1
Subculture was performed in 0% FBS-199 medium.

【００３９】上記の血管内皮細胞（１．５×１０⁵ 個／
ウエル）を２４ウェルディシュに蒔き、コンフルエント
に達するまで培養した。コンフルエントとなった内皮細
胞を、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ−１９９培地 ５００
μｌで２回洗浄した。次いで、予め調製した当該被験化
合物及び好中球接着の惹起剤トロンビン１Ｕ／ｍｌを含
む０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ−１９９培地 ５００μｌ
を添加し、直ちに好中球浮遊液 ５００μｌ (３×１０
⁶ 個) を加えてよく分散させた。該試験液を、５％ＣＯ
₂ インキュベ−タ−を用い、３７℃で２０分間静置培養
した。培養終了後、直ちに未接着の好中球を浮遊し、ピ
ペットを用い吸引除去した。その後、０．２５％トリプ
シン−０．０１％ＥＤＴＡ液 ４００μｌを加えて３７
℃で１０分間静置処理し、残る接着している好中球を、
内皮細胞より分離した。該試験液を氷冷し、０．１％ c
alf serum 含有１９９培地 １００ μｌを添加しトリ
プシンの反応を停止した。次いで、０．１Ｎ ＮａＯＨ
溶液 ４００μl を加えて、分離した好中球を放射能測
定用試験管に移し取り、⁵¹Ｃｒで標識した好中球による
全放射能量を測定した。この測定値の当初好中球浮遊液
５００μl より測定される全放射能量に対する割合よ
り、接着の指標を算出した。なお、反応液中に被験化合
物を溶解してない場合に測定される接着の指標と、所定
量の被験化合物を溶解している場合に測定される接着の
指標との差より、抑制率を算出した。前記接着の指標差
が零の場合、抑制率 ０％とし、接着の指標が惹起剤ト
ロンビンを添加しない（ブランク群）と等しい場合、抑
制率 １００％と抑制率を定義した。The above-mentioned vascular endothelial cells (1.5 × 10 ⁵ cells /
Wells) were plated on 24-well dishes and cultured until they reached confluence. Confluent endothelial cells were treated with 0.1% (w / v) BSA-199 medium 500
Washed twice with μl. Then, 500 μl of 0.1% (w / v) BSA-199 medium containing the test compound prepared in advance and 1 U / ml of thrombin, an inducer of neutrophil adhesion,
And immediately add 500 μl of neutrophil suspension (3 × 10
⁶ ) were added and well dispersed. The test solution was added with 5% CO
₂ incubation - data - the use, and stationary culture for 20 min at 37 ° C.. Immediately after the completion of the culture, unadhered neutrophils were suspended and removed by suction with a pipette. After that, 400 μl of 0.25% trypsin-0.01% EDTA solution was added to add 37
Let stand for 10 minutes at ℃, the remaining adhered neutrophils,
Separated from endothelial cells. The test solution was ice-cooled to obtain 0.1% c
100 μl of 199 medium containing alf serum was added to stop the trypsin reaction. Then 0.1N NaOH
400 μl of the solution was added, and the separated neutrophils were transferred to a radioactivity measuring tube, and the total amount of radioactivity from neutrophils labeled with ⁵¹ Cr was measured. The index of adhesion was calculated from the ratio of this measured value to the total radioactivity measured from 500 μl of the initial neutrophil suspension. The inhibition rate was calculated from the difference between the adhesion index measured when the test compound was not dissolved in the reaction solution and the adhesion index measured when a predetermined amount of the test compound was dissolved. did. The inhibition rate was defined as 0% when the difference in the index of adhesion was zero, and the inhibition rate was defined as 100% when the index of adhesion was equal to the case where the inducer thrombin was not added (blank group).

【００４０】前記する該被験化合物の最終濃度を種々に
選び、最終濃度と抑制率との間の相関を調べ、血管内皮
細胞に対する好中球接着防止の効果を評価した。表１
に、最終濃度を１０μＭに選んだ結果を例示する。Various final concentrations of the test compound were selected, the correlation between the final concentration and the inhibition rate was investigated, and the effect of preventing neutrophil adhesion to vascular endothelial cells was evaluated. Table 1
The results of selecting the final concentration of 10 μM are illustrated in FIG.

【００４１】[0041]

【表１】 被験化合物 最終濃度（μＭ） 抑制率（％） 実施例１の化合物 １０ ６５ 実施例２の化合物 １０ ６５Table 1 Final concentration of test compound (μM) Suppression rate (%) Compound of Example 1 10 65 Compound of Example 2 10 65

【００４２】上記の結果より、当該プリン誘導体は、好
中球- 内皮細胞接着の過程を抑制する作用を有すること
が判る。From the above results, it can be seen that the purine derivative has an action of suppressing the neutrophil-endothelial cell adhesion process.

