JPH07159404A - Method of measuring substance using biotin spin labeled - Google Patents
Method of measuring substance using biotin spin labeledInfo
- Publication number
- JPH07159404A JPH07159404A JP30500993A JP30500993A JPH07159404A JP H07159404 A JPH07159404 A JP H07159404A JP 30500993 A JP30500993 A JP 30500993A JP 30500993 A JP30500993 A JP 30500993A JP H07159404 A JPH07159404 A JP H07159404A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- biotin
- avidin
- spin
- labeled
- amount
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、スピンラベルしたビオ
チンを用いた物質の測定方法に関し、とくにアビジンお
よびビオチンの反応量を正確に定量する測定方法に関す
る。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for measuring a substance using spin-labeled biotin, and more particularly to a method for accurately quantifying the reaction amounts of avidin and biotin.
【０００２】[0002]
【従来の技術】生化学物質の測定に広く利用されている
イムノアッセイ法は、生物の有する免疫に基づく特異な
反応を利用した測定方法である。すなわち脊髄動物の免
疫システムは抗原等の外来の物質に対して特異的な親和
性をもつたんぱく質分子である抗体を作ることができる
ので、このような抗原抗体反応を利用することによって
高感度で選択性が高い測定が可能である。2. Description of the Related Art An immunoassay method widely used for measuring biochemical substances is a measuring method utilizing a specific reaction based on the immunity of an organism. In other words, the immune system of spinal cord animals can produce antibodies, which are protein molecules that have a specific affinity for foreign substances such as antigens, so by using such an antigen-antibody reaction, selection can be made with high sensitivity. Highly accurate measurement is possible.
【０００３】とくに、酵素の有する大きな触媒能力と特
異性を利用した酵素を標識としたエンザイムノアッセイ
法（ＥＩＡ）は、きわめて高い感度、検出能力、特異性
を有しており、しかも測定に使用する機器が比較的簡単
であり、試薬類の入手も容易であるという特徴を有して
いるが、一般に検出は発色試薬等を使用して、試料の吸
光度の変化にて行われている。しかし、このような発色
を利用した方法では、試料の形状に影響され、また試料
中に吸光度に影響を与える物質や、光を分散する物質等
が含まれていると測定値に悪影響を与えるので、発色に
よらない方法が提案されている。Particularly, the enzyme-linked immunoassay method (EIA) using an enzyme as a label, which utilizes the large catalytic ability and specificity of the enzyme, has extremely high sensitivity, detection ability and specificity, and is used for measurement. Although it is characterized in that the equipment is relatively simple and the reagents can be easily obtained, the detection is generally performed by changing the absorbance of the sample using a coloring reagent or the like. However, in the method using such coloring, the measurement value is adversely affected if the sample is influenced by the shape of the sample and the sample contains a substance that affects the absorbance or a substance that disperses light. , A method not based on color development has been proposed.
【０００４】発色試薬によらない方法である放射線同位
元素を標識した抗体を用いたラジオイムノアッセイ法
（ＲＩＡ）では、放射線の被爆の危険や、廃棄物の処理
に特別な設備を有するという問題がある。The radioimmunoassay method (RIA) using an antibody labeled with a radioisotope, which is a method that does not rely on a color reagent, has a problem of radiation exposure and a special facility for treating waste. .
