JPH0650991B2 - ＮＡＧａｓｅ活性測定用試薬および測定方法 - Google Patents

ＮＡＧａｓｅ活性測定用試薬および測定方法

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JPH0650991B2 JP62146143A JP14614387A JPH0650991B2 JP H0650991 B2 JPH0650991 B2 JP H0650991B2 JP 62146143 A JP62146143 A JP 62146143A JP 14614387 A JP14614387 A JP 14614387A JP H0650991 B2 JPH0650991 B2 JP H0650991B2
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Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は腎臓障害を鋭敏に反映するＮ−アセチル−β−
Ｄ−グルコサミニダーゼ（以下、ＮＡＧａｓｅという）
の活性測定用試薬およびそれを用いた測定方法を提供す
る。
従来技術 ＮＡＧａｓｅ活性測定用基質としては、４−メチルウン
ベリフェリル Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド
（4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-glucosaminid
e：４ＭＵ−ＮＡＧ）、バラニトロフェニル Ｎ−アセ
チル−β−Ｄ−グルコサミニド（ＰＮＰ−ＮＡＧ）が古
くから知られていたが、これらは各検体毎に基質ブラン
ク及び尿ブランクが必要であったり、尿中阻害物質の影
響を受け易い、反応に長時間を要する等の欠点がある。
また、メタクレゾールスルホンフタイレン（以下、ＭＣ
Ｐという）の呈色物質とするソジオ−メタクレゾールス
ルホンフタイレニル Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサ
ミニド（以下、ＭＣＰ−ＮＡＧという）が開発され、こ
れらの欠点を解決する基質として特開昭５８−９９４に
開示されているが、基質ブランクが必要であり、またア
ルカリ試薬で一旦酵素反応を停止させなければＮＡＧａ
ｓｅ活性を測定できない（ワンポイント測定法）等の欠
点があった。
最近、２−クロロ−４−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル
−β−Ｄ−グルコサミニド（以下、ＣＮＰ−ＮＡＧとい
う）が開発され、反応を停止することなくＮＡＧａｓｅ
活性を測定する（連続測定法）試薬が特開昭６１−１１
２０９２に開示されている。これは反応速度を連続的に
測定して酵素活性を測定する方法で自動測定が容易であ
る。しかし、ＣＮＰ−ＮＡＧは水に難溶性である為、界
面活性剤を添加しても、尚、使用時に基質を完全に溶解
するのに数分を要する等の欠点がある。また、微量のＮ
ＡＧａｓｅの測定には長時間を要する等の欠点もある。
解決すべき問題点 本発明者らは以上の点に鑑み、水に易溶性の取り扱い易
い基質を見出すべく研究を重ねた結果、本発明を完成し
た。本発明が提供する測定用試薬は、尿ブランクを必要
とせず、連続測定が可能である。また、非常に高感度で
ある為、微量のＮＡＧａｓｅでも短時間で正確に測定で
きる。
問題点を解決する為の手段 本発明で使用するソジオ−3,3′−ジクロロフエノール
スルホンフタレイニル Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコ
サミニド（以下、ＣＰＲ−ＮＡＧという）は3,3′−ジ
クロロフエノールスルホンフタレイン（クロロフェノー
ルレッド：ＣＰＲと略記する）と１−クロロ−１−デオ
キシ−2,3,4,6−テトラアセチル−α−Ｄ−グルコサミ
ンとから特開昭５８−９９４記載の方法に従って、容易
に合成することができる。
該ＣＰＲ−ＮＡＧは水に任意の割合で速やかに溶解する
ので、前記ＣＮＰ−ＮＡＧの様に界面活性剤等の特別な
添加剤を必要としない。従って、基質溶液を極めて短時
間で調製することができる。
基質化合物の分解は、酵素活性の測定限界を低下させる
ことに成る為、基質化合物の安定化は重要な課題であ
る。本発明で使用するＣＰＲ−ＮＡＧは、格別の安定化
剤を添加しなくもかなり安定であり、その儘、製剤化し
うる。また、冷暗所で保存すれば、測定限界を低下させ
ること無く、相当期間保存しうる。更に長期間の安定性
