JPH0673100A - Production of peptide antibody and egg containing peptide antibody - Google Patents
Production of peptide antibody and egg containing peptide antibodyInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、ペプチド抗体の製造方
法およびペプチド抗体を含む卵に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing a peptide antibody and an egg containing the peptide antibody.
【０００２】[0002]
【従来の技術】ペプチドは、２個以上のアミノ酸がペプ
チド結合によって結合したもので、狭義にはアミノ酸数
が１００以下のものをいう。そのうちアミノ酸数が５０
以上のものは広義の蛋白質と呼ばれている。ペプチドの
活性は、記憶、睡眠、血糖値、血圧、免疫等の代謝調節
を始め、抗菌、抗ウイルス活性、抗腫瘍、毒、呈味、酵
素活性阻害、微生物の接合促進など幅広い。2. Description of the Related Art A peptide is a peptide in which two or more amino acids are linked by a peptide bond and, in a narrow sense, refers to one having 100 or less amino acids. 50 of them are amino acids
The above are called proteins in a broad sense. A wide range of peptide activities include metabolic regulation of memory, sleep, blood sugar level, blood pressure, immunity, antibacterial activity, antiviral activity, antitumor, poison, taste, inhibition of enzyme activity, and promotion of microbial conjugation.
【０００３】一方、生理活性ペプチドホルモンの活性部
位や、抗原抗体反応に関与する抗原決定基は、数個のア
ミノ酸からなる極めて狭い領域にあるといわれている。On the other hand, the active site of the physiologically active peptide hormone and the antigenic determinant involved in the antigen-antibody reaction are said to be in a very narrow region consisting of several amino acids.
【０００４】そこで、上記短鎖のペプチドそのものに対
する抗体を容易に得ることができれば、各ペプチドの簡
易測定系の確立をすることができ、また上記抗体または
上記方法によって取得した抗体をウイルス感染診断ある
いはワクチン製造のための抗原決定基の決定方法に利用
することができる。Therefore, if an antibody against the short-chain peptide itself can be easily obtained, a simple assay system for each peptide can be established, and the above-mentioned antibody or the antibody obtained by the above-mentioned method can be used for diagnosis of viral infection or It can be used in a method for determining an antigenic determinant for vaccine production.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】しかし、その抗体を得
るために、未変性のペプチドをそのまま用いて抗原とし
て免疫しても、抗体の取得は困難であった。例えば、ア
ミノ酸数が５個のロイシン・エンケファリンもそのまま
では免疫原性が低い（A.CUPO,J.VION-DURY,Neuropeptid
es 8、 p207-219、 1986）ことなどが報告されている。こ
の原因としては、ペプチドが生体内で消化酵素により分
解されたり、抗原決定基のみでなく担体決定基も備えな
ければ抗原として認識されない等のことが考えられてい
る。However, in order to obtain the antibody, it was difficult to obtain the antibody even if the native peptide was used as it was for immunization as an antigen. For example, leucine enkephalin, which has 5 amino acids, has low immunogenicity as it is (A.CUPO, J.VION-DURY, Neuropeptid
es 8, p207-219, 1986). It is considered that the cause of this is that the peptide is decomposed by digestive enzymes in the living body and is not recognized as an antigen unless it has not only the antigenic determinant but also the carrier determinant.
【０００６】このことから、一般に低分子化合物は、よ
り分子量の大きい蛋白質と結合しない限り、免疫原性を
獲得することはできないとされている（P.TIJSSEN,石川
英治、エンザイムイムノアッセイ、生化学実験法１１、
p35 〜36、1989）。From this, it is generally considered that a low molecular weight compound cannot acquire immunogenicity unless it binds to a protein having a larger molecular weight (P.TIJSSEN, Eiji Ishikawa, enzyme immunoassay, biochemical experiment). Law 11,
p35-36, 1989).
