JPH06510986A - Inhibitor of picornavirus protease - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】 ピコルナウィルスプロテアーゼのインヒビター１五光■ 本発明は、ウィルス学およびプロテアーゼの分野に関する。[Detailed description of the invention] Picornavirus protease inhibitor 1 Gokou■ The present invention relates to the fields of virology and proteases.

より特定すると、本発明は、ピコルナウィルスプロテアーゼ酵素のインヒビター として有用である低分子化合物、およびウィルス疾患の治療におけるそれらの使 用に関する。More particularly, the invention provides inhibitors of picornavirus protease enzymes. small molecule compounds that are useful as agents and their use in the treatment of viral diseases. Concerning business.

ｌ胛旦背ｌ ピコルナウィルスは、非常に小型の、ＲＮＡ含有ウィルスであり、ヒトを含む広 い範囲の動物に感染する。ピコルナウィルス科は、とりわけ、ヒトポリオウィル ス、ヒトコクサソキーウイルス、ヒトエコーウィルス、ヒトおよびウシエンテロ ウィルス、リノウィルス、編心筋炎ウィルス、***ウィルス（ＦＭＤＶ）、お よびＡ型肝炎ウィルス（ＨＡＹ）を包含する。l The back of victory l Picornaviruses are very small, RNA-containing viruses that are widespread, including humans. Infects a wide range of animals. The Picornaviridae family includes, among others, the human poliovirus human coxavirus, human echovirus, human and bovine enterovirus virus, rhinovirus, myocarditis virus, foot-and-mouth disease virus (FMDV), and hepatitis A virus (HAY).

ピコルナウィルスは、ヒトに感染する酸に安定なウィルスである。このウィルス は、経口感染により入り込み、胃腸管内で増殖し、そして神経系に侵入する。ポ リオウィルスは、中枢神経系に達するまで神経繊維に沿って広がり得、その結果 、ポリオウィルスは、運動神経、を髄、および脳幹を攻撃する。感染が進行する と、麻痺を生じ得る。重症の感染は西洋世界では稀であるが、おりに触れてなお 生じる場合がある。Picornaviruses are acid-stable viruses that infect humans. this virus enters through oral infection, multiplies in the gastrointestinal tract, and invades the nervous system. Po Riovirus can spread along nerve fibers until it reaches the central nervous system, resulting in The poliovirus attacks the motor nerves, spinal cord, and brain stem. infection progresses and can cause paralysis. Severe infections are rare in the Western world, but if you come into contact with the cage, may occur.

時期療法のみが現在用いられている。Only seasonal therapy is currently used.

コクサオキーウィルスおよびエコーウィルスは、種々の種類の疾患を引き起こす エンテロウィルスと関連があり、この疾患は、水庖性口峡炎、胸膜痛、無菌性髄 膜炎、心筋障害、急性出血性結膜炎、および急性下痢を包含する。無菌性髄膜炎 および心筋障害は、特に重病であり、致命的であり得る。coxaochivirus and echovirus cause different types of diseases Associated with enteroviruses, the disease causes phlegmonitis, pleurisy, and aseptic pulp. including inflammation, myocardial damage, acute hemorrhagic conjunctivitis, and acute diarrhea. aseptic meningitis and myocardial damage are particularly serious and can be fatal.

リノウィルスは、一般の風邪の最も重要な病因因子であり、はとんど全てのヒト に、その生涯のある時点で感染する。現在、承認された治療法はない。Rhinoviruses are the most important etiological agents of the common cold and cause almost all human infections. become infected at some point during their life. There are currently no approved treatments.

ＨＡＹは、感染性肝炎の高度な伝染性を有する病因である。これはまれに慢性肝 炎をもたらすことがあるが、現在ワクチンまたは有効な治療法はない。HAY is a highly contagious cause of infectious hepatitis. This is rarely a chronic liver disease. It can cause inflammation, but there is currently no vaccine or effective treatment.

ＦＭＤＶは、家畜に影響する最も重大な１つの病原であるとみなされており、従 って市販される重要なウィルスである。これは高度な伝染性を有し、７０％程度 の高割合で致死に達し得る。米国におけるウィルスの規制では、一般に、全ての 感染動物を殺すか、またはワクチン注射して、全ての動物に３０日間徴候が現れ ないまで隔離することを指示している。この疾患は、接触によりヒトにうつり得 る。FMDV is considered to be one of the most important pathogens affecting livestock, and It is an important virus that is commercially available. It is highly contagious, around 70% A high percentage of cases can be fatal. Virus regulations in the United States generally require all Infected animals are killed or vaccinated and all animals show signs for 30 days. They have been instructed to isolate themselves until they are released. This disease can be transmitted to humans through contact. Ru.

感染の治療は、一般に、感染させる生物がその宿主とは別の代謝系を用いるとい う前提に依存する。従って、抗生物質は、バクテリウム属のライフサイクルのあ る局面を、特異的に（または選択的に）阻害するかまたは破壊するので、バクテ リアの感染と対抗させるために用いられる。バクテリアの酵素が真核生物（例え ば、ヒト）の酵素と構造的に異なるという事実により、原核生物の対となる一方 における好ましくない結果を生じることなく、バクテリアの酵素を不活性化させ るか、またはその能力を弱める化合物を発見することを可能にする。しかし、ウ ィルスは、大部分、在来の宿主酵素および代謝に依存する：従って、ウィルスが 宿主と顕著に異なる少数の標的に存在するために、ウィルス感染を治療すること は困難である。結果として、少数の抗ウィルス剤のみが現在使用可能であり、は とんどは重大な副作用を有する。Treatment of infections generally involves the infecting organism using a different metabolic system than its host. It depends on the assumptions. Therefore, antibiotics can be used to treat any part of the life cycle of Bacterium spp. Bacteria specifically (or selectively) inhibit or destroy aspects of It is used to fight against Leah's infection. Bacterial enzymes are eukaryotic (e.g. The fact that it is structurally different from enzymes found in humans, for example, inactivates bacterial enzymes without any undesirable consequences. make it possible to discover compounds that increase or weaken that ability. However, Viruses are largely dependent on native host enzymes and metabolism; therefore, viruses To treat viral infections due to their presence in a small number of targets that are significantly different from the host It is difficult. As a result, only a small number of antiviral agents are currently available, and Most have serious side effects.

現在の抗ウィルス剤は（例えば、アンクロビルおよびガンシクロビル）、ウィル スポリメラーゼを標的する。これらの薬剤は、核酸類似体であり、そしてウィル スポリメラーゼが真核生物ポリメラーゼより識別力に劣るという事実に依存して いる：この薬剤はポリメラーゼにより複製するウィルスＤＮＡ中に取り込まれ、 次いで付加塩基を結合し得ない。よって、ウィルス複製は不完全であり、無効で ある。しかし、これらの薬剤は重大な副作用を有しており、現在はＡＩＤＳおよ びＡＩＤＳ関連感染（例えば、免疫無防備状態の患者でのサイトメガロウィルス 感染）の治療にのみ用いられている。Current antivirals (e.g., anclovir and ganciclovir) Targets polymerase. These drugs are nucleic acid analogs and Relying on the fact that polymerases are less discriminatory than eukaryotic polymerases Yes: This drug is incorporated into the replicating viral DNA by a polymerase, Additional bases cannot then be attached. Therefore, virus replication is incomplete and ineffective. be. However, these drugs have serious side effects and are currently being used to treat AIDS and AIDS. and AIDS-related infections (e.g., cytomegalovirus in immunocompromised patients). It is used only to treat infections.

他の方法では、ウィルスが宿主細胞に侵入する手段をブロックする。ウィルスは 、典型的には、特定の細胞表面レセプターに結合し、宿主によるレセプターの内 在化または宿主との膜融合のいずれかにより、細胞に侵入する。従って、理論上 では、侵入に用いられるレセプターをブロックすることにより、ウィルスの侵入 （および従って複製および感染）を妨害し得る。このアプローチの例には、ＨＩ Ｍの侵入を阻害する可溶性ＣＤ４の使用がある。しかし、大多数のレセプターの ために、ウィルスにより用いられる全てのレセプターをブロックすることは困難 である。たとえ成功したとしても、このようなレセプターを阻害することにより 、レセプターの正常な機能を損なうために、別の不利な影響が生じ得る。Other methods block the means by which the virus enters the host cell. The virus is , typically binds to specific cell surface receptors and induces internalization of the receptor by the host. invade cells either by localization or membrane fusion with the host. Therefore, theoretically By blocking the receptors used for virus invasion, (and thus replication and infection). Examples of this approach include HI There is the use of soluble CD4 to inhibit the entry of M. However, the majority of receptors Therefore, it is difficult to block all receptors used by viruses. It is. Even if successful, blocking such receptors , other adverse effects may occur due to impairing the normal function of the receptor.

