JPH0672884A - α‐アミラーゼ阻害剤及びそれを用いた医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 一般式 【化１】 （ｎ＝１〜５の整数である）で表わされる６‐デオキシ
マルトオリゴ糖を有効成分とするα‐アミラーゼ阻害
剤、及びこれを用いた過血糖症、特に肥満症や糖尿病の
予防又は治療剤である。 【効果】 前記６‐デオキシマルトオリゴ糖はα‐アミ
ラーゼ、特に膵液α‐アミラーゼに対して強い阻害作用
を有し、α‐アミラーゼ阻害剤として、特に過血糖症、
例えば肥満症や糖尿病の患者に投与したとき、副作用も
なく著効を奏する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、６‐デオキシマルトオ
リゴ糖を有効成分とするα‐アミラーゼ阻害剤及びこれ
を用いた、過血糖症例えば肥満症、糖尿病などの疾患を
予防又は治療するための医薬に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】哺乳動物が摂取した炭水化物は口腔及び
胃内で唾液α‐アミラーゼによりある程度消化（水解）
され、次いで、十二指腸及び空腸内で膵液α‐アミラー
ゼにより本格的に消化されてオリゴ糖や二糖類となり、
これらが更にグルコアミラーゼ、マルターゼなどのグル
コシド加水分解酵素により加水分解されて、最終的には
グルコースなどの単糖類となり、腸間膜上の繊毛から吸
収される。

【０００３】そして炭水化物の摂取後には、この吸収さ
れたグルコースにより、一時的に血糖値が上昇する、い
わゆる過血糖症状が起こるが、この症状は、通常生体に
おける糖の恒常性維持システムによって血糖値が一定の
範囲に調整されることによって回復する。

【０００４】ところが、食餌性過血糖症状が長時間持続
したり、血糖値が異常に高値となると、過血糖症と称さ
れる疾患となり、肥満症や糖尿病などの症例をもたら
す。

【０００５】この肥満症は、過食による過血糖症状が、
インシュリンの多量の分泌を促進し、このために脂肪合
成の増大及び脂肪分解の減少をもたらし、体内に脂肪が
蓄積される結果発症する。

【０００６】また、 肥満症は糖尿病、高血圧、動脈硬
化症、心血管疾患、脂肪肝などの成人病を合併しやす
く、死亡率も高く、更に短命であるとされている。

【０００７】さらに、糖尿病は神経障害、不妊、視力障
害、失明、動脈硬化症、自立神経障害など多くの重い合
併症を引き起こすこと、そして、特に成人型の糖尿病は
肥満した人に圧倒的に多く、カロリーの摂取を少なくし
て、体重を減少することによって軽快することが知られ
ている。

【０００８】このような過血糖症の有力な予防又は治療
剤として、これまで食欲抑制剤、腸管からの吸収抑制
剤、消化酵素阻害剤などが提案されている（「医学のあ
ゆみ」、第１４１巻、第２４９〜２５１ページ）。

【０００９】他方、消化酵素阻害剤の一つとして挙げら
れているα‐アミラーゼ阻害剤が肥満症、糖尿病などの
過血糖症の予防又は治療剤として有用であるとされてお
り、その例としてアカーボース（Ａｃａｒｂｏｓｅ）
［チャップマン及びホール編「ディクショナリー・オブ
・オーガニック・コンパウンズ（Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ
ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」第１
巻、第５版、第７ページ（１９８２）］及びこれと類似
のアミノ糖誘導体（特開昭５２−１２２３４２号公報）
が知られている。

【００１０】上記のアカーボースは、還元的なＣ‐Ｎ結
合の切断反応により、サイクリトール部及びアミノ糖と
２個のグルコースからなる４^３‐アミノ‐６^３、４^３‐
ジデオキシマルトトリオース（トリサッカライド）を生
成する構造を有する化合物であるが、この際に生成する
トリッカライドは、ブタ膵臓α‐アミラーゼの阻害作用
を有しない［ブラッドベック編、「エンザイム・インヒ
ビターズ・プロシーディングズ・オブ・ア・ミーティン
グ・ヘルド・イン・バーゼル（ＥｎｚｙｍｅＩｎｈｉｂ
ｉｔｏｒｓ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ａ ｍｅ
ｅｔｉｎｇｈｅｌｄ ｉｎ Ｂａｓｅｌ）」、１９８０
年、３月２０日、２１日、第１２５ページ］。

【００１１】また、上記のアカーボースを医薬として服
用した場合には、腹鳴、放屁などの副作用があるという
欠点を有している（「医学のあゆみ」第１５６巻、第１
３号、第１０３９〜１０４２ページ）。

