JPH07107993A - Production of myxol and its use - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain myxol useful as an antioxidant having strong oxidation- resistant force and free from mutagenicity by culturing a microorganism having ability producing myxol in a medium and then collecting myxol from the cultured mixture. CONSTITUTION:A microorganism which belongs to the genus Flavobacterium and having ability producing myxol, e.g. A99-3 strain (FERMP-13903) is cultured in a medium and the resultant bacterial cell and cultured medium are purified to provide the objective myxol expressed by the formula. Myxol is preferably contained in an amount of 0.05-5wt.% in an antioxidant.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、微生物を用いたミクソ
ールの製造法、及び、ミクソールを有効成分として含有
する酸化防止剤に関するものである。ミクソールを有効
成分として含有する酸化防止剤は、その安定性や酸化防
止能力により主に食品、化粧品、及び、医薬品における
酸化防止成分として有用である。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a process for producing mixol using microorganisms, and an antioxidant containing mixol as an active ingredient. The antioxidant containing mixol as an active ingredient is useful mainly as an antioxidant ingredient in foods, cosmetics, and pharmaceuticals due to its stability and antioxidant ability.

【０００２】[0002]

【従来の技術】従来より、食品、化粧品、医薬、油脂等
の酸化を防止するために、酸化防止剤としてブチルヒド
ロキシアニソール（ＢＨＡ）やジブチルヒドロキシトル
エン（ＢＨＴ）などが利用されてきたが、衛生学的な安
全性に疑問がなげかけられ、酸化防止剤は、化学合成品
に対する拒否反応とともに天然化の方向をたどってい
る。従って、現在では、合成品に対する開発からもっぱ
ら天然物の中から酸化防止剤として利用できるものの検
索へと研究の主流が移っている。天然の抗酸化性物質と
しては、すでに天然トコフェロール類、没食子酸とその
誘導体、コーヒー酸とその誘導体、フラボン誘導体、
糖、アミノ酸類とその誘導体及び香辛料類（セサモー
ル、ローズマリーなど）などが知られている。これらの
天然抗酸化性物質は、抗酸化力が低く、単品ではさほど
の酸化防止力が望めなく、また臭いがあったり、添加し
た製品を着色させるなどの欠点を示すことも多い。従っ
て、現在では、天然抗酸化性物質で抗酸化能が強い物質
が求められている。2. Description of the Related Art Conventionally, butylhydroxyanisole (BHA) and dibutylhydroxytoluene (BHT) have been used as antioxidants in order to prevent the oxidation of foods, cosmetics, medicines, fats and oils. The question of biological safety has been raised, and antioxidants are following the direction of naturalization along with the rejection reaction to chemically synthesized products. Therefore, at present, the mainstream of research is shifting from the development of synthetic products to the search of natural products that can be used as antioxidants. As natural antioxidants, natural tocopherols, gallic acid and its derivatives, caffeic acid and its derivatives, flavone derivatives,
Sugars, amino acids and their derivatives, spices (sesamol, rosemary, etc.) are known. These natural antioxidative substances have low antioxidative ability, and when they are used alone, they cannot be expected to have much antioxidative ability, and they often have drawbacks such as odor and coloring of added products. Therefore, at present, a natural antioxidant substance having a strong antioxidant ability is required.