を欲すれば、安定化剤としてホウ砂を少量添加すること
ができる。ホウ砂の添加量は、ＣＰＲ−ＮＡＧ１重量部
に対して約0.02〜約2.0重量部、更に好ましくは約0.6〜
約1.2重量部である。
また試薬の製剤化に際しては、基質試薬と緩衝剤とを別
々の製剤として調製してもよいし、これらを一個の製剤
としてもよい。製剤の美観や安定性を考慮すれば、これ
らは凍結乾燥品とするのが好ましい。
本来、ＮＡＧａｓｅの活性は反応pHが約4.5〜約5.0の時
に極大となるが、該ＣＰＲを発色物質として使用すれ
ば、反応速度は見かけ上pH約6.25付近で最大になる。従
って、使用する緩衝剤はＮＡＧａｓｅの反応pHを約4.5
〜約8.0に保つことができれば全て使用される。更に好
ましくは、該pHが約6.0〜約6.5、最も好ましくは約6.2
〜約6.3である緩衝剤を使用する。例えば、クエン酸、
ホウ砂／クエン酸、クエン酸／リン酸、リン酸、ホウ砂
／リン酸、バルビタール・ナトリウム／酢酸ナトリウ
ム、グッド緩衝剤等が例示され、適宜、精製水に溶解し
て使用する。
前記ＭＣＰ−ＮＡＧの測定法では、酵素反応を充分に進
行させた後、アルカリ試薬を添加して酵素を失活させる
と共に、生成したアグリコン（ＭＣＰ）を発色させなけ
ればならない。この方法では操作が１つ増すばかりでな
く、反応の進行を呈色によって知ることができないの
で、反応不充分でアルカリ試薬を添加した場合には、再
度測定を行なわなければならない。
一方、本発明測定用試薬に於ては、酵素反応を吸光度変
化として直接追跡できるので、操作が簡便であるのみな
らず、前記のようなミスは生じない。更に、最近の自動
測定器の多くは、連続測定用に設計されており、測定の
自動化が容易である。
（測定原理） pH約4.5〜約8.0の緩衝液中で、基質化合物ＣＰＲ−ＮＡ
ＧはＮＡＧａｓｅにより加水分解されてＣＰＲを生成す
る。ＣＰＲのpKaは約5.8であり、生成したＣＰＲは直ち
に赤紫色（λmax＝575nm）を呈す。単位時間後の吸光度
差からＮＡＧａｓｅ活性を求める。
（連続測定法測定操作） 基質溶液（２〜６mM、pH約4.5〜約8.0）1.0mlに検体＊
５０μｌを加えて、３７℃にて恒温セルホルダー付分光
光度計で検体添加t1分後とt2分後の５７５nmにおける吸
光度A1及びA2をそれぞれ測定する。
注）検体： ヒトまたは動物由来の尿または血清であり、採取後直ち
に測定するのが好ましい。しかし、長時間保存するとき
は２Ｎ塩酸または２Ｎ水酸化カリウムを用いてpHを6.5
に調整しておく。こうすれば、検体中のＮＡＧａｓｅ活
性は室温で約１日、−２０℃で約４ヶ月間安定である。
（酵素活性の定義） 測定条件下、１分間に１μＭのＣＰＲを生成させるＮＡ
Ｇａｓｅの量を１ IU/とする。
（酵素活性の求め方） ＮＡＧａｓｅ活性は次式より算出される。
ΔＡ＝A2−A1 ε＝ＣＰＲの測定pH、測定波長における吸光係数（cm2
／μＭ） ｄ＝光路長（cm） Δｔ（t2−t1）は通常１〜２０分、特に５〜１０分が好
ましい。
以下の諸実施例、諸実験例により本発明を更に詳しく説
明するが、これらは何等、本発明を限定するものではな
い。
参考例１ 3,3′−ジクロロフエノールスルホンフタレイニル Ｎ
−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド ペンタアセテー
ト(1)の製造 クロロフエノールレツド（1.4g,3.3mmol）のメタノール
（4ml）溶液に0.9717Mのナトリウムメチラート（6.8ml,
3.3×2mmol）を加えて１５分間攪拌した後、３５℃以下
でメタノールを減圧留去する。残渣にトルエンを加えて
摩砕したのち減圧乾固する。同操作を更に２回繰り返
し、次いで減圧乾燥する。
この様にして得た二ナトリウム塩をＤＭＦ（7ml）に溶
解し、アセトクロログルコサミン（1.1g,3mmol）を加え
て２１時間攪拌する。これにアンバーライト IRC-50
（１０ml）を加えて３０分攪拌した後、濾過し、メタノ
ールで洗浄する。濾液および洗液を合し、減圧乾固す
る。
残渣をピリジン（２０ml）に溶解後、無水酢酸（１０m
l）を加えて室温にて一夜放置する。反応混液を減圧濃
縮し、トルエンを加えて更に減圧濃縮する。残渣をカラ
ムクロマトグラフイー（水３％含有SiO2１０ｇ，0.063-
0.2mmφ）に付してジクロルメタンの画分（１６０ml）
から2.1ｇの無色あめ状物を得る。これを更にカラムク
ロマトグラフイー（ローバーカラムＢ，溶媒系：酢酸エ
チル）に付して第４〜９画分（１５ｇ／画分）を集め、