【００１２】他方、６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオ
ースに関しては、これがタカアミラーゼＡに対して基質
阻害作用を示すものでないことのみが報告されており
［「ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．）」、第８４巻、第８３５〜８４１ペー
ジ］、α‐アミラーゼ阻害作用を有することは知られて
いない。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
従来の予防又は治療剤が有する欠点を克服し、α‐アミ
ラーゼに対し強い阻害作用を有するα‐アミラーゼ阻害
剤、及び副作用のない、過血糖症、例えば肥満症、糖尿
病などの予防又は治療剤を提供することを目的としてな
されたものである。

【００１４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成するために鋭意研究を重ねた結果、非還元末端グ
ルコースの６位の水酸基が水素原子で置換された６‐デ
オキシマルトオリゴ糖が、α‐アミラーゼ、特に膵液α
‐アミラーゼに対する強力な阻害剤として有用であるこ
と、そしてこれが過血糖症の予防又は治療剤として、副
作用もなく有効に用いることができて、その目的を達成
し得ることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成
するに至った。

【００１５】すなわち、本発明は、一般式

【化３】 （式中のｎは１〜５の整数である）で表わされる６‐デ
オキシマルトオリゴ糖を有効成分とするα‐アミラーゼ
阻害剤、及びこれを用いた過血糖症の予防又は治療剤を
提供するものである。

【００１６】前記一般式（Ｉ）の６‐デオキシマルトオ
リゴ糖は、例えば特開平３−８６７０１号公報などに記
載された既知物質である。

【００１７】前記一般式（Ｉ）の６‐デオキシマルトオ
リゴ糖はα‐アノマー又はβ‐アノマーのいずれであっ
てもよい。

【００１８】このような化合物としては、６^３‐デオキ
シ‐Ｄ‐マルトトリオース、６^４‐デオキシ‐Ｄ‐マル
トテトラオース、６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオ
ース、６^６‐デオキシ‐Ｄ‐マルトヘキサオース、６^７
‐デオキシ‐Ｄ‐マルトヘプタオースが挙げられる。そ
して、これらの化合物は１種又は２種以上組合わせて用
いられる。

【００１９】なお、上記において、記号６^３‐、６
^４‐、６^５‐などは、マルトオリゴ糖を構成するグルコ
ース単位の還元末端から、３番目、４番目、５番目のグ
ルコース残基（すなわち、非還元末端のグルコース残
基）の６位の水酸基が置換されていることを示す。

【００２０】次に、本発明に用いられる前記一般式
（Ｉ）の６‐デオキシマルトオリゴ糖は、例えば前記特
開平３−８６７０１号公報に記載の方法で製造すること
ができるが、その外の方法によって製造してもよい。

【００２１】上記の方法によれば、モノ‐６‐デオキシ
シクロデキストリンに、既知シクロデキストリナーゼ
［すなわち、（イ）シクロデキストリンを開裂し、シク
ロデキストリンのグルコース重合度に由来するマルトオ
リゴ糖を生成させる作用及び（ロ）シクロデキストリン
に対する加水分解速度又は親和性が多糖類あるいはシク
ロデキストリンと同じ重合度の直鎖オリゴ糖よりも大き
い基質特異性を有するシクロデキストリナーゼ］（特開
平３−１５３８４号公報及び前記特開平３−８６７０１
号公報参照）を作用させると同時に、又は作用させたの
ちに、エキソ型糖化酵素類、例えばグルコアミラーゼ、
α‐グルコシダーゼなどを作用させ、必要により、例え
ば活性炭カラムクロマトグラフィー、オクタデシル化シ
リカゲル（ＯＤＳ）カラムクロマトグラフィーなどを用
いて精製することにより製造できる。

【００２２】本発明で用いられる前記一般式（Ｉ）の化
合物は、α‐アミラーゼ、特に膵液α‐アミラーゼに対
し強い阻害作用を有するので、α‐アミラーゼ阻害剤と
して使用することができる。中でも６^３‐デオキシ‐Ｄ
‐マルトトリオース、６^４‐デオキシ‐Ｄ‐マルトテト
ラオース、６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオースが
殊に強い阻害作用を有している。

【００２３】本発明のα‐アミラーゼ阻害剤の投与量
は、投与方法と症状の程度、患者の年齢、体重などによ
り異なるが、通常、成人１日当たり有効成分として０．
０１〜２０ｇ、好ましくは０．５〜１０ｇの範囲で選ば
れる。