別の方法は、あるウィルスに特有なタンパク質発現系に依存する。あるウィルス では、完全なウィルスゲノムを１つの長い「ポリタンパク質」として発現し、次 いで構造ウィルスタンパク質および非構造ウィルスタンパク質に開裂する。この 開裂は、特異的なウィルスプロテアーゼまたは内在性宿主細胞プロテアーゼ、ま たはこの２つの組合せにより達成され得る。ウィルスプロテアーゼは、特定の１ 次構造（およびことによると２次構造）の形をとらねばならない、非常に特異的 な開裂部位を必要とし得る。従って、ウィルスプロテアーゼの開裂／認識部位に 擬似の化合物を設計することが可能であり得る。この化合物はこのプロテアーゼ を阻害し、ウィルス複製サイクルを妨害する。Ｍｏｌｌｉｎｇらのヨーロッパ特 許第３７３．５７６号は、旧Ｖプロテアーゼに対する認識部位に擬似するペプチ ド開示している。このペプチドは、ただ１つの非共通アミノ酸（５−オキソプロ リン）を含み、従っておそらく競合結合により作用する。Another method relies on protein expression systems specific to certain viruses. a certain virus The complete viral genome is expressed as one long "polyprotein" and then cleaved into structural and nonstructural viral proteins. this Cleavage is performed by specific viral proteases or endogenous host cell proteases, or or a combination of the two. Viral protease is a specific a very specific form that must take the form of a secondary structure (and possibly a secondary structure) cleavage sites may be required. Therefore, at the cleavage/recognition site of the viral protease. It may be possible to design mimetic compounds. This compound is this protease and disrupt the viral replication cycle. The European special of Molling et al. No. 373.576 is a peptide that mimics the recognition site for old V protease. is disclosed. This peptide contains only one uncommon amino acid (5-oxopropropylene). phosphorus) and therefore probably act by competitive binding.

ペプチド内でプロテアーゼ認識部位を取り囲む残基は、通常、以下のように示さ れる： 、、、Ｐａ−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ＋−Ｐ＋−Ｐａｏ−Ｐ３°−１，。The residues surrounding the protease recognition site within a peptide are typically designated as: Will be: ,,,Pa-P3-P2-P+-P+-Pao-P3°-1,.

ここで、開裂はＰＩとＰ＋°との間で起こる。低特異性を有するプロチアーゼは 、Ｐ＋位およびＰ１°位の残基の正体によってのみ強制され得、より除去された 残基に関わらず、そのジペプチドを含有する全てのポリペプチドを開裂する。し かし、はとんどの特異性プロテアーゼは、少なくとも残基Ｐａ−Ｐ４’のい（っ かが特定のアミノ酸（または特定のアミノ酸の小セット）に限定されることが必 要である。ピコルナウィルスシスティンプロテアーゼは、通常、Ｐ１位置にＧｉ ｎを必要とする。Here, cleavage occurs between PI and P+°. Proteases with low specificity are , can be forced only by the identity of the residues in the P+ and P1° positions, and are more removed Cleavage all polypeptides containing that dipeptide, regardless of residue. death However, most specific proteases contain at least the residues Pa-P4'. need to be limited to specific amino acids (or a small set of specific amino acids). It is essential. Picornavirus cysteine proteases usually have a Gi at the P1 position. Requires n.

プロテアーゼインヒビターの一般形は、阻害されるプロテアーゼへの結合を誘導 するのに充分なポリペプチド配列を含むが、ｈ−Ｐｘ’部分に対して電子アンカ リング基（ａｎｃｈｏｒｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ）を置換する。プロテアーゼによる 認識に際し、アンカー基は、活性部位中の必須残基（例えば、活性部位求核試薬 ）に結合し、さらなるタンパク質分解活性を阻害する。しかし、ＧｌｕまたはＧ ｌｎで終わるペプチドプロテアーゼインヒビターを調製することは、これらの残 基が、環状化し、アンカリング部分の濃度を低下させる（このことはプロテアー ゼへの結合を顕著に減少させる）傾向を有するので、困難である。Generic forms of protease inhibitors induce binding to inhibited proteases contains sufficient polypeptide sequence to Substitute the anchoring group. by protease Upon recognition, the anchor group is attached to an essential residue in the active site (e.g., active site nucleophile ) and inhibit further proteolytic activity. However, Glu or G Preparing peptide protease inhibitors ending in ln eliminates these residues. group cyclizes and reduces the concentration of anchoring moieties (this This is difficult because it tends to significantly reduce binding to enzymes.

ｌ丑旦皿示 本発明は、ピコルナウィルス科（例えば、Ａ型肝炎ウィルス、リノウイルス、コ クサノキーウイルスなど）による感染の治療に有用である、特定のクラスの７ス テインプロテアーゼインヒビターに関する。Ｐ＋　Ｇｌｎ残基が、側鎖カルボニ ル基を保持するＧｌｎ類似体で、プロテアーゼ結合活性を保持したまま置換され 得ることが分かった。本発明のインヒビターは、式Ｉの化合物である： ここで、Ｒ＋は、−０Ｒ３または−ＮＲｉＲｔであり、ここでＲ３は低級アルキ ル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、またはアリール−低級アルキルであり、モし てＲ４は、Ｈまたは低級アルキルであり、Ｒ２は、Ｈまたは低級アンルであり； Ｘは、−ｃＨＯｌ−ＣＥＥＮ、−ＣＯＣＨ２Ｆ、−ＣＯＣＨ２Ｆ　Ｌ　−Ｃ０Ｃ Ｈ２Ｎ２、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２、または−ＣＯＣＯＲｓ（ここ でＲ５は、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アリール、アリール−低級アル キル、またはアリール−低級アルコキンである）からなる群から選択されるアン カー基であり；そして（ａａ）。は、選択された特定のプロテアーゼにより特異 的に認識される２〜４０個のアミノ酸のポリペプチドである。l Ushitan plate The present invention relates to the Picornaviridae family (e.g., hepatitis A virus, rhinovirus, colivirus). A specific class of 7-spinal strains that are useful in treating infections caused by Relating to tein protease inhibitors. P+ Gln residue is a side chain carbonyl Gln analogues that retain the Gln group and are substituted while retaining protease binding activity. I found out that I can get it. Inhibitors of the invention are compounds of formula I: Here, R+ is -0R3 or -NRiRt, where R3 is lower alkyl aryl, hydroxy, lower alkoxy, or aryl-lower alkyl; R4 is H or lower alkyl, R2 is H or lower anru; X is -cHOl-CEEN, -COCH2F, -COCH2F L -C0C H2N2, -CH=N-NH-C(=S)NH2, or -COCORs (here and R5 is lower alkyl, lower alkoxy, lower aryl, aryl-lower alkyl, or aryl-lower alkokene). and (aa). is specific to the particular protease selected. It is a polypeptide of 2 to 40 amino acids that is recognized by humans.

本発明の他の局面は、有効量の式Ｉの化合物をそれらを必要とする被験体に投与 することにより、ピコルナウィルス感染を治療するための方法である。Another aspect of the invention provides for administering an effective amount of a compound of Formula I to a subject in need thereof. A method for treating picornavirus infections.

本発明の池の局面は、式■の化合物を調製するための方法である。An important aspect of the invention is a method for preparing compounds of formula (1).

（以下余白） 図面の簡単な説明 図１は、イア　ヒヒ９−Ａｃ−ＬＲＴＥ（ＯＭｅ）−ＣＨＯ，ＡＣ−ＴＰＬＳＴ Ｅ（ＯＭｅ）−ＣＨＯおよびＡｃ−ＬＲＴＱ（ＮＭｅ２）−ＣＩ（０に対するイ ンヒビター濃度の関数としての）ＩＡＶ　Ｃ３プロテアーゼの阻害を示すグラフ である。(Margin below) Brief description of the drawing Figure 1 shows Ia Baboon 9-Ac-LRTE (OMe)-CHO, AC-TPLST E(OMe)-CHO and Ac-LRTQ(NMe2)-CI(I Graph showing inhibition of IAV C3 protease (as a function of inhibitor concentration) It is.

λ粧乏尖上土玉Ｂ１ Ａ、定義 本明細書中で用いられる用語「低級アルキル」は、１個〜８個の炭素原子を有す る直鎖および分枝鎖の炭化水素基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプ ロピル、ｎ−ブチル、Ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルな どをいう。λMake-poor-cusp-top clay ball B1 A. Definition As used herein, the term "lower alkyl" has 1 to 8 carbon atoms. straight-chain and branched hydrocarbon groups such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl Lopyl, n-butyl, S-butyl, t-butyl, n-pentyl, n-hexyl, etc. What do you say?

「低級アルコキシＪは、式−ＯＲの基をいい、ここでＲは上記で定義した低級ア ルキルである。　「アリール」は、１４個までの炭素原子を有する芳香族炭化水 素、好ましくはフェニルまたはナフチルをいう。　「アリール低級アルキル」は 、Ａｒ−Ｒ−の形の基をいい、ここでＡｒはアリールであり、そしてＲは低級ア ルキルである。"Lower alkoxy J refers to a group of the formula -OR, where R is a lower alkoxy group as defined above. It's Lukiru. "Aryl" is an aromatic hydrocarbon having up to 14 carbon atoms phenyl or naphthyl. “Aryl lower alkyl” is , Ar-R-, where Ar is aryl and R is lower aryl. It's Lukiru.

用語「低級アンル」は、式ＲＣＯ−の基をいい、ここでＲは、Ｈｌ　上記で定義 された低級アルキル、フェニルマタハヘンジルである。代表的な低級アンル基に は、アセチル、プロピオニル、ホルミル、ベンゾイルなどが包含される。The term "lower anru" refers to a group of the formula RCO-, where R is Hl as defined above lower alkyl, phenylmatahahenzil. Typical lower anlu groups includes acetyl, propionyl, formyl, benzoyl, and the like.

