JPH06507610A - 酸化防止剤及び細胞保護剤として有用なプルプロガリンを含む医薬用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 酸化防止剤及び細胞保護剤として有用なプルプロガリンを含む医薬用組成物 本発明は一般的に、生体医学的に通用可能な酸化防止剤に関する。さらに詳しく は、本発明は、プルプロガリン及びプルプロガリン・グルコシド類の遊離ａｔ素 基捕捉性に関わるものである。

血流中では、酸素の約５％が、過酸化基０２や水酸基ＯＨなどの遊離酸素基とし て形成される。この遊離酸素基は毒性が高く、細胞や［織に不可逆的酸化損傷を 引き起こすことがあり帰る０例えば臓器移植、バイパス外科手術などの間、生体 器官や組織への正常な血流が中断された場合〔イスケミア（虚血）として知られ ている外料処ｌ〕、組織中に酸素が再導入されると過酸化物の産生がいちじるし く増加し、二次的水酸基が形成され、明かな細胞毒性が発揮される。イスケミア 復に生じる過剰の遊離基の主たる発生源はキサンチン・デヒドロゲナーゼである 。このものは、通常はプリン塩基からニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチ ドの酸化物にエレクトロンを移送する酵素である。酸素欠乏状態にある間、この 酵素は急速に不可逆的にキサンチン・オキシダーゼに変換される。これは、その エレクトロンを直接酸素に移行さることによって大量の過酸化物を生じる酵素で ある。

遊離酸素基は重要な生体分子を攻撃して損傷を与えることが有り得る。細胞膜内 では、　ＯＨが、脂買過酸化として知られている連鎖反応を開始させることがあ り得る。この反応では、高不飽和脂肪酸が破壊されて水溶性ｎ＊となり、その結 果、膜形態が破壊される。＊の過酸化は、リソソームのハイドロラーゼの細胞質 への放出による細胞死滅をまねくことがある。遊離酸素基は、ＤＮＡに突然変異 を起こさせることがあり、また、ヒアルロン酸及びその他の巨大分子を解重合さ せることがある。

生体はいくつかの防ｍｓｉ横を持ち、それによって酸化による損傷が最小限にと どめられている。その一つとしてスーパーオキシド・ジスムターゼの関与する酵 素機構があり、これは２ｆｌｌの０２遊離基と水素との組合わせに接触的に作用 して過酸化水素を形成させるものである。過酸化水素は比較的毒性の低い分子で あり、カタラーゼなどのパーオキシダーゼによって除去される。もう一つの防衛 機構は、ビタミンＥ（１−コフェロール）など天然の酸化防止物質によって与え られ、細胞膜に疎水性コアを生じ、細胞液中にグルタチオン及びアスコルビン酸 を生じるものである。この種の酸化防止物質は、細胞中に通常生じる過酸化物の 大部分を解毒するのに適当である。しかし、このものは、イスヶミアの期間後に 組織に酸素が再導入されたときに生じる大幅な過酸化物産生の増加には対応でき ない。

従って、特に、心臓、肝臓、腎臓などの器官のイスヶミアが関与するような手術 など、外科的処置に伴って生じることのある遊離酸素基の障害を阻止叉は軽減す るためには、治療的に有効な酸化防止剤が必要となる。

虚血−再潅流における損傷を軽減するための遊離基捕捉剤として用いるべく、こ れまでに提案されている物質としては、アロプリノール、アスコルビン酸、　ｄ ｌ−トコフェロール、ビタミンＥ。

及び、６−ヒドロキシ−２＋　５＋　７　＋　８−テトラメチルクロマン−２− カルボン酸（トロロックス：　Ｔｒｏｌｏｘ）　（例えば米国特許第４．８７７ ．８１０号ａｍ書を参照）などがある、スコツト等（５ｃｏｔｔ　ｅｔａｌ、、 Ｊ、＾−，Ｏｉｌ、Ｃｈｅ−、Ｓｏｃ、シー：２００−２０３　（１９７４）　 ）　ｉ！、　食品及び脂肪類を保存するための酸化防止剤としてのトロロックス の原デザインを報告している。