【００２４】これは、経口的又は非経口的のいずれの方
法で投与することもできるが、経口的に投与するのが有
利である。

【００２５】本発明のα‐アミラーゼ阻害剤は、単独で
投与することもできるが、通常は、賦形剤、滑沢剤、希
釈剤、安定剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、甘味剤、芳香剤、
矯味剤、着色剤、保存剤、乳化剤、粘稠剤、基剤などを
用いて錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、
座剤、注射剤、点滴剤その他の製剤の形で用いられる。
これらの製剤は常法により行われる。

【００２６】賦形剤としては、例えば、ばれいしょデン
プン、乳糖、結晶セルロース、マンニットなど、滑沢剤
としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、
硬化油など、甘味剤、芳香剤、矯味剤としては、例えば
食塩、サッカリン、オレンジ油、クエン酸、メントー
ル、リンゴ酸などが用いられる。

【００２７】

【発明の効果】本発明の前記一般式（Ｉ）の６‐デオキ
シマルトオリゴ糖は、α‐アミラーゼ、特に膵液α‐ア
ミラーゼに対し強い阻害作用を有しているので、過血糖
症、例えば肥満症、糖尿病の予防又は治療剤としての薬
効を示し、副作用もない。

【００２８】したがって、この過血糖症に起因する高脂
血症、脂肪肝、動脈硬化症などの予防又は治療剤として
も有効であり、また、該阻害剤は免疫賦活作用も予想さ
れ、今後期待される重要な生理活性物質である。

【００２９】

【実施例】次に実施例により本発明をさらに詳細に説明
する。

【００３０】参考例１ ６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトト
リオースの製造 （１）６‐デオキシ‐β‐シクロデキストリンの製造 市販のβ‐シクロデキストリン［和光純薬工業（株）
製］５．００ｇ（４．４１ｍｍｏｌ）をピリジン５０ｍ
ｌに溶解し、トシルクロリド１０．０ｇ（５２．４ｍｍ
ｏｌ）を加え、室温下で５時間、かきまぜながら反応さ
せた。次いで、この反応液のピリジンを減圧下に留去さ
せたのち、残留分に水１００ｍｌ及びベンゼン１５０ｍ
ｌを攪拌下に加え、固形物を析出させた。次に、この固
形物をグラスフィルターでろ別し、アセトン５０ｍｌで
２回洗浄したのち、ろ取物をＯＤＳカラムクロマトグラ
フィーにより精製し、エタノール‐水混液（容量比１：
９）で溶出した目的区分を濃縮し、水から再結晶する
と、６‐Ｏ‐トシル‐β‐シクロデキストリンが１．６
３ｇ（１．２６ｍｍｏｌ、収率２８．６％）得られた。

【００３１】このものの物性は次のとおりである。 融点（℃）：１７２．０〜１７４．０（分解） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４００，２９３
０，１６４２，１６３２，１６００，１４２４，１３６
０，１３００，１１７８，１１５６，１０７８，１０２
８

【００３２】核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐ
ｐｍ（ＤＭＳＯ‐ｄ_６）：２．４４，（３Ｈ，ｓ），
３．１５〜４．４５（ｍ），４．７６（２Ｈ，ｂｒ．
ｓ），４．８５（５Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．４４（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．
８Ｈｚ）

【００３３】次に、このようにして得られた前記６‐Ｏ
‐トシル‐β‐シクロデキストリン１．２７ｇ（０．９
８５ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）２
０ｍｌに溶解したのち、これに水素化ホウ素ナトリウム
（ＮａＢＨ_４）３８４ｍｇ（１０．２ｍｍｏｌ）を加
え、５０℃で１２時間反応させた。次いで、この反応液
に水１０００ｍｌを加え、ＯＤＳカラムクロマトグラフ
ィー処理してＤＭＳＯを除去した後、エタノール水混合
液（容量比１：９）で溶出した目的画分を濃縮して、メ
タノール再結晶することにより、６‐デオキシ‐β‐シ
クロデキストリン８３９．６ｍｇ（０．７５０ｍｍｏ
ｌ、収率７６．１％）が得られた。

【００３４】このものの物性は次のとおりである。 融点（℃）：２８０．０〜２８１．０（分解） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３３７０，２９２
０，１１５２，１０８０，１０２０

【００３５】核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐ
ｐｍ（ＤＭＳＯ‐ｄ_６）：１．２０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝
６．１Ｈｚ），２．８０〜４．０５（ｍ），４．８４
（７Ｈ，ｂｒ．ｓ）