【０００７】このため、ペプチド抗体の作製法として、
特開昭６２―１０２１５７号のように、担体部分となる
ような分子量の大きいキャリヤー蛋白を抗原となるペプ
チドに結合して免疫原性を付与し、かかる抗原―キャリ
ヤー蛋白複合物をマウス、ウサギ、ラット等の動物に免
疫し、その血液より抗体を調製することが知られてい
る。Therefore, as a method for producing a peptide antibody,
As disclosed in JP-A-62-102157, a carrier protein having a large molecular weight which serves as a carrier moiety is bound to a peptide serving as an antigen to impart immunogenicity, and the antigen-carrier protein complex is bound to a mouse, a rabbit, It is known to immunize animals such as rats and prepare antibodies from the blood.
【０００８】しかしながら、このようなペプチド抗体の
作製法では、キャリヤー蛋白を用いているために、抗原
に対する抗体ばかりでなく、そのキャリヤー蛋白に対す
る抗体もまた誘導されてしまい、結果として抗原―抗体
間の親和性が低くなってしまうおそれがあった。さら
に、抗原がほ乳類由来のものである場合、同系のマウ
ス、ウサギ、ラット等の動物に免疫しても、短鎖のペプ
チドのような低分子抗原を用いたときに、抗原が認識さ
れず、抗体が産生されにくいという難点もあった。However, in such a method for producing a peptide antibody, since a carrier protein is used, not only an antibody against an antigen but also an antibody against the carrier protein is induced and, as a result, the antigen-antibody There was a risk that the affinity would be low. Furthermore, when the antigen is of mammalian origin, even when immunizing animals such as syngeneic mice, rabbits, and rats, when a low-molecular antigen such as a short-chain peptide is used, the antigen is not recognized, There was also the drawback that antibodies were difficult to produce.
【０００９】なお、単一の抗原決定基を認識する抗体と
してモノクローナル抗体が知られているが、その調製に
は多大なコストを要し、大量生産が困難であった。Although a monoclonal antibody is known as an antibody that recognizes a single antigenic determinant, its preparation requires a large amount of cost and is difficult to mass-produce.
【００１０】したがって、本発明の目的は、未変性のペ
プチドに対する抗体を容易に作製することを可能とした
ペプチド抗体の製造方法およびペプチド抗体を含む卵を
提供することにある。[0010] Therefore, an object of the present invention is to provide a method for producing a peptide antibody, which enables easy production of an antibody against a native peptide, and an egg containing the peptide antibody.
【００１１】[0011]
【課題を解決するための手段】上記目的達成のため、請
求項１に記載の本発明は、ペプチド抗体の製造方法にお
いて、あらかじめ抗原を摂取した鶏が産生した卵よりペ
プチド抗体を調製することを特徴とする。To achieve the above object, the present invention according to claim 1 provides a method for producing a peptide antibody, wherein the peptide antibody is prepared from an egg produced by a chicken that has previously ingested the antigen. Characterize.
【００１２】上記目的達成のため、請求項２に記載の発
明は、請求項１のペプチド抗体の製造方法において、上
記抗原がペプチドであることを特徴とする。To achieve the above object, the invention according to claim 2 is characterized in that, in the method for producing the peptide antibody according to claim 1, the antigen is a peptide.
【００１３】上記目的達成のため、請求項３に記載の発
明は、請求項２のペプチド抗体の製造方法において、上
記抗原がアミノ酸２個以上５０個以下のペプチドである
ことを特徴とする。To achieve the above object, the invention according to claim 3 is characterized in that, in the method for producing the peptide antibody according to claim 2, the antigen is a peptide having 2 to 50 amino acids.
【００１４】上記目的達成のため、請求項４に記載の発
明は、請求項３のペプチド抗体の製造方法において、上
記抗原がアミノ酸３個以上１５個以下の短鎖のペプチド
であることを特徴とする。To achieve the above object, the invention according to claim 4 is characterized in that, in the method for producing the peptide antibody according to claim 3, the antigen is a short-chain peptide having 3 to 15 amino acids. To do.