【０００３】一方、微生物の生産する抗酸化物質にとし
ては、土壌中から分離したカビが抗酸化性のあるシトリ
ニン、プロトカテキン酸を生産すること (Agr. Biol. C
hew.46、2369 1982) 、アスペルギルス・チエバリエリ
(Aspergillus Chevalieri)が抗酸化性物質を生産するこ
と（日本農芸化学会大会講演要旨集 1983) 、ペニシリ
ウム・ハーケイ (Penicillium Herquei) が抗酸化性物
質を生産すること（日本農芸化学会大会講演要旨集 198
3) 、アスペルギルス・オリゼー (Aspergillus oryzae)
が水溶性抗酸化性物質を生産すること（日本農芸化学
会大会講演要旨集 1987) 及びアスペルギルス・ニーガ
(Aspergillus niger) の抽出物が強い抗酸化性を示すこ
と（J. Sci. fd. Agric. 26 、1357、1975) などが知ら
れている。On the other hand, as an antioxidant produced by microorganisms, molds isolated from soil produce antioxidant citrinin and protocatechuic acid (Agr. Biol. C).
hew.46, 2369 1982), Aspergillus Chievalieri
(Aspergillus Chevalieri) produces antioxidants (Abstracts of the Annual Meeting of the Japanese Society of Agricultural Chemistry 1983), Penicillium Herquei produces antioxidants (Abstracts of the Annual Meeting of the Japanese Society of Agricultural Chemistry) 198
3), Aspergillus oryzae
Producing water-soluble antioxidants (Proceedings of the Annual Meeting of the Japanese Society of Agricultural Chemistry 1987) and Aspergillus niger
It is known that the extract of (Aspergillus niger) exhibits strong antioxidant properties (J. Sci. Fd. Agric. 26, 1357, 1975).

【０００４】しかしながら、これらの微生物が産生した
抗酸化性物質のほとんどは、α−トコフェロールとほぼ
同程度の抗酸化性しか示さないため、実用上、より強い
抗酸化力を有するものの開発が望まれている。一方、ミ
クソールは、次式：However, most of the antioxidative substances produced by these microorganisms show almost the same antioxidative properties as α-tocopherol, and therefore it is practically desired to develop those having a stronger antioxidative power. ing. On the other hand, Mixol has the following formula:

【０００５】[0005]

【化１】 [Chemical 1]

【０００６】で示される公知化合物であるが (Phytoche
mistry, 8, 1259-1280 (1969))、産業上の用途は知られ
ていない。Is a known compound represented by (Phytoche
mistry, 8 , 1259-1280 (1969)), no industrial use is known.

【０００７】[0007]

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は、従
来の天然の抗酸化性物質よりも抗酸化力が強い天然の抗
酸化性物質を提供することを目的とする。SUMMARY OF THE INVENTION Accordingly, the object of the present invention is to provide a natural antioxidant having a stronger antioxidant power than the conventional natural antioxidants.

【０００８】[0008]

【課題を解決するための手段】本発明者は、フラボバク
テリウム属に属する微生物を培養することにより得られ
る化合物が強い抗酸化性を有することを見いだし、本発
明を完成した。即ち、本発明はフラボバクテリウム属に
属しミクソールを生産する能力を有する微生物を利用し
てミクソールを製造する方法、およびミクソールの抗酸
化剤としての用途に関する。The present inventor has found that a compound obtained by culturing a microorganism belonging to the genus Flavobacterium has a strong antioxidant property, and completed the present invention. That is, the present invention relates to a method for producing mixol using a microorganism belonging to the genus Flavobacterium and capable of producing mixol, and use of mixol as an antioxidant.

【０００９】以下に本発明を詳細に説明する。最初に本
発明の酸化防止剤について説明する。本発明の酸化防止
剤の有効成分は、化学的に合成されたミクソールでも、
またフラボバクテリウム・sp. (Flavobacterium sp.) A
99-3 株を培養して得られる菌体及び培養液を精製して
得ることのできたミクソールの抽出物、特に有機溶媒、
好ましくはエタノールやアセトン抽出エキスの状態であ
ってもよい。この際、必要により適宜精製して使用する
ことも可能である。また、これら種々の方法により得ら
れるミクソールを混合して酸化防止剤中に配合すること
もできる。The present invention will be described in detail below. First, the antioxidant of the present invention will be described. The active ingredient of the antioxidant of the present invention is a chemically synthesized mixol,
In addition, flavobacterium sp.
Extracts of Mixol that could be obtained by purifying the bacterial cells and the culture solution obtained by culturing 99-3 strain, particularly an organic solvent,
It may preferably be in the form of an ethanol or acetone extract. At this time, if necessary, it can be appropriately purified before use. Further, it is also possible to mix the mixols obtained by these various methods and mix them in the antioxidant.

