JPH06502650A - Excellent stabilized GRF analog - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】 安定化された優れたＧＲＦアナログ 序 本発明は、ヒトおよび他の動物、特に補乳動物の下垂体の機能に影響を与えるペ プチドに関する。特に、本発明は下垂体による成長ホルモンの放出を促進するペ プチドに指向される。本発明のペプチドはｉｎ　ｖｉｖｏで優れており、血漿中 で安定性がよく、選択されたペプチドは天然ＧＲＦ配列よりも中性ＰＨにて水性 環境でより安定である。[Detailed description of the invention] Excellent stabilized GRF analog Preface The present invention relates to pharmaceuticals that affect the function of the pituitary gland in humans and other animals, especially in mammalian animals. Regarding petit de. In particular, the present invention provides a drug that promotes the release of growth hormone by the pituitary gland. Oriented to petite. The peptides of the present invention are excellent in vivo and have been shown to be effective in plasma. The selected peptides are more stable at neutral pH than the native GRF sequence. More stable in the environment.

発明の背景 生理学者は、長い間、視床下部が膝下垂体の分泌機能を制御し、視床下部が各下 垂体ホルモンの分泌を刺激または抑制する特別の物質を産生ずると認識してきた 。１９８２年に、ヒト膵臓（腫瘍）放出因子（ｈｐＧＲＦ）がヒト膵臓腫瘍の抽 出物から単離され、精製され、特徴付けられ、合成され、テストされ、下垂体に よる成長ホルモン（Ｇ　Ｈ）の放出を促進することが判明した［ギレミン・アー ル（Ｇｕｉｌｌｅｍｉｎ、　Ｒ，）ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　２１８ ．５８５−５８５　（１９８２）］。それ以来、ラット種、ブタ橿、ヒツジ種、 ウシ種およびヤギ種を含めた他の種からの対応する視床下部ＧＨ放出因子も特徴 付けられ、合成されている。Background of the invention Physiologists have long believed that the hypothalamus controls the secretory functions of the genicular pituitary gland, and that the hypothalamus It has been recognized that the gland produces special substances that stimulate or suppress the secretion of hormones . In 1982, human pancreatic (tumor) releasing factor (hpGRF) was discovered in the extraction of human pancreatic tumors. isolated from the pituitary gland, purified, characterized, synthesized, and tested. It was found that the release of growth hormone (GH) by Guillemin, R, et al., Science 218 ．． 585-585 (1982)]. Since then, rat, pig, and sheep species, Corresponding hypothalamic GH releasing factors from other species including bovine and caprine species also characterized attached and synthesized.

ヒト視床下部ＧＲＦ　（ｈＧＲＦ）はｈｐＧＲＦと同一の式、すなわち：Ｇｌｎ −Ｇｌｕ−＾ｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−＾１ａ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−ＮＨ２ を有することが判明している。Human hypothalamic GRF (hGRF) has the same formula as hpGRF, namely: Gln -Glu-^rg-Gly-Ala-Arg-^1a-^rg-Leu-NH2 It has been found that the

ラットＧＲＦ　（ｒＧＲＦ）は８位にＳｅｒ残基を有し、式：％式％ Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−＾ｒｇ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−＾５ｎ−ＯＨを有 することが判明している（例えば、米国特許第４５９５６７６号）。Rat GRF (rGRF) has a Ser residue at position 8, formula: % formula % Gln-Glu-Gln-^rg-Ser-Arg-Phe-^5n-OH It has been found (eg, US Pat. No. 4,595,676).

ウノＧＲＦ　（ｂＧＲＦ）は、式）１−Ｔｙｒ−Ａｌａ−＾５ｐ−Ａｌａ−Ｉ　 Ｒｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−丁ｙｒ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌ ｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−＾１ａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌ ｅｕ−Ｇｌｎ−＾ｓｐ−１１ｅ|Ｍｅｔ−＾ｓｎ− ＾ｒｇ−Ｇ　１　ｎ　−Ｇ　１　ｎ　−Ｇ　１　ｙ　−Ｇ　ｌ　ｕ−＾ｒｇ−Ａ ｓｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｙｓＪ≠戟|＾ｒｇ−Ｌｅ ｕ−ＮＵ２を有 することが判明している。Uno GRF (bGRF) has the formula: 1-Tyr-Ala-^5p-Ala-I Re-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-^rg-Lys-Val-L eu-Gly-Gln-Leu-3er-^1a-Arg-Lys-Leu-L eu-Gln-^sp-11e|Met-^sn- ＾rg-G　　n　-G　1　n　-G　1　y　-G　l　u-＾rg-A sn-Gin-Glu-Gin-Gly-Ala-LysJ≠戟|＾rg-Le Has u-NU2 It has been found that

ブタＧＲＦは２８位にＳｅｔ残基を有することが判明している。Pig GRF has been found to have a Set residue at position 28.

天然ＧＲＦ配列は血中血漿酵素による急速な不活化に付される。急速な分解は、 ジベプチノルアミノベプチダーゼー■とも過去に呼ばれたジペプチジルペプチダ ーゼ・タイプＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）によるペプチドの２−３結合の切断を含むし フローマン・エル・エイ（Ｆｒｏｈｍａｎ、　Ｌ、　Ａ、　）ら、ジャーナル・ オン・クリニカル・インベスティゲーンａ　：／　（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅ ｓｔ、　）、７８．９０６−９１３（１９８６）］。Native GRF sequences are subject to rapid inactivation by blood plasma enzymes. Rapid decomposition is Dipeptidyl peptida, also known as dibeptinolaminobeptidase■ cleavage of the 2-3 bond of the peptide by DPP-IVase type IV (DPP-IV). Frohman, L., et al., Journal On Clinical Investigation a:/ (J, Cl1n, Inve st, ), 78.906-913 (1986)].

ＧＲＦの代謝安定性およびンベブチンルベプチダーゼ切断に対するＧＲＦペプチ ドの種々の保護法は、フエリブロス（Ｆｅｌｉｘ）ら［ペプチドにおける新規線 状および環状ＧＲＦアナログの合成および生物学的活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　 ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　１ｉｎｅ ａｒ　ａｎｄ　ｃｙｃｌｉｃ　ＧＲＦ　ａｎａｌｏｇｓ、　ｉｎ　ｐｅｐｔｉｄ ｅｓ）　、■wと 生物学（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第１０回米国ペプチ ドシンポジウム、シイ・アール・マーシャル（Ｇ、　Ｒ，Ｍａｒｓｈａｌｌ）編 、ニスコム・サイエンス（ＥＳＣＯＭ　Ｓｃｉ、　）出版社、ライデン（Ｌｅｉ ｄｅｎ）、オランダ国、４６５−４６７頁（１９８８）コを含めて提案されてお り、著者らは、酵素分解に対するそのＮ−末端の安定性が増強され、１位がデス ＮＨ２−Ｔｙｒで置換され、または／および２位がＤ−Ａｌａで置換されたＧＲ Ｆアナログについて報告している。この情報は、最近、フローマン（Ｆｒｏｈｍ ａｎ）ら［血漿中のヒト成長ホルモン−放出ホルモンのジペプチジルペプチダー ゼ−■およびトリプシン様酵素分解（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌｐｅｐｔｉｄａｓｅ −１１ａｎｄｔｒｙｐｓｉｎ−１ｉｋｅ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｄｅｇｒａｄａ ｔｊｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅ≠唐奄 獅■ ｈｏｒｍｏｎｅ　ｉｎ　ｐｌａｓａ＋ａ）、ジャーナル・オン・クリニカル・イ ンベスティゲーション（Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　）　８３．１５５ ３−１５４０　（１９７８）］によって確認された。さらに、後者のグループは 、ＧＲＦにおけるＮ−末端チロシン残基のＮ−アセチル化およびＮ−メチル化ま たはＤ−Ｔｙｒでの置換により、２〜３位での切断が完全に抑制されたことを示 した。他方、Ｔｙｒ−］のアルファーメチル化はＤＰＰ−ＩＶによる分解を部分 的にブロックしたにすぎない。GRF peptides on GRF metabolic stability and nbebutin rubeptidase cleavage Various methods of protection of peptides have been described by Felix et al. Synthesis and biological activities of cyclic and cyclic GRF analogs and biological activity of novel 1ine ar and cyclic GRF analogs, in peptide es), ■w and Biology (Chemistry and Biology), 10th American Peptide Symposium, edited by C.R. Marshall (G.R. Marshall) , ESCOM Sci, Publisher, Leiden den), Netherlands, pp. 465-467 (1988). The authors found that the stability of its N-terminus against enzymatic degradation was enhanced and that the first position was GR substituted with NH2-Tyr and/or substituted with D-Ala at position 2 Reports on F analog. This information was recently published by Frohman. an) et al. [dipeptidyl peptidyl of human growth hormone-releasing hormone in plasma] Ze-■ and trypsin-like enzymatic degradation (Dipeptidylpeptidase) -11andtrypsin-1ike enzymatic degrada tjon of human growth hormone-rele≠Karaku lion hormone in plasa+a), Journal on Clinical I Investigation (J, C11n, Invest,) 83.155 3-1540 (1978)]. Furthermore, the latter group , N-acetylation and N-methylation of the N-terminal tyrosine residue in GRF. This indicates that cleavage at positions 2 and 3 was completely suppressed by substitution with D-Tyr or D-Tyr. did. On the other hand, alpha methylation of Tyr-] partially inhibits degradation by DPP-IV. I just blocked it.

マーコイ・ダブリュー・エイおよびコイ・ディ・エイチ（Ｍｕｒｐｈｙ、　ｆ、 　Ａ、　ａｎｄ　Ｃｏｙ。Murphy, W.A. and Co., D.H. (Murphy, f. A, and Coy.

Ｄ、　Ｈ，）　［ｒ成長ホルモン−放出因子の優れた長期間作用アルキル化アナ ログ（Ｐｏｔｅｎｔｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ　ａｌｋｙｌａｔｅｄ　ａｎａｌｏ ｇｓ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏ 秩j、ペブ タイド・リサーチ（Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　１．３６−４１　（ １９８８）　］は、ペプチド鎖内のリジンの側鎖基の付随するＮ−アルキル化を 伴うまたは伴わないＮ−末端アミノ酸のＮ−アルキル化またはＮ−アリールアル キル化の結果として、酵素分解に対する耐性の増加を示すＧＲＦのアナログを記 載している。D, H,) [An excellent long-acting alkylating analyte of growth hormone-releasing factor. Log (Potentlong-acting alkylated analog gs of growth hormone-releasing facto chichi j, peb Tide Research (Peptide Research) 1.36-41 ( 1988)] demonstrated the concomitant N-alkylation of lysine side groups within the peptide chain. N-alkylation or N-aryl alkylation of the N-terminal amino acid with or without We describe analogs of GRF that exhibit increased resistance to enzymatic degradation as a result of quenching. It is listed.