【０００５】一方、安定なフリーラジカルであるスピン
ラベル剤で標識しＢＦ分離の不用な免疫測定方法とし
て、抗原、抗体等にスピンラベルしたものを用いて免疫
反応を行わせ、反応終了後のＥＳＲスペクトルを解析す
ることにより目的物質を定性的あるいは定量的に測定す
るスピンイムノアッセイ法が提案されている。この方法
は、試料の形状や試料中に含まれている着色物質によっ
て影響を受けないという特徴を有している。ところが、
にわとりの卵白中に含まれており、生体防御蛋白として
注目されているアビジンのような高分子物質の測定で
は、蛋白質にスピン標識物質を結合させると測定信号の
ピークが明確に観測されず、極端な感度低下が生じる。
また、抗原が低分子物質であっても、抗原抗体反応後の
信号がブランク値となり、エンザイムイムノアッセイ、
ラジオイムノアッセイ法等に比べて測定の優位性が得ら
れなかった。On the other hand, as an immunoassay method unnecessary for BF separation by labeling with a spin labeling agent which is a stable free radical, an immunoreaction is performed using a spin-labeled antigen, antibody or the like, and ESR after the reaction is completed. A spin immunoassay method has been proposed in which a target substance is qualitatively or quantitatively measured by analyzing a spectrum. This method is characterized in that it is not affected by the shape of the sample or the coloring substance contained in the sample. However,
In the measurement of macromolecular substances such as avidin, which is contained in chicken egg white and is attracting attention as a biological defense protein, when the spin-labeled substance is bound to the protein, the peak of the measurement signal is not clearly observed, and Sensitivity decreases.
Even if the antigen is a low molecular weight substance, the signal after the antigen-antibody reaction becomes a blank value, and the enzyme immunoassay,
The superiority of measurement was not obtained as compared with the radioimmunoassay method and the like.
【０００６】また、カルボキシル化反応に関与する酵素
であり、脂質代謝、糖質代謝等に重要な役割を果たして
いるビオチンに関しては、ビオチンの欠乏が免疫不全、
神経系疾患、アトピー性皮膚炎、糖尿病、腎不全、肝不
全等の症状に関係することが知られており、ビオチンを
正確に分析することは極めて重要である。現在、ビオチ
ンの定量は、微生物の増殖度から求める微生物法、ビオ
チンがアビジンに対して極めて大きな親和性を有するこ
とを利用し、残留したアビジンが色素、４´−ヒドロキ
シアゾベンゼン−２−カルボキシレートと反応すること
による呈色の変化によって求める吸光度分析法が行われ
ている。このうち、吸光度分析法では、簡便に測定する
ことが可能であるが、生体の試料のように微量のビオチ
ンの測定には適さない。一方、微生物法は感度が高く特
異性も高いが、一般に生物学的な方法に共通するよう
に、再現性が悪く、また、ヒト血中のビオチンの正常値
では、２〜８倍の相違があるので正確な測定方法が求め
られていた。Regarding biotin, which is an enzyme involved in carboxylation reaction and plays an important role in lipid metabolism, carbohydrate metabolism, etc., deficiency of biotin causes immunodeficiency,
It is known to be associated with conditions such as nervous system diseases, atopic dermatitis, diabetes, renal failure and liver failure, and accurate analysis of biotin is extremely important. At present, biotin is quantified by utilizing the microbial method that is obtained from the growth rate of microorganisms, that biotin has an extremely high affinity for avidin, and the residual avidin is a dye, 4'-hydroxyazobenzene-2-carboxylate. Absorbance analysis method, which is obtained by a change in color due to reaction, is performed. Among them, the absorbance analysis method allows simple measurement, but is not suitable for measuring a small amount of biotin such as a sample of a living body. On the other hand, the microbial method has high sensitivity and high specificity, but is generally poor in reproducibility as is common to biological methods, and there is a difference of 2 to 8 times in the normal value of biotin in human blood. Therefore, an accurate measurement method was required.
【０００７】[0007]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、スピンラベ
ル化剤によってスピンラベルしたビオチンとアビジンの
選択的反応を用いたラジカルバウンドイムノアッセイに
よって、アビジンおよびビオチンを試料の形状や着色等
に左右されず、発色による方法に比べて感度が高く、微
生物法に比べて正確な測定方法を提供することを課題と
するものである。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention provides a radical bound immunoassay using a selective reaction of biotin and avidin spin-labeled with a spin-labeling agent, so that avidin and biotin are not affected by the shape or color of the sample. It is an object of the present invention to provide a measuring method which has higher sensitivity than the method based on color development and is more accurate than the microbial method.
