JPH06508604A - Treatment of endotoxemia - Google Patents

Treatment of endotoxemia

Info

Publication number
JPH06508604A
JPH06508604A JP4507346A JP50734692A JPH06508604A JP H06508604 A JPH06508604 A JP H06508604A JP 4507346 A JP4507346 A JP 4507346A JP 50734692 A JP50734692 A JP 50734692A JP H06508604 A JPH06508604 A JP H06508604A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
protein
scavenger receptor
fragment
pharmaceutical composition
receptor protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP4507346A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
クリエガー，モンティ
Original Assignee
マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー filed Critical マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー
Publication of JPH06508604A publication Critical patent/JPH06508604A/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]

内毒素血症の治療 請求の背景 本発明の技術分野は、内毒素血症および類縁の疾病容態の診断と治療の分野であ り、詳しくは、遺伝子工学的または化学的に改変された、スカベンジャー受容体 タンパク質（ｓｃａｖｅｎｇｅｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ）の固有 のポリペプチドを全身投与することによって内毒素関連物質を不活性化すること に関する。 内毒素は、グラム陰性細菌の外表面にしか見い出されないリボ多糖類（ＬＰＳ） である。内毒素は、グラム陰性菌の感染と関連がある病態生理学的現象の大部分 に関与している。 大部分のグラム陰性細菌の外膜の外側の単層には、リポ多糖の活性部分である、 リピドＡと呼ばれる独特の疎水性要素が含有されている。橋準的な膜リン脂質の 、。−１，２−ジアシルグリセロール部分はリピドＡには存在せず、そのグリコ サミン骨格に連結されたアンル鎖は、グリセロールリン脂質と比較して２〜６個 の炭素数だけ短かく、かつＲ−３−ヒドロキシル置換基を含有するという点が、 異なっている。リピドＡのこの独特の構造は、膜の組立ておよびホスホリパーゼ に対する耐性を与えることを含む機能に反映される。 またリピドＡおよびその前駆物質のリビドｌＶａはマクロファージの強力な活性 化因子であるので、マクロファージはとりわけインターロイキン−１、腫瘍壊死 因子、および血小板活性化因子のような免疫伝達因子を大量に急速に産生ずるよ うになる（Ｒａｅｔｚ、　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｔ、５９巻１２９ 〜１７０頁１９９０年を参照）。腫瘍壊死因子が身体に急速に分泌されるとシト ツク症候群（敗血症性、内毒素性、あるいは中毒性のショックまたは内毒素血症 ）が起こる（例えばＢｅｕｔｌｅｒら、■」ユ、３２０巻５８４頁　１９８６年 およびＯｌｄ、　Ｓｃ’ｅｎｔ’ｆｉｃ　Ａｎｅｒ’ｃａ　、　２５８巻５９頁 １９８８年参照）。 初期の敗血症性ショックの特徴の一部は、極端な体温、精神状態の変化、起立性 血圧の低下、尿排出量の減少、血清アルブミンの濃度の低下、および低酸素血症 を伴う頻呼吸である。内毒素が誘発するショックの高い罹病率は、特に免疫を抑 制されかつ衰弱している患者に、大きな臨床上の問題として残っている。 伝統的な抗シヨツク治療法には、例えば血管作用性化合物、抗炎症薬剤、および ／または各種の抗プロスタグランジン剤を含有する血漿増量剤（ｐｌａｓｍａ　 ｅｘｐａｎｄｅｒｓ）で、血漿の容積分を置換する方法がある。 しかしこのような手段は、内毒素血症の罹病を抑制するのに一部成功しているだ けなので、次のような他のタイプの治療法が開発されている。例えばトランスフ ォーミング増殖因子Ｂ　（ＰＣＴ／ＵＳ８９１０３１６２）、インター口イキ／ −１（ＰＣＴ／ＵＳ８７１０２０６５）、血小板活性因子ノアゴニスト（ＥＰ　 ８９１０４４２９．９）の全身投与、ならびにタウロリジンおよび／またはタウ ルルタム（ＥＰ　８７３０６２９７．０）の非経口投与がある。 免疫治療法としては、内毒素に対する抗体の全身投与（例えば米国特許第４．１ ２０．９５０号；　ＰＣＴ／ＵＳ８４１００６８８　；　ＥＰ　８４３０８２１ ８、１参照）またはＴＮＦ結合タンパク質の全身投与（Ｂｅｕｔｌｅｒら、鋒お １四、出巻８６９〜８７１頁１９８５年：　ＥＰ　８９１０４４９４．３）など が開発されている。これらの免疫治療法には、好ましくない動力学、短かい生物 学的半減期、および場合によっては治療力のある抗体を中和してしまう抗イデイ オタイプ抗体が発生する可能性があるという不利な点がある。 したがって、内毒素血症の改良された治療法、グラム陰性病理原菌を不活性化す る有効な方法、およびこれらの方法に有用な治療剤が要望されている。 灸匪旦！狛 内毒素関連物質は、可溶性形態のスカベンジャー受容体タンパク質のような非免 疫グロブリンポリペプチド治療剤に結合させることによって不活性化することが できることが発見されたのである。内毒素関連物質が治療剤に捕捉されると、結 合体を生成するが、その結合体は、未結合の内毒素関連物質に比べて、毒性と病 原性が低い。 「内毒素関連物質」という用語は、本願で用いる場合、内毒素すなわちグラム陰 性病原菌の表面に見い出されるリポ多糖、内毒素様分子、リビドＡ様分子、スカ ベンジャー受容体を捕捉しかつ毒性もしくはさもなければ病原性の作用を有する 分子、およびその表面、または可溶性スカベンジャー受容体タンパク質に接近し やすい部位で、このような内毒素、内毒素様、毒性もしくは病原性の分子を発現 する生物を意味する。 本発明の好ましい実施態様では、治療剤は、可溶性のスカベンジャー受容体タン パク質の細胞外フラグメントを含有している。固有のスカベンジャー受容体タン パク質は可溶性ではない。なぜなら、マクロファージの膜内にタンパク質をしっ かりと固定するトランスメンブレン領域と細胞質領域が存在するためである。本 発明の治療剤の好ましい実施態様の一つとして、固有のスカベンジャー受容体タ ンパク質のコラーゲン結合領域がある。他の実施態様には、αらせん状超らせん 領域および／またはシスティンリッチ領域（ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｒｉｃｈ　ｄｏ ｍａｉｎ）が含まれる。さらに他の実施態様としては、コラ−ケン結合領域に加 えて、スカベンジャー受容体タンパク質のスペーサー領域がある。 可溶性のフラグメントは、各種の生化学的開裂法に付されて単離された固有のス カベンジャー受容体タンパク質がう得ることができる。あるいは、そのフラグメ ントは、分泌形のスカベンジャー受容体タンパク質のように、組換えＤＮＡ法で 製造された類似体であってもよい。この類似体は、少な（ともその細胞内領域と トランスメンブレン領域とを欠失した、先を切りつめたスカベンジャー受容体タ ンパク質であっテモよい、また、この類似体はスカベンジャー受容体タンパク質 の細胞外領域の一部分のアミノ酸配列に充分、類似したアミノ酸を有し、その結 果、該受容体タンパク質は、内毒素関連物質を捕捉して不活性化する。その上、 前記類似体は、内毒素関連物質に対する結合親和性が、固有のスカベンジャー受 容体タンパク質より大きいかもしくはその細胞外フラグメントより大きいように 処理することができ、またはスカベンジャー受容体と結合する分子、もしくはそ の表面で、あるいは可溶性受容体タンパク質に近づきうる部位でこのような分子 を発現する生物の、毒作用もしくは病原作用を一層有効に中和するよう処理する ことができる。この中和は、直接不活性化、立体障害、血液循環系からのより迅 速な除去、または他のなんらかの機序の結果である。 本発明の態様においては、その治療剤が内毒素のリビドＡ部分に特異的に結合す る場合がある。別の態様では、治療剤は１ミリリツトルあたり約０．５から５． ０μｇタンパク質であるアセチル化低密度リポタンパク質に対して親和性を有し ている。その上に本発明の治療剤は、化学的に修飾された低密度リポタンパク質 （ＬＤＬ）、または負の電荷を有する巨大分子、例えばポリビニルスルフェート 、マレイル−ＢＳＡ、フコイダンおよびプリンポリヌクレオチド類、ポリ［■− Ｃ］、ポリ［１１およびポリ［Ｇ］、および／またはグラム陰性菌への結合能を 有することが特徴である。 また、内毒素関連物質と結合する性能を有する治療剤は、内毒素関連物質を発現 する生物の感染、または内毒素関連物質の摂取もしくは侵入によって起こる内毒 素血症などの毒血症を治療するのに使用できることが発見された。「内毒素血症 」、「中毒性シ璽ツク」、「敗血症ショック」および「内毒素性ショック」とい う用語を、本明細書で用いる場合、グラム陰性菌の感染または他の内毒素関連物 質の侵入に応答して起こるショック症候群を示す。本発明の方法には、本発明の 治療剤を提供する工程、および薬学的に受容可能な担体中に入れた有効量の内毒 素血症阻害薬剤を、被検者の血液循環系に投与する工程が包含される。「被検者 」という用語は、本明細書中で用いられる場合ヒトと動物を意味する。本発明の 薬剤は、遭遇する内毒素関連物質と結合して結合体を形成するが、この結合体は 未結合の内毒素関連物質に比べて毒性と病原性が低下している。 ＭΔ隻車屋川用 本発明の上記およびその他の目的、それらの各種特徴、および本発明自体は、以 下の説明を添付図面とともに読めば、一層充分に理解し得る。 図１はタイプ■とタイプＨのスカベンジャー受容体タンパク質とそのタンパク質 領域の概略図である。 図２Ａ〜２Ｄは、可溶性スカベンジャー受容体タンパク質をコードする遺伝子を 有する宿主細胞をトランスフェクトするのに用いられるプラスミドの構築を示す 概略図である。 図２Ａはミニリン関連糖タンパク質のリーダー配列のｐＣＤＮＡＩへの挿入を示 す。 図２Ｂは、ｐｃＤＮＡ１／共通ベクターの構築を示す。 図２０は、可溶性スカベンジャー受容体のタイプ■とタイプ■を作るための非反 復領域をｐｃＤＮＡｌ−ＭＡＧベクターに挿入するところを示す。 図２Ｄは、ＭＡＧリーダーを含有する、分泌可溶性スカベンジャー受容体の遺伝 子の、ｐ　Ｒｃ　／　ＣＭ　Ｖベクター中への転移を示す。 λ脈旦脱」 可溶性型のスカベンジャー受容体タンパク質は、内毒素関連物質と結合して、そ の物質を不活性化し、血液循環系からのその物質の排除を助長することによって 、治療剤として作用できることが発見された。この治療剤は、内毒素性シせツク が高い危険度にあるか、またはその症状を示している患者に投与することができ る。 固有のスカベンジャー受容体は、膜に結合したタンパク質であり、タイプＩとタ イプ■という２つの形態をとり、両方ともマクロファージの表面に見出される。 このタンノくり質は、タイプ■受容体の場合、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル 上で約２２０，０００ダルトン（２２０ｋＤ）の見掛けの分子量を有し、かつア セチル化もしくはオキサロアセチル化された低密度リポタンパク質（Ｌ　Ｄ　Ｌ ）のような化学的に改変されたＬＤＬに対して結合親和性を有している。例えば 、このタンパク質は、１ミリリツトルあたり約０．５〜５．０μｇタンノイク實 であるアセチル化ＬＤＬ　（Ａｃ−ＬＤＬ）に対して結合親和性を有しティる。 このタンパク質は、他の２つのスカベンジャー受容体サブユニットと結合してサ ブユニットのトリマーを形成して、機能を発揮する。その各トリマーは、タイプ ■受容体の場合、５ＯＳ−ポリアクリルアミドゲル上で約７７ｋＤの見掛けの分 子量であり、アスパラギン（Ａｓｎ）を連結した炭水化物鎖を有している。 図１に示すように、固有のタンパク質すブユニットハ各々、Ｎ末端の細胞質領域 、および膜にかかる領域（トランスメンブレン領域）を有し、これに続いてスペ ーサー領域、αらせん状超らせん領域および細胞外コラーゲン領域がある。「コ ラーゲン領域」という用語が、本明細書で用いられる場合、フラーゲンまたはそ の類似体もしくはそれらのタンパク質のポリペプチドと実質的に同じポリペプチ ドの領域が含まれる。 タイプ■受容体のコラーゲン領域には、システィン残基が豊富な他の細胞外領域 （「システィンリッチ」領域）が連結されている。 表１は、スカベンジャー受容体タンパク質のアミノ酸配列内の、各種領域の位置 を示す。 表■ ７Ｅ／（７）　＠ｊ＠　１Ｊ１※ １〜５０　細胞質　５．７４０ ５１〜７６　トランスメン７ルン　２，７６６７７〜１０９　スベー号−３，７ ０８ １１０〜２７１　αらせん状超らせん　１８．７４７２７２〜３４３　コラーゲ ン結合　６．７９５合計　５０，０５６ 米個々のアミノ酸の分子量に基づいている。 各サブユニットは少な（とも１つのアスパラギン（Ａｓｎ）連結炭水化物鎖を有 し、この鎖は各種の脱グリコジル化酵素で処理することによって測定される。そ のアミノ酸配列を分析することによって、これらの炭水化物の結合部位は、スペ ーサー領域とαらせん状超らせん領域内に位置が決定される。 ３４１〜４５３の残基のシスティンリッチ領域としての帰属は、この領域が多数 のシスティンアミノ酸を含有していることに基づいている。その上に、この領域 は最も遠位の外側領域であり、かついくつもの他の公知の細胞表面受容体がシス ティンリッチのりガント結合領域をもっているので、この領域はリガンド結合部 位としての働きもし得る。しかし、コラーゲン結合領域（アミノ酸番号２７２〜 ３４３）は正の電荷を有し、かつリガンドは負の電荷をもっていることが多いの で、コラーゲン領域は、別に、または付加的にリガンド結合に関与し得る。Ａｓ ｎ連結の糖領域におけるαらせん状超らせんの一部またはすべてに対して同じこ とが当てはまる。 本発明の可溶性治療剤は、内毒素関連物質との結合に関与する固有のスカベンジ ャー受容体タンパク質の細胞外領域（アミノ酸番号７７〜４５３）の少なくとも 一部分を含有する。この細胞外部分には、スペーサー領域、αらせん状超らせん 領域のすべてもしくは一部、コラーゲン結合領域のすべてもしくは一部、および ／またはシスティンリッチ領域のすべてもしくは一部が含まれている。あるいは 、可溶性タンパク質は組換え法で製造される類似体であり、この類似体は、細胞 外領域の少なくとも一部分のアミノ酸配列に充分類似したアミノ酸配列をもって いるので、そのタンパク質は、固有の、不溶性の、膜に結合したタンパク質また はその可溶性フラグメントとして、同様の、より大きい、またはわずかに小さい 親和性で内毒素関連物質と結合する。 本発明の治療剤は、その表面にスカベンジャー受容体タンパク質を発現するマク ロファージまたはその類縁細胞系から固有のスカベンジャー受容体タンパク質を 単離しく　ＰＣＴ／ＵＳ８９１０５１１５に開示されている。これは本明細書に 参考文献として援用する）、次にその精製されたタンパク質をタンパク質分解開 裂反応に付して、そのタンパク質の細胞内部分とトランスメンブレン部分とを細 胞外領域から除去することによって調製し得る。特定のアミノ酸またはアミノ酸 配列を区議して開裂させる多数のタンパク質分解酵素が当該技術分野で知られて いる。市販されているこのような酵素としてはトリプシン、キモトリプシン、ペ プシン、エンドリシンＣ（Ｅｎｄｏ　ＬｙｓＣ）およびエンドアルギニンＣ（Ｅ ｎｄｏ　Ａｒｇ　Ｃ）がある。消化した後、タンパク質のフラグメントは、とり わけ、分画遠心分離法、アフィニティクロマトグラフィーおよびカラムクロマト グラフィーなどを含む任意の数のクロマトグラフィー法で単離することができる 。 あるいは、本発明の治療剤は、スカベンジャー受容体タンパク質またはそのフラ グメントを発現するように遺伝子工学で処理された細胞系から得ることができる 。例えばスカベンジャー受容体タンパク質の細胞外領域またはそのタンパク質の 特定のフラグメントをフードする核酸配列は、適当な微生物、酵母、昆虫または 哺乳類宿主細胞でタンパク質を産生させるために使用し得る。これを行うために 、上記配列は、原核（細菌）の宿主細胞または真核（酵母、昆虫もしくは哺乳類 ）の宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトするのに適切なベクターのよう な発現系に挿入される。いくつかの有用な哺乳類の宿主細胞としては、チャイニ ーズハムス９−卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ　Ｍ６細胞およびＴＨＰ−１細胞が ある。これらの樟準方法は、インスリン、インターフェロン、ヒト成長ホルモン などのような公知のタンパク質を製造するのに実施されている。 類似の方法またはそれらの自明の改変法も、配列番号＝１および配列番号、３と して以下に列挙する配列で示されるスカベンジャー受容体タンパク質に対する核 酸配列を用い、本発明にしたがって、スカベンジャー受容体タンパク質およびそ れらのフラグメントあるいはそれらの類似体を調製するのに利用し得る。 本発明のタンパク質のアミノ酸配列の主要部分は、このタンパク質をコードする 遺伝子の核酸配列から誘導された。しかし、１つ以上のヌクレオチドトリプレ／ ト（コドン）が単一のアミノ酸をコードできるので、多くの異なるヌクレオチド 配列が申−のタンパク質をコードし得る。その結果本明細書中に開示されたペプ チドフラグメントは、上記のフラグメントと機能的に等価でかつ公知の合成法で 調製し得る核酸配列によってコードすることができる。したがって、本発明には 、このような機能的に等価のヌクレオチド配列が含まれる。 更に、当業者は、受容体タンパク質のアミノ酸配列を知っていれば、実質的に同 じ生物活性を有する、本発明の受容体タンパク質と機能的に等価な類似体を、合 成または生合成で調製し得る。詳しくはタンパク質のフラグメント、特に細胞外 領域の部分は、過度の実験を行うことなしに、本願の開示事項にしたがって得る ことができる。 したがって、本発明の適用範囲には、本明細書中に示すアミノ酸配列および対応 する核酸配列、ならびに可溶性のスカベンジャー受容体タンパク質と実質的に同 じ生物活性を有する分子と機能的に等価なアミノ酸配列のすべて（および対応す る核酸配列）が含まれる。例えば本発明の一つの実施態様には、可溶性スカベン ジャー受容体タンパク質のサブユニットのアミノ酸配列と充分に類似したアミノ 酸配列を有するポリペプチドが含まれ、そして、そのポリペプチドが池の２つの 類似ポリペプチドもしくはスカベンジャー受容体タンパク質の２つのサブユニッ トとともに三量体化されると、そのポリペプチドは固有のタンパク質と同じかも しくはより大きい親和性を有して、化学的に改変された形態のＬＤＬおよび内毒 素関連物質と結合する。 本発明のスカベンジャー受容体タンパク質は、各種の診断および治療目的に用い 得る。簡単な実施態様において、不溶性もしくは可溶性の受容体タンパク質は、 好ましくは哺乳類の真核細胞から、またはそのタンパク質を産生ずるように組換 え法によって処理された原核細胞もしくは真核細胞から採取され精製された。ま た、この受容体タンパク質は、その受容体の存在を試験する拮抗結合検定法にお いて、放射性標識をつけた状態と標識なしの両方の状態で使用される。また本発 明の受容体タンパク質、またはそれらのフラグメントもしくはそれらの類似体は 、精製および検定を行うために挿入支持体に固定してもよい。例えば受容体タン パク質のフラーゲン結合領域は、内毒素などのリピドおよびリビド含有物質を単 離するためまたは有用な診断剤、分析剤もしくは治療剤となり得る阻害剤を精製 するため、アフィニティクロマトグラフィー法に用いる挿入支持体物質に連結し てもよい。 他の用途には本明細書に開示した試薬を用いて実行できる各種の検定法があるが 、これらの検定法としては、放射線免疫検定法、酵素免疫検定法、不均一検定法 と均一検定法、酵素結合イムノソルベント検定法（ｒＥＬＩｓＡＪ　）などがあ る。 内毒素関連物質の代表的な検定は以下のようにして実施できる。試料（未知濃度 の内毒素関連物質を含有している）を、まず第一に、既知量の不溶性の受容体タ ンパク質（または内毒素関連物資と結合するエピトープおよび性能を有する、そ れらの類似体もしくはその一部分）と接触させ、その接触時間中に、試料中の内 毒素関連物質は受容体タンパク質と結合するようになる。得られた混合物は、放 射性標識を付けた既知量の被分析体で処理し、その被分析体は、固定支持体の未 占有部位に結合する。次いで過剰の標識は洗浄して除き、支持体に残っている標 識の量は、試料中に最初に存在していた被分析体の量に逆比例している。 可溶形態の受容体タンパク質は、スカベンジャー受容体に結合する内毒素関連物 質の毒性と病原性をより低下させる治療効力がある金属イオン封鎖剤として有用 であり得る。 内毒素血症を治療する際の、本発明の治療剤の有効投与量およびそれらの投与方 法は、常規の試験によって決定することができる。注射用に適した医薬形態とし ては、滅菌水溶液もしくは分散液、および滅菌の注射用水溶液もｌ、　＜は分散 液を即座に調製するのに用いる滅菌粉末がある。すべての場合、その剤形は滅菌 されていなければならずかつ容易に注射できる程度に流動性を有しなければなら ない。剤形は、製造条件と貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌および真菌 のような微生物の汚染作用を受けないように保存され得る。担体は、溶媒、また は例えば水、ポリオール（例えばグリセリン、プロピレングリコールおよび液体 のポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および植物油を含有 する分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティ ングを用い、分散液の場合は必要な粒径を維持し、および界面活性剤をもちいる ことによって維持することができる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤およ び抗真菌剤で行うことができる。これらの薬剤としては、例えばパラベン（ｐａ ｒａｂｅｎ）　、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールな どがある。場合によっては、等張剤、例えば糖類もしくは塩化ナトリウムを含有 させてもよい。注射用治療薬剤の長期間にわたる吸収は、吸収を遅らせる薬剤の 組成物中に入れて、その薬剤を使用することによってなし得る。 滅菌注射用溶液は、上記列挙した各種の他の成分とともに適切な溶媒中に、必要 量の治療剤を物質混合し、必要な場合には続いて濾過滅菌を行って調製される。 一般に分散液は、各種の滅菌活性成分を、滅菌賦形剤中に組み込むことによって 調製される。また、その滅菌賦形剤は、基本的な分散媒体および上記成分から選 ばれた必要な他の成分を含有する。滅菌注射用溶液を調製するのに用いる滅菌粉 末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥法と凍結乾燥法であり、これらの方法に よって、活性成分および先に滅菌濾過したその溶液由来の所望の付加成分の粉末 が得られる。 本発明の治療剤は非経口でまたは腹腔内に投与することができる。薬理的に受容 可能な塩としての治療剤の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面 活性剤と適切に混合した水で調製し得る。また分散液は、グリセリン、液体のポ リエチレングリコールおよびそれらの混合物、ならび油で調製することができる 。貯蔵と使用の通常の条件下では、これらの製剤は微生物の増殖を防止するため に保存剤を含有シている。 また本発明の治療剤は、例えば不活性の希釈剤または吸収可能で、摂食可能な担 体とともに経口投与してもよく、または硬質もしくは軟質の外殻ゼラチンカプセ ル（ｓｈｅｌｌ　ｇｅｌａｔｔｎ　ｃａｐｓｕｌｅ）中に密封してもよ（、また は飲食物の食料と直接混合してもよい。経口投与するために、本発明の治療剤は 、賦形剤と混合して、経口摂取が可能な錠剤、バッカル錠剤、トローチ剤、カプ セル剤、エリキシル剤、懸濁シロップ剤、ウェファース剤などの形態で使用でき る。このような組成物と製剤は、少なくとも０．１％の治療剤を含有するべきで ある。 組成物および製剤の割合は勿論変えることができるが、そのユニ）ｌトの重量の 約２〜約６０％であり得る。このような有用な組成物中の治療剤の量は、適切な 投与量が得られるような量である。 また錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などは、リン酸二カルシウムのような 賦形剤、崩壊剤を含有し得るし、モしてスクロース、ラクトースもしくはサッカ リンのような甘味剤、およびはっか、ウィンターグリーン油（ｖｉｎｔｅｒｇｒ ｅｅｎ　ｏｉｌ）もしくはさくらんぼの香味料のような香味剤を添加してもよい 。投与単位形態がカプセルの場合、上記の種類の物質に加えて、液体の担体を含 有していてもよい。他の各種物質は、コーティングとして存在していてもよく、 または投与単位体の物理的形態を他の方法で改変するために添加してもよい。 例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤は、シェラツク、糖モしくは両者でフート され得る。シロップ剤とエリキシル剤は、活性化合物、甘味剤としてのスクロー ス、保存剤としてのメチルパラベンとプロピルパラベン、染料、およびさくらん ぼもしくはオレンジの香味のような香味剤も含有し得る。勿論、投与単位剤形を 調製するのに用いるいかなる物質でも、医薬として純品でかつ使用される量で実 質的に無毒でなければならない。さらに本発明の活性化合物は、徐放性の製剤お よび処方物に混合してもよい。 「薬学的に受容可能な担体」という用語には、本明細書中で用いられる場合、す べての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤と抗真菌剤、等張剤および吸収 遅延剤などが含まれる。薬学的に活性な物質についてのこのような媒体および薬 剤の使用は当該技術分野ではよく知られている。通常の媒体または薬剤が本発明 の活性成分と不適合の場合を除いて、この活性成分を治療組成物に用いることが 考えられる。また補充の活性成分を組成物に混合してもよい。 次に、本発明を明確な例示実施態様で説明する。しかし、各種の改変、付加およ び置換は、本発明の思想もしくは適用範囲から逸脱することな〈実施できること は明らかであろう。 失態勇士 ンパク　か゛の口゛　スカベンジャー　〇　の−可溶性形態のスカベンジャー受 容体タンパクは、分離した天然タンパク質の酵素分解により次のようにして得ら れる。 主として、参考文献として本明細書中に援用される５ｃｈｎｅｉｄｅｒらの方法 （Ｖｏｌ、　２２５．　Ｊ、肛ｏ１．　Ｃｈｅｗ、　ｐｐ、　１１４４２−１１ ４４７　（１９８０））により、肝臓５００ｇから膜タンパク質を調製する。