【００３６】 （２）６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオースの製造 前記（１）で得た６‐デオキシ‐β‐シクロデキストリ
ン１５ｇを１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）
１．０ｌ中にかきまぜながら投入し、完全に溶解した。
これに、シクロデキストリナーゼ２４単位を加え、４０
℃で４８時間かきまぜながら反応を行った。反応終了
後、反応液に塩酸を加えｐＨを約２．０にすることによ
り反応を停止させたのち、水酸化ナトリウム溶液を加え
て中和し、次いで、これをＯＤＳカラムに通液して、未
反応の６‐デオキシ‐β‐シクロデキストリンを吸着さ
せ、通液画分を得た。この操作を繰り返して、合計６３
ｇの６‐デオキシ‐β‐シクロデキストリンを処理し
た。この通液画分を１／１０の液量の１００ｍＭ酢酸緩
衝液（ｐＨ４．５）と混合したのち、さらに１００ｍＭ
酢酸によりｐＨを４．５に調整した。次いで、これにグ
ルコアミラーゼ２５００単位を添加して４０℃で８時間
酵素反応を行わせたのち、この反応液に塩酸を添加して
ｐＨを約２．０にすることにより反応を停止させ、次い
で水酸化ナトリウム溶液を加えて中和した。次に、この
液を活性炭カラムに通液したのち、０〜３５％のエタノ
ールグラジエントにより６‐デオキシマルトオリゴ糖を
溶出させ、この内約２１％のエタノール溶出画分を凍結
乾燥して、純度約９８％の６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルト
トリオース約１．１ｇを得た。

【００３７】このものの物性は次のとおりである。 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４００，２９５
０，１６９０，１１４６，１０４２

【００３８】高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）
製ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍ
ＩＤ×２５０ｍｍ），ＲＩ検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／２（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔ_Ｒ＝５．９ｍｉｎ

【００３９】核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐ
ｐｍ（Ｄ_２Ｏ）：１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈ
ｚ），３．１７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），３．２
９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），３．５０〜４．０５
（ｍ），４．６５（ｃａ．０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈ
ｚ），５．３５（ｃａ．０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈ
ｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），５．３
６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ）

【００４０】参考例２ ６^４‐デオキシ‐Ｄ‐マルトテ
トラオースの製造 参考例１の（２）において、エタノールグラジエントに
よる約２３％エタノール溶出画分を採取した以外は、参
考例１と同様に操作を行い、純度９９．５％の６^４‐デ
オキシ‐Ｄ‐マルトテトラオース約２．４ｇを得た。

【００４１】このものの物性は次のとおりである。 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４２０，２９３
０，１６３６，１４１０，１３６６，１１４８，１０７
８，１０３８

【００４２】高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）
製ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍ
ＩＤ×２５０ｍｍ），ＲＩ検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／２（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔ_Ｒ＝７．２ｍｉｎ

【００４３】核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐ
ｐｍ（Ｄ_２Ｏ）：１．２７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈ
ｚ），３．１４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），３．２
６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），３．５０〜４．１０
（ｍ），４．６３（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），
５．２２（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．２５
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），５．３３（２Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１．５Ｈｚ）

【００４４】参考例３ ６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペ
ンタオースの製造 参考例１の（２）において、エタノールグラジエントに
よる約２５％エタノール溶出画分を採取した以外は、参
考例１と同様に操作を行い、純度９８％の６^５‐デオキ
シ‐Ｄ‐マルトペンタオース約２．５ｇを得た。

【００４５】このものの物性は次のとおりである。 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４２０，２９２
５，１６２８，１４１２，１３６８，１１５０，１０８
０，１０４０

【００４６】高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）
製ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍ
ＩＤ×２５０ｍｍ），ＲＩ検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／２（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔ_Ｒ＝８．７ｍｉｎ

【００４７】核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐ
ｐｍ（Ｄ_２Ｏ）：１．２７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈ
ｚ），３．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），３．２
９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），３．５０〜４．１０
（ｍ），４．６５（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，α
‐Ｈ），５．２３（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，β
‐Ｈ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．
３５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ）

【００４８】参考例４ ６^６‐デオキシ‐Ｄ‐マルトヘ
キサオースの製造 参考例１の（２）において、エタノールグラジエントに
よる約２７％エタノール溶出画分を採取した以外は、参
考例１と同様に操作を行い、純度９７％の６^６‐デオキ
シ‐Ｄ‐マルトヘキサオース約２．２ｇを得た。

【００４９】このものの物性は次のとおりである。 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４００，２９３
０，１６４０，１４１２，１３６０，１１５０，１０７
８，１０３６

【００５０】高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）
製ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍ
ＩＤ×２５０ｍｍ），ＲＩ検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／２（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔ_Ｒ＝１０．１ｍｉｎ

【００５１】核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐ
ｐｍ（Ｄ_２Ｏ）：１．２７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈ
ｚ），３．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），３．２
８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），３．４５〜４．１５
（ｍ），４．６５（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，α
‐Ｈ），５．２２（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，β
‐Ｈ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），５．
３５（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）