【００１５】上記目的達成のため、請求項５に記載の発
明は、請求項１ないし４のいずれか一のペプチド抗体の
製造方法において、上記抗原がキャリヤー蛋白に結合し
ていない未変性の状態であることを特徴とする。To achieve the above object, the invention according to claim 5 is the method for producing the peptide antibody according to any one of claims 1 to 4, wherein the antigen is in a non-denatured state in which it is not bound to a carrier protein. It is characterized by being.
【００１６】上記目的達成のため、請求項６に記載の発
明の要旨は、あらかじめ抗原を摂取した鶏が産生したペ
プチド抗体を含む卵にある。To achieve the above object, the subject matter of the invention according to claim 6 is an egg containing a peptide antibody produced by a chicken which has previously ingested an antigen.
【００１７】本発明にかかるペプチド抗体の製造方法で
は、予め抗原としてペプチドが摂取された鶏の産生する
卵の卵黄からペプチド抗体を得る。一般に抗原がほ乳類
由来のものである場合、同系のマウス、ウサギ、ラット
等の動物に免疫しても、短鎖のペプチドのような低分子
抗原を用いたときに、抗原が認識されず、抗体が産生さ
れにくかった。本発明者が鋭意検討したところ、鶏の免
疫系では、ペプチドのような低分子抗原でも認識される
ことが判明した。In the method for producing a peptide antibody according to the present invention, the peptide antibody is obtained from the yolk of an egg produced by a chicken which has been previously ingested with the peptide as an antigen. In general, when the antigen is derived from a mammal, even when immunizing animals such as syngeneic mice, rabbits and rats, when a low molecular antigen such as a short chain peptide is used, the antigen is not recognized and the antibody Was hard to produce. As a result of diligent studies by the present inventor, it was found that the chicken immune system also recognizes low molecular weight antigens such as peptides.
【００１８】卵黄より抗体を調製した場合は、卵黄１ｍ
ｌあたり１０ｍｇ程度のＩｇＧ抗体が含まれていると言
われ、従来の血液由来ものに比べ、高濃度に蓄積してい
る。また、抗体価を保持している期間中の卵を抗体取得
用に供することができるので、血液より調製する方法に
比べて容易である。If the antibody is prepared from egg yolk, 1 m of egg yolk
It is said that about 10 mg of IgG antibody is contained per liter, and it is accumulated at a high concentration as compared with the conventional blood-derived one. In addition, eggs can be used for antibody acquisition during the period in which the antibody titer is retained, which is easier than the method of preparing from blood.
【００１９】本発明では、産生抗体の特異性を考慮し
て、短鎖のペプチドを使用する。具体的には、アミノ酸
２個以上５０個以下のペプチド、好ましくはアミノ酸３
個以上１５個以下の短鎖のペプチドを使用する。生体内
で抗原決定基となるペプチド部位は、アミノ酸数にして
数個から成るからである。また、５０個以上であると高
分子の蛋白となり、抗原決定基が複数となり、本発明の
目的に沿わなくなる。In the present invention, a short-chain peptide is used in consideration of the specificity of the produced antibody. Specifically, a peptide having 2 to 50 amino acids, preferably 3 amino acids
One or more and 15 or less short-chain peptides are used. This is because the peptide site that serves as an antigenic determinant in vivo consists of several amino acids. Further, when it is 50 or more, it becomes a high molecular weight protein, and the number of antigenic determinants becomes plural, and the purpose of the present invention is not met.
【００２０】本発明では、短鎖のペプチドを、キャリヤ
ー蛋白に結合していない未変性の状態で使用する。これ
によって、抗原決定基をマスクするおそれがなくなり、
キャリヤー蛋白に対する抗体も誘導されない。In the present invention, the short-chain peptide is used in a non-denatured state in which it is not bound to a carrier protein. This eliminates the risk of masking antigenic determinants,
Antibodies to the carrier protein are also not induced.
