JPH0677508B2 - Method for producing modified phospholipid - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は改質したリン脂質の製造方法に関し、詳しく
は、リン脂質（本発明では特に断りがない限りリン脂質
はリン脂質又は／及びリン脂質混合物を言う）をリポキ
シゲナーゼ欠失植物より採取した油糧種子処理物を処理
することを特徴とする改質したリン脂質の製造方法に関
するものであり、特に、リン脂質をリポキシゲナーゼ欠
失植物より採取した油糧種子処理物を用い加水分解を行
うことを特徴とするホスファチジン酸（以下PAと略記）
の製造法に関するものである。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing a modified phospholipid, more specifically, phospholipids (phospholipids are phospholipids and / or phospholipids unless otherwise specified in the present invention. (A lipid mixture) is treated with an oil seed treated product obtained from a lipoxygenase-deficient plant, and more particularly to a method for producing a modified phospholipid, wherein the phospholipid is obtained from the lipoxygenase-deficient plant. Phosphatidic acid (hereinafter abbreviated as PA) characterized by performing hydrolysis using the treated oil seed
Of the manufacturing method of.

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕[Problems to be Solved by Prior Art and Invention]

リン脂質は生体膜構成要素の基本物質であり、細胞組織
の保護、情報の伝達、物質移動の制御等、生命活動の基
本を司る機能を有する脂質の一つである。Phospholipids are basic substances of biological membrane constituents, and are one of the lipids that have the functions of controlling the basics of life activities such as protection of cell tissues, transmission of information, control of substance transfer and the like.

近年、二分子膜形成能を有するリン脂質が形成するベシ
クル（又はリポソーム）が各種機能物質を包接する機能
を有するという現象が学問的並びに工業的に注目され始
め、例えば医薬・医療分野においてDDS（ドラッグデリ
バリーシステム）としてその応用が期待されている。In recent years, the phenomenon that vesicles (or liposomes) formed by phospholipids capable of forming bilayer membranes have the function of including various functional substances has started to attract attention academically and industrially. For example, in the fields of medicine and medicine, DDS ( Its application is expected as a drug delivery system).

本発明者らは、従来よりかかる高機能脂質の食品分野へ
の利用について検討を続けてきたが、先般リン脂質の１
種であるPAを利用することにより、油ハネのない離型性
に優れた調理油を完成させることに成功した（特開平１
−27431号）。The inventors of the present invention have been continuously studying the utilization of such high-functional lipids in the food field.
By using PA, which is a seed, we succeeded in completing a cooking oil with excellent releasability without oil splatter (JP-A-1
-27431).

さらに、PAの産業分野への利用例としては、例えば製パ
ン工程での生地物性改良（特開昭58−51853号）、PAと
ツエイン複合体よりなる乳化剤の製造（特開昭62−2048
38号）等食品工業への利用、医薬品への利用（特開昭54
−105222号、同55−11582号、同56−127308号、同60−2
55728号）、化粧品への利用（特開昭59−27809号）、化
成品への応用（特開昭53−108503号、同60−243171号）
等が挙げられ、各種産業分野での利用が検討されてい
る。Further, examples of the use of PA in the industrial field include, for example, improvement of physical properties of dough in a baking process (Japanese Patent Laid-Open No. 58-51853), production of an emulsifier composed of PA and zein complex (Japanese Patent Laid-Open No. 62-2048).
No. 38) and other uses in the food industry and pharmaceuticals (JP-A-54)
-105222, 55-11582, 56-127308, 60-2
55728), use in cosmetics (JP-A-59-27809), application to chemical products (JP-A-53-108503, JP-A-60-243171).
Etc., and their use in various industrial fields is being considered.

しかしながら、PA自体、製油副産物であるレシチン中に
は少量しか含まれない為、これを高純度で取り出すこと
は極めて困難であり、工業的生産方法も未だ確率されて
いない。従って、レシチンの利用に比べてPAの利用法は
未だ限定されている。However, since PA and lecithin, which is an oil by-product, are contained only in a small amount, it is extremely difficult to take out PA with high purity, and an industrial production method has not yet been established. Therefore, the use of PA is still limited as compared with the use of lecithin.

本発明者らはかかる状況においてより高純度をPAを製造
する方法として、油糧種子破砕物を使用した高純度PAの
製造方法を見出し先に特許出願した（特願平１−3509
号）。The inventors of the present invention found a patent application for a method for producing high-purity PA having a higher purity in such a situation and found a method for producing high-purity PA using crushed oil seeds (Japanese Patent Application No. 1-3509).
issue).

しかしながら、前記方法で生産されるPAについては、経
時的な劣化が認められ、とりわけ食品分野へ利用した場
合、食品の風味、外観、物性等を著しく損なうことが明
らかとなった。However, the PA produced by the above method was observed to deteriorate over time, and it was revealed that the flavor, appearance, physical properties and the like of the food are remarkably impaired particularly when used in the food field.

従って、経時的な劣化のないPAを高純度で生産する方法
が望まれているのが現状である。Therefore, at present, there is a demand for a method of producing PA with high purity without deterioration over time.