【００１０】本発明の酸化防止剤は、有効成分となるミ
クソールを単に水で希釈することによっても調製できる
が、乳液状製剤として調製することが好ましい。乳液状
製剤の調製は、水溶性成分と油溶性成分とを常法により
混合乳化すればよい。ここで用いる水溶性成分として
は、没食子酸、アスコルビン酸、ガム質、ビタミンＰ
（フラボノイド類）等を挙げることができ、油溶成分と
しては、グリセリン脂肪酸エステルや菜種油、大豆油、
コーン油等の油脂等を挙げることができる。酸化防止剤
中に含まれるミクソールの含量は、添加対象とする商品
に応じて任意に設定することができるが、0.05〜５％と
するのが好ましい。The antioxidant of the present invention can be prepared by simply diluting the active ingredient, Mixol, with water, but it is preferably prepared as an emulsion. The emulsion formulation may be prepared by mixing and emulsifying a water-soluble component and an oil-soluble component by a conventional method. As the water-soluble components used here, gallic acid, ascorbic acid, gum, vitamin P
(Flavonoids) and the like, and as the oil-soluble component, glycerin fatty acid ester, rapeseed oil, soybean oil,
Examples thereof include fats and oils such as corn oil. The content of mixol contained in the antioxidant can be arbitrarily set according to the product to be added, but it is preferably 0.05 to 5%.

【００１１】本発明の酸化防止剤は、その安全性や酸化
防止能力により主に食品、化粧品、及び医薬品における
酸化防止成分として有用である。ミクソールの酸化防止
剤としての使用量は添加する対象商品により異なるが、
例えば、食品、化粧品に対してはそれぞれ0.1g／食品k
g、0.05g／化粧品kg程度である。The antioxidant of the present invention is useful mainly as an antioxidant component in foods, cosmetics, and pharmaceuticals due to its safety and antioxidant ability. The amount of mixol used as an antioxidant depends on the target product to be added,
For example, 0.1g / food k for food and cosmetics
g, 0.05 g / kg of cosmetics.

【００１２】本発明の酸化防止剤は、対象商品に単独で
使用する場合でも十分な効果を得られるが、従来の天然
酸化防止剤、例えば、トコフェールを有効成分とする酸
化防止剤等と併用することも可能である。次に、微生物
によるミクソールの製造法について説明する。ミクソー
ルはフラボバクテリウム属に属し、ミクソールを産生す
る能力を有する微生物を培地に培養し培養物中にミクソ
ールを生成蓄積させ、該培養物からミクソールを採取す
ることによって得ることができる。The antioxidant of the present invention can obtain a sufficient effect even when it is used alone in a target product, but it is used in combination with a conventional natural antioxidant such as an antioxidant containing tocopher as an active ingredient. It is also possible to do so. Next, a method for producing mixol using a microorganism will be described. Mixol belongs to the genus Flavobacterium, and can be obtained by culturing a microorganism having the ability to produce mixol in a medium to produce and accumulate mixol in the culture, and collecting the mixol from the culture.

【００１３】ミクソール生産菌株としてはフラボバクテ
リウム属に属し、ミクソール生産能を有する菌株であれ
ばいずれの菌株でも用いることができる。またこれらの
菌株の人工的変異方法、例えば紫外線照射、Ｘ線照射、
変異誘起剤処理などあるいは自然発生による変異株でも
ミクソールを生産するものであれば本発明に用いること
ができる。代表的菌株としてA99-3 株があげられる。As the strain for producing mixol, any strain can be used as long as it belongs to the genus Flavobacterium and has the ability to produce mixol. Also, artificial mutation methods of these strains, for example, ultraviolet irradiation, X-ray irradiation,
Any mutant strain that can be treated with a mutagen or is naturally occurring can be used in the present invention as long as it produces Mixol. A representative strain is A99-3 strain.