用語「ビコルナウイルスンステインプロテアーゼ」は、ピコルナウィルスのゲノ ム内でコードされた酵素をいう。この酵素はその酵素の活性部位内にシスティン 残基を含有している。このピコルナウィルスのシスティンプロテアーゼは、好ま しくほこのウィルスの複製および／または感染性に必須の酵素であり、特にこの ウィルスのポリタンパク質をその構成要素のタンパク質に開裂するプロテアーゼ である。The term "bicornavirus proteinase" refers to the genome of picornaviruses. An enzyme encoded within a system. This enzyme contains a cysteine within the active site of the enzyme. Contains residues. This picornavirus cysteine protease is a preferred It is an essential enzyme for the replication and/or infectivity of Shikuhoko virus, and especially for this virus. protease that cleaves the viral polyprotein into its component proteins It is.

本明細書中で用いられる用語「アンカー」は、プロテアーゼの活性部位中に導入 されたとき、可逆的にまたは非可逆的にプロテアーゼに結合し、そしてこの酵素 のタンパク質分解活性を阻害する基をいう。ここで好適なアンカーには、アルデ ヒド（−ＣＨＯ）、ニトリル（−Ｃ＝Ｎ）、α−ケトエステル（−ＣＯＣＯＲｓ ）、ハローメチルケトン（−ＣＯＣＨ２Ｆ、−Ｃ０ＣＨ２Ｃ１）、ジアゾメチル ケトン（−ＣＯＣＨ２Ｎ２）、およびチオセミカルバゾン（−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ− Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２）が包含される。最も有効なアンカー基は、プロテアーゼか らプロテアーゼで相違し得る。As used herein, the term "anchor" refers to an anchor introduced into the active site of a protease. binds reversibly or irreversibly to the protease when A group that inhibits the proteolytic activity of Suitable anchors include Alde Hydrodes (-CHO), Nitriles (-C=N), α-ketoesters (-COCORs ), halomethylketone (-COCH2F, -C0CH2C1), diazomethyl ketone (-COCH2N2), and thiosemicarbazone (-CH=N-NH- C(=S)-NH2). The most effective anchoring group is protease and proteases may differ.

用語「有効量」は、検知し得る治療効果を示すのに十分な化合物の量をいう。治 療効果には、限定するものではないが、例えば、病原体の復製を阻害すること、 病原体による毒素の放出を阻害することまたは防くこと、病原体を殺すこと、お よび感染の定着を防ぐこと（予防）が包含され得る。被験体に対する正確な有効 量は、被験体の大きさおよび健康状態、病原体の性質、感染の重症度などに依存 する。したがって、前もって正確な有効量を特定することは不可能である。しか し、所定の状況の有効量は、本明細書に提供される情報に基づくルーチンの実験 によって決定され得る。The term "effective amount" refers to an amount of a compound sufficient to exhibit a detectable therapeutic effect. Osamu The therapeutic effects include, but are not limited to, inhibiting the reproduction of pathogens; inhibiting or preventing the release of toxins by pathogens, killing pathogens, and preventing the establishment of infection (prophylaxis). Precise validity for the subject Amount depends on subject size and health, nature of pathogen, severity of infection, etc. do. Therefore, it is not possible to specify in advance the exact effective amount. deer However, the effective amount for a given situation can be determined by routine experimentation based on the information provided herein. can be determined by

用語「薬学的に受容可能な」は、哺乳類に投与され得る、過度な毒性を有［、な い化合物および組成物をいう。代表的な薬学的に受容可能な塩類には、鉱酸塩類 （例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩など）；および有機酸の塩 類（例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩など）が包含さ れる。The term "pharmaceutically acceptable" refers to non-toxic substances that can be administered to mammals. refers to compounds and compositions that are Typical pharmaceutically acceptable salts include mineral acid salts. (e.g., hydrochlorides, hydrobromides, phosphates, sulfates, etc.); and salts of organic acids. (e.g. acetate, propionate, malonate, benzoate, etc.) It will be done.

用語「アミノ酸」は、一般的に、タンパク質およびペプチドの構成要素として通 常見いだされる天然に存在する以下のアミノ酸をいう：Ｌ−アラニン（Ａ）、Ｌ −ンスティン（Ｃ）、Ｌ−アスパラギン酸（Ｄ）、Ｌ−グルタミン酸（Ｅ）、１ ．−フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、Ｉ７−ヒスチジン（Ｉ］）、Ｌ −イソロイシン（１）、Ｌ−リジン（Ｋ）、し−ロイシン（Ｌ）、Ｌ−メチオニ ン（Ｍ）、Ｌ−アスパラギン（Ｎ）、Ｌ−プロリン（Ｐ）、Ｌ−グルタミン（Ｑ ）、し−アルギニン（Ｒ）、Ｌ−セリン（Ｓ）、Ｌ−）レオニン（Ｔ）、Ｌ−バ リン（Ｖ）、Ｌ−トリプトファン（Ｗ）、およびＬ−チロシン（Ｙ）。しかし、 他の類似体化合物は、選択されたプロテアーゼによってインヒビターの認識に逆 の影響を及ぼさない場合には、置換され得る。代表的な類似体には、上記で挙げ られたアミノ酸のＤ−異性体、同族体、例エバ、ノルロインン、フェニルグリシ ン、Ｎ、Ｎ’−ジメチル−Ｄ−アルギニンなどが包含される。好適なアミノ酸は 、通常、天然に存在するアミノ酸である。The term "amino acid" is commonly used as a building block of proteins and peptides. Refers to the following naturally occurring amino acids commonly found: L-alanine (A), L -nstine (C), L-aspartic acid (D), L-glutamic acid (E), 1 ．． -Phenylalanine (F), glycine (G), I7-histidine (I), L -isoleucine (1), L-lysine (K), leucine (L), L-methiony (M), L-asparagine (N), L-proline (P), L-glutamine (Q ), Arginine (R), L-Serine (S), L-)Leonine (T), L-Ba Phosphorus (V), L-tryptophan (W), and L-tyrosine (Y). but, Other analog compounds may reverse recognition of the inhibitor by selected proteases. may be substituted if it does not have any effect. Representative analogs include those listed above. D-isomers and homologs of amino acids, such as Eba, Norloin, Phenylglycide N,N'-dimethyl-D-arginine, and the like. The preferred amino acid is , usually a naturally occurring amino acid.

語句「特異的な阻害」および「特異的に阻害すること」は、選択されたプロテア ーゼのタンパク質分解活性の低減または妨害をいい、これは、異なる基質特異性 を有するタンパク質分解酵素に関して実質的な効果は有しない。したがづて、本 発明のプロテアーゼインヒビターは、好ましくは、特定する配列（代表的には、 開裂部位から４個〜７個のアミノ酸上流）を十分包含し、その結果、選択された ピコルナウィルスプロテアーゼのみが認識し、そしてこの化合物によって阻害さ れる。このことについて、　「認識する」は、プロテアーゼが特定のアミノ酸配 列を有するペプチドのみを結合し、そして開裂し得るという事実をいう：このよ うな配列を有するペプチドは、プロテアーゼによって「認識される」。The phrases "specific inhibition" and "specifically inhibiting" refer to This refers to the reduction or interference of the proteolytic activity of enzymes with different substrate specificities. It has no substantial effect on proteolytic enzymes with . Accordingly, books The protease inhibitors of the invention preferably have specific sequences (typically 4 to 7 amino acids upstream from the cleavage site), so that the selected Only picornavirus proteases recognize and are inhibited by this compound. It will be done. In this regard, “recognize” means that a protease recognizes a specific amino acid sequence. Refers to the fact that only peptides with sequences like this can bind and be cleaved: Peptides with such sequences are "recognized" by proteases.

Ｂ、二股五亙五皿 本発明の実施には、一般的に、当該分野である、分子生物学、微生物学、組換え ＤＮＡ、および免疫学の通常の技法が使用される。このような技法は、文献にお いて十分に説明されている。例えば、Ｊ、　Ｓａｍｂｒｏｏｋらの−Ｍｏｌｅｃ ｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ；　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ−（１ ９Ｂ９）；　−ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ−、１巻および１１巻（Ｄ、Ｎ　Ｇｌｏ ｖｅｒｉｉｌ、　１９８５）＋　−０１ｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｙｎｔ ｈｅｓｉｓ−（Ｍ、Ｊ。B, 5 plates, 5 plates The practice of the invention will generally involve those skilled in the art of molecular biology, microbiology, recombinant engineering, Conventional techniques of DNA, and immunology are used. Such techniques are well documented in the literature. and well explained. For example, J. Sambrook et al. -Molec ular Cloning; A Laboratory Manual-(1 9B9); -DNA Cloning-, volumes 1 and 11 (D, N Glo veriil, 1985) + -01igonucleotide 5ynt hesis-(M, J.

