JPH07270414A - 高感度酵素免疫測定法 - Google Patents
高感度酵素免疫測定法Info
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- JPH07270414A JPH07270414A JP6270594A JP6270594A JPH07270414A JP H07270414 A JPH07270414 A JP H07270414A JP 6270594 A JP6270594 A JP 6270594A JP 6270594 A JP6270594 A JP 6270594A JP H07270414 A JPH07270414 A JP H07270414A
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- enzyme
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 抗体に対するペルオキシダ−ゼの結合率が１
から２のペルオキシダ−ゼ標識抗体を用いる酵素免疫測
定法。 【効果】 本発明方法は、非特異吸着によるバックグラ
ウンドが低く、測定感度が高いので高感度ＥＩＡに適用
でき、血中等に含まれる微量抗原の検出が可能となる。
から２のペルオキシダ−ゼ標識抗体を用いる酵素免疫測
定法。 【効果】 本発明方法は、非特異吸着によるバックグラ
ウンドが低く、測定感度が高いので高感度ＥＩＡに適用
でき、血中等に含まれる微量抗原の検出が可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は高感度酵素免疫測定法に
関するものであり、さらに詳しくは特定なペルオキシダ
−ゼ標識抗体を用いる酵素免疫測定法に関するものであ
る。
関するものであり、さらに詳しくは特定なペルオキシダ
−ゼ標識抗体を用いる酵素免疫測定法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】酵素免疫測定法（以下ＥＩＡと略す）
は、放射性物質を使用しないという利点に加え、ラジオ
イムノアッセイより高感度測定が可能であることが明ら
かになるにつれ、医学、薬学の分野を中心に種々の物質
の特異的かつ高感度な定量分析手段として広く活用され
ている。特に最近は検査の自動化が進み増々広範囲に利
用されてきている。このＥＩＡによる測定においては、
一般的には抗体を酵素で標識化した酵素標識抗体を用い
る場合が多く、酵素標識抗体の品質が測定系全体の性能
に大きく影響を及ぼしている。
は、放射性物質を使用しないという利点に加え、ラジオ
イムノアッセイより高感度測定が可能であることが明ら
かになるにつれ、医学、薬学の分野を中心に種々の物質
の特異的かつ高感度な定量分析手段として広く活用され
ている。特に最近は検査の自動化が進み増々広範囲に利
用されてきている。このＥＩＡによる測定においては、
一般的には抗体を酵素で標識化した酵素標識抗体を用い
る場合が多く、酵素標識抗体の品質が測定系全体の性能
に大きく影響を及ぼしている。
【０００３】抗体を酵素で標識する方法としては、グル
タルアルデヒド法、過ヨウ素酸法、マレイミド法など多
くの方法が試みられているが、いずれの場合も標識反応
後のサンプルは酵素と未標識抗体、および結合率の異な
る数種の酵素標識抗体の混った酵素標識抗体の混合物と
なっている。非特異吸着をおさえ、測定感度を上げるた
めには、この混合物から目的とする結合率の酵素標識抗
体だけを分取して用いる必要が生じる。
タルアルデヒド法、過ヨウ素酸法、マレイミド法など多
くの方法が試みられているが、いずれの場合も標識反応
後のサンプルは酵素と未標識抗体、および結合率の異な
る数種の酵素標識抗体の混った酵素標識抗体の混合物と
なっている。非特異吸着をおさえ、測定感度を上げるた
めには、この混合物から目的とする結合率の酵素標識抗
体だけを分取して用いる必要が生じる。
【０００４】ところが、一般的に知られたゲル濾過法
で、目的とする結合率の酵素標識抗体だけを分離しよう
とすれば難しく、その他にも有効で簡便な分離手段はほ
とんど知られていない。また特開平２−００２９３７号