目的物を0.98ｇ得る。これを酢酸エチル／エーテルより
再結晶して標題化合物(1)0.8ｇ（収率36.9％）を得る。
mp142〜143℃。
IRνmax(Nujol):3265,3090,1750,1663,1604,1556,1352c
m-1． NMR(90MHz,CDCl3)δ：1.85(3H,s),2.00(9H,s),2.32(3H,
s)． 元素分析C35H33NO14Cl2S・1/2H2Oとして、 （計算値） C;52.32,H;4.27,N;1.74,Cl;8.83,S;3.99． （実測値） C;52.33,H;4.25,N;1.73,Cl;8.34,S;3.84． 参考例２ ソジオ−3,3′−ジクロロフエノールスルホンフタレイ
ニル Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド(2)の製
造 参考例１で得た化合物(1)2.057ｇ（2.56mmol）をメタノ
ール１８mlに溶解し、0.9717Mのナトリウムメチラート
5.3ml（2.58×2mmol）を加えて、窒素気流中で３時間反
応させる。反応液にアンバーライト IRC-50（１０ml）
を加えて１時間攪拌した後、濾過し、メタノールで洗浄
する。濾液および洗液を合し、３５℃以下で減圧乾固す
る。得られた黄色泡状物を5mlの水に溶解し、これをＤ
ＥＡＥ−セフアロース CL-6B（１０ml、フアルマシア
社製）のカラムに通じて、流出液を集める。流出液を凍
結乾燥して目的化合物(2)1.735ｇ（収率98.1％）を非晶
状粉末として得る。
元素分析C27H24NO10Cl2SNa・MeOH・1/2H2Oとして、 （計算値） C;49.24,H;4.28,N;2.03,Cl;10.26,S;4.64． （実測値） C;48.87,H;4.61,N;2.05,Cl;9.81,S;4.38． 実施例１ ＣＰＲ−ＮＡＧを５０mMホウ砂含有の水溶液で３０mM濃
度に溶解し、２０mlガラスバイアルに2mlずつ分注した
後、凍結乾燥して基質試薬とする。
クエン酸二カリウム塩502.9ｇとクエン酸三カリウム塩1
014.0ｇを粉砕後、混合して粒度を揃えて粉末充填機で3
03.4mgずつ２５mlポリ容器に充填して緩衝剤とする。
用時、蒸留水２０mlを加えて緩衝溶液を調製し、その全
量を基質試薬に加えて測定用試薬溶液（pH6.25）を調製
する。
実施例２ ＣＰＲ−ＮＡＧ３０mM、ホウ砂５０mMおよび塩化ナトリ
ウム1.5ＭをBis-Tris*緩衝液５００mM（pH6.10）に溶解
し、これを２０mlガラスバイアルに2mlずつ分注した
後、凍結乾燥して緩衝剤を含有する測定用試薬とする。
注）＊：ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス
（ヒドロキシメチル）メタン。
用時、蒸留水２０mlを加えて測定用試薬溶液（pH6.25）
を調製する。
実験例１ 実施例１で調製した測定用試薬溶液（pH6.25）１００μ
ｌを９６穴平底マイクロプレートの各穴に取り、各々に
検体１０μｌずつを加える。マイクロプレート分光光度
計（ＭＣＣ３４０型：タイターテック社製）で５４０nm
における吸光度A1を測定する。室温下で放置し、正確に
１０分後、再び５４０nmにおける吸光度A2を測定する。
ブランクとして検体の替わりに蒸留水１０μｌを加えた
ものを前記と同様にして操作して、ブランクの吸光度を
それぞれ求める（ΔＢ＝B2−B1）。
検体と同様に、活性既知のＮＡＧａｓｅを同様に反応さ
せて検量線を作成し、１分間あたりの吸光度変化からＮ
ＡＧａｓｅ活性を求める。
検量線を第１図に示し、従来のＭＣＰ−ＮＡＧワンポイ
ント測定法（ＮＡＧテストシオノギ：商標）との相関関
係を第２図に示す。
実験例２ 市販のＮＡＧａｓｅ活性測定用試薬（ＣＮＰ−ＮＡＧ連
続測定法）を求め、記載の使用方法に従つて試薬溶液を
調製する。試薬溶液５０μｌを９６穴平底マイクロプレ
ートの各穴に取り、各々に活性既知のＮＡＧａｓｅ標準
液を１０μｌずつ加える。マイクロプレート分光光度計
（ＭＣＣ３４０型：タイターテック社製）で４０５nmに
おける吸光度A1を測定する。室温下で放置し、正確に３
０分後、再び４０５nmにおける吸光度A2を測定して、Ｃ
ＮＰ−ＮＡＧ法の検量線（○−○）を作成する。第３
図。
実施例１で調製した本発明の測定用試薬溶液（pH6.25）
１００μｌを９６穴平底マイクロプレートの各穴に取
り、各々に検体１０μｌずつを加える。マイクロプレー
ト分光光度計（ＭＣＣ３４０型：タイターテック社製）