【００１４】A99-3 株の菌学的性質について以下に述べ
るが、該性質の決定は清水らの方法〔門田元、多賀信夫
編：海洋微生物研究法、学会出版センター pp.229 (198
5)〕に従った。形態学的検討は、光学顕微鏡、透過型電
子顕微鏡によった。A99-3 株の菌学的性質は以下の通り
である。 （１）形態 菌の形：桿状 運動性：なし 鞭毛：なし 細胞の多形成：なし 胞子の形成：なし グラム染色：陰性 抗酸性：なし （２）各培地における生育状況 肉汁寒天平板培養：非拡散性で光沢を有する、橙色の円
形コロニーを形成する。The bacteriological properties of the A99-3 strain are described below. The properties are determined by the method of Shimizu et al. [Gen Kadota and Nobuo Taga: Marine Microbial Research Methods, Academic Publishing Center, pp.229 (198).
5)] was followed. The morphological examination was performed with an optical microscope and a transmission electron microscope. The mycological properties of the A99-3 strain are as follows. (1) Morphology Form: Rod Motility: None Flagella: None Cell polymorphism: None Spore formation: None Spore formation: None Gram stain: Negative anti-acidity: None (2) Growth condition in each medium Meat juice agar plate culture: Non-diffusion It forms orange, round colonies that are lustrous and shiny.

【００１５】肉汁寒天斜面培養：非拡散性で光沢を有す
る、橙色帯状に生育する。 肉汁液体培養：培地全体に均一に生育し、橙色を示す。 肉汁ゼラチン穿刺培養：ゼラチンを液化し生育する。 リトマスミルク：凝固しない。 （３）生理学的性質 硝酸塩の還元：陰性 脱窒反応：陰性 ＭＲテスト：陰性 ＶＰテスト：陰性 インドールの生成：陰性 硫化水素の生成：陰性 デンプンの加水分解：陽性 クエン酸の利用：コーサーの培地で利用する。Meat broth agar slant culture: non-diffusive, glossy, orange band-like growth. Broth liquid culture: It grows uniformly on the whole medium and shows an orange color. Meat broth gelatin stab culture: liquefy gelatin and grow. Litmus milk: Does not solidify. (3) Physiological properties Nitrate reduction: Negative Denitrification reaction: Negative MR test: Negative VP test: Negative Indole formation: Negative Hydrogen sulfide formation: Negative Starch hydrolysis: Positive Utilization of citric acid: in Coser's medium To use.

【００１６】クリステンセンの培地で利用しない。 無機窒素源の利用：硝酸塩およびアンモニウム塩を利用
しない。 色素の生成：脂溶性の橙色色素を生成する。 ウレアーゼ：陽性 オキシダーゼ：陽性 カタラーゼ：陽性 生育の範囲：pH５〜９、温度10〜37℃ 酸素に対する態度：好気性 Ｏ−Ｆテスト：陰性 海水耐性：陽性 糖類からの酸およびガスの生成 酸の生成：陽性は、Ｄ−グルコースおよびデンプン 陰性は、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マン
ノース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース、麦芽
糖、ショ糖、乳糖、トレハロース、Ｄ−ソルビット、Ｄ
−マンニット、イノシット、グリセリン ガスの生成：上記全ての糖について陰性 （４）ＤＮＡ塩基組成（グアニン＋シトシン含有率）；
35％ （５）イソプレノイドキノン組成：メナキノン−６ 以上の知見からA99-3 株をフラボバクテリウム属に帰属
させるのが適当である。本属における種の同定において
はエヌ・アール・クリーグ（N. R. Krieg) 、ジェイ・
ジイ・ホルト (J. G. Holt) 編、バージーズ・マニュア
ル・オブ・システマチック・バクテリオロジー (Berge
y's Manual of Systematic Bacteriology) をもとに検
索した。Not used in Christensen's medium. Use of inorganic nitrogen source: No use of nitrate and ammonium salts. Dye formation: A lipophilic orange pigment is formed. Urease: Positive Oxidase: Positive Catalase: Positive Growth range: pH 5-9, Temperature 10-37 ° C Attitude toward oxygen: Aerobic OF test: Negative Seawater tolerance: Positive Acid and gas production from sugars Acid production: Positive is D-glucose and starch Negative is L-arabinose, D-xylose, D-mannose, D-fructose, D-galactose, maltose, sucrose, lactose, trehalose, D-sorbit, D
-Mannitol, inosit, glycerin Gas production: negative for all of the above sugars (4) DNA base composition (guanine + cytosine content);
35% (5) Isoprenoid quinone composition: menaquinone-6 Based on the above findings, it is appropriate to assign the A99-3 strain to the genus Flavobacterium. For identification of species in this genus, N. Krieg, Jay.
Edited by JG Holt, Vergi's Manual of Systematic Bacteriology (Berge)
It searched based on y's Manual of Systematic Bacteriology).

