JPH07228594A - Endothelin receptor-antagonistic peptide - Google Patents
Endothelin receptor-antagonistic peptideInfo
- Publication number
- JPH07228594A JPH07228594A JP6021079A JP2107994A JPH07228594A JP H07228594 A JPH07228594 A JP H07228594A JP 6021079 A JP6021079 A JP 6021079A JP 2107994 A JP2107994 A JP 2107994A JP H07228594 A JPH07228594 A JP H07228594A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- lys
- group
- xaa
- carboxyl group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、エンドセリン受容体拮
抗作用を有する新規ペプチド及びその用途に関する。本
ペプチドは、エンドセリン受容体に対する優れた拮抗作
用を有し、循環器疾患（例えば、高血圧、動脈硬化、高
脂血症）、アレルギー（例えば喘息）、腎疾患（例えば
腎不全）などの治療薬として有用である。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel peptide having an endothelin receptor antagonistic activity and its use. This peptide has an excellent antagonistic effect on endothelin receptors, and is a therapeutic drug for cardiovascular diseases (eg, hypertension, arteriosclerosis, hyperlipidemia), allergies (eg, asthma), renal diseases (eg, renal failure), etc. Is useful as
【０００２】[0002]
【従来の技術】エンドセリン（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ，
以下、ＥＴと表す場合がある）は、Ｎａｔｕｒｅ ３３
２，４１１，１９８８で報告された、血管収縮性ペプチ
ドである。また、ＥＴには、２１個のアミノ酸からなる
ＥＴ−１、ＥＴ−２、ＥＴ−３の３種のペプチドが知ら
れており、これらに特異的な受容体としてＥＴＡ受容
体、ＥＴＢ受容体の存在が知られている。BACKGROUND OF THE INVENTION Endothelin,
Hereinafter, it may be expressed as ET) is Nature 33
2 , 411, 1988, which is a vasoconstrictor peptide. In addition, 3 types of peptides, ET-1, ET-2, and ET-3, each consisting of 21 amino acids are known in ET, and specific receptors for these are ETA receptor and ETB receptor. Existence is known.
【０００３】上記ＥＴは血管収縮作用を有していること
から、循環系調節に関与する内因性因子であると予想さ
れ、高血圧症、心・脳循環疾患、腎疾患（例えば腎不
全）との関係が推定されている。また、気管支平滑筋収
縮作用も有しており、喘息との関係も推定されている。
よって、上記ＥＴ受容体に対する拮抗剤は、上記の疾患
の有効な治療薬になる可能性が大きいと考えられ、これ
までにＥＴ受容体に対する拮抗作用を示すＥＴ誘導体の
特許出願がなされている。（特開平４−２８８０９９
号） しかしながら、上記ＥＴ誘導体は、ＥＴのＣ末端に相当
する１１個のアミノ酸残基よりなるＥＴ類縁体であり、
また、分子内にＳ−Ｓ結合を有するため、酸化還元反応
を受けやすいという欠点を有する。Since the above-mentioned ET has a vasoconstrictor action, it is expected to be an endogenous factor involved in the regulation of the circulatory system, and is associated with hypertension, cardio-cerebral circulatory diseases and renal diseases (eg renal failure). Relationships have been estimated. It also has a bronchial smooth muscle contractile action, and its relationship with asthma has been estimated.
Therefore, it is considered that the antagonists to the ET receptor are highly likely to be effective therapeutic agents for the above-mentioned diseases, and patent applications for ET derivatives showing an antagonistic action to the ET receptor have been filed so far. (JP-A-4-288099
However, the ET derivative is an ET analog consisting of 11 amino acid residues corresponding to the C-terminal of ET,
Further, since it has an S—S bond in the molecule, it has a drawback that it is susceptible to a redox reaction.
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、低毒
性で、エンドセリン受容体に対して優れた拮抗作用を有
し、酸化還元反応に安定な新規エンドセリン受容体拮抗
ペプチドを提供しようとするものである。Therefore, the present invention is intended to provide a novel endothelin receptor antagonist peptide which is low in toxicity, has an excellent antagonism to the endothelin receptor, and is stable in a redox reaction. Is.
【０００５】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＥＴが分
子内に４つのＣｙｓを有しこれらが２つのＳ−Ｓ結合を
形成しているため酸化還元反応に不安定であると考え、
Ｓ−Ｓ結合に関与しているＣｙｓの一方をＬｙｓに、他
方をＡｓｐまたはＧｌｕに置換し、Ｌｙｓのε−または
α−アミノ基と、Ａｓｐのβ−カルボキシル基またはＧ
ｌｕのγ−カルボキシル基との間でアミド結合を形成さ
せることによって、本発明を完成した。Means for Solving the Problems The present inventors consider that ET has four Cys in the molecule and they form two S—S bonds, so that they are unstable in the redox reaction. ,
One of Cys involved in the SS bond is substituted with Lys and the other is substituted with Asp or Glu, and the ε- or α-amino group of Lys and the β-carboxyl group or G of Asp are substituted.
The present invention was completed by forming an amide bond with the γ-carboxyl group of lu.
【０００６】すなわち本発明は、式（Ｉ）（配列番号：
１および２）：That is, the present invention provides the compound of formula (I) (SEQ ID NO:
1 and 2):
【化２】 （式中、ＸａａはＧｌｕまたはＡｓｐを示し、ｎは０ま
たは１を示し、ＬｙｓとＸａａの結合は、Ｌｙｓのα−
またはε−アミノ基とＸａａのβ−またはγ−カルボキ
シル基がアミド結合していることを示す）で表されるエ
ンドセリン受容体拮抗ペプチドおよびその酸付加塩を提
供する。本発明はまた、上記エンドセリン受容体拮抗ペ
プチドを含んでなる、循環器用薬、抗アレルギー薬、お
よび腎疾患用薬を提供する。[Chemical 2] (In the formula, Xaa represents Glu or Asp, n represents 0 or 1, and the bond between Lys and Xaa is α- of Lys.
Alternatively, the endothelin receptor antagonistic peptide represented by (indicating that the ε-amino group and the β- or γ-carboxyl group of Xaa are amide-bonded) and an acid addition salt thereof are provided. The present invention also provides a cardiovascular drug, an antiallergic drug, and a drug for renal disease, which comprises the above endothelin receptor antagonist peptide.
【０００７】以下、本発明について具体的に説明する
が、本明細書において、特に標記のないアミノ酸はＬ−
型であり、略記号は試薬類を含め下に示される略記号を
用いた。The present invention will be described in detail below. In the present specification, amino acids unless otherwise specified are L-.
The abbreviation used was the type shown below including the reagents.
【０００８】Ａｓｐ：アスパラギン酸 Ｇｌｕ：グルタミン酸 Ｈｉｓ：ヒスチジン Ｉｌｅ：イソロイシン Ｌｅｕ：ロイシン Ｌｙｓ：リジン Ｐｈｅ：フェニルアラニン Ｔｒｐ：トリプトファン Ｔｙｒ：チロシン Ｖａｌ：バリン Ａｌｌｏｃ：アリルオキシカルボニル Ｂｎ：ベンジル Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル ＢＯＭ：ベンジルオキシメチル ＢＯＰ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス
（ジメチルアミノ）ホスホニウム ヘキサフルオロホス
フェート ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＨＯＮＢ：Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２,３
−ジカルボキシイミド ＯＡｌｌｙｌ：アリルオキシ ＯＢｎ：ベンジルオキシ ＯＰａｃ：フェナシルオキシ ＯＳｕ：スクシンイミドオキシ ＯｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブトキシ Ｐａｃ：フェナシル ＰＡＭ：４−（ヒドロキシメチル）フェニルアセタミド
メチル ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ：テトラヒドロフラン Ｔｒｔ：トリチル Ａｌｋｏ：ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール 本発明のエンドセリン受容体拮抗ペプチドは、低毒性
で、エンドセリン受容体に対して優れた拮抗作用を有
し、酸化還元反応に安定であり、エンドセリン受容体に
介在される循環器疾患（例えば、高血圧、動脈硬化、高
脂血症）、アレルギー（例えば喘息）、腎疾患（例えば
腎不全）などの治療薬としての有用性が期待できる。Asp: Aspartic acid Glu: Glutamic acid His: Histidine Ile: Isoleucine Leu: Leucine Lys: Lysine Phe: Phenylalanine Trp: Tryptophan Tyr: Tyrosine Val: Valine Alloc: Allyloxycarbonyl Bn: Benzyl Boc: tert-Butoxycarbonyl. Benzyloxymethyl BOP: Benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate DCC: N, N'-dicyclohexylcarbodiimide DMF: N, N-dimethylformamide Fmoc: 9-fluorenylmethoxycarbonyl HOBt: N -Hydroxybenzotriazole HONB: N-hydroxy-5-norbornene-2,3
-Dicarboximide OAllyl: allyloxy OBn: benzyloxy OPac: phenacyloxy OSu: succinimidooxy OtBu: tert-butoxy Pac: phenacyl PAM: 4- (hydroxymethyl) phenyl acetamide methyl tBu: tert-butyl TFA: trifluoro. Acetate THF: Tetrahydrofuran Trt: Trityl Alko: p-benzyloxybenzyl alcohol The endothelin receptor antagonistic peptide of the present invention has low toxicity, has an excellent antagonistic effect on the endothelin receptor, and is stable in redox reaction. It is expected to be useful as a therapeutic drug for cardiovascular diseases mediated by endothelin receptors (eg, hypertension, arteriosclerosis, hyperlipidemia), allergies (eg, asthma), renal diseases (eg, renal failure).
【０００９】本発明化合物（Ｉ）において、Ｘａａで示
されるアミノ酸はＧｌｕまたはＡｓｐであり、Ｌｙｓの
α−またはε−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキシル基
またはＧｌｕのγ−カルボキシル基がアミド結合を形成
し環化している。In the compound (I) of the present invention, the amino acid represented by Xaa is Glu or Asp, and the α- or ε-amino group of Lys and the β-carboxyl group of Asp or the γ-carboxyl group of Glu form an amide bond. Formed and cyclized.