天然のＧＲＦ配列は１５位にｃ＋ｙ残基を有する。１５位にＡｌａまたはＬｅｕ を有するアナログは増大したＧＨ放出能を有することが知られている。例えば、 米国特許第４６４９１３１号および第４７３４３９９号ならびにリン・エフ（Ｌ ｉｎｇ、　Ｎ、　）ら［コ・バディ？、シンポジウム（Ｑｕｏ　Ｖａｄｉｓ　？ 、　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）、サノフィ”グループ（Ｓａｎｏｆｉ　Ｇｒｏｕｐ） 、１９８５年５月２９〜３０日、ツールーズーラベーゲ（Ｔｏｕｌｏｕｓｅ−Ｌ ａｂｅｇｅ）、フランス国（３０９−３２２頁）参照。また、Ｇｌｙ−１５のＶ ａｌまたはアルファーアミノ−イソブチリック酸（ｉｓｏｂｕｔｉｒｉｃａｃｉ ｄ）での置換の結果、能力が増強されたＧＲＦアナログが得られた［フェリブロ ス（Ｆｅｌｉｘ）ら［ペプチドにおける新規成長ホルモン成長因子アナログの合 成および生物学的活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　 ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｌｅ ａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎａｌｏｇｓ、　ｉｎ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、１ ９８６、ウォルター・ドウ・グリイテル・アンド・カンパニー（ｆａｌｔｅｒ　 ｄｅ　Ｆｒｕｙｔｅｒ　＆い、）、ベルリン−ニューヨーク、４８１−４８４頁 （１９８７）］。The natural GRF sequence has a c+y residue at position 15. 15th place is Ala or Leu It is known that analogs with GH have an increased ability to release GH. for example, U.S. Patent Nos. 4,649,131 and 4,734,399 and Lin F. ing, N,) et al. , Symposium (Quo Vadis? , Symposium), Sanofi Group , May 29-30, 1985, Toulouse-L abege), France (pp. 309-322). Also, the V of Gly-15 al or alpha-amino-isobutyric acid (isobutiric acid) Substitution with d) resulted in a GRF analogue with enhanced potency [ferribro Felix et al. [Synthesis of novel growth hormone growth factor analogs in peptides] Synthesis and biological activity activity of novel growthhormone rele asing factor analogs, in peptides), 1 986, Walter Doe Grieter & Co. de Fruyter & I), Berlin-New York, pp. 481-484. (1987)].

エイ・エム・フエリブロス（＾、　Ｍ、　Ｆｅ１ｉｘ）は、Ａｌａ１５ｈ−ＧＲ Ｆ　（１−２９）ＮＨ！およびデスＮＨ２−Ｔｙｒ’５Ｄ−Ａｌ　ａ２、ＡＩａ １５ｈＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２の調製およびテストを含めて、増強したおよ び／または延長された生物学的活性を有するアナログを合成するプログラムを報 告している。例えば、米国特許第４６４９１３１号および第４７３４３９９号な らびにエイ・エム・フエリブロス、イー・ビイ・ハイマー、ティ・エフ・モウレ ス、エイチ・ヒセンベイス、ビイ・レンゲ、ティ・ノエイ・ランプロス、エム・ アーマド、シイ・ティ・ランプおよびポール・ブラシ（Ａ、　Ｍ、　Ｆｅ１ｉｘ 、　Ｅ、　Ｐ、　Ｂｅｉｍｅｒ、　Ｔ、　Ｆ、　Ｍｏｖｉｅｓ、　Ｈ，Ｂ１５ｅ ｎｂｅｉ刀B Ｐ、　Ｌｅｕｎｇ、　Ｔ、　Ｊ、　Ｌａｍｂｒｏｓ、　Ｍ、＾ｔ＋ｍａｄ、　Ｃ ，Ｔ、　ｆａｎｇ　＆　Ｐａｕｌ　Ｂｒａｚｅａｕ）　：ペvチドにおける新 規成長ホルモン放出因子アナログの合成および生物学的活性（３ｙｎｔｈｅｓｉ ｓ　ａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｇｒ ｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎ≠撃盾■ 刀B ｐｅｐｔｉｄｅｓ）　１９８６　：フェリブロス・エイ・エム、ランプ・シイ・ ティ、ハイマー・イー、フルニエ・エイ、ポリン・ディ、アーマド・エム、ラム ブロス・ティ、モウレス・ティおよびミラー・エル（Ｆｅｌｉｘ、　Ａ、　Ｍ、 　、　ｆａｎｇ、　Ｃ，Ｔ、　、　Ｈｅｉｍｅｒ、　Ｅ、　、　Ｆｏｕｒｎ奄■ 秩B ＾、、　Ｂｏｌｉｎ、　Ｄ、　、　Ａｈｍａｄ、　Ｍ、　、　Ｌａｍｂｒｏｓ、 　Ｔ、、Ｍｏｗｌｅｓ、　Ｔ、　、　ａｎｄ　ＭｉｌｌｅｒA　Ｌ、　）　：ペ プチドにおけ る新規線状および環状ＧＲＦアナログの合成および生物学的活性（Ｓｙｎｔｈｅ ｓｉｓ　ａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　 １ｉｎｅａｒ　ａｎｄ　Ｃｙｃｌｉｃ　ＧＲＦ　ａｎａｌｏｇｓ、　ｉｎ　oｅ ｐｔｉｄｅｓ） 化学および生物学（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第１０回 米国ペプチドシンポシウム会議、シイ・アール・マーシャル（Ｇ、　Ｒ，Ｍａｒ ｓｈａｌｌ）４１．ニスコン・サイエンス（Ｅｓｃａｍ　５ｃｉｅｎｃｅ）出版 社、ライデン（Ｌｅｉｄｅｎ）、オランダ国（１９８８）　、４６５−４６７頁 ：ディ・ベティクレルク、エイチ・ラピエール、シイ・ベレティエ、ビイ・ドウ プレイ、ビイ・ガウドレ、ティ・モウレス、エイ・フェリブロスおよびビイ−ブ ラシ（Ｄ、　Ｐｅｔｉｅｌｅｒｃ、　Ｈ，Ｌａｐｉｅｒｒｅ、　Ｇ、　Ｐｅ１ｌ ｅｔｉｅｒ、　Ｐ、　Ｄｕｂｒｅｕｉｌ、　Ｐ、@Ｇａｕｄｒｅａｕ。A.M. Felibros (^, M, Fe1ix) is Ala15h-GR F (1-29) NH! and desNH2-Tyr’5D-Al a2, AIa 15hGRF (1-29) Enhanced and report programs for synthesizing analogs with and/or extended biological activity; I'm telling you. For example, US Patent Nos. 4,649,131 and 4,734,399 Ravi A. M. Hueribros, E. B. Heimer, T. F. Moure. S, H. Hisenbeis, B. Renge, T. Noei Lampros, M. Ahmad, Shii Thi Lamp and Paul Brush (A, M, Fe1ix , E, P, Beimer, T, F, Movies, H, B15e nbei sword B P, Leung, T, J, Lambros, M, ^t+mad, C , T, fang & Paul Brazeau): New in peptides Synthesis and biological activity of normal growth hormone releasing factor analogs (3ynthesi s and biological activity of novel gr owth hormone releasing factor an≠geshishi■ sword B peptides) 1986: Felibros A.M., Lamp.C. T., Heimer E., Fournier A., Pauline D., Ahmad M., Lam. Bros T, Maures T and Miller L (Felix, A, M, , fang, C, T, , Heimer, E, , Fourn 奄■ Chichi B ^, , Bolin, D, , Ahmad, M, , Lambros, T,, Mowles, T,, and MillerA L, ): Pe in petit de Synthesis and biological activity of novel linear and cyclic GRF analogs (Synthe sis and biological activity of novel 1inear and Cyclic GRF analogs, in oe ptides) Chemistry and Biology, 10th American Peptide Symposium Conference, C.R.Marshall (G, R, Mar shall)41. Published by Niscon Science (Escam 5science) Co., Ltd., Leiden, Netherlands (1988), pp. 465-467. : Di Betiklerk, H. Lapierre, C. Belletier, B. Dou. Prey, B. Gaudre, T. Mowres, A. Felibros and B.B. Rashi (D, Petielerc, H, Lapierre, G, Pe1l etier, P. Dubreuil, P. @Gaudreau.

Ｔ、　Ｍｏｖｉｅｓ、人、　Ｆｅ１ｉｘ　ａｎｄ　Ｐ、　Ｂｒａｚｅａｕ）　成 長ホルモン（ＧＨ）放出および乳牛のミルク生産に与えるヒト成長ホルモン−放 出因子（ｈＧＲＦ）の優れたアナログの効果（Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａ　ｐｏｔ ｅｎｔ　ａｎａｌｏｇ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒ ｅｌｅａｓｉｎｇ　■≠モ狽盾■ （ｈＧＲＦ）　ｏｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ　（ＧＨ）　ｒｅｌｅａｓ ｅ　ａｎｄ　ｍ１ｌｋ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄａ奄窒凵@ｃｏｗｓ） 、 ミイーティング・アブストラクト（Ｍｅｅｔｉｎｇ　Ａｂｓｔｒａｃｔ）　Ｐ　 ２２３、第８２回ミイーティング・アメリカン・デアシイ・サイエンス・アスン （Ｍｅｅｔｉｎｇ　ＡｍｅｒｉｃａｎＤａｉｒｙ　Ｓｃｉ、　Ａｓ５ｎ、　）、 コロンビア、ミズリー州、６月２１−５４日（１９８７）を参照されたし。T, Movies, people, Fe1ix and P, Brazeau) Long hormone (GH) release and human growth hormone release on milk production in dairy cows Effect of a superior analog of hGRF ent analog of human growth hormone-r eleasing■≠Moshishido■ (hGRF) on growth hormone (GH) releases e and m1lk production of da Amanito @cows) , Meeting Abstract (Meeting Abstract) P 223, 82nd Meeting American Disaster Science Assn. (Meeting American Dairy Sci, As5n,), See Columbia, Missouri, June 21-54 (1987).

同一分子中の８つの他の修飾に加え、５ｅｒ２で修飾されたＧＲＦアナログはト ウ（Ｔｏｕ）ら［両親媒性成長ホルモン−放出因子（ＧＲＦ）アナログ、ペプチ ドデザインおよびｉｎ　ｖｉｖｏにおける生物学的活性（＾ｍｐｈｉｐｈｉｌｉ ｃ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ　（Ｇ ＲＦ）　ａｎａｌｏｇｓ：ｐｅｐｔｉｄｅ　ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏ ｇｉｃａｌ　ａｃ狽奄魔奄狽凵@１ｎ ｖｉｖｏ）　、バイオケミカル・オンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュ ーニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ ｕｎ、　）　１３９．７６３−７７０　（１９８６）コによって記載されている 。このアナログはｂＧＲＦ　（１４４）ＮＨ２と比較して、ヒラ／にて、１６５ ％のｉｎ　ｖｉｖｏ活性を有することが報告されている。In addition to eight other modifications in the same molecule, the 5er2-modified GRF analog Tou et al. [Amphipathic growth hormone-releasing factor (GRF) analog, pepti design and in vivo biological activity (^mphiphili) c Growth Hormone-Releasing Factor (G RF) analogs: peptide design and biolo gical ac 狽奄奄狽凵@1n vivo), Biochemical Ondo Biophysical Research Community (Biochem, Biophys, Res, Comm un, ) 139.763-770 (1986). . This analog has 165 at Hira/compared to bGRF (144) NH2. % in vivo activity.