Ｇａｌｔ編、１９８４）：　−Ｎｕｃｌｅｉｅ　Ａｃ１ｄ　Ｈｙｂｒｉｄｉｚａ ｔｉｏｎ−（Ｂ、Ｄ、　ＨａｌｅｓおよびＳ、Ｊ、　１１ｇｇ１ｎｓ編、１９８ ４）；　−Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ａｎｄ　Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ−（ Ｂ、Ｄ、　ＨａｌｅｓおよびＳ、Ｊ、　Ｈ４ｇｇｉｎｓ編、１９８４）；　−Ａ ｎｉｗ＋ａｌ　Ｃｅ１ｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ−（Ｒ，１，Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１ ９８６）；　−１ｇｕｏｂｉｌｉｚｅｄＣｅｌｌｓ　Ａｎｄ　Ｅｎｚｙｖｅｓ” （ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、　１９８６）：　Ｂ、　Ｐｅｒｂａｌ、　−Ａ　Ｐｒａ ｃｔｉｃａｌ　Ｇｕｉｄｅ　Ｔｏ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ＋（１ ９８４）；　−ＭｅｔｈｏｄｓＩｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ−のンリーズ（Ａｃ ａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ、）：　−ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒ　Ｖｅ ｃｔｏｒｓ　Ｆｏｒ　Ｍａｍｍａｌｉａｎ　Ｃｅ１ｌｓ−（Ｊ、Ｈ，Ｍｉｌｌｅ ｒおよびＭ、Ｐ、　Ｃａｌｏｓ編、１９８７．　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａ ｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；む」Ｌ■」１虹（１９８７）　１５４およ び居１（それぞれ、ＷｕおよびＧｒｏｓｓｍａｎｗａｌ　およびｌＶｕｍ）　； 　ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編（１９８７）、−１＋ａｍｕｎｏｃｈｅｍｉ ｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　Ｃｅ１ｌ　Ａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉ ｏｌｏｇｙ−（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、ロンドン）；　５ｃｏｐｅｓ、 −Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｐｕｒｉｆｉｅａｔｉ。Edited by Galt, 1984): -Nucleie Ac1d Hybridiza tion-(edited by B, D, Hales and S, J, 11gg1ns, 198 4); -Transcription And Translation-( B, D. Hales and S. J. H4ggins, 1984); -A niw+al　Ce1l　Culture-(R, 1, Freshney edition, 1 986); -1guobilized Cells And Enzyves” (IRL Press, 1986): B, Perbal, -A Pra ctical Guide To Mo1ecular Cloning+(1 984); -MethodsInEnzymology-'s Nries (Ac academic Press, Inc.): -GeneTransfer Ve ctors For Mammalian Ce1ls-(J, H, Mille r and M, P. Calos, eds., 1987. Co1d Spring Ha rbor Laboratory) ;mu"L■" 1 Niji (1987) 154 and 1 (Wu and Grossmanwal and lVum, respectively); Edited by Mayer and Walker (1987), -1+amunochemi cal Methods In Ce1l And Mo1ecular Bi ology-(Academic Press, London); 5 copies, -Protein Purification.

ｎ：　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　Ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ−１第２版（Ｓｐｒｉ ｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ。n: Pr1nciples And Practice-1 2nd edition (Spri nger-Verlag.

Ｎ、Ｙ、、　１９ｇ？）：　および−Ｈａｎｄｂｏｏｋ　Ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａｌ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ″、第１−ＩＶ巻　（ＷｅｉｒおよびＢｌａ ｃｋｗｅｌ１編、１９８６）を参照のこと。N, Y... 19g? ): and - Handbook Of Experiment 1mmunology'', Volume 1-IV (Weir and Bla ckwell 1, ed., 1986).

ビフルナウイルス基質のアミノ酸配列は、ウィルスゲノムの検査、およびウィル スタンパク貫末端の比較によって決定され得る。ゲノム核酸配列とウィルスタン パク質を並べることにより、推定される開裂部位を確かめ得る。これは、開裂部 位を含有するペプチドの合成およびウィルスプロテアーゼとのインキュベーショ ンによって確認され得る。一度本来の認識部位が確認されれば、インヒビターは 本明細書中に記載の方法によって調製される。インヒビターの（ａａ）。部分は 、活性を最適化するために系統的に改変され得る。最も有効なインヒビターは、 任意の変更は最小（アミノ酸３個未満の相違）であると予想されるが、本来の基 質と同一の配列を必ずしも示す必要はない。The amino acid sequence of the biflunavirus substrate can be determined by examining the viral genome and It can be determined by comparison of protein trans-ends. Genomic nucleic acid sequence and virus tan By aligning the proteins, the putative cleavage site can be ascertained. This is the cleavage Synthesis of peptides containing the position and incubation with viral proteases This can be confirmed by Once the original recognition site is identified, the inhibitor Prepared by the methods described herein. Inhibitor (aa). Part , can be systematically modified to optimize activity. The most effective inhibitor is Any changes are expected to be minimal (less than 3 amino acid differences) but It is not necessary to show the same sequence as the quality.

ピコルナウィルスプロテアーゼは類似の基質配列要求性を持つことを見いだした 。一般的に、Ｐｌは、Ｇｌｎであるべきであり、モしてＰ４は、脂肪族（例えば 、Ｌｅｕ、　ｌｉｅ、　Ｖａｌなど）であるべきである。ＨＡＹ　３Ｃプロテア ーゼにおいて、Ｐ２は、ヒドロキシル側［ＵＩえば、５ｅｒＳＴｈｒ、ヒドロキ シプロリンなど）を有するべきである。Ｐ３およびＰ５残基は、プロテアーゼ特 異性に寄与するとは思えない。ピコルナウィルスプロテアーゼの最小の基質認識 部位は、一般にポリオ：　−ＡＬＦＱ（ＧＰＬ）　；ＨＲＶ　１４：　ＰＶＶＶ Ｑ（ＧＰ）；　ＨＡＹ：　ＬＲＴＱ（ＳＦＳ）Ｔあると考エラレテイる：ここで Ｐ、、ｌ’残基は括弧中に記載されている。We found that picornavirus proteases have similar substrate sequence requirements. . Generally, Pl should be Gln and P4 should be aliphatic (e.g. , Leu, lie, Val, etc.). HAY 3C Protea In the enzyme, P2 is on the hydroxyl side [UI, for example, 5erSThr, hydroxyl side] cyproline, etc.). P3 and P5 residues are protease specific I don't think it will help the opposite sex. Minimal substrate recognition of picornavirus proteases The site is generally polio: -ALFQ (GPL); HRV 14: PVVV Q (GP); HAY: LRTQ (SFS) I think there is an error: Here P,,l' residues are listed in parentheses.

あるいは、インヒビターの「ライブラリー」は、米国特許第５．０１０．１７５ 号および同時係属出願ＵＳＳＮ　０７／６５２．１９４号（１９９１年２月１６ 日出願）に開示された方法に従って合成され得る。ここで両者は、本明細書中に 参考として全体が援用される。簡単には、ペプチドの混合物を調製し、次いで、 スクリーニングして、所望の活性を示すペプチドを決定する。°１７５の方法で は、適切なペプチド合成支持体く例えば、樹脂）が、適切に保護され、活性化さ れたアミノ酸の混合物に結合する。反応混合物中の各アミノ酸の濃度は、結合反 応速度に反比例して調節または調整される。その結果得られる生成物は、開始樹 脂に結合したアミノ酸の等モル混合物である。結合したアミノ酸は、次いで、脱 保護され、そして他の調節されたアミノ酸混合物と反応して、全ての可能なジペ プチドの等モル混合物を形成する。このプロセスは、所望の長さく例えば、６量 体）のペプチドの混合物が形成されるまで、繰り返される。Alternatively, a "library" of inhibitors may be used in U.S. Pat. No. 07/652.194 and co-pending application USSN 07/652.194 (February 16, 1991) It can be synthesized according to the method disclosed in Japanese Patent Application (Japanese). In this specification, both Incorporated in its entirety by reference. Briefly, prepare a mixture of peptides and then Screening is performed to determine peptides that exhibit the desired activity. °175 way A suitable peptide synthesis support (e.g., resin) is properly protected and activated. binds to a mixture of amino acids. The concentration of each amino acid in the reaction mixture is It is adjusted or adjusted in inverse proportion to the response rate. The resulting product is the starting tree It is an equimolar mixture of amino acids bound to fat. The bound amino acids are then released protected and reacted with other controlled amino acid mixtures to Form an equimolar mixture of putido. This process can be carried out for the desired length, e.g. Repeat until a mixture of peptides (body) is formed.

各工程において、全てのアミノ酸を含む必要はないことを注意すること：いくつ かの工程においては、１個または２個のアミノ酸のみが含まれ得る（例えば、こ こで、特定のアミノ酸が所定の位置に必須であることが知られている）。したが って、この混合物の複雑さが低減される。このような場合においては、追加の最 終アミノ酸は、Ｇｌｎ（Ｘ）チオエステル誘導体、例えば、Ｇｌｕ（ＯＭｅ）− チオエステルである。チオエステルのアルデヒドへの脱保護および変換後、イン ヒビターの混合物は、選択されたピコルナウィルスプロテアーゼに結合（または このプロテアーゼを阻害）についてスクリーニングされる。Note that it is not necessary to include all amino acids in each step; In such a step, only one or two amino acids may be included (e.g. where certain amino acids are known to be essential at certain positions). However, Thus, the complexity of this mixture is reduced. In such cases, additional The terminal amino acid is a Gln(X) thioester derivative, e.g. Glu(OMe)- It is a thioester. After deprotection and conversion of thioester to aldehyde, in The mixture of inhibitors binds (or Inhibition of this protease) is screened for.

十分な活性を示すインヒビターは、次いで、単離されそして配列決定される。Inhibitors that exhibit sufficient activity are then isolated and sequenced.

