JPH0680696A - 新規ペプチド - Google Patents
新規ペプチドInfo
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- JPH0680696A JPH0680696A JP4255424A JP25542492A JPH0680696A JP H0680696 A JPH0680696 A JP H0680696A JP 4255424 A JP4255424 A JP 4255424A JP 25542492 A JP25542492 A JP 25542492A JP H0680696 A JPH0680696 A JP H0680696A
- Authority
- JP
- Japan
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- peptide
- boc
- bzl
- cys
- ser
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Abstract
(57)【要約】
【構成】 下記の式(１)で表されるアミノ酸配列を有す
る新規なペプチド。 【化１】 【効果】 本ペプチドは、Ｎ型カルシウムチャンネルの
単離用の薬剤として有用である。
る新規なペプチド。 【化１】 【効果】 本ペプチドは、Ｎ型カルシウムチャンネルの
単離用の薬剤として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規なペプチドに関する
ものである。詳しくは、Ｎ型カルシウムチャンネルの単
離に有効な新規なペプチドに関するものである。
ものである。詳しくは、Ｎ型カルシウムチャンネルの単
離に有効な新規なペプチドに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】カルシウムイオンは筋肉の収縮や神経伝
達物質の放出などに関与しており、細胞の内外で大きな
濃度差がある。細胞が活動するときにこの濃度差が変化
するが、カルシウムイオンが細胞膜を通るためのカルシ
ウムチャンネル(Ca channel)という機構が知られている
[Annual Review of Neuroscience,13, 337-356(199
0)]。 カルシウムチャンネルについては未解明な点が
多く、これを単離精製してその機能を明らかにするには
これと特異的に結合する物質が有効である。
達物質の放出などに関与しており、細胞の内外で大きな
濃度差がある。細胞が活動するときにこの濃度差が変化
するが、カルシウムイオンが細胞膜を通るためのカルシ
ウムチャンネル(Ca channel)という機構が知られている
[Annual Review of Neuroscience,13, 337-356(199
0)]。 カルシウムチャンネルについては未解明な点が
多く、これを単離精製してその機能を明らかにするには
これと特異的に結合する物質が有効である。
【０００３】従来、神経細胞のみに見られるＮ型のカル
シウムチャンネルに特異的に結合する物質として27アミ
ノ酸残基からなるペプチドであるω-コノトキシンGVIA
(ω-conotoxin GVIA)が知られている[Annual Review of
Biochemistry,57, 665-700(1988)]。しかしながら、こ
の物質はカルシウムチャンネルとの親和性が著しく大き
く、その結合は不可逆的であるため、通常の親和性クロ
マトグラフィ−による精製ではカルシウムチャンネルを
単離することが極めて困難であった。
シウムチャンネルに特異的に結合する物質として27アミ
ノ酸残基からなるペプチドであるω-コノトキシンGVIA
(ω-conotoxin GVIA)が知られている[Annual Review of
Biochemistry,57, 665-700(1988)]。しかしながら、こ
の物質はカルシウムチャンネルとの親和性が著しく大き
く、その結合は不可逆的であるため、通常の親和性クロ
マトグラフィ−による精製ではカルシウムチャンネルを
単離することが極めて困難であった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明はカルシウムチ
ャンネルを単離精製するための有効な物質を提供するこ
とを目的とするものである。
ャンネルを単離精製するための有効な物質を提供するこ
とを目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の目的
を達成するため、ω-コノトキシンGVIAの類縁物質につ
いて探索し検討を重ねた結果、ω-コノトキシンGVIAの2
位のリジン残基をアラニン残基で置換した新規なペプチ
ドが、ω-コノトキシンGVIAに比しカルシウムチャンネ
ルに対する親和性が明らかに弱く、Ｎ型のカルシウムチ
ャンネルの単離精製に極めて有効であることを見い出し
本発明を達成した。即ち、本発明の要旨は、請求項１に
おける式(１)で表わされるアミノ酸配列を有する新規ペ
プチドに存する。
を達成するため、ω-コノトキシンGVIAの類縁物質につ
いて探索し検討を重ねた結果、ω-コノトキシンGVIAの2
位のリジン残基をアラニン残基で置換した新規なペプチ
ドが、ω-コノトキシンGVIAに比しカルシウムチャンネ
ルに対する親和性が明らかに弱く、Ｎ型のカルシウムチ
ャンネルの単離精製に極めて有効であることを見い出し
本発明を達成した。即ち、本発明の要旨は、請求項１に
おける式(１)で表わされるアミノ酸配列を有する新規ペ
プチドに存する。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
新規なペプチドは、下記の式(１)
新規なペプチドは、下記の式(１)
【化２】 で示される27のアミノ酸配列からなるものである。但
し、上記アミノ酸配列中のHypは4-trans-ヒドロキシプ