米国特許第４７３４３９９号は、２位にＡｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａまたは Ｄ−Ａｌａを、および１５位に、ＡｌａＳＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｊ］ｅ、Ｎｌｅ。U.S. Pat. No. 4,734,399 discloses that Ala, N-methyl-D-Ala or D-Ala and at position 15, AlaSLeu, Val, J]e, Nle.

Ｎｖａｌまたはβ−Ａｈａを有するＧＲＦアナログを開示している。米国特許第 ４６４９１３１号も参照。GRF analogs with Nval or β-Aha are disclosed. US Patent No. See also No. 4649131.

コイおよびマーコイ（Ｃｏｙ　ａｎｄ　Ｍｕｒｐｈｙ）の欧州特許出願、公開番 号０１８８２１４号、出願番号８６１００１２７．９号は、２位の置換基として ＬまたはＤ−立体配置の種々の非天然アミノ酸を有するＧＲＦペプチドの他に、 ２位にＬｅｕまたはＰｈｅを有するＧＲＦアナログを開示している。Coy and Murphy European patent application, publication number No. 0188214 and Application No. 86100127.9, as a substituent at the 2-position In addition to GRF peptides with various unnatural amino acids in the L or D configuration, GRF analogs with Leu or Phe in the second position are disclosed.

５ａｒ２またはＰｒｏ’を有する非常に低い生物活性を有するＧＲＦアナログが コイ（Ｃｏｙ）ら［成長ホルモン−放出因子の合成作動剤および拮抗剤のデザイ ンでの戦略（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｓｉｇｎ　ｏｆ　５ｙ ｎｔｈｅｔｉｃ　ａｇｏｎｉｓｔｓ　ａｎｄ　ａｎｔａｇｏｎｉ唐狽刀@ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）、ペブタ イズ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、７巻、増補版４９−５２　（１９８６）］によって 記載されている。GRF analogs with very low biological activity with 5ar2 or Pro' Coy et al. [Design of synthetic agonists and antagonists of growth hormone-releasing factor] Strategies in the design of 5y nthetic agonists and antagoni karakuto@of growth hormone-releasing factor), Pebuta Peptides, Volume 7, Expanded Edition 49-52 (1986)] Are listed.

リン（Ｌｉｎｇ）ら［ペプチドにおける優れた拮抗剤活性を有する成長ホルモン −放出因子アナログ（Ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆ ａｃｔｏｒ　ａｎａｌｏｇｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ奄■ ａｃｔｉｖｉｔｙ、　ｉｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、化学および生物学（Ｃｈｅ＋ １ｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第１０回米国ペプチドシンポジウム 会議、シイ・アール・マーシャル（Ｇ、　Ｒ，Ｍａｒｓｈａｌｌ）編、ニスコン ・サイエンス（Ｅｓｃａｍ　５ｃｉｅｎｃｅ）出版社、ライデン（Ｌｅｉｄｅｎ ）、オランダ国（１９８８）　、４８４−４９６頁］は、２位をＡｒｇまたは種 々のＤ−アミノ酸いずれかで置換した一連のＧＲＦアナログについて報告してい る。それらのすべては、親ホルモンより優れてはないが、それらのうちいくつか は拮抗活性を示した。Ling et al. [Growth hormone with excellent antagonist activity in peptides] -Release factor analog (Growth hormone-releasing f actor analogs with antagonist 奄■ activity, in Peptides), Chemistry and Biology (Che+ 1stry and Biology), 10th American Peptide Symposium Conference, edited by C.R. Marshall (G.R. Marshall), Niscon. ・Science (Escam 5science) Publisher, Leiden ), Netherlands (1988), pp. 484-496], Arg or species reported a series of GRF analogs substituted with any of the various D-amino acids. Ru. Not all of them are better than the parent hormone, but some of them showed antagonistic activity.

先行発明は、水性環境における化学分解（脱アミド化）を抑制する手段として、 ポリペプチドの８および２８位に、通常、見い出されるアミノ酸残基の代わりに Ｓｅｒ残基を有する合成ＧＲＦポリペプチドを提供している。１９８９年１月２ ７日付けの米国特許出願第０７／３０３．５１８号および１９８９年３月１５日 付は出願の第０７／３２３．９５５号参照。また、エイ・アール・フリートマン 、エイ・ケイ・イクプラニ、ディ・エム・ブラウン、アール・エム・ヒルマン、 エル・エフ・クラビル、アール・エイ・マーチン、エイチ・エイ・ツルヘルーニ ーリイおよびディ・エム・ギド（Ａ、　Ｒ，Ｆｒｉｅｄｍａｎ、　Ａ、　Ｋ、　 Ｉｅｈｈｐｕｒａｎｉ、　Ｄ、　Ｍ、　Ｂｒｏｗｎ、　Ｒ，ＭＢｉｌｌｍａｎ、 　Ｌ、　Ｆ、　Ｋｒａｂｉｌｌ、　Ｒ，Ａ、　Ｍａｒｔｉｎ、　Ｂ、＾Ｚｕｒｃ ｈｅｒ−Ｎｅｅｌｅｙ、　ａｎｄ　Ｄ、ＭAＧｕｉｄｏ）参照。The prior invention provides, as a means for suppressing chemical decomposition (deamidation) in an aqueous environment, in place of the amino acid residues normally found at positions 8 and 28 of the polypeptide. Synthetic GRF polypeptides having a Ser residue are provided. January 2, 1989 U.S. Patent Application No. 07/303.518, dated March 7 and March 15, 1989. See application no. 07/323.955. Also, A.R. Friedman , A.K. Ikplani, D.M. Brown, R.M. Hillman, L.F. Krabill, R.A. Martin, H.A. Turheruni - and D.M. Guido (A.R., Friedman, A.K. Iehhpurani, D., M., Brown, R., M.Billman, L, F, Krabill, R, A, Martin, B, ^Zurc Her-Neeley, and D. MAGuido).

中性水性溶液中における成長ホルモン放出因子アナログの分解はアスパラギン残 基の脱アミド化に関連付けられている。セリン安定化剤によるアスパラギン残基 の置換（Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｓｐａｒａｇｉｎｅ　Ｒｅ５ｉｄｕ ｅｓ　ｂｙ　５ｅｒｉｎｅ　５ｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ）、イ■ ターナショナル・ジャーナル・オン・ペプタイド・プロティン・リサーチズ（Ｉ ｎｔ。Degradation of growth hormone-releasing factor analogs in neutral aqueous solutions results in asparagine residues. Associated with deamidation of groups. Asparagine residues with serine stabilizers Replacement of Asparagine Re5idu es by 5erine 5tabilizers), i ■ International Journal on Peptide Protein Research (I nt.

Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｒｅｓ、　）、３７．１４−２０　（ １９９１）。J, Peptide Protein Res, ), 37.14-20 ( 1991).

先行発明はＲ３および／またはＲ２５位におけるアミノ酸残基の代わりに置換し たンステイン酸残基（Ｃｙａ）を有する合成ＧＲＦポリペプチドを提供している 。The prior invention involves substitution in place of the amino acid residue at position R3 and/or R25. Provides synthetic GRF polypeptides with tansteic acid residues (Cya) .

１９８８年１月２９日付は出願の米国特許出願第０７／１５０．３０１号および １９８９年１月２７日出願の箪８９１００２４号参照。No. 07/150.301, filed January 29, 1988; See Kan No. 8910024 filed on January 27, 1989.

ｈＧＲＦの２９−アミノ酸アナログはベリセレビ（Ｖｅｌｉｃｅｌｅｂｉ）ら［ プロンーディングズ・オン・ナショナル・アカデミ−・オン・サイエンシズ（Ｐ ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ＾ｃａ、　Ｓｃｉ、　）　Ｕ　Ｓ　Ａ、８３巻、５３９７− ５３９９　（１９８６）］によってデザインされており、そこでは、アミノ末端 の最初の６個のアミノ酸の配列が、８位のＳｅｒ残基の取り込みを含めた配列の 残りにおける１３アミノ酸により天然のペプチドと異なっている。該アナログの アミドおよび遊離酸形態は式：　Ｈ−Ｔｙｒ−＾１ａ−＾５ｐ−Ａｌａ−１１ｅ −Ｐｈｅ−３ｅｒ−３ｅｒ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−＾ｒｇ−＾ｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ −Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ|３ｅｒ−＾ｒｇ− Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ− ＮＨ２１０Ｒを有していた。ラット下垂体前菓細胞の初代培養において成長ホル モン（ＧＨ）分泌を刺激する能力につき検定すると、アミドアナログはｈＧＲＦ 　（１−４０）ＧＨの１５７倍の能力であり、一方、遊離酸形態は同アッセイで １７６倍の能力であると報告されている。A 29-amino acid analog of hGRF was developed by Velicelebi et al. [ Pronoddings on National Academy on Sciences roc, Natl^ca, Sci, ) U S A, Volume 83, 5397- 5399 (1986)], in which the amino terminal The sequence of the first six amino acids of the sequence including the incorporation of the Ser residue at position 8 is It differs from the natural peptide by the remaining 13 amino acids. of the analog The amide and free acid forms have the formula: H-Tyr-^1a-^5p-Ala-11e -Phe-3er-3er-Ala-Tyr-^rg-^rg-Leu-Leu -Ala-Gln-Leu-Ala|3er-＾rg- Arg-Leu-Leu-Gin-Glu-Leu-Leu-Ala-Arg- It had NH210R. Growth hormone in primary culture of rat pituitary preconvulsant cells. When assayed for the ability to stimulate hGRF secretion, amide analogs It is 157 times more potent than (1-40)GH, while the free acid form is less effective in the same assay. It is reported to be 176 times more powerful.