【００２１】鶏の免疫にあたっては、上記短鎖のペプチ
ドを、免疫増強剤（アジュバント）、ポリビニルピロリ
ドンと共に摂取させる。免疫増強剤（アジュバント）と
しては、フロイントの完全アジュバント，不完全アジュ
バントを使用することができる。ポリビニルピロリドン
は、ペプチドを吸着させ、生体内でこれが急速に分解、
拡散することを避けるために用いるが、特に限定するも
のではない。For immunization of chickens, the above-mentioned short-chain peptide is ingested together with an immunopotentiator (adjuvant) and polyvinylpyrrolidone. Freund's complete and incomplete adjuvants can be used as the immunopotentiator (adjuvant). Polyvinylpyrrolidone adsorbs peptides, which rapidly decompose in vivo,
It is used to prevent diffusion, but is not particularly limited.
【００２２】摂取にあたっては、皮下注射、筋肉注射あ
るいは腹腔内投与など適当な経路が可能である。１回あ
たりの摂取量は、一羽あたり５０μｇから１０ｍｇであ
る。５０μｇでも十分免疫されるが、より早く抗体価を
上昇させるためには、１ｍｇ以上とすることが好まし
い。For ingestion, a suitable route such as subcutaneous injection, intramuscular injection or intraperitoneal administration is possible. The intake per dose is 50 μg to 10 mg per bird. Although 50 μg is sufficiently immunized, it is preferably 1 mg or more in order to increase the antibody titer more quickly.
【００２３】上記のようにして鶏に初回免疫を行って数
週間以内に特異抗体が形成される。ペプチド抗体の抗体
価持続のためには、２週間間隔で数回追加免疫を行うこ
とが好ましい。As described above, specific antibodies are formed within a few weeks of the initial immunization of chickens. In order to maintain the antibody titer of the peptide antibody, it is preferable to perform booster immunization several times at 2-week intervals.
【００２４】以上のようにして免疫された鶏の産生する
卵は、抗原ペプチドの特異抗体を含む。得られた卵黄か
ら、抗体を抽出する方法としては、例えば、アルギン酸
ナトリウムによる抽出、クロロホルムによる抽出等（特
開昭６３―２１５６９９号等）が挙げられるが、これら
の方法に限定されるものではない。The egg produced by the chicken immunized as described above contains a specific antibody of the antigen peptide. Examples of the method for extracting the antibody from the obtained egg yolk include extraction with sodium alginate, extraction with chloroform and the like (Japanese Patent Laid-Open No. 63-215699), but are not limited to these methods. .
【００２５】本発明によって製造したペプチド抗体の抗
体価は、ＥＬＩＳＡ法（酵素免疫吸着法）によって定量
することができる。The antibody titer of the peptide antibody produced by the present invention can be quantified by the ELISA method (enzyme immunosorbent assay).
【００２６】以下に本発明の実施例を挙げるExamples of the present invention will be given below.
【００２７】実施例１ （１） 抗原の調製 鶏への免疫原として、ニューロペプチドの一種であるロ
イシン・エンケファリン（分子量５５５，アミノ酸数５
個，Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu）をＦｍｏｃ固相合成法によ
り作製した。このロイシン・エンケファリンの３．５％
ポリビニルピロリドン―ＰＢＳ液に免疫増強剤としてフ
ロイントの完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ社製）を等量
加えて乳化させ、抗原液を得た。Example 1 (1) Preparation of Antigen As an immunogen for chickens, leucine enkephalin (molecular weight 555, amino acid number 5), which is a neuropeptide, is used.
Individual, Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu) were prepared by the Fmoc solid phase synthesis method. 3.5% of this leucine enkephalin
An equivalent amount of Freund's complete adjuvant (manufactured by Difco) as an immunopotentiator was added to the polyvinylpyrrolidone-PBS solution and emulsified to obtain an antigen solution.