【００５２】参考例５ ６^７‐デオキシ‐Ｄ‐マルトヘ
プタオースの製造 参考例１の（２）において、エタノールグラジエントに
よる約２９％エタノール溶出画分を採取した以外は、参
考例１と同様に操作を行い、純度９９．５％の６^７‐デ
オキシ‐Ｄ‐マルトヘプタオース約２．７ｇを得た。

【００５３】このものの物性は次のとおりである。 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４２０，２９３
０，１６２８，１４１２，１３６４，１１５０，１０７
８，１０２２

【００５４】高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）
製ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍ
ＩＤ×２５０ｍｍ），ＲＩ検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／２（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔ_Ｒ＝１２．１ｍｉｎ

【００５５】核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐ
ｐｍ（Ｄ_２Ｏ）：１．２５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈ
ｚ），３．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），３．２
７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），３．４５〜４．１０
（ｍ），４．６４（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，α
‐Ｈ），５．２０（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，β
‐Ｈ），５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），５．
３５（５Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ）

【００５６】 参考例６ ６^２‐デオキシ‐Ｄ‐マルトースの製造 参考例１の（２）において、エタノールグラジエントに
よる約１９％エタノール溶出画分を採取した以外は、参
考例１と同様に操作を行い、純度９８．５％の６^２‐デ
オキシ‐Ｄ‐マルトース約１．５ｇを得た。

【００５７】このものの物性は次のとおりである。 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４２２，２９３
０，１６３０，１１５０，１０５０

【００５８】高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）
製ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍ
ＩＤ×２５０ｍｍ），ＲＩ検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／２（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔ_Ｒ＝４．７ｍｉｎ

【００５９】核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐ
ｐｍ（Ｄ_２Ｏ）：１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈ
ｚ），３．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），３．２
８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），３．５０〜４．００
（ｍ），４．６５（ｃａ．０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈ
ｚ），５．２２（ｃａ．０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈ
ｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ）

【００６０】参考例７ シクロデキストリナーゼの調製 １％（ｗ／ｖ）β‐シクロデキストリン、１％（ｗ／
ｖ）ペプトン、０．５％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ及び０．１
％（ｗ／ｖ）イーストエキスから成る液体培地（水道水
使用、ｐＨ７．０）１００ｍｌを５００ｍｌ容坂口フラ
スコに入れ、１２０℃で２０分間、殺菌処理を行った。
これに、バチルス・スフェリカスＥ‐２４４（ＦＥＲＭ
ＢＰ‐２４５８）の保存スラントより１白金耳接種
し、３０℃で１日間振とう培養した。この培養液５０ｍ
ｌを、前記と同様の培地組成と殺菌条件により調製した
２０００ｍｌの培地を含有する３０００ｍｌ容ミニジャ
ーに接種して３０℃、１ｖｖｍ、３５０ｒｐｍの条件で
２日間通気かくはん培養を行い、培養終了後、この培養
液から８０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離処理により
菌体を分離し、２％（ｗ／ｖ）トリトンＸ‐１００を含
有する１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）５００ｍｌ
に菌体を懸濁して２５℃で１日間かきまぜた。該懸濁液
から１２０００ｒｐｍで２０分間の遠心分離処理により
菌体残留分を除去したのち、上清液を１０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）に対して１６時間透析した。得られ
た透析物を１２０００ｒｐｍで２０分間遠心分離処理し
て不溶物を除去し、上清を粗酵素液（１）とした。

【００６１】次いで、この粗酵素液（１）約５００ｍｌ
（総活性２００単位、タンパク量２０８３ｍｇ、比活性
０．１、ｐＨ７．０）を１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）で平衡化したＤＥＡＥセファロース充填カラム
（φ３４×１７０ｍｍ）に供し、酵素を吸着させたの
ち、０〜１．５ＭＮａＣｌのグラジエント勾配により溶
出を行った。このようにして得られた活性フラクション
を集めて粗酵素液（２）１０５ｍｌ（総活性１４５単
位、比活性０．５８、収率７２．５％）を得た。

【００６２】続いて、この粗酵素液（２）２０ｍｌ（総
活性３１単位、タンパク量２９ｍｇ）を１Ｍ硫酸ナトリ
ウム含有１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で平衡
化したエーテル５ＰＷ充填カラム（φ２１．５×１５０
ｍｍ）に供し、酵素を吸着させたのち、１Ｍ〜０Ｍ硫酸
ナトリウムのグラジエント勾配により溶出を行った。こ
のようにして得られた活性フラクションを集めて粗酵素
液（３）５０ｍｌ（総活性７２単位、比活性２．９３、
収率３６％）を得た。