ペイル（Ｖａｌｅ）ら（１９８７年５月２２日付は出願の米国特許出願第０５３ ２３３号）は、別の蛋白に結合し得る官能性側鎖基を有する３１−位残基を利用 する３１−残基ｈＧＲＦアナログを記載している。該３１−残基ｈＧＲＦアナロ グもまた、８位に、Ａ　ｓ　ｎまたはＳｅｒ、１０位にＰｈｅ、または１５位に Ａｌａのごとき天然ＧＲＦ配列で現れる他の残基についての置換を有し得る。Ａ ｓｎまたはＳｅｔは２８位に存在してもよい。Vale et al. (U.S. Patent Application No. 053, filed May 22, 1987) No. 233) utilizes the 31-position residue that has a functional side chain group that can bind to another protein. A 31-residue hGRF analog is described. The 31-residue hGRF analog G also has A sn or Ser in 8th place, Phe in 10th place, or Phe in 15th place. Substitutions may be made for other residues that occur in the native GRF sequence, such as Ala. A sn or Set may be present at position 28.

ポリペプチドにおけるＡｓｎ残基は、いくつかの環境下で、水の存在下における 脱アミド化の対象となると報告されている。しかしながら、脱アミド化の速度を 支配する法則は明らかでない。例えば、ポリペプチドトリプシンでは、部分的配 列Ａｓｎ−５ｅｒと共にＡｓｎ残基のいくつかのみが脱アミド化される一方、他 はされない。コンアコフ・エイ・エイ（Ｋｏｓｓｉａｋｏｆｆ７人＾）、サイエ ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２４０．１９１−１９４　（１９８８）参照。Asn residues in polypeptides can under some circumstances It is reported that it is subject to deamidation. However, the rate of deamidation The governing laws are not clear. For example, in polypeptide trypsin, partial Only some of the Asn residues along with the sequence Asn-5er are deamidated, while others Not allowed. Kossiakoff 7 members, Saye See Science, 240.191-194 (1988).

欧州特許出願第８６０８３３７．４号、公開番号０２２０９５８号は、Ｘが天然 に存在するアミノ酸の残基であり、Ｐｒｏが天然に存在するアミノ酸プロリンで あってＰｅｐｔｉｄｅが生物学的に活性なペプチドまたは蛋白のそれを定義する アミノ酸残基の配列である式）（−Ｘ　−Ｐ　１　ｏ−Ｐｅｐｔｉｄｅを有する 化合物のクラスを開示している。Ｈ−Ｘ　−Ｐ　ｒ　ｏ−Ｐｅｐｔｉｄｅの例は 、化学的にＧＲＦに変換できるＭｅｔ−Ｐｒｏ（成長ホルモン−放出因子）を包 含する。European Patent Application No. 8608337.4, Publication No. 0220958 discloses that Pro is the naturally occurring amino acid proline. Peptide defines a biologically active peptide or protein. Formula that is a sequence of amino acid residues) (having -X -P 1 o-Peptide Discloses classes of compounds. An example of H-X-Pr o-Peptide is , contains Met-Pro (growth hormone-releasing factor), which can be chemically converted to GRF. Contains.

非ＧＲＦペプチド上のＮ−末端伸長アナログが種々の目的で報告されている。N-terminal extension analogs on non-GRF peptides have been reported for various purposes.

例えば、 エム・エイ・タロン（Ｍ＾、Ｔａ１ｌｏｎ）ら［バイオケミストリー（Ｂｉｏｃ ｈｅｍ、　）、２６７７６７−７７７４　（１９８７）は、伸長部分にＡｌａ、 Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ａｈａ−Ｇｌｕ−ＡｌａまたはＧｌｕ−Ａｈａ−Ｇｌｕ−Ａｌ ａを有する酵母α接合因子の一連のＮ−末端伸長アナログを合成で製造した。こ れらのペプチドは構造−活性の関連の研究で用いられた。for example, M.A. Tallon et al. [Bioc. hem, ), 267767-7774 (1987) has Ala, Glu-Ala, Aha-Glu-Ala or Glu-Aha-Glu-Al A series of N-terminal extension analogs of the yeast alpha mating factor with a were synthetically produced. child These peptides were used in structure-activity relationship studies.

ディ・アンドリュー（Ｄ、　Ａｎｄｒｅｕ）ら［第２０回欧州ペプチドシンポジ ウム、ツビンゲン（Ｔｕｂｉｎｇｅｎ）、ＧＲＦ、９月４−９日、１９８８年、 シンポジウム・アスパラギン（Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　、へｂｓｔｒｃｔｓ）、３ ３頁］は、優れたプロセッシング中間体に対応する数個のより短いペプチドと共 にセクロビン（ｃｅｃｒｏｐｉｎ）　Ａアナログの前駆体形態の全６４アミノ酸 配列を合成した。それらの中には、Ａｌａ−Ｐｒ。Andrew D. et al. [20th European Peptide Symposium] Umm, Tubingen, GRF, September 4-9, 1988. Symposium Asparagine (Symposium, hebstrcts), 3 page 3] along with several shorter peptides corresponding to superior processing intermediates. All 64 amino acids in the precursor form of Cecropin A analogue The sequence was synthesized. Among them are Ala-Pr.

−Ｇｌｙ−ＰｒｏがＮ−末端として伸長した全セクロビン配列があり、用いると 、伸長部分はセクロピアサン・ブラ（ｃｅｃｒｏｐｉａ　ｓｉｌｋｍｏｔｈ　ｐ ｕｒａ）から得た部分的に精製したジペプチンルベプチダーゼ一様酵素製剤によ って切断されることが示された。エイチ・ポマン（Ｈ，Ｂｏｍａｎ）ら、ジャー ナル・オン・バイオロジカル・ケミストリー〇、Ｂｉｏ１．Ｃｈｅｍ、）２６４ ＋５８５２　５８６０（１９８９）　も参照。-Gly-Pro has the entire securobin sequence extended as the N-terminus, and when used , the extension part is cecropia sun bra (cecropia silkmoth p) by a partially purified dipeptin rubeptidase-like enzyme preparation obtained from It was shown that it was disconnected. H. Boman et al. Null on Biological Chemistry〇, Bio1. Chem,) 264 +5852 See also 5860 (1989).

シイ・フレイル（Ｇ、　Ｋｒｅｉｌ）ら［ニーロビーアン・ジャーナル・オン・ バイオケミストリー（Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｅｈｅｍ、）１１１　：　４９− ５８（１，９８０）］は、メリチン（ｍｅｌｉｔｔｉｎ）、すなわち、ミツバチ 毒の主要成分はブロメリチンに由来すると報告している。プロメリチンのプロ配 列は６つのＸ−Ｐｒｏおよび５つのＸ−Ａｌａ反復ジペプチジル残基よりなる。Kreil, G. et al. [Neirobian Journal on Biochemistry (Eur, J, Bioehem,) 111: 49- 58 (1,980)] is melittin, i.e., honey bee It is reported that the main component of the poison is derived from bromelitin. Pro-distribution of promelitin The row consists of 6 X-Pro and 5 X-Ala repeating dipeptidyl residues.

フレイルらによって提示されている結果は、前駆体−生成物変換は、毒腺からの 抽出物に存在するジペプチジルペブチダーゼ■タイプの酵素によるンペプチド単 位の段階的切断を介して進行し得ることを示唆する。The results presented by Freil et al. show that the precursor-product conversion occurs from the venom gland. Depletion of peptide monomers by dipeptidyl peptidase type enzymes present in the extract. This suggests that the process may proceed through stepwise cleavage of the position.

シイ・モライ（Ｃ，Ｍｏ１ｌａｙ）ら［ニーロビーアン・ジャーナル・オン・バ イオケミストリー（Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅａ＋、　）、１６０：３１− ３５　（１９８６）］、セルレイン（ｃａｅｒｕｌｅｉｎ）およびキセノプンン （ｘｅｎｏｐｓｉｎ）はツメガエルの皮膚分泌で見い出された２つのペプチドで ある。前者はＰｈｅ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｇｌｙの配列を、後者はＳ　ｅ　ｒ−Ａ 　Ｉ　ａ　−Ｇ　ｌ　ｕ−、へ１ａの配列をその各前駆体形中のＮ−末端伸長に 有する。カエル皮膚分泌から単離したタイプ■のジペプチジルペプチダーゼは、 成熟生成物の形成に導くこれらのＮ−末端伸長の切断に要する特異性を有してい る。C, Mo1lay et al. [Neirobian Journal on Ba. Iochemistry (Eur, J, Biochea+, ), 160:31- 35 (1986)], caerulein and xenopunn. (xenopsin) are two peptides discovered in the skin secretion of Xenopus. be. The former has the sequence Phe-Ala-Asp-Gly, and the latter has the sequence S e r-A Ia-Glu-, the sequence of 1a to the N-terminal extension in each of its precursor forms. have Dipeptidyl peptidase of type ■ isolated from frog skin secretion is possessing the specificity required for cleavage of these N-terminal extensions leading to the formation of the mature product. Ru.

ディ・ユリウス（Ｄ、　Ｊｕｌｉｕｓ）ら〔セル（Ｃｅｌｌ）、３２：８３９− ８５２　（１９８３〕。α因子接合ホルモンは、サツカロミセス・セレビシェ（ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）α細胞によって分泌される １３個のアミノ酸のペプチドである。膜結合ジペプチジルペプチダーゼを欠く非 接合α細胞突然変異体は通常のα因子を産生じないが、生物学的活性が顕著に減 少した構造Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−、Ａｈａ−α因子またはＡ　Ｓ　＋）−Ａ 　ｌ　ａ−Ｇ　１　ｕ−Ａ　ｌ　ａ−α因子を持ち不完全にプロセッシングされ た一連の形態を放出する。膜結合ンペプチ／ルペブチダーゼは通常のα因子前駆 体ブロセッソングに必要で、このプロセスは通常の酵母α細胞におけるα因子成 熟の律速であり得ることが示されている。D. Julius et al. [Cell, 32:839- 852 (1983). The α-factor mating hormone is derived from Satucharomyces cerevisiae ( Saccharomyces cerevisiae) secreted by α cells It is a 13 amino acid peptide. non-membrane-bound dipeptidyl peptidase Although zygotic α-cell mutants do not produce normal α-factor, their biological activity is markedly reduced. Small structure Glu-Ala-Glu-, Aha-α factor or A S +)-A l　a-G　1　u-A　l　a-α factor and incompletely processed emit a series of forms. Membrane-bound peptid/lupebutidase is the normal α-factor precursor This process is necessary for α-factor formation in normal yeast α-cells. It has been shown that this may be the rate-limiting factor for ripening.

シイ・エル・コイ（Ｃ，Ｌ、　Ｃｈｏｙ）ら［ニーロビーアン・ジオ−ナル・オ ン・バイオケミストリー（Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、１６０　：　 ２６７−２７２　（１９８６）コ。Choy (C, L, Choy) et al. Biochemistry (Eur. J. Biochem.), 160: 267-272 (1986).