ロリンを意味する。
し、上記アミノ酸配列中のHypは4-trans-ヒドロキシプ
ロリンを意味する。
【０００７】式(１)のペプチドは、以下に述べる方法に
より容易に製造することができる。なお、以下の説明で
用いる記号は夫々次のものを示す。MBHA樹脂:p-メチル
ベンツヒドリルアミン樹脂；Boc:t-ブチルオキシカルボ
ニル基；Br-Z:2-ブロモベンジルオキシカルボニル基；C
l-Z:2-クロロベンジルオキシカルボニル基；MeBzl:4-メ
チルベンジル基；Bzl:ベンジル基；Tos:p-トルエンスル
ホニル基。
より容易に製造することができる。なお、以下の説明で
用いる記号は夫々次のものを示す。MBHA樹脂:p-メチル
ベンツヒドリルアミン樹脂；Boc:t-ブチルオキシカルボ
ニル基；Br-Z:2-ブロモベンジルオキシカルボニル基；C
l-Z:2-クロロベンジルオキシカルボニル基；MeBzl:4-メ
チルベンジル基；Bzl:ベンジル基；Tos:p-トルエンスル
ホニル基。
【０００８】本発明のペプチドを製造するには周知の固
相法によるペプチド合成法が適用される。例えば、MBHA
樹脂を自動ペプチド合成機にセットし、これに予め製造
されたBoc-Tyr(Br-Z)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-Arg
(Tos)-OH, Boc-Lys(Cl-Z)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-T
yr(Br-Z)-OH, Boc-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Cys
(MeBzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-
Cys(MeBzl)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-
Tyr(Br-Z)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Bo
c-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH,
Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gly-OH, Boc
-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Cys
(MeBzl)-OHを供給して順次縮合させる。
相法によるペプチド合成法が適用される。例えば、MBHA
樹脂を自動ペプチド合成機にセットし、これに予め製造
されたBoc-Tyr(Br-Z)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-Arg
(Tos)-OH, Boc-Lys(Cl-Z)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Boc-T
yr(Br-Z)-OH, Boc-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-Cys
(MeBzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-
Cys(MeBzl)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-Asn-OH, Boc-
Tyr(Br-Z)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(Bzl)-OH, Bo
c-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH,
Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Gly-OH, Boc
-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-OH, Boc-Cys
(MeBzl)-OHを供給して順次縮合させる。
【０００９】次いで、得られる側鎖が保護されているHー
Cys(MeBzl)-Ala-Ser(Bzl)-Hyp(Bzl)-Gly-Ser(Bzl)-Ser
(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Hyp(Bzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bz
l)-Tyr(Br-Z)-Asn-Cys(MeBzl)-Cys(MeBzl)-Arg(Tos)-Se
r(Bzl)-Cys(MeBzl)-Asn-Hyp(Bzl)-Tyr(Br-Z)-Thr(Bzl)-
Lys(Cl-Z)-Arg(Tos)-Cys(MeBzl)-Tyr(Br-Z)-MBHA樹脂
を、フツ化素と反応させてすべての側鎖保護基を除去す
ると共にペプチドをMBHA樹脂と切り離し、空気酸化すれ
ばよい。
Cys(MeBzl)-Ala-Ser(Bzl)-Hyp(Bzl)-Gly-Ser(Bzl)-Ser
(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Hyp(Bzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bz
l)-Tyr(Br-Z)-Asn-Cys(MeBzl)-Cys(MeBzl)-Arg(Tos)-Se
r(Bzl)-Cys(MeBzl)-Asn-Hyp(Bzl)-Tyr(Br-Z)-Thr(Bzl)-
Lys(Cl-Z)-Arg(Tos)-Cys(MeBzl)-Tyr(Br-Z)-MBHA樹脂
を、フツ化素と反応させてすべての側鎖保護基を除去す