【００２８】（２） 抗原の鶏への免疫 （１）で得た抗原液を、鶏４羽を用い、ロイシン・エン
ケファリン投与量が１０ｍｇ／羽（Ｎｏ．１），５ｍｇ
／羽（Ｎｏ．２），５００μｇ／羽（Ｎｏ．３），５０
μｇ／羽（Ｎｏ．４）となるように、各鶏の足腿に皮下
注射した。この免疫操作を初回免疫後、２週間間隔で３
回行った。初回免疫後９週間、採取した卵の特異抗体価
を測定し（抗体の調製および測定方法は以下に示す）、
その推移を観察した。その結果を図１に示す。(2) Immunization of Chicken with Antigen The antigen solution obtained in (1) was used in 4 chickens and leucine / enkephalin dose was 10 mg / chicken (No. 1), 5 mg.
/ Wing (No.2), 500 μg / wing (No.3), 50
Each chicken was subcutaneously injected into the thighs so that the amount of microgram / wing (No. 4) was obtained. After the first immunization, this immunization procedure is performed every 2 weeks for 3
I went there. 9 weeks after the first immunization, the specific antibody titer of the collected egg was measured (the antibody preparation and measurement method is shown below),
The transition was observed. The result is shown in FIG.
【００２９】（３） 抗体の調製 卵黄を卵より分離し、卵黄と等量のＰＢＳ（Ｏ．Ｏ１Ｍ
リン酸緩衝食塩液：Ｏ．Ｏ１Ｍリン酸ナトリウム、０．
１５Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ７．２）を加え、混合し、
さらに０．１％アルギン酸ナトリウム溶液を卵黄に対し
て０．２％から０．３５％になるように加え、２時間
後、１５０００ｒｐｍ、２０分遠心した。遠心後の水溶
性画分を抗体価の測定に供した。(3) Preparation of antibody Egg yolk was separated from the egg and PBS (O.
Phosphate buffered saline: O.C. O1M sodium phosphate, 0.
15M sodium chloride, pH 7.2) was added and mixed,
Further, a 0.1% sodium alginate solution was added to the egg yolk so as to be 0.2% to 0.35%, and after 2 hours, the mixture was centrifuged at 15,000 rpm for 20 minutes. The water-soluble fraction after centrifugation was subjected to antibody titer measurement.
【００３０】（４） 抗体価の測定方法 抗原として用いたロイシン・エンケファリンをＰＢＳ溶
液に５０μｇ／ｍｌになるように調製し、９６穴マイク
ロタイタープレート（日本インターメッド社製）の各ウ
ェルに１００μｌずつ分注した。３７℃で２時間、４℃
で一晩反応させた。その後、ＰＢＳで３回洗浄後、ブロ
ックエース（大日本製薬株式会社製）を１／４にＰＢＳ
で希釈したものを３００μｌずつプレートの各ウェルに
分注した。３７℃で１時間反応後、ＰＢＳで３回洗浄し
た。（２）で示した水溶性画分を１／１０ブロックエー
スで１０００倍希釈し、１００μｌずつ分注した。３７
℃で２時間反応させた後、ＰＢＳ―Ｔｗｅｅｎ（Ｏ．Ｏ
１Ｍリン酸緩衝食塩液、ｐＨ７．４に０．０５％になる
ようにＴｗｅｅｎ２０を加えたもの）で５回洗浄した。
二次抗体として、ペルオキシターゼ標識ウサギ抗ニワト
リＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ社製）を１／１０ブロックエー
スで１０００倍希釈し、１００μｌずつ分注し、３７℃
で１時間反応させた。その後、ＰＢＳ―Ｔｗｅｅｎで５
回洗浄後、ＴＭＢＺ―ＨＣｌ（３，３’，５，５’―テ
トラメチルベンジジン、ジヒドロクロライド）３ｍｇを
０．０１ＮＨＣｌ（ｐＨ２）５ｍｌに溶解した。３０％
Ｈ2Ｏ2 ４０μｌを水１０ｍｌにとかし、これを１ｍｌ
と０．１Ｍリン酸―クエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）９ｍ
ｌとを混合した。これに先のＴＭＢＺ―ＨＣｌ液４．２
９ｍｌを混合したものを１００μｌずつ分注した。３７
℃で２０分反応させた後、１Ｎ硫酸を２００μｌずつ分
注し、吸光度４５０ｎｍを測定した。サンプルはあらか
じめタンパク量を測定しておき（Ｂｉｏ―Ｒａｄ Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ）、タンパク量あたりの吸光度
としての比活性を算出した。 比活性＝（実施例試料の抗体価吸光度―ブランク）／実
施試料のタンパク量（ｍｇ） ここで、ブランクとは、抗原を固定していないウエルの