〔課題を解決するための手段〕[Means for Solving the Problems]

かかる現状にあって、本発明者らは上記課題を解決すべ
く鋭意研究の結果、本発明を完成するに致った。Under these circumstances, the present inventors have completed the present invention as a result of intensive research to solve the above problems.

即ち、本発明は、リン脂質をリポキシゲナーゼ欠失株植
物より採取した油糧種子処理物で処理すること特徴とす
る改質したリン脂質の製造方法、特に、リン脂質をリポ
キシゲナーゼ欠失株植物より採取した油糧種子処理物を
用い加水分解反応を行うことを特徴とするホスファチジ
ン酸の製造方法を提供するものである。That is, the present invention is a method for producing a modified phospholipid, which comprises treating a phospholipid with an oil seed treatment product collected from a lipoxygenase-deficient strain plant, and in particular, collecting the phospholipid from a lipoxygenase-deficient strain plant. The present invention provides a method for producing phosphatidic acid, which comprises performing a hydrolysis reaction using the treated oil seed product.

本発明において使用するリポキシゲナーゼ欠失株植物の
油糧種子は特に限定されないが大豆が最適であり、例え
ば、日本醸造協会雑誌，第82巻，第76頁〜第79頁（1987
年）等に開示されている。The oil seed of the lipoxygenase-deficient strain plant used in the present invention is not particularly limited, but soybean is most suitable. For example, Journal of the Brewing Society of Japan, Vol. 82, pp. 76-79 (1987).
Year) etc.

更には、本発明においてこれらの油糧種子の破砕物或い
は破砕物の抽出物を用いることが好ましい。油糧種子破
砕物は、前記した油糧種子を物理的処理によって破砕
し、生成する粉砕物をそのまま反応に供することができ
る。破砕物の粒径については、特に制限はないが、好ま
しくは5mm以下の範囲にある破砕物であれば差し支えな
い。粉砕法については、当該分野で公知の如何なる装
置、方法等をも利用できる。Furthermore, in the present invention, it is preferable to use a crushed product of these oil seeds or an extract of the crushed product. As the oil seed crushed product, the oil seed described above can be crushed by physical treatment, and the resulting crushed product can be directly used in the reaction. The particle size of the crushed product is not particularly limited, but preferably, the crushed product is in the range of 5 mm or less. For the pulverization method, any device, method, etc. known in the art can be used.

他方、油糧種子抽出物は、前記した油糧種子を物理的処
理によって粉砕し（破砕物の粒径については特に制限は
ないが、好ましくは5mm以下の範囲にある破砕物であれ
ば良い）、生成する粉砕物を水或いはカルボン酸のアル
カリ金属塩、アルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属
塩の１種又は２種以上を含有する水溶液を用いて抽出す
る事により得られる。On the other hand, the oil seed extract is obtained by crushing the oil seed described above by physical treatment (the particle size of the crushed product is not particularly limited, but preferably the crushed product is in the range of 5 mm or less). The resulting pulverized product can be obtained by extraction with water or an aqueous solution containing one or more of alkali metal salts, alkali metal salts or alkaline earth metal salts of carboxylic acids.

抽出に用いるカルボン酸のアルカリ金属塩、アルカリ金
属塩若しくはアルカリ土類金属塩に於いて、カルボン酸
の炭素数２〜８らなる直鎖又は分岐型の脂肪族カルボン
酸又は／及び炭素数７〜12の芳香族カルボン酸であっ
て、例えば酢酸、酪酸、プロピオン酸等の脂肪族カルボ
ン酸又は／及び安息香酸等の芳香族カルボン酸があげら
れる。また、アルカリ金属としてはナトリウム、カリウ
ム等があげられ、アルカリ土類金属としてはバリウム、
マグネシウム、カルシウム等があげられ、これら金属の
ハロゲン化物、炭酸塩、リン酸塩等が挙げられる。この
ような系での抽出に於いては抽出液のpHが重要であり、
pH＝4.0〜7.5の範囲内で抽出を行うことが好ましいが、
pHが6.0±1.0の範囲がより好ましい。In the alkali metal salt, alkali metal salt or alkaline earth metal salt of carboxylic acid used for extraction, a linear or branched aliphatic carboxylic acid having 2 to 8 carbon atoms or / and 7 to 7 carbon atoms Among the 12 aromatic carboxylic acids, there may be mentioned, for example, aliphatic carboxylic acids such as acetic acid, butyric acid and propionic acid, and / or aromatic carboxylic acids such as benzoic acid. Examples of alkali metals include sodium and potassium, and examples of alkaline earth metals include barium and
Examples thereof include magnesium and calcium, and halides, carbonates and phosphates of these metals. In the extraction with such a system, the pH of the extract is important,
It is preferable to perform the extraction within the range of pH = 4.0 to 7.5,
More preferably, the pH is in the range of 6.0 ± 1.0.