において、ヒドロキシアパタイトカラムを用いて標識反
応後のサンプルを精製しているが、未標識抗体と酵素を
分離するだけで、得られた酵素標識抗体は結合率の異な
る数種の酵素標識抗体の混合物であったため、ＥＩＡに
使用した時、測定感度が未だ不十分であり、保存安定性
も十分満足できるものではなかった。
で、目的とする結合率の酵素標識抗体だけを分離しよう
とすれば難しく、その他にも有効で簡便な分離手段はほ
とんど知られていない。また特開平２−００２９３７号
において、ヒドロキシアパタイトカラムを用いて標識反
応後のサンプルを精製しているが、未標識抗体と酵素を
分離するだけで、得られた酵素標識抗体は結合率の異な
る数種の酵素標識抗体の混合物であったため、ＥＩＡに
使用した時、測定感度が未だ不十分であり、保存安定性
も十分満足できるものではなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、この現状に
鑑み、標識反応後の酵素標識抗体を抗体に対する酵素の
結合率に従って分画し、非特異吸着によるバックグラウ
ンドが低く、測定感度が高く、かつ保存安定性が良好で
ある結合率の酵素標識抗体を得て、ＥＩＡに用いること
にある。
鑑み、標識反応後の酵素標識抗体を抗体に対する酵素の
結合率に従って分画し、非特異吸着によるバックグラウ
ンドが低く、測定感度が高く、かつ保存安定性が良好で
ある結合率の酵素標識抗体を得て、ＥＩＡに用いること
にある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記目的は、酵素標識抗
体をヒドロキシアパタイトカラムを使用して分離精製
し、目的とする結合率の酵素標識抗体を得て、ＥＩＡに
用いることにより達成される。
体をヒドロキシアパタイトカラムを使用して分離精製
し、目的とする結合率の酵素標識抗体を得て、ＥＩＡに
用いることにより達成される。
【０００７】本発明で用いる抗体としては、ポリクロ−
ナル抗体およびモノクロ−ナル抗体のどちらもが対象と
なり得るが、より完全な分離を得るためには分子として
均一であるモノクロ−ナル抗体がより好ましい。また本
発明は、特に抗体がＩｇＧである場合に有効である。
ナル抗体およびモノクロ−ナル抗体のどちらもが対象と
なり得るが、より完全な分離を得るためには分子として
均一であるモノクロ−ナル抗体がより好ましい。また本
発明は、特に抗体がＩｇＧである場合に有効である。
【０００８】抗体を得るために免疫する抗原としてはヒ
トおよび各種動物由来の細胞、タンパクおよび核酸など
の高分子化合物、ホルモンその他の低分子化合物など、
一般に抗原として使われる全ての物質を用いることがで
きる。
トおよび各種動物由来の細胞、タンパクおよび核酸など
の高分子化合物、ホルモンその他の低分子化合物など、
一般に抗原として使われる全ての物質を用いることがで
きる。
【０００９】また、抗体に結合させる酵素としてはペル
オキシダ−ゼが適し、特に西洋ワサビ・ペルオキシダ−
ゼ（以下ＨＲＰと略す）が好ましく用いられる。
オキシダ−ゼが適し、特に西洋ワサビ・ペルオキシダ−
ゼ（以下ＨＲＰと略す）が好ましく用いられる。
【００１０】ペルオキシダ−ゼを抗体に結合させる方法
としては、グルタルアルデヒド法、過ヨウ素酸法、マレ
イミド法などこれまでに知られている全ての方法が可能
である。特にペルオキシダ−ゼとしてＨＲＰを用いる場
合には、マレイミド・ヒンジ法が適している。
としては、グルタルアルデヒド法、過ヨウ素酸法、マレ
イミド法などこれまでに知られている全ての方法が可能
である。特にペルオキシダ−ゼとしてＨＲＰを用いる場
合には、マレイミド・ヒンジ法が適している。
【００１１】本発明を達成するために用いられるヒドロ
キシアパタイトカラムは、一般のカラムクロマトグラフ
ィ−用および高速液体カラムクロマトグラフィ−用のい
ずれもが使用できる。一般カラムクロマトグラフィ−用
の充填剤としては“バイオゲルＨＴ”および“バイオゲ
ルＨＴＰ”（バイオ・ラッド社製）など、また高速液体
クロマトグラフィ−用のカラムとしては“ＨＣＡ−Ｃｏ
ｌｕｍｎ”三井東圧化学（株）製）など多くの市販品が
入手可能である。分離時間を短くするためには、１０ｍ
ｌ／ｍｉｎ程度の高流速が可能な高速液体クロマトグラ