吸光度のことである。非特異反応による見かけの抗体価
上昇を補正するため差し引く。図１から明かなように、
３回免疫を行って抗体価が上昇し、７週目あたりでその
最大抗体価を得ていることがわかる。免疫投与量が少な
いものは、抗体価が上昇するのに時間がかかるものの、
５０μｇでも抗体価の上昇が得られた。(4) Method for measuring antibody titer Leucine enkephalin used as an antigen was prepared in a PBS solution so as to have a concentration of 50 μg / ml, and 100 μl was added to each well of a 96-well microtiter plate (manufactured by Nippon Intermed). Dispensed. 2 hours at 37 ℃, 4 ℃
And reacted overnight at. Then, after washing 3 times with PBS, block Ace (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) is ¼ PBS
300 μl of the solution diluted with was dispensed into each well of the plate. After reacting at 37 ° C. for 1 hour, the plate was washed 3 times with PBS. The water-soluble fraction shown in (2) was diluted 1000 times with 1/10 Block Ace and dispensed in 100 μl portions. 37
After reacting for 2 hours at ℃, PBS-Tween (O.O.
It was washed 5 times with 1M phosphate buffered saline, pH 7.4 with Tween 20 added to bring the concentration to 0.05%).
As a secondary antibody, peroxidase-labeled rabbit anti-chicken IgG (manufactured by Cappel) was diluted 1000-fold with 1/10 Block Ace and dispensed in 100 μl aliquots at 37 ° C.
And reacted for 1 hour. After that, 5 with PBS-Tween
After washing twice, 3 mg of TMBZ-HCl (3,3 ′, 5,5′-tetramethylbenzidine, dihydrochloride) was dissolved in 5 ml of 0.01N HCl (pH 2). 30%
Dissolve 40 μl of H 2 O 2 in 10 ml of water and add 1 ml of this.
And 0.1M phosphate-citrate buffer (pH 4.0) 9m
and 1 were mixed. In addition to the above TMBZ-HCl solution 4.2
A mixture of 9 ml was dispensed in 100 μl portions. 37
After reacting at 20 ° C. for 20 minutes, 200 μl of 1N sulfuric acid was dispensed and the absorbance at 450 nm was measured. The protein content of the sample is measured in advance (Bio-Rad Pr
The specific activity as the absorbance per protein amount was calculated. Specific activity = (antibody titer absorbance of Example sample-blank) / protein amount of working sample (mg) Here, the blank is the absorbance of the well to which the antigen is not immobilized. Subtract to correct for apparent antibody titer increase due to nonspecific reaction. As is clear from Figure 1,
It can be seen that the antibody titer increased by immunization three times and the maximum antibody titer was obtained around the 7th week. For those with a small immunization dose, it takes time for the antibody titer to rise, but
An increase in antibody titer was obtained even at 50 μg.