そ のタンハク質ヲ１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、　ｐＨ８，１ｍＭ　ＣａＣｌ２． ０．１５Ｍ　ＮａＣ１および１　ｍＭ　ＰＭＳＦ　（緩衝液Ａ）　５００ｍ１ｉ ：再懸濁し、２回音波破砕し、次に２０％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００５５ｍ１を 加えて３０分間攪拌しながら溶解する。遠心分離（３３，ＧＯＯｒｐｍ、　１時 間、Ｂｅｃｋｍａｎ型３５０−ター）によって不溶性物質を除去する。あらがし め１％Ｔｒｉ　ｒｏｎ　Ｘ−１００を含む緩衝液Ａを平衡させておいたＭ−ＢＳ Ａ結合５ｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂカラム（Ｐｈａｒｍａｅｉａ、　９．８Ｘ１２ｃ ｍ、　ゲル１ｍｌ当りＭ−ＢＳＡＳｉＣ２＋ａｇ含有）に、７５ｍ１／時の流量 で上清（５００ｍｌ）を注入する。 同緩衝液でカラムを一晩洗浄し、その後カラムの２倍容量の、４０ｎＭオクチル グリコシドを加えた緩衝液Ａで洗浄する。受容体タンパク質を緩衝液Ｂ　（Ｉ　 Ｍ　ＮａＣ１，２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ　ＨＣＩ、　ｐＨ８，１ｍＭ　ＣａＣｌ２． １ｍＭ　ＰＭＳＦ、および４０ｍＭオクチルグリコシド）で溶出する。 得られた分画を、次のようにしてＡｃ−ＬＤＬおよび内毒素への結合能に関して 試験する；　Ａｃ−ＬＤＬと内毒素関連物質の結合活性を有する分画をプールし 、限外濾過（Ｄｉａｆｌ膜、ＰＭ３０％　Ａｓ１ｃｏｎ）を用いて濃縮する。Ｐ ＤＩＯ脱塩カラム（１’ｈａｒｍａｃｉａ）を用いてサンプル緩衝液を２５＋ｇ Ｍリン酸カリウム、４０ｍＭオクチルグＩＪ　：ｌ　シ）’、ｌ　ｓＭ　ＰＭＳ Ｆｌｐ）１６．８１ｍ交換する。次１ｍＭ−ＢＳＡ親和性の精製分画（５０ｍｌ ）を７５ｍ１／時の流量でＵｌｔｒｏｇｅｌ−Ｈａ　（ＬＫＢ）カラム（２，５ ｘ　１３ｃｍ）に注入し、４０ｍＭオクチルグリコシドを加えたリン酸緩衝液（ ２５ｍＭ〜３５０＊Ｍ）の勾配でタンパク質を溶出する。 １００〜２００ｍＭのリン酸塩濃度で２２０ｋＤのスカベンジャー受容体タンパ ク質を回収し、Ｌａｅｍｍｌｉ　（Ｖｏｌ、２２７．　Ｎａｔｕｒｅ、　ｐｐ、 　６８０−６８５（１９７０））、参考文献として本明細書中に援用）による記 載のように、３〜１０％アクリルアミド勾配ゲルでの非還元５ＤＳ−ＰＡＧＥに よってさらに精製する。Ａｃ−ＬＤＬ結合活性を有する２２０ｋＤタンパク質を 、ｌ５ＣＯ１７５０ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏ ｒを用いて０．１％ＳＤＳ、　１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、　ｐＨ８中で、そ のゲルから電気溶出した。 スカベンジャー受容体タンパク質を、同様に、スカベンジャー受容体タンパク質 に対する抗体を用いてＭ−ＢＳＡアフィニティクロマトグラフィーとＩｇＧ−Ｄ Ｉ免疫アフイニテイクロマトグラフィーとの組合せによって精製した。すべての 工程は４℃で実施する。緩衝１ｆｆｌｃ　（０，１％ＳＤＳ、０．１％デオキシ コール酸ナトリウム、１％Ｎｏｎ１ｄｅｔＰ４０，５０ＩＩＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ 、ｐＦＩ８．１５０ｍＭＮａＣ１，および１　ｍＭ　ＰＭＳＦ）　１００ｍ１を 、緩衝Ｍ８　１００ｍ１中の肝臓あるいは肺５００ｇ　（あるいは少量のＴＨＰ −１細胞）から調製したＭ−ＢＳＡ親和性の精製タンパク質に加える。次に述べ るようにして調製したＩｇＧ−ＤＩ　（抗体４　ｍｇ／ａｌゲル）結合の５ｅｐ ｈａｒｏｓｅ　４Ｂ　（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に５０＋Ｉｌｌ／時の流量でサン プルを注入し、−晩再循環させる。カラムを緩衝液Ｃ５０■１１　緩衝液Ｄ（０ ，２％Ｔｒｉｔ。 ｎ　Ｘ−１００，１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、ｐＨ８）　５０ｍ１．　２Ｍ　 ＮａＣ１を含む緩衝液Ｄ　５０ｍ１．　および緩衝液Ｅ　（１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ −ＨＣＩを含む４０ｉＭオクチルグリコシド、Ｉ）Ｈ８）　２ｈｌで連続的に洗 浄する。その後２Ｍチオシアン酸グアニジンを加えた緩衝液Ｅ２０ｍｌで結合タ ンパク質を溶出する。溶出後、ＰＤＩＯカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて 緩衝液を４０ｍＭオクチルグリコシド含有の緩衝液Ａに変換する。 分離したスカベンジャー受容体タンパク質を、次に、セリン−、スルフヒドリル −、メタロ−あるいはアスパルチルプロテアーゼを用いてタンパク質分解させ、 受容体を開裂してリガンド結合部位を含む細胞外領域から膜範囲領域を取り出す 。 あるいは、臭化シアンを用いてスペーサー領域にあるスルフヒドリル基で開裂す ることにより、可溶性形態のスカベンジャー受容体タンパク質を作製し得る（五 人課、Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚ。 （Ｈｅｉｓ、編集）中のＣｒｏｓｓ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎ、 Ｙ、（１９６７）　ｇ：２３８参照）。 支胤五ｌ えＤＮＡ　による ロ　スカベンジャー　六　ンパク　の−１可溶性形態のスカベンジャー受容体タ ンパク質は、組換えＤＮＡ法を用いることによっても得られ得る。特に記載がな い限り、組換え可溶性スカベンジャー受容体の生産のための方法は、Ｍａｎｉｓ ｔｉｓら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉｎ　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒ　Ｍｏ ｄｅｌ（１９８２）　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔ ｏｒｙ）およびＤａｖｉｓら（旦ａｓｉｃ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃ ｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏ　（１９８８）　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉ ｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、　Ｉｎｃ、、　ＮＹ）が述べているような標 準的工程であった。 スカベンジャー受容体タンパク質の核酸配列を次のようにして決定する。分離し たスカベンジャー受容体タンパク質をＪＩＰ−３００（ＢｒｏｗｎＩｅｅ　Ｌａ ｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、　ＣＡ）逆相ＨＰＬＣを用いてさ らに精製する。該受容体を７０％ギ酸中で可溶化する。 次に臭化ンアノ（ＣＮＢｒ）　（２５ｍｇ７１００ｍｌ溶液）により室温で一晩 開裂し、多数の開裂フラグメントを形成させる。フラグメントをＲＰ−３００カ ラムでのクロマトグラフィーにより分離する。 フラグメントの１つを分離し、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅ＋＊ｓ　Ａｍ １ｎ。 ｓ　Ａｃ１ｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅｒ　（Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃ１ｔｙ、　ＣＡ）を用 いて自動アミノ酸分析にかける。Ｍａｔｓｕｄａｉｒａ　（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　 Ｃｈｅｗ、　（１９８７）　２６２：１００３５−１００３８）のゲル電気泳動 ／免疫プロット法を用いて、同様のＣＮＢｒ消化から第２の配列（ｓｅｃｏｎｄ 　５ｅｑｕｅｎｃｅ）を得る。 λＺＡＰＵ　（Ｓｔｒａｔｏｇｅｎｅ）におけるサイズ分画した（８００塩基対 未満）　ｃＤＮＡライブラリーを次のようにして調整する。ポリ（ｚ）　’　ｍ ＲＮＡをＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ　（Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、（１９Ｂ？） 　１６２：ｌ５６−１５９）による記載のように、ウシの肺から酸性チオシアン 酸グアニジウム／フェノール／クロロホルム抽出によって分離し、これを用いて ランダムにプライムされたｃＤＮＡライブラリーを構築する。Ｈａｒｂｅｎｅｒ ら（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、（Ｕ　Ｓ　Ａ）　（１９８ ｇ＞　８５：１７３５−１７３９）による記載のように５−フルオロデオキシウ リジン（Ｆ）を含む３２ｐ末端標識した４１ｍｅｒオリゴヌクレオチドプローブ 、ＡＮＴＣＡＧＴＡＮＩＮＩ　ＴＮ２ＴＣＮ２ＧＡＮＩＡＡ　ＮＩＧＡＧＧＣＮ ２ＡＡＮＩ　ＮＩＴＸＮＩＴＮ２ＧＡＮＧ　Ｃ（７）プールでライブラリーをス クリーニングする。各々のプールについて、ｓｘ　ｔｏ５のプラークを３７℃で のハイブリダイゼータ１ンによってスクリーニングし、０゜１％ＳＤＳを含むＳ ＳＣ（Ｍａｎｉａｔｌｓら、同上、ｐ４４７）中で６回５０”Ｃ１’洗浄する。 推定上の陽性クローンを精製し、インビボでピコブルー（ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔ ）誘導プラスミドに切り出す（５ｈｏｒｔ、同上）。１７ｍａｒオリゴヌクレオ チドプローブ、ＡＲＲＴＴＮＧＣＹＴ　ＣＲＴＴＲＴＣ，ならびに２６−ｓｅｔ オリゴヌクレオチドプローブ、ＡＴＮ２ＣＡＲＴＡＮ＋Ｎ＋　ＴＮ＋ＴＣＮ＋Ｇ ＡＮ＋ＡＡ　Ｎ＋ＧＡＲＧＣとＡＴＮ２ＣＡＲＴＡＮＩＮＩ　ＴＮＩＡＧＮＩＧ ＡＮＩＡＡ　Ｎ＋ＧＡＲＧＣを用いてサザンプロットハイブリダイゼーション（ ５ｏｕｔｈｅｒｎ（１９７５）Ｌ」旦Ｌ」違１４９８　：５０３）により挿入部 分をスクリーニングする。 ５つの陽性クローン（ｐＢｓＲ？およびｐＢＳＲ３′４を含む）をジデオキシ鎖 終止法によって配列決定した。含まれるすべての配列がペプチド■および■をフ ードしていた。さらに、オーバーラツプクローンをオリゴ（ｄＴ）でプライムさ れたウシ肺ｃＤＮＡライブラリーから分離した。配列番号＝３および４は、各々 ウシクローンから誘導した可溶性スカベンジャー受容体の核酸配列およびこれに 対応する推定アミノ酸配列を示す。ヒト配列も同様に、例えばＭａｔｓｕｍｏｔ ｏらの方法（ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　（１９９０）　８ ７：９１３３−９１３７）によって誘導し得る。ヒト核酸配列およびアミノ酸配 列を各々配列番号＝１および２に示す。 可溶性の分泌スカベンジャー受容体タイプＩ（ｂｓＲＩ）およびタイプｎ　（ｂ ｓＲｎ）の発現のためのベクターを次のようにして作製する。ミニリン結合糖タ ンパク質（ＭＡＧ）のリーダー配列およびフィブロネクチン遺伝子の一部を含む ＤＮＡフラグメントは、ベクターｐＭＩＴ　（ＭＩＴのＲｉｃｈａｒｄ　Ｈｙｎ ｅｓｌｌ１士より寄贈）をＢａ間旧とＸｂａｌで消化することによって得られる 。これを、ｐＸｂＳＲ３（ｐｃＤＮＡ１／タイプ■）をＢａｒＨ１／Ｘｂａｌで 消化することによって作製したｐｃＤＮＡｌバックボーンに連結する。ｐｃＤＮ Ａ１ベクターは市販されている（ｌｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）　；ただし、図２Ａに 示したｐＣＤＮＡ　Ｉ／タイプＩＩ　（ｐＸｂＳＲ３）ベクターはさらなる特徴 を有する（　Ｒｏｈｒｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ参照）。得られたベクターを匹ＤＮ Ａ　１／ＭＡＧと呼ぶ（図２Ａ参照）。 ｐｃＤＮＡ１７ＭＡＧベクターをＸｈｏ　ｌで消化し、クレノーフラグメントで 平滑化して、さらにＸｂａｌで消化し、５′平滑末端と３°付着Ｘｂａｌ末端を 持つ線形フラグメントを生成する。この構築物を次に、以下に述べるようなＳｍ ａｌおよびＸｂａｌで消化したポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）産物に連結し、ｐ ｃＤＮＡｌ／共通と呼ばれる構築物（図２Ｂ参照）を形成する。「共通」の語は 、ＰＣＲ産物は、タイプ■およびタイプ■のウシスカベンジャー受容体ｃＤＮＡ の両方に共通する配列を含むという事実に由来する。 分泌されたｂＳＲＩおよびｂＳＲ■に共通する領域は、ＰＣＲＴｅｃｈｎｏｌｏ 　゛　ｒｉｎｃｉ　Ｉｅｓ　ａｎｄ　Ａ　ｌ’ｃａｔ’ｏｎｓ　ｆｏｒ　ＤＮＡ 　Ａｍ　１ｉｆｉｃａｔ伽（）Ｉｅｎｒｙ　Ｒ，Ｅｒ１ｉｅｈ、　′ｓ集）　５ ｔｏｃｋｔｏｎ　Ｐｒｅｓｓ、　１９８９．ならびにＦ　ｒｅｅｍａｎら（Ｐｒ ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）　８７：８８１０−８８ １４〉の中に記載のようなＰＣＲ法を用いることによって得られる。 未変性ｐｃＤＮＡｌ−ｂＳＲＩ　（ｐＸｂＳＲ？）を鋳型として用いるＰＣＲニ より、オリゴヌクレオチドＭＫＳｅｃ　５°およびＭＫＴＫ８を使用して６２０ 塩基対のフラグメントを作製する。このフラグメントをＳｍａｌ　（プライマー ＭＪ［５６Ｃ５’の中の部位）とＸｂａｌ　（共通するスカベンジャー受容体ｃ ＤＮＡ配列中の部位）で消化し、上記のようにｐＣＤＮＡ　Ｉ−ＭＡＧ構築物に 連結しｒｐｃＤＮＡｌ／共通を作製スル。ｐｃＤＮＡｌ／共通はその５′末端に 、スカベンジャー受容体のアミノ酸７７〜２２７をコードするｃＤＮＡに直接結 合するＭＡＧリーダー配列をコードしている。その構築により、受容体の７７位 のりシンは２つのアミノ酸、アルギン−グリシンに変換する。この部位は、ＭＡ Ｇ−受容体の第一次翻訳産物が小胞体内に輸送される間に開裂した後、Ｎ末端ア ミノ酸になると予想される。 分泌ｂｓＲ１の残り部分は、該遺伝子の３°部分をコードする完全な長さのｐｃ ＤＮＡ１／タイプｌ　（ｐＸｂＳＲ？、　Ｋｏｄａｍａら、■■■（１９９０） 　３４３：５３１−５３５参照）からＸｂａｌ−Ｘｂａｌフラグメントを得、そ れをＸｂａｌで消化したｐＣＤＮＡ　ｌ／共通ベクターに連結して、ｐＣＤＮＡ Ｉ／ｂＳＲ−ｒ　−５ｅｅ　（図２ｃ参照）と呼ばれる構築物を作製することに よって付加する。ベクターｐＣＤＮＡ１／ｂＳＲ−Ｕ−ｓｅｅは、Ｒｏｈｒｅｒ ら（Ｎａｔｕｒｅ　（１９９０）　３４３：５３１−５３５）による記載のよう にｐＣＤＮＡＩ／タイプＩＩ　（ｐＸｂＳＲ３）からノＸｂａｌ−Ｘｂａ１７　 ラグメントを用いて同様に作製する。 ＭＡＧリーダーを含んだ分泌ｂｓＲ１をコードする領域は、Ｂｉｎｄｍを用いて ｐｃＤＮＡｌ／ｂＳＲ−Ｉ−ｓｅｅから切り出し、図２Ｄに示すように旧ｎｄＩ １１で消化したＰＲｃ／ＣＭＶ　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）バックボーンに連結 する。同じ方法を用いて分泌ｂＳＲＩＩをｐＲｃ／ＣＭＶ　Ｉｆに転移する。 Ｍａｎｉａｓｔｉｓら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃ１ｏｎｉｎ　Ａ　Ｌａｂｏｒａ ｔｏｒ　Ｍａｎｕａｌ。 Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒ４ｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　１９８２． ｐｐ、　１６−４７）による記載のポリブレン法（ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ　ｍｅｔ ｈｏｄ）を用いて、ＣＨＯ宿主細胞をｐＲｃ／ＣＭＶ／ｂＳＲ−１−ｓｅｅベク ターでトランスフェクトする。 ネオマイシン耐性細胞を、ネオマイシン類似体であるＧ４１Ｂ　（Ｇｉｂｃｏ） を用いて選抜する。０４１８耐性コロニーを無作為に採取し、４００μＣｉ／＊ ｌの３５Ｓ−メチオニンによる３０分ノくルスとそれに続く溶解、ならびにシス ティンリッチな領域中のペプチドに対して誘起した抗ペプチド抗体による免疫沈 降反応を用いて、タンパク質産物の発現に関してスクリーニングする。 陽性コロニーからの培地を、次のようにして分泌ｂＳＲ−１の存在に関して検査 する。細胞を８０μＣｉ／ｍｌの３５３−メチオニン存在下で５時間培養し、そ の後、培地を採取する。ＰＭＳＦを１−Ｍ、ロイペプチンを０．１＋ｍＭ加える 。次に培地をＬ５０Ｑｘｇで１５分間遠心分離し、細胞残渣を除去する。標識し た培地を、２ｍｇ／ｍｌノウシ血清アルブミンを含む緩衝液Ａ　（２０ｎＭ　Ｔ ｒｉｓ、ｐＨ８，０，１５０ｍＭ　ＮａＣ１，１ｍＭ　ＣａＣｌ２）で３：　ｌ に希釈する。これに、あら力）しめ緩衝液Ａ中で洗浄しておいた２５μＩ　ＡＧ −ＰｏｌｙＧピーズ（ｐｈａｒ＋５ａｃｉａ）を加える。この混合物を攪拌し、 −晩４℃でローチーターに入れる。その後ビーズを緩衝液Ａで２回洗浄し、サン プル緩衝液３０μｍを加えて煮沸することにより、タン７＜り質溶出する。溶出 物を８％Ｌａｅｍｍｌｉゲル上に流し、それを乾燥して、予備フラッシュしたコ ダノクＸＲ７フイルムに露光する。 トランスフェクトした細胞中には７２ｋＤのノくンドが見られる力く、トランス フェクトしていないＣＨＯ細胞中には認められな℃）。 見立■ユ 五月Ｊｏｂ（社）１丞 可溶性スカベンジャー受容体タンパク質の有用性を、既知のスカベンジャー受容 体リガンド（放射標識した内毒素あるいは１２’　Ｉ−ＡｃＬＤＬのような）の スカベンジャー受容体仲介の細胞代謝を遮断する能力を測定することによって判 定する。可溶性受容体タンパク質が膜結合形態と同じリガンドによって阻害され ることは、このようなリガンドが、放射性あるいはその池の方法で標識した可溶 性形態受容体とＰｏ１ｙＧビーズ（Ｐｈａｒ＋５ａｃｉａ）との結合を妨害し得 ることによって示される。例えば、阻害因子ポリＧ１　ポリ■、マレイル化ＢＳ Ａ、およびＡｃＬＤＬが４００μｇ／＋＊　ｌで良好な競合因子であるのに対し 、ポリＣ，ＬＤＬｌおよびＢＳＡは競合しない。このことより、この可溶性受容 体タンパク質は同様の結合特異性を有し、従って完全な長さの膜結合形態として の有用性を有することが示される。このビーズ結合アッセイは、内毒素、リピド ＩＩ／Ａおよび同様の分子の可溶性形態スカベンジャー受容体への結合を測定す るために使用され得る。 スカベンジャー受容体のリピドＩＶＡへの結合能は、Ｒａｅｔｚら（Ｃｏｌｄ　 Ｓ　ｒｉｎ　Ｆ！ａｒｂｏｒ　Ｓ　ｍ　、ｕａｎｔ、　Ｂｉｏｌ、　（１９８８ ）　５３：９７３−９８２）およびＨａｍｐｔｏｎら（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈ ｅｗ、（１９８８）　２６３：１４８０２−１４８０７）の方法によって測定す る。 可溶性受容体タンパク質結合活性は、各々参考文献として本明細書中に援用され る５ｃｈｎｅｉｄｅｒら（同上）およびＤａｎｉｅｌら（Ｖｏｌ、２５８．　Ｊ 、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　ｐｐ、　４６０６−４６１１　（１９８３））の 方法に従い、若干の修正を加えて実施するフィルター結合およびリガンドブロノ ティングアノセイによっても測定される。リガンド結合特異性は、同様に核酸ア フィニテイクロマトグラフィーによっても測定される。４ｈＭオクチルグリコシ ドを含む緩衝液４１１１中の、内毒素関連物質の結合活性を有するＭ−ＢＳＡ精 製可溶性タンパク質を、多核酸結合アガロースカラム（ＡＧ−ＰＯＬＹ　５ｅｒ ｉｅｓ、予備充填カラムＰｈａｒｍａｃｉａ）に注入する。同じ緩衝液で洗浄後 、結合タンパク質を溶出緩衝液５冑１で溶出する。 内毒素血症の治療における治療薬として有用なタンパク質は、本発明のタンパク 質である。 前記の説明および実施例から、可溶性形態のスカベンジャー受容体タンパク質は 、種々の適切な哺乳類組織から精製し、次にタンパク質分解を行うことによって 、あるいは組換えＤＮＡ法を用いることによって調製され得ることが理解され得 る。 これらのタンパク質は内毒素関連物質と結合し得るので、敗血症性ショックにか かつている患者の血液循環系で認められる内毒素および他の内毒素関連物質を分 離し、清掃を促進する治療薬として有用である。 本発明は、本発明の意図あるいは基本的特性から逸脱することなく池の特定の形 態において実施され得る。従って、本発明の実施態様は、すべての点において、 前記の記載ではなく添付される請求の範囲によって指示される本発明の範囲を例 示するが、これを制限しない。このため、請求の意図および相当する範囲内でな されるあらゆる変更は、その中に包含されることが意図される。 （ＬＩＸＴ余し） Treatment of Endotoxemia Background of the Claim The technical field of this invention is that of the diagnosis and treatment of endotoxemia and related disease conditions. More specifically, the present invention relates to inactivating endotoxin-related substances by systemically administering a genetically or chemically modified unique polypeptide of a scavenger receptor protein. Endotoxins are ribopolysaccharides (LPS) found only on the external surface of Gram-negative bacteria. Endotoxins are involved in most of the pathophysiological phenomena associated with Gram-negative infections. The outer monolayer of the outer membrane of most Gram-negative bacteria contains a unique hydrophobic element called lipid A, which is the active portion of lipopolysaccharide. of semiconductive membrane phospholipids. The -1,2-diacylglycerol moiety is not present in lipid A, and its glycolytic The unru chain linked to the samin backbone differs from glycerol phospholipids in that it is shorter by 2 to 6 carbons and contains an R-3-hydroxyl substituent. This unique structure of lipid A is reflected in its functions, including membrane assembly and conferring resistance to phospholipases. Additionally, because lipid A and its precursor, lipid lVa, are potent activators of macrophages, macrophages rapidly release large amounts of immune mediators such as interleukin-1, tumor necrosis factor, and platelet activating factor, among others. I'll produce it (See Raetz, Ann, Rev, Biochet, Vol. 59, pp. 129-170, 1990). When tumor necrosis factor is rapidly secreted into the body, Tsuku syndrome (septic, endotoxic, or toxic shock or endotoxemia) occurs (eg, Beutler et al., 320, p. 584 1986 and Old, Sc'ent'fic Aner'ca, 258). (see Vol. 59, 1988). Some of the characteristics of early septic shock are extreme body temperature, altered mental status, decreased orthostatic blood pressure, decreased urine output, decreased serum albumin concentration, and tachypnea with hypoxemia. be. The high morbidity of endotoxin-induced shock is particularly important for immunosuppression. It remains a major clinical problem in depressed and debilitated patients. Traditional anti-shock treatments include replacing plasma volume with plasma expanders containing, for example, vasoactive compounds, anti-inflammatory drugs, and/or various anti-prostaglandin agents. There is. However, such measures have shown some success in controlling the morbidity of endotoxemia. Because of this, other types of treatments have been developed, including: For example, transfer Systemic administration of growing growth factor B (PCT/US89103162), inter-oral growth factor-1 (PCT/US87102065), platelet activating factor noagonist (EP 89104429.9), and taurolidine and/or tau There is parenteral administration of Lultam (EP 87306297.0). Immunotherapy