【００１０】本発明のエンドセリン受容体拮抗ペプチド
（Ｉ）は、任意の常法を用いて合成することができる。
すなわち、液相合成法、固相合成法のいずれによっても
よいが、固相合成法が好ましい。The endothelin receptor antagonist peptide (I) of the present invention can be synthesized by any conventional method.
That is, either the liquid phase synthesis method or the solid phase synthesis method may be used, but the solid phase synthesis method is preferable.
【００１１】そのようなペプチド合成の手段は、任意の
公知の方法に従えばよく、例えば、「続医薬品の開発」
第１４巻，ペプチド合成（矢島治明監修，廣川書店）な
どに記載された方法、例えば、アジド法、クロリド法、
酸無水物法、混酸無水物法、ＤＣＣ法、活性エステル
法、ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボニルイミ
ダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ／ＨＯＮＢ法、ＢＯＰ
試薬を用いる方法などが挙げられる。The means for synthesizing such a peptide may be according to any known method, for example, "Development of pharmaceuticals"
Volume 14, Peptide Synthesis (supervised by Haruaki Yajima, Hirokawa Shoten), etc., for example, azide method, chloride method,
Acid anhydride method, mixed acid anhydride method, DCC method, active ester method, method using Woodward reagent K, carbonyl imidazole method, redox method, DCC / HONB method, BOP
Examples include methods using reagents.
【００１２】固相合成法においては、原料として市販の
あるいは常法により保護基を付加したアミノ酸を用い、
ペプチド合成機（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ社 ４３０Ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｚｅｒ）または振盪機で振盪させて合成すること
ができ、ペプチドの非環状部分をペプチド合成機により
合成し、別に合成した環状部分を結合させる方法、ペプ
チドの構成アミノ酸すべてをペプチド合成機により結合
し、キャリア上で側鎖アミド結合を形成させる方法が例
示される。In the solid phase synthesis method, a commercially available or amino acid having a protecting group added by a conventional method is used as a raw material,
Peptide synthesizer (eg, Applied Biosy
tems company 430A peptide synth
or non-cyclic portion of the peptide can be synthesized by a peptide synthesizer and a separately synthesized cyclic portion can be bonded, or all the constituent amino acids of the peptide can be bound by the peptide synthesizer. , A method of forming a side chain amide bond on a carrier is exemplified.
【００１３】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護およびそのために用いる保護基、ならびにその保護基
の脱離、さらには反応に関与する官能基の活性化なども
また公知の基あるいは公知の手段から適宜選択しうる。Protecting a functional group which should not be involved in the reaction of the raw material and protecting groups used therefor, and elimination of the protecting group, and activation of the functional group involved in the reaction are also known groups or known groups. It can be appropriately selected from the means.
【００１４】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカ
ルボニル、ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル、イソボ
ルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシ
カルボニル、２−クロロベンジルオキシカルボニル、ア
ダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、
フタロイル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニ
ル、ジフェニルホスフィノチオイル、９−フルオレニル
メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニルなどが挙
げられる。カルボキシル基の保護基としては、例えば、
アルキルエステル（例えば、メチル、エチル、プロピ
ル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロペンチル、シク
ロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２−ア
ダマンチルなどのエステル基）、ベンジルエステル、４
−ニトロベンジルエステル、４−メトキシベンジルエス
テル、４−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエ
ステル、フェナシルエステル、アリルエステル、ベンジ
ルオキシカルボニルヒドラジド、ｔｅｒｔ−ブトキシカ
ルボニルヒドラジド、トリチルヒドラジドなどが挙げら
れる。Examples of the protective group for the amino group of the raw material include benzyloxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, tert-amyloxycarbonyl, isobornyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, 2-chlorobenzyloxycarbonyl, Adamantyloxycarbonyl, trifluoroacetyl,
Examples thereof include phthaloyl, formyl, 2-nitrophenylsulfenyl, diphenylphosphinothioyl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl, allyloxycarbonyl and the like. Examples of the protective group for the carboxyl group include, for example,
Alkyl ester (for example, ester group such as methyl, ethyl, propyl, butyl, tert-butyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, 2-adamantyl), benzyl ester, 4
-Nitrobenzyl ester, 4-methoxybenzyl ester, 4-chlorobenzyl ester, benzhydryl ester, phenacyl ester, allyl ester, benzyloxycarbonyl hydrazide, tert-butoxycarbonyl hydrazide, trityl hydrazide and the like can be mentioned.
【００１５】Ｌｙｓのε−アミノ基の保護基としては、
例えば、ベンジルオキシカルボニル、２−クロロベンジ
ルオキシカルボニル、３−クロロベンジルオキシカルボ
ニル、４−クロロベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ
−ブトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキ
シカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、９−フ
ルオレニルメトキシカルボニル、トリチル、４−メタン
スルホニルベンジルオキシカルボニル、アリルオキシカ
ルボニルなどが挙げられる。The protecting group for the ε-amino group of Lys includes
For example, benzyloxycarbonyl, 2-chlorobenzyloxycarbonyl, 3-chlorobenzyloxycarbonyl, 4-chlorobenzyloxycarbonyl, tert.
-Butoxycarbonyl, 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl, trityl, 4-methanesulfonylbenzyloxycarbonyl, allyloxycarbonyl and the like.
【００１６】Ａｓｐのβ−カルボキシル基の保護基とし
ては、例えば、ベンジルエステル、４−クロロベンジル
エステル、４−ブロモベンジルエステル、ｔｅｒｔ−ブ
チルエステル、フルオレニルメチルエステル、アダマン
チルエステル、アリルエステルなどが挙げられる。Examples of the protecting group for the β-carboxyl group of Asp include benzyl ester, 4-chlorobenzyl ester, 4-bromobenzyl ester, tert-butyl ester, fluorenylmethyl ester, adamantyl ester and allyl ester. Can be mentioned.
【００１７】Ｇｌｕのγ−カルボキシル基の保護基とし
ては、例えば、ベンジルエステル、４−クロロベンジル
エステル、４−ブロモベンジルエステル、ｔｅｒｔ−ブ
チルエステル、フルオレニルメチルエステル、アダマン
チルエステル、アリルエステルなどが挙げられる。Examples of the protecting group for the γ-carboxyl group of Glu include benzyl ester, 4-chlorobenzyl ester, 4-bromobenzyl ester, tert-butyl ester, fluorenylmethyl ester, adamantyl ester and allyl ester. Can be mentioned.
【００１８】Ｔｒｐのインドールの保護基としては、例
えば、ホルミル、２，４，６−トリメチルベンゼンスル
ホニル、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホニ
ル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンス
ルホニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニ
ル、ジフェニルホスフィノチオイルなどが挙げられる
が、必ずしも保護する必要はない。Examples of the protecting group for the indole of Trp include formyl, 2,4,6-trimethylbenzenesulfonyl, 2,4,6-trimethoxybenzenesulfonyl and 4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzenesulfonyl. , 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, diphenylphosphinothioyl oil, etc., but not necessarily protected.
【００１９】Ｈｉｓのイミダゾール基の保護基として
は、例えば、ｐ−トルエンスルホニル、４−メトキシ−
２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、２，４−
ジニトロフェニル、ベンジルオキシメチル、ｔｅｒｔ−
ブトキシメチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、トリ
チル、９−フルオレニルメトキシカルボニルなどが挙げ
られるが、必ずしも保護する必要はない。Examples of the protecting group for the imidazole group of His include p-toluenesulfonyl and 4-methoxy-
2,3,6-trimethylbenzenesulfonyl, 2,4-
Dinitrophenyl, benzyloxymethyl, tert-
Examples thereof include butoxymethyl, tert-butoxycarbonyl, trityl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl and the like, but they are not necessarily protected.
【００２０】Ｔｙｒのフェノール性水酸基の保護基とし
ては、例えば、ベンジル、２，６−ジクロロベンジル、
２−ニトロベンジル、２−ブロモベンジルオキシカルボ
ニル、ｔｅｒｔ−ブチルなどが挙げられるが、必ずしも
保護する必要はない。Examples of the protective group for the phenolic hydroxyl group of Tyr include benzyl, 2,6-dichlorobenzyl,
2-nitrobenzyl, 2-bromobenzyloxycarbonyl, tert-butyl and the like can be mentioned, but they are not necessarily protected.
【００２１】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば対応する酸無水物、アジド、活性エス
テル［アルコール（例えば、ペンタクロロフェノール、
２,４,５−トリクロロフェノール、２,４−ジニトロフ
ェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノ
ール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２,３−ジ
カルボキシイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ−ヒ
ドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾ
ール）とのエステル］などが挙げられる。原料のアミノ
基の活性化されたものとしては、例えば対応するリン酸
アミドが挙げられる。The activated carboxyl group of the raw material includes, for example, corresponding acid anhydrides, azides, active esters [alcohols (for example, pentachlorophenol,
2,4,5-Trichlorophenol, 2,4-dinitrophenol, cyanomethyl alcohol, paranitrophenol, N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide, N-hydroxysuccinide, N-hydroxy Phthalimide, ester with N-hydroxybenztriazole)] and the like. Examples of the activated amino group of the raw material include the corresponding phosphoric acid amide.
【００２２】原料アミノ酸の縮合反応は溶媒の存在下に
行うことができる。溶媒としては、ペプチド縮合反応に
使用しうることが知られているものから適宜選択されう
る。例えば、無水または含水のジメチルホルムアミド、
ジメチルスルホキシド、ピリジン、クロロホルム、ジオ
キサン、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、アセト
ニトリル、酢酸エチル、Ｎ−メチルピロリドンあるいは
これらの適宜の混合物などが挙げられる。The condensation reaction of the starting amino acid can be carried out in the presence of a solvent. The solvent can be appropriately selected from those known to be usable in the peptide condensation reaction. For example, anhydrous or hydrous dimethylformamide,
Examples thereof include dimethyl sulfoxide, pyridine, chloroform, dioxane, dichloromethane, tetrahydrofuran, acetonitrile, ethyl acetate, N-methylpyrrolidone, and appropriate mixtures thereof.