ると共にペプチドをMBHA樹脂と切り離し、空気酸化すれ
ばよい。
【００１０】本発明のペプチドは、後記実施例に具体的
に記載するように、ωーコノトキシンGVIAと比較して、
カルシウムチャンネルに対し明瞭に弱い結合活性を有
す。例えば、ωーコノトキシンGVIAは、ニワトリ脳シナ
プス膜に含まれるカルシウムチャンネルへの125Ｉで標
識したωーコノトキシンGVIAの結合を1nM以下の濃度で抑
制するのに対し、本発明のペプチドは同様の抑制効果を
示すためには約40倍高い濃度が必要である。
に記載するように、ωーコノトキシンGVIAと比較して、
カルシウムチャンネルに対し明瞭に弱い結合活性を有
す。例えば、ωーコノトキシンGVIAは、ニワトリ脳シナ
プス膜に含まれるカルシウムチャンネルへの125Ｉで標
識したωーコノトキシンGVIAの結合を1nM以下の濃度で抑
制するのに対し、本発明のペプチドは同様の抑制効果を
示すためには約40倍高い濃度が必要である。
【００１１】
【実施例】次に本発明を実施例について更に詳細に説明
するが、本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例
に限定されるものではない。
するが、本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例
に限定されるものではない。
【００１２】［ペプチドの製造］ (イ)HーCys(MeBzl)-Ala-Ser(Bzl)-Hyp(Bzl)-Gly-Ser(Bz
l)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Hyp(Bzl)-Thr(Bzl)-
Ser(Bzl)-Tyr(Br-Z)-Asn-Cys(MeBzl)-Cys(MeBzl)-Arg(T
os)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Asn-Hyp(Bzl)-Tyr(Br-Z)-Thr
(Bzl)-Lys(Cl-Z)-Arg(Tos)-Cys(MeBzl)-Tyr(Br-Z)-MBHA
樹脂の製造：
l)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Ser(Bzl)-Hyp(Bzl)-Thr(Bzl)-
Ser(Bzl)-Tyr(Br-Z)-Asn-Cys(MeBzl)-Cys(MeBzl)-Arg(T
os)-Ser(Bzl)-Cys(MeBzl)-Asn-Hyp(Bzl)-Tyr(Br-Z)-Thr
(Bzl)-Lys(Cl-Z)-Arg(Tos)-Cys(MeBzl)-Tyr(Br-Z)-MBHA
樹脂の製造：
【００１３】MBHA樹脂0.79 g(アミン含量0.76 mmol／g
樹脂)をバイオサ−チ社製9500型自動ペプチド合成機に
セットし、これにBoc-Tyr(Br-Z)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-O
H, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Lys(Cl-Z)-OH, Boc-Thr(Bzl)
-OH, Boc-Tyr(Br-Z)-OH, Boc-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Asn-O
H, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Arg(To
s)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-A
sn-OH, Boc-Tyr(Br-Z)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(B
zl)-OH, Boc-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Cys
(MeBzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-
Gly-OH, Boc-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-
OH, Boc-Cys(MeBzl)-OHを供給し、順次縮合させて上記
の側鎖保護ペプチド-MBHA樹脂4.24 gを得た。
樹脂)をバイオサ−チ社製9500型自動ペプチド合成機に
セットし、これにBoc-Tyr(Br-Z)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-O
H, Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-Lys(Cl-Z)-OH, Boc-Thr(Bzl)
-OH, Boc-Tyr(Br-Z)-OH, Boc-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Asn-O
H, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Arg(To
s)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-Cys(MeBzl)-OH, Boc-A
sn-OH, Boc-Tyr(Br-Z)-OH,Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Thr(B
zl)-OH, Boc-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Cys
(MeBzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-
Gly-OH, Boc-Hyp(Bzl)-OH, Boc-Ser(Bzl)-OH, Boc-Ala-