関節炎、炎症、ならびにある種の癌などの疾病の病因における、また、老化にお ける遊離酸素基の重要性も認識されている０例えばクロス等（Ｃｒｏｓｓ　ｅｔ 　ａｌ、、＾ｎｎ、　Ｉｎｔ、　Ｗｅｄ、　１０７：　５２６−５４５）を参照 、ビタミンＥは一般に、これまで知られた最良の天然酸化防止剤であると考えら れている。しかし、このものは、特に緊急条件のもとでは特に満足すべき治療用 酸化防止剤とはいえない、なぜなら、このものはきわめて親油性であり、細胞に よる取り込みが緩慢だからである。

プルプロガリン（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ）は、メルク・インデックス第１ １版のエントリ一番号７９６３に記述されている既知化合物である。化学的には 下記の構造を有する２、３．　４．　６−テトラヒドロキシ−５Ｈ−ベンゾシク ロへブテン−５−オンである。

このものはピロガロールの酸化によって造られる。その代表的用途は、食用及び 非食用の油脂、炭化水素系燃料及び潤滑油への添加剤であり、酸化や金属汚染を 阻止するのに用いられている。

米国特許第４．１８１．５４５号明細書（発明者アンダーソン）には、ゴム基質 固体推進薬用の高分子バインダーのための加硫系における添加剤として、プルプ ロガリン及びその他のヒドロキシ置換芳香族化合物を用いることが記述されてい る。これらの化合物は、加硫作用を併進し、また、そのままでは未加硫又は加硫 高分子系の酸化分解を促進するような金属イオンと複合体を造るものと報じられ ている。

本発明の目的の一つは、なかんずく再潅流において用いられる、これまでより効 果的で、生体医学的に容認され得る酸化防止剤を提供することにある。

本発明は、プルプロガリン及びそのグルコシド類が、予想に反して、生体医学の 利用分野で酸化防止剤及び細胞保護剤として有用かつ効果的であるという発見に 基づくものである。このような利用分野におけるプルプロガリンの効果は、トロ ロックスやアスコルビン酸など、これまで用いられていた酸化防止剤の効果より 大である。このものは、イスケミア壕の患者の血液を処理して、イスケミア壕の 血液の組織及び器官への再潅流によって酸化的遊離基がこれらに引き起こす損傷 を軽減するのに特に有用である。

プルプロガリンは非毒性であり、安定で、自然状態で血流中に数週間存続する。

本発明の一つの特色は、細胞保護用酸化防止剤として用いるためのプルプロガリ ン及びそのグルコシド類を提供する点にある。

本発明のもう一つの特色は、哺乳動物における酸化防止剤及び細胞保護剤として 有用な組成物を提供することにあり、その組成物は、生理学的に容認し帰る助剤 と組み合わせて、有効量のプルプロガリン又はそのグルコシドを含むものである 。

さらにもう一つの特色として、本発明は、哺乳動物の血液中の酸化性遊離基の濃 度を低下させる方法を提供するものであり、その方法は、哺乳動物の血液を生体 内で有効量のプルプロガリン叉はそのグルコシドで処理することを含む。

添付図面において、 第１図は、以下の実施例１によって得られた結果を図式によって示すものである 。

第２図は、以下の実施例２によって得られた結果を図式によって示すものである 。

本発明の好ましい操作手順は、プルプロガリンを酸化防止剤として用いて、器官 の虚血−再潅流障害を軽減することにある。そのような目的に対して、適切な、 生理学的に容認し得る担体中の。

液状の、有効量のプルプロガリン組成物を、イスケミア徨の器官の再潅流の直前 に、再潅流させるべき器官の近接部位において患者の血液中に注入する。再潅流 させるべき器官の近辺にこの注入を行えば、プルプロガリンの必要量が少なくて すむ、任意の好都合な箇所でプルプロガリンを血流中に普通に注入することによ っても望ましい結果が得られるが、それは無駄であり、その場合はより大量のプ ルプロガリンが必要となる。しかし、負傷した患者の場合などは、別の部位への 注入もやむを得ない、また、適当な担体とともに経口投与することも可能である 。