【００２３】反応温度は、ペプチド結合形成反応に使用
されうることが知られている範囲から適宜選択され、通
常−２０℃〜３０℃の範囲から適宜選択される。The reaction temperature is appropriately selected from the range known to be applicable to peptide bond-forming reactions, and is usually selected in the range of -20 ° C to 30 ° C.
【００２４】保護基の脱離方法としては、例えば、Ｐｄ
黒、Ｐｄ−炭素あるいはＰｄ（ＯＨ）2−炭素などの触
媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水
フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンス
ルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合液に
よる酸処理や、また液体アンモニア中ナトリウムによる
還元なども挙げられる。上記酸処理による脱離反応は、
一般に−２０℃〜４０℃の範囲で行われるが、酸処理に
おいては、アニソール、フェノール、チオアニソール、
メタクレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィ
ド、１，４−ブタンジチオール、１，２−エタンジチオ
ール、水のようなカチオン捕足剤の添加が有効である。
また、Ｈｉｓのイミダゾール保護基として用いられる
２，４−ジニトロフェニル基はチオフェノール処理によ
り除去され、Ｔｒｐのインドール保護基として用いられ
るホルミル基は上記の１，２−エタンジチオール、１，
４−ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保
護以外に、希水酸化ナトリウム、希アンモニアなどによ
るアルカリ処理によっても除去される。The protecting group can be removed by, for example, Pd
Catalytic reduction in a hydrogen stream in the presence of a catalyst such as black, Pd-carbon or Pd (OH) 2 -carbon, or anhydrous hydrogen fluoride, methanesulfonic acid, trifluoromethanesulfonic acid, trifluoroacetic acid or Acid treatment with a mixed solution of these, reduction with sodium in liquid ammonia, and the like are also included. The elimination reaction by the acid treatment is
Generally, it is carried out in the range of -20 ° C to 40 ° C, but in the acid treatment, anisole, phenol, thioanisole,
It is effective to add a cation trapping agent such as meta-cresol, para-cresol, dimethyl sulfide, 1,4-butanedithiol, 1,2-ethanedithiol, and water.
Further, the 2,4-dinitrophenyl group used as the imidazole protecting group of His is removed by thiophenol treatment, and the formyl group used as the indole protecting group of Trp is the above 1,2-ethanedithiol, 1,
In addition to deprotection by acid treatment in the presence of 4-butanedithiol or the like, it is also removed by alkali treatment with dilute sodium hydroxide, dilute ammonia or the like.
【００２５】このようにして製造された本発明ペプチド
（Ｉ）は、反応終了後、ペプチドの分離精製手段、例え
ば、抽出、分配、再沈殿、再結晶、カラムクロマトグラ
フィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）など
によって採取される。After completion of the reaction, the peptide (I) of the present invention thus produced can be separated and purified by means of peptide separation such as extraction, distribution, reprecipitation, recrystallization, column chromatography, high performance liquid chromatography (HPLC). ) And so on.
【００２６】本発明ペプチドは、公知の方法により酸付
加塩、例えば、塩酸、硫酸、燐酸などの無機酸、あるい
は蟻酸、酢酸、プロピオン酸、クエン酸、酒石酸、リン
ゴ酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸
などの有機酸との薬理学的に許容される酸付加塩として
も得ることができる。The peptides of the present invention are acid addition salts by known methods, for example, inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, or formic acid, acetic acid, propionic acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, oxalic acid, methanesulfonic acid. , And also as a pharmacologically acceptable acid addition salt with an organic acid such as trifluoroacetic acid.
【００２７】（合成法１）本発明のペプチドの非環状部
分をペプチド合成機により合成し、別に合成した環状部
分を結合させる前述の方法について、式（ＩＩ）（配列
番号：３）：(Synthesis Method 1) The above-mentioned method of synthesizing the acyclic portion of the peptide of the present invention by a peptide synthesizer and linking the separately synthesized cyclic portion is represented by the formula (II) (SEQ ID NO: 3):
【化３】 （式中、Ｌｙｓのα−またはε−アミノ基とＧｌｕのγ
−カルボニル基がアミド結合している）で表される本発
明ペプチドの合成方法を例に挙げて、さらに詳しく説明
する。[Chemical 3] (In the formula, α- or ε-amino group of Lys and γ of Glu
-The carbonyl group is amide-bonded) will be described in more detail by taking as an example the method for synthesizing the peptide of the present invention.
【００２８】この方法は、環状部分を構成するアミノ酸
を固体キャリア上で結合させてペプチド鎖を合成し、該
ペプチド鎖を固体キャリアから遊離させると同時に分子
内のアミノ基の側鎖を架橋環化させて得られた環状ペプ
チドを、別の固体キャリア上で合成したペプチド鎖に結
合させる方法である。In this method, amino acids constituting a cyclic portion are bound on a solid carrier to synthesize a peptide chain, the peptide chain is released from the solid carrier, and at the same time, side chains of amino groups in the molecule are crosslinked and cyclized. In this method, the cyclic peptide thus obtained is bound to a peptide chain synthesized on another solid carrier.
【００２９】原料として用いられるアミノ酸のα-アミ
ノ基の保護基は、ペプチド形成に便利で、架橋環化させ
る位置のアミノ基の保護基を脱離する際、及び、縮合反
応中に除去されないものが用いられ、例えば、Ｂｏｃが
挙げられる。側鎖官能基を有するアミノ酸の保護基は、
例えば、側鎖でアミド結合を形成させる位置のＧｌｕの
α−カルボキシル基の場合はＯＰａｃ、Ｌｙｓのε−ア
ミノ基の場合はＴｒｔ、環化に関与しないＡｓｐのβ−
カルボキシル基の場合はＯＢｎ、Ｔｒｐのインドール基
の場合はホルミル、Ｈｉｓのイミダゾール基の場合はＢ
ＯＭ、Ｔｙｒのフェノール性水酸基の場合はＢｎが挙げ
られる。The protecting group for the α-amino group of the amino acid used as a starting material is convenient for peptide formation and is not removed during elimination of the protecting group for the amino group at the position for cross-linking and cyclization. Is used, and examples thereof include Boc. The protecting group of an amino acid having a side chain functional group is
For example, in the case of α-carboxyl group of Glu at the position where an amide bond is formed in the side chain, OPac is used, in the case of ε-amino group of Lys, Trt, and β-of Asp that is not involved in cyclization.
OBn for a carboxyl group, formyl for an indole group of Trp, and B for an imidazole group of His
In the case of the phenolic hydroxyl group of OM and Tyr, Bn is mentioned.
【００３０】この例の場合、まず、式（ＩＩＩ）（配列
番号：４）：In the case of this example, first, the formula (III) (SEQ ID NO: 4):
【化４】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボニ
ル基がアミド結合している）で表される環状ペプチドを
合成する。[Chemical 4] (In the formula, the ε-amino group of Lys and the γ-carbonyl group of Glu are amide-bonded) to synthesize a cyclic peptide.
【００３１】Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−ＯＰａｃは、常
法によって合成できるが、例えば、市販のＢｏｃ−Ｇｌ
ｕ（ＯｔＢｕ）にＫＦ存在下でＰａｃＢｒを反応させ、
ＴＦＡで処理することによってＧｌｕ−ＯＰａｃ・ＴＦ
Ａを合成し、市販のＢｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＳｕと反応させ
ることによって得られる。得られたＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｕ−ＯＰａｃを固体キャリア（例えばオキシムレジ
ン）上に、縮合剤（例えばＤＣＣ）を用いてＧｌｕのβ
位で結合させ、さらに、縮合剤（例えばＢＯＰ）を用い
て、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（ＯＢｎ）、Ｂｏｃ−Ｖａｌ、Ｂｏ
ｃ−Ｌｙｓ（Ｔｒｔ）を結合させ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド中、酢酸で処理することによって、上記式
（ＩＩＩ）の環状ペプチドが得られる。Boc-Phe-Glu-OPac can be synthesized by a conventional method. For example, commercially available Boc-Gl
u (OtBu) is reacted with PacBr in the presence of KF,
Glu-OPac / TF by treating with TFA
It is obtained by synthesizing A and reacting with commercially available Boc-Phe-OSu. Obtained Boc-Phe-G
β- of Glu using a condensing agent (eg DCC) on a solid carrier (eg oxime resin) of lu-OPac.
At a position and further using a condensing agent (for example, BOP), Boc-Tyr (OBn), Boc-Val, Bo
Binding of c-Lys (Trt) and treatment with acetic acid in N, N-dimethylformamide gives the cyclic peptide of formula (III) above.
【００３２】また、非環状部分は、固体キャリア（例え
ば、ＰＡＭレジン）を用いてペプチド合成機でペプチド
鎖の形成を行い、固体キャリア上で前記式（ＩＩＩ）で
表した環状ペプチドを縮合剤（例えばＢＯＰ）を用いて
結合させる。固体キャリアからのペプチドの遊離は、常
法により、例えば、ｍ−クレゾール存在下フッ化水素で
処理することによって行うことができ、Ｔｒｐのホルミ
ル基は、常法により、例えば、水酸化ナトリウム水溶液
で処理することにより脱保護することができる。In the acyclic portion, a solid carrier (for example, PAM resin) is used to form a peptide chain by a peptide synthesizer, and the cyclic peptide represented by the above formula (III) is condensed on the solid carrier ( For example, BOP) is used for binding. Release of the peptide from the solid carrier can be carried out by a conventional method, for example, by treatment with hydrogen fluoride in the presence of m-cresol, and the formyl group of Trp can be converted by a conventional method, for example, with an aqueous sodium hydroxide solution. It can be deprotected by treatment.