【０００８】[0008]
【課題を解決するための手段】本発明の方法は、スピン
ラベルしたビオチンを用いた物質の測定方法において、
スピンラベルしたビオチンをアビジンと反応させた後に
電子スピン共鳴装置によってラジカル量を測定し、反応
によって減少したラジカル量からビオチンあるいはアビ
ジンを定量するスピンラベルしたビオチンを用いた物質
の測定方法である。The method of the present invention is a method for measuring a substance using spin-labeled biotin,
This is a method for measuring a substance using spin-labeled biotin, in which spin-labeled biotin is reacted with avidin, the radical amount is measured by an electron spin resonance apparatus, and biotin or avidin is quantified from the radical amount reduced by the reaction.
【０００９】すなわち、本発明は、ビオチンにスピンラ
ベリング剤を結合した物質が通常のビオチンと同様にア
ビジンと結合し、その結果ビオチンにラベルしたスピン
ラベリング剤によって電子スピン共鳴装置によって測定
される測定値がアビジンの量に応じて減少することを見
いだし、本発明をなすに至ったものである。That is, according to the present invention, a substance in which a spin labeling agent is bound to biotin is bound to avidin in the same manner as ordinary biotin, and as a result, a measured value measured by an electron spin resonance apparatus by the spin labeling agent labeled to biotin. The present invention has been found to be reduced according to the amount of avidin, and the present invention has been completed.
【００１０】アビジンはビオチンに対し１０15Ｍ-1とい
う極めて高い親和性を有しており、この親和性を利用し
た免疫測定方法が行われているが、スピンラベリング剤
を結合し、イムノアッセイに適用することは行われて来
なかった。本発明はアビジンに直接にスピンラベリング
剤を結合するのではなく、アビジンと反応するビオチン
にスピンラベリング剤を結合したもので、ビオチンはア
ビジンとの反応の結果、結合したスピンラベリング剤が
観測されなくなるものである。[0010] Avidin has an extremely high affinity of 10 15 M -1 for biotin, and an immunoassay utilizing this affinity has been carried out. However, it is bound to a spin labeling agent and applied to an immunoassay. Nothing has been done. The present invention does not directly bind the spin labeling agent to avidin, but binds the spin labeling agent to biotin that reacts with avidin, and the biotin reacts with avidin, and as a result, the bound spin labeling agent is not observed. It is a thing.
【００１１】ビオチンに結合するスピンラベリング剤に
は、４−アミノ基を有するニトロキシドラジカルが用い
られ、このような化合物には、４−アミノ−２，２，
６，６−テトラメチルピペリジン−Ｎ−オキシル（４−
アミノ−ＴＥＭＰＯ）、３−アミノ−２，２，５，５−
テトラメチルピロリジン−Ｎ−オキシル（３−アミノ−
ＰＲＯＸＹＬ）等を挙げることができる。例えば、ＴＥ
ＭＰＯは、下記のようにビオチンと反応して、ビオチン
をスピンラベルし、ビオチンＴＥＭＰＯを生成する。A nitroxide radical having a 4-amino group is used as a spin labeling agent which binds to biotin, and such compounds include 4-amino-2,2,2.
6,6-Tetramethylpiperidine-N-oxyl (4-
Amino-TEMPO), 3-amino-2,2,5,5-
Tetramethylpyrrolidine-N-oxyl (3-amino-
PROXYL) and the like. For example, TE
MPO reacts with biotin as described below to spin-label biotin to produce biotin TEMPO.
【００１２】[0012]
【化１】 [Chemical 1]
【００１３】スピンラベルしたビオチンは、通常のビオ
チンと同様にアビジンと反応し、その結果、アビジンの
量に応じてスピンラベリング剤によるラジカルが観測さ
れなくなる。また、本発明の方法で測定可能なアビジン
は、分子量が約６０，０００の鶏卵の卵白から得られる
アビジンとともに、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ａｖｉ
ｄｉｎｉｉによって産生する分子量が約６８，０００の
ストレプトアビジンも同様に観測することができる。ア
ビジン、ストレプトアビジンとスピンラベルしたビオチ
ンの反応を利用することによって、既知のスピンラベル
したビオチン量から未知のアビジン量を求めること、あ
るいは既知のアビジン量から未知のビオチン量を求める
ことが可能である。Spin-labeled biotin reacts with avidin in the same manner as ordinary biotin, and as a result, radicals due to the spin labeling agent are not observed depending on the amount of avidin. Further, avidin which can be measured by the method of the present invention includes Streptomyces Avi together with avidin obtained from egg white of chicken eggs having a molecular weight of about 60,000.