前記した抽出の具体的方法としては、油糧種子破砕物に
対して重量比0.1〜50（好ましくは1.0〜20）の前記した
抽出液を用い、抽出処理温度10〜30℃、好ましくは15〜
25℃にて、抽出処理時間１〜24時間、好ましくは１〜12
時間の条件で静置、撹拌、振盪等の物理的抽出方法を併
用して抽出するのが良い。As a specific method of the above-mentioned extraction, a weight ratio of 0.1 to 50 (preferably 1.0 to 20) to the oil seed crushed product is used, and the extraction treatment temperature is 10 to 30 ° C, preferably 15 to
At 25 ℃, extraction treatment time 1 to 24 hours, preferably 1 to 12
It is preferable to perform extraction in combination with a physical extraction method such as standing, stirring, and shaking under time conditions.

かくして得られた抽出物をそのままリン脂質の改質方法
に使用することができる。The extract thus obtained can be directly used in the method for modifying phospholipids.

更には必要に応じて糖質、蛋白質、各種塩類などの安定
化剤を添加し、減圧濃縮、乾燥もしくは凍結乾燥などの
処理により、液状、固形状として使用することもでき
る。Further, if necessary, stabilizers such as sugars, proteins and various salts may be added, and the mixture may be used as a liquid or a solid by a treatment such as concentration under reduced pressure, drying or freeze-drying.

本発明に用いられるリン脂質としては、ホスファチジル
エタノールアミン（PE）、ホスファチジルコリン（P
C）、ホスファチジルセリン（PS）、ホスファチジルイ
ノシトール（PI）、ホスファチジルグリセロール（PG）
等が挙げられ、これらの混合物であってもよい。The phospholipids used in the present invention include phosphatidylethanolamine (PE) and phosphatidylcholine (P).
C), phosphatidylserine (PS), phosphatidylinositol (PI), phosphatidylglycerol (PG)
And the like, and may be a mixture thereof.

これらのリン脂質の構成脂肪酸としては同一又は異種で
あって、炭素数が８〜24の飽和又は不飽和脂肪酸であ
り、例えばカプロン酸、カプリル酸、ラウリン酸、ミリ
スチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ア
ラキジン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、リノー
ル酸、α−及びγ−リノレイン酸、エルシン酸、アラキ
ドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、
テトラコサテトラエン酸等が挙げられる。これらのリン
脂質は天然からの抽出物、濃縮物であっても、また合成
品であっても良く、特に限定されるものではない。The constituent fatty acids of these phospholipids are the same or different and are saturated or unsaturated fatty acids having 8 to 24 carbon atoms, such as caproic acid, caprylic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, Behenic acid, arachidic acid, palmitooleic acid, oleic acid, linoleic acid, α- and γ-linolenic acid, erucic acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, docosahexaenoic acid,
Tetracosatetraenoic acid and the like can be mentioned. These phospholipids may be natural extracts, concentrates, or synthetic products, and are not particularly limited.

本発明の方法によりリン脂質の加水分解反応を行いPAを
製造する方法について、以下詳細に説明する。A method for producing PA by hydrolyzing a phospholipid by the method of the present invention will be described in detail below.

リポキシゲナーゼ欠失株植物より採取した油糧種子破砕
物又は／及び油糧種子破砕物抽出物を用い、特定の有機
溶剤、又はカルボン酸のアルカリ金属塩もしくはアルカ
リ土類金属塩、又は／及びカルボン酸とアルカリ金属塩
もしくはアルカリ土類金属塩の混合の水溶液中で、リン
脂質の加水分解反応を行いPAを製造する。Using an oil seed crushed product or / and an oil seed crushed product extract collected from a lipoxygenase-deficient strain plant, a specific organic solvent, or an alkali metal salt or alkaline earth metal salt of a carboxylic acid, and / or a carboxylic acid PA is produced by hydrolyzing the phospholipids in an aqueous solution of a mixture of the above and an alkali metal salt or an alkaline earth metal salt.

このような方法により、未加水分解物等の副生成物が極
めて少ない、高純度のPAを工業的規模で製造することが
できる。By such a method, high-purity PA with very little by-products such as unhydrolyzed products can be produced on an industrial scale.