米国特許°１９４に記載されている方法は、本願の方法と類似している。しかし 、合成樹脂と活性化したアミノ酸の混合物とを反応させる代わりに、樹脂を２０ 個の均等な部分に分割しくあるいは、この工程で添加される異なったアミノ酸の 数に対応した数の部分に分割し）、そして、各々のアミノ酸を個別に樹脂の部分 に結合させる。複数の樹脂部分を次に、組合せ、混合し、そして再び複数の均等 な部分に分割し、第二のアミノ酸と反応させる。この方法では、各反応は容易に 進められ完了する。加えて、各工程で全ての樹脂を組み合わせるのでは無く、各 部分を平行して処理するごとで、独立した「サブプール」を維持し得る。こうす ると、どのインヒビターが、観察されるいずれの活性に対応するのかを調べる方 法が単純化される。The method described in US Pat. No. 194 is similar to the method of the present application. but , instead of reacting a synthetic resin with a mixture of activated amino acids, the resin was Alternatively, the different amino acids added in this step can be divided into equal parts. ), and then separate each amino acid into a portion of the resin separately. be combined with Multiple resin parts are then combined, mixed, and again multiple equal parts and react with a second amino acid. In this method, each reaction is easily Proceed and complete. In addition, rather than combining all resins in each process, each Separate "subpools" can be maintained for each parallel processing of parts. Kosu Then, there is a way to find out which inhibitors correspond to which activities observed. The law is simplified.

米国特許°１７５および°１９４に記載されている方法は、プロテアーゼに対す る天然の基質が未知あるいは未確認の場合にも使用し得る。候補インヒビターの 混合物は、天然の基質が存在しない条件下でプロテアーゼに対する結合に関ｌ、 てアッセイし得る。あるいは、米国特許゛１７５および°１９４に記載されてい る方法を用いて（即ち、全ての可能なオリゴマーの混合物を調製し、この混合物 を酵素と接触させ、そして、反応生成物をアッセイし、どのオリゴマーが開裂さ れたのかを調べることで）、基質を確認し得る。ウィルスプロテアーゼが確認さ れていないあるいは単離されていない場合にでさえも、特定のウィルスのインヒ ビターの確認に実際に、米国特許°１９４に記載されている方法を採用し得る。The methods described in U.S. Patents °175 and °194 are It can also be used when the natural substrate involved is unknown or unidentified. candidate inhibitor The mixture is capable of binding to proteases in the absence of natural substrates; can be assayed. Alternatively, as described in U.S. Patents '175 and '194, (i.e., by preparing a mixture of all possible oligomers and is contacted with an enzyme and the reaction products are assayed to determine which oligomers are cleaved. The substrate can be identified by checking whether the Viral protease confirmed Inhibitors of a particular virus, even when not isolated or isolated. In practice, the method described in US Pat. No. 194 may be employed to identify bitters.

この様な場合には、複数のウェル中の宿主細胞上でウィルスを培養し、そして、 例えば各々１−２．０００の候補を含むサブプールで処理する。陽性の結果を生 じた各サブプールを次に、例えば２０−１００個の候補を含む、より小さいサブ プール（サブ−サブプール）のグループに再合成し、そして、再アッセイする。In such cases, the virus may be cultured on host cells in multiple wells, and For example, work with sub-pools each containing 1-2,000 candidates. produce a positive result Each subpool is then divided into smaller subpools containing, for example, 20-100 candidates. Recombine into groups of pools (sub-subpools) and reassay.

陽性のサブ−サブプールは、個々の化合物として再合成し、そして、活性なイン ヒビターを確認するために最終的にアッセイし得る。米国特許゛１９４に記載さ れている方法は、平行して行なわれる自動化技法により、この様なプールおよび サブプールの調製を、全ての合成および再合成が数日間で行われ得る様にする。The positive sub-subpools are resynthesized as individual compounds and become active infusions. A final assay can be performed to confirm the inhibitor. Described in U.S. Pat. No. 194 The proposed method uses parallel automated techniques to create such pools and The preparation of the subpools is such that all synthesis and resynthesis can be performed in a few days.

一般に、精製した形態のウィルスプロテアーゼを採用することが好ましい。この ようなプロテアーゼは、通常、関連文献で報告されていることが見いだされ得る 。It is generally preferred to employ purified forms of viral proteases. this Such proteases can usually be found reported in the relevant literature. .

プロテアーゼインヒビターは、任意の利用できる方法を使用して、スクリーニン グされ得る。現在のところ、本明細書中に記載の方法が好ましい。一般に、その 酵素の天然の基質を模倣した基質が採用されるが、これは開裂した時に定量的に 検出可能な信号を与える。この信号は、比色的定量手段あるいは蛍光的定量手段 で検出し得るのが好ましいニ　しかし、ＨＰＬＣあるいはシリカゲルのクロマト グラフィー、ＧＣ−ＭＳ、核磁気共鳴、等の様な他の方法も有用で有り得る。基 質と酵素の最適濃度が決まれば、候補のプロテアーゼインヒビターを、ある範囲 の濃度で、反応混合物に添加する。このアッセイ条件は理想的には、ｉｎ　ｖｉ ｖｏでプロテアーゼが阻害される条件に類似していなければならない。即ち、生 理的な、ｐＨ，温度、イオン強度、等の条件下である。適切なインヒビターは、 被験体中で毒性の副反応を生じない濃度で、強いプロテアーゼ阻害を示す。プロ テアーゼの活性部位に対する結合に競合するインヒビターは、基質濃度と等しい かあるいは基質濃度より高濃度が必要とされ得る。一方、プロテアーゼの活性部 位に非可逆的に結合し得るインヒビターは、酵素濃度と同じ桁の濃度で添加され 得る。Protease inhibitors are screened using any available method. can be logged. The methods described herein are currently preferred. Generally, that A substrate is employed that mimics the enzyme's natural substrate, which upon cleavage results in a quantitative Gives a detectable signal. This signal can be detected by colorimetric or fluorometric means of quantification. However, HPLC or silica gel chromatography is preferable. Other methods such as chromatography, GC-MS, nuclear magnetic resonance, etc. may also be useful. base Once the quality and optimal enzyme concentration have been determined, candidate protease inhibitors can be added over a range of to the reaction mixture at a concentration of . The assay conditions ideally are in vitro. The conditions must be similar to those under which proteases are inhibited in vo. That is, raw under physical conditions such as pH, temperature, ionic strength, etc. A suitable inhibitor is Demonstrates strong protease inhibition at concentrations that do not produce toxic side reactions in subjects. Professional The inhibitor that competes for binding to the active site of the tease is equal to the substrate concentration. or alternatively higher concentrations than the substrate concentration may be required. On the other hand, the active part of protease The inhibitor that can irreversibly bind to the enzyme is added at a concentration of the same order of magnitude as the enzyme concentration. obtain.

（以下余白） 好ましくは、この基質と濃度を変えた候補インヒビターとを混合し、続いて、プ ロテアーゼを添加する。反応混合物のアリコートを定期的時点で反応停止し、基 質開裂の程度をアッセイした。好適な技法は、反応停止した溶液にＴＮＢＳ　（ トリニトロベンゼンスルホネート）を添加することであり、これは開裂によって 生じた遊離のアミンと反応して定量可能な黄色を生成する。(Margin below) Preferably, the substrate is mixed with varying concentrations of the candidate inhibitor, followed by Add rotease. Aliquots of the reaction mixture were stopped at regular time points and grouped. The extent of plasma cleavage was assayed. A preferred technique is to add TNBS ( trinitrobenzene sulfonate), which by cleavage Reacts with the resulting free amine to produce a quantifiable yellow color.