【００１７】検索の結果、A99-3 株の性質と一致する種
を特定する事は困難でありA99-3 株をFlavobacterium s
p. A99-3として工業技術院生命工学工業技術研究所にFE
RM P-13903として寄託した。（原寄託日：平成５年１０
月１２日）。上記微生物を一般に微生物の培養に用いら
れる培地で培養し、産生される抗酸化性物質を常法によ
り採取する。[0017] As a result of the search, it is difficult to identify a species that matches the characteristics of the A99-3 strain, and the A99-3 strain was identified as Flavobacterium s.
p. A99-3 as FE in Institute of Biotechnology, Institute of Biotechnology
Deposited as RM P-13903. (Original deposit date: 1993 10
12th of a month). The above-mentioned microorganism is cultivated in a medium generally used for culturing the microorganism, and the produced antioxidant substance is collected by a conventional method.

【００１８】まず培養法について述べる。フラボバクテ
リウム・sp. (Flavobacterium sp.) の培養には通常の
培養方法を用いる事ができる。培地としては資化可能な
炭素源、窒素源、無機物および必要な生育、生産促進物
質を程よく含有する培地であれば合成培地、天然培地い
ずれでも使用可能である。炭素源としては、グルコー
ス、澱粉、デキストリン、マンノース、フラクトース、
シュクロース、ラクトース、キシロース、アラビノー
ス、マンニトール、糖蜜などを単独または組み合わせて
用いられる。更に、菌の資化能によっては炭化水素、ア
ルコール類、有機酸なども用いられる。窒素源としては
塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウ
ム、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵
母、コーン・スチーブ・リカー、大豆粉、カザミノ酸な
どが単独または組み合わせて用いられる。そのほか、食
塩、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウ
ム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硝
酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、
硫酸銅などの無機塩類や海水を必要に応じて加える。ま
た、ミクソール生合成上の前駆体と考えられる代謝マッ
プ（日本生化学会編、東京化学同人発行、1980年）123
〜125ページ記載のカロテン類およびその前駆体などを
添加することができる。更に使用菌の生育やミクソール
の生産を促進する微量成分を適当に添加することができ
る。First, the culture method will be described. For culturing Flavobacterium sp., An ordinary culture method can be used. As the medium, both synthetic medium and natural medium can be used as long as they can contain assimilable carbon sources, nitrogen sources, inorganic substances and necessary growth and production promoting substances. Carbon sources include glucose, starch, dextrin, mannose, fructose,
Sucrose, lactose, xylose, arabinose, mannitol, molasses, etc. may be used alone or in combination. Further, depending on the assimilation ability of the bacterium, hydrocarbons, alcohols, organic acids and the like are also used. As the nitrogen source, ammonium chloride, ammonium nitrate, sodium nitrate, urea, peptone, meat extract, yeast extract, dry yeast, corn steve liquor, soybean powder, casamino acid, etc. may be used alone or in combination. In addition, salt, potassium chloride, magnesium sulfate, calcium carbonate, potassium dihydrogen phosphate, dipotassium hydrogen phosphate, ferrous nitrate, calcium chloride, manganese sulfate, zinc sulfate,
Inorganic salts such as copper sulfate and seawater are added as needed. Metabolism map that is thought to be a precursor for mixol biosynthesis (edited by the Japanese Biochemical Society, published by Tokyo Kagaku Dojin, 1980) 123
The carotenes and precursors thereof described on page 125 can be added. Furthermore, trace components that promote the growth of the bacteria used and the production of Mixol can be appropriately added.