PAの製造に用いられる有機溶剤は、融点40℃以下のカル
ボン酸のアルキルエステル、脂肪族炭化水素、脂環式炭
化水素、芳香族炭化水素、ハロゲン化炭化水素等の中か
ら１種又は２種以上混合して使用できる。カルボン酸の
アルキルエステルとしては、例えば、炭素数２〜６の直
鎖又は分岐脂肪酸のアルキル（（炭素数１〜８の直鎖又
は分岐アルキルである）エステルが挙げられ、酢酸メチ
ル、酢酸エチル、プロピオン酸メチル、酪酸メチル、吉
草酸メチル、カプロン酸メチル等を用いることができ
る。脂肪族炭化水素としては炭素数６〜12の直鎖又は分
岐脂肪族炭化水素が挙げられ、特にヘキサン、ヘプタ
ン、石油エーテルが好適である。脂環式炭化水素として
は炭素数６〜12の非置換式又は置換式脂環式炭化水素が
挙げられ、特にシクロヘキサン、メチルシクロヘキサ
ン、シクロオクタンが好適である。芳香族炭化水素とし
ては、炭素数６〜12の非置換式又は置換式芳香族炭化水
素が挙げられ、特にベンゼン、トルエン、キシレンが好
適である。さらにハロゲン化炭化水素としては炭素数１
〜８の直鎖又は分岐アルカンのクロル化、ブロム化、ヨ
ウソ化物が挙げられるが、特にクロロホルム、四塩化炭
素、塩化メチレンが好適である。更にメタノール、エタ
ノール等の炭素数１〜５の直鎖又は分岐の低級アルコー
ルも用いることができる。The organic solvent used for the production of PA is one or two selected from alkyl esters of carboxylic acids having a melting point of 40 ° C or lower, aliphatic hydrocarbons, alicyclic hydrocarbons, aromatic hydrocarbons, halogenated hydrocarbons, etc. The above can be mixed and used. Examples of the alkyl ester of carboxylic acid include an alkyl ester of a linear or branched fatty acid having 2 to 6 carbon atoms ((which is a linear or branched alkyl having 1 to 8 carbon atoms), methyl acetate, ethyl acetate, Methyl propionate, methyl butyrate, methyl valerate, methyl caproate, etc. can be used, and examples of the aliphatic hydrocarbons include linear or branched aliphatic hydrocarbons having 6 to 12 carbon atoms, particularly hexane, heptane, Petroleum ether is preferred, and examples of the alicyclic hydrocarbon include unsubstituted or substituted alicyclic hydrocarbons having 6 to 12 carbon atoms, and cyclohexane, methylcyclohexane and cyclooctane are particularly preferable. Examples of the hydrocarbon include unsubstituted or substituted aromatic hydrocarbons having 6 to 12 carbon atoms, and benzene, toluene and xylene are particularly preferable. Carbon atoms Examples of the halogenated hydrocarbon to 1
Examples of the chlorinated, brominated, and iodinated straight-chain or branched alkanes of to 8 are preferable, and chloroform, carbon tetrachloride, and methylene chloride are particularly preferable. Further, a linear or branched lower alcohol having 1 to 5 carbon atoms such as methanol or ethanol can also be used.

またPAの製造に用いられるカルボン酸のアルカリ金属塩
もしくはアルカリ土類金属塩、又は／及びカルボン酸と
アルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩の混合物に
おいて、カルボン酸は炭素数２〜８の直鎖又は分岐の脂
肪族カルボン酸、炭素数７〜12の芳香族カルボン酸が好
ましく、例えば、酢酸、酪酸、プロピオン酸等の脂肪族
カルボン酸、安息香酸等の芳香族カルボン酸が挙げられ
るが、脂肪族カルボン酸がより好ましい。また、アルカ
リ金属としてはナトリウム、カリウム等が挙げられ、ア
ルカリ土類金属としてはバリウム、マグネシウム、カル
シウム等が挙げられ、アルカリ金属塩もしくはアルカリ
土類金属塩としはこれらの金属のハロゲン化物、炭酸
塩、リン酸塩等が挙げられる。このような系での反応に
於いては反応液のpHが重要であり、pH＝4.0〜7.5の範囲
内で反応を行うことが好ましいが、pHが6.0±0.5の範囲
がより好ましい。Further, in the alkali metal salt or alkaline earth metal salt of carboxylic acid used for the production of PA, and / or the mixture of carboxylic acid and alkali metal salt or alkaline earth metal salt, the carboxylic acid is a straight chain having 2 to 8 carbon atoms. Or, branched aliphatic carboxylic acids and aromatic carboxylic acids having 7 to 12 carbon atoms are preferable, and examples thereof include aliphatic carboxylic acids such as acetic acid, butyric acid and propionic acid, and aromatic carboxylic acids such as benzoic acid. Group carboxylic acids are more preferred. Examples of the alkali metal include sodium and potassium, examples of the alkaline earth metal include barium, magnesium, calcium and the like, and examples of the alkali metal salt or alkaline earth metal salt include halides and carbonates of these metals. , Phosphates and the like. In the reaction in such a system, the pH of the reaction solution is important, and it is preferable to carry out the reaction within the range of pH = 4.0 to 7.5, but it is more preferable that the pH is within the range of 6.0 ± 0.5.

本発明のPAの好ましい製造方法を以下に説明する。A preferred method for producing the PA of the present invention will be described below.

リン脂質（市販の植物系又は動物系の脱脂レシチン、又
は市販のクルードレシチン等）に対して、10〜100重量
％のリポキシゲナーゼ欠失株植物より採取した油糧種子
粉砕物或いはリン脂質に対して重量比1.0〜50（好まし
くは1.0〜10）のリポキシゲナーゼ欠失油糧種子破砕物
の抽出物を添加し、撹拌混合してスラリー状とし、カル
ボン酸のアルキルエステル等の有機溶剤、好ましくは酢
酸やプロピオン酸の低級アルキル（炭素数１〜３）エス
テルをリン脂質１に対し重量比で0.5〜20、好ましくは
1.0〜10添加して反応を行うか、或いは、0.05〜1.0M、
好ましくは0.1〜0.5Mの濃度のカルボン酸のアルカリ金
属塩若しくはアルカリ土類金属塩（又はカルボン酸とア
ルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩の混合物）の
水溶液（以下、反応液と略記）をリン脂質１に対し重量
比で1.0〜30、好ましくは2.0〜10添加して反応を行う。For phospholipids (commercially available plant-based or animal-based defatted lecithin, or commercially available crude lecithin, etc.), 10 to 100% by weight of oil seed crushed products or phospholipids collected from lipoxygenase-deficient strain plants A weight ratio of 1.0 to 50 (preferably 1.0 to 10) was added to the extract of lipoxygenase-deficient oil seed crushed and mixed by stirring to form an organic solvent such as an alkyl ester of carboxylic acid, preferably acetic acid or The lower alkyl (1 to 3 carbon atoms) ester of propionic acid is used in a weight ratio of 0.5 to 20, preferably 1 to phospholipid 1.
The reaction is performed by adding 1.0 to 10 or 0.05 to 1.0M,
Preferably, an aqueous solution (hereinafter referred to as a reaction solution) of an alkali metal salt or alkaline earth metal salt of carboxylic acid (or a mixture of carboxylic acid and alkali metal salt or alkaline earth metal salt) at a concentration of 0.1 to 0.5 M is used as a phosphorous solution. The reaction is carried out by adding 1.0 to 30, preferably 2.0 to 10 by weight ratio to lipid 1.