本発明のプロテアーゼインヒビターは、種々の方法、例えば、静脈内、経口、筋 肉内、腹膜腔内、気管支、鼻内、などで投与し得る。投与の好ましい経路は、イ ンヒビターの性質および治療される病原体に依存する。例えば、リノウィルス感 染の治療のために投与されるインヒビターは、最も好ましくは、鼻内投与される 。インヒビターは、良好に吸収され、食物摂取によって実質的に分解しないので あれば、しばしば、経口投与され得る。しかしながら、殆どのインヒビターは、 消化に感受性であると予想されるので、一般に、非経口的な経路で投与されなけ ればならない。このインヒビターは、薬学的に受容可能な賦形剤と組み合わせた 薬学的な組成物で投与され得る。そのような組成物は、水溶液、エマルション、 クリーム、軟膏、懸濁液、ゲル、リポソーム懸濁液などであり得る。従って、適 切な賦形剤は、水、塩水、リンガ−液、デキストロース溶液、および、エタノー ル、ブドウ糖、ショ糖、デキストラン、マンノース、マンニトール、ソルビトー ル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）　、リン酸塩、酢酸塩、ゼシラン、コラ ーゲン、Ｃａｒｂｏｐｏｌ”、植物油の溶液などを包含する。それは、さらに、 適切な保存剤、安定剤、酸化防止剤、抗菌剤、および緩衝剤、例えば、ＢＨＡ、 　ＢＩＴ、クエン酸、アスコルビン酸、テトラサイクリンなどを含有し得る。製 剤中で有用なりリームまたは軟膏のベースは、ラノリン、　Ｓｉｌｖａｄｅｎｅ Ｏ（Ｍａｒｉｏｎ社）、Ａｑｕａｐｈｏｒ＠　（Ｄｕｋｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ ｉｅｓ社）などを含有する。他の局所製剤は、エアロゾル、バンデージ、徐放性 貼付剤などを含有する。あるいは、適切なポリマーマトリックスまたは膜中にイ ンヒビターを取り込み得、またはカプセル化し得、こうすることによって、局部 的に治療されるべき部位近くの移植に適した徐放性供給デバイスを与える。The protease inhibitors of the present invention can be administered in a variety of ways, including intravenously, orally, intramuscularly. It can be administered intracutaneously, intraperitoneally, bronchially, intranasally, etc. The preferred route of administration is i. Depends on the nature of the inhibitor and the pathogen being treated. For example, rhinovirus The inhibitor administered for the treatment of inflammatory disease is most preferably administered intranasally. . Inhibitors are well absorbed and are virtually not degraded by food intake, so If present, it can often be administered orally. However, most inhibitors Because they are expected to be sensitive to digestion, they generally must be administered by the parenteral route. Must be. This inhibitor is combined with pharmaceutically acceptable excipients. It may be administered in a pharmaceutical composition. Such compositions include aqueous solutions, emulsions, It can be a cream, ointment, suspension, gel, liposomal suspension, etc. Therefore, suitable Suitable excipients include water, saline, Ringer's solution, dextrose solution, and ethanol. Le, glucose, sucrose, dextran, mannose, mannitol, sorbitol polyethylene glycol (PEG), phosphate, acetate, zesilane, cola Carbopol”, solutions of vegetable oils, etc. suitable preservatives, stabilizers, antioxidants, antimicrobials, and buffers, such as BHA, May contain BIT, citric acid, ascorbic acid, tetracycline, etc. made Bases for creams or ointments useful in preparations include lanolin, Silvadene O (Marion), Aquaphor @ (Duke Laborator ies), etc. Other topical formulations include aerosols, bandages, sustained release Contains patches, etc. Alternatively, it can be embedded in a suitable polymer matrix or membrane. The inhibitor may be incorporated or encapsulated, thereby providing local provides a sustained release delivery device suitable for implantation near the site to be treated.

他のデバイスは、内在するカテーテル、および例えばＡｔｚｅｕミニポンプなど のデバイスを包含する。さらに、固体形態、特に凍結乾燥された粉末として、イ ンヒビターを供給し得る。Other devices include indwelling catheters and, for example, the Atzeu mini pump. devices. Furthermore, it can be used in solid form, especially as a lyophilized powder. inhibitors may be provided.

凍結乾燥製剤は、代表的には、安定剤および増量剤、例えばヒト血清アルブミン 、ショ糖、マンニトールなどを含有スル。Lyophilized formulations typically contain stabilizers and bulking agents, such as human serum albumin. Contains , sucrose, mannitol, etc.

薬学的に受容可能な賦形剤の完全な討論は、「勤１１」ｕ旦「」−Ｐｈａｒ＋＋ ａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　（Ｍａｃｋ　Ｐｕｂ、　Ｃｏ、）　Ｊ で入手可能である。A complete discussion of pharmaceutically acceptable excipients can be found in "Work 11" - Phar++ aceutical 5 sciences (Mack Pub, Co,) J Available at:

Ｃ１実１Ｌ憇 以下に記載の本実施例は、当業者である実施者へのさらなる指針として提供され 、そしていかなる方法でも本発明を限定するとして解釈されるべきでない。C1 fruit 1L 憇 The examples described below are provided as further guidance to practitioners skilled in the art. , and should not be construed as limiting the invention in any way.

実１１１１ （グルタメートエステルアルデヒドインヒビターの合成）Ａ、　Ａｃ−ＴＰＬＳ ＴＥ　ＯＭｅ　−ＣＩＯ配列Ａｃ−Ｔ（ｔ−Ｂｕ）−Ｐ−Ｌ−Ｓ（ｔ−Ｂｕ）− Ｔ（ｔ−Ｂｕ）−０Ｈを有する保護ペプチドを、リンク（Ｒｉｎｋ）樹脂を支持 体として用いて、標準固相Ｆｍｏｅ法で合成した（Ｈ，Ｒｉｎｋ、　Ｔｅｔｒａ ｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ　２ｇ巻＝３７８７頁（１９８７年））。コノヘブチド を、２時間、１０％Ｉ’１ＯＡｃ（７）ＣＨ２Ｃ１２溶液を用いて、樹脂から開 裂した。Fruit 1111 (Synthesis of glutamate ester aldehyde inhibitor) A, Ac-TPLS TE　OMe　-CIO arrangement Ac-T(t-Bu)-PL-S(t-Bu)- Protected peptide with T(t-Bu)-0H supported on Rink resin It was synthesized by standard solid phase Fmoe method (H, Rink, Tetra hedron Lett Volume 2g = 3787 pages (1987)). conohebutide was opened from the resin using 10% I'1OAc(7)CH2C12 solution for 2 hours. It was torn.

市販のｔ−Ｂｏａ−グルタメートメチルエステル（２，５ｇ）を、トリエチルア ミ７（７，１当量、８．３９ｇ）およびＤＭＡＰ　（、０，１当量、０１４ｇ） の存在下、０°Ｃで１時間、エタンチオール（１０当量、７、　ｔａｇ）および エチルクロロホルメート（３，６当量、４．５ｇ）と反応させた。ｔ−Ｂｏａ保 護基を、２５％　トリフルオロ酢酸（”ＴＦＡ”）のＣＨ２Ｃｌ２溶液１００　 ｍＬで、３０分間室温で反応させることによって、除去し、エチルグルタメート チオエステルを得た。Commercially available t-Boa-glutamate methyl ester (2.5 g) was added to triethyl alcohol. Mi7 (7,1 equivalent, 8.39g) and DMAP (0,1 equivalent, 014g) ethanethiol (10 eq., 7, tag) for 1 h at 0 °C in the presence of Reacted with ethyl chloroformate (3.6 eq., 4.5 g). T-Boa Protecting groups were added to a solution of 25% trifluoroacetic acid (“TFA”) in CH2Cl2 at 100% mL of ethyl glutamate, removed by reacting at room temperature for 30 min. A thioester was obtained.

ＤＭＦ　（１，１４ｍＬ）中でＨＯＢｔ　（３当量、７７　ｍｇ）およびＢＯＰ （３当量、２５２■ｇ）を用いて、保護ペプチド（４１，５Ｂ）をエチルグルタ メートチオエステル（，０７，５−ｇ１３当量）に結合した。HOBt (3 eq., 77 mg) and BOP in DMF (1.14 mL) (3 equivalents, 252 g) was used to convert the protected peptide (41,5B) into ethylglutamate. Coupled to mate thioester (,07,5-g13 equivalents).

次に、ペプチド（２０■ｇ）を５０％ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液で２時間、室温 で処理することによって、ｔ−ブチル保護基を除去し、ペプチドチオエステルを 得た。次いで、このペプチド（Ａｃ−ＴＰＬＳＴＥ（ＯＭｅ）−ＳＥＬ）を、Ｃ Ｈ２Ｃｌ２　（１ｗＬ）中で、ペプチド（２ｍｇ）をトリエチルシラン（４０当 量、７０　Ｉｌｇ）およびパラジウム（１，４当量、１３．９　ｍｇ）と１時間 室温で処理することによって、還元した。この生成物、Ａｃ−ＴＰＬＳＴＥ　（ ＯＭｅ＞−ＣＨｏを、セライトを通して濾過し、高真空下でロータリーエバポレ ーションによって、濃縮して揮発性物質を除去し、そしてＣ＋５−ＨＰＬＣで精 製した。このペプチドの構造は、’　Ｈ−ＮＭＲおよび質量分析法で確認した（ 計算値Ｍ＋Ｈ＝　６８７Ｊ、実測値＝　６８７．４）。Next, the peptide (20 μg) was incubated in 50% TFA in CH2Cl2 for 2 hours at room temperature. The t-butyl protecting group was removed and the peptide thioester was prepared by treatment with Obtained. This peptide (Ac-TPLSTE(OMe)-SEL) was then converted to C Peptide (2 mg) was dissolved in triethylsilane (40 equivalents) in H2Cl2 (1 wL). amount, 70 Ilg) and palladium (1,4 equivalents, 13.9 mg) for 1 hour. Reduction was achieved by treatment at room temperature. This product, Ac-TPLSTE ( OMe>-CHO was filtered through Celite and rotary evaporated under high vacuum. concentration to remove volatiles and purification by C+5-HPLC. Manufactured. The structure of this peptide was confirmed by H-NMR and mass spectrometry ( Calculated value M+H = 687J, actual value = 687.4).

Ｂ、　Ａｃ−ＬＲＴＥ　ＯＭｅ　−ＣＩＯＡｃ−Ｔ（ｔ−Ｂｕ）ＰＬＳ（ｔ−Ｂ ｕ）Ｔ（ｔ−Ｂｕ）−０Ｈの代わりにＡｃ−ＬＲ（Ｐｍｃ）Ｔ（ｔ−Ｂｕ）−０ ）１を用いて、化合物Ａｃ−ＬＲＴＥ　（ＯＭｅ）−ＣＨＯを上記のＡ部分の化 合物と同様に調製した。生成物の構造を、’　Ｈ−ＮＭＲおよび質量分析で確認 した（計算値Ｍ＋Ｈ＝　５５８．３．実測値＝５５８５）。B, Ac-LRTE OMe-CIOAc-T(t-Bu)PLS(t-B u) Ac-LR(Pmc)T(t-Bu)-0 instead of T(t-Bu)-0H ) 1 to convert the compound Ac-LRTE (OMe)-CHO into the above A moiety. It was prepared in the same way as the compound. Confirm the structure of the product using H-NMR and mass spectrometry (Calculated value M+H = 558.3. Actual value = 5585).