【００３３】（合成法２）本発明のペプチドの構成アミ
ノ酸すべてをペプチド合成機により結合し、キャリア上
で側鎖アミド結合を形成させる方法について、さらに詳
しく説明する。(Synthesis Method 2) A method of binding all the constituent amino acids of the peptide of the present invention by a peptide synthesizer to form a side chain amide bond on the carrier will be described in more detail.
【００３４】原料として用いるアミノ酸のα−アミノ基
の保護基としては、縮合反応中及び架橋環化させる位置
のアミノ基及びカルボキシル基の保護基を脱離する際に
除去されないものが用いられ、例えば、Ｆｍｏｃが挙げ
られる。側鎖官能基を有するアミノ酸の保護基は、例え
ば、側鎖でアミド結合を形成させる位置のＡｓｐのβ−
カルボキシル基またはＧｌｕのγ−カルボキシル基の場
合はＯＡｌｌｙｌ、Ｌｙｓのε−アミノ基の場合はＡｌ
ｌｏｃ、環化に関与しないＡｓｐのβ−カルボキシル基
の場合はＯｔＢｕ、Ｈｉｓのイミダゾール基の場合はＢ
ｏｃ、Ｔｙｒのフェノール性水酸基の場合はｔＢｕが挙
げられる。As the α-amino group-protecting group of the amino acid used as a raw material, those which are not removed during the condensation reaction or when the protecting groups for the amino group and the carboxyl group at the position for crosslinking and cyclization are eliminated are used. , Fmoc. The protecting group of an amino acid having a side chain functional group is, for example, β-of Asp at the position where an amide bond is formed in the side chain.
OAllyl in the case of γ-carboxyl group of carboxyl group or Glu, Al in the case of ε-amino group of Lys
loc, OtBu in the case of a β-carboxyl group of Asp that is not involved in cyclization, B in the case of an imidazole group of His
In the case of phenolic hydroxyl groups of oc and Tyr, tBu can be mentioned.
【００３５】固体キャリアとしては、例えば、Ａｌｋｏ
レジンを用いることができる。As the solid carrier, for example, Alko
A resin can be used.
【００３６】合成は、ペプチド鎖をペプチド合成機で形
成後、側鎖アミド結合を形成させる位置のＡｓｐのＯＡ
ｌｌｙｌ及びＬｙｓのＡｌｌｏｃを除去し、縮合剤（例
えばＢＯＰ）を用いて側鎖アミド結合を形成させること
によって行われる。次に、例えば、ピペリジン処理によ
りＦｍｏｃ基を除去後、水及び１，２−エタンジチオー
ルを共存させたＴＦＡで処理することによって、脱保護
した本発明ペプチドを得ることができる。The synthesis is carried out by forming a peptide chain on a peptide synthesizer, and then OA of Asp at a position where a side chain amide bond is formed.
This is done by removing the Alloc of llyl and Lys and forming a side chain amide bond with a condensing agent (eg BOP). Next, the deprotected peptide of the present invention can be obtained by, for example, removing the Fmoc group by treatment with piperidine and then treating with TFA in the presence of water and 1,2-ethanedithiol.
【００３７】本発明の式（ＩＶ）（配列番号：５）：Formula (IV) of the present invention (SEQ ID NO: 5):
【化５】 （式中、ＸａａはＧｌｕまたはＡｓｐを示し、Ｌｙｓの
α−アミノ基とＸａａのβ−またはγ−カルボキシル基
がアミド結合している）で表されるペプチドは、前述の
２つの方法において、例えば、Ｌｙｓのα−アミノ基と
ε−アミノ基の保護基を入れ換えることにより合成する
ことができる。また、合成法２の操作において、式
（Ｖ）（配列番号：６）：[Chemical 5] (In the formula, Xaa represents Glu or Asp, and the α-amino group of Lys and the β- or γ-carboxyl group of Xaa are amide-bonded to each other). , Lys can be synthesized by exchanging the protecting groups for the α-amino group and the ε-amino group. Further, in the operation of the synthesis method 2, the formula (V) (SEQ ID NO: 6):
【化６】 （式中、ＸａａはＧｌｕまたはＡｓｐを示し、Ｌｙｓの
ε−アミノ基とＸａａのβ−またはγ−カルボキシル基
がアミド結合している）で表されるペプチドを合成する
際、副生成物として得ることができる。[Chemical 6] (Wherein Xaa represents Glu or Asp, and the ε-amino group of Lys and the β- or γ-carboxyl group of Xaa are amide-bonded) to be obtained as a by-product when synthesized. be able to.
【００３８】本明細書において、エンドセリン受容体拮
抗活性とは、エンドセリンを特異的に認識する受容体と
の結合について、エンドセリンと競合若しくは拮抗し
て、その結合を阻害する活性若しくは作用を意味する。
そのような受容体は、生体内の多くの組織に分布してお
り、例えば、血管内皮、心臓、腎臓、肺、肝、脳、その
他に存在している。In the present specification, the endothelin receptor antagonistic activity means an activity or an action of competing or antagonizing endothelin for binding to a receptor that specifically recognizes endothelin to inhibit the binding.
Such receptors are distributed in many tissues in the living body, and are present in, for example, vascular endothelium, heart, kidney, lung, liver, brain and the like.
【００３９】本発明のエンドセリン受容体拮抗ペプチド
は、ＥＴが受容体に結合するのを阻止する作用により、
エンドセリン受容体に介在されて引き起こされる種々の
疾患、例えば、循環器疾患（例えば、高血圧、動脈硬
化、高脂血症）、アレルギー（例えば喘息）、腎疾患
（例えば腎不全）などの治療薬としての有用性が期待で
きる。しかも、従来知られていたエンドセリン受容体拮
抗ペプチドと比較して、酸化還元に対して著しく安定で
あるから、合成も容易であり、医薬として取扱いや保存
性に優れ、体内での薬効持続時間も長いという利点を有
する。The endothelin receptor antagonistic peptide of the present invention has the action of blocking the binding of ET to the receptor.
As a therapeutic drug for various diseases caused by the endothelin receptor, such as cardiovascular disease (eg, hypertension, arteriosclerosis, hyperlipidemia), allergy (eg, asthma), renal disease (eg, renal failure), etc. Can be expected to be useful. Moreover, compared with the conventionally known endothelin receptor antagonist peptide, it is remarkably stable against oxidation-reduction, easy to synthesize, excellent in handling and storage as a medicine, and has a long duration of drug effect in the body. It has the advantage of being long.
【００４０】本発明のペプチドのエンドセリン受容体拮
抗作用は、例えば、後述する実施例に記載する、受容体
結合アッセイによって調べることができる。The endothelin receptor antagonism of the peptide of the present invention can be examined, for example, by a receptor binding assay described in Examples described later.
【００４１】本発明のペプチドを上記治療薬として用い
る場合、そのままあるいは薬理学的に許容される担体、
賦形剤、希釈剤と混合し、粉末、顆粒、錠剤、カプセル
剤、注射剤、座剤、軟膏剤、徐放型製剤などの剤型で経
口的または非経口的に安全に投与することができる。本
発明のペプチドは主として非経口的に投与（例えば、静
脈あるいは皮下注射、脳室内あるいは脊髄内投剤、経鼻
投与、直腸投与）されるが、場合によっては経口投与さ
れることもある。When the peptide of the present invention is used as the above-mentioned therapeutic agent, as it is or a pharmacologically acceptable carrier,
It can be mixed with excipients and diluents and safely administered orally or parenterally in the form of powder, granules, tablets, capsules, injections, suppositories, ointments, sustained-release preparations, etc. it can. The peptide of the present invention is mainly administered parenterally (for example, intravenous or subcutaneous injection, intraventricular or intraspinal injection, nasal administration, rectal administration), but in some cases, it may be orally administered.
【００４２】本発明のペプチドは物質として安定である
ため生理食塩水の溶液として保存できるが、マンニトー
ル、ソルビトールを添加して凍結乾燥アンプルとし、使
用時に溶解することもできる。本発明のペプチドは、誘
導体としてあるいはその酸付加塩として投与され得る。
その投与量は、ペプチドの遊離体、酸付加塩ともに、遊
離体の量として、一般に体重１ｋｇ当たり１μｇ−１０
０ｍｇの範囲が適量である。さらに詳述すれば、投与量
は対象疾患、症状、投与対象、投与方法によっても異な
るが、例えば、成人の高血圧症患者に対して注射で投与
する場合、通常薬効成分として本発明のペプチドを１回
量として１μｇ／ｋｇ−１００ｍｇ／ｋｇ体重程度、よ
り好ましくは１００μｇ／ｋｇ−２０ｍｇ／ｋｇ体重程
度を１日１回−３回程度投与するのが好都合である。ま
た、点滴でも効果があり、点滴の場合の全投与量は注射
の場合と同じである。本発明のペプチドは、マウスを用
いた毒性試験において、１００ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与で
死亡例はなかった。Since the peptide of the present invention is stable as a substance, it can be stored as a solution of physiological saline, but it can also be dissolved at the time of use by adding mannitol and sorbitol to form a freeze-dried ampoule. The peptide of the present invention can be administered as a derivative or an acid addition salt thereof.
The dosage is generally 1 μg-10 kg / kg body weight for both the peptide free form and the acid addition salt.
A suitable range is 0 mg. More specifically, the dose varies depending on the target disease, symptom, administration subject, and administration method. For example, when administered by injection to an adult hypertensive patient, the peptide of the present invention is usually used as a medicinal ingredient. It is convenient to administer a dose of about 1 μg / kg-100 mg / kg body weight, more preferably about 100 μg / kg-20 mg / kg body weight once to three times a day. In addition, infusion is also effective, and the total dose in the case of infusion is the same as in the case of injection. In the toxicity test using mice, the peptide of the present invention did not die in 100 mg / kg ip administration.