フィ−を用いることが好ましい。
キシアパタイトカラムは、一般のカラムクロマトグラフ
ィ−用および高速液体カラムクロマトグラフィ−用のい
ずれもが使用できる。一般カラムクロマトグラフィ−用
の充填剤としては“バイオゲルＨＴ”および“バイオゲ
ルＨＴＰ”（バイオ・ラッド社製）など、また高速液体
クロマトグラフィ−用のカラムとしては“ＨＣＡ−Ｃｏ
ｌｕｍｎ”三井東圧化学（株）製）など多くの市販品が
入手可能である。分離時間を短くするためには、１０ｍ
ｌ／ｍｉｎ程度の高流速が可能な高速液体クロマトグラ
フィ−を用いることが好ましい。
【００１２】サンプルの溶出のための溶離液としては、
リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液など一
般にヒドロキシアパタイトカラムクロマトで用いられる
溶離液が使用できる。サンプルの溶出は直線濃度勾配、
段階的濃度勾配のいずれもが用いられる。いずれの場合
にも低イオン強度から高イオン強度への濃度勾配が一般
的に用いられるが、ｐＨ勾配による溶出も可能であり、
両者を組み合わせて用いることがさらに好ましい。ま
た、サンプルによっては、低濃度のカルシウムイオン、
マグネシウムイオンなどで効果的な分離が得られること
もある。
リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液など一
般にヒドロキシアパタイトカラムクロマトで用いられる
溶離液が使用できる。サンプルの溶出は直線濃度勾配、
段階的濃度勾配のいずれもが用いられる。いずれの場合
にも低イオン強度から高イオン強度への濃度勾配が一般
的に用いられるが、ｐＨ勾配による溶出も可能であり、
両者を組み合わせて用いることがさらに好ましい。ま
た、サンプルによっては、低濃度のカルシウムイオン、
マグネシウムイオンなどで効果的な分離が得られること
もある。
【００１３】結合率１から２の抗体を得るには、２８０
nmにおける紫外吸収でモニターしながら分画して得た溶
出液の吸光度（Ａ280 、Ａ403 ）を測定して、抗体濃
度、ＨＲＰ濃度を計算し、１から２の溶出液をあつめる
ことにより達成される。
nmにおける紫外吸収でモニターしながら分画して得た溶
出液の吸光度（Ａ280 、Ａ403 ）を測定して、抗体濃
度、ＨＲＰ濃度を計算し、１から２の溶出液をあつめる
ことにより達成される。
【００１４】本発明の酵素免疫測定法としては、サンド
イッチ法、競合法など種々の測定原理を用いることがで
きるが、ペルオキシダーゼ標識抗体を用いたサンドイッ
チ法が好ましく用いられる。ペルオキシダーゼ標識抗体
を用いたサンドイッチ法は、 ａ）抗原を含む試料と、測定対象抗原と特異的に反応し
得る抗体を固体担体に固定させた固定化抗体と、測定対
象抗原と特異的に反応し得るペルオキシダーゼ標識抗体
とを反応させる過程、 ｂ）過程ａ）で生じた固定化抗体−測定対象抗原−ペル
オキシダーゼ標識抗体を、未反応のペルオキシダーゼ標
識抗体と分離する過程、および ｃ）固体単体に固定された複合体を該複合体と含まれる
ペルオキシダーゼを利用して検出する過程を含むことを
特徴とする酵素免疫測定法である。固定化抗体用の担体
としては適宜選択されるが、、プラスチック試験管、マ
イクロタイタープレート、ガラスビーズ、プラスチック
ビーズ、メンブレン、磁気ビーズ等が用いられる。
イッチ法、競合法など種々の測定原理を用いることがで
きるが、ペルオキシダーゼ標識抗体を用いたサンドイッ
チ法が好ましく用いられる。ペルオキシダーゼ標識抗体
を用いたサンドイッチ法は、 ａ）抗原を含む試料と、測定対象抗原と特異的に反応し
得る抗体を固体担体に固定させた固定化抗体と、測定対
象抗原と特異的に反応し得るペルオキシダーゼ標識抗体
とを反応させる過程、 ｂ）過程ａ）で生じた固定化抗体−測定対象抗原−ペル
オキシダーゼ標識抗体を、未反応のペルオキシダーゼ標
識抗体と分離する過程、および ｃ）固体単体に固定された複合体を該複合体と含まれる
ペルオキシダーゼを利用して検出する過程を含むことを
特徴とする酵素免疫測定法である。固定化抗体用の担体
としては適宜選択されるが、、プラスチック試験管、マ
イクロタイタープレート、ガラスビーズ、プラスチック