Streptavidin with a molecular weight of about 68,000 produced by dinii can also be observed. By utilizing the reaction between avidin and streptavidin and spin-labeled biotin, it is possible to obtain the unknown amount of avidin from the known amount of spin-labeled biotin, or the unknown amount of biotin from the known amount of avidin. .
【００１４】さらに、球状、板状等の任意の形状の担体
に、測定したい物質の抗体を吸着させた後に、測定すべ
き抗原を含有する試料を加えると、試料中の抗原が抗原
抗体反応で結合する。さらに、アビジンが結合した抗体
を添加して抗原抗体反応で結合させた後に、スピンラベ
ルしたビオチンを加えてアビジンによって減少したラジ
カル量を測定することによって、アビジンと結合した抗
原の量を間接的に測定することが可能となる。Further, after adsorbing the antibody of the substance to be measured on a carrier having an arbitrary shape such as a sphere or a plate and then adding a sample containing the antigen to be measured, the antigen in the sample undergoes an antigen-antibody reaction. Join. In addition, the amount of antigen bound to avidin was indirectly measured by adding an antibody to which avidin was bound and binding it in an antigen-antibody reaction, and then adding spin-labeled biotin to measure the amount of radicals reduced by avidin. It becomes possible to measure.
【００１５】[0015]
【作用】ビオチンにスピンラベルした物質とアビジンと
が極めて特異的に反応し、ラジカルが消失する現象が、
アビジンの量に比例して起こることを見い出し、スピン
ラベルしたビオチン使用して、アビジン、ビオチンを試
料の着色に影響されずに高感度に測定することができ、
抗原−抗体反応に基づく抗原量の測定に利用できる。[Function] A phenomenon in which a substance spin-labeled with biotin and avidin react extremely specifically and radicals disappear,
We found that it occurs in proportion to the amount of avidin, and by using spin-labeled biotin, avidin and biotin can be measured with high sensitivity without being affected by the coloring of the sample.
It can be used to measure the amount of antigen based on the antigen-antibody reaction.
【００１６】[0016]
【実施例】以下に本発明の実施例を示し、本発明を詳細
に説明する。 実施例１ スピンラベルしたビオチンＴＥＭＰＯ（同仁化学製）を
滅菌蒸留水に溶解し、濃度５ｍｇ／ｍｌの溶液を製造
し、さらにこの溶液を滅菌蒸留水によって１０００倍に
希釈した測定用の試料を調整した。また、ストレプトア
ビジン（ＺＹＭＥＤ ＬＡＢ ＩＮＣ製）を滅菌蒸留水
に溶解し濃度が１ｍｇ／ｍｌの溶液を調整した。EXAMPLES The present invention will be described in detail below by showing Examples of the present invention. Example 1 Spin-labeled biotin TEMPO (manufactured by Dojindo) was dissolved in sterile distilled water to prepare a solution having a concentration of 5 mg / ml, and this solution was diluted 1000 times with sterile distilled water to prepare a sample for measurement. did. Further, streptavidin (manufactured by ZYMED LAB INC) was dissolved in sterile distilled water to prepare a solution having a concentration of 1 mg / ml.
【００１７】ビオチンＴＥＭＰＯ、ストレプトアビジン
および水を表１にμｌで示す量で混合し、５０μｌの試
料番号１〜７の試料を調整し、それぞれの試料の１０μ
ｌを用いてスピンラベリング剤のスピン強度の測定を行
いその結果を図１に示す。測定は、日本電子社製電子ス
ピン共鳴装置ＲＥ２Ｘによって、磁場３３６±５ｍＴ、
磁場変調１００ｋＨｚ、１０Ｇ、増幅比５００、応答時
間０．１秒、掃引時間１分の条件で測定し、得られた結
果を図１に示す。Biotin TEMPO, streptavidin and water were mixed in an amount shown in μl in Table 1, 50 μl of sample Nos. 1 to 7 were prepared, and 10 μm of each sample was prepared.