Ｃ０池９アンカニ 他のアンカリング基を有するインヒビターを、上述のように：ＡＬｌだ。このと き、アルデヒドを標準化学技法によって改変した。例えば、−Ｃ）１０基はアミ ドに転換され、続いて脱水（例えば５ＯＣ１２を用いる）されて、ニトリルが得 られ得る。C0 Pond 9 Angkani Inhibitors with other anchoring groups are as described above: ALl. Koto The aldehydes were then modified by standard chemical techniques. For example, -C)10 group is amino followed by dehydration (e.g. using 5OC12) to yield the nitrile. It can be done.

α−ケトエステルは、アルデヒドをＫＣＮと処理してα−ヒドロキシ酸を形成し 、続いてエステル化することによって調製される。ジアゾメチルケト類似体は、 アルデヒドをアシル／％ライドに転換し、続いてジアゾメタンと反応させること によって、調製される。チオセミカルバゾンは、アルデヒドから単純添加によっ て、調製される。ノ１０メチルケト基は、Ｊ　ＭｅｄＣｈｅｍ、　Ｈ屈：　３９ ４−４０７頁（１９９０年）に記載された方法に従って調製される。α-ketoesters are produced by treating aldehydes with KCN to form α-hydroxy acids. , followed by esterification. Diazomethylketo analogs are Converting aldehydes to acyl/%lides followed by reaction with diazomethane Prepared by. Thiosemicarbazone can be extracted from aldehydes by simple addition. and prepared. The 10 methyl keto group is defined by J MedChem, H: 39 4-407 (1990).

Ｌ血珂１ （グルタメートジアルキルアミンアルデヒドインヒビターの市販のｔ−Ｂｏａ− グルタメートα−０−ベンジルエステル（３ｇ）を、トリエチルアミン（１，１ 当量、Ｉｇ）の存在下、２時間室温で、ジメチルアミン・ＨＣＩ（２当量、１． ４６ｇ）およびＢＯＰ（１゜１当量、４．３３ｇ）と混合して、ｔ−Ｂｏｃ−グ ルタメート−ａ−０−ベンジル−χ−ジメチルアミドを得た。Ｍｅａｎ　（１９ ｍＬ）およびＨＯＡｃ　（１ｍＬ）中でＰｄ　（０，６９ｇ）上で水素添加分解 により、ベンジル基を除去して、ｔ−Ｂｏｃ−グルタメートγ−ジメチルアミド を得た。L blood 1 (Commercially available t-Boa- of glutamate dialkylamine aldehyde inhibitor) Glutamate α-0-benzyl ester (3 g) was added to triethylamine (1,1 dimethylamine.HCI (2 eq., Ig) for 2 hours at room temperature. 46 g) and BOP (1°1 eq., 4.33 g) to produce t-Boc-G Ruthamate-a-0-benzyl-χ-dimethylamide was obtained. Mean (19 mL) and hydrogenolysis over Pd (0,69 g) in HOAc (1 mL). t-Boc-glutamate γ-dimethylamide by removing the benzyl group by I got it.

１当量のｔ−Ｂｏｃ−グルタメートγ−ジメチルアミド（２００ｍｇ）を、トリ エチルアミン（３，６当量、２６６　Ｉｌｇ）およびＤＭＡＰ　（０，１当量、 ９　Ｂ）の存在下、ＥｔＳ）ｌ　（１０当量、４４０　Ｉｌｇ）およびエチルク ロロホルメート（３，６当量、２８５　ｍｇ）　と、１時間、０°Ｃで処理し、 続いてＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液（２５％、１００　ｍＬ）を用いて３０分間室 温で、ｔ−Ｂｏａ基を除去して、ｔ−Ｂｏｃ−グルタメートグージメチルアミド チオエステルを得た。One equivalent of t-Boc-glutamate γ-dimethylamide (200 mg) was added to the Ethylamine (3,6 equivalents, 266 Ilg) and DMAP (0,1 equivalents, 9B) in the presence of EtS)l (10 eq., 440 Ilg) and ethylc treated with loloformate (3.6 eq., 285 mg) for 1 h at 0 °C, followed by incubation for 30 min using TFA in CH2Cl2 solution (25%, 100 mL). At room temperature, the t-Boa group was removed to form t-Boc-glutamate goudimethylamide. A thioester was obtained.

）１０Ｂｔ　（３当量、８５　ｍｇ）およびＢＯＰ（３当量、２７８　ｍｇ）を 用いて、Ａｃ−ＬＲ（Ｐｍｃ）Ｔ（ｔ−Ｂｕ）−０Ｈ（１７０Ｂ）を、ｔ−Ｂｏ ａ−グルタメートグージメチルアミドチオエステル（３当量、１３７１ｇ）ニ結 合した。Ｐｍｃおよびｔ−ブチル保護基を、ペプチド（５０ｍｇ）を５Ｏ％ＴＦ ＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液（１００■Ｌ）で２時間室温で処理することによって、除 去し、ペプチドチオエステルを得た。次に、この２　■ｇを無水アセトン（１曽 Ｌ）中のトリエチルシラン（２０当量、７０　ｍｇ）およびＰｄ（０，６当量、 １６　ｍｕｇ）と１時間室温で処理することによって、還元してアルデヒドにし た。この粗生成物をセライトを通して濾過し、ロータリー二バポレーションによ り濃縮し、そしてＣ＋　５−ＨＰＬＣによって精製した。この生成物の構造、Ａ ｃ−ＬＲＴＥ　（ＮＭｅ２）−ＣＩＯを’　Ｈ−ＮＭＲおよび質量分析で確認し た（計算値Ｍ＋Ｅ・５７１．３．実測値＝　５７１．３）Ｌ血史−１ （プロテアーゼ阻害を示す実験） 実施例１および２で調製されたインヒビターのＨＡＹ　３Ｃプロテアーゼの阻害 のためのアッセイを、９６−ウェルマイクロタイタープレート上で行った。) 10Bt (3 equivalents, 85 mg) and BOP (3 equivalents, 278 mg) Using Ac-LR(Pmc)T(t-Bu)-0H(170B), t-Bo a-Glutamate goudimethylamide thioester (3 equivalents, 1371 g) It matched. Pmc and t-butyl protecting groups were added to the peptide (50 mg) in 50% TF. A was removed by treatment with a CH2Cl2 solution (100 L) for 2 hours at room temperature. The peptide thioester was obtained. Next, add 2 g of this to anhydrous acetone (1 so Triethylsilane (20 eq., 70 mg) and Pd (0.6 eq., 16 mg) for 1 hour at room temperature to reduce it to an aldehyde. Ta. The crude product was filtered through Celite and subjected to rotary evaporation. Concentrated and purified by C+5-HPLC. The structure of this product, A c-LRTE (NMe2)-CIO was confirmed by H-NMR and mass spectrometry. (Calculated value M + E・571.3. Actual value = 571.3) L blood history -1 (Experiment showing protease inhibition) Inhibition of HAY 3C protease by the inhibitors prepared in Examples 1 and 2 Assays were performed on 96-well microtiter plates.

０．６ｍＭ　アリコートのインヒビターを８つの６３μＬ　反応緩衝溶液（６■ Ｍクエン酸ナトリウム、９４ｍＭリン酸ナトリウム、２１Ｍ　ＥＤＴＡ、　３． ５１Ｍ基質ＬＩＩＴＥＳＦＳＳＰＨ７，６）に加えて、６０．２０、６．０．２ ．０．０．６．０．２．０．０６．および０．０２ＭＭ　の濃度のインヒビター を有する最終反応液容量８０μＬを得た。８μＬの精製　ＨＡＹ　３Ｃプロテア ーゼ（３，７ＨＭ）を加えて、反応を開始させ、室温でインキュベートした。８ μＬアリコートを各反応バイアルからマイクロタイタープレートウェルの中の５ ０μＬの停止溶液（０，２４Ｍホウ酸塩、０．１２５　Ｍ　Ｎａ０Ｈ）中に５分 間隔で移して、基質の開裂を止めた。Add 0.6mM aliquots of the inhibitor to eight 63μL reaction buffer solutions (6μL). M sodium citrate, 94mM sodium phosphate, 21M EDTA, 3. 51M substrate LIITESFSSPH7,6) plus 60.20, 6.0.2 ．． 0.0.6.0.2.0.06. and inhibitor at a concentration of 0.02 MM. A final reaction volume of 80 μL was obtained. 8μL purified HAY 3C protea The reaction was started by adding 3,7HM and incubated at room temperature. 8 Aliquot 5 µL from each reaction vial into 5 microtiter plate wells. 5 min in 0 μL stop solution (0.24 M borate, 0.125 M NaOH) Intervals were transferred to stop cleavage of the substrate.

基質の開裂の程度を、得られた遊離のアミンとＴＮＢＳ　（）リニトロベンゼン 　スルホネート）との反応により決定した。The degree of cleavage of the substrate was determined by comparing the resulting free amine and TNBS ()linitrobenzene. Determined by reaction with sulfonate).