で５４０nmにおける吸光度A1を測定する。室温下で放置
し、正確に１０分後、再び５４０nmにおける吸光度A2を
測定して、ＣＰＲ−ＮＡＧ法（本発明）の検量線（●−
●）を作成する。第３図。
第３図から明らかな様に、本発明による方法は先行技術
のものと比較して、測定感度が約３〜４倍高い。ＮＡＧ
ａｓｅの濃度が非常に低い場合には、感度が低ければ反
応に長時間を費やさなければ正確な測定ができないが、
本発明方法の様に感度が高ければ、短時間で正確な測定
ができるので便利である。
【図面の簡単な説明】
第１図は、活性既知のＮＡＧａｓｅから求めた本発明試
薬の検量線であり、ＮＡＧａｓｅ活性と生成するＣＰＲ
との関係を示す。横軸はＮＡＧａｓｅ濃度（IU/）を
示し、縦軸は生成するＣＰＲの量を吸光度（ΔA540nm/
分）で示す。 第２図は、ＭＣＰ−ＮＡＧ法と本発明方法（ＣＰＲ−Ｎ
ＡＧ法）の相関関係を示す。横軸はＭＣＰ−ＮＡＧ法に
よるＭＡＧａｓｅ濃度（IU/）を示し、縦軸はＣＰＲ
−ＮＡＧ法によるＮＡＧａｓｅ濃度（IU/）を示す。 直線回帰 Ｙ＝0.97x+1.84 相関係数 ｒ＝0.99 第３図は、本発明方法（ＣＰＲ−ＮＡＧ法）および先行
技術の方法（ＣＮＰ−ＮＡＧ法）によるそれぞれのＮＡ
Ｇａｓｅ検量線を示す図。横軸はＮＡＧａｓｅ濃度（IU
/）を示し、縦軸は３０分あたりの吸光度変化を示
す。図中、●−●はＣＰＲ−ＮＡＧ法（ΔA540nm/分）
を、○−○はＣＮＰ−ＮＡＧ法（ΔA405nm/分）を示
す。

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】下記試薬ａおよびｂより成り、実質的にア
    ルカリ試薬を含まないＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサ
    ミニダーゼ活性測定用試薬。 ａ．次式： で示されるソジオ−3,3′−ジクロロフエノールスルホ
    ンフタレイニル Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニ
    ドを含有する基質試薬、 ｂ．緩衝剤。
  2. 【請求項２】前記試薬ａおよびｂが、それぞれ別々の容
    器に充填されている特許請求の範囲第１項記載の測定用
    試薬。
  3. 【請求項３】基質試薬ａがソジオ−3,3′−ジクロロフ
    エノールスルホンフタレイニル Ｎ−アセチル−β−Ｄ
    −グルコサミニドとホウ砂との凍結乾燥品である特許請
    求の範囲第２項記載の測定用試薬。
  4. 【請求項４】前記試薬ａおよびｂが、一の容器に充填さ
    れている特許請求の範囲第１項記載の測定用試薬。
  5. 【請求項５】該測定用試薬がソジオ−3,3′−ジクロロ
    フエノールスルホンフタレイニル Ｎ−アセチル−β−
    Ｄ−グルコサミニド、ホウ砂および緩衝剤の凍結乾燥品
    である特許請求の範囲第４項記載の測定用試薬。
  6. 【請求項６】次式： で示されるソジオ−3,3′−ジクロロフエノールスルホ
    ンフタレイニル Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニ
    ドを含有する試薬に緩衝剤を加えてpH6.0〜pH6.5の基質
    溶液を調製し、これに検体を加えて遊離する3,3′−ジ
    クロロフエノールスルホンフタレインを比色定量するこ
    とを特徴とする実質的にアルカリ試薬を使用しないＮ−
    アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性の測定方
    法。
  7. 【請求項７】単位時間あたりの吸光度の変化量を測定す
    ることを特徴とする特許請求の範囲第６項記載の測定方
    法。
JP62146143A 1987-06-11 1987-06-11 ＮＡＧａｓｅ活性測定用試薬および測定方法 Expired - Lifetime JPH0650991B2 (ja)

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EP19880109201 EP0294804B1 (en) 1987-06-11 1988-06-09 Method for determination of nagase and reagent therefor
DE88109201T DE3884466T2 (de) 1987-06-11 1988-06-09 Verfahren zur Bestimmung der NAGase und Reagens dafür.