1 was used to measure the spin intensity of the spin labeling agent, and the results are shown in FIG. The measurement was carried out by an electron spin resonance device RE2X manufactured by JEOL Ltd., magnetic field 336 ± 5 mT,
Measurement was performed under the conditions of magnetic field modulation of 100 kHz, 10 G, amplification ratio of 500, response time of 0.1 seconds, and sweep time of 1 minute, and the obtained results are shown in FIG.
【００１８】[0018]
【表１】 [Table 1]
【００１９】実施例２ ストレプトアビジンに代えてアビジン（ＺＹＭＥＤ Ｌ
ＡＢ ＩＮＣ製）を用いた点を除き実施例１と同様に、
表２に示す試料番号８〜１３の試料を調整して同様に測
定し、得られた結果を図２に示す。Example 2 Instead of streptavidin, avidin (ZYMED L
The same as in Example 1 except that AB INC) was used,
Sample Nos. 8 to 13 shown in Table 2 were prepared and similarly measured, and the obtained results are shown in FIG.
【００２０】[0020]
【表２】 [Table 2]
【００２１】実施例３ ビオチンに結合したスピンラベリング剤であるＴＥＭＰ
Ｏ（シグマ社製）を滅菌蒸留水に溶解した濃度２０ｍｇ
／ｍｌの溶液を希釈した２０μｇ／ｍｌの溶液の１０μ
ｌと水４０μｌの混合液、および実施例１および２で用
いたストレプトアビジンあるいはアビジンの４０μｌと
の混合液を調整し、それぞれ１０μｌを実施例１と同様
に測定したところ、ストレプトアビジンあるいはアビジ
ンを含有するものとしないものでは、測定結果に相違は
なく、スピンラベリング剤のみでは、アビジンの測定は
できないことが確認できた。Example 3 TEMP, a spin labeling agent bound to biotin
Concentration of O (manufactured by Sigma) dissolved in sterile distilled water 20 mg
10 μl of 20 μg / ml solution diluted with 1 μg / ml solution
1 and 40 μl of water and a mixture of 40 μl of streptavidin or avidin used in Examples 1 and 2 were prepared, and 10 μl of each were measured in the same manner as in Example 1 to find that they contained streptavidin or avidin. There was no difference in the measurement results between those with and without spinner, and it was confirmed that the measurement of avidin cannot be performed only with the spin labeling agent.
【００２２】実施例４ アビジンに代えて分子量が６６，０００の牛血清アルブ
ミン分画物Ｖ（シグマ社製）の濃度２ｍｇ／ｍｌの溶液
の５μｌ、１０μｌを用いて、残部を滅菌蒸留水とした
５０μｌの混合液を調整して実施例１と同様に測定した
ところ、蛋白の添加によって測定結果は変化せず、アビ
ジンとの特異的な反応によってのみスピンラベルが消失
することが確認できた。Example 4 Instead of avidin, 5 μl and 10 μl of a solution of bovine serum albumin fraction V having a molecular weight of 66,000 (manufactured by Sigma) at a concentration of 2 mg / ml was used, and the rest was made sterile distilled water. When 50 μl of the mixed solution was prepared and measured in the same manner as in Example 1, it was confirmed that the addition of the protein did not change the measurement result and the spin label disappeared only by the specific reaction with avidin.