【００４３】[0043]

【実施例５】 （アジュバント関節炎に対する予防効果)本発明のプリ
ン誘導体が、炎症性疾患の治療薬として効果を有するこ
とを検証するため、代表的な炎症性疾患である慢性関節
リウマチのモデルとされるアジュバント関節炎に対する
予防効果を、下記の方法により評価した。Example 5 (Preventive Effect on Adjuvant Arthritis) In order to verify that the purine derivative of the present invention has an effect as a therapeutic agent for inflammatory diseases, it is used as a model of rheumatoid arthritis, which is a typical inflammatory disease. The preventive effect against adjuvant arthritis was evaluated by the following method.

【００４４】アジュバント関節炎のモデルラットは、５
週齢の雄性ＳＤラットを用い、アジュバントとして０．
６％結核死菌(Mycobacterium butyricum) の流動パラフ
ィン懸濁液 0.1 ml/匹 を足蹠皮下( 一方の後肢) に注
射投与した。The number of model rats for adjuvant arthritis was 5
Using week-old male SD rats, 0.1% as an adjuvant.
A liquid paraffin suspension of 6% Mycobacterium butyricum (0.1% / animal) was subcutaneously injected into the foot pad (one hind leg).

【００４５】被験化合物のプリン誘導体は、１日当たり
の投与量を 100mg/kg とし、 0.5％ CMC-Na 水溶液に懸
濁し、惹起の当日より１５日間毎日経口投与した。ま
た、陽性対照群として、非ステロイド性抗炎症剤である
インドメタシンを、１日当たりの投与量を 1 mg/kg と
し、 0.5 ％ CMC-Na 水溶液に懸濁し、同様に経口投与
した。参照群として、 0.5 ％ CMC-Na 水溶液のみを同
様に経口投与した。関節炎の発症は、各足の足容積を足
容積測定装置により測定して、惹起の当日に測定した足
容積を基準とし、関節炎に伴う足容積の増加分を算出し
た。惹起より１８日目の足容積増加分を基準とする惹起
当日の足容積で除し、％表示する値を浮腫率とした。ま
た、参照群の浮腫率に対する、被験化合物の群及び陽性
対照群の浮腫率の差を参照群の浮腫率で除し、％表示す
る値を抑制率とした。表２にアジュバントを注射した後
肢の結果、表３にアジュバントを注射しなかった後肢の
結果を示す。なお、各群は６匹とし、平均値を求めた。The purine derivative of the test compound was suspended in 0.5% CMC-Na aqueous solution at a daily dose of 100 mg / kg and orally administered daily for 15 days from the day of induction. Further, as a positive control group, indomethacin, which is a non-steroidal anti-inflammatory drug, was dosed at 1 mg / kg per day, suspended in 0.5% CMC-Na aqueous solution, and orally administered in the same manner. As a reference group, only 0.5% CMC-Na aqueous solution was orally administered in the same manner. For the onset of arthritis, the foot volume of each foot was measured by a foot volume measuring device, and the foot volume measured on the day of induction was used as a reference to calculate the increase in foot volume due to arthritis. The increase in paw volume on day 18 after induction was divided by the paw volume on the day of induction, and the value expressed in% was taken as the edema rate. Further, the difference between the edema rate of the test compound and the positive control group with respect to the edema rate of the reference group was divided by the edema rate of the reference group, and the value expressed in% was defined as the inhibition rate. Table 2 shows the results of the hind limbs injected with the adjuvant, and Table 3 shows the results of the hind limbs not injected with the adjuvant. Each group had 6 animals, and the average value was calculated.

【００４６】[0046]

【表２】 〔アジュバントを注射した後肢の結果〕 被験化合物 浮腫率（％） 抑制率（％） 参照群（無投与） 179.2 ± 18.1 − 実施例１の化合物 79.0 ± 8.9 ** ５６ 実施例２の化合物 92.0 ± 14.7 ** ４９ 実施例３の化合物 136.9 ± 21.5 ２４ インドメタシン 74.1 ± 9.5 ** ５９ 注) ** : Ｐ＜０．０１ 参照群より有為差あり[Table 2] [Results of hind limbs injected with adjuvant] Test compound Edema rate (%) Inhibition rate (%) Reference group (no administration) 179.2 ± 18.1-Compound of Example 1 79.0 ± 8.9 ** 56 Compound 92.0 ± 14.7 ** 49 Compound of Example 3 136.9 ± 21.5 24 Indomethacin 74.1 ± 9.5 ** 59 Note) **: P <0.01 There is a significant difference from the reference group