includes the systemic administration of antibodies against endotoxins (see e.g. US Pat. 14, Volume 869-871, 1985: EP 89104494.3), etc. have been developed. These immunotherapies have unfavorable kinetics, short biological half-lives, and in some cases anti-inflammatory antibodies that neutralize therapeutic antibodies. The disadvantage is that otype antibodies may develop. Therefore, an improved treatment for endotoxemia, inactivating Gram-negative pathogens. There is a need for effective methods for treating cancer, and for therapeutic agents useful in these methods. Moxibustion trick! Koma: Endotoxin-related substances are non-immune substances such as soluble forms of scavenger receptor proteins. It has been discovered that the anti-inflammatory globulin polypeptide can be inactivated by conjugation to therapeutic agents. When endotoxin-related substances are captured by therapeutic agents, results can occur. The conjugates are less toxic and pathogenic than the unconjugated endotoxin-related substances. Low origin. As used herein, the term "endotoxin-related substances" refers to endotoxins or gram negative Lipopolysaccharide, endotoxin-like molecules, libido A-like molecules, and scarabine molecules found on the surface of sexually transmitted pathogens. Molecules that scavenge scavenger receptors and have a toxic or otherwise pathogenic effect, and such endotoxin, endotoxin-like, toxic or pathogenic molecules on their surface or at sites accessible to soluble scavenger receptor proteins. means an organism that expresses sexual molecules. In a preferred embodiment of the invention, the therapeutic agent is a soluble scavenger receptor protein. Contains extracellular fragments of protein. Unique scavenger receptor tan Proteins are not soluble. This is because proteins are deposited within the membrane of macrophages. This is because there is a transmembrane region and a cytoplasmic region that are firmly fixed. As one of the preferred embodiments of the therapeutic agent of the present invention, the unique scavenger receptor There are collagen binding regions of protein. Other embodiments include alpha-helical superhelical regions and/or cysteine-rich domains. In still other embodiments, the addition of a kolaken binding region to In addition, there is a spacer region of the scavenger receptor protein. Soluble fragments are unique fragments isolated by various biochemical cleavage methods. Cavenger receptor proteins can be obtained. Or that flag The agents may also be analogs produced by recombinant DNA methods, such as secreted forms of scavenger receptor proteins. This analog is a truncated scavenger receptor protein lacking both its intracellular and transmembrane regions. In addition, this analog has sufficient amino acid sequence similarity to the amino acid sequence of a portion of the extracellular region of the scavenger receptor protein, and its binding As a result, the receptor protein captures and inactivates endotoxin-related substances. Moreover, the analogs have a unique scavenger receptor binding affinity for endotoxin-related substances. a molecule that can be engineered to be larger than a host protein or an extracellular fragment thereof, or that binds to a scavenger receptor; can be treated to more effectively neutralize the toxic or pathogenic effects of organisms that express such molecules on their surface or at sites accessible to soluble receptor proteins. This neutralization results from direct inactivation, steric hindrance, and more rapid release from the blood circulation system. be the result of rapid clearance or some other mechanism. In embodiments of the invention, the therapeutic agent specifically binds to the libido A moiety of endotoxin. There may be cases where In another embodiment, the therapeutic agent is about 0.5 to 5.0 mg per milliliter. It has affinity for acetylated low-density lipoprotein, which is 0 μg protein. Additionally, the therapeutic agents of the present invention may include chemically modified low density lipoproteins (LDL) or negatively charged macromolecules such as polyvinyl sulfate, maleyl-BSA, fucoidan and purine polynucleotides, polyvinyl sulfate, maleyl-BSA, fucoidan and purine polynucleotides, It is characterized by having the ability to bind to [-C], poly[11 and poly[G], and/or Gram-negative bacteria. In addition, therapeutic agents that have the ability to bind endotoxin-related substances can be used to treat endotoxins caused by infection of organisms that express endotoxin-related substances, or by ingestion or invasion of endotoxin-related substances. It has been discovered that it can be used to treat toxemias such as adiaemia. The terms ``endotoxemia,'' ``toxic shock,'' ``septic shock,'' and ``endotoxic shock.'' As used herein, the term refers to infection with Gram-negative bacteria or other endotoxin-related Indicates a shock syndrome that occurs in response to a quality invasion. The method of the invention includes the steps of providing a therapeutic agent of the invention and an effective amount of endotoxin in a pharmaceutically acceptable carrier. A step of administering an aemia-inhibiting drug to the blood circulatory system of the subject is included. The term "subject" as used herein refers to humans and animals. The agent of the present invention binds to endotoxin-related substances it encounters to form a conjugate, which has reduced toxicity and pathogenicity compared to unbound endotoxin-related substances. The above and other objects of the present invention, their various features, and the present invention itself are as follows: The following description will be better understood when read in conjunction with the accompanying drawings. Figure 1 is a schematic diagram of type and type H scavenger receptor proteins and their protein regions. Figures 2A-2D are schematic diagrams showing the construction of plasmids used to transfect host cells with genes encoding soluble scavenger receptor proteins. Figure 2A shows the insertion of the minirin-related glycoprotein leader sequence into pCDNAI. vinegar. Figure 2B shows construction of pcDNA1/common vector. Figure 20 shows the types of soluble scavenger receptors and non-reactive methods for making the types. The insertion of the modified region into the pcDNAI-MAG vector is shown. Figure 2D shows the genetics of secreted soluble scavenger receptors containing MAG leaders. Transfer of the offspring into the pRc/CMV vector is shown. Soluble scavenger receptor proteins bind to endotoxin-related substances and release them. It has been discovered that by inactivating a substance and aiding its elimination from the blood circulation system, it can act as a therapeutic agent. This treatment can be administered to patients who are at high risk or exhibiting symptoms of endotoxicity. Ru. Intrinsic scavenger receptors are membrane-bound proteins, type I and type I. Both are found on the surface of macrophages. This tannin has an apparent molecular weight of approximately 220,000 Daltons (220 kD) on 5DS-polyacrylamide gels for type receptors and It has binding affinity for chemically modified LDL such as cetyl or oxaloacetylated low density lipoprotein (LDL). For example, the protein has a binding affinity for acetylated LDL (Ac-LDL) that is approximately 0.5-5.0 μg per milliliter. This protein binds to two other scavenger receptor subunits to Forms the trimmer of the unit and performs its functions. Each trimer has an apparent fraction of approximately 77 kD on 5OS-polyacrylamide gels for type receptors. It has a carbohydrate chain linked to asparagine (Asn). As shown in Figure 1, each unique protein subunit has an N-terminal cytoplasmic region and a transmembrane region, followed by a transmembrane region. ser region, α-helical superhelical region, and extracellular collagen region. "Ko As used herein, the term "largen region" refers to fullergen or its analogs or polypeptides that are substantially the same as the polypeptides of those proteins. Contains the area of the code. The collagen region of type receptors is linked to other extracellular regions that are rich in cysteine residues (“cystine-rich” regions). Table 1 shows the positions of various regions within the amino acid sequence of the scavenger receptor protein. Table ■ 7E/(7) @Jj@ 1J1* 1~50 Cytoplasm 5.740 51~76 Transmen 7run 2,76677~109 Sube-3,7 08 110-271 α-helical superhelix 18.747272-343 Collage Combined 6.795 Total 50,056 Based on the molecular weight of individual amino acids. Each subunit has a small number (one asparagine (Asn)-linked carbohydrate chain, which is determined by treatment with various deglycosylation enzymes. By analyzing the amino acid sequences of The positions are determined within the superhelical region and the α-helical superhelical region. The assignment of residues 341-453 as a cysteine-rich region is based on the fact that this region contains a large number of cysteine amino acids. Moreover, this region is the most distal outer region and a number of other known cell surface receptors are in cis-system. Since it has a tin-rich glue Gant binding region, this region is a ligand binding region. It can also function as a rank. However, the collagen binding region (amino acid numbers 272-343) has a positive charge, and the ligand often has a negative charge. In this case, the collagen region may be separately or additionally involved in ligand binding. The same thing can be done for part or all of the α-helical superhelix in the As n-linked sugar region. applies. The soluble therapeutic agents of the present invention have inherent scavenging properties involved in binding endotoxin-related substances. Contains at least a portion of the extracellular region (amino acid numbers 77-453) of the receptor protein. This extracellular portion includes a spacer region, all or part of the α-helical supercoil region, all or part of the collagen binding region, and/or all or part of the cysteine-rich region. Alternatively, the soluble protein is a recombinantly produced analog having an amino acid sequence sufficiently similar to that of at least a portion of the extracellular region that the protein has a unique, insoluble , membrane-bound proteins or As its soluble fragment, it binds endotoxin-related substances with similar, greater, or slightly less affinity. The therapeutic agent of the present invention is a macromolecule expressing a scavenger receptor protein on its surface. The isolation of unique scavenger receptor proteins from lophages or their related cell lines is disclosed in PCT/US89105115. (incorporated herein by reference), the purified protein is then subjected to proteolytic decomposition. The intracellular and transmembrane parts of the protein are separated by a cleavage reaction. It can be prepared by removal from the extravesicular region. Numerous proteolytic enzymes are known in the art that selectively cleave specific amino acids or amino acid sequences. Commercially available such enzymes include trypsin, chymotrypsin, and These include endolysin C (Endo LysC) and endoarginine C (Endo Arg C). After digestion, the protein fragments are However, it can be isolated by any number of chromatographic methods, including differential centrifugation, affinity chromatography, column chromatography, and the like. Alternatively, the therapeutic agent of the present invention may be a scavenger receptor protein or its flag. can be obtained from cell lines that have been genetically engineered to express the protein. For example, a nucleic acid sequence encoding the extracellular region of a scavenger receptor protein or a specific fragment of that protein can be used to produce the protein in a suitable microbial, yeast, insect, or mammalian host cell. To do this, the above sequences are inserted into an expression system such as a vector suitable for transforming or transfecting prokaryotic (bacterial) or eukaryotic (yeast, insect or mammalian) host cells. Ru. Some useful mammalian host cells include Chinese The cells include COSM 9-ovary (CHO) cells, COS M6 cells and THP-1 cells. These standard methods have been implemented to produce known proteins such as