【００３１】実施例２ （１） 抗原の調製 鶏への免疫源として、血管拡張作用などを持つペプチド
のニューロテンシン（分子量１６７２，アミノ酸数１３
個Ｐｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｌ
ｅｕ）を実施例１と同様に、Ｆｍｏｃ固相合成法により
作製した。このニューロテンシンを実施例１と同様な方
法で抗原液とした。Example 2 (1) Preparation of Antigen Neurotensin (molecular weight: 1672, amino acid number: 13) having a vasodilatory action etc. as an immunogen for chickens
Pyr-Leu-Tyr-Glu-Asn-Lys-
Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-L
eu) was prepared by the Fmoc solid phase synthesis method in the same manner as in Example 1. This neurotensin was used as an antigen solution in the same manner as in Example 1.
【００３２】（２） 抗原の鶏への免疫 （１）で得た抗原液を、鶏２羽を用い、ニューロテンシ
ン投与量が１０ｍｇ／羽（Ｎｏ．１）、５００μｇ／羽
（Ｎｏ．２）となるように、各鶏の足腿に皮下注射し
た。この免疫操作を初回免疫後、２週間で３回行い、初
回免疫後９週間、採取した卵の特異抗体価を測定し（抗
体の調製および測定方法は実施例１と同様）その推移を
観察した。その結果を図２に示す。(2) Immunization of Chicken with Antigen The antigen solution obtained in (1) was used in 2 chickens, and the dose of neurotensin was 10 mg / bird (No. 1) and 500 μg / bird (No. 2). Each chicken was subcutaneously injected into the thigh. This immunization procedure was performed 3 times within 2 weeks after the first immunization, and the specific antibody titer of the collected eggs was measured for 9 weeks after the first immunization (the antibody preparation and measurement method were the same as in Example 1), and the change was observed. . The result is shown in FIG.
【００３３】（３） 抗体の調製 実施例１の（３）と同様の方法で調製した。(3) Preparation of antibody The antibody was prepared in the same manner as in (3) of Example 1.
【００３４】（４） 抗体価の測定方法 実施例１の（４）と同様の方法で抗体価を測定し、比活
性を算出した。図２で示したように、３回免疫を行って
抗体価が上昇し、７週目あたりでその最大抗体価を得て
いることがわかる。５００μｇ免疫したものは抗体価は
低いものの、上昇を続けている。(4) Method for measuring antibody titer The antibody titer was measured in the same manner as in (4) of Example 1 to calculate the specific activity. As shown in FIG. 2, it can be seen that the antibody titer increased by immunization three times and the maximum antibody titer was obtained around the 7th week. The antibody titer of 500 μg immunized is low, but it continues to rise.
【００３５】[0035]
【発明の効果】上記したところから明らかなように、本
発明によれば、未変性のペプチドに対する抗体を容易に
作製することを可能としたペプチド抗体の製造方法およ
びペプチド抗体を含む卵を提供することができる。すな
わち、本発明によれば、抗原としての未変性のペプチド
に対するペプチド抗体の応答が早く、短期間で最大抗体
価を得ることができ、簡易に安価で、大量にペプチド抗
体を提供することができ、ペプチドに関連する医薬製造
において、有効な手段を提供することができる。As is clear from the above, according to the present invention, there is provided a method for producing a peptide antibody capable of easily producing an antibody against a native peptide, and an egg containing the peptide antibody. be able to. That is, according to the present invention, the response of the peptide antibody to the native peptide as an antigen is fast, the maximum antibody titer can be obtained in a short period of time, and the peptide antibody can be provided easily and inexpensively in large quantities. , It is possible to provide an effective means in the manufacture of a drug related to a peptide.
【図１】ロイシン・エンケファリンの投与量を変えて免
疫したときの、比活性の経時変化を示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing the change over time in specific activity when immunizing with varying doses of leucine enkephalin.