本発明の方法に用いる油糧種子処理物の酵素活性は、反
応に用いるリン脂質1gに対して、リン脂質をPAと含窒素
塩基に加水分解する酵素0.01〜1000ユニット（好ましく
は0.1〜500ユニット）、リン脂質をジグリセリドとホス
ホリル塩基に加水分解する酵素0.01〜1000ユニット（好
ましくは0.1〜500ユニット）が各々好適である。The enzymatic activity of the oil seed treated product used in the method of the present invention is 0.01 to 1000 units (preferably 0.1 to 500 units) of an enzyme that hydrolyzes the phospholipid into PA and a nitrogen-containing base with respect to 1 g of the phospholipid used in the reaction. ), And 0.01 to 1000 units (preferably 0.1 to 500 units) of an enzyme that hydrolyzes phospholipid into diglyceride and phosphoryl base are suitable.

ここで言う酵素単位の１ユニットとは、リン脂質をPAと
含窒素塩基に加水分解する酵素にあっては１分間に１μ
moleのホスファチジルコリンを加水分解する酵素量を表
し、リン脂質をジグリセリドとホスホリル塩基に加水分
解する酵素にあっては１分間に１μmoleのホスファチジ
ルコリンを加水分解する酵素量を表す。One unit of the enzyme unit here means 1 μ per minute for an enzyme that hydrolyzes phospholipids into PA and nitrogen-containing bases.
It represents the amount of enzyme that hydrolyzes phosphatidylcholine of mole, and in the case of an enzyme that hydrolyzes phospholipids to diglyceride and phosphoryl base, it represents the amount of enzyme that hydrolyzes 1 μmole of phosphatidylcholine per minute.

更に油糧種子粉砕物の酵素活性を高めることを目的とし
て、必要に応じて植物生長促進剤（例えばジベレリン類
やインドール酢酸等のオーキシン類のような生長ホルモ
ン、カルシウムイオンやバリウムイオン等の２価の典型
金属イオン及び／又はマンガン、ランタン、セリウム等
の遷移金属イオンのハロゲン化物、炭酸塩、リン酸塩、
硫酸塩等）を、原料リン脂質に対して0.1〜10重量％、
より好ましくは0.1〜５重量％添加してもさしつかえな
い。In addition, plant growth promoters (eg, growth hormones such as gibberellins and auxins such as indoleacetic acid), divalent calcium ions and barium ions, etc. may be added as necessary for the purpose of enhancing the enzymatic activity of the crushed oil seeds. Halides, carbonates, phosphates of typical metal ions of and / or transition metal ions such as manganese, lanthanum and cerium,
(Sulfate, etc.), 0.1 to 10% by weight with respect to the raw material phospholipid,
More preferably, it may be added in an amount of 0.1 to 5% by weight.

反応混合物は、反応温度10〜60℃、就中20〜50℃にて数
時間以上撹拌を続けることにより、反応が完結する。The reaction mixture is stirred at a reaction temperature of 10 to 60 ° C, especially 20 to 50 ° C for several hours or more to complete the reaction.

本発明の反応の具体的方法に関しては、原料リン脂質や
溶剤、油糧種子粉砕物、油糧種子の抽出物の反応に関与
する物質の添加順序、使用する溶剤や反応液の組成につ
いては何ら制限を付するものでなく、本発明の方法の効
果が発現する範囲において任意に調整できるものであ
る。Regarding the specific method of the reaction of the present invention, there is nothing about the raw material phospholipids and the solvent, the oil seed crushed product, the addition order of the substances involved in the reaction of the oil seed extract, the composition of the solvent and the reaction solution used. It is not limited and can be arbitrarily adjusted within the range where the effect of the method of the present invention is exhibited.

本発明の方法で生成するPAは、反応スラリーより常法に
より、例えば溶剤抽出、溶剤分別等の精製処理を施すこ
とにより、容易に分離収得することができる。PA produced by the method of the present invention can be easily separated and obtained from the reaction slurry by a conventional method, for example, by subjecting it to a purification treatment such as solvent extraction or solvent fractionation.