【００６３】 試験例１ 試験管内α‐アミラーゼ阻害作用 （１） 基質液の調製 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド（Ｍ_Ｗ９８３）を酵素反応液中の濃度が
２．０ｍＭになるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ
‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）に溶解した。この濃度は後記α‐アミラーゼ反
応時において、ヒト膵液α‐アミラーゼ（以下、ヒトＰ
型α‐アミラーゼという）及びヒト唾液α‐アミラーゼ
（以下、ヒトＳ型α‐アミラーゼという）に対して、そ
れぞれＫｍ値の５倍に相当するため、最大反応速度に達
するには十分な基質量である。

【００６４】（２） 共役酵素液の調製 酵母由来の市販α‐グルコシダーゼ及びアーモンド由来
のβ‐グルコシダーゼを反応中の濃度が、それぞれ１１
７Ｕ／ｍｌ、１３Ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ
‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に混合して溶解した。な
お、これら市販のα‐及びβ‐グルコシダーゼは東洋紡
績（株）製を使用した。

【００６５】 （３） ヒトα‐アミラーゼ液の調製 市販のヒトＰ型α‐アミラーゼ及びヒトＳ型α‐アミラ
ーゼ（表において、各々ＨＰＡ、ＨＳＡと示す）に５０
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、１５０Ｕ／ｌ
の濃度になるように溶解してヒトα‐アミラーゼ液とし
た。

【００６６】なお、この市販のヒトα‐アミラーゼは国
際試薬（株）製キャリブザイム・ＡＭＹを使用した。ま
た、α‐アミラーゼの活性は、３７℃、１分間に１μｍ
ｏｌの２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド（市販品）を分解する酵素量を１単位
（Ｕ）として定義した。

【００６７】（４） マウス膵液の調製 市販の体重１３．２〜１５．８ｇのＩＣＲ−ＣＲＪ：Ｃ
Ｄ−１マウス［雄、３週令、日本チャールス・リバー
（株）販売］７匹分の膵臓を摘出し、５０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７．０）を加えてホモジナイズ後、１００，
０００×ｇ、１時間の遠心分離を行い、上澄液を得た。
該上澄液の活性を２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β
‐Ｄ‐マルトペンタオシド（市販品）を基質として測定
し、この活性が１５０Ｕ／ｌの濃度になるように５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて希釈し、マウス
膵液とした。

【００６８】なお、このマウス膵液の酵素活性は、α‐
アミラーゼ（表において、ＭＰＡと示す）活性を意味す
る。

【００６９】（５） 阻害液の調製 前記の参考例により得られた各種６‐デオキシマルトオ
リゴ糖［表において、前記一般式（Ｉ）のｎ＝１〜５の
化合物をＤＯＧ３〜ＤＯＧ７と示す］及び６^２‐デオキ
シ‐Ｄ‐マルトース（表において、ＤＯＧ２と示す）が
それぞれ７、１４ｍＭの濃度になるように５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）を用いて阻害液を調製した。な
お、各種阻害剤の阻害作用測定時の濃度（最終濃度）は
表１記載のものとなる。

【００７０】（６） 阻害液中のヒトα‐アミラーゼ阻
害作用及びマウス膵液阻害作用の測定 ２５０μｌのヒトＰ型α‐アミラーゼ、ヒトＳ型α‐ア
ミラーゼ又はマウス膵液に共役酵素液１．０ｍｌを加え
てかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、基質液２．
０ｍｌ及び阻害液２５０μｌを加えてかきまぜ、３７℃
で２分間加温したのち、２分間の４００ｎｍにおける吸
光度の変化量を測定した。

【００７１】ブランクとして、阻害液の代わりに５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を用いた。

【００７２】そして、α‐アミラーゼ阻害率（％）は、
ブランクの吸光度変化量をＡｏ、阻害剤添加時の吸光度
変化量をＡｉとして、［１−（Ａｉ／Ａｏ）］×１００
で算出した。その結果を表１及び表２に示す。

【００７３】

【表１】

【００７４】

【表２】

【００７５】表１及び表２より、本発明の６‐デオキシ
マルトオリゴ糖がヒトα‐アミラーゼ、特にヒトＰ型α
‐アミラーゼ及びマウス膵液酵素活性に対する強い阻害
作用を有すること、また、ヒトＰ型α‐アミラーゼに対
しては、６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース（ＤＯ
Ｇ３）〜６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオース（Ｄ
ＯＧ５）が殊に強い阻害作用を示すのに対し、６^２‐デ
オキシ‐Ｄ‐マルトース（ＤＯＧ２）は阻害作用を全く
示さないことがわかる。