本発明のプルプロガリンとともに用いるに適当な生理学的に容認し得る担体には 、水、食塩水、好ましくは、等張食塩水、あるいは、血液と容易に混合し、相溶 性である、普通に用いられるカージオプレシック（ｃａｒｄｉｏｐｌｅｇｉｃ） 溶液が含まれる。患者に投与するための注射用プルプロガリン溶液の担体として 最も好ましいものは、患者自身の血液、又は患者と同じ型の血液、の検体である 。これらは通常、イスケミアが関与する外科手術の現場で入手することができる 。これは患者に対して理想的な生体適合性媒体となる。

プルプロガリンの投与量は、患者の体重や血液能力によって異なる。一般には、 患者の体重ｋｇ当たり約０．３　ｍｇ　−１５■ｇ、好ましくは約０．５−１０ １ｇ、を患者に与えることが好ましい、普通の体重と血液能力を持つ成人の患者 の場合、約３　ｍｇ　−１００ｍｇのプルプロガリン量が適当である。子供や動 物に投与する場合は、患者の体重に比例してこれらの量を適宜調節することがで きる。

投与すべき溶液中のプルプロガリンの濃度は特に重要ではなく、投与する者が容 易に工夫することができる。一般には希薄溶液が望ましい。プルプロガリン溶液 はゆっくりと、例えば１０−２０分かけて患者に投与することが好ましく、その ため、このような条件のもとでは希薄溶液の方が投与しやすい。０．１−１０１ Ｈ１好ましくは０．２−５−にの濃度の溶液が適当である０本溶液の投与中は、 患者の状態やバイタルサインを監視し、必要なら投与速度を調節するべきであろ う。

本発明をさらに以下の非限定的な実施例によって説明する。特に断りのない限り 、使用した全ての化学薬品は試薬グレードで、シグマ社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍ ｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｔｓ、　Ｎｏ、、　Ｌｌ、Ｓ、Ａ、）から 供給を受けた。プルプロガリン及びトロロックスはアルドリッチ社（Ａｌｄｒｔ ｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）から入手した。ＡＡＰＩＩ　Ｃ２，２”　− アゾ−ビス−（２−アミジノプロパン）塩酸塩〕はポリサイエンス社（Ｐｏ１ｙ ｓｃｉｅｎｃｅｓ　Ｉｎｃ、）から供給を受けた。

１１１」 本実施例では、ヒトの赤血球を用いて実験を行った。すなわち、種々の量のプル プロガリン又はトロロックスの不存在及び存在下の反応混液中で、　ＡＡＰＨの 熱活性化によって生じる遊離基を赤血球に接触させて、こうした条件下でのプル プロガリンの細胞保護能力を判定した。

新鮮なヒト赤血球を、食塩水中で１５００　ｇ　ｘ　１０■１ｎの遠心分離によ って少なくとも３回洗浄した０次いで、燐酸塩緩衝食塩水（ｐＨ７，４）中２０ ％ＲＢＣ！！濁液を調製した。　（Ｍｉｋｉ　ｅｔ　ａｌ、。

＾ｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、２５８：　３７３−３８０．　１ ９８７　）。

アゾ開始剤、２．２′−アゾ−ビス（２−アミジノプロパン）塩酸塩（＾＾ＰＦ Ｉ　）の熱活性化によって遊離基を発生させた０反応混液（０，５■Ｌ容）は、 １０１に燐酸塩緩衛食塩水中Ｇ：１０％赤血球細胞（ＲＢＣ）懸濁液、　ＡＡＰ Ｈ（最終濃度レベル１００−阿）及び種々の濃度レベルのプルブロガリンを含ん でいた。この混液を、ゆっくりＩｌｌしながら３７℃で　１８０分間培養した０ 反応混液の３５置１分を取り出して、　１．５　ｍＬの食塩水で希釈し、遠心分 離に（１５００ｇ、　１０　ｗｉｎ　）かけた、この上澄液の５２５　ｍＭにお ける吸収度をＰＢ＾対照物と比較した。同様に、反応混液を１．５　ｍＬの蒸留 水で処理して、２分間超音波処理し、完全な溶血状態を得た。