ビーズ、メンブレン、磁気ビーズ等が用いられる。
【００１５】本発明の酵素免疫測定法は、いわゆる１ス
テップサンドイッチ法、２ステップサンドイッチ法のど
ちらにも使用できる。
テップサンドイッチ法、２ステップサンドイッチ法のど
ちらにも使用できる。
【００１６】
【実施例】以下実施例により、本発明を更に詳細に説明
する。
する。
【００１７】実施例１ ヒト結腸癌細胞を免疫して得られた抗ＣＡ１９−９マウ
スモノクロナ−ル抗体ＮＳ１９−９（セントコア社、ク
ラスＩｇＧ1 ）３８ｍｇとＨＲＰ（ベ−リンガ−・マン
ハイム社、グレ−ドΙ）３６ｍｇをマレイミド・ヒンジ
法により結合し、７．９ｍｌの反応液を得た。この反応
液を０．２２μｍのフィルタ−で濾過した後、３７℃に
保温したヒドロキシアパタイトカラム（三井東圧（株）
製ＨＣＡカラムＦ２０２５、φ２０ｍｍ×Ｌ２５０ｍ
ｍ）にアプライし、高速液体クロマトグラフィ−（島津
製作所（株）製、島津ＬＣ−６Ａ）を用いて、１０ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）から５００ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）の濃度勾配に
て、７ｍｌ／ｍｉｎの流速で分離溶出を行った。溶出液
を２８０ｎｍにおける紫外吸収でモニタ−し、蛋白部分
を分画した。各フラクションの吸光度（Ａ280 、
Ａ403 ）を測定し、ＮＳ１９−９の濃度は（Ａ280 −Ａ
403 ／３．１）／１．５×１６００００（Ｍ）の式よ
り、ＨＲＰの濃度はＡ403／２．２７５×４００００
（Ｍ）の式より求めて、ＮＳ１９−９に対するＨＲＰ結
合率を計算した。その結果、ＮＳ１９−９に対するＨＲ
Ｐ結合率が２．５、１．５、０．８のフラクションが、
それぞれ１０ｍｇ、２５ｍｇ、３ｍｇ得られた。２８０
ｎｍの紫外吸収でモニタ−した溶出パタ−ンを図１に示
す。
スモノクロナ−ル抗体ＮＳ１９−９（セントコア社、ク
ラスＩｇＧ1 ）３８ｍｇとＨＲＰ（ベ−リンガ−・マン
ハイム社、グレ−ドΙ）３６ｍｇをマレイミド・ヒンジ
法により結合し、７．９ｍｌの反応液を得た。この反応
液を０．２２μｍのフィルタ−で濾過した後、３７℃に
保温したヒドロキシアパタイトカラム（三井東圧（株）
製ＨＣＡカラムＦ２０２５、φ２０ｍｍ×Ｌ２５０ｍ
ｍ）にアプライし、高速液体クロマトグラフィ−（島津
製作所（株）製、島津ＬＣ−６Ａ）を用いて、１０ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）から５００ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）の濃度勾配に
て、７ｍｌ／ｍｉｎの流速で分離溶出を行った。溶出液
を２８０ｎｍにおける紫外吸収でモニタ−し、蛋白部分
を分画した。各フラクションの吸光度（Ａ280 、
Ａ403 ）を測定し、ＮＳ１９−９の濃度は（Ａ280 −Ａ
403 ／３．１）／１．５×１６００００（Ｍ）の式よ
り、ＨＲＰの濃度はＡ403／２．２７５×４００００
（Ｍ）の式より求めて、ＮＳ１９−９に対するＨＲＰ結
合率を計算した。その結果、ＮＳ１９−９に対するＨＲ
Ｐ結合率が２．５、１．５、０．８のフラクションが、
それぞれ１０ｍｇ、２５ｍｇ、３ｍｇ得られた。２８０
ｎｍの紫外吸収でモニタ−した溶出パタ−ンを図１に示
す。
【００１８】これら３フラクションのペルオキシダ−ゼ
標識抗体を使用して、２ステップサンドイッチＥＩＡ
で、既知濃度のＣＡ１９−９溶液（０Ｕ／ｍｌ、３００
Ｕ／ｍｌ）を測定し、吸光度を求めた。測定結果および
測定感度の指標になるＳ／Ｎ比｛（３００Ｕ／ｍｌの吸
光度）／（０Ｕ／ｍｌの吸光度）｝を表１に示す。
標識抗体を使用して、２ステップサンドイッチＥＩＡ
で、既知濃度のＣＡ１９−９溶液（０Ｕ／ｍｌ、３００
Ｕ／ｍｌ）を測定し、吸光度を求めた。測定結果および
測定感度の指標になるＳ／Ｎ比｛（３００Ｕ／ｍｌの吸
光度）／（０Ｕ／ｍｌの吸光度）｝を表１に示す。
【００１９】
【表１】
【００２０】次に、これらのフラクションを８℃に保存
し、３カ月，６カ月後に同じ方法で既知濃度のＣＡ１９