ホウ酸塩（０，２５Ｍ）中のＴＮＢＳ　（１０μＬ、３５　＋＊ｇ／■Ｌ）を各 ウェルに加えて２０分間インキコベートした。得られた黄色の生成物に２２５μ Ｌの亜硫酸ナトリウム（１９ｍｇ１５０　ｍＬ、０．４　Ｍ　Ｉ［Ｈ２ＰＯａ） を加えて安定化した。得られた溶液の吸光度は４０５ｎｍであった。TNBS (10μL, 35+*g/■L) in borate (0.25M) was added to each Add to the wells and incubate for 20 minutes. 225μ to the resulting yellow product L of sodium sulfite (19 mg 150 mL, 0.4 M I[H2POa) was stabilized by adding The absorbance of the obtained solution was 405 nm.

結果を以下の図１および表１に示す： 表土： 化合ｔ　氏注ユＬ料 Ａｃ−ＬＲＴＥ　（ＯＭｅ）　−ＣＨｏ　０．３Ａｃ−ＴＰＬＳＴＥ（ＯＭｅ） −ＣＩＯ０，３Ａｃ−ＬＲＴＱ（ＮＭｅ２）−ＣＨＯ０，３Ｉ　ｐＭThe results are shown in Figure 1 and Table 1 below: Topsoil: Compound T Mr. Yu L fee Ac-LRTE (OMe) -CHO 0.3Ac-TPLSTE (OMe) -CIO0,3Ac-LRTQ(NMe2)-CHO0,3I pM

Claims (13)

【特許請求の範囲】[Claims] １．選択されたプロテアーゼのタンパク質分解活性を特異的に阻害するのに有用 な式Ｉの化合物：▲数式、化学式、表等があります▼式Ｉここで、Ｒ１は、−Ｏ Ｒ３または−ＮＲ３Ｒ４であり、ここでＲ３は低級アルキル、ヒドロキシ、低級 アルコキシ、またはアリール−低級アルキルであり、そしてＲ４は、Ｈまたは低 級アルキルであり； Ｒ２は、Ｈまたは低級アシルであり； ｎは、２から４０までを含む整数であり；Ｘは、−ＣＨＯ、−Ｃ≡Ｎ、−ＣＯＣ Ｈ２Ｆ、−ＣＯＣＨ２Ｃｌ、−ＣＯＣＨ２Ｎ２、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｓ）Ｎ Ｈ２、または−ＣＯＣＯＲ５（ここでＲ５は、低級アルキル、低級アルコキシ、 低級アリール、アリール−低級アルキル、またはアリール−低級アルコキシであ る）からなる群から選択されるアンカー基であり；そして ａａは、アミノ酸を示し；ここで、（ａａ）ｎは、該選択されたプロテアーゼに より認識されるアミノ酸配列である。1. Useful for specifically inhibiting the proteolytic activity of selected proteases Compounds of formula I: ▲ There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc. ▼ Formula I where R1 is -O R3 or -NR3R4, where R3 is lower alkyl, hydroxy, lower alkoxy, or aryl-lower alkyl, and R4 is H or lower class alkyl; R2 is H or lower acyl; n is an integer from 2 to 40; X is -CHO, -C≡N, -COC H2F, -COCH2Cl, -COCH2N2, -CH=N-NHC(=S)N H2, or -COCOR5 (where R5 is lower alkyl, lower alkoxy, lower aryl, aryl-lower alkyl, or aryl-lower alkoxy. is an anchor group selected from the group consisting of aa represents an amino acid; where (aa)n represents the selected protease. This is a more recognized amino acid sequence. ２．Ｒ１が−ＯＲ３である、請求項１に記載の化合物。2. 2. A compound according to claim 1, wherein R1 is -OR3. ３．Ｒ３がメチルである、請求項２に記載の化合物。3. 3. A compound according to claim 2, wherein R3 is methyl. ４．Ｒ２がエチルである、請求項２に記載の化合物。4. 3. A compound according to claim 2, wherein R2 is ethyl. ５．Ｒ２がアセチルである、請求項１に記載の化合物。5. 2. A compound according to claim 1, wherein R2 is acetyl. ６．（ａａ）ｎがＬｅｕ−Ａｒｇ−Ｔｈｒを含む、請求項１に記載の化合物。6. 2. A compound according to claim 1, wherein (aa)n comprises Leu-Arg-Thr. ７．（ａａ）ｎがＴｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒを含む、請求項１に 記載の化合物。7. Claim 1, wherein (aa)n comprises Thr-Pro-Leu-Ser-Thr. Compounds described. ８．以下を含有する、ウイルス感染を治療するための組成物： 有効量の式Ｉの化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼式Ｉここで、Ｒ１は、−ＯＲ３または−ＮＲ ３Ｒ４であり、ここでＲ３は低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、また はアリール−低級アルキルであり、そしてＲ４は、Ｈまたは低級アルキルであり ； Ｒ２は、Ｈまたは低級アシルであり； ｎは、２から４０までを含む整数であり；Ｘは、−ＣＨＯ、−Ｃ≡Ｎ、−ＣＯＣ Ｈ２Ｆ、−ＣＯＣＨ２Ｃｌ、−ＣＯＣＨ２Ｎ２、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｓ）Ｎ Ｈ２、または−ＣＯＣＯＲ５（ここでＲ５は、低級アルキル、低級アルコキシ、 低級アリール、アリール−低級アルキル、またはアリール−低級アルコキシであ る）からなる群から選択されるアンカー基であり；そして ａａは、アミノ酸を示し；ここで、（ａａ）ｎは、該選択されたプロテアーゼに より特異的に認識されるアミノ酸配列である；および 薬学的に受容可能な賦形剤。8. A composition for treating a viral infection containing: An effective amount of a compound of formula I: ▲There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc.▼Formula I where R1 is -OR3 or -NR 3R4, where R3 is lower alkyl, hydroxy, lower alkoxy, or is aryl-lower alkyl and R4 is H or lower alkyl ; R2 is H or lower acyl; n is an integer from 2 to 40; X is -CHO, -C≡N, -COC H2F, -COCH2Cl, -COCH2N2, -CH=N-NHC(=S)N H2, or -COCOR5 (where R5 is lower alkyl, lower alkoxy, lower aryl, aryl-lower alkyl, or aryl-lower alkoxy. is an anchor group selected from the group consisting of aa represents an amino acid; where (aa)n represents the selected protease. is an amino acid sequence that is more specifically recognized; and Pharmaceutically acceptable excipients. ９．ウイルス感染の被検体を治療する方法であって、該ウイルスがシステインプ ロテアーゼを含有し、該工程は以下の工程を包含する； 該被験体に有効量の式Ｉの化合物を投与する工程；▲数式、化学式、表等があり ます▼式Ｉここで、Ｒ１は、−ＯＲ３または−ＮＲ３Ｒ４であり、ここでＲ３は 低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、またはアリール−低級アルキルで あり、そしてＲ４は、Ｈまたは低級アルキルであり； Ｒ２は、Ｈまたは低級アシルであり； ｎは、２から４０までを含む整数であり；Ｘは、−ＣＨＯ、−Ｃ≡Ｎ、−ＣＯＣ Ｈ２Ｆ、−ＣＯＣＨ２Ｃｌ、−ＣＯＣＨ２Ｎ２、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨＣ（＝Ｓ）Ｎ Ｈ２、または−ＣＯＣＯＲ５（ここでＲ５は、低級アルキル、低級アルコキシ、 低級アリール、アリール−低級アルキル、またはアリール−低級アルコキシであ る）からなる群から選択されるアンカー基であり；そして ａａは、アミノ酸を示し；ここで、（ａａ）ｎは、該選択されたプロテアーゼに より特異的に認識されるアミノ酸配列である。9. A method of treating a subject infected with a virus, the method comprising: containing rotease, and the step includes the following steps; administering to said subject an effective amount of a compound of formula I; ▼Formula I where R1 is -OR3 or -NR3R4 where R3 is Lower alkyl, hydroxy, lower alkoxy, or aryl-lower alkyl and R4 is H or lower alkyl; R2 is H or lower acyl; n is an integer from 2 to 40; X is -CHO, -C≡N, -COC H2F, -COCH2Cl, -COCH2N2, -CH=N-NHC(=S)N H2, or -COCOR5 (where R5 is lower alkyl, lower alkoxy, lower aryl, aryl-lower alkyl, or aryl-lower alkoxy. is an anchor group selected from the group consisting of aa represents an amino acid; where (aa)n represents the selected protease. This is an amino acid sequence that is more specifically recognized. １０．上記ウイルスが、Ａ型肝炎ウイルスである、請求項９に記載の方法。10. 10. The method according to claim 9, wherein the virus is hepatitis A virus. １１．上記ウイルスが、ポリオウイルスである、請求項９に記載の方法。11. 10. The method according to claim 9, wherein the virus is poliovirus. １２．上記ウイルスが、リソウイルスである、請求項９に記載の方法。12. 10. The method according to claim 9, wherein the virus is a lysovirus. １３．上記ウイルスが、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、エンテロウイ ルス、脳心筋炎ウイルス、および***ウイルスからなる群から選択される、請 求項９に記載の方法。13. The above viruses include coxsackievirus, echovirus, and enterovirus. virus, encephalomyocarditis virus, and foot-and-mouth disease virus. The method described in claim 9.