溶血率は前述のＭｉｋｉ　ｅｔ　ａｌの文献に従って算出した。

第１図は、その結果を図式によって示したもので、酸化防止剤（プルプロガリン 及びトロロックス）の濃度の上昇にともなって赤血球溶解阻止率が上昇している ことを示している。細胞保護剤の酸化防止効率を特徴づける重要な指標は、細胞 溶解の５０％阻止車（ＩＣ％（１）を達成する薬剤濃度である。プルプロガリン では、ＩＣ，、は０．１２置にであり、トロロックスでは、約０．７４■Ｎであ る。

すなわち、プルプロガリンは、トロロックスの場合に必要な量のたった６分の１ の濃度で細胞溶解を５０％防護する。従ってプルプ支１１ユ 本実施例では、ラットの肝細胞を用いて実験を行った。すなわち、種々の濃度レ ベルのプルプロガリンの存在及び不存在のもとに肝細胞に遊離基を作用させた。

肝細胞は、プリンセン等（Ｐｒｉｎｃｅｎ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、 　Ｉｎｖｅｓｔ。

７８：　１０Ｂ４−１０７１　（１９８６）　）の方法によって、雄スプラグ・ ドーリ一種ラット（４００ｇ　−４５０ｇ＞がら調製した。ただし、肝臓への潅 流は、まず２５０　ｓＬ　ｆ）　０．５　ｓＭ　ＥＧＴＡ及び、１４２　ｍＮ　 ＮａＣｌ　トロ、７ｍＮ　ＫＣＩとを含む１０　ＭＭヘペス緩陽液（ｐＨ７，４ ）を２０　ｓＬ／ｍｌｎ。

の速度で重力滴下させ、次いで、セグレン（Ｓｅｇｌｅｎ、　Ｅｘｐ、　Ｃｅ１ ｌ。

Ｒｅ＠、　８２：　３９１−３９８　（１９７３））　Ｇ：従ッテ、　５　ｓＭ 　ＣａＣ１ｚ及びＯ，ＯＳ％コラ−ゲナーゼを含む１００■Ｌのマグネシウム不 合ハンクス平衡塩類溶液を用いて行った。その地金ての細目は、これまでに文献 に記載されている通りである。　（ｗｕ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　 Ｃｅ１ｌＢｉｏ１．６８．１１８９−１１９４．　（１９９０））　。

遊離基の検討は、細胞媒体を除去し、この細胞に、　６６．７　ＩＵ／Ｌのキサ ンチン・オキシダーゼ＜　ＸＯＯ＞及び２　ｓＭのヒポキサンチン（これら２者 は遊離酸素基を発生させるためのもの）を含む３ｍＬの０．０５　Ｎ燐酸曹達緩 衝食塩水（ＰＢＳ）　（ｐＨ７，４）を加えて行った。プルプロガリンの各濃度 レベルにおける効果を比較する基準は、各培養皿における同一世代の１０５個の 細胞の９５％にネクローシス（壊死）を起こすに要する時間であった。酸化防止 剤の存在する場合、それをｘＯＤ及びヒポキサンチンとともに細胞に加え、評価 者が無作為に選んだ３組について盲検を行った。

プルプロガリン溶液は、あらがじめ少なくとも３０分間脱ガスしたＰＢＳを用い て調製した。プルプロガリンは部分的水溶性であるため、　４　ｓＭ漬震度レベ ルプルプロガリン溶液は、短時間の超音波処理によって調製した。固体プルプロ ガリンがほぼ完全に溶解した徨、　ｐＨを　７．４０±　０．０５に調整した。

対照群は、細胞のみを含むＰＢＳ、あるいは、ＰＢＳと　ＸＯＤ、又は、ＰＢＳ とヒポキサンチンを細胞とともに培養したものからなる。

結果を第２図に図式的に示す０図において、垂直軸は、肝細胞１００．０００個 にネクローシスを起こすのに要する時間を分で表している。水平軸は、種々の試 験に用いたプルプロガリンの濃度をＩＭで表している。同一濃度レベルのいくつ かの実験の平均値を示し、スチューデント式ｔテストを用いて統計解析を行った 債である。