ニューファウンドランドの冬のヒラメ類からの抗凍結蛋白のプロ配列は４つのＸ −Ｐｒｏおよび７つのＸ−Ａｌａ反復配列をそのＮ−末端部分に含宵する。この 前駆体のプロセンシングは調べられていないが、著者らは、かかる変換はジペプ チジルペプチダーゼ一様酵素により血清中で起こり得、引き続き、該酵素は伸長 部分中のジペプチジル単位を切断して成熟抗凍結蛋白を放出するのであろうと推 測している。Anti-freeze protein pro-sequence from Newfoundland winter flounder contains four X -Pro and seven X-Ala repeats in its N-terminal part. this Although processing of precursors was not investigated, the authors suggest that such conversion This can occur in serum by a tidyl peptidase-like enzyme, which subsequently undergoes elongation. It is speculated that the mature anti-freeze protein is released by cleaving the dipeptidyl unit in the part. I'm measuring.

本出願の優先日の後、／ニール（Ｓｕｈｒ）らは、マウスＧＲＦをコードする全 長ｃＤＮＡクローンの単離および特徴付けを報告した。成熟マウスＧＲＦは、遊 離カルボキシル末端を有する４２アミノ酸残基ペプチドであると予測された。こ のペプチドは２位にバリン残基を有し、それにより、すべて２位にＡｌａを有す る他の種からのＧＲＦの中でユニークとなる。モル・エントリノロジー（Ｍｏ１ ．　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）　３　：１６９３　１７００．１９８９参照 。After the priority date of this application, Suhr et al. reported the isolation and characterization of long cDNA clones. Adult mouse GRF is It was predicted to be a 42 amino acid residue peptide with separated carboxyl termini. child The peptides have a valine residue at position 2, thereby all having an Ala at position 2. This makes it unique among GRFs from other species. Molar Entrinology (Mo1 ．． Endocrinology) 3:1693 1700.1989 .

他の者により提案された考慮に基づき、Ｌｅｕ”置換［すなわち、Ｔｈｒ２ＡＩ ａＩ５Ｌｅｕ”Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２、トリフルオロ酢酸塩 、化合物Ｎｏ、３　＋Ｌｅｕ”Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２）リフル オロ酢酸塩；　Ｔｈ　ｒ２Ｌｅｕ１９Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２ｈ リフルオロ酢酸塩：Ａｌ　ａ”Ｌｅｕ”Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２ トリトリオロ酢酸塩］を持つＧＲＦアナログを調製した。ラット下垂体前葉細胞 を用いて成長ホルモン（ＧＨ）放出アッセイでｉｎ　ｖｉｔｒｏテストをすると 、Ｌｅｕ”アナログ（すなわち、Ｔｈｒ２Ａｌａ１ｓＬｅｕＩＱＬｅｕ”−ｂＧ ＲＦ　（１−２９）ＮＨ２、トリフルオロ酢酸塩、化合物Ｎｏ、３、Ｌｅｕ”Ｌ ｅｕ２７ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２トリフルオロ酢酸塩、Ｔｈｒ２Ｌｅｕ” Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２トリフルオロ酢酸塩、およびＡｌ　ａ１ ５Ｌｅｕ”Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２トリフルオロ酢酸塩）は対応 するＡｌａ”アナログよりも有意に活性が低かった。Based on the considerations proposed by others, the Leu” substitution [i.e. Thr2AI aI5Leu"Leu"-bGRF (1-29) NH2, trifluoroacetate , Compound No. 3 +Leu"Leu"bGRF (1-29)NH2) Rifle Oroacetate; Th r2Leu19Leu”bGRF (1-29)NH2h Refluoroacetate: Al a”Leu”Leu”bGRF (1-29)NH2 A GRF analog with tritrioloacetate] was prepared. Rat anterior pituitary cells When tested in vitro in a growth hormone (GH) release assay using , Leu” analog (i.e., Thr2Ala1sLeuIQLeu”-bG RF (1-29) NH2, trifluoroacetate, compound No. 3, Leu”L eu27bGRF (1-29) NH2 trifluoroacetate, Thr2Leu” Leu”bGRF (1-29) NH2 trifluoroacetate, and Al a1 5Leu”Leu”bGRF (1-29) NH2 trifluoroacetate) is compatible The activity was significantly lower than that of the ``Ala'' analog.

ｉｎ　ｖｉｖｏでテストすると、１０ｐｍｏｌ／ｋｇで去勢雄牛を成長させるに おいて、Ｌｅｕ”アナログによって２時間のテスト時間にわたって放出されたＧ Ｈの量はＡｌａ”化合物と有意には異ならなかった（ｐ＞０．０５）。ウシ血漿 で安定性をテストすると、Ｌ　ｅ　ｕ”化合物はＡｌａ”アナログよりも安定で あった。When tested in vivo, 10 pmol/kg was effective in growing steers. The G emitted by the Leu” analog over a 2-hour test period The amount of H was not significantly different from the Ala” compound (p>0.05). When tested for stability in there were.

ＧＲＦ分子において、残基１９は、膜様環境でラセン状である領域にある［クロ ール・シイ・エム、マーチン・ニス・アールおよびグロネンボーン・エイ・エム （Ｃ１ｏｒｅ、　Ｇ、　Ｍ、　、　Ｍａｒｔｉｎ、　Ｓ、　Ｒ，、ａｎｄ　Ｇｒ ｏｎｅｎｂｏｒｎ、　Ａ、　Ｍ、　）、ジャーナル・オンEモレ キュラー・バイオロジー（Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、　）、よ旦１．５５３− ５６１（１９８６）］。In the GRF molecule, residue 19 is located in a region that is helical in a membrane-like environment [crop L.C.M., Martin Niss.R. and Gronenborn A.M. (C1ore, G, M, , Martin, S, R,, and Gr onenborn, A, M, ), Journal on Emore Biological Biology (J, Mo1. Biol, ), Yotan 1.553- 561 (1986)].

ＧＲＦ分子中のＡｌａ”残基の役割が構造的にものであるのか、それがレセプタ ー接触残基であるのか否かは知られていない［サト・ケイ、ホック・エム、カゲ ガメ・ジエイ、シアング・ティ・シイ、マー・エイチ・タイ、トング・エム・エ イチ、およびリンーｚヌ（Ｓａｔｏ、　Ｋ、　、　Ｈｏｔｔａ、　Ｍ、　、　Ｋ ａｇｅｇａｍｅ、　Ｊ、　、　Ｃｈｉａｎｇ、　ＴＣ，ｎｕA　ＢＹ、　。Is the role of the Ala” residue in the GRF molecule structural? -It is unknown whether it is a contact residue [Sato K, Hock M, Kage GAME, J.I., SHIANG, T.C., M.H.T., TONG.M.E. Ichi, and Rin-znu (Sato, K, Hotta, M, K agegame, J, Chiang, TC, nuA BY,.

Ｄｏｎｇ９ＭＵ、　ａｎｄ　Ｌｉｎｇ、　Ｎ、　）、バイオケミカル・アンド・ バイフィジカル・リサーチ・コミューニケーションズ（Ｂｕｉｃｈｅｍ、　Ｂｉ ｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　（ｏｍｍｕｎ、　）　１４９　（２）　５３１−５３ ７　（１９８７）　、ソファ−・エムおよびエドムンドソン・エイ・ビイ（Ｓｃ ｈｉｆｆｅｒ、　Ｍ、　、　ａｎｄ　Ｅｄｍｕｎｄｓｏｎ、＾Ｂ）、バイオフィ ジカル・ジャーナル（ＢｉｏｐｈｙｓＪ）、７．１２１　（１９６７）コ。ラッ ト下垂体細胞アッセイでは、ｈＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２におけるＤ−Ａｌａ ”によるＡｌａ”の置換はｉｎ　ｖｉｔｒｏＳ　を放出能力をＬ−Ａｌａ１９ア ナログの６％にまで減少させた。Ｎｌ　ｅ”ｒＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２にお ける同買換はウノ下垂体細胞テスト系において標準の１０％まで能力を減少させ た。Ｎｌ　ｅ”ｒＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２におけるこの同置換はラット下垂 体細胞テスト系において標準の３０％まで能力を減少させた［リバー・ジエイ（ Ｒｉｖｅｒ、　Ｊ、　）　、血管腸ペプチドおよび関連ペプチドについての第２ 回国際ンンポジウム、カブ・ダシ（Ｃａｐ　ｄ’　Ａｇｄｅ）、フランス国、１ ９８５年６月］りしかしながら、Ｓｅｒ”ＧＲＦアナログはラット下垂体細胞Ｓ ｔ放出アッセイでｈＧＲＦ　（１−４０）と同能力で十分であった［ベリセレビ ・シイ、パラシイ・ニスおよびカイザー・ティ・イー（Ｖｅｌｉｃｅｌｅｂｉ、 　Ｇ、　、　Ｐａｔｔｈｉ、　Ｓ、　、　ａｎｄ　Ｋａｉｓｅｒ、　Ｔ、　Ｅ、 @）、 可能な両親媒性ラセン状カルボキン末端を有する成長ホルモン放出因子のアナロ グのデザインおよび生物学的活性（Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａ ｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｎａｌｏｇｓｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏ ｎｅ　ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ｗｉｔｈ　ｐｏｔｅｎｔｉｏａｌ　 ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ　■■撃奄モ≠■ ｃａｒｂｏｘｙ　ｔｅｒｍｉｎｉ）、プロンーディングズ・オン・ナショナル・ アカデミ−・オン・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ 、　）　８３．５３９７−５３９９（１９８６）］。Dong9MU, and Ling, N,), Biochemical & Biphysical Research Communications (Buichem, Bi ophys, Res, (ommun,) 149 (2) 531-53 7 (1987), Sofa M. and Edmundson A.B. (Sc. Hiffer, M., and Edmundson, ^B), Biophys. BiophysJ, 7.121 (1967). Rat In the human pituitary cell assay, D-Ala in hGRF(1-29)NH2 Replacement of “Ala” by “Ala” increases the ability to release in vitro S It has been reduced to 6% of analog. Nl　e”rGRF　(1-29) to NH2 The same replacement product reduces the ability to 10% of the standard in the Uno pituitary cell test system. Ta. Nl　rGRF　(1-29) This same substitution in NH2 causes rat ptosis. In the somatic cell test system, the capacity was reduced to 30% of the standard [River G.I. River, J.), 2nd volume on vascular intestinal peptides and related peptides. International Emposium, Cap d'Agde, France, 1 [June 985] However, the Ser"GRF analog is In the t-release assay, the same ability as hGRF (1-40) was sufficient [Beri Cerevi ・Velicelebi, Palashii Nis and Kaiser T.I. G, Patthi, S, and Kaiser, T, E, @), An analog of growth hormone-releasing factor with a possible amphipathic helical carboxine terminus. Design and biological activity l activity of analogs of growth hormo ne releasing factor with potential amphiphilic ■■ Gekimamo≠■ carboxy termini), Prondings on National Academy on Sciences (Proc, Natl, ^cad, Sci , ) 83.5397-5399 (1986)].