尚、本発明の方法によるリン脂質の加水分解反応の反応
過程は、例えば薄層クロマトグラフィー（TLC）、高速
液体クロマトグラフィー（HPLC）等の分析方法を用いれ
ば、その経過が把握でき、これにより反応時間をコント
ロールすることもできる。The reaction process of the hydrolysis reaction of phospholipids according to the method of the present invention can be grasped by using an analysis method such as thin layer chromatography (TLC) or high performance liquid chromatography (HPLC). The reaction time can also be controlled.

〔発明の効果〕〔The invention's effect〕

本発明によれば、目的とするPAが常温、常圧、中性等の
温和な反応条件下で高純度、高収率で生成し、高品質の
PAが製取できる。かかるPAは工業的に利用した場合、製
品のニオイ、外観、味、物性等の劣化がなく、安全性の
面でも全く問題のない製品を製造できる。特に、食品、
化粧品、医薬品等へPAを利用する上で、高純度かつ高品
質のPAを製取できる本発明の方法は極めて優れたもので
ある。According to the present invention, the target PA is produced in high purity and high yield under mild reaction conditions such as normal temperature, normal pressure, and neutrality, and is of high quality.
PA can be produced. When industrially used, such PA does not cause deterioration of product odor, appearance, taste, physical properties, etc., and can produce a product having no problem in terms of safety. Especially food,
The method of the present invention, which can produce high-purity and high-quality PA, is extremely excellent in using PA in cosmetics, pharmaceuticals, and the like.

〔実施例〕〔Example〕

以下、参考例、実施例、比較例等をもって本発明方法を
詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。Hereinafter, the method of the present invention will be described in detail with reference to Reference Examples, Examples, Comparative Examples, etc., but the present invention is not limited thereto.

参考例１（油糧種子破砕物の調製） 油糧種子としてリポキシゲナーゼ欠失大豆を使用した。
リポキシゲナーゼ欠失大豆としては、前記した日本醸造
協会雑誌，第82巻，第76頁〜第79頁（1987年）等に開示
されているリポキシゲナーゼ−２（Ｌ−２）とリポキシ
ゲナーゼ−３（Ｌ−３）の同時欠失大豆を用いた。これ
らリポキシゲナーゼ欠失大豆25gを、ワーリングブレン
ダーにて破砕した。破砕物は、ふるい（メッシュNo20）
にかけ、夾雑物等を取り除いた。得られた大豆破砕物を
以下の実施例等に使用した。Reference Example 1 (Preparation of Oil Seed Crushed Product) As an oil seed, soybean lacking lipoxygenase was used.
Examples of the lipoxygenase-deficient soybean include lipoxygenase-2 (L-2) and lipoxygenase-3 (L-, which are disclosed in the above-mentioned Journal of The Brewing Society of Japan, Vol. 82, pp. 76-79 (1987). The simultaneous deletion soybean of 3) was used. 25 g of these lipoxygenase-deficient soybeans were crushed with a Waring blender. The crushed material is a sieve (mesh No20)
Then, foreign matters were removed. The crushed soybean thus obtained was used in the following Examples and the like.

リポキシゲナーゼ欠失以外の大豆についても同様の方法
で処理して大豆破砕物を調製した。Soybeans other than those lacking lipoxygenase were treated in the same manner to prepare crushed soybeans.

実施例１ 撹拌装置を備えた500ml4口フラスコに、市販の脱脂レシ
チン（商品名SLP−WSP:ツルーレシチン工業（株）製）2
5gをとり、参考例１で調製したＬ−２とL3−の同時欠失
大豆の砕物25gを加えた。混合物を撹拌しながらこれに
酢酸エチル（250ml）を加え、更に水32.5gを加え撹拌を
続けた。反応混合物は30℃にて20時間撹拌せしめた。Example 1 In a 500 ml four-necked flask equipped with a stirrer, commercially available defatted lecithin (trade name SLP-WSP: manufactured by Trulecithin Industry Co., Ltd.) 2
5 g was taken, and 25 g of L-2 and L3-simultaneous deletion soybean crushed product prepared in Reference Example 1 was added. While stirring the mixture, ethyl acetate (250 ml) was added thereto, 32.5 g of water was further added, and the stirring was continued. The reaction mixture was allowed to stir at 30 ° C. for 20 hours.

反応生成物から、酢酸エチル層（Ａ）を除き、残渣
（Ｂ）はクロロホルム／メタノール（2/1 V/V）で２回
抽出処理した。（Ｂ）を含む抽出溶液をフォルチ分配に
付し、先に得た（Ａ）より酢酸エチルを除去した残渣と
併せてクロロホルム／メタノールを除去してリン脂質粗
生成物（Ｃ）を得た。（Ｃ）に対し５倍容量のアセトン
を加えかき混ぜた後、静置することにより沈澱物（Ｄ）
21gを得た。（Ｄ）はさらに氷冷アセトンにて洗浄後、
減圧乾燥に付した。得られた（Ｄ）についてのPA含有率
をHPLC（UV検出型）で測定した。The ethyl acetate layer (A) was removed from the reaction product, and the residue (B) was extracted twice with chloroform / methanol (2/1 V / V). The extraction solution containing (B) was subjected to Forti partition, and chloroform / methanol was removed together with the residue obtained by removing ethyl acetate from (A) obtained above to obtain a crude phospholipid product (C). Acetone (5 times volume) was added to (C), and the mixture was stirred and then allowed to stand to precipitate (D)
21g was obtained. (D) was further washed with ice-cold acetone,
It was subjected to vacuum drying. The PA content of the obtained (D) was measured by HPLC (UV detection type).