データは平均上ＳＤ（標準偏差）として表した。対照との比較として、データの 統計的有意差をＰ値＜　０．０５によって示した。

第２図は、ラット肝細胞に対するプルプロガリンの投与量依存効果を示す、プル ブロガリンの濃度が高まれば、遊離酸素基にさらされた肝細ｔｍ　ｔｏｏ、ｏｏ ｏｍがネクローシスを起こすに要する時間（分）が長引く。プルプロガリンによ って最善の細胞保護効果が得られるのは３−Ｍ濃度レベルにおいてであり、この 濃度レベルで、肝細胞がネクローシスを起こすに要する時間は３０分にまで引き 延ばされた。対照群（すなわち、添加物なしのヒポキサンチン及びＸＯＤにさら された肝細胞）では、約６分で１００．０００個の細胞に明確なネクローシスが 生じた。

さらに検討を重ねるため、ラット肝細胞を培養し、ウー等の文献（前述）及びＣ ｌ１ｎ、　Ｃｈｅｓ＋、　３６：　１１７２−１１７３　（抄録）　、　１９９ ０の手順に従って、添加剤としてプルプロガリン及びトロロックスを用いて遊離 酸素基による損傷を試験し、以下の第工表に示すような結果を得た。

第」二量 遊離酸素基層ｇ徨の １０５ラツト肝細胞の 添加剤を加えない対照試験では、細胞は、遊離酸素基にさらした場合に約６．５ 分生存した。これは、同等量濃度の場合、プルプロガリンは、ビタミンＥから導 かれた有力な酸化防止剤であるトロロックスよりも、ラット肝細胞に対して明ら かに保護作用が優れていることを示す。

実施例３ ヒト心室筋細胞を取り出し、ウー等の文献（前述）に記載されている方法及び手 順を用いて、プルプロガリン及びトロロックスの遊離酸素基損傷に対する保護作 用を試験した。結果を以下の第１Ｉ表に示す。

第」Ｌ轟 遊離酸素基損傷後の １（Ｉｓ慣の筋細胞の 添加剤を用いない対照試験では、細胞は、遊離酸素基への暴露渣２分間生存した 。

第１＋表に輻じた各結果は、密に条件を揃えた５−７回の繰り返し実験の平均値 である。この結果は、プルプロガリンが、特に０゜５−に以上の濃度レベルで、 本試験におけるトロロックスより少なくとも一桁、筋細胞の保護作用が優れてい ることを示している。

１１五１ ラット腎臓脈管膜細胞を取り出し、ウー等の文献（前述）記載の方法及び手順で 、遊離酸素基損傷に対する保護作用について、同一濃度範囲におけるプルプロガ リン対トロロックスの試験を行った。試験した全ての濃度レベルにわたって、プ ルプロガリンがトロロックスよりも実質的に優れた腎臓細胞保護作用を示した。

結果を以下の第ｍ表に示す ＬＬ真 ＸＯＤ　（６６，７ＩＵ／Ｌ）及び ヒポキサンチン　（０，５ｍＷ） に暴露した ０　（対照）　５．７　５．７ ０．１３　１１．５　６．４ Ｇ、２５　１３．４　６．８ ０．５０　１６．０　？、４ １．００　１９．４　７．８ え１亘１ ラットの肝臓について生体内試験を行い、部分的肝臓虚血−再潅流におけるプル プロガリンの細胞保護効果を判定した。