insulin, interferon, human growth hormone, etc. Similar methods or obvious modifications thereof may also be used for SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 3. Nuclei for scavenger receptor proteins with the sequences listed below. Scavenger receptor proteins and their These fragments or analogs thereof can be prepared. The main part of the amino acid sequence of the protein of the invention was derived from the nucleic acid sequence of the gene encoding this protein. However, since more than one nucleotide triplet (codon) can encode a single amino acid, many different nucleotide sequences can encode the protein in question. As a result, the peptides disclosed herein Tide fragments can be encoded by nucleic acid sequences that are functionally equivalent to the fragments described above and can be prepared by known synthetic methods. Accordingly, the present invention includes such functionally equivalent nucleotide sequences. Furthermore, one skilled in the art, knowing the amino acid sequence of a receptor protein, would know that it is substantially the same. A functionally equivalent analogue of the receptor protein of the present invention, which has the same biological activity, is synthesized. It can be prepared synthetically or biosynthetically. In particular, protein fragments, particularly portions of the extracellular region, can be obtained according to the disclosure of the present application without undue experimentation. Accordingly, the scope of the present invention includes the amino acid sequences and corresponding nucleic acid sequences set forth herein, as well as those substantially identical to soluble scavenger receptor proteins. All functionally equivalent amino acid sequences (and corresponding nucleic acid sequences). For example, one embodiment of the invention includes soluble scavengers. An amino acid sequence sufficiently similar to that of a subunit of the JAR receptor protein. a polypeptide having an acid sequence, and the polypeptide has two similar polypeptides or two subunits of a scavenger receptor protein. When trimerized with protein, the polypeptide may be identical to the native protein. or with greater affinity, chemically modified forms of LDL and endotoxins. Combines with elementary related substances. Scavenger receptor proteins of the invention can be used for a variety of diagnostic and therapeutic purposes. In a simple embodiment, the insoluble or soluble receptor protein is preferably derived from a mammalian eukaryotic cell or recombinantly produced to produce the protein. It was collected and purified from prokaryotic or eukaryotic cells that had been treated by the method. Ma Additionally, this receptor protein can be used in competitive binding assays to test for the presence of the receptor. It is used in both radiolabeled and unlabeled states. Also from the main A specific receptor protein, or a fragment thereof or an analog thereof, may be immobilized on an insert support for purification and assay. For example, receptor tan The flagen-binding region of proteins is an intercalated support used in affinity chromatography methods to isolate lipids and libido-containing substances, such as endotoxins, or to purify inhibitors that can be useful diagnostic, analytical, or therapeutic agents. May be linked to body material. Other applications include a variety of assays that can be performed using the reagents disclosed herein, including radioimmunoassays, enzyme immunoassays, heterogeneous assays, and homogeneous assays. , enzyme-linked immunosorbent assay (rELIsAJ), etc. Ru. A typical assay for endotoxin-related substances can be performed as follows. The sample (containing an unknown concentration of endotoxin-related substances) is first treated with a known amount of insoluble receptor protein. that have epitopes and the ability to bind to proteins (or endotoxin-related substances); During the contact period, endotoxin-related substances in the sample become bound to receptor proteins. The resulting mixture is released The analyte is treated with a known amount of radiolabeled analyte, which binds to unoccupied sites on the immobilized support. Excess label is then washed away and any remaining label on the support is removed. The amount of analyte is inversely proportional to the amount of analyte initially present in the sample. The soluble form of the receptor protein is an endotoxin-related compound that binds to scavenger receptors. It may be useful as a sequestering agent with therapeutic efficacy to further reduce the toxicity and pathogenicity of metals. Effective dosages of therapeutic agents of the present invention and methods of administering them when treating endotoxemia The law may be determined by routine tests. In a pharmaceutical form suitable for injection It also includes sterile aqueous solutions or dispersions and sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile injectable solutions and dispersions. In all cases, the form must be sterile and must be fluid to the extent that easy syringability exists. do not have. The dosage form must be stable under the conditions of manufacture and storage and must be preserved free from the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi. The carrier can be a solvent or The dispersion medium can be, for example, a dispersion medium containing water, polyols such as glycerin, propylene glycol and liquid polyethylene glycol, suitable mixtures thereof, and vegetable oils. Adequate fluidity is achieved through coatings such as lecithin. In the case of dispersions, the required particle size can be maintained by using surfactants and by the use of surfactants. Prevention of the action of microorganisms is achieved by using various antibacterial agents and This can be done with antifungal agents. These drugs include, for example, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, and thimerosal. There is. Optionally, isotonic agents, such as sugars or sodium chloride, may also be included. Prolonged absorption of injectable therapeutic agents can be achieved by using the agents in compositions of agents that delay absorption. Sterile injectable solutions are prepared by incorporating the therapeutic agent in the required amount in the appropriate solvent with various of the other ingredients enumerated above, as required, followed by filtered sterilization. Generally, dispersions are prepared by incorporating the various sterilized active ingredients into a sterile vehicle. The sterile excipient may also be selected from the basic dispersion medium and the ingredients listed above. Contains other necessary ingredients as determined. Sterile powder used to prepare sterile injectable solutions The preferred preparation methods are vacuum drying and lyophilization; Thus, a powder of the active ingredient and the desired additional ingredients from its previously sterile-filtered solution is obtained. The therapeutic agents of the invention can be administered parenterally or intraperitoneally. Solutions of therapeutic agents as pharmaceutically acceptable salts may be prepared in water suitably mixed with a surfactant such as hydroxypropyl cellulose. In addition, the dispersion liquid is glycerin, liquid Can be prepared with lyethylene glycol and mixtures thereof, as well as oils. Under normal conditions of storage and use, these preparations contain preservatives to prevent the growth of microorganisms. The therapeutic agents of the invention may also be present in an inert diluent or in an absorbable, ingestible carrier. May be administered orally with the body or in hard or soft shell gelatin capsules. It can also be sealed in a shell gelatn capsule. may be mixed directly with food and drink foods. For oral administration, the therapeutic agents of the present invention can be mixed with excipients to form orally ingestible tablets, buccal tablets, troches, or capsules. Can be used in the form of cells, elixirs, suspension syrups, wafers, etc. Ru. Such compositions and preparations should contain at least 0.1% therapeutic agent. The proportions of the composition and formulation can of course vary, but can range from about 2% to about 60% of the weight of the unit. The amount of therapeutic agent in such useful compositions is such that a suitable dosage will be obtained. Tablets, troches, pills, capsules, etc. may also contain excipients, disintegrants, such as dicalcium phosphate, and may contain sucrose, lactose, or saccharide. Sweetening agents such as phosphorus, and flavoring agents such as mint, wintergreen oil or cherry flavoring may be added. When the dosage unit form is a capsule, it contains, in addition to materials of the above type, a liquid carrier. may have. Various other materials may be present as coatings or added to otherwise modify the physical form of the dosage unit. For example, tablets, pills, or capsules may be footed with shellac, sugar, or both. Syrups and elixirs contain sucrose as the active compound, sweetening agent. methylparaben and propylparaben as preservatives, dyes, and cherries. Flavoring agents such as horseradish or orange flavor may also be included. Of course, any material used in preparing a dosage unit form must be pharmaceutically pure and in the amount used. Must be qualitatively non-toxic. Additionally, the active compounds of the invention may be formulated into sustained release formulations or and may be mixed into formulations. The term "pharmaceutically acceptable carrier" as used herein includes all This includes all solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic and absorption delaying agents, etc. Such media and drugs for pharmaceutically active substances The use of agents is well known in the art. Unless the conventional vehicle or agent is incompatible with the active ingredient of the present invention, it is contemplated that the active ingredient may be used in therapeutic compositions. Supplementary active ingredients may also be incorporated into the compositions. The invention will now be described by means of specific exemplary embodiments. However, various modifications, additions and It will be obvious that modifications and substitutions may be made without departing from the spirit or scope of the invention. Scavenger - Soluble form of scavenger The protein is obtained by enzymatic degradation of isolated natural protein as follows. It will be done. Primarily, the method of Schneider et al. (Vol. 225. 447 (1980)) from 500 g of liver. So Protein in 500ml of 10mM Tris-HCI, pH 8, 1mM CaCl, 0.15M NaCl and 1mM PMSF (Buffer A): resuspended, sonicated twice, then added 5ml of 20% Triton X-1005. Dissolve with stirring for 30 minutes. Centrifugation (33, GOOrpm, 1 o'clock During this time, insoluble material is removed using a Beckman type 350-meter. Disagreements At a flow rate of 75 ml/h, a M-BSA-coupled 5epharose 4B column (Pharmaeia, 9.8 x 12 cm, containing M-BSA SiC2+ag per ml of gel) was equilibrated with buffer A containing 1% Triron X-100. Inject the supernatant (500 ml). The column is washed overnight with the same buffer, followed by twice the column volume of buffer A containing 40 nM octyl glycoside. The receptor protein is eluted with buffer B (IM NaCl, 20mM Tris HCI, pH 8, 1mM CaCl2. 1mM PMSF, and 40mM octyl glycoside). The resulting fractions are tested for binding ability to Ac-LDL and endotoxin as follows; fractions with binding activity for Ac-LDL and endotoxin-related substances are pooled and subjected to ultrafiltration (Diafl). Concentrate using a membrane (PM30% As1con). The sample buffer is exchanged using a PDIO desalting column (1'harmacia) with 25+g M potassium phosphate, 40mM octylgIJ:l 2', 1 sM PMS Flp) 16.81m. The purified fraction (50 ml) with 1mM BSA affinity was then injected onto an Ultragel-Ha (LKB) column (2,5 x 13 cm) at a flow rate of 75 ml/h and injected into phosphate buffer (25mM) containing 40mM octyl glycoside. Elute the protein with a gradient of ~350*M). 