ES88109201T ES2059440T3 (es) 1987-06-11 1988-06-09 Metodo para la determinacion de la actividad de la nagase y reactivo para el mismo.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3345748A1 (de) * 1983-12-17 1985-08-29 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Phenolsulfonphthaleinyl-ss-d-galactoside, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung zur bestimmung der ss-d-galactosidase
JPH04221393A (ja) * 1990-12-20 1992-08-11 Kikkoman Corp Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体、これを有効成分とするＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性の測定方法
JP2722874B2 (ja) * 1991-08-01 1998-03-09 日東紡績株式会社 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体及びこれを基質に用いたＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性測定法
US20050187532A1 (en) * 2004-02-24 2005-08-25 Medex, Inc. Diaphragm-based reservoir for a closed blood sampling system
CN111850092A (zh) * 2020-07-01 2020-10-30 甘肃省地质矿产勘查开发局第三地质矿产勘查院(甘肃遥感地质中心、甘肃地质灾害防治工程勘查设计院、甘肃省地质遗迹评估中心、甘肃省中心实验室) 基于土壤酶活性测定的土壤生物学活性和生产力评价方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4552841A (en) * 1981-03-17 1985-11-12 Shionogi & Co., Ltd. N-Acetyl-β-D-glucosaminides for determining N-acetyl-β-D-glucosaminidase activity
JPS58994A (ja) * 1981-03-17 1983-01-06 Shionogi & Co Ltd 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体およびこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼ活性測定法
AU1498883A (en) * 1982-06-21 1984-01-05 State Of Queensland, The Method for diagnosis of mastitis using enzyme, n-acetyl-b-d -glucosaminidase
DE3345748A1 (de) * 1983-12-17 1985-08-29 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Phenolsulfonphthaleinyl-ss-d-galactoside, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung zur bestimmung der ss-d-galactosidase
JPS61112092A (ja) * 1984-11-07 1986-05-30 Meiji Seika Kaisha Ltd 新規グルコサミン誘導体及びこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼの活性測定試薬

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