ウー等の文献（ｗｕ　ｅｔ　ａｌ、　Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ　１３：　５）５− ５８０　（１９９１）　）に記載されているモデルと同じものを用いた。要点を いえば、モデルは、左門脈、左肝動脈及び左胆管を鉗子上めすることによって、 肝臓の左側票、中葉およびスビゲリウス集に血液を供給する血管を閉鎖すること からなる。右側の門脈、肝動脈及び胆管は、内部短絡流として自然に保った。− 夜食餌を断ったスプラグ・ドーリ一種ラット（０，３−０，４ｋｇ）を用いて血 管閉鎖を行った。イスケミア絆了の約４５秒前に、　３−Ｌの食塩水（対照）、 あるいは、プルプロガリン又はトロロックス（以下に示す濃度レベルで）を含む 食塩水を、隨茎血管中に３分間かけて注入した。続いて２４時間再潅流を行った ０次に、ネクローシスの程度（肝臓湿重量を基準にして）を、現在広く認められ ている組織化学的方法（Ｆｒｅｄ−ｅｒｉｋｓ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｅｘｐｔｌ、 　Ｍｏ１．　Ｐａｔｈ、　４１：　１１９−１２５．１９８４　）によって定量 解析した。

結果を以下の第■表に示すが、これから、プルプロガリン投与量をラットモデル の体重ｋｇ当たり　４．４から　１８μ■ｏｌｅｓに増加すると、肝臓ネクロー シスの程度が著しく軽減されることがわかる。これは、注入プルプロガリン投与 量を増すにつれて器官回復がいちじるしく増加することにも現れている。全ての 濃度レベルで器官回復が対照に対して統計的に有意義であること、また、用いた 有効投与量が全て体重ｋｇ当たり　μ−ｏｌｅ単位であることは注目にｆｌする 。

１ヱ１ 部分的虚血−再潅流を受けたラットに対するプルプロガリンの効果 対照　プルプロガリン 食塩水のみ　４．４　８．８　１８ 注入薬量　（酸化防止剤なし）（μｍｏ１ｅｓ／ｋｇ体重）平均ネクローシス（ 重量％＞　３０．３　１７．７　７．３　４．４±ＳＤ　１１．９　４．６　４ ．９　１．１肝臓回復％　Ｏ４２７６８６ ラツト個体数　６　６　６　６ Ｐ債対対照　０．０５　Ｇ、００５　０．００１Ｐ憧＜　Ｏ，ＯＳは統計的に有 意義である。

１１五１ 本実施例では、ウサギの心臓虚血−再潅流における生体内でのプルプロガリンの 細胞保護効果を試験した。

ニュージランド白ウサギ（体重３．０−３．５　ｋｇ　）をケタミン（３５−ｇ ／ｋｇ　）及びアトラベット（０，４％ｇ／ｋｇ　）の筋肉内注射、及びアトロ ビン（０，１％ｇ／ｋｇ　）の静脈注射によって麻酔させた。

動物の前頭域を刺毛した徨、気管切開を行い、バーバード小動物呼吸器及び、酸 素中２．５％のニドラン（ｅｔｈｒａｎｅ）　（又はエンフルラン（ｅｎｆｌｕ ｒａｎｅ　）を含む混合ガスを用いて、陽圧呼吸によって動物に通気を行うこと で麻酔を維持した。正中線胸骨切間を施した。６膜を開き、心臓を露出させた。

ウサギの左心室及び心尖の大部分に血液を供給する前心室冠状動脈の主分技（左 回旋冠状動脈ともいう）を、心尖から房室溝までの１７２ないし２／３の箇所で 、５−０絹糸を用いて１時間一時的に結紮した。閉鎖を解放する約１分前に、右 外部頚静脈から　１ｍＭ供試溶液３０−ｍｌを一挙に注入した。対照動物では、 供試溶液の代わりに通常の食塩水３〇−麿ｌを一挙に与えた。いずれの場合も、 次いで３時間再潅流を行った。

その壕、心臓を採取し、酵素活性を調べるためにテトラゾリウム染料で染色し、 面積測定によってネクローシスの範囲を判定した。

リスク分野を判定するために、心臓の原結紮を強め、大動脈に２２Ｇアンギオカ ス　（ａｎｇｉｏｃａｔｈ）を挿入して３０　ｍＬのエバンス・ブルー溶液を注 入した０次に心臓を横方向に２１−厚の薄片にスライスし、１．２５％ニトロ・ レッド・テトラゾリウムで３０分染色した。ニトロ・レッド・テトラゾリウム非 染色俸を透明アセテート紙上にトレースし、コンピューター化面積測定によって ネクローシス分野の面積を計算した。