220kD scavenger receptor protein at 100-200mM phosphate concentration. The material was collected and processed as described by Laemmli (Vol. 227. Nature, pp. 680-685 (1970)), incorporated herein by reference. Non-reducing 5DS-PAGE on a 3-10% acrylamide gradient gel as described above. Therefore, it is further purified. A 220 kD protein with Ac-LDL binding activity was cultured in 0.1% SDS, 10 mM Tris-HCI, pH 8 using a 15CO1750 electrophoretic concentrator. electroeluted from the gel. Scavenger receptor protein was similarly purified by a combination of M-BSA affinity chromatography and IgG-DI immunoaffinity chromatography using antibodies against the scavenger receptor protein. All steps are performed at 4°C. Add 100 ml of buffered 1FFLC (0.1% SDS, 0.1% sodium deoxycholate, 1% Non1detP40, 50IIMTris-HCI, pFI8.150mM NaCl, and 1mM PMSF) to 500 g of liver or lung (or a small amount) in 100 ml of buffered M8. of M-BSA affinity purified protein prepared from THP-1 cells). Next Samples were added to 5ep harose 4B (Pharmacia) conjugated with IgG-DI (antibody 4 mg/al gel) prepared as described above at a flow rate of 50+Ill/hour. Inject the pull and recirculate overnight. Column was washed with 50 ml of buffer C5011 buffer D (0.2% Trit. and Buffer E (40 iM octyl glycoside, I)H8 containing 10 mM Tris-HCI). Purify. Then, add 20 ml of buffer E containing 2M guanidine thiocyanate to the binding tube. Elute proteins. After elution, the buffer is converted to buffer A containing 40 mM octyl glycoside using a PDIO column (Pharmacia). The isolated scavenger receptor protein is then proteolyzed using serine-, sulfhydryl-, metallo-, or aspartyl proteases to cleave the receptor and free the membrane-bound region from the extracellular region containing the ligand-binding site. . Alternatively, cyanogen bromide can be used to cleave at the sulfhydryl groups in the spacer region. A soluble form of the scavenger receptor protein can be produced by (see Cross, Academic Press, N, Y., (1967) g: 238, in Meth, Enz. (Heis, ed.)). Soluble form of scavenger receptor protein -1, which is derived from DNA-mediated loss of scavenger protein. Proteins can also be obtained using recombinant DNA methods. There is no particular mention Insofar, methods for the production of recombinant soluble scavenger receptors have been described by Manistis et al. (Molecular Clonin A Laboratory Model (1982) Cold Spring Harbor Laboratory) and Davis et al. hods In Molecular Biolo (1988) Standards such as those described by Elsevier 5 Scientific Publishing Co., Inc., NY) It was a semi-standard process. The nucleic acid sequence of the scavenger receptor protein is determined as follows. separate Scavenger receptor proteins were purified using JIP-300 (BrownIee Laboratory, Emeryville, CA) reverse phase HPLC. Further refinement. The receptor is solubilized in 70% formic acid. It is then cleaved with anobromide (CNBr) (25 mg in 7100 ml) overnight at room temperature to form multiple cleavage fragments. Fragment to RP-300 Separate by chromatography on ram. One of the fragments was isolated and applied Biosystem+*s Am 1n. s Ac1d 5equencer (Foster C1ty, CA) and subjected to automated amino acid analysis. A second 5 sequence is obtained from a similar CNBr digestion using the gel electrophoresis/immunoplot method of Matsudaira (J, Biol, Chew, (1987) 262:10035-10038). A size-fractionated (less than 800 base pairs) cDNA library in λZAPU (Stratogene) is prepared as follows. Poly(z)' m RNA was isolated from bovine lung by acid guanidinium thiocyanate/phenol/chloroform extraction and used as described by Chomczynski (Anal, Biochem, (19B?) 162:156-159). Construct a randomly primed cDNA library. 5-Fluorodeoxyfluoride was used as described by Harbener et al. 32p end-labeled 41-mer oligonucleotide probe containing lysine (F), ANTCAGTANINI TN2TCN2GANIAA NIGAGGCN 2AANI NITXNITN2GANG C(7) pool. Clean. For each pool, sx to 5 plaques were screened by hybridization zeta1 at 37°C and washed six times with 50"C1' in SSC (Maniatls et al., supra, p447) containing 0.1% SDS. Putative positive clones were purified and excised in vivo into a PicoBlue (pBluescript) derived plasmid (5hort, ibid.). Southern blot hybridization (5 Other (1975) L "Dan L" difference 1498:503) inserted part Screening minutes. Five positive clones (including pBsR? and pBSR3'4) were sequenced by the dideoxy chain termination method. All included sequences are peptides and was coded. Additionally, overlapping clones were primed with oligo(dT). It was isolated from a derived bovine lung cDNA library. SEQ ID NOs: 3 and 4 show the nucleic acid sequence and corresponding deduced amino acid sequence of a soluble scavenger receptor derived from a bovine clone, respectively. Human sequences may similarly be derived, for example, by the method of Matsumoto et al. (roc, Natl. Acad, Set, (1990) 87:9133-9137). Human nucleic acid sequence and amino acid sequence The columns are shown as SEQ ID NO: 1 and 2, respectively. Vectors for the expression of soluble secreted scavenger receptor type I (bsRI) and type n (b sRn) are generated as follows. Miniphosphorus-linked saccharide A DNA fragment containing the protein (MAG) leader sequence and part of the fibronectin gene is obtained by digesting the vector pMIT (a gift from Richard Hynesll of MIT) with Ba and Xbal. This is ligated to the pcDNA1 backbone created by digesting pXbSR3 (pcDNA1/type) with BarH1/Xbal. The pcDNA I/type II (pXbSR3) vector shown in Figure 2A has additional features (see Rohrer et al., Nature). The resulting vector is called DNA 1/MAG (see Figure 2A). The pcDNA17MAG vector is digested with Xhol, blunted with Klenow fragment, and further digested with Xbal to generate a linear fragment with a 5' blunt end and a 3° cohesive Xbal end. This construct is then ligated to the polymerase chain reaction (PCR) product digested with Smal and Xbal as described below to form a construct called p cDNA1/common (see Figure 2B). The term "common" derives from the fact that the PCR product contains sequences common to both types of bovine scavenger receptor cDNAs. The region common to secreted bSRI and bSR■ is PCRTechnolo ゛ Rinci Ies and All'cat'ons for DNA Am 1ificat () Ienry R, Ernieh, 's collection) 5 tockton Press, 1989. and by using a PCR method as described in Freeman et al. A 620 base pair fragment is generated using the oligonucleotides MKSec 5° and MKTK8 by PCR as a template. This fragment is combined with Smal (a site within primer MJ [56C5') and c DNA sequence) and ligated into the pCDNA I-MAG construct as above to create rpcDNAl/common.pcDNAl/common is at its 5' end, encoding amino acids 77-227 of the scavenger receptor. directly linked to the cDNA It encodes a matching MAG leader sequence. Its construction converts lysine at position 77 of the receptor into two amino acids, argine-glycine. This site is cleaved during transport of the primary translation product of the MA G-receptor into the endoplasmic reticulum, and then the N-terminal It is expected to be a amino acid. The remainder of the secreted bsR1 is derived from the full length pc DNA1/type l (pXbSR?, see Kodama et al. (1990) 343:531-535) encoding the 3° portion of the gene from Xbal-Xbal. Get the fragment and This was ligated to pCDNA I/common vector digested with Xbal to create a construct called pCDNA I/bSR-r-5ee (see Figure 2c). Therefore, add it. The vector pCDNA1/bSR-U-see is similarly generated using the Xbal-Xba17 fragment from pCDNAI/type II (pXbSR3) as described by Rohrer et al. (Nature (1990) 343:531-535). The region encoding secreted bsR1, including the MAG leader, is excised from pcDNA1/bSR-I-see using Bindm and ligated into the old ndI11 digested PRc/CMV (Invitrogen) backbone as shown in Figure 2D. The same method is used to transfer secreted bSRII to pRc/CMV If. The polybrene method described by Maniastis et al. pRc/CMV/bSR-1-see CHO host cells using pRc/CMV/bSR-1-see Baek transfect with a sterilizer. Neomycin-resistant cells are selected using the neomycin analog G41B (Gibco). 0418-resistant colonies were randomly picked and subjected to 30 min lysis followed by lysis with 400 μCi/*l of 35S-methionine, and lysis. Immunoprecipitation with anti-peptide antibodies raised against peptides in tin-rich regions A reaction is used to screen for protein product expression. Media from positive colonies is tested for the presence of secreted bSR-1 as follows. Cells were cultured in the presence of 80 μCi/ml 353-methionine for 5 hours; After that, collect the medium. Add PMSF at 1-M and leupeptin at 0.1+mM. The medium is then centrifuged at L50Qxg for 15 minutes to remove cell debris. mark The culture medium is diluted 3:1 with buffer A (20 nM Tris, pH 8.0, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2) containing 2 mg/ml bovine serum albumin. To this are added 25 μI AG-PolyG peas (phar+5acia) that have been washed in buffer A. The mixture is stirred and placed in a low cheetah at -4°C overnight. The beads were then washed twice with buffer A and sampled. By adding 30 μm of pull buffer and boiling, protein 7 is eluted. The eluate was run on an 8% Laemmli gel, which was dried and transferred to a pre-flushed column. Expose to Danok XR7 film. A 72 kD protein was strongly observed in transfected cells, but not in untransfected CHO cells (°C). The usefulness of soluble scavenger receptor proteins was demonstrated by the use of known scavenger receptor ligands (such as radiolabeled endotoxin or 12' I-AcLDL) in scavenger receptor-mediated interactions. Determined by measuring its ability to block cellular metabolism. Set. The fact that soluble receptor proteins are inhibited by the same ligands as their membrane-bound forms suggests that such ligands can be Can interfere with the binding of sex morphomorphic receptors to Po1yG beads (Phar+5acia) It is shown by For example, the inhibitors polyG1 poly, maleylated BSA, and AcLDL are good competitors at 400 μg/+*l, whereas polyC, LDL1, and BSA do not compete. This indicates that the soluble receptor protein has similar binding specificity and thus has utility as a full-length membrane-bound form. This bead-binding assay measures the binding of endotoxin, lipid II/A, and similar molecules to soluble forms of scavenger receptors. can be used to The binding capacity of scavenger receptors to lipid IVA was determined by Raetz et al. ) 263:14802-14807) Ru. Soluble receptor protein binding activity was determined according to the method of Schneider et al. (ibid.) and Daniel et al. (Vol. 258. J. Biol. Chew, pp. 4606-4611 (1983)), each of which is incorporated herein by reference. It is also determined by filter binding and ligand bronoting analysis performed with some modifications. Ligand binding specificity is similarly determined by It is also measured by Finitei chromatography. 4hM Octyl Glycosy M-BSA spermatozoa having binding activity for endotoxin-related substances in buffer solution 4111 containing The prepared soluble protein is injected onto a multinucleic acid binding agarose column (AG-POLY 5er ies, pre-packed column Pharmacia). After washing with the same buffer, the bound proteins are eluted with 5 parts of elution buffer. Proteins useful as therapeutic agents in the treatment of endotoxemia include the proteins of the present invention. It is quality. From the foregoing description and examples, it can be seen that soluble forms of scavenger receptor proteins can be prepared by purification from a variety of suitable mammalian tissues followed by proteolysis or by using recombinant DNA methods. be understood Ru. These proteins can bind to endotoxin-related substances and, therefore, separate endotoxins and other endotoxin-related substances found in the blood circulation of patients suffering from septic shock. It is useful as a therapeutic agent to promote separation and cleaning. The invention relates to specific forms of ponds without departing from the spirit or essential characteristics of the invention. It can be carried out in the following manner. The embodiments of the invention are therefore illustrative in all respects of the scope of the invention, which is indicated by the appended claims rather than by the foregoing description. shown, but not limited to. Therefore, within the scope of the intent of the claim and the corresponding scope. Any modifications that may be made are intended to be included therein. (LIXT remainder)