【００４７】[0047]

【表３】 〔アジュバントを注射しなかった後肢の結果〕 被験化合物 浮腫率（％） 抑制率（％） 参照群（無投与） 66.0 ± 15.2 − 実施例１の化合物 16.2 ± 0.8 ** ７５ 実施例２の化合物 13.9 ± 2.1 ** ７９ 実施例３の化合物 56.3 ± 12.8 １５ インドメタシン 15.6 ± 4.2 * ７６ 注) ** : Ｐ＜０．０１ 参照群よりの有為差 * : Ｐ＜０．０５ 参照群よりの有為差[Table 3] [Results of hind limbs without injection of adjuvant] Test compound Edema rate (%) Inhibition rate (%) Reference group (no administration) 66.0 ± 15.2-Compound of Example 16.2 ± 0.8 ** 75 Example Compound 2 of 13.9 ± 2.1 ** 79 Compound of Example 3 56.3 ± 12.8 15 Indomethacin 15.6 ± 4.2 * 76 Note) **: P <0.01 Significant difference from the reference group *: P <0.05 Reference group Significant difference from

【００４８】上記の結果より、試験した用量において、
本発明のプリン誘導体はインドメタシンと同じ程度のア
ジュバント関節炎に対する予防効果を有することが判
る。また、本発明のプリン誘導体は、経口的に投与する
治療剤に用いることができることが判る。From the above results, at the dose tested,
It can be seen that the purine derivative of the present invention has the same protective effect against adjuvant arthritis as indomethacin. It is also found that the purine derivative of the present invention can be used as a therapeutic agent to be administered orally.

【００４９】アジュバント関節炎は、結核菌の菌体成分
（主に結核菌由来の熱ショック蛋白）と高い反応性を示
すＴ細胞により引き起こされることが報告されている
（Science 219, 56 (1983)を参照）。同様に、慢性関節
リウマチの患部の関節液中のＴ細胞も結核菌由来の熱シ
ョック蛋白と高い反応性を示すことが報告されている(L
ancet 2, 478 (1988) を参照）。これらのＴ細胞が、関
節の組織細胞がその表面に提示する抗原によりて集結す
るため炎症が引き起こされる。このことを考えあわせる
と、前記する実施例５の結果及び本例の結果から、本発
明のプリン誘導体はＴ細胞や好中球などの白血球が患部
における組織細胞に接着する過程を阻害するので、炎症
の発症、増悪を抑制・予防する効果が生ずると判断され
る。即ち、インドメタシンなどの非ステロイド性抗炎症
剤は、主にＴ細胞や好中球などの白血球が患部における
組織細胞に接着する結果、細胞が発現するシクロオキシ
ゲナ−ゼの働きを抑え、このシクロオキシゲナ−ゼがア
ラキドン酸より生成する環状ペルオキシド（ＰＧＨ₂ ）
の産出を抑制する作用機序であるが、本発明のプリン誘
導体の主な作用機序は異なるものである。また、インド
メタシンなどの非ステロイド性抗炎症剤で見られる、消
化管のシクロオキシゲナ−ゼをも非組織特異性に阻害し
てしまい、高頻度で消化管に潰瘍をおこしてしまうなど
の欠点は、本発明のプリン誘導体では、組織特異的、患
部に特異的な抗原によりＴ細胞や好中球などの白血球が
集積する過程並びに組織細胞に接着する過程を阻害する
ので、前記の欠点は克服されるものである。この特徴
は、継続的、或は長期にわたる経口投与において顕著と
なる。Adjuvant arthritis has been reported to be caused by T cells that are highly reactive with bacterial components of M. tuberculosis (mainly heat shock proteins derived from M. tuberculosis) (Science 219, 56 (1983)). reference). Similarly, it has been reported that T cells in synovial fluid of affected areas of rheumatoid arthritis also show high reactivity with heat shock proteins derived from Mycobacterium tuberculosis (L.
ancet 2, 478 (1988)). Inflammation is caused by the aggregation of these T cells by the antigens that the tissue cells of the joint present on their surface. Taking this into consideration, from the results of Example 5 and the results of this example described above, the purine derivative of the present invention inhibits the process in which leukocytes such as T cells and neutrophils adhere to tissue cells in the affected area. It is judged that the effects of suppressing and preventing the onset and exacerbation of inflammation will occur. That is, a nonsteroidal anti-inflammatory drug such as indomethacin suppresses the action of cyclooxygenase expressed by cells, as a result of mainly leukocytes such as T cells and neutrophils adhering to tissue cells in the affected area. Cyclic Peroxide (PGH ₂ ) Generated from Arachidonic Acid
The mechanism of action of suppressing the production of Escherichia coli is different from that of the purine derivative of the present invention. In addition, the disadvantages of non-steroidal anti-inflammatory drugs such as indomethacin that inhibit cyclooxygenase in the digestive tract in a non-tissue specific manner and cause ulcer in the digestive tract at high frequency are The purine derivative of the present invention inhibits the process of accumulation of leukocytes such as T cells and neutrophils and the process of adhesion to tissue cells by tissue-specific and disease-specific antigens, so that the above-mentioned drawbacks can be overcome. Is. This characteristic becomes remarkable in continuous or long-term oral administration.