−９溶液の吸光度を測定した。結果を表２に示す。
し、３カ月，６カ月後に同じ方法で既知濃度のＣＡ１９
−９溶液の吸光度を測定した。結果を表２に示す。
【表２】
【００２１】表１に示されるとおり、結合率１．５のフ
ラクションが最もＳ／Ｎ比が大きく測定感度が高い。こ
れに対して、結合率２．５のフラクションは０Ｕ／ｍｌ
の吸光度が高く、また結合率０．８のフラクションは３
００Ｕ／ｍｌの吸光度が低く、両方のフラクション共、
Ｓ／Ｎ比が小さく測定感度が低い。さらに表２に示すと
おり、８℃保存において、結合率０．８、１．５のフラ
クションは６カ月間吸光度が変化せず安定であり、長期
保存が可能である。これに対して結合率２．５のフラク
ションは保存の経過と共に、３００Ｕ／ｍｌの吸光度が
低くなっているにもかかわらず、０Ｕ／ｍｌの吸光度が
高くなり、Ｓ／Ｎ比が下がり測定感度が明らかに低下し
ている。
ラクションが最もＳ／Ｎ比が大きく測定感度が高い。こ
れに対して、結合率２．５のフラクションは０Ｕ／ｍｌ
の吸光度が高く、また結合率０．８のフラクションは３
００Ｕ／ｍｌの吸光度が低く、両方のフラクション共、
Ｓ／Ｎ比が小さく測定感度が低い。さらに表２に示すと
おり、８℃保存において、結合率０．８、１．５のフラ
クションは６カ月間吸光度が変化せず安定であり、長期
保存が可能である。これに対して結合率２．５のフラク
ションは保存の経過と共に、３００Ｕ／ｍｌの吸光度が
低くなっているにもかかわらず、０Ｕ／ｍｌの吸光度が
高くなり、Ｓ／Ｎ比が下がり測定感度が明らかに低下し
ている。
【００２２】実施例２ ヒト乳癌転移細胞の膜成分に富んだ分画を免疫して得ら
れた抗ＣＡ１５−３マウスモノクロ−ナル抗体ＤＦ３
（セントコア社、クラスＩｇＧ1 ）６９ｍｇと、ＨＲＰ
６２ｍｇをマレイミド・ヒンジ法により結合し、１３．
９ｍｌの反応液を得た。この反応液を０．２２μｍフィ
ルタ−で濾過した後、３７℃に保温したヒドロキシアパ
タイトカラムにアプライし、高速液体クロマトグラフィ
−を用いて、実施例１と同じ条件で溶出し、蛋白部分を
分画した。溶出パタ−ンは実施例１とほぼ同様であっ
た。各フラクションの吸光度を測定し、結合率を計算し
た結果、ＤＦ３に対するＨＲＰ結合率が２．５、１．
５、０．８のフラクションが、それぞれ１６ｍｇ、３６
ｍｇ、６ｍｇ得られた。
れた抗ＣＡ１５−３マウスモノクロ−ナル抗体ＤＦ３
（セントコア社、クラスＩｇＧ1 ）６９ｍｇと、ＨＲＰ
６２ｍｇをマレイミド・ヒンジ法により結合し、１３．
９ｍｌの反応液を得た。この反応液を０．２２μｍフィ
ルタ−で濾過した後、３７℃に保温したヒドロキシアパ
タイトカラムにアプライし、高速液体クロマトグラフィ
−を用いて、実施例１と同じ条件で溶出し、蛋白部分を
分画した。溶出パタ−ンは実施例１とほぼ同様であっ
た。各フラクションの吸光度を測定し、結合率を計算し
た結果、ＤＦ３に対するＨＲＰ結合率が２．５、１．
５、０．８のフラクションが、それぞれ１６ｍｇ、３６
ｍｇ、６ｍｇ得られた。
【００２３】これらのフラクションを２ステップサンド
イッチＥＩＡで、既知濃度のＣＡ１５−３溶液（０Ｕ／
ｍｌ、３００Ｕ／ｍｌ）を用い評価した結果、結合率
１．５のフラクションが最も測定感度が高く、保存安定
性が良好であった。表３に測定感度の指標であるＳ／Ｎ
比、表４に保存安定性の結果を示す。
イッチＥＩＡで、既知濃度のＣＡ１５−３溶液（０Ｕ／
ｍｌ、３００Ｕ／ｍｌ）を用い評価した結果、結合率
１．５のフラクションが最も測定感度が高く、保存安定
性が良好であった。表３に測定感度の指標であるＳ／Ｎ
比、表４に保存安定性の結果を示す。
【００２４】
【表３】
【００２５】
【表４】
【００２６】
【発明の効果】本発明は、ヒドロキシアパタイトカラム
を使用して分離精製した品質の良いペルオキシダ−ゼ標
識抗体を、ＥＩＡに用いる方法である。分画して得られ
たペルオキシダ−ゼ標識抗体は、非特異吸着によるバッ
クグラウンドが低く、測定感度が高いので高感度ＥＩＡ
に適用でき、血中等に含まれる微量抗原の検出が可能と
なる。また、保存安定性も良好なので、ＥＩＡキットに
使用した場合、長期間に亘って安定した品質が得られ
る。
を使用して分離精製した品質の良いペルオキシダ−ゼ標