【旦表 （Ｅ）国：　アメリカ合衆国 （Ｂ）出願日　：　１９９１年２月２２日（ｉｖ）関連住所： ）、２１１００ （Ｃ）市：　アトランタ （＾）出願番号：　ＵＳ　０７７６６２．２２７（Ｂ）出願日　：　１９９１年 ２月２２日（ｖｌｌ）優先権主張の出願データ： （＾）出願番号：　ＵＳ　０７／２７２００２（Ｂ）出願日　：　Ｈ８８年１１ ８１５日（ｖｌｉｉ＞弁護士／代理人清報： （＾）氏名：　バブスト、バトレア　エル（Ｂ）登録番号：　３１．２８４ （Ｃ）照会／記録番号：　ＭＩＴＳ３Ｓｌｌ（ｘｉ）電話回線情報 （＾）電話：　４０４−５７２−６５０１１（Ｂ）テレファックス７４０４−５ ７２−６５５５（２）配列番号１の情報： （＋）配列の特徴： （＾）長さ：　２０３７塩基対 （Ｂ）型：　核酸 （Ｃ）鎖の数：　一本鎖 （Ｄ）トポロジー：　直鎖状 ｍ）配列の種類：　ｃＤＮＡ （Ｉ　Ｉ　１）ハイポセティカル：Ｎ０（１ｖ）アンチセンス二Ｎ０ （Ｖ）フラグメント型：Ｎ末端 （ｖｌ）起源： （Ａ）生物名：　ｈｏｍｏ　５ａｐｌｅｎ（ｖｌｌ）直接の起源： （Ａ）ライブラリー二Ｔ■Ｐ−１ Ｌｙｓ　Ａｇｎ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ＾ ｌａ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｉｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　５ａｒＶａｌ　Ｐｈａ　Ｃｙ ｓ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓａｒ　Ｓｅｒ工１ａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ 　Ｃｙｓ　ＬｙｌｉＩｌａ　Ａｒｇ４２Ｇ　４２５　４３Ｇ ロ　ロ　ロ　ロ　Ｑ　ロ １　Ｎ　ψ　！　ロ　１ ＋＋ｌ　Ｆ４　Ｎ　ＦＩ　ＰＩ Ａｓｎ　Ｇ］、ｕ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ 　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ工１ａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ４２０　４２５　４ ３Ｏ ＩＬｓ　Ａｒｑ　Ｇｌｎ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ＾ｒ９＾１ａ　Ｃｙｓ　Ｓｅ ｒ　ｌ１ｉｓ　Ｊｌｕ！ｐ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌ■ ７１７°　Ｉ　クィデ１１ Ｆ／６７ ＦＩＧ、　２ｃ 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法筒１８４条の７第１項）道連ｍ匠 ［１９９２年８月３日に国際事務局が受け取った；オリジナル請求項２および１ ５が取り消された；請求項３−１４および１６−２５は、請求項２−１３および １４−２３に番号変更され、他の請求項は変わっていない（３頁）］１、内毒素 血症を治療するための方法であって：治療を必要とする患者に、実質的に純粋な マクロファージスカベンジャー受容体タンパク質の細胞外部分のポリペプチドフ ラグメントの、内毒素と結合するのに有効な量を、投与する工程であって、該受 容体タンパク質が、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で各々約７７．０００ダ ルトンの見掛けの分子量を有する、３つのサブユニットから形成されており、グ リコジル化した時の該受容体タンパク質が、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上 で約２２０，０００ダルトンの見掛けの分子量を有する、工程、および、 アセチル化低密度リポタンパク質に対する結合能が、少な（とも１．４ｍｇアセ チル−ＬＤＬタンパク質／　ｍ　ｇ受容体タンパク質である工程を包含する、方 法。 ２、前記フラグメントがコラーゲン結合領域を特徴する請求項１に記載の方法。 ３、前記スカベンジャー受容体タンパク質の前記フラグメントがスペーサー領域 を特徴する請求項２に記載の方法。 ４、前記フラグメントがαらせん状超らせん領域を特徴する請求項１に記載の方 法。 ５、前記フラグメントがシスティンリッチ領域を特徴する請求項１に記載の方法 。 ６、実質的に精製された固有のスカベンジャー受容体タンパク質から生化学的手 法により前記フラグメントを開裂する工程を特徴する請求項１に記載の方法。 ７、適切な宿主発現系内で前記スカベンジャー受容体タンパク質をコードする単 離ＤＮＡフラグメント由来の前記フラグメントを発現させる工程を特徴する請求 項ｌに記載の方法。 ８、前記フラグメントが１ミリリツトルあたり約０．５から５．０マイクログラ ムタンパク質であるアセチル化低密度リポタンパク質に対する親和性を有する、 請求項１に記載の方法。 ９、前記フラグメントが化学的に改変された低密度リポタンパク質と結合し得る 、請求項１に記載の方法。 １０、前記フラグメントが、ポリビニルスルフェート、マレイル−ＢＳＡ、フコ イダン、およびプリンポリヌクレオチド、ポリ［１−Ｃ］、ポリ［Ｉ］、および ポリ［Ｇ］からなる群から選択される、負電荷を膏する高分子と結合し得る、請 求項１に記載の方法。 １１、前記フラグメントが内毒素のリビドＡ部分と結合する、請求項１に記載の 方法。 １２、前記フラグメントがグラム陰性菌と結合する、請求項１に記載の方法。 １３、内毒素血症を治療するための薬剤組成物であってよ実質的に純粋なマクロ ファージスカベンジャー受容体タンパク質の細胞外部分のポリペプチドフラグメ ントであって、該受容体タンパク質が、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で各 々約７７．０００ダルトンの見掛けの分子量を有する、３つのサブユニ・ノドか ら形成されており、グリコジル化された該受容体タンパク質が、５ＤＳ−ポリア クリルアミドゲル上で約２２０，０００ダルトンの見掛けの分子量を有し、アセ チル化低密度ツボタンパク質に対する結合能が少な（とも１．４ｍｇアセチル− ＬＤＬタンパク’Ｍ／ｍｇ受容体タンパク質であり；および 薬学的に受容可能な担体を含有する、組成物。 １４、前記フラグメントが、コラーゲン結合領域を特徴する請求項１３に記載の 薬剤組成物。 １５、前記フラグメントが、スペーサー領域を特徴する請求項１４に記載の薬剤 組成物。 １６、前記フラグメントが、αらせん状超らせん領域を特徴する請求項１３に記 載の薬剤組成物。 １７、前記フラグメントが、システインリ・ノチ領域を特徴する請求項１３に記 載の薬剤組成物。 １８、前記フラグメントが、本質的に適切な宿主発現系内の前記スカベンジャー 受容体タンパク質からなるタンノずり質をコードするＤＮＡフラグメントから発 現させられたフラグメントである、請求項１３に記載の薬剤組成物。 １９．１ミリリツトルあたり約０．　５から５．　０マイクログラムタンパク質 であるアセチル化低密度リポタンパク質に対する親和性を有することを特徴とす る請求項１３に記載の薬剤組成物。 ２０、ポリビニルスルフェート、マレイル−Ｂ　Ｓ　Ａ、フコイダン、およびプ リンポリヌクレオチド、ポリ［Ｉ−Ｃ］、ポリ［１］、およびポリ［Ｇ］からな る群から選択される負電荷を有する高分子に対する結合能を有することを特徴と する請求項１３に記載の薬剤組成物。 ２１、化学的に改変された低密度リポタンパク質に対する結合能を有することを 特徴とする請求項１３に記載の薬剤組成物。 ２２、内毒素のリピドＡ部分と結合することを特徴とする請求項１３に記載の薬 剤組成物。 ２３、グラム陰性菌と結合することを特徴とする請求項１３に記載の薬剤組成物 。 補正書の写しく翻訳文）提出書く特許法第１８４条の８）平成５年８月２３日 １、特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ９２１０１３７０ ２、発明の名称 内毒素血症の治療 ３、特許出願人 住所　アメリカ合衆国　マサチューセッツ　０２１３９ケンブリツジ、マサチュ ーセッツ　アベニューフッ名称　マサチューセソツ　インステイテコート　オブ テクノロジー ４、代理人 住所　〒５４０　大阪府大阪市中央区域見−下目２番２７号５、補正書の提出年 月日 逍３」１１匣 １、内毒素血症を治療するための方法であって：治療を必要とする患者に、実質 的に純粋なマクロファージスカベンジャー受容体タンパク質の細胞外部分のコラ ーゲン結合領域を含有するポリペプチドフラグメントの内毒素と結合するのに有 効な量を投与する工程であって、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で各々約７ ７．０００ダルトンの見掛けの分子量を有する、３つのサブユニットから形成さ れる、マクロファージの表面に存在するマクロファージスカベンジャー受容体タ ンパク質であり、グリコジル化した該受容体タンパク質が、５ＤＳ−ポリアクリ ルアミドゲル上で約２２０゜０００ダルトンの見掛けの分子量を有する、工程、 および、アセチル化低密度リポタンパク質に対する結合能が少なくとも１．４ｍ ｇアセチル−ＬＤＬタンパク質／ｍｇ受容体タンパク質である、工程を包含する 、方法。 ２、前記スカベンジャー受容体タンパク質の前記フラグメントがスペーサー領域 を特徴する請求項１に記載の方法。 ３、前記フラグメントがαらせん状超らせん領域を特徴する請求項ｌに記載の方 法。 ４、前記フラグメントがシスティンリッチ領域を特徴する請求項ｌに記載の方法 。 ５、実質的に精製された固有のスカベンジャー受容体タンパク質から生化学的手 法により前記フラグメントを開裂する工程を特徴する請求項ｌに記載の方法。 ６、適切な宿主発現系内で前記スカベンジャー受容体タンパク賃をコードする単 離ＤＮＡフラグメント由来の前記フラグメントを発現させる工程を特徴する請求 項１に記載の方法。 ７、前記フラグメントが１ミリリ・ノトルあたり約０．５力）ら５．０ミリグラ ムタンノずり質であるアセチルイヒ低密度電ノボタンパク質に対する親和性を有 する、請求項１（こ８己載の方法。 ８、前記フラグメントが化学的に改変された低密度）ノボタンパク貫と結合し得 る、請求項１に記載の方法。 ９、前記フラグメントが、ポリビニルスルフェートイル−Ｂ　Ｓ　Ａ１　フコイ ダン、およびブリンボＩＪヌクレオチド、およびポリ［Ｇ］からなる群から選択 される、負電荷を有する高分子と結合し得る、請求項１に記載の方法。 １０、前記フラグメントが内毒素のＩＪビドＡ部分と結合する、請求項１に記載 の方法。 １１、前記フラグメントがグラム陰性菌と結合する・ｚ請求項１に記載の方法。 １２、内毒素血症を治療するための薬剤組成物であって：実質的に純粋なマクロ ファージスカベンジャー受容体タンパク質の細胞外部分のコラーゲン結合領域を 含有するボ１ノ６ブチドフラグメントであって、マクロファージスカヘンシャー 受容体タン、−ｆり質が、ＳＤＳ−ボＩＪアク１ノルアミドゲルテ各々約７７、 ０００ダルトンの見掛１すの分子量を有する、３つのサブユニットから形成され 、マクロファージの表面１こ存在し、グリコジル化した該受容体タンパク質が、 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で約２２０，０００ダルトンの見掛けの分子 量を有し、アセチル化低密度リポタンパク質に対する結合能が少なくとも１．４ ｍｇアセチル−しＤＬタンパク質／ｍｇ受容体タンパク質であり、；および薬学 的に受容可能な担体を含有する、組成物。 １３、前記フラグメントがスペーサー領域を特徴する請求項１２に記載の薬剤組 成物。 １４、前記フラグメントがαらせん状超らせん領域を特徴する請求項１２に記載 の薬剤組成物。 １５、前記フラグメントがシスティンリッチ領域を特徴する請求項１２に記載の 薬剤組成物。 １６、前記フラグメントが本質的に適切な発現系内の前記スカベンジャー受容体 タンパク質からなるタンパク質をコードするＤＮＡフラグメントから発現された フラグメントである、請求項１２に記載の薬剤組成物。 】７、　１ミリリツトルあたり約０．　５から５．　０ミリグラムタンパク質で あるアセチル化低密変りボタンバク質に対する親和性を有することを特徴とする 請求項１２に記載の薬剤組成物。 １８、ポリビニルスルフェート、マレイル−Ｂ　Ｓ　Ａ，　フコイダン、および プリンポリヌクレオチド、およびポリ［Ｇ］からなる群から選択される、負電荷 を有する高分子に対する結合能を有することを特徴とする請求項１２に記載の薬 剤組成物。 １９．　化学的に改変された低密度リポタンパク質に対する結合能を有すること を特徴とする請求項１２に記載の薬剤組成物。 ２０、内毒素のリピドＡ部分と結合することを特徴とする請求項１２に記載の薬 剤組成物。 ２１、グラム陰性菌と結合することを特徴とする請求項１２に記載の薬剤組成物 。 国際調査報告[Dan table (E) Country: United States of America (B) Application date: February 22, 1991 (iv) Related address: ), 21100 (C) City: Atlanta (^) Application number: US 077662.227 (B) Application date: 1991 February 22nd (vll) Priority claim application data: (^) Application number: US 07/272002 (B) Application date: November 1988 815th (vlii>Lawyer/Agent News: (^) Name: Babst, Batrea L (B) Registration number: 31.284 (C) Inquiry/record number: MITS3Sll (xi) Telephone line information (^) Telephone: 404-572-65011 (B) Telefax 7404-5 72-6555 (2) Information on sequence number 1: (+) Characteristics of array: (^) Length: 2037 base pairs (B) type: Nucleic acid (C) Number of strands: single strand (D) Topology: Linear m) Sequence type: cDNA (I I 1) Hypothetical: N0 (1v) Antisense 2 N0 (V) Fragment type: N-terminus (vl) Origin: (A) Organism name: homo 5aplen (vll) Direct origin: (A) Library 2 T P-1 Lys Agn Cys Ser Val Ser Ser Thr Asn^ la Asn Asp Ila Thr Gin 5arVal Pha Cy s Pha Gly Arg Glu Sar Ser Engineering 1a Glu Glu Cys LyliIla Arg42G 425 43G Ro Ro Ro Ro Q Ro 1　N　ψ　! B 1 ++l　F4　N　FI　PI Asn G], u Val Phe Cys Pha Gly Lys Glu Ser Ser engineering 1a Glu Glu Cys Arg420 425 4 3O ILs Arq Gln Trp Gly Val^r9^1a Cys Se r　l1is　Jlu! p Glu Asp Ala Gl ■ 717° I Quide 11 F/67 FIG, 2c Copy and translation of written amendment) Submission (Patent Act Article 184-7, Paragraph 1) Doren M Craftsman [Received by the International Bureau on August 3, 1992; original claims 2 and 1 5 is canceled; claims 3-14 and 16-25 are canceled; claims 3-14 and 16-25 are 14-23, other claims unchanged (page 3)] 1. Endotoxin 12. A method for treating blood clots: providing a patient in need of treatment with a substantially pure Polypeptide fragments of the extracellular portion of the macrophage scavenger receptor protein administering an amount of the fragment effective to bind endotoxin, the step of Each protein contained approximately 77,000 Da on a 5DS-polyacrylamide gel. It is formed from three subunits with the apparent molecular weight of Gluton. The receptor protein when lycodylated was shown on a 5DS-polyacrylamide gel. having an apparent molecular weight of about 220,000 Daltons, and The binding ability to acetylated low-density lipoprotein is small (both 1.4 mg acetylated chill-LDL protein/mg receptor protein. Law. 2. The method of claim 1, wherein the fragment features a collagen binding region. 3. The fragment of the scavenger receptor protein is a spacer region 3. A method according to claim 2, characterized in that: 4. The method according to claim 1, wherein the fragment is characterized by an α-helical superhelical region. Law. 5. The method of claim 1, wherein the fragment is characterized by a cysteine-rich region. . 6. Biochemical techniques from substantially purified native scavenger receptor proteins 2. A method according to claim 1, characterized by the step of cleaving said fragments by a method. 7. Insert the monoenzyme encoding the scavenger receptor protein in a suitable host expression system. A claim characterized by the step of expressing the fragment derived from an isolated DNA fragment. The method described in Section 1. 8. The fragments contain about 0.5 to 5.0 micrograms per milliliter. has an affinity for acetylated low-density lipoprotein, which is a mu protein. The method according to claim 1. 9. The fragment is capable of binding to chemically modified low density lipoproteins , the method of claim 1. 10, the fragment is polyvinyl sulfate, maleyl-BSA, fuco idan, and purine polynucleotides, poly[1-C], poly[I], and A polymer capable of binding to a negatively charged polymer selected from the group consisting of poly[G] The method described in claim 1. 11. The fragment according to claim 1, wherein the fragment binds to the Libido A portion of endotoxin. Method. 12. The method of claim 1, wherein the fragment binds Gram-negative bacteria. 13. A pharmaceutical composition for treating endotoxemia, comprising a substantially pure macrophage. Polypeptide fragments of the extracellular portion of the phage scavenger receptor protein 5DS-polyacrylamide gel. Three subunit nodes each having an apparent molecular weight of approximately 77,000 Daltons. The glycosylated receptor protein is formed from 5DS-polya It has an apparent molecular weight of approximately 220,000 Daltons on acrylamide gel and is Low binding ability to chilled low-density acupoint proteins (both 1.4 mg acetyl- LDL protein'M/mg receptor protein; and A composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier. 14. The fragment according to claim 13, wherein the fragment is characterized by a collagen binding region. Pharmaceutical composition. 15. The agent according to claim 14, wherein the fragment is characterized by a spacer region. Composition. 16. The fragment according to claim 13, wherein the fragment is characterized by an α-helical superhelical region. Pharmaceutical compositions. 17. The fragment according to claim 13, wherein the fragment is characterized by a cysteine region. Pharmaceutical compositions. 18. said fragment essentially contains said scavenger in a suitable host expression system. Generated from a DNA fragment that encodes a tannoplasmic protein consisting of a receptor protein. 14. The pharmaceutical composition according to claim 13, which is an expressed fragment. Approximately 0.0ml per 19.1ml. 5 to 5. 0 microgram protein characterized by having an affinity for acetylated low-density lipoproteins that is 14. The pharmaceutical composition according to claim 13. 20, polyvinyl sulfate, maleyl-BSA, fucoidan, and protein phosphorus polynucleotide, poly[I-C], poly[1], and poly[G] characterized by having the ability to bind to negatively charged polymers selected from the group of The pharmaceutical composition according to claim 13. 21, has the ability to bind to chemically modified low-density lipoproteins. 14. A pharmaceutical composition according to claim 13, characterized in that: 22. The drug according to claim 13, which binds to the lipid A moiety of endotoxin. agent composition. 23. The pharmaceutical composition according to claim 13, which binds to Gram-negative bacteria. . Copy and translation of amendment) Article 184-8 of the Patent Act submitted on August 23, 1993 1. Display of patent application PCT/US92101370 2. Name of the invention Treatment of endotoxemia 3. Patent applicant Address: United States, Massachusetts, 02139 Cambridge, Massachusetts - Sets Avenue Name Massachusetts Instate Court of technology 4. Agent Address: 〒540, Osaka City, Osaka Prefecture, Chuo District, Osaka Prefecture, Osaka Prefecture, Osaka Prefecture, Chuo District, No. 2-27, No. 5, Year of submission of the amendment. time Sho 3” 11 boxes 1. A method for treating endotoxemia, wherein the patient in need of treatment Collage of the extracellular portion of the purified macrophage scavenger receptor protein A polypeptide fragment containing a protein-binding domain that is useful for binding endotoxins. administering an effective amount of about 70% each on a 5DS-polyacrylamide gel. Formed from three subunits with an apparent molecular weight of 7.000 Daltons macrophage scavenger receptors present on the surface of macrophages. The glycosylated receptor protein is 5DS-polyacrylate. having an apparent molecular weight of about 220°000 Daltons on a Ruamide gel; and a binding capacity for acetylated low density lipoprotein of at least 1.4 m g acetyl-LDL protein/mg receptor protein. ,Method. 2. The fragment of the scavenger receptor protein is a spacer region A method according to claim 1, characterized in that: 3. The method according to claim 1, wherein the fragment is characterized by an α-helical superhelical region. Law. 4. The method according to claim 1, wherein the fragment is characterized by a cysteine-rich region. . 5. Biochemical techniques from substantially purified native scavenger receptor proteins A method according to claim 1, characterized by the step of cleaving said fragments by a method. 6. Expression of a monomer encoding the scavenger receptor protein in a suitable host expression system. A claim characterized by the step of expressing the fragment derived from an isolated DNA fragment. The method described in Section 1. 7. The fragment has a force of about 0.5 milligrams per milliliter (approximately 0.5 milligrams) to 5.0 milligrams. It has an affinity for acetylated low-density electro-novoproteins, which are mutanthyl proteins. A method according to claim 1 (hereinafter referred to as claim 8). 8. The fragment is capable of binding to a chemically modified (low-density) 2. The method according to claim 1. 9. The fragment is polyvinyl sulfateyl-BSS A1 fucoy selected from the group consisting of Dan, and Blimbo IJ nucleotide, and poly[G] 2. The method according to claim 1, wherein the method is capable of binding to a negatively charged macromolecule. 10. According to claim 1, said fragment binds to the IJ bid A portion of endotoxin. the method of. 11. The method of claim 1, wherein the fragment binds to Gram-negative bacteria. 12. A pharmaceutical composition for treating endotoxemia, comprising: substantially pure macrophages; The collagen-binding region of the extracellular portion of the phage scavenger receptor protein A bo1no6butide fragment containing macrophage skachenscher Receptor protein and receptor protein are each about 77, Formed from three subunits with an apparent molecular weight of 1,000 daltons , the glycosylated receptor protein is present on the surface of macrophages, Approximately 220,000 daltons apparent molecule on SDS-polyacrylamide gel and has a binding capacity for acetylated low density lipoprotein of at least 1.4. mg acetyl-DL protein/mg receptor protein; and pharmaceutical 1. A composition comprising a commercially acceptable carrier. 13. The pharmaceutical combination according to claim 12, wherein the fragment is characterized by a spacer region. A product. 14. Claim 12, wherein said fragment is characterized by an α-helical supercoiled region. pharmaceutical composition. 15. The fragment according to claim 12, wherein the fragment is characterized by a cysteine-rich region. Pharmaceutical composition. 16. Said scavenger receptor in an expression system for which said fragment is essentially suitable. expressed from a DNA fragment encoding a protein consisting of 13. A pharmaceutical composition according to claim 12, which is a fragment. ]7. Approximately 0.0 per milliliter. 5 to 5. With 0 mg protein Characterized by having an affinity for certain acetylated low-density bacterium Pharmaceutical composition according to claim 12. 18, polyvinyl sulfate, maleyl-BSA, fucoidan, and a negative charge selected from the group consisting of purine polynucleotides, and poly[G] The drug according to claim 12, which has the ability to bind to a polymer having agent composition. 19. Possess the ability to bind to chemically modified low-density lipoproteins The pharmaceutical composition according to claim 12, characterized in that: 20. The drug according to claim 12, which binds to the lipid A moiety of endotoxin. agent composition. 21. The pharmaceutical composition according to claim 12, which binds to Gram-negative bacteria. . international search report