OH, Boc-Cys(MeBzl)-OHを供給し、順次縮合させて上記
の側鎖保護ペプチド-MBHA樹脂4.24 gを得た。
【００１４】(ロ) フツ化素処理:上記(イ)で得た側鎖保
護ペプチド-MBHA樹脂中の2.12 gを採取し、これを蛋白
質研究奨励会ペプチド研究所製のフツ化素反応装置にセ
ットし、3.2 mlのアニソ−ルの存在下で21 mlのフツ化
素と0℃で1時間反応させた。反応終了後、フツ化素を減
圧下留去し、残留物を酢酸エチルで洗浄した後、2M酢酸
150 mlで抽出し鎖状のペプチドの溶液を得た。
護ペプチド-MBHA樹脂中の2.12 gを採取し、これを蛋白
質研究奨励会ペプチド研究所製のフツ化素反応装置にセ
ットし、3.2 mlのアニソ−ルの存在下で21 mlのフツ化
素と0℃で1時間反応させた。反応終了後、フツ化素を減
圧下留去し、残留物を酢酸エチルで洗浄した後、2M酢酸
150 mlで抽出し鎖状のペプチドの溶液を得た。
【００１５】(ハ)空気酸化によるジスルフィド結合形成 上記(ロ)で得た鎖状ペプチドの溶液を蒸留水で550 mlに
希釈した。これにアンモニア水を加えて溶液のpHを7.8
に調整し、さらに全容量が600 mlになるよう蒸留水を加
えた。この溶液を5℃で48時間攪袢した後、酢酸を加え
てpHを4に調整し不溶物を濾過した後、凍結乾燥を繰り
返すことにより、前記の式(１)で表される環状の粗ペプ
チド437 mgを得た。
希釈した。これにアンモニア水を加えて溶液のpHを7.8
に調整し、さらに全容量が600 mlになるよう蒸留水を加
えた。この溶液を5℃で48時間攪袢した後、酢酸を加え
てpHを4に調整し不溶物を濾過した後、凍結乾燥を繰り
返すことにより、前記の式(１)で表される環状の粗ペプ
チド437 mgを得た。
【００１６】(ニ)ペプチドの精製:上記(ハ)で得た粗ペ
プチドを30％酢酸20 mlに溶解してセファデックスG-50F
のカラム(内径5 cm、長さ110 cm)にかけ、同じ溶媒を用
いて溶出して目的物を含む画分を集めた。この部分精製
物の収量は96 mgであった。その中の40 mgを5 mlの蒸留
水に溶解し、ODS(オクタデシルシラン)をシリカに結合
した逆相系のカラム(内径2 cm、長さ25 cm)を用いたHPL
Cにより精製した。溶出は0.1％トリフルオロ酢酸中アセ
トニトリル濃度を13％から16％に30分かけて増加するこ
とにより行った。
プチドを30％酢酸20 mlに溶解してセファデックスG-50F
のカラム(内径5 cm、長さ110 cm)にかけ、同じ溶媒を用
いて溶出して目的物を含む画分を集めた。この部分精製
物の収量は96 mgであった。その中の40 mgを5 mlの蒸留
水に溶解し、ODS(オクタデシルシラン)をシリカに結合
した逆相系のカラム(内径2 cm、長さ25 cm)を用いたHPL
Cにより精製した。溶出は0.1％トリフルオロ酢酸中アセ
トニトリル濃度を13％から16％に30分かけて増加するこ
とにより行った。
【００１７】上記の操作により、最終目的物である式
(１)で表される環状の精製ペプチド28mgを得た。本物質
の構造は、FAB-MS及びアミノ酸分析等により確認され
た。FAB-MS[M+H]+2980,計算値(C117H175N37O43S6+H)298
1;Asp 1.68(2),Ser 5.79(6),Thr1.90(2),Arg 1.85(2),G
ly 1.00(1),Ala 1.05(1),(Cys)2 2.27(3),Lys 1.04(1),
Tyr 3.00 (3)
(１)で表される環状の精製ペプチド28mgを得た。本物質
の構造は、FAB-MS及びアミノ酸分析等により確認され
た。FAB-MS[M+H]+2980,計算値(C117H175N37O43S6+H)298
1;Asp 1.68(2),Ser 5.79(6),Thr1.90(2),Arg 1.85(2),G
ly 1.00(1),Ala 1.05(1),(Cys)2 2.27(3),Lys 1.04(1),
Tyr 3.00 (3)
【００１８】［カルシウムチャンネルへの結合活性の測
定］本発明のペプチドとωーコノトキシンGVIAのカルシ
ウムチャンネルへの結合活性を、ニワトリシナプス膜に
含まれるカルシウムチャンネルへの125Ｉで標識したωー
コノトキシンGVIAの結合に対する阻害効果を調べること
によって比較した。ニワトリ脳から調製したシナプス膜
を蛋白質濃度が0.8 mg/mlになるように20mMヘペス／ト
リス緩衝液(pH 7.3)中に懸濁し、これに種々の濃度のω
ーコノトキシンGVIA及び本発明ペプチドをそれぞれ別個
に添加して4℃で15分間放置した。
定］本発明のペプチドとωーコノトキシンGVIAのカルシ
ウムチャンネルへの結合活性を、ニワトリシナプス膜に
含まれるカルシウムチャンネルへの125Ｉで標識したωー
コノトキシンGVIAの結合に対する阻害効果を調べること
によって比較した。ニワトリ脳から調製したシナプス膜
を蛋白質濃度が0.8 mg/mlになるように20mMヘペス／ト
リス緩衝液(pH 7.3)中に懸濁し、これに種々の濃度のω
ーコノトキシンGVIA及び本発明ペプチドをそれぞれ別個
に添加して4℃で15分間放置した。
【００１９】次いでそれぞれの緩衝液に、125Ｉで標識
したωーコノトキシンGVIAを0.2nMの濃度になるように加
えて更に4℃で90分間放置した。その後、ガラス繊維製
のロ紙を用いてシナプス膜を緩衝液から分離し、シナプ
ス膜中に含まれるカルシウムチャンネルに結合した125
Ｉ標識ωーコノトキシンGVIAの量をγカウンタ−により
計測した。その結果を図１に示す。図１の縦軸は、125
Ｉで標識したωーコノトキシンGVIAのカルシウムチャン
ネルへの結合量[カウント／分(cpm)]を示し、横軸はペ
プチドの濃度[モル(Mol)]を示す。
したωーコノトキシンGVIAを0.2nMの濃度になるように加
えて更に4℃で90分間放置した。その後、ガラス繊維製