識抗体を、ＥＩＡに用いる方法である。分画して得られ
たペルオキシダ−ゼ標識抗体は、非特異吸着によるバッ
クグラウンドが低く、測定感度が高いので高感度ＥＩＡ
に適用でき、血中等に含まれる微量抗原の検出が可能と
なる。また、保存安定性も良好なので、ＥＩＡキットに
使用した場合、長期間に亘って安定した品質が得られ
る。
【図１】実施例１におけるＮＳ１９−９とＨＲＰの結合
反応後の溶液の分離パタ−ンである。
反応後の溶液の分離パタ−ンである。
Claims (2)
- 【請求項１】 抗体に対するペルオキシダ−ゼの結合率
が１から２のペルオキシダ−ゼ標識抗体を用いることを
特徴とする高感度酵素免疫測定法。 - 【請求項２】 ペルオキシダ−ゼ標識抗体がヒドロキシ
アパタイトカラムにより精製されたものである請求項１
記載の高感度酵素免疫測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6270594A JPH07270414A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 高感度酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6270594A JPH07270414A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 高感度酵素免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07270414A true JPH07270414A (ja) | 1995-10-20 |
Family
ID=13208006
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6270594A Pending JPH07270414A (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 高感度酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07270414A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1767942A1 (en) * | 2004-06-14 | 2007-03-28 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Immunoassay in which non-specific reaction is suppressed and reagent therefore |
-
1994
- 1994-03-31 JP JP6270594A patent/JPH07270414A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1767942A1 (en) * | 2004-06-14 | 2007-03-28 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Immunoassay in which non-specific reaction is suppressed and reagent therefore |
| JPWO2005121795A1 (ja) * | 2004-06-14 | 2008-04-10 | 協和メデックス株式会社 | 非特異反応が抑制された免疫測定方法および試薬 |
| EP1767942A4 (en) * | 2004-06-14 | 2008-07-16 | Kyowa Medex Co Ltd | IMMUNOENZYMATIC ASSAY METHOD HAVING INHIBITED NON-SPECIFIC REACTION AND REAGENT THEREFOR |
| JP4866724B2 (ja) * | 2004-06-14 | 2012-02-01 | 協和メデックス株式会社 | 非特異反応が抑制された免疫測定方法および試薬 |
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