【００１９】培養法としては、液体培養法、とくに深部
攪拌培養法がもっとも適している。培養温度は10〜37
℃、特に20〜30℃が適当であり、培養中の培地のｐＨは
アンモニア水や炭酸アンモニウム溶液などを添加して、
４〜10、特に６〜８に維持することが望ましい。液体培
養で通常１〜７日培養をおこなうと、目的物質のミクソ
ールが菌体中に生成蓄積される。培養物中の生成量が最
大に達したときに培養を停止する。As a culture method, a liquid culture method, particularly a deep agitation culture method is most suitable. Culture temperature is 10 to 37
℃, particularly 20 ~ 30 ℃ is suitable, the pH of the medium during the culture, such as ammonia water and ammonium carbonate solution,
It is desirable to maintain 4 to 10, especially 6 to 8. When liquid culture is generally performed for 1 to 7 days, the target substance, Mixol, is produced and accumulated in the cells. The culture is stopped when the maximum production in the culture is reached.

【００２０】培養物からミクソールの単離精製は、微生
物代謝生産物をその培養物から単離精製するために常用
される方法に従っておこなわれる。例えば培養物をろ過
や遠心分離などにより培養ろ液と菌体に分け、菌体を有
機溶剤（例えば、ヘキサン、ベンゼン、クロロホルム、
アセトン、エーテル、酢酸エチル、エタノール、メタノ
ールおよびこれらの混合溶液など）で抽出する。また、
培養ろ液中にミクソールが存在する場合には、酢酸エチ
ルやジエチルエーテルなどの有機溶媒による抽出や、吸
着型樹脂（Amberlite XAD-2 など）に吸着後、適当な有
機溶媒にて抽出物を得ることが可能である。ついで抽出
液を濃縮後、シリカゲル、化学結合型シリカゲル、ゲル
ろ過剤などを用いた液体クロマトグラフィーにより、ミ
クソールを分離、精製する。なお、培養、精製操作中の
ミクソールの動向は薄層クロマトグラフィーによるミク
ソールの橙色を目安として追跡することができる。Isolation and purification of Mixol from the culture is carried out according to a conventional method for isolating and purifying microbial metabolites from the culture. For example, the culture is separated into a culture filtrate and cells by filtration or centrifugation, and the cells are separated with an organic solvent (eg, hexane, benzene, chloroform,
Acetone, ether, ethyl acetate, ethanol, methanol and mixed solutions thereof, etc.). Also,
When mixol is present in the culture filtrate, extract with an appropriate organic solvent after extraction with an organic solvent such as ethyl acetate or diethyl ether, or adsorption on an adsorption resin (Amberlite XAD-2, etc.) It is possible. Then, the extract is concentrated, and then the mixture is separated and purified by liquid chromatography using silica gel, chemically bonded silica gel, gel filtration agent, or the like. The trend of mixol during the culture and purification operations can be traced using the orange color of mixol as a standard by thin layer chromatography.

【００２１】[0021]

【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれに限定されるものではない。 （実施例１）種菌としてFlavobacterium sp. A99-3株
(FERM P-13903）を用いる。前培養及び本培養には、DIF
CO 社製「MARINE BROTH」を説明書記載の方法、即ち、M
ARINEBROTH 37.4gを1000mlの蒸留水に溶解し、pH7.6に
調製後、適宜培養に分注し、121℃、15分オートクレー
ブ処理を行った。前培養として、500ml容量三角フラス
コ中の150mlの培地に、該菌株を一白金耳植菌し、25℃
で48時間振とう（100rpm）培養した。このようにして得
られた種培養液を、10Ｌ容量培養槽中の上記組成と同一
の組成の培地３Ｌに５％v/vの割合で移し、25℃で通気
攪拌方式（回転数100rpm、通気量１Ｌ／min ）により本
培養を行った。培養中、培地のｐＨは特に制御しない
で、120時間培養した。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereto. (Example 1) Flavobacterium sp. A99-3 strain as an inoculum
(FERM P-13903) is used. DIF for pre-culture and main culture
"MARINE BROTH" made by CO is described in the manual, that is, M
37.4 g of ARINEBROTH was dissolved in 1000 ml of distilled water, adjusted to pH 7.6, dispensed into culture as appropriate, and autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes. As a preculture, one platinum loop of the strain was inoculated into 150 ml of medium in a 500 ml Erlenmeyer flask, and the temperature was 25 ° C.
The cells were cultured with shaking (100 rpm) for 48 hours. The seed culture thus obtained was transferred to 3 L of a medium having the same composition as the above composition in a 10 L culture tank at a rate of 5% v / v, and aerated and agitated at 25 ° C. (rotation speed 100 rpm, aeration). The main culture was performed at an amount of 1 L / min. During the culture, the pH of the medium was not particularly controlled, and the culture was performed for 120 hours.