【００４３】[0043]
【実施例】以下に実施例および参考例を挙げて本発明を
さらに具体的に説明するが、本発明はこの実施例に限定
されるものではない。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples and reference examples, but the present invention is not limited to these examples.
【００４４】実施例および参考例において分析値のＨＰ
ＬＣは、カラムにＴＯＳＯＨ ＯＤＳ−８０ＴＭを用
い、Ａ液として０．１％ＴＦＡを含む５％アセトニトリ
ル水溶液、Ｂ液として０．０９％ＴＦＡを含む９５％ア
セトニトリル水溶液を用い、インジェクション時より以
下のようなグラディエントをかけて溶出したときのリテ
ンション時間を示した。HP of analytical values in Examples and Reference Examples
LC used TOSOH ODS-80TM for the column, 5% acetonitrile aqueous solution containing 0.1% TFA as solution A, and 95% acetonitrile aqueous solution containing 0.09% TFA as solution B. The retention time was shown when the sample was eluted with a different gradient.
【００４５】 ０分 Ａ液 ７０％ Ｂ液 ３０％ １分 Ａ液 ７０％ Ｂ液 ３０％ １０分 Ａ液 ４０％ Ｂ液 ６０％ 最初に、本発明ペプチドの合成に使用できる中間体の合
成を参考例として示す。0 minutes A solution 70% B solution 30% 1 minute A solution 70% B solution 30% 10 minutes A solution 40% B solution 60% First, refer to the synthesis of an intermediate that can be used for the synthesis of the peptide of the present invention. As an example.
【００４６】参考例１ ペプチド（１）（配列番号：
７）の合成Reference Example 1 Peptide (1) (SEQ ID NO:
Synthesis of 7)
【化７】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキ
シル基がアミド結合している） オキシムレジン １．０ｇ（０．６２ミリモル）をジク
ロロメタン ３０ｍｌに懸濁し、Ｂｏｃ−Ａｓｐ α−
フェナシルエステル ０．４５ｇ（１．２８ミリモル）
をアセトン ５ｍｌに溶かしたもの、ＤＣＣ ０．３６
ｇ（１．７４ミリモル）を加え、４日間振盪した。レジ
ンをジクロロメタン、ジクロロメタン：エタノール＝
１：１、ジクロロメタンで洗い、２５％トリフルオロ酢
酸ジクロロメタン溶液 ３０ｍｌ中で３０分間振盪し
た。さらに、ジクロロメタン、ＤＭＦで洗い、ＤＭＦ
３０ｍｌに懸濁し、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ ０．０５ｇ（１．
８８ミリモル）、ＢＯＰ ０．８２ｇ（１．８５ミリモ
ル）、ＨＯＢｔ ０．２５ｇ（１．８５ミリモル）を加
え、３０分間振盪した。同様にレジン上にＢｏｃを脱保
護後、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ、Ｂｏｃ−Ｖａｌ、Ｂｏｃ−ε−
Ｔｒｔ−Ｌｙｓを結合させた。さらに、５％トリフルオ
ロ酢酸ジクロロメタン溶液 ３０ｍｌ中で３０分間振盪
し、ジクロロメタンで洗浄後、ＤＭＦ ３０ｍｌに懸濁
し、酢酸 ０．１１ｍｌ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチ
ルアミン ０．３３ｍｌを加え、３日間振盪した。反応
液を減圧留去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー
（メルク９３６５シリカゲル６０（５０ｇ） 酢酸エチ
ル：ｎ−ヘキサン＝３：１→酢酸エチルで溶出）で精製
し、標記化合物（１） １２４．５ｍｇ（０．１３ミリ
モル）を無色固体として得た。（収率２１％） ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＝９６１ 参考例２ ペプチド（２）（配列番号：８）の合成[Chemical 7] (In the formula, the ε-amino group of Lys and the β-carboxyl group of Asp are amide-bonded) 1.0 g (0.62 mmol) of oxime resin was suspended in 30 ml of dichloromethane, and Boc-Asp α-
Phenacyl ester 0.45 g (1.28 mmol)
Dissolved in 5 ml of acetone, DCC 0.36
g (1.74 mmol) was added and shaken for 4 days. Resin is dichloromethane, dichloromethane: ethanol =
It was washed with 1: 1, dichloromethane and shaken in 30 ml of 25% trifluoroacetic acid in dichloromethane solution for 30 minutes. Furthermore, wash with dichloromethane and DMF,
Suspended in 30 ml, Boc-Phe 0.05 g (1.
88 mmol), BOP 0.82 g (1.85 mmol) and HOBt 0.25 g (1.85 mmol) were added, and the mixture was shaken for 30 minutes. Similarly, after deprotecting Boc on the resin, Boc-Tyr, Boc-Val, Boc-ε-
Trt-Lys was bound. Furthermore, it was shaken in 30 ml of 5% dichloromethane solution of trifluoroacetic acid for 30 minutes, washed with dichloromethane, suspended in 30 ml of DMF, 0.11 ml of acetic acid and 0.33 ml of N, N-diisopropylethylamine were added, and the mixture was shaken for 3 days. The reaction solution was evaporated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel chromatography (Merck 9365 silica gel 60 (50 g) ethyl acetate: n-hexane = 3: 1 → eluted with ethyl acetate) to obtain 124.5 mg of the title compound (1) ( 0.13 mmol) was obtained as a colorless solid. (Yield 21%) MASS (FAB) M + = 961 Reference Example 2 Synthesis of peptide (2) (SEQ ID NO: 8)
【化８】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキ
シル基がアミド結合している） オキシムレジン ５．０ｇ（２．７０ミリモル）、Ｂｏ
ｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕα−フェナシルエステル ２．６０
ｇ（５．０７ミリモル）を原料として用いて参考例１と
同様に処理することにより、標記化合物（２） １．４
６ｇ（１．５０ミリモル）を無色固体として得た。（収
率５５％） ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＝９７５ 参考例３ ペプチド（３）（配列番号：９）の合成[Chemical 8] (In the formula, the ε-amino group of Lys and the γ-carboxyl group of Glu are amide-bonded) Oxime resin 5.0 g (2.70 mmol), Bo
c-Phe-Gluα-phenacyl ester 2.60
Using g (5.07 mmol) as a starting material and treating in the same manner as in Reference Example 1, the title compound (2) 1.4
Obtained 6 g (1.50 mmol) as a colorless solid. (Yield 55%) MASS (FAB) M + = 975 Reference Example 3 Synthesis of peptide (3) (SEQ ID NO: 9)
【化９】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキ
シル基がアミド結合している） オキシムレジン １．０ｇ（０．５４ミリモル）、Ｂｏ
ｃ−Ｐｈｅ−Ａｓｐα−フェナシルエステル ０．５３
ｇ（１．０６ミリモル）を原料として用いて参考例１と
同様に処理することにより、標記化合物（３） １０
１．９ｍｇ（０．１２ミリモル）を無色固体として得
た。（収率２２％） ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＋１＝８６３ 参考例４ ペプチド（４）（配列番号１０）の合成[Chemical 9] (In the formula, the ε-amino group of Lys and the β-carboxyl group of Asp are amide-bonded) Oximeresin 1.0 g (0.54 mmol), Bo
c-Phe-Aspα-phenacyl ester 0.53
g (1.06 mmol) was used as a starting material and treated in the same manner as in Reference Example 1 to give the title compound (3) 10
Obtained 1.9 mg (0.12 mmol) as a colorless solid. (Yield 22%) MASS (FAB) M + + 1 = 863 Reference Example 4 Synthesis of peptide (4) (SEQ ID NO: 10)
【化１０】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキ
シル基がアミド結合している） オキシムレジン１．０ｇ（１．００ミリモル）、Ｂｏｃ
−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ α−フェナシルエステル１．２ｇ
（２．３４ミリモル）を原料として用いて参考例１と同
様に処理することにより、標記化合物（４） ３３８．
１ｍｇ（０．３９ミリモル）を無色固体として得た。
（収率３９％） ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＝８７６ 参考例５ ペプチド（５）（配列番号１１）の合成[Chemical 10] (In the formula, the ε-amino group of Lys and the γ-carboxyl group of Glu are amide-bonded) Oximeresin 1.0 g (1.00 mmol), Boc
-Phe-Glu α-phenacyl ester 1.2 g
(2.34 mmol) was used as a starting material and treated in the same manner as in Reference Example 1 to give the titled compound (4) 338.
1 mg (0.39 mmol) was obtained as a colorless solid.
(Yield 39%) MASS (FAB) M + = 876 Reference Example 5 Synthesis of peptide (5) (SEQ ID NO: 11)
【化１１】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキ
シル基がアミド結合している） 参考例２で合成したペプチド ０．６０ｇ（０．７８ミ
リモル）、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＢＯＭ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ
（ＯＢｎ）−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ（Ｆｏｌｍｙｌ）
ＰＡＭレジン ０．３８ミリモルを原料とし、２５％Ｔ
ＦＡ ２０ｍｌで３０分間振盪し、ジクロロメタンで洗
い、実施例１と同様に反応後、ｍ−クレゾール ０．１
ｍｌ、フッ化水素 約１５ｍｌでペプチドを担体から遊
離させ、精製し、標記化合物（５） ４３．４ｍｇ（２
９．５マイクロモル）を無色固体として得た。（収率８
％） ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＝１４７２ 以下に本発明のペプチドの合成について実施例を示す。[Chemical 11] (In the formula, ε-amino group of Lys and γ-carboxyl group of Glu are amide-bonded) Peptide synthesized in Reference Example 2 0.60 g (0.78 mmol), Boc-His (BOM) -Leu- Asp
(OBn) -Ile-Ile-Trp (Folmyl)
Using PAM resin 0.38 mmol as a raw material, 25% T
After shaking with 20 ml of FA for 30 minutes, washing with dichloromethane, and carrying out the reaction in the same manner as in Example 1, m-cresol 0.1
ml, hydrogen fluoride (about 15 ml) to release the peptide from the carrier and purify it to obtain 43.4 mg (2) of the title compound (5).