ゲゲラオフＧｅｔｚｏｆｆ）は、ミオヘムエリトリンのペプチドエピトーブにお いて、抗体結合を喪失することなくＶａｌの代わりにＡｌａ、Ｉ　ｌｅ、Ｓｅｒ およびＴｈｒで置き換え得るが、Ｌｅｕ置換ペプチドは結合を減少させたことを 報告している［ゲラオフ・イー・ディ、ジシン・エイチ・エム、ロッゾ・ニス・ ジェイ、アレキサンダ・エイチ、タイネル・ジェイ・エイおよびレルネル・アー ル・エイ（Ｇｔｚｏｆｆ、　Ｅ、　Ｄ、　、　Ｇｙｓｉｎ、　Ｈ，Ｍ、　、　Ｒ ｏｄｄａ、　Ｓ、　、　Ｊ、　、＾１ｅｘａｎｄｅｒ、　Ｈ，、ＴａPｎｅｒ、 　Ｊ、　Ａ、　、　ａｎｄ　Ｌｅｒｎｅｒ。Getzoff) is a peptide epitope of myohemerythrin. Ala, Ile, Ser instead of Val without loss of antibody binding. and Thr, but Leu-substituted peptides reduced binding. Reported by Geraoff E.D., Jisin H.M., Rozzo Nis. Jay, Alexander H., Tynel J.A. and Lernel A. Gtzoff, E, D, Gysin, H, M, R odda, S,, J,, ^1exander, H,, TaPner, J, A, and Lerner.

Ｒ，Ａ、　）、蛋白に結合する抗体の機構（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｎｔ ｉｂｏｄｙ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ａ５８２１は通常２位に見い出されるアミ ノ酸残基の代わりにＴｂｒＳＶａｌまたはＩｌｅ残基を、１９位にＡｌａを、１ ５位に以下のアミノ酸Ａｌａ、ＶａＬＬｅｕ、ｌｉｅまたはＧｌｙのうちの１つ と組合せて有する種々のＧＲＦペプチドを開示している。所望により、該ＧＲＦ ペプチドは、通常ポリペプチドの８および２８位に見い出されるアミノ酸残基の 代わりにＳｅｒ残基を有し得る。R, A, ), Mechanism of antibody binding to protein ibody binding to a5821 is the amino acid usually found in second place. TbrSVal or He residue in place of the amino acid residue, Ala at position 19, 1 One of the following amino acids Ala, VaLLeu, lie or Gly in position 5 discloses various GRF peptides having in combination with. Optionally, the GRF A peptide is a combination of amino acid residues normally found at positions 8 and 28 of a polypeptide. It may have a Ser residue instead.

加えて、該ＧＲＦペプチドは、所望により、Ｃ，−Ｃ５アルキル、ベンノル、Ｙ およびＹ′が同一または異なって天然に存在するアミノ酸、好ましくはＴｙｒま たは、へｓｐ；ＸおよびＸ゛が同一または異なってＴｈｒ、ＳｅｒまたはＡｌａ 、好ましくはＴｈｒまたはＳｅｒ：ｎが１〜１０；ｍが１〜５；ｐが１〜５であ るＨ−（Ｙ−Ｘ）。もしくはＨ−（Ｙ−Ｘ）、（Ｙ’−Ｘ’）。でＮ−末端が伸 長していてもよい。In addition, the GRF peptide optionally contains C,-C5 alkyl, benol, Y and Y′ are the same or different and are naturally occurring amino acids, preferably Tyr or or sp; X and X' are the same or different and Thr, Ser or Ala , preferably Thr or Ser: n is 1-10; m is 1-5; p is 1-5. H-(Y-X). Or H-(Y-X), (Y'-X'). The N-terminus is It can be long.

イー・ビイ・ハイマー（ＥＰ　Ｈｅ１ＩＩｌｅｒ）ら（第１２回米国ペプチドン ンポンウム、ケンブリツノ、マサチューセンツ州、６月１６−２２日、１９９１ ）、（シンポジウム「プログラムおよびアブストラクト（Ｐｒｏｇｒａｍ　ａｎ ｄ　Ａｂｓｔｒａｃｔ）Ｊ中アブストラクトＲＰ−３２）は、Ｍｏ１２はｍＧＲ Ｆをジペプチジルペプチダーゼ■による切断に対して耐性とすることを報告して いる。Ｍｏ１２につき強調された、２位修飾を一体化した一連のｈＧＲＦアナロ グが報告された。後半の会期にて、Ｇｌｙ２、ｌ１ｅ２、およびＬｅｕ２ＧＲＦ アナログも開示された。EP He1IIler et al. (12th U.S. Peptide Mponium, Cambridge, Massachusetts, June 16-22, 1991 ), (Symposium “Program and Abstracts (Program and Abstracts) d Abstract) J Medium Abstract RP-32), Mo12 is mGR It has been reported that F is resistant to cleavage by dipeptidyl peptidase. There is. A series of hGRF analogs with integrated 2-position modification highlighted for Mo12. was reported. In the second half of the session, Gly2, l1e2, and Leu2GRF An analogue was also disclosed.

発明の概要 本発明は、下垂体による成長ホルモン（ＧＲＦペプチド）の放出を促進し、かつ １９位に〜’ａｌまたはＩｃｅを有するポリペプチドを提供する。該ＧＲＦペプ チドは、１５位の以下のアミノ酸、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌ ｙのうちの１つと組み合わせて、２位に通常見い出されるアミノ酸残基の代わり にＧａｙ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ残基を有する。所望により、該ＧＲＦペ プチドはポリペプチドの８および２８位に通常見い出されるアミノ酸残基の代わ りにＳｅｒ残基を有していてもよい。加えて、本発明のＧＲＦペプチドは、所望 により、Ｃ，−Ｃ５アルキル、ベンジル、（ｎが０〜２０、好ましくは０〜１０ 、Ｘがいずれかの天然に存在するアミノ酸、Ｙがアラニン、セリン、スレオニン またはプロリンであって、ｎが０である場合、Ｙはアラニン、セリンまたはスレ オニンよりなる群から選択され；Ｘ′　はプロリンまたはヒドロキシプロリン以 外のいずれかの天然に存在するアミノ酸である）（Ｘ−Ｙ）−（Ｘ’−Ｙ）、で Ｎ−末端が伸長されていてもよい。Summary of the invention The present invention promotes the release of growth hormone (GRF peptide) by the pituitary gland, and A polypeptide having ~'al or Ice at position 19 is provided. The GRF Pep Tide is the following amino acid at position 15, Ala, Val, Leu, He or Gl substitute for the amino acid residue normally found in position 2, in combination with one of y has a Gay, Thr, Val or He residue. If desired, the GRF Peptides are substitutes for the amino acid residues normally found at positions 8 and 28 of polypeptides. It may also have a Ser residue. In addition, the GRF peptides of the invention can be C, -C5 alkyl, benzyl, (n is 0 to 20, preferably 0 to 10 , X is any naturally occurring amino acid, Y is alanine, serine, threonine or proline, and if n is 0, Y is alanine, serine or thread. selected from the group consisting of onine; X' is proline or hydroxyproline or more; (X-Y)-(X'-Y), which is any naturally occurring amino acid outside of The N-terminus may be extended.

本発明のペプチドはｉｎ　ｖｉｖｏで優れており、血液中血漿酵素による分解に 対して天然のＧＲＦ配列よりも安定である。加えて、Ｓｅｒ’およびＳｅｒ”で 置換された化合物は水性環境中における脱アミド化に対して保護されており、化 学的により安定である。The peptide of the present invention is excellent in vivo and is resistant to degradation by blood plasma enzymes. In contrast, it is more stable than the natural GRF sequence. In addition, Ser’ and Ser” Substituted compounds are protected against deamidation in aqueous environments and are Scientifically more stable.

発明の詳細な説明 残基と４４残基の間であって、下垂体による成長ホルモンの放出を促進する公知 のポリペプチドを意味する。ＧＲＦペプチドの例は、米国特許第４５１７１８１ 号、第４５１８５８６号、第４５２８１９０号、第４５２９５９５号、第４５６ ３３５２号、第４５８５７５６号、第４５９５６７６号、第４６０５６４３号、 第４６１０９７６号、第４６２６５２３号、第４６２８０４３号、第４６８９３ １８号、第４７８４９８７号、第４８４３０６４号および１９８９年１月２７日 付は出願の米国特許出願筒８　９／Ｏ　Ｏ　２　４　５号に開示されている天然 または合成ポリペプチドを包含し、それら文献すべてをここに参照のために挙げ る。フェリ・ソクス・エイ、ランプ・シイ・ティ、ハイマー・イー、フルニエ・ エイ、ボリン・ディ、アーマド・エム、ランプロス・ティ、モウレス・ティ、お よびミラー・エル（Ｆｅｌｉｘ．Ａ．　、　ｆａｎｇ．　Ｃ．　Ｔ，　、　Ｈｅ ｉｍｅｒ．　Ｅ．　、　Ｆｏｕｒｎｉｅｒ．　Ａ．　、　Ｂｏｌｉｎ．　ＤC　 、　Ａｈｍａｄ．Ｍ．ルａｍｂｒｏｓ．　Ｔ。Detailed description of the invention and 44 residues, and is known to promote the release of growth hormone by the pituitary gland. means a polypeptide of Examples of GRF peptides are U.S. Pat. No. 4,517,181 No. 4518586, No. 4528190, No. 4529595, No. 456 No. 3352, No. 4585756, No. 4595676, No. 4605643, No. 4610976, No. 4626523, No. 4628043, No. 46893 No. 18, No. 4784987, No. 4843064 and January 27, 1989 Attached is the natural material disclosed in U.S. Patent Application No. 89/O245. or synthetic polypeptides, all of which are incorporated herein by reference. Ru. Feli Soksu A, Lamp C T, Heimer E, Fournier A A., Bolin D., Ahmad M., Lampros T., Maures T., O. and Mirror L (Felix.A., fang.C.T., He imer. E. , Fournier. A. , Bolin. DC , Ahmad. M. le ambros. T.

Ｍｏｗｌｅｓ．　Ｔ．　ａｎｄ　Ｍｉｌｌｅｒ．　Ｌ．　）　、ペプチド、化学 および生物学（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇ ｙ）における「ペプチドにおける新規線状および環状ＧＲＦアナログの合成およ び生物学的活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｃｔ ｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＮｏｖｅｌＬｉｎｅａｒ　＆　Ｃｙｃｌｉｃ　ＧＲＦ　Ａｎ ａｌｏｇｓ）ｊ　、第１０回米国ペプチドシンポジウム、シイ・アール−？ーシ ャル（Ｇ．　Ｒ．　Ｍａｒｓｈａｌｌ）編、ニスコム・サイエンス（ＥＳＣＯＭ 　Ｓｃｉ．　）出版社、ライデン（Ｌｅｉｄｅｎ）、オランダ国、４６５−４６ ７頁（１９８８）：トウ・ジェイ・ニス、カンフエ・エル・エイ、ビニヤード・ ビイ・ディ、ブオノモ・エフ・シイ、デッシーフェラ・エム・エイ、およびパイ ル・シイ・エイ（Ｔｏｅ．　Ｊ，　Ｓ，　。Mowles. T. and Miller. L. ), peptide, chemistry and Biology (Peptides. Chemistry and Biolog y) “Synthesis of novel linear and cyclic GRF analogs in peptides and Synthesis and Biological Act ivity of NovelLinear & Cyclic GRF An alogs)j, 10th American Peptide Symposium, C.R.? -shi Edited by G. R. Marshall, Niscom Science (ESCOM) Sci. ) Publisher, Leiden, Netherlands, 465-46 7 pages (1988): Tou J. Nis, Kanhue L. A., Vinyard. B.D., Buonomo F.C., Dessie Blow M.A., and Pie Toe. J, S,.