【００５０】[0050]

【発明の効果】本発明のプリン誘導体は、Ｔ細胞や好中
球などの白血球が患部における組織細胞に接着する過程
を有効に阻害する作用を持つので、この細胞接着の過程
が起因となる炎症性疾患、例えば自己免疫疾患、臓器移
植時の拒絶反応として知られる移植片対宿主病（ＧＶＨ
Ｄ）、アレルギ−疾患、変形性膝関節症などの慢性炎症
などに薬効を示す治療剤に用いることができる。また、
低分子量の化合物であり、消化器管おいて容易に吸収さ
れるので、経口投与に適する治療剤となる。更には、投
与が継続的、或は長期にわたる慢性的炎症性疾患或は自
己免疫疾患などの治療に用いる際、その作用機序が患部
組織に特異性を持つので、インドメタシンなどの従来の
非ステロイド性抗炎症剤で見られる、消化管のシクロオ
キシゲナ−ゼをも非組織特異性に阻害してしまい、高頻
度で消化管に潰瘍をおこしてしまうなどの欠点をも克服
する治療剤となる利点が生ずる。INDUSTRIAL APPLICABILITY The purine derivative of the present invention has an effect of effectively inhibiting the process in which white blood cells such as T cells and neutrophils adhere to tissue cells in the affected area, and therefore inflammation caused by this process of cell adhesion is caused. Diseases such as autoimmune diseases, graft-versus-host disease (GVH) known as rejection during organ transplantation
D), allergic diseases, and therapeutic agents having a therapeutic effect on chronic inflammation such as osteoarthritis of the knee. Also,
Since it is a low molecular weight compound and is easily absorbed in the digestive tract, it is a therapeutic agent suitable for oral administration. Furthermore, when it is used for the treatment of chronic inflammatory diseases or autoimmune diseases for which the administration is continuous or long-term, its mechanism of action has specificity to the affected tissue, so that conventional non-steroids such as indomethacin are used. Non-tissue-specific inhibition of gastrointestinal cyclooxygenase, which is often seen with sexual anti-inflammatory agents, and has the advantage of being a therapeutic agent that overcomes the drawbacks such as causing gastric tract ulcers at high frequency. Occurs.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/52 ＡＣＶ ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code Office reference number FI technical display area A61K 31/52 ACV

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 次の一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒ₁ 及びＲ₂ は、それぞれ独立に水素原子、炭
素数１〜４の直鎖アルキル基、及び炭素数３又は４の分
枝状アルキル基からなる群より選ばれる基を示す。）で
表される化合物又はその医薬上許容可能な塩であるプリ
ン誘導体。1. The following general formula (1): (In the formula, R ₁ and R ₂ each independently represent a group selected from the group consisting of a hydrogen atom, a linear alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and a branched alkyl group having 3 or 4 carbon atoms. ) A purine derivative which is a compound represented by the formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 【請求項２】 Ｒ₁ 及びＲ₂ のいずれかは水素原子であ
り、他は水素原子又はメチル基である請求項１に記載す
るプリン誘導体。 _2. The purine derivative according to claim 1, wherein one of R ₁ and R ₂ is a hydrogen atom, and the other is a hydrogen atom or a methyl group. 【請求項３】 請求項１又は２に記載するプリン誘導体
を有効成分とする白血球接着阻害剤。3. A leukocyte adhesion inhibitor containing the purine derivative according to claim 1 or 2 as an active ingredient. 【請求項４】 請求項１又は２に記載するプリン誘導体
を有効成分とする炎症性疾患の治療剤。4. A therapeutic agent for an inflammatory disease, which comprises the purine derivative according to claim 1 or 2 as an active ingredient. 【請求項５】 上記の炎症性疾患が、リウマチ、腎炎、
自己免疫疾患、又は移植片対宿主病の何れかの炎症性疾
患である請求項４に記載する治療剤。5. The above-mentioned inflammatory disease is rheumatism, nephritis,
The therapeutic agent according to claim 4, which is an inflammatory disease of either autoimmune disease or graft-versus-host disease.