Claims (25)

【特許請求の範囲】[Claims] １．内毒素血症を治療するための方法であって：血液循環中に可溶な非免疫グロ ブリンポリペプチドであり、内毒素に対する結合能を有する、治療薬を供給する 工程；および 薬学的に受容可能な担体内の該薬剤を、内毒素血症の抑制に有効な量、患者の循 環系に投与する工程を包含する方法であって、 該薬剤が、血液循環系内で内毒素関連物質と結合して、弱められた毒性および病 原性を有する、結合体を形成する薬剤である、方法。1. CLAIMS 1. A method for treating endotoxemia, comprising: is a bulin polypeptide and has the ability to bind endotoxins, providing a therapeutic agent process; and The drug in a pharmaceutically acceptable carrier is administered to the patient's circulation in an amount effective to inhibit endotoxemia. A method comprising administering to a cyclic system, the method comprising: The drug binds to endotoxin-related substances in the blood circulation, resulting in reduced toxicity and disease. 12. A method in which the agent is a conjugate-forming agent that has conjugate properties. ２．前記供給工程がスカベンジャー受容体タンパク質のフラグメントを含有する 治療薬を供給する工程を包含し、該フラグメントがスカベンジャー受容体タンパ ク質の細胞外部分を含有するフラグメントである、請求項１に記載の方法。2. said providing step contains a fragment of a scavenger receptor protein. providing a therapeutic agent, wherein the fragment is a scavenger receptor protein. 2. The method according to claim 1, wherein the fragment contains the extracellular part of the protein. ３．前記供給工程がコラーゲン結合領域を供給する工程を包含する、請求項２に 記載の方法。3. 3. The method of claim 2, wherein the step of providing comprises providing a collagen binding region. Method described. ４．前記供給工程がスペーサー領域を含有するスカベンジャー受容体タンパク質 のフラグメントを供給する工程を包含する、請求項３に記載の方法。4. a scavenger receptor protein in which the supplying step contains a spacer region; 4. The method of claim 3, comprising providing a fragment of. ５．前記供給工程がαヘリックス構造の超らせん領域を供給する工程を包含する 、請求項２に記載の方法。5. The supplying step includes a step of supplying a superhelical region having an α-helical structure. , the method according to claim 2. ６．前記供給工程がシステインリッチ領域を供給する工程を包含する、請求項２ に記載の方法。6. Claim 2, wherein the supplying step includes supplying a cysteine-rich region. The method described in. ７．前記供給工程が実質的に精製された固有のスカベンジャー受容体タンパク質 由来の前記フラグメントを生化学的手法により開裂する工程を包含する、請求項 ２に記載の方法。7. said providing step substantially purified native scavenger receptor protein; Claim comprising the step of cleaving said fragment derived from a biochemical method by a biochemical method. The method described in 2. ８．前記供給工程が組換えＤＮＡ技術により生産される前記スカベンジャー受容 体タンパク質の類似体を供給する工程を包含する、請求項２に記載の方法。8. said feeding step is said scavenger receptor produced by recombinant DNA technology; 3. The method of claim 2, comprising the step of providing an analog of a body protein. ９．前記供給工程が１ミリリットルあたり約０．５から５．０マイクログラムタ ンパク質であるアセチル化低密度リポタンパク質に対する親和性を有することを 特徴とする治療薬を供給する工程を包含する、請求項１に記載の方法。9. The feeding process is approximately 0.5 to 5.0 micrograms per milliliter. It has an affinity for the protein acetylated low-density lipoprotein. 2. The method of claim 1, comprising the step of providing a characterized therapeutic agent. １０．前記供給工程が化学的に改変された低密度リボタンパク質に対する結合能 を有することを特徴とする治療薬を供給する工程を包含する、請求項１に記載の 方法。10. Binding ability to chemically modified low density riboproteins in the supply step 2. A therapeutic agent according to claim 1, comprising the step of providing a therapeutic agent characterized in that Method. １１．前記供給工程が、ポリビニルスルフェート、マレイル−ＢＳＡ、フコイダ ン、およびプリンポリヌクレオチド、ポリ［Ｉ−Ｃ］、ポリ［Ｉ〕、およびポリ ［Ｇ］からなる群がら選択される負電荷を有する高分子に対する結合能を有する ことを特徴とする治療薬を供給する工程を包含する、請求項１に記載の方法。11. In the supply step, polyvinyl sulfate, maleyl-BSA, Fucoida and purine polynucleotides, poly[I-C], poly[I], and polynucleotides. has the ability to bind to a negatively charged polymer selected from the group consisting of [G] 2. The method of claim 1, comprising the step of providing a therapeutic agent characterized in that: １２．前記供給工程が内毒素のリピドＡ部分と結合する治療薬を供給する工程を 包含する、請求項１に記載の方法。12. the step of supplying a therapeutic agent that binds to the lipid A portion of endotoxin; 2. The method of claim 1, comprising: １３．前記供給工程がグラム陰性菌と結合する治療薬を供給する工程を包含する 、請求項１に記載の方法。13. The supplying step includes supplying a therapeutic agent that binds to Gram-negative bacteria. , the method of claim 1. １４．内毒素血症を治療するための薬剤組成物であって：血液循環系中に可溶で あり、かつ弱められた毒性および弱められた病原性を有する結合体を形成するよ うに、内毒素関連物質に対する結合能を有する非免疫グロブリンポリペプチド治 療薬；および 薬学的に受容可能な担体を、含有する、組成物。14. A pharmaceutical composition for treating endotoxemia, comprising: and to form conjugates with reduced toxicity and reduced pathogenicity. sea urchin, a non-immunoglobulin polypeptide therapeutic that has the ability to bind to endotoxin-related substances. therapeutic drugs; and A composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier. １５．前記薬剤が前記スカベンジャー受容体タンパク質のフラグメントを含有す る前記薬剤であって、該フラグメントがスカベンジャー受容体タンパク質の細胞 外部分を含有するフラグメントである、請求項１４に記載の薬剤組成物。15. If the drug contains a fragment of the scavenger receptor protein, said agent, wherein said fragment is a scavenger receptor protein in a cell. 15. A pharmaceutical composition according to claim 14, which is a fragment containing an external portion. １６．前記スカベンジャー受容体タンパク質の前記細胞外部分がコラーゲン結合 領域を含有する、請求項１５に記載の薬剤組成物。16. The extracellular portion of the scavenger receptor protein binds to collagen. 16. A pharmaceutical composition according to claim 15, comprising a region. １７．前記スカベンジャー受容体タンパク質の前記細胞外部分が前記スペーサー 領域を含有する、請求項１６に記載の薬剤組成物。17. the extracellular portion of the scavenger receptor protein is connected to the spacer 17. A pharmaceutical composition according to claim 16, comprising a region. １８．前記スカベンジャー受容体タンパク質の前記細胞外部分がαらせん状超ら せん領域を含有する、請求項１５に記載の薬剤組成物。18. The extracellular portion of the scavenger receptor protein has an α-helical structure. 16. A pharmaceutical composition according to claim 15, comprising a helical region. １９．前記スカベンジャー受容体タンパク質の前記細胞外部分がシステインリッ チ領域を含有する、請求項１５に記載の薬剤組成物。19. The extracellular portion of the scavenger receptor protein has a cysteine linkage. 16. The pharmaceutical composition according to claim 15, comprising a 1-h domain. ２０．前記薬剤が組換えＤＮＡ技術により生産される前記スカベンジャー受容体 タンパク質の活性類似体を含有する、請求項１４に記載の薬剤組成物。20. said scavenger receptor, wherein said drug is produced by recombinant DNA technology; 15. Pharmaceutical composition according to claim 14, containing an active analog of the protein. ２１．１ミリリットルあたり約０．５から５．０マイクログラムタンパク質であ るアセチル化低密度リボタンパク質に対する親和性を有することを特徴とする、 請求項１４に記載の薬剤組成物。21. Approximately 0.5 to 5.0 micrograms protein per milliliter characterized by having an affinity for acetylated low density riboproteins, Pharmaceutical composition according to claim 14. ２２．ポリビニルスルフェート、マレイル−ＢＳＡ、フコイダン、およびプリン ポリヌクレオチド、ポリ［Ｉ−Ｃ］、ポリ［Ｉ］、およびポリ［Ｇ］からなる群 から選択される負電荷を有する高分子との結合能を有すること特徴とする、請求 項１４に記載の薬剤組成物。22. Polyvinyl sulfate, maleyl-BSA, fucoidan, and purine The group consisting of polynucleotides, poly[I-C], poly[I], and poly[G] A claim characterized by having the ability to bind to a polymer having a negative charge selected from The pharmaceutical composition according to item 14. ２３．化学的に改変された低密度リボタンパク質との結合能を有することを特徴 とする、請求項１４に記載の薬剤組成物。23. Characterized by its ability to bind to chemically modified low-density riboproteins The pharmaceutical composition according to claim 14. ２４．内毒素のリピドＡ部分と結合することを特徴とする、請求項１３に記載の 薬剤組成物。24. according to claim 13, characterized in that it binds to the lipid A moiety of endotoxin. Pharmaceutical composition. ２５．グラム陰性菌と結合することを特徴とする、請求項１３に記載の薬剤組成 物。25. Pharmaceutical composition according to claim 13, characterized in that it binds to Gram-negative bacteria. thing.
JP4507346A 1991-02-22 1992-02-21 Treatment of endotoxemia Pending JPH06508604A (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US66222791A 1991-02-22 1991-02-22
US662,227 1991-02-22
PCT/US1992/001370 WO1992014482A1 (en) 1991-02-22 1992-02-21 Treatment of endotoxemia