結果を以下の第Ｖ表に示す。

１兄１ プルプロガリン 対照食塩水　（８，６−１０ｕ　ｍｏｌｅｓ／ｋｇＬすｌ　立１１ｕルユ リスク分野における 器官ネクローシスの 平均％（±Ｓ　Ｄ　）　４６．６±　１０　１１．８±　６．２器官回復率平均 ％　０７５ ウサギ個体数　６６ Ｐ値対対照　＜０．００１ ここで比較的低い投与量によって７５％平均器官回復車が達成されたことは、統 計学的にも、臨床的にも、きわめて有意義である。これは、この心臓モデルの条 件において単一化合物を用いて示される最高の心筋回復といえよう。

１１■ユ 本発明に従って、前述の方法及び手順によってプルプロガリンのジグルコシド（ Ｃ２３Ｈ２８０１＠）を使用し、赤血球、肝細胞、及び筋細胞、並びに、前述の ような肝臓及び心臓のモデルにおいて保護作用を確かめた。このものはプルブロ ガリン自体と同様の効果を示した。高性能液体クロマトグラフィーによって別の グルコシド（恐らくモノ体）が単離され、これを試験した。この化合物もプルプ ロガリンと類似の行動を示した。このようにして、プルプロガリン、そのモノグ ルコシド及びジグルコシドのいずれも、細胞内及び生体内で優れた細胞保護剤と なる。

阻止率　［〃］ 冨さ呂円冒Ｘ沼２５６　ｇワ９のψｑへＱ□　時間　粉） 国際調査報告 フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ 、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ、ＴＧ ）、ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　Ｃ３，ＦＩ、　ＧＢ、　ＨＵ。

Ｊ　Ｐ、　ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　Ｎｏ、　ＰＬ、Ｒ Ｏ，ＲＵ、ＳＤ

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．生理学的に容認し得る補助剤と組み合わせて、有効量のプルプロガリン又は そのグルコシドを含有することを特徴とする、哺乳動物の酸化防止剤及び細胞保 護剤として有用な組成物。
2. ２．活性成分がプルプロガリンである請求項１に記載の組成物。
3. ３．補助剤が水性液体である請求項２の組成物。
4. ４．補助剤が水、 生理的食塩水又は全血である請求項３の組成物。
5. ５．哺乳動物の血液を、有効量の、請求項１に記載の組成物を用いて生体内で処 理することを特徴とする、哺乳動物の血液中の酸化性遊離基濃度を低下させる方 法。
6. ６．哺乳動物の血液を、有効量の、請求項４に記載の組成物を用いて生体内で処 理することを特徴とする、哺乳動物の血液中の酸化性遊離基濃度を低下させる方 法。
7. ７．有効量の、請求項１に記載の組成物を生体内で血液に添加することを特徴と する、イスケミア後に哺乳動物の器官への血液を再灌流させる間のその器官にお ける組織障害を軽減させる方法。
8. ８．有効量の、請求項４に記載の組成物を生体内で血液に添加することを特徴と する、イスケミア後に哺乳動物の器官への血液を再灌流させる間のその器官にお ける組織障害を軽減させる方法。
9. ９．哺乳動物の体重当たり約０．３−１５ｍｇの量のプルプロガリンを投与する 請求項４の方法。
10. １０．哺乳動物の体重当たり約０．５−１０ｍｇの量のプルプロガリンを投与す る請求項５の方法。
11. １１．有効量の、生理学的に容認し得る、プルプロガリン又はそのグルコシドを 含む組成物を用いて生体内で血液を処理することによって、哺乳動物血液中の酸 化性遊離基濃度を低下させるためのプルプロガリン又はそのグルコシドの使用法 。
12. １２．哺乳動物血液中の酸化性遊離基濃度を低下させることを目的として、生体 内でその血液を処理するための、生理学的に容認し得る組成物を調製することに よるプルプロガリンの使用法。