【００７６】 試験例２ α‐アミラーゼ阻害剤の体重増加抑制作用 （１） 使用動物 市販の体重１１．６〜１６．６ｇのＩＣＲ‐ＣＲＪ：Ｃ
Ｄ‐１マウス雄及び雌［３週令、日本チャールス・リバ
ー（株）販売］

【００７７】（２） 実験方法 投与群は、３週令マウス雄、雌各１０匹ずつを、一般固
形飼料（ＭＦ）（炭水化物含量４２〜４５％）［オリエ
ンタル酵母工業（株）製］で５日間飼育し、α‐アミラ
ーゼ阻害剤を蒸留水に溶かして、１日当たり２ｍｇ（α
‐アミラーゼ阻害剤量）／マウス投与した。投与法は自
由経口摂取とした。対照群は、α‐アミラーゼ阻害剤を
投与しない以外は、前記と同様に飼育した。投与群及び
対照群の体重、飼料の摂取量、糞量及び乾燥糞量を測定
し、α‐アミラーゼ阻害剤として６^３‐デオキシ‐Ｄ‐
マルトトリオース（ＤＯＧ３）を投与したときの結果を
表３に、６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオース（Ｄ
ＯＧ５）を投与したときの結果を表４に示す。なお、体
重増加抑制効果は、投与日数５日における「体重増加量
（ｇ）」のｔ‐検定により判定した。

【００７８】

【表３】

【００７９】

【表４】

【００８０】表３及び表４から、本発明（投与群）に用
いられた６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース及び６
^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオースは、飼料摂取量
の減少及び下痢（糞量、乾燥糞量及び観察から判断）が
認められないにもかかわらず、対照群に比し、体重増加
を顕著に抑制していること、すなわち、肥満症の予防又
は治療剤として有効であることがわかる。

【００８１】なお、投与群は、乾燥糞量が対照群に比し
増加していることから、α‐アミラーゼ阻害作用によっ
て消化が抑制されていることもわかる。

【００８２】 試験例３ α‐アミラーゼ阻害剤の抗糖尿作用 （１）使用動物 市販の体重３２．０〜３５．２ｇの遺伝性肥満糖尿病マ
ウス［ＹｅｌｌｏｗＫＫ マウス、雄、１０週令、日本
クレア（株）販売］

【００８３】（２）実験方法 投与群は、あらかじめ２０時間絶食させたマウス５匹
に、α‐アミラーゼ阻害剤及び糖質としてのコーンスタ
ーチを蒸留水で液状にして、それぞれ０．１ｇ（α‐ア
ミラーゼ阻害剤量）／体重１ｋｇ及び１ｇ（コーンスタ
ーチ量）／体重１ｋｇとなるように経口投与して強制摂
取させた。対照群は、α‐アミラーゼ阻害剤を投与しな
い以外は、前記と同様にした。

【００８４】そして、摂取前及び摂取後３０分のマウス
の眼窩静脈叢より採血を行い、血中グルコース量を測定
し、コーンスターチ摂取後の血糖値上昇に対する抑制効
果すなわち抗糖尿作用を検討した。α‐アミラーゼ阻害
剤として６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース（ＤＯ
Ｇ３）を投与したときの結果を表５に、６^５‐デオキシ
‐Ｄ‐マルトペンタオース（ＤＯＧ５）を投与したとき
の結果を表６に示す。

【００８５】なお、各表中の抑制率（％）は、対照群の
血糖上昇値をＡ、投与群のそれをＢとして、［１−（Ｂ
／Ａ）］×１００により算出したものである。また、血
中グルコース量（ｍｇ／ｄｌ）はグルコースオキシダー
ゼ法により定量し、平均値±標準偏差で示した。

【００８６】

【表５】

【００８７】

【表６】

【００８８】表５及び表６から、本発明（投与群）に用
いられた６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース及び６
^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオースは、対照群に比
し、顕著に抑制していること、すなわち、糖尿病の予防
又は治療剤として有効であることが分る。

【００８９】次に、本発明に用いられる前記一般式
（Ｉ）の化合物の急性毒性につき試験した結果を試験例
４として示す。

【００９０】試験例４ 急性毒性試験 （１） 使用動物 市販の体重２９〜３２ｇのＩＣＲ‐ＣＲＪ：ＣＤ‐１マ
ウス雄及び雌［５週令、日本チャールス・リバー（株）
販売］