のロ紙を用いてシナプス膜を緩衝液から分離し、シナプ
ス膜中に含まれるカルシウムチャンネルに結合した125
Ｉ標識ωーコノトキシンGVIAの量をγカウンタ−により
計測した。その結果を図１に示す。図１の縦軸は、125
Ｉで標識したωーコノトキシンGVIAのカルシウムチャン
ネルへの結合量[カウント／分(cpm)]を示し、横軸はペ
プチドの濃度[モル(Mol)]を示す。
【００２０】図１において、●印は各種濃度の本発明ペ
プチド溶液中における125Ｉで標識したωーコノトキシン
GVIAの結合量を示し、○印は同濃度のωーコノトキシンG
VIAの溶液中における125Ｉで標識したωーコノトキシンG
VIAの結合量を示す。図１に示すように、ωーコノトキシ
ンGVIA及び本発明ペプチドは、何れもカルシウムチャン
ネルへの125Ｉで標識したωーコノトキシンGVIAの結合を
濃度依存的に阻害したが、両者の間でその作用濃度に大
きな差が認められた。
プチド溶液中における125Ｉで標識したωーコノトキシン
GVIAの結合量を示し、○印は同濃度のωーコノトキシンG
VIAの溶液中における125Ｉで標識したωーコノトキシンG
VIAの結合量を示す。図１に示すように、ωーコノトキシ
ンGVIA及び本発明ペプチドは、何れもカルシウムチャン
ネルへの125Ｉで標識したωーコノトキシンGVIAの結合を
濃度依存的に阻害したが、両者の間でその作用濃度に大
きな差が認められた。
【００２１】即ち、125Ｉで標識したωーコノトキシンGV
IAの結合を半分抑制するために、ωーコノトキシンGVIA
では0.146nMの濃度で充分であるのに対し、本発明のペ
プチドでは5.49nMと約40倍高い濃度が必要であった。こ
の事実は、本発明のペプチドのカルシウムチャンネルに
対する親和性が、ω-コノトキシンGVIAのそれに比して
明瞭に弱く、Ｎ型のカルシウムチャンネルの単離精製に
極めて有効であることを示している。
IAの結合を半分抑制するために、ωーコノトキシンGVIA
では0.146nMの濃度で充分であるのに対し、本発明のペ
プチドでは5.49nMと約40倍高い濃度が必要であった。こ
の事実は、本発明のペプチドのカルシウムチャンネルに
対する親和性が、ω-コノトキシンGVIAのそれに比して
明瞭に弱く、Ｎ型のカルシウムチャンネルの単離精製に
極めて有効であることを示している。
【００２２】
【発明の効果】本発明のペプチドは、カルシウムチャン
ネルに対して適度の親和性を有しているので、カルシウ
ムチャンネルの単離精製の試薬として極めて有用であ
り、カルシウムチャンネル機能の解明に大きく貢献する
ことが期待される。
ネルに対して適度の親和性を有しているので、カルシウ
ムチャンネルの単離精製の試薬として極めて有用であ
り、カルシウムチャンネル機能の解明に大きく貢献する
ことが期待される。
【図１】本発明のペプチド及び公知のペプチド(ωーコノ
トキシンGVIA)の溶液の濃度と、これら溶液中における
125Ｉで標識したωーコノトキシンGVIAのカルシウムチャ
ンネルへの結合量との関係を示す図である。
トキシンGVIA)の溶液の濃度と、これら溶液中における
125Ｉで標識したωーコノトキシンGVIAのカルシウムチャ
ンネルへの結合量との関係を示す図である。
●印：各種濃度の本発明ペプチドの溶液中における125
Ｉで標識したωーコノトキシンGVIAの結合量。 ○印：本発明ペプチドと同濃度のωーコノトキシンGVIA
の溶液中における125Ｉで標識したωーコノトキシンGVIA
の結合量。
Ｉで標識したωーコノトキシンGVIAの結合量。 ○印：本発明ペプチドと同濃度のωーコノトキシンGVIA
の溶液中における125Ｉで標識したωーコノトキシンGVIA
の結合量。
配列番号：１ 配列の長さ：２７ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：環状 配列の種類：ペプチド 配列： Ｃｙｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｈｙｐ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｓｅｒ
Ｈｙｐ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｈｙｐ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｔｙｒ ２０ ２５
Ｈｙｐ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ｈｙｐ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｔｙｒ ２０ ２５
Claims (1)
- 【請求項１】 下記の式（１） 【化１】 で表わされるアミノ酸配列を有する新規ペプチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4255424A JPH0680696A (ja) | 1992-09-01 | 1992-09-01 | 新規ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
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| JP4255424A JPH0680696A (ja) | 1992-09-01 | 1992-09-01 | 新規ペプチド |
Publications (1)
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| JPH0680696A true JPH0680696A (ja) | 1994-03-22 |
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ID=17278574