9.5 μmol) was obtained as a colorless solid. (Yield 8
%) MASS (FAB) M + = 1472 Examples are shown below for the synthesis of the peptide of the present invention.
【００４７】実施例１ ペプチド（６）（配列番号：１
２）の合成Example 1 Peptide (6) (SEQ ID NO: 1)
2) Synthesis
【化１２】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキ
シル基がアミド結合している） 参考例１で合成した環状ペプチド ８３ｍｇ（８３マイ
クロモル）をＴＨＦ１０ｍｌ、水 １ｍｌに溶かし、水
酸化パラジウム炭素（２０％） １００ｍｇを加えて常
法により水素添加した。反応液をセライト濾過し、濾液
より溶媒を留去した。残渣をエーテル中で結晶化し、濾
取して乾燥させた。また、ペプチド合成機（Ａｐｐｌｉ
ｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社 ４３０Ａ ｐｅｐｔｉ
ｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）で合成したＦｍｏｃ−Ｈ
ｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ
−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｌｋｏレジン ２００ｍｇ（７
０．４マイクロモル）を２０％ピペリジン／ＤＭＦ溶液
２０ｍｌで３０分間処理することによりＦｍｏｃを脱
保護させた。このレジンをＤＭＦ １０ｍｌに懸濁させ
たものに、さきの乾燥した結晶を加え、さらに、ＢＯＰ
０．１２ｇ（２．７１ミリモル）、ＨＯＢｔ ５０ｍ
ｇ（３．７０ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチ
ルアミン ０．１ｍｌを加え、２日間振盪した。反応後
レジンをＤＭＦ、ジクロロメタンで洗い、エタンジチオ
ール ０．２５ｍｌ、水 ０．２５ｍｌ、ＴＦＡ ９．
５ｍｌで処理し、ペプチドを遊離させ、高速液体クロマ
トグラフィー（ＹＭＣ ＰａｃｋｅｄカラムＯＤＳ−５
Ｓ５ ＲＯＡＯＤＳ ２０ｍｍ×２５０ｍｍ ０．
１％ＴＦＡを含む５％アセトニトリル水溶液→０．０９
％ＴＦＡを含む９５％アセトニトリル水溶液で溶出）で
精製、凍結乾燥し、標記化合物（６） ２７．２ｍｇ
（１９．０マイクロモル）を無色固体として得た。（収
率２３％） ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＋１＝１４３１ ＨＰＬＣリテンション時間 ８．０５分 実施例２ ペプチド（７）（配列番号：１３）の合成[Chemical 12] (In the formula, the ε-amino group of Lys and the β-carboxyl group of Asp are amide-bonded) 83 mg (83 micromol) of the cyclic peptide synthesized in Reference Example 1 was dissolved in 10 ml of THF and 1 ml of water, and palladium hydroxide carbon was added. (20%) 100 mg was added and hydrogenated by a conventional method. The reaction solution was filtered through Celite, and the solvent was distilled off from the filtrate. The residue was crystallized in ether, filtered off and dried. In addition, a peptide synthesizer (Appli
ed Biosystems 430A pepti
Fmoc-H synthesized by desynthesizer)
is (Boc) -Leu-Asp (OtBu) -Ile
-Ile-Trp-Alko resin 200 mg (7
Fmoc was deprotected by treating 0.4 micromol) with 20 ml of 20% piperidine / DMF solution for 30 minutes. To the suspension of this resin in DMF (10 ml), add the dried crystals and add BOP.
0.12 g (2.71 mmol), HOBt 50 m
g (3.70 mmol) and 0.1 ml of N, N-diisopropylethylamine were added, and the mixture was shaken for 2 days. After the reaction, the resin was washed with DMF and dichloromethane, ethanedithiol 0.25 ml, water 0.25 ml, TFA 9.
Treatment with 5 ml to release the peptide, high performance liquid chromatography (YMC Packed column ODS-5
S5 ROAODS 20 mm × 250 mm 0.
5% acetonitrile aqueous solution containing 1% TFA → 0.09
29.5 mg of the title compound (6) by purification with a 95% acetonitrile aqueous solution containing TFA) and lyophilization.
(19.0 micromol) was obtained as a colorless solid. (Yield 23%) MASS (FAB) M + + 1 = 1431 HPLC retention time 8.05 minutes Example 2 Synthesis of peptide (7) (SEQ ID NO: 13)
【化１３】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキ
シル基がアミド結合している） 参考例５で合成したペプチド ２０．２ｍｇ（１３．７
マイクロモル）を氷冷下、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水
溶液に溶かし、２時間攪拌した。反応液を０．１Ｎ塩酸
でｐＨ７にし、実施例１と同様に高速液体クロマトグラ
フィーで精製し、標記化合物（７） ６．６ｍｇ（４．
６マイクロモル）を無色固体として得た。（収率３３
％） ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＝１４４４ 実施例３ ペプチド（８）（配列番号：１４）の合成[Chemical 13] (In the formula, the ε-amino group of Lys and the γ-carboxyl group of Glu are amide-bonded) 20.2 mg (13.7) of the peptide synthesized in Reference Example 5
(Micromol) was dissolved in 0.1N aqueous sodium hydroxide solution under ice cooling, and the mixture was stirred for 2 hours. The reaction solution was adjusted to pH 7 with 0.1N hydrochloric acid and purified by high performance liquid chromatography in the same manner as in Example 1 to give 6.6 mg of the title compound (7) (4.
6 μmol) was obtained as a colorless solid. (Yield 33
%) MASS (FAB) M + = 1444 Example 3 Synthesis of peptide (8) (SEQ ID NO: 14)
【化１４】 （式中、Ｌｙｓのα−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキ
シル基がアミド結合している） Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−Ａｌｋｏレジン ２８６ｍｇ（０．１
２５ミリモル）を原料とし、ペプチド合成機（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社 ４３０Ａｐｅｐｔｉ
ｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）でＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆ
ｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ａｓｐ
（ＯＡｌｌｙｌ）−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ａｓｐ
（ＯｔＢｕ）−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａｌｋｏレジ
ンを合成した。これにＤＭＳＯ：ＴＨＦ：０．５Ｎ塩
酸：Ｎ−メチルアニリン＝２：２：１：０．１ １５ｍ
ｌ、(Ｐｈ3Ｐ)4Ｐｄ ２８９ｍｇ（０．２５ミリモル）
を加え、９０分間振盪した。ＤＭＦ、ジクロロメタンで
洗浄後、再びＤＭＳＯ：ＴＨＦ：０．５Ｎ塩酸：Ｎ−メ
チルアニリン＝２：２：１：０．１ １５ｍｌ、(Ｐｈ3
Ｐ)4Ｐｄ ２８９ｍｇ（０．２５ミリモル）を加え、さ
らに３０分間振盪した。洗浄後、２０％ピペリジン／Ｄ
ＭＦ溶液 ２０ｍｌで６０分間２回振盪した。ＤＭＦ、
ジクロロメタン、０．４％塩酸／ＤＭＦ溶液、ＤＭＦで
洗浄後、ＤＭＦ １０ｍｌ、ＢＯＰ １９３．５ｍｇ
（０．４４ミリモル）、ＨＯＢｔ ５９．１ｍｇ（０．
４４ミリモル）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
０．１ｍｌ（０．６３ミリモル）を加え、一夜振盪し
た。ＤＭＦ、ジクロロメタンで洗浄後、エタンジチオー
ル ０．２５ｍｌ、水 ０．２５ｍｌ、ＴＦＡ ９．５
ｍｌで処理し、ペプチドを遊離させ、高速液体クロマト
グラフィー（ＹＭＣ ＰａｃｋｅｄカラムＯＤＳ−５
Ｓ５ ＲＯＡＯＤＳ ２０ｍｍ×２５０ｍｍ ０．１％
ＴＦＡを含む５％アセトニトリル水溶液→０．０９％Ｔ
ＦＡを含む９５％アセトニトリル水溶液で溶出）で精製
し、標記化合物（８） ８．２ｍｇ（５．７マイクロモ
ル）を無色固体として得た（収率５％）。[Chemical 14] (In the formula, the α-amino group of Lys and the β-carboxyl group of Asp are amide-bonded) Boc-Trp-Alko resin 286 mg (0.1
25 mmol) as a raw material, peptide synthesizer (Appl
ied Biosystems 430Apepti
de synthesizer) Boc-Lys (F
moc) -Val-Tyr (tBu) -Phe-Asp
(OAllyl) -His (Boc) -Leu-Asp
(OtBu) -Ile-Ile-Trp-Alko resin was synthesized. DMSO: THF: 0.5N hydrochloric acid: N-methylaniline = 2: 2: 1: 0.1 15 m
l, (Ph 3 P) 4 Pd 289 mg (0.25 mmol)
Was added and shaken for 90 minutes. After washing with DMF and dichloromethane, DMSO: THF: 0.5N hydrochloric acid: N-methylaniline = 2: 2: 1: 0.1 15 ml, (Ph 3
289 mg (0.25 mmol) of P) 4 Pd was added, and the mixture was further shaken for 30 minutes. After washing, 20% piperidine / D
Shake twice with 20 ml of MF solution for 60 minutes. DMF,
After washing with dichloromethane, 0.4% hydrochloric acid / DMF solution, DMF, DMF 10 ml, BOP 193.5 mg
(0.44 mmol), HOBt 59.1 mg (0.
44 mmol) and 0.1 ml (0.63 mmol) of N, N-diisopropylethylamine were added, and the mixture was shaken overnight. After washing with DMF and dichloromethane, 0.25 ml of ethanedithiol, 0.25 ml of water, TFA 9.5.