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Ｂａ１ｒｄ、　Ａ、　、　ｌｌｅｈｒｅｎｂｅｒｇ、　ｆ、　Ｂ、　、　Ｍｕｎ ｅｇｕｍｉ、　Ｔ、　、　ａｎｄ　［］ｅｎｏ、　Ｎ、　）A「遺伝子工学によ り生 産されたＧＲＦ治療剤の競合的拮抗剤としての合成ＧＲＦアナログ（Ｓｙｎｔｈ ｅｔｉｃＧＲＦ　Ａｎａｌｏｇｓ　ａｓ　Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ　Ａｎｔａｇ ｏｎｉｓｔｓ　ｏｆ　ＧＲＦ　Ｔｈｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｇｅｎｔｓ@Ｐｒｏｄ ｕｃｅｄ ｂｙ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　）Ｊ、クオ６バ０シンポジウ ム（Ｑｕｏ　Ｖａｄｉｓ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ）Ｓサノフィ・グループ（Ｓａｎ ｏｆｉ　Ｇｒｏｕｐ）、５月２９−３０日、１９８５、トウール−ズーラベージ （Ｔｏｕｌｏｕｓｅ−Ｌａｂｅｇｅ）、フランス国、３０９−３２９頁、マーコ イ・ダブりニー・エイおよびコイ・ディーエイチ（Ｍｕｒｐｈｙ、　Ｗ、＾、　 ａｎｄ　Ｃｏｙ、　Ｄ、　１１．　）、「成長ホルモン−放出因子の優れた長期 間持続アルキル化アナログ（Ｐｏｔｅｎｔ　ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ　ａｌｋｙ ｌａｔｅｄ　ａｎａｌｏｇｓ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌｅ ａｓｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ）Ｊ　、yブタイ ド・リサーチ（Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）　１．３６−４１　（１９ ８８）　、ジエイ・シイ・トウ、エル・エイ・ケンフエ、ビイ・ディ・ビニヤー ド、エフ・シイ・ブオノモ、エム・エイ・デッシーフェラおよびシイ・エイ・バ イμ（Ｊ、　Ｃ，Ｔｏｕ、　Ｌ、Ａ、Ｋａｅｍｐｈｅ。Ba1rd, A, , llehrenberg, f, B,, Mun egumi, T,, and []eno, N,) A “Genetic engineering Ryu Synthetic GRF analogs (Synth eticGRF Analogs as Competitive Antag onists of GRF Thrapeutic Agents@Prod uced by Genetic Engineering) J, Quo 6 Ba 0 Symposium Quo Vadis Symposium S Sanofi Group ofi Group), May 29-30, 1985, Tour-Zoulavage (Toulouse-Labege), France, pp. 309-329, Marko Murphy, W, ^, and Coy, D, 11. ), “Excellent long-term growth hormone-releasing factor Potent long-acting alkylated analogs lated analogs of growth hormonee-rele asing factor) J, Y butai Peptide Research 1.36-41 (19 88) Do, F.C. Buonomo, M.A. Dessifera and C.A.B. Iμ(J, C, Tou, L, A, Kaemphe.

Ｂ、　Ｄ、　Ｖｉｎｅｙａｒｄ、　Ｆ、　Ｃ，Ｂｕｏｎｏｍｏ、　Ｍ＾、　Ｄｅ ｌｌａ−Ｆｅｒａ　ａｎｄ　Ｃ，Ｄ、　Ｂａ１ｌｅ）　７両e媒性成長ホル モン−放出因子（ＧＲＦ）アナログ：ペプチドデザインおよびｉｎ　ｖｉｖｏ生 物学的活性（＾ｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｒｅｌ ｅａｓｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ（ＧＲＦ）ａｎａｌｏｇｓ：ｐｅｐｔ奄р■ ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉ ｖｏ）　、バイオケミカル・アンド・バイフィジカル・リサーチ・コミューニケ ーションズ（Ｂｉｏｃｈｅａ＋、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ 、　）　１３９．７６３−７００　（１９８６）。ＧＲＦペプチドなる語はその 非毒性塩を包含する。B, D, Vineyard, F, C, Buonomo, M^, De lla-Fera and C, D, Ba1le) 7 ampholytic growth hormone Mon-releasing factor (GRF) analogs: peptide design and in vivo production Physical activity (^mphiphilic Growth Hormone-Rel) easing Factor (GRF) analogs: pept design and biological activity invi vo), Biochemical and Biphysical Research Communiqué tions (Biochea+, Biophys, Res, Commun , ) 139.763-700 (1986). The term GRF peptide is Includes non-toxic salts.

ＧＲＦペプチドを定義するのに用いる命名法は、シュローダ−・アンド・ルブケ （Ｓｃｈｒｏｄｅｒ　＆　Ｌｕｂｋｅ）、「ザ・ペブタイズ（Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔ ｉｄｅｓ）Ｊ　、アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）　（ １９６５）のものであり、そこでは、通常の表示法により、Ｎ−末端のアミノ基 は左側に現れ、Ｃ−末端のカルボキシル基は右側に現れる。アミノ酸残基が異性 体形を有する場合、特に断りのない限り、アミノ酸のし一形態が表示される。The nomenclature used to define GRF peptides is that of Schroeder and Lubke. (Schroder & Lubke), “The Peptide” ides) J, Academic Press ( (1965), in which the N-terminal amino group is appears on the left, and the C-terminal carboxyl group appears on the right. Amino acid residues are isomeric If the amino acid has a physical shape, the single form of the amino acid is displayed unless otherwise specified.

本発明は、以下の式： ％式％ ０式中、 Ｒは、Ｈ，Ｃ，−Ｃ５アルキルまたはベンンル；好ましくはＨＲｏは、Ｔｙｒま たはＨｉｓ、好ましくはＴｙｒ；Ｒ２は、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ 、好ましくはＶａｌまたは１１ｅ： Ｒ８はＡｓｐ、ＧｌｕまたはＣｙａ、好ましくはＡｓｐ：Ｒ８は、Ａ、　ｓ　ｎ またはＳｅｒ、好ましくはＳｅｒ；Ｒ１２はＬｙｓＳＮ−ε−アルキル−または Ｎ−ε−ペンシル−Ｌｙｓまたは、へｒｇ、好ましくはＬｙｓ：あるいはＲがＣ ，−Ｃ５アルキルまたはベンノルである場合、Ｎ−ε−アルキルまたはＮ−ε− ペンシル−Ｌｙｓ；Ｒ１３はＶａｌまたはＩｌｅ、好ましくはＶａｌ；Ｒ１，は Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙ　（好ましくはＡｈａ。The present invention is based on the following formula: %formula% In formula 0, R is H, C, -C5 alkyl or benzene; preferably HRo is Tyr or or His, preferably Tyr; R2 is Gly, Thr, Val or He , preferably Val or 11e: R8 is Asp, Glu or Cya, preferably Asp: R8 is A, sn or Ser, preferably Ser; R12 is LysSN-ε-alkyl- or N-ε-pencil-Lys or herg, preferably Lys: or R is C , -C5 alkyl or benol, N-ε-alkyl or N-ε- Pencil-Lys; R13 is Val or He, preferably Val; R1, is Ala, Val, Leu, He or Gly (preferably Aha).

Ｖａｌ、Ｌｅｕまたはｌｉｅ、より好ましくはＡｌａ）；Ｒ１８はＳｅｒまたは Ｔｙｒ、好ましくはＳｅｔ；ＲｌＧは〜’ａｌまたはＩｌｅ；（好ましくはＶａ ｌ）；Ｒ２１はＬｙｓ、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓま たは、Ａｒｇ、好ましくはＬｙｓあるいはＲがＣ−Ｃ５アルキルまたはベンジル である場合はＮ−ε−アルキル−またはＮ−ε−アルキル−またすはＮ−ε−ベ ンジル−Ｌｙｓ： Ｒ２２はＡｈａまたはＬｅｕ、好ましくはＬｅｕ　：Ｒ４ＳはＡｓｐまたはＧｌ ｕ、好ましくは、Ａｓｐ：Ｒ２７はＭｅｔ、ＴｉｅまたはＬｅｕ、好ましくはＬ ｅｕ　；Ｒ２ｇはＡｓｎまたはＳｅｒ：好ましくはＳｅｒ＋Ｒ３４はＳｅｒまた はＡｒｇ、好ましくはＡｒｇ　：ＲｓｓはＡｓｎまたはＳｅｒ、好ましくはＡｓ ｎ：Ｒ３ＭはＡｒｇまたはＧｌｎ、好ましくはＧｌｎ；Ｒ３１はｃ、＋ｙまたは Ａｒｇ、好ましくはＧｌｙ：Ｒ４０はＡｌａまたはＳｅｒ、好ましくはＡｌａ； Ｒ１２はＡｌａ、ＶａｌまたたはＰ　ｈ　ｅ　ｓ好ましくはＶａｎ：およびＺは Ｃ−末端におけるアミノ酸残基のカルボキシ部位を表すものであって、基−ＣＯ ＯＲ，、−ＣＲ，○、−ＣＯＮＨＮＨＲ，、−ＣＯＮ　（Ｒ，）（Ｒ，）または −ＣＨ２０Ｒ，で、Ｒ８およびＲ６はＣ＋　Ｃｓアルキルまたは水素を意味する ］を有する合成ペプチドアナログ（ＧＲＦペプチド）、またはＮ−末端のＲから そのＣ−末端としての２７位ないし４４位いずれかの残基まで伸びるその生物学 的活性断片：または前記のもののＨｓｅ（ラクトン）、ＨｓｅＯＨまたはＨｓｅ Ｎ（Ｒ，）（Ｒ＝）および／または前記のものの非毒性塩を提供する。Val, Leu or lie, more preferably Ala); R18 is Ser or Tyr, preferably Set; RlG ~'al or Ile; (preferably Va l); R21 is Lys, N-ε-alkyl- or N-ε-benzyl-Lys or or Arg, preferably Lys or R is C-C5 alkyl or benzyl N-ε-alkyl- or N-ε-alkyl- or N-ε-base Njiru-Lys: R22 is Aha or Leu, preferably Leu: R4S is Asp or Gl u, preferably Asp:R27 is Met, Tie or Leu, preferably L eu; R2g is Asn or Ser: Preferably Ser+R34 is Ser or is Arg, preferably Arg: Rss is Asn or Ser, preferably As n: R3M is Arg or Gln, preferably Gln; R31 is c, +y or Arg, preferably Gly: R40 is Ala or Ser, preferably Ala; R12 is Ala, Val or Phes preferably Van: and Z is It represents the carboxy position of the amino acid residue at the C-terminus, and the group -CO OR,, -CR,○, -CONHNHR,, -CON (R,) (R,) or -CH20R, where R8 and R6 mean C+ Cs alkyl or hydrogen ] (GRF peptide), or from the N-terminal R Its biology extends to residues anywhere from position 27 to 44 as its C-terminus. or Hse (lactone), HseOH or Hse of the above. N(R,)(R=) and/or non-toxic salts of the foregoing are provided.