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP4255424A Pending JPH0680696A (ja) | 1992-09-01 | 1992-09-01 | 新規ペプチド |
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| JP (1) | JPH0680696A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999002146A1 (fr) * | 1997-07-08 | 1999-01-21 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Derives d'acide amine |
| US7351721B2 (en) | 1998-06-26 | 2008-04-01 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Amino acid derivatives and pharmaceutical composition comprising, as active ingredients, them |
| US7427634B2 (en) | 1998-07-14 | 2008-09-23 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Amino acid derivatives and pharmaceutical composition comprising, as active ingredients, them |
| CN107001433A (zh) * | 2014-12-26 | 2017-08-01 | 深圳华大基因研究院 | 芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl03、其制备方法及应用 |
| CN107001421A (zh) * | 2014-12-26 | 2017-08-01 | 深圳华大基因研究院 | 芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl02、其制备方法及应用 |
| CN107001416A (zh) * | 2014-12-26 | 2017-08-01 | 深圳华大基因研究院 | 芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl04、其制备方法及应用 |
| CN107108696A (zh) * | 2014-12-26 | 2017-08-29 | 深圳华大基因研究院 | 芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl05、其制备方法及应用 |
| US9780069B2 (en) | 2009-06-18 | 2017-10-03 | Rohm Co., Ltd. | Semiconductor device |
-
1992
- 1992-09-01 JP JP4255424A patent/JPH0680696A/ja active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO1999002146A1 (fr) * | 1997-07-08 | 1999-01-21 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Derives d'acide amine |
| US7166590B2 (en) | 1997-07-08 | 2007-01-23 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Amino acid derivatives |
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| US10163850B2 (en) | 2009-06-18 | 2018-12-25 | Rohm Co., Ltd. | Semiconductor device |
| US9780069B2 (en) | 2009-06-18 | 2017-10-03 | Rohm Co., Ltd. | Semiconductor device |
| CN107001421A (zh) * | 2014-12-26 | 2017-08-01 | 深圳华大基因研究院 | 芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl02、其制备方法及应用 |
| CN107001416A (zh) * | 2014-12-26 | 2017-08-01 | 深圳华大基因研究院 | 芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl04、其制备方法及应用 |
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| CN107001433A (zh) * | 2014-12-26 | 2017-08-01 | 深圳华大基因研究院 | 芋螺毒素肽κ‑CPTx‑btl03、其制备方法及应用 |
| CN107001416B (zh) * | 2014-12-26 | 2021-01-15 | 深圳华大生命科学研究院 | 芋螺毒素肽κ-CPTx-btl04、其制备方法及应用 |
| CN107001433B (zh) * | 2014-12-26 | 2021-01-15 | 深圳华大生命科学研究院 | 芋螺毒素肽κ-CPTx-btl03、其制备方法及应用 |
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