Treatment with ml to release the peptide, and high performance liquid chromatography (YMC Packed column ODS-5
S5 ROAODS 20mm x 250mm 0.1%
5% acetonitrile aqueous solution containing TFA → 0.09% T
Purification by elution with an aqueous 95% acetonitrile solution containing FA) gave 8.2 mg (5.7 μmol) of the title compound (8) as a colorless solid (yield 5%).
【００４８】このとき同時に実施例１で得られたペプチ
ド（６） １１．５ｍｇ（８．０マイクロモル）も得ら
れた。At the same time, 11.5 mg (8.0 μmol) of peptide (6) obtained in Example 1 was also obtained.
【００４９】ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＝１４３０ ＨＰＬＣリテンション時間 ７．８５分 実施例４ ペプチド（９）（配列番号：１５）の合成MASS (FAB) M + = 1430 HPLC retention time 7.85 minutes Example 4 Synthesis of peptide (9) (SEQ ID NO: 15)
【化１５】 （式中、Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキ
シル基がアミド結合している） 参考例４で合成したペプチド（４） １３０ｍｇ（１４
８マイクロモル）をＤＭＦ ５ｍｌ、ＴＨＦ ５ｍｌ、水
１ｍｌに溶かし、水酸化パラジウム炭素（２０％） ２
００ｍｇを加えて、脱保護後、実施例１と同様に処理す
ることにより、標記化合物（９） ３．４ｍｇ（２．５
マイクロモル）を無色固体として得た。（収率１．７
％）。[Chemical 15] (In the formula, ε-amino group of Lys and γ-carboxyl group of Glu are amide-bonded) Peptide (4) synthesized in Reference Example 4 130 mg (14
8 micromol) was dissolved in 5 ml of DMF, 5 ml of THF and 1 ml of water, and palladium hydroxide on carbon (20%) 2
After deprotection by adding 00 mg, the same treatment as in Example 1 was carried out to give 3.4 mg (2.5%) of the title compound (9).
Micromol) was obtained as a colorless solid. (Yield 1.7
%).
【００５０】ＭＡＳＳ（ＦＡＢ） Ｍ+＋１＝１３４５受容体結合アッセイ（ｂｉｎｄｉｎｇ ａｓｓａｙ） 実施例１−４で合成したペプチドが有するエンドセリン
受容体拮抗活性を次のように測定した。MASS (FAB) M + + 1 = 1345 Receptor Binding Assay The endothelin receptor antagonistic activity of the peptides synthesized in Examples 1-4 was measured as follows.
【００５１】ウシエンドセリンＡ受容体（ＥＴＡ）また
はラットエンドセリンＢ受容体（ＥＴＢ）を発現させた
ＣＨＯ細胞より、以下の方法に従って膜標本を調製する
（Ｎａｔｕｒｅ ｖｏｌ．３４８，７３０−７３２）。Membrane preparations are prepared from CHO cells expressing bovine endothelin A receptor (ETA) or rat endothelin B receptor (ETB) according to the following method (Nature vol. 348, 730-732).
【００５２】ＥＴＡまたはＥＴＢを発現させたＣＨＯ細
胞を直径１００ｍｍの培養皿１５−１６枚に植え、３−
４日間培養し、コンフルエントになった時点で用いる。
細胞を洗浄用緩衝液（５ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢ
Ｓ）で２回洗浄し、２−３ｍｌの同緩衝液を加え、細胞
を剥離し、５０ｍｌ遠心管に集める。９００ｒｐｍ、４
℃で５分間遠心し、さらにもう１回洗浄して再度遠心す
る。上清を捨て、１０ｍｌのホモジェナイズ用緩衝液
（０．２５Ｍ スクロース、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ
ＤＴＴ、１０μｇ／ｍｌ ＳＴＩ、１０μｇ／ｍｌ バ
シトラシン 、１μｇ／ｍｌ ロイペプチンおよび１ｍＭ
ＰＭＳＦ／ＥｔＯＨを含有する５０ｍＭＴｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ、ｐＨ７.４）を加え、Ｄｏｕｎｃｅ Ｔｉｓｓｕｅ
Ｇｒｉｎｄｅｒ（ＷＨＥＡＴＯＮ）で２０−３０回ホモ
ジェナイズする。９００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心し、
上清を超遠心管に集め、沈殿については再度ホモジェナ
イズする。４００００ｒｐｍ、４℃で１時間遠心する。
沈殿に、０．２５Ｍ スクロースおよび１ｍＭ ＥＤＴ
Ａを含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４を１．
５ｍｌ加え、再懸濁する（Ｎａｔｕｒｅ ｖｏｌ．３４
８，７３０−７３２）。CHO cells expressing ETA or ETB were planted in 15-16 culture dishes with a diameter of 100 mm, and
Cultivate for 4 days and use when it becomes confluent.
Washing buffer for cells (PB containing 5 mM EDTA
Wash twice with S), add 2-3 ml of the same buffer, detach the cells and collect in a 50 ml centrifuge tube. 900 rpm, 4
Centrifuge at 5 ° C for 5 minutes, wash once more and centrifuge again. Discard the supernatant and discard 10 ml of homogenization buffer (0.25 M sucrose, 1 mM EDTA, 1 mM).
DTT, 10 μg / ml STI, 10 μg / ml bacitracin, 1 μg / ml leupeptin and 1 mM
50 mM Tris-H containing PMSF / EtOH
Cl, pH 7.4) was added, and Dounce Tissue
Homogenize with Grinder (WHEATON) 20-30 times. Centrifuge at 900 rpm for 5 minutes at 4 ° C,
Collect the supernatant in an ultracentrifuge tube and homogenize again for the precipitate. Centrifuge for 1 hour at 40000 rpm and 4 ° C.
For precipitation, 0.25 M sucrose and 1 mM EDT
50 mM Tris-HCl, pH 7.4 containing A.
Add 5 ml and resuspend (Nature volume.34)
8, 730-732).
【００５３】評価薬物をＤＭＳＯに溶解して５ｍｇ／ｍ
ｌとした後、用時蒸留水にて希釈し、最終濃度 ５０μ
ｇ／ｍｌ以下で評価する。5 mg / m of the drug to be evaluated was dissolved in DMSO
Dilute with distilled water before use to make final concentration 50μ
Evaluation is made at g / ml or less.
【００５４】マルチスクリーンシステム用９６穴プレー
ト（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製）に、アッセイ用緩衝液
（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ,ｐＨ７.２；１５４ｍＭ
ＮａＣｌ, １ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ，２５ｍＭ ＭｎＣ
ｌ2，０.１％ ＢＳＡ含有）１１０μｌ、サンプルまた
はＥＴ−１のアッセイ用緩衝液２０μｌ、[125Ｉ]−Ｅ
Ｔ−１液（最終濃度０.１ｎＭ） ２０μｌ、膜標本 ５
０μｌを入れ、室温で３０分間反応させる。Assay buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.2; 154 mM) was added to a 96-well plate for multi-screen system (MILLIPORE).
NaCl, 1 mM EDTA ・ 2Na, 25 mM MnC
l 2 , 0.1% BSA) 110 μl, sample or ET-1 assay buffer 20 μl, [ 125 I] -E
T-1 solution (final concentration 0.1 nM) 20 μl, membrane preparation 5
Add 0 μl and allow to react for 30 minutes at room temperature.
【００５５】反応後、反応液を濾過して、フィルター上
に膜を残し、このフィルターを乾燥させてマルチスクリ
ーンシステム用チップ（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製）を用
いて、フィルターをはずし、γ−カウンタで測定する。After the reaction, the reaction solution is filtered to leave a membrane on the filter, the filter is dried, the filter is removed using a chip for multi-screen system (manufactured by MILLIPORE), and measurement is carried out with a γ-counter. .
【００５６】解析は、[125Ｉ]−ＥＴ−１の結合率とし
て、以下のように算出する。In the analysis, the binding rate of [ 125 I] -ET-1 is calculated as follows.
【００５７】[0057]
【数１】結合率(%) ＝ [sample count - N.S.] ／ [tot
al count - N.S.] ×100 sample count：サンプルを加えた場合のカウント total count：サンプルを加えない場合（緩衝液のみ）
のカウント N.S.：10-7M ET-1(大過剰量) を加えた場合のカウント
(非特異的結合) 実施例１−４で合成したペプチドのエンドセリン受容体
に対する結合活性を表１に示す。それぞれの化合物の受
容体結合活性は、ＥＴＡないしＥＴＢ受容体を発現した
ＣＨＯ細胞を用いて、［125Ｉ］−ＥＴ−１（１０
-10Ｍ）との競合結合実験により、化合物２５μｇ／ｍ
ｌあるいは５０μｇ／ｍｌによる［125Ｉ］−ＥＴ−１
の特異的結合の阻害率（％）[＝１００−結合率（％）]
で表示した。[Equation 1] Coupling rate (%) = [sample count-NS] / [tot
al count-NS] × 100 sample count: Count when sample is added total count: When sample is not added (buffer only)
Count NS: Count when adding 10 -7 M ET-1 (large excess amount)
(Non-specific binding) Table 1 shows the binding activity of the peptides synthesized in Examples 1-4 to the endothelin receptor. The receptor binding activity of each compound was determined by [ 125 I] -ET-1 (10) using CHO cells expressing the ETA or ETB receptor.
-10 M), the compound 25 μg / m
1 or 50 μg / ml of [ 125 I] -ET-1
Inhibition rate (%) of specific binding of [= 100-binding rate (%)]
Displayed in.