【００２２】培養液を遠心分離して（10,000rpm) して
菌体画分を得、アセトン200mlを添加し攪拌し、沈殿物
をろ別し、抽出液を乾固した。これを更にシリカゲルカ
ラムを用いて、ベンゼン：酢酸エチル＝５：５で展開し
た。溶出された画分Ａを濃縮し、ミクソール0.52mgを得
た。このようにして得られたミクソールは、水素核磁気
共鳴スペクトル、可視部吸光スペクトル、質量分析にお
いて、公知のものと一致した。The culture solution was centrifuged (10,000 rpm) to obtain a microbial cell fraction, 200 ml of acetone was added and stirred, the precipitate was filtered off, and the extract was dried to dryness. This was further developed with benzene: ethyl acetate = 5: 5 using a silica gel column. The eluted fraction A was concentrated to give 0.52 mg of mixol. The thus-obtained mixol was in agreement with known ones in hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum, visible absorption spectrum and mass spectrometry.

【００２３】（実施例２）実施例１で得られたミクソー
ルについて、メチレンブルーの光反応による一重項酸素
の発生に起因する不飽和脂肪酸（リノール酸及びオレイ
ン酸）の酸化に対するミクソールの阻止効果（酸化防止
効果）を見た。結果を第１表に示す。試験管中で、色素
の一つであるメチレンブルー（１μｇ）を１重項酸素発
生源として、1.0％（体積比）のステアリン酸、リノー
ル酸及びオレイン酸を含むエタノール溶液（１ml）に溶
解し、これにミクソールを二段階の濃度（５および0.5
μｇ）で加えた。これらの溶液に8000ルクスの白色光を
照射し、30分後、メチレンブルーの光反応で発生した１
重項酸素によるリノール酸及びオレイン酸の酸化による
減少を次のようにして定量した。これらの反応液（１m
l）に水（８ml）を加えた後、ヘキサン（１ml）で抽出
しこのヘキサン溶液を毛細管ガスクロマトグラフィー
(Fused Silica Capilary Column、0.25mm径、50ｍ長、1
95°）で分析した。ステアリン酸を内部標準としリノー
ル酸及びオレイン酸を面積法で定量した。ミクソールの
酸化阻害作用を同様の方法でα−トコフェロール（５お
よび0.5μｇ）、ミクソールとα−トコフェロールの併
用（各0.5μｇ）、ＢＨＴ（0.5μｇ）、およびコントロ
ールと比較した。Example 2 With respect to the mixol obtained in Example 1, the inhibitory effect of mixol on the oxidation of unsaturated fatty acids (linoleic acid and oleic acid) due to the generation of singlet oxygen by the photoreaction of methylene blue (oxidation) Preventive effect). The results are shown in Table 1. In a test tube, one of the dyes, methylene blue (1 μg), was dissolved in an ethanol solution (1 ml) containing 1.0% (volume ratio) of stearic acid, linoleic acid and oleic acid as a singlet oxygen source, Mixol is added to this in two levels (5 and 0.5
μg). These solutions were irradiated with 8000 lux of white light, and after 30 minutes, they were generated by the photoreaction of methylene blue.
The decrease due to the oxidation of linoleic acid and oleic acid by heavy oxygen was quantified as follows. These reaction liquids (1m
Water (8 ml) was added to (l) and extracted with hexane (1 ml). This hexane solution was subjected to capillary gas chromatography.
(Fused Silica Capilary Column, 0.25mm diameter, 50m length, 1
The analysis was performed at 95 °. Linoleic acid and oleic acid were quantified by the area method using stearic acid as an internal standard. The oxidative inhibitory effect of Mixol was compared with α-tocopherol (5 and 0.5 μg), a combination of Mixol and α-tocopherol (0.5 μg each), BHT (0.5 μg), and a control in the same manner.