【００２３】実施例５ 実施例２で調整したスピンラベルしたビオチンの信号が
消失した試料１３をオートクレーブで１２０℃２０分間
加熱処理をしてビオチンとアビジンの結合を解離した後
に再度測定したところ、スピンラベルによる信号を再び
観測することができた。さらに、スピンラベルが再度観
測された試料の１０μｌに実施例１で調整したストレプ
トアビジンを１０μｌを添加して測定したところ、スピ
ンラベルによる信号が消失した。この結果、スピンラベ
ルしたビオチンはオートクレーブでの熱処理では分解し
ないほど安定であることを確認することができた。Example 5 Sample 13 from which the spin-labeled biotin signal had been prepared prepared in Example 2 was heat-treated at 120 ° C. for 20 minutes in an autoclave to dissociate the bond between biotin and avidin, and then measured again. The signal by the label could be observed again. Further, when 10 μl of the streptavidin prepared in Example 1 was added to 10 μl of the sample in which the spin label was observed again and the measurement was performed, the signal due to the spin label disappeared. As a result, it was confirmed that spin-labeled biotin was so stable that it was not decomposed by heat treatment in an autoclave.
【００２４】[0024]
【発明の効果】スピンラベルしたビオチンがアビジンと
結合することによって消失するラジカルを電子スピン共
鳴装置によって測定することによって、アビジン、ビオ
チンあるいはこれらと抗原抗体反応をする物質を試料の
着色に影響されずに、高感度に測定することができる。EFFECTS OF THE INVENTION By measuring the radical disappeared by binding spin-labeled biotin with avidin by an electron spin resonance apparatus, avidin, biotin or a substance that reacts with them in an antigen-antibody reaction is not affected by the coloration of the sample. Moreover, it is possible to measure with high sensitivity.
【図１】スピンラベルしたビオチンと結合したストレプ
トアビジンの電子スピン共鳴装置による測定結果を説明
する図である。FIG. 1 is a diagram illustrating the measurement result of streptavidin bound to spin-labeled biotin by an electron spin resonance apparatus.
【図２】スピンラベルしたビオチンと結合したアビジン
の電子スピン共鳴装置による測定結果を説明する図であ
る。FIG. 2 is a diagram illustrating a measurement result of avidin bound to spin-labeled biotin by an electron spin resonance apparatus.
フロントページの続き (72)発明者 志賀 匡宣 熊本県上益城郡益城町田原2025−５ 株式 会社同仁化学研究所内 (72)発明者 佐々本 一美 熊本県上益城郡益城町田原2025−５ 株式 会社同仁化学研究所内 (72)発明者 河野 雅弘 東京都昭島市武蔵野三丁目１番２号 日本 電子株式会社内 (72)発明者 真明 正志 東京都昭島市武蔵野三丁目１番２号 日本 電子株式会社内Front page continuation (72) Inventor Masanori Shiga 2025-5 Tahara, Mashiki-machi, Kamimashiki-gun, Kumamoto Prefecture Dojin Chemical Research Co., Ltd. (72) Inventor Masahiro Kono 3-12 Musashino, Akishima-shi, Tokyo Japan Electronics Co., Ltd. (72) Masashi Masaki 1-2-3 Musashino, Akishima-shi, Tokyo Japan Electronics Co., Ltd.