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH06508604A true JPH06508604A (en) 1994-09-29

Family

ID=24656904

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP4507346A Pending JPH06508604A (en) 1991-02-22 1992-02-21 Treatment of endotoxemia

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP0572541A1 (en)
JP (1) JPH06508604A (en)
CA (1) CA2104217A1 (en)
WO (1) WO1992014482A1 (en)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5624904A (en) * 1993-11-17 1997-04-29 Massachusetts Institute Of Technology Method for treating gram positive septicemia
US5691197A (en) * 1995-02-21 1997-11-25 Tryggvason; Karl Isolated DNA sequence for a novel macrophage receptor with a collagenous domain
US5683903A (en) * 1995-05-30 1997-11-04 Smithkline Beecham Corporation Attachment enhanced 293 cells
WO2002064770A1 (en) * 2001-02-15 2002-08-22 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Novel scavenger receptor class a protein
JP2011093804A (en) * 2008-02-13 2011-05-12 Kyoto Sangyo Univ Agent for rheumatoid arthritis

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE68925275T2 (en) * 1988-06-23 1996-08-22 Ass Cape Cod Inc ENDOTOXIN BINDING PROTEIN AND THEIR USE

Also Published As

Publication number Publication date
WO1992014482A1 (en) 1992-09-03
CA2104217A1 (en) 1992-08-23
EP0572541A1 (en) 1993-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1379266B1 (en) Modified annexin proteins and prevention and treatment of thrombosis
JP5695318B2 (en) Protease-resistant mutant of stromal cell-derived factor 1 in the repair of tissue injury
JPH07502490A (en) Compositions containing bactericidal/permeability-enhancing proteins and lipid carriers, methods of making them, and uses thereof
BE1003636A4 (en) Peptide-2 ACTIVATION NEUTROPHIL.
EP2100968B1 (en) Method of producing recombinant TAT-HOXB4H protein for use as a stimulant of hematopoiesis in vivo
JPH04506510A (en) Use of bactericidal/permeability-enhancing proteins or biologically active analogs thereof to treat lipopolysaccharide-associated gram-negative bacterial infections
JPH09503511A (en) Cell and serum protein anchors and conjugates
JPH06500765A (en) Phagocytic receptor proteins and their antibodies
JPH09509944A (en) Products and methods for T cell regulation
US5624904A (en) Method for treating gram positive septicemia
JP2791074B2 (en) Molecular decoyant and method of using the same
JPH06501456A (en) surface complex lymphotoxin
JPH11501636A (en) Pharmaceutical composition
JPH08511682A (en) Recombinant BPI protein and LBP protein, nucleic acid molecule encoding the same, production method thereof and use thereof
KR20200018781A (en) Fusion Proteins with Half-Life Extended Polypeptides
RU2426745C2 (en) Recombinant chimeric protein of neutrophil and girugen inhibition factor and pharmaceutical composition containing it
JP2003526315A (en) Chemokines with amino terminal modifications
CN109111517A (en) A kind of modified growth and differentiation factor and its preparation method and application
CA2319210A1 (en) Cubilin protein, dna sequences encoding cubilin and uses thereof
CZ291281B6 (en) Catalytically active L-methionine-L-deamino-gamma-mercaptomethane-lyase polypeptide and use thereof
JPH06508604A (en) Treatment of endotoxemia
KR100522509B1 (en) Soluble polypeptides
JPH03505576A (en) Improvements related to organic compounds
JPH06510908A (en) Macrophage activating factor from animal vitamin D binding protein
WO1992007579A1 (en) Soluble mannose receptor peptides