【図２】ニューロテンシンの投与量を変えて免疫したと
きの、比活性の経時変化を示すグラフである。FIG. 2 is a graph showing the change over time in specific activity when immunization was performed by changing the dose of neurotensin.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 15/06 ＺＮＡ 8517−4Ｈ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ 33/531 Ａ 8310−2Ｊ (72)発明者 河本 泰良 神奈川県川崎市高津区坂戸３丁目２番１号 信越化学工業株式会社コーポレートリサ ーチセンター内 (72)発明者 千葉 徹 神奈川県川崎市高津区坂戸３丁目２番１号 信越化学工業株式会社コーポレートリサ ーチセンター内 (72)発明者 滝口 泰之 神奈川県川崎市高津区坂戸３丁目２番１号 信越化学工業株式会社コーポレートリサ ーチセンター内 (72)発明者 三好 洋 神奈川県川崎市高津区坂戸３丁目２番１号 信越化学工業株式会社コーポレートリサ ーチセンター内 (72)発明者 木山 晋哉 東京都杉並区善福寺４−22−18 アルペー ジュ善福寺102 (72)発明者 熊谷 佳子 東京都世田谷区上祖師谷１−６−12─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 5 Identification number Office reference number FI technical display location C07K 15/06 ZNA 8517-4H G01N 33/53 D 8310-2J 33/531 A 8310-2J (72 ) Inventor Yasuyoshi Kawamoto 32-1 Sakado, Takatsu-ku, Kawasaki-shi, Kanagawa Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. Corporate Research Center (72) Toru Chiba 3-2-1 Sakado, Takatsu-ku, Kawasaki-shi, Kanagawa Prefecture Shin-Etsu Chemical Industrial Co., Ltd. Corporate Research Center (72) Inventor Yasuyuki Takiguchi 32-1 Sakado, Takatsu-ku, Kawasaki-shi, Kanagawa Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. Corporate Research Center (72) Hiroshi Miyoshi, Sakado, Takatsu-ku, Kawasaki-shi, Kanagawa 3-2-1, Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. Corporate Research Centerー (72) Inventor Shinya Kiyama 4-22-18 Zenpukuji, Suginami-ku, Tokyo 102 Argege Zenpukuji 102 (72) Inventor, Keiko Kumagai 1-6-12 Kamisoshiya, Setagaya-ku, Tokyo
Claims (6)
卵よりペプチド抗体を調製することを特徴とするペプチ
ド抗体の製造方法。1. A method for producing a peptide antibody, which comprises preparing the peptide antibody from an egg produced by a chicken that has ingested an antigen in advance.
する請求項１のペプチド抗体の製造方法。2. The method for producing a peptide antibody according to claim 1, wherein the antigen is a peptide.
のペプチドであることを特徴とする請求項２のペプチド
抗体の製造方法。3. The method for producing a peptide antibody according to claim 2, wherein the antigen is a peptide having 2 to 50 amino acids.
の短鎖のペプチドであることを特徴とする請求項３のペ
プチド抗体の製造方法。4. The method for producing a peptide antibody according to claim 3, wherein the antigen is a short-chain peptide having 3 to 15 amino acids.
ない未変性の状態であることを特徴とする請求項１ない
し４のいずれか一のペプチド抗体の製造方法。5. The method for producing a peptide antibody according to claim 1, wherein the antigen is in a non-denatured state in which it is not bound to a carrier protein.
ペプチド抗体を含む卵。6. An egg containing a peptide antibody produced by a chicken that has previously received an antigen.
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|---|---|---|---|
| JP4248584A JP3021207B2 (en) | 1992-08-25 | 1992-08-25 | Method for producing peptide antibody |
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| JP4248584A JP3021207B2 (en) | 1992-08-25 | 1992-08-25 | Method for producing peptide antibody |
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| JPH0673100A true JPH0673100A (en) | 1994-03-15 |
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ID=17180302
Family Applications (1)
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| JP4248584A Expired - Lifetime JP3021207B2 (en) | 1992-08-25 | 1992-08-25 | Method for producing peptide antibody |
Country Status (1)
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| JP (1) | JP3021207B2 (en) |
-
1992
- 1992-08-25 JP JP4248584A patent/JP3021207B2/en not_active Expired - Lifetime
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