Claims (1)
の測定方法において、スピンラベルしたビオチンをアビ
ジンと反応させた後に電子スピン共鳴装置によってラジ
カル量を測定し、反応によって減少したラジカル量から
ビオチンあるいはアビジンを定量することを特徴とする
スピンラベルしたビオチンを用いた物質の測定方法。1. A method for measuring a substance using spin-labeled biotin, wherein the spin-labeled biotin is reacted with avidin, and then the amount of radicals is measured by an electron spin resonance apparatus, and biotin or avidin is determined from the amount of radicals reduced by the reaction. A method for measuring a substance using spin-labeled biotin, which comprises quantifying
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30500993A JPH07159404A (en) | 1993-12-06 | 1993-12-06 | Method of measuring substance using biotin spin labeled |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30500993A JPH07159404A (en) | 1993-12-06 | 1993-12-06 | Method of measuring substance using biotin spin labeled |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07159404A true JPH07159404A (en) | 1995-06-23 |
Family
ID=17939992
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30500993A Pending JPH07159404A (en) | 1993-12-06 | 1993-12-06 | Method of measuring substance using biotin spin labeled |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07159404A (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014515264A (en) * | 2011-05-19 | 2014-06-30 | セクエノム， インコーポレイテッド | Products and processes for multiplex nucleic acid identification |
| US10233489B2 (en) | 2015-04-24 | 2019-03-19 | Agena Bioscience, Inc. | Multiplexed method for the identification and quantitation of minor alleles and polymorphisms |
| US10640817B2 (en) | 2015-04-24 | 2020-05-05 | Agena Bioscience, Inc. | Multiplex methods for detection and quantification of minor variants |
-
1993
- 1993-12-06 JP JP30500993A patent/JPH07159404A/en active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014515264A (en) * | 2011-05-19 | 2014-06-30 | セクエノム， インコーポレイテッド | Products and processes for multiplex nucleic acid identification |
| US10604791B2 (en) | 2011-05-19 | 2020-03-31 | Agena Bioscience, Inc. | Products and processes for multiplex nucleic acid identification |
| US11667958B2 (en) | 2011-05-19 | 2023-06-06 | Agena Bioscience, Inc. | Products and processes for multiplex nucleic acid identification |
| US10233489B2 (en) | 2015-04-24 | 2019-03-19 | Agena Bioscience, Inc. | Multiplexed method for the identification and quantitation of minor alleles and polymorphisms |
| US10513728B2 (en) | 2015-04-24 | 2019-12-24 | Agena Bioscience, Inc. | Multiplexed method for the identification and quantitation of minor alleles and polymorphisms |
| US10640817B2 (en) | 2015-04-24 | 2020-05-05 | Agena Bioscience, Inc. | Multiplex methods for detection and quantification of minor variants |
| US10865439B2 (en) | 2015-04-24 | 2020-12-15 | Agena Bioscience, Inc. | Multiplexed method for the identification and quantitation of minor alleles and polymorphisms |
| US11680289B2 (en) | 2015-04-24 | 2023-06-20 | Agena Bioscience, Inc. | Multiplexed method for the identification and quantitation of minor alleles and polymorphisms |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0809111B1 (en) | Analyzing method utilizing oligomeric receptors | |
| US4332783A (en) | Process for immunologic determination tests | |
| EP0280211B1 (en) | Method for determination of antibodies | |
| US4859583A (en) | Chemiluminescent immunochemical technique for low molecular weight antigens | |
| US5188939A (en) | Displacement immunoassay utilizing an oligavalent labelled antibody | |
| JPH03502244A (en) | Test method and reagent kit | |
| US4804625A (en) | Assay procedures | |
| EP0239318A1 (en) | Assay employing binding pair members on particles and on a filter or membrane | |
| EP0247796A1 (en) | Solid phase immunoassay method | |
| JP2007161717A (en) | Polydiacetylene supermolecule and method for detecting ligand | |
| JPH06503886A (en) | Test method and its reagent kit | |
| JPH09504094A (en) | Method for assaying immunological substances using magnetic latex particles and non-magnetic particles | |
| EP0201211A1 (en) | Method and compositions for visual solid phase immunoassays based on luminescent microspheric particles | |
| AU751938B2 (en) | Immunoassay reagents and immunoassay method | |
| JPH05223820A (en) | Kit and method for detecting microorganism accompanied by periodontal disease using surfactant mixture as extraction composition | |
| CA2093494A1 (en) | Method for the elimination of non-specific reactions in immuno-assays | |
| EP2309265B1 (en) | Method of assaying complex and kit to be used therefor | |
| JPH07159404A (en) | Method of measuring substance using biotin spin labeled | |
| US8628933B2 (en) | Homogeneous detection method | |
| US4491634A (en) | Chemiluminescent immunoassay with activator of hydrogen peroxide and a chloramine | |
| EP0687910A1 (en) | Test kit and method for competitive specific binding assay | |
| JPH08304406A (en) | Calibrator matrix | |
| JPS61250558A (en) | Immunological assaying method | |
| JP2004144687A (en) | Method for measuring substance | |
| JPH05113443A (en) | Enzyme-immunity measuring method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20000307 |