【００９１】（２） 実験方法 「改正 医薬品毒性試験法ガイドライン ＧＬＰ基準」
厚生省（平成元年９月）により、単回投与毒性試験を行
った。

【００９２】すなわち、６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトト
リオース及び６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオース
を生理食塩水１ｍｌ当たり１００ｍｇずつ溶解し、５匹
の５週令のＩＣＲ‐ＣＲＪ：ＣＤ‐１マウス（雌性２９
〜３２ｇ）に、体重２５ｇ当り０．５ｍｌ（２．０ｇ／
ｋｇ）の割合で経口投与し、７日間観察した。

【００９３】この極端に大量の投与でも死亡動物はな
く、下痢、便秘などの異常も観察されなかった。また７
日目の剖検においても、組織、臓器の顕微鏡的異常は何
ら観察されず、これらのことから毒性は極めて低いと判
断された。

【００９４】また６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオー
ス及び６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオースを生理
食塩水１ｍｌ当たり１００ｍｇずつ溶解し、これを体重
２５ｇ当り０．２５ｍｌ（１．０ｇ／ｋｇ）の割合で腹
腔内に注射し、７日間経過を観察したが、異常は何ら認
められなかった。

【００９５】以上の試験結果から、前記一般式（Ｉ）の
６‐デオキシマルトオリゴ糖はα‐アミラーゼ阻害作用
が強く、強力なα‐アミラーゼ阻害剤として、そして過
血糖症、例えば肥満症、糖尿病などの予防又は治療剤と
して有用であることが認められる。

【００９６】実施例１ 凍結乾燥粉末製剤 ６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース２５０ｇを１０
００ｍｌの生理食塩水に溶解したのち、メンブランフィ
ルターを用い無菌的にろ過を行い、得たろ液を滅菌した
ガラス容器に１０ｍｌずつ充填し、これを密栓して常法
により凍結乾燥して、凍結乾燥粉末製剤とした。

【００９７】実施例２ 経口用錠剤 （１）６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース ２５０ｇ （２）マンニット ２００ｇ （３）ばれいしょデンプン ４７ｇ （４）ステアリン酸マグネシウム ３ｇ （１）と（２）を混合し、これに（３）を１０％デンプ
ン糊として加えて粒状化し、これをＮｏ．６０メッシュ
（Ｂ．Ｓ．）のふるいを通し、さらにＮｏ．１６メッシ
ュ（Ｂ．Ｓ．）のふるいで選別し、この粒子を（４）と
混合したのち、打錠機で直径１０ｍｍ、１錠当りの重量
が５００ｍｇの錠剤とした。

【００９８】実施例３ 経口用錠剤 （１）６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオース ２５０ｇ （２）マンニット ２００ｇ （３）ばれいしょデンプン ４７ｇ （４）ステアリン酸マグネシウム ３ｇ （１）と（２）を混合し、これに（３）を１０％デンプ
ン糊として加えて粒状化し、これをＮｏ．６０メッシュ
（Ｂ．Ｓ．）のふるいを通し、さらにＮｏ．１６メッシ
ュ（Ｂ．Ｓ．）のふるいで選別し、この粒子を（４）と
混合したのち、打錠機で直径１０ｍｍ、１錠当りの重量
が５００ｍｇの錠剤とした。

【００９９】実施例４ カプセル剤 ６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース１００ｇ又は６
^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオース１００ｇ、ばれ
いしょデンプン５０ｇ、乳糖５０ｇ及び結晶セルロース
１０ｇをよく混和して、カプセルに充填し、１カプセル
中に有効成分２００ｍｇを含有するカプセル剤とした。

【０１００】実施例５ 内用液剤 ６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース２０ｇ又は６^５
‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオース２０ｇに５％安息
香酸（４５ｖ／ｖエタノール）１ｍｌ及び精製水を加え
て全量を１００ｍｌとし、内用液剤とした。

【０１０１】実施例６ 注射剤 滅菌した６^３‐デオキシ‐Ｄ‐マルトトリオース５ｇ又
は６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルトペンタオース５ｇを注射
用蒸留水に溶解して全量を３００ｍｌとし、１アンプル
に３．０ｍｌの割合で無菌的に封入し、注射剤とした。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中のｎは１〜５の整数である）で表わされる６‐デ
   オキシマルトオリゴ糖を有効成分とするα‐アミラーゼ
   阻害剤。
2. 【請求項２】 一般式 【化２】 （式中のｎは１〜５の整数である）で表わされる６‐デ
   オキシマルトオリゴ糖を有効成分とする過血糖症の予防
   又は治療剤。
3. 【請求項３】 過血糖症が肥満症又は糖尿病である請求
   項２記載の予防又は治療剤。