【００２４】その結果、ミクソールを加えた系ではその
濃度に応じて脂質の酸化による減少が阻止されたのに対
し、α−トコフェロール、ＢＨＴの脂質の酸化阻止効果
はミクソールより劣った。またミクソールはα−トコフ
ェロールとの併用により相乗効果が見られた。As a result, in the system to which mixol was added, the decrease due to the oxidation of lipid was prevented depending on the concentration, whereas the effect of α-tocopherol and BHT to prevent lipid oxidation was inferior to that of mixol. In addition, a synergistic effect was seen with mixol in combination with α-tocopherol.

【００２５】[0025]

【表１】 [Table 1]

【００２６】（実施例３） 酸化防止剤の調製例 ミクソールおよび天然の濃縮ミクソールを用いた酸化防
止製剤の製法。ローカストビーンガムを溶解させた水を
65℃に加熱してから没食子酸とＬ−アスコルビン酸を混
合し、予め65℃で混合、溶解しておいた油相部を混合、
攪拌後ホモジナイザーを通し、均質化後10℃まで冷却し
て以下の配合の液状製剤を得た。Example 3 Preparation Example of Antioxidant Preparation method of antioxidant preparation using mixol and natural concentrated mixol. The water in which the locust bean gum is dissolved
After heating to 65 ° C, gallic acid and L-ascorbic acid are mixed, and the oil phase portion that has been dissolved and mixed in advance at 65 ° C is mixed,
After stirring, the mixture was passed through a homogenizer, homogenized, and cooled to 10 ° C. to obtain a liquid preparation having the following formulation.

【００２７】 油相部 （重量％） ミクソール １．０ ％ 菜種油 ３９．１ ％ コハク酸グリセリド ２．０ ％ 水相部 Ｌ−アスコルビン酸 ２．０ ％ 没食子酸 １．０ ％ ケルセチン（ビタミンＰ） １．０ ％ ローカストビーンガム ０．１ ％ 水 ５３．９ ％Oil phase part (% by weight) Mixol 1.0% Rapeseed oil 39.1% Succinic acid glyceride 2.0% Water phase part L-ascorbic acid 2.0% Gallic acid 1.0% Quercetin (vitamin P) 1 0.0% Locust Bean Gum 0.1% Water 53.9%

【００２８】[0028]

【発明の効果】本発明によれば、従来の天然の抗酸化性
物質のみならず合成品であるＢＨＴなどよりも強い抗酸
化力を示す抗酸化性物質を簡易に製造することができ
る。また、本発明により製造された抗酸化性物質は変異
原性も見られないため、食品、香料、色素、化粧品等、
酸化により品質が著しく損なわれる製品に対して好適に
添加することができる。更に、本発明により製造される
抗酸化性物質は強力な抗酸化力を有するので医薬品とし
て用いることも可能である。According to the present invention, it is possible to easily produce not only a conventional natural antioxidant substance but also an antioxidant substance having a stronger antioxidant power than BHT which is a synthetic product. Further, since the antioxidant produced by the present invention does not show mutagenicity, foods, flavors, pigments, cosmetics, etc.
It can be suitably added to products whose quality is significantly impaired by oxidation. Furthermore, since the antioxidant substance produced by the present invention has a strong antioxidant power, it can be used as a medicine.

Claims (2)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 フラボバクテリウム属に属しミクソール
を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、得られ
た培養物からミクソールを採取することを特徴とするミ
クソールの製造法。1. A method for producing mixol, which comprises culturing in a medium a microorganism belonging to the genus Flavobacterium and capable of producing mixol, and collecting the mixol from the obtained culture. 【請求項２】 ミクソールを有効成分として含有するこ
とを特徴とする酸化防止剤。2. An antioxidant containing mixol as an active ingredient.