【００５８】[0058]
【表１】 表１ ペプチドのエンドセリン受容体に対する結合活性 サンプル [125Ｉ]-ＥＴ-１の特異的結合の阻害率(％) ＥＴＡ受容体 ＥＴＢ受容体 ペプチド（６）（実施例１） ７３ ３８ ペプチド（７）（実施例２） ７３＊ ７６＊ ペプチド（８）（実施例３） ８８ ６ ペプチド（９）（実施例４） ９３ ５２ ＊は２５μｇ／ｍｌ、その他は５０μｇ／ｍｌTable 1 Binding activity of peptides to endothelin receptorsInhibition rate (%) of specific binding of sample [ 125 I] -ET-1 ETA receptor ETB receptor Peptide (6) (Example 1) 73 38 Peptide (7) (Example 2) 73 * 76 * Peptide (8) (Example 3) 88 6Peptide (9) (Example 4) 93 52 *: 25 μg / ml, others: 50 μg / ml
【００５９】[0059]
【配列表】配列番号：１ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１１ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｘａａ＝ＧｌｕまたはＡｓｐ Ｌｙｓのα−またはε−アミノ基とＸａａのβ−または
γ−カルボキシル基がアミド結合している 配列番号：２ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１０ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｘａａ＝ＧｌｕまたはＡｓｐ Ｌｙｓのα−またはε−アミノ基とＸａａのβ−または
γ−カルボキシル基がアミド結合している 配列番号：３ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１１ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのα−またはε−アミノ基とＧｌｕのγ−
カルボキシル基がアミド結合している 配列番号：４ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：５ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：５ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１１ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｘａａ＝ＧｌｕまたはＡｓｐ Ｌｙｓのα−アミノ基とＸａａのβ−またはγ−カルボ
キシル基がアミド結合している 配列番号：６ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１１ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｘａａ＝ＧｌｕまたはＡｓｐ Ｌｙｓのε−アミノ基とＸａａのβ−またはγ−カルボ
キシル基がアミド結合している 配列番号：７ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：５ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：８ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：５ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：９ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：４ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：１０ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：４ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：１１ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１１ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：１２ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１１ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：１３ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１１ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：１４ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１１ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのα−アミノ基とＡｓｐのβ−カルボキシ
ル基がアミド結合している 配列番号：１５ 配列の種類：ペプチド 配列の長さ：１０ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：環状 配列の型：合成ペプチド 特徴：Ｌｙｓのε−アミノ基とＧｌｕのγ−カルボキシ
ル基がアミド結合している [Sequence Listing] SEQ ID NO: 1 Sequence type: Peptide Sequence length: 11 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Characteristics: Xaa = Glu or Asp Lys α- or ε-amino Group and amide bond between β- or γ-carboxyl group of Xaa SEQ ID NO: 2 Sequence type: Peptide Sequence length: 10 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Xaa = Glu or Asp Lys α- or ε-amino group and Xaa β- or γ-carboxyl group is amide bond SEQ ID NO: 3 Sequence type: Peptide Sequence length: 11 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Lys α- or ε-amino group and Glu γ-
Carboxyl group is amide bond SEQ ID NO: 4 Sequence type: Peptide Sequence length: 5 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Lys ε-amino group and Glu γ-carboxyl group form an amide bond ing SEQ ID NO: 5 Sequence type: Peptide Sequence length: 11 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Xaa = Glu or Asp Lys α-amino group and Xaa β-or γ-carboxyl group is amide bond SEQ ID NO: 6 Sequence type: Peptide Sequence length: 11 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Xaa = Glu or Asp Lys ε-amino group and Xaa β-or γ-carboxyl group is amide bond SEQ ID NO: 7 Sequence type: Peptide Sequence length: 5 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Lys ε-amino group and Asp β-carboxyl group form an amide bond ing SEQ ID NO: 8 Sequence type: Peptide Sequence length: 5 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Lys ε-amino group and Glu γ-carboxyl group form an amide bond ing SEQ ID NO: 9 Sequence type: Peptide Sequence length: 4 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Lys ε-amino group and Asp β-carboxyl group form an amide bond ing SEQ ID NO: 10 Sequence type: Peptide Sequence length: 4 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Characteristics: Lys ε-amino group and Glu γ-carboxyl group form an amide bond ing SEQ ID NO: 11 Sequence type: Peptide Sequence length: 11 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: ε-amino group of Lys and γ-carboxyl group of Glu are amide-bonded ing SEQ ID NO: 12 Sequence type: Peptide Sequence length: 11 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: Lys ε-amino group and Asp β-carboxyl group form an amide bond ing SEQ ID NO: 13 Sequence type: Peptide Sequence length: 11 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: ε-amino group of Lys and γ-carboxyl group of Glu are amide-bonded ing SEQ ID NO: 14 Sequence type: Peptide Sequence length: 11 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Features: α-amino group of Lys and β-carboxyl group of Asp are amide-bonded ing SEQ ID NO: 15 Sequence type: Peptide Sequence length: 10 Number of chains: Single chain Topology: Cyclic Sequence type: Synthetic peptide Characteristics: Lys ε-amino group and Glu γ-carboxyl group form an amide bond ing
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＣＶ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＶ (72)発明者 石黒 正路 大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号 サントリー株式会社生物医学研究所内─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Internal reference number FI Technical indication location A61K 38/00 ACV A61K 37/02 ACV (72) Inventor Masajiro Ishiguro Wakayamadai, Shimamoto-cho, Mishima-gun, Osaka Prefecture 1-1-1 Suntory Ltd. Biomedical Research Institute
Claims (4)
たは１を示し、ＬｙｓとＸａａの結合は、Ｌｙｓのα−
またはε−アミノ基とＸａａのβ−またはγ−カルボキ
シル基がアミド結合していることを示す）で表されるエ
ンドセリン受容体拮抗ペプチドまたはその酸付加塩。Claims 1. Formula (I) (SEQ ID NOS: 1 and 2): (In the formula, Xaa represents Glu or Asp, n represents 0 or 1, and the bond between Lys and Xaa is α- of Lys.
Or an endothelin receptor antagonistic peptide represented by amide bond between ε-amino group and β- or γ-carboxyl group of Xaa or an acid addition salt thereof.
プチドまたはその薬理学的に許容される酸付加塩を含有
する循環器用薬。2. A cardiovascular drug containing the endothelin receptor antagonist peptide according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof.
プチドまたはその薬理学的に許容される酸付加塩を含有
する抗アレルギー薬。3. An anti-allergic drug containing the endothelin receptor antagonist peptide according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof.
プチドまたはその薬理学的に許容される酸付加塩を含有
する腎疾患用薬。4. A drug for renal diseases, which comprises the endothelin receptor antagonist peptide according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6021079A JPH07228594A (en) | 1994-02-18 | 1994-02-18 | Endothelin receptor-antagonistic peptide |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6021079A JPH07228594A (en) | 1994-02-18 | 1994-02-18 | Endothelin receptor-antagonistic peptide |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07228594A true JPH07228594A (en) | 1995-08-29 |
Family
ID=12044884
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6021079A Pending JPH07228594A (en) | 1994-02-18 | 1994-02-18 | Endothelin receptor-antagonistic peptide |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07228594A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002032933A1 (en) * | 2000-06-21 | 2002-04-25 | Institute Of Pharmacology And Toxicology Accademy Of Military Medical Sciences P.L.A | Endothelin antagonist |
| US6914122B2 (en) * | 2000-04-19 | 2005-07-05 | Schering Corporation | Macrocyclic NS-3 serine protease inhibitors of hepatitis C virus comprising alkyl and aryl alanine P2 moieties |
-
1994
- 1994-02-18 JP JP6021079A patent/JPH07228594A/en active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6914122B2 (en) * | 2000-04-19 | 2005-07-05 | Schering Corporation | Macrocyclic NS-3 serine protease inhibitors of hepatitis C virus comprising alkyl and aryl alanine P2 moieties |
| WO2002032933A1 (en) * | 2000-06-21 | 2002-04-25 | Institute Of Pharmacology And Toxicology Accademy Of Military Medical Sciences P.L.A | Endothelin antagonist |
| US6953780B2 (en) | 2000-06-21 | 2005-10-11 | Institute Of Pharmacology And Toxicology Academy Of Military Medical Sciences, P.L.A. | Endothelin antagonist |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2677489B2 (en) | Cyclic peptide and its use | |
| JP2944669B2 (en) | Peptide, method for producing the same, LHRH antagonist containing the peptide | |
| EP0672055B1 (en) | Neuropeptide y antagonists | |
| US4935491A (en) | Effective antagonists of the luteinizing hormone releasing hormone which release negligible histamine | |
| JP3266311B2 (en) | Novel polypeptide and anti-HIV agent using the same | |
| EP0309297B1 (en) | Therapeutic peptides | |
| EP0315367B1 (en) | Polypeptides | |
| US5955425A (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
| EP1179537B1 (en) | Solid phase peptide synthesis method | |
| JP2599947B2 (en) | Peptide compounds | |
| CZ301696B6 (en) | Peptide compound, pharmaceutical composition in which the peptide compound is comprised and use of the peptide compound | |
| EP1309613B1 (en) | Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide | |
| HU208159B (en) | Process for producing 1h-rh analogs and pharmaceutical compositions comprising same | |
| Escher et al. | Synthesis and biological activities of photoaffinity labeling analogs of substance P | |
| JPH07228594A (en) | Endothelin receptor-antagonistic peptide | |
| JPH0687891A (en) | Peptide compound having bradykinin antagonist activity | |
| EP0452447A1 (en) | Reduced irreversible bombesin antagonists | |
| JPH09124692A (en) | Biotin derivative | |
| HUT73777A (en) | Novel tripeptides useful in immune and central nerve system therapy | |
| EP0034721A2 (en) | Polypeptide and its production and use | |
| JPH02258798A (en) | Competitive gonadoliberin antagonist | |
| JP3354173B2 (en) | Polypeptides and uses thereof | |
| JPH06192293A (en) | Cyclic pentapeptide, its production and use thereof | |
| JP2513440B2 (en) | New peptide | |
| Greiner et al. | Bradykinin antagonists with dehydrophenylalanine analogues at position 5 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040420 |