結果を第１表に示した。The results are shown in Table 1.

比較例１ 実施例１において、大豆破砕物として普通大豆〔米国産
大豆（オハイオ,Glycine max［L.］〕を用いた他は全て
同一の反応条件下で加水分解を行った。Comparative Example 1 In Example 1, hydrolysis was performed under the same reaction conditions except that ordinary soybeans [US soybeans (Ohio, Glycine max [L.]]] were used as the crushed soybeans.

実施例１と同様に生成物のリン脂質中のPA含有率を測定
した。The PA content in the phospholipid of the product was measured in the same manner as in Example 1.

結果をは第１表に示した。The results are shown in Table 1.

実施例２ 撹拌装置を備えた500ml4口フラスコに、市販の脱脂レシ
チン（商品名SLP−WSP:ツルーレシチン工業（株）製）2
5gをとり、参考例１で調製したＬ−２とＬ−３の同時欠
失大豆の破砕物25gを加えた。混合物を撹拌しながらこ
れに0.1M酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液（pH6.0）100mlを
加え、更に、50mM塩化カルシウム水溶液32.5gを加え撹
拌を続けた。反応混合物は30℃にて20時間撹拌せしめ
た。Example 2 In a 500 ml four-necked flask equipped with a stirrer, commercially available defatted lecithin (trade name SLP-WSP: manufactured by Trulecithin Industry Co., Ltd.) 2
5 g was taken, and 25 g of crushed soybean having L-2 and L-3 simultaneously deleted in Reference Example 1 was added. While stirring the mixture, 100 ml of 0.1 M sodium acetate / acetate buffer (pH 6.0) was added thereto, and further 32.5 g of a 50 mM calcium chloride aqueous solution was added and stirring was continued. The reaction mixture was allowed to stir at 30 ° C. for 20 hours.

反応生成物から、残渣（Ｅ）を取り出しクロロホルム／
メタノール（2/1 V/V）で２回抽出処理した。（Ｅ）を
含む抽出溶液をフォルチ分配に付し、クロロホルム／メ
タノールを除去してリン脂質粗生成物（Ｆ）を得た。
（Ｆ）に対し５倍容量のアセトンを加えかき混ぜた後、
静止することにより沈澱物（Ｇ）20gを得た。（Ｇ）は
さらに氷冷アセトンにて洗浄後、減圧乾燥に付した。得
られた（Ｇ）についてのPA含有率をHPLC（UV検出型）で
測定した。The residue (E) was taken out from the reaction product, and chloroform /
Extraction treatment was performed twice with methanol (2/1 V / V). The extraction solution containing (E) was subjected to Forti partition, and chloroform / methanol was removed to obtain a crude phospholipid product (F).
After adding 5 volumes of acetone to (F) and stirring,
Upon standing, 20 g of precipitate (G) was obtained. (G) was further washed with ice-cold acetone and then dried under reduced pressure. The PA content of the obtained (G) was measured by HPLC (UV detection type).

結果を第１表に示した。The results are shown in Table 1.

比較例２ 実施例２において、大豆破砕物として普通大豆〔米国産
大豆（オハイオ,Glycine max［L.］〕を用いた他は全て
同一の反応条件下で加水分解を行った。Comparative Example 2 In Example 2, hydrolysis was performed under the same reaction conditions except that ordinary soybean [US soybean (Ohio, Glycine max [L.]]] was used as the crushed soybean product.

実施例２と同様に生成物のリン脂質中のPA含有率を測定
した。The PA content in the phospholipid of the product was measured in the same manner as in Example 2.

結果を第１表に示した。The results are shown in Table 1.

これらのリン脂質生成物を油脂へ配合し、これを用いて
調理した際、調理食品（炒め物、生食（サラダ）など）
の風味、ニオイの面で比較例1,2は極めて不良であった
のに対して、本発明実施例1,2はいずれも良好な風味を
示し、不快臭等を示さなかった。 When these phospholipid products are mixed with fats and oils and cooked using them, cooked foods (stir-fried foods, raw foods (salad), etc.)
Comparative Examples 1 and 2 were extremely poor in terms of flavor and odor, whereas Examples 1 and 2 of the present invention exhibited good flavor and did not show unpleasant odor.

参考例２ 参考例１で用いたリポキシゲナーゼ欠失大豆2gを50mM塩
化カルシウム入りの0.1M酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液
（pH6.0）150gに加え、常温で湿式粉砕し（2mmφ以
下）、遠心分離（3,000rpm、10分）により、上清部（抽
出液）120g得た。得られた抽出液を以下の実施例に使用
した。Reference Example 2 2 g of the lipoxygenase-deficient soybean used in Reference Example 1 was added to 150 g of 0.1 M sodium acetate / acetic acid buffer (pH 6.0) containing 50 mM calcium chloride, wet-milled at room temperature (2 mmφ or less), and centrifuged ( At 3,000 rpm for 10 minutes, 120 g of the supernatant (extract) was obtained. The obtained extract was used in the following examples.

実施例３ 実施例１において参考例１で得たリポキシゲナーゼ欠失
大豆粉砕物に代えて参考例２で得たリポキシゲナーゼ欠
失大豆粉砕物の抽出液120gを用いた他は全て同一条件で
加水分解せしめ、同様にして分析した。Example 3 In Example 1, all were hydrolyzed under the same conditions except that the lipoxygenase-deficient soybean crushed soybean pulverized product obtained in Reference Example 1 was replaced with 120 g of the lipoxygenase-deficient soybean pulverized extract obtained in Reference Example 2. , And analyzed in the same manner.

結果を第２表に示した。The results are shown in Table 2.

比較例３ 実施例３においてリポキシゲナーゼ欠失大豆粉砕物の抽
出液に代えて、参考例２においてリポキシゲナーゼ欠失
大豆に代えて、普通大豆〔米国産大豆（オハイオ,Glyci
ne max［L.］〕を用いて得た抽出液120gを用いた他は全
て同一条件で加水分解せしめ、同様に分析した。Comparative Example 3 Instead of the extract of the ground product of lipoxygenase-deficient soybean in Example 3, instead of the lipoxygenase-deficient soybean in Reference Example 2, ordinary soybean [US soybean (Ohio, Glyci
ne max [L.]] was used for hydrolysis under the same conditions except that 120 g of the extract obtained by using ne max [L.]] was used, and the same analysis was performed.

結果を第２表に示した。The results are shown in Table 2.

実施例４ 実施例２において参考例１で得たリポキシゲナーゼ欠失
大豆粉砕物に代えて参考例２で得たリポキシゲナーゼ欠
失大豆粉砕物の抽出液120gを用いた他は全て同一条件で
加水分解せしめ、同様にして分析した。Example 4 Hydrolysis was carried out under the same conditions except that 120 g of the extract of the lipoxygenase-deficient soybean crushed product obtained in Reference Example 2 was used in place of the lipoxygenase-deficient soybean crushed product obtained in Reference Example 1 in Example 2. , And analyzed in the same manner.

結果を第２表に示した。The results are shown in Table 2.

比較例４ 実施例４においてリポキシゲナーゼ欠失大豆粉砕物の抽
出液に代えて、参考例２においてリポキシゲナーゼ欠失
大豆に代えて、普通大豆〔米国産大豆（オハイオ,Glyci
ne max［L.］〕を用いて得た抽出液120gを用いた他は全
て同一条件で加水分解せしめ、同様に分析した。Comparative Example 4 Instead of the extract of the ground product of lipoxygenase-deficient soybean in Example 4, instead of the lipoxygenase-deficient soybean in Reference Example 2, ordinary soybean [US soybean (Ohio, Glyci
ne max [L.]] was used for hydrolysis under the same conditions except that 120 g of the extract obtained by using ne max [L.]] was used, and the same analysis was performed.

結果を第２表に示した。The results are shown in Table 2.

これらのリン脂質生成物を油脂へ配合し、これを用いて
調理した際、調理食品（炒め物、生食（サラダ）など）
の風味、ニオイの面で比較例3,4は極めて不良であった
のに対して、本発明実施例3,4はいずれも良好な風味を
示し、不快臭等を示さなかった。 When these phospholipid products are mixed with fats and oils and cooked using them, cooked foods (stir-fried foods, raw foods (salad), etc.)
Comparative Examples 3 and 4 were extremely poor in terms of flavor and odor, whereas Examples 3 and 4 of the present invention showed good flavor and did not show unpleasant odor.

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】リン脂質をリポキシゲナーゼ欠失株植物よ
り採取した油糧種子処理物で処理することを特徴とする
改質したリン脂質の製造方法。1. A method for producing a modified phospholipid, which comprises treating the phospholipid with an oil seed treatment product collected from a plant that is deficient in lipoxygenase. 【請求項２】リン脂質をリポキシゲナーゼ欠失株植物よ
り採取した油糧種子処理物を用い加水分解反応を行うこ
とを特徴とするホスファチジン酸の製造方法。2. A method for producing phosphatidic acid, which comprises subjecting a phospholipid to a hydrolysis reaction using an oil seed treated product collected from a lipoxygenase-deficient strain plant. 【請求項３】油糧種子処理物が油糧種子破砕物である請
求項１又は２記載の方法。3. The method according to claim 1, wherein the processed oil seed is a crushed oil seed. 【請求項４】油糧種子処理物が油糧種子からの抽出物で
ある請求項１又は２記載の方法。4. The method according to claim 1, wherein the treated oil seed is an extract from oil seed. 【請求項５】リポキシゲナーゼ欠失株植物より採取した
油糧種子がリポキシゲナーゼ欠失大豆である請求項１〜
４のいずれか一項に記載の方法。5. An oil seed collected from a lipoxygenase-deficient strain plant is lipoxygenase-deficient soybean.
The method according to any one of 4 above.