Ｒ１は好ましくは水素（Ｈ）である。R1 is preferably hydrogen (H).

Ｒ５は好ましくはエチルである。R5 is preferably ethyl.

Ｃ＋　Ｃｍアルキルの例はメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキ シル、オクチルおよびその異性体形である。Examples of C+ Cm alkyl are methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl. syl, octyl and its isomeric forms.

ｉＰｒなる語はイソプロピルをいう。The term iPr refers to isopropyl.

Ｂｚｌなる語はベンジルをいう。The word Bzl refers to benzyl.

本発明の具体例は、Ｒ，、がＶａｌまたはＩｌｅであるＧＲＦペプチドで、ペプ チドＴｈｒ”Ａｌａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ２フｂＧＲＦ（１−２９）ＮＯ２、Ｔｈｒ ２Ａ１ａ”Ｉｌｅ”Ｌｅｕ２’ｂＧＲＦ（１−２９）Ｎ［ＩQ、 Ｖａ１２＾１ａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＯ２、ｌ１ｅ ２＾１ａ”　ｒｌｅ”　Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ（１−２９）Ｎgｚ、 Ｖａｌ”Ａｌａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ２フーｂＧＲＦ（１−２９）ＮＯ２，１１ｅ” Ａｌａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ”　７−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＦQ、 Ｇ１ｙ２Ａ１ａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ２フーｂＧＲＦ（１−２９）ＮＲ２、Ｇ１ｙ２ ＾１ａ”Ｖａｌ”Ｌｅｙ”丁−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＯ２■■ 含し、好ましくはペプチド Ｔｈｒ２Ｓｅｒ’＾ｌａ”　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”Ｈｓｅ”ｂＧＲＦ（１ −３０）ＮＯ２、Ｔｈｒ”Ｓｅｒ’Ａ１ａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ”フＳｅｒ”Ｈｓｅ ”ｂＧＲＦ（１−３３）Ｎｌ１２、Ｔｈｒ”Ｓｅｔ’＾ｌａ”　Ｖａｌ”　Ｌｅ ｕ”Ｓｅｒ”Ｈｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＨｚ、Ｔｈｒ　２Ｓｅｒ’　Ａｌ ａ　”　Ｖａｌ　”　Ｌｅｕ　２７Ｓｅｒ”Ｕｓｅ”　ｎＧＲＦ（１−４４）Ｎ Ｏ２、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ’＾ｌａ’用ｅ’　”Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２ｓＨｓｅ’°ｂ ＧＲＦ（１−３０）ＮＨ２、Ｔｈｒ２Ｓｅｒ”Ａｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ”Ｓ ｅｒ”ｕｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ２、丁ｈｒ”Ｓｅｔ’＾ｌａ”　Ｉｌ ｅ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｔ”１（ｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＨ２、また（まＴｈ ｒ２Ｓｅｒ’Ａ１ａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１ −４４）Ｎｌ１２；より好ましく（よ１１ｅ２Ｓｅｒ’Ａ１ａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ ”Ｓｅｒ”Ｕｓｅ３°ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ２、Ｔｈｒ”Ｓｅｔ”Ａｌａ” Ｖａｌ”Ｌｅｕ”Ｓｅｔ”Ｕｓｅ３°ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨＥｔ。A specific example of the invention is a GRF peptide in which R, , is Val or He; Thr”Ala”Val”Leu2fu bGRF(1-29)NO2, Thr 2A1a”Ile”Leu2’bGRF(1-29)N[IQ, Va12^1a”　Ile”　Leu”-bGRF(1-29) NO2, l1e 2^1a"rle"Leu"-bGRF(1-29)Ngz, Val”Ala”Val”Leu2fu bGRF(1-29)NO2,11e” Ala”Val”Leu” 7-bGRF(1-29)NFQ, G1y2A1a"Val"Leu2 Fu bGRF (1-29) NR2, G1y2 ^1a"Val"Ley"Ding-bGRF(1-29)NO2■■ containing, preferably a peptide Thr2Ser'^la"Val"Leu"Ser"Hse"bGRF(1 -30) NO2, Thr”Ser’A1a”Val”Leu”FSer”Hse "bGRF(1-33)Nl12, Thr"Set'^la" Val" Le u"Ser"Hse"bGRF (1-37) NHz, Thr 2Ser' Al a “Val” Leu 27Ser”Use” nGRF(1-44)N O2, Thr2Ser'^la'e'"Leu27Ser2sHse'°b GRF (1-30) NH2, Thr2Ser"Ala" Ile"Leu"S er"use"bGRF(1-33)NH2, dinghr"Set'^la" Il e”　Leu”Set”1(se”bGRF(1-37)NH2, also(MaTh r2Ser’A1a”　Ile”　Leu27Ser”Hse”　bGRF(1 -44) Nl12; More preferably (Y11e2Ser'A1a"Val"Leu “Ser”Use3°bGRF(1-30)NH2,Thr”Set”Ala” Val"Leu"Set"Use3°bGRF(1-30)NHEt.

１１ｅ”Ｓｅｒ’＾ｌａ”　Ｖａｌ”Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”ｕｓｅ３３ｂＧＲＦ（ １−３３）ＮＨｚ、１１ｅ２Ｓｅｒ’＾ｌａ”　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ” ｕｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨＥｔ。11e"Ser'^la" Val"Leu27Ser"use33bGRF( 1-33) NHz, 11e2Ser’^la” Val” Leu27Ser” use”bGRF(1-33)NHEt.

Ｔｈｒ”５ｅｒ８＾１ａ”　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（ １−３３）ＮＨＥｔ。Thr"5er8^1a" Val"Leu"Ser"Hse33bGRF( 1-33) NHEt.

１１ｅ”Ｓｅｒ”Ａｌａ”　Ｖａｌ　”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ２８Ｈｓｅ３７ｂＧ ＲＦ（１−３７）ＮＨｚ、１１ｅ２Ｓｅｒ’八ｌａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ”Ｓｅｒ” Ｕｓｅ”ｂＧＲＦ（１−４４）ＮＨ２、Ｖａｌ”Ｓｅｒ’＾１ａ１５Ｖａ１１９ Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”ｕｓｅ３°ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＬ、Ｖａｌ　”Ｓｅｔ’ Ａ１ａ　”　Ｖａｌ　’　”Ｌｅｕ　”　７Ｓｅｒ２”ｕｓｅ”　”ｂＧＲＦ　 （１−３３）ＮＨ２、Ｖａｌ　２Ｓｅｒ８＾１ａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ２１Ｓｅｒ” Ｈｓｅ３フｂＧＲＦ（１−３７）ＮＬ、Ｖａｌ　２Ｓｅｒ’　Ａｌａ　”　Ｖａ ｌ　”　Ｌｅｕ　”　’Ｓｅｒ”　８Ｂｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−４４）ＮＢ２． １１ｅ”Ｓｅｒ”Ａｌａ”　Ｉｌｅ”Ｌｅｕ２’Ｓｅｒ書５ｅ３０ｂＧＲＦ（１ −３０）ＮＯ２、Ｉ　１ｅ”Ｓｅｒ”Ａ　ｌａ　”　ｔｌｅ　”　Ｌｅｕ　２７ Ｓｅｒ２”Ｈｓｅ”　３ｂＧＲＦ　（１−３３）ＮＨ２，１１ｅ２Ｓｅｒ’＾ｌ ａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”＋Ｉｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＨ２， １１ｅ２Ｓｅｒ”Ａｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”Ｂｓｅ”　ｂＧＲＦ （１−４４）ＮＬ、Ｖａ１２Ｓｅｒ’＾ｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ” ｕｓｅ３０ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＢｚ、Ｖａ１２Ｓｅｒ”Ａｌａ”　Ｉｌｅ” 　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”８Ｂｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＬ、Ｖａ１２Ｓｅｒ ”Ａｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”ｕｓｅ３７ｂＧＲＦ（１−３７）Ｎ ）Ｉ２、Ｖａｌ”Ｓｅｔ”Ａｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”ｕｓｅ”ｂＧ ＲＦ（１−４４）ＮＢｚ、Ｖａｌ”５ｅｒ８＾１ａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ”Ｓｅ ｔ”ｕｓｅ３７ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＵ　−ｎ−プロピル；あるＬ）＋１その 非毒性塩。11e”Ser”Ala” Val　”Leu27Ser28Hse37bG RF (1-37) NHHz, 11e2Ser'8la"Val"Leu"Ser" Use”bGRF(1-44)NH2,Val”Ser’^1a15Va119 Leu27Ser"use3°bGRF(1-30)NL, Val"Set' A1a “Val” “Leu” 7Ser2 “use” “bGRF” (1-33) NH2, Val　2Ser8^1a"Val"Leu21Ser" Hse3fu bGRF (1-37) NL, Val 2Ser’ Ala “” Va l"Leu"'Ser"8Bse"bGRF(1-44)NB2. 11e”Ser”Ala” Ile”Leu2’Ser Book 5e30bGRF(1 -30) NO2, I 1e “Ser” A la “tle” Leu 27 Ser2”Hse” 3bGRF (1-33)NH2,11e2Ser’^l a"　Ile"　Leu27Ser"+Ise"bGRF(1-37)NH2, 11e2Ser”Ala”　Ile”　Leu27Ser”Bse”　bGRF (1-44) NL, Va12Ser’^la”　Ile”　Leu27Ser” use30bGRF(1-30)NBz, Va12Ser"Ala" Ile" 　Leu27Ser”8Bse33bGRF(1-33)NL, Va12Ser "Ala" Ile"Leu27Ser"use37bGRF(1-37)N ) I2, Val"Set"Ala"　Ile"　Leu"Ser"use"bG RF (1-44) NBz, Val”5er8^1a”　Ile”　Leu”Se t"use37bGRF (1-37) NU -n-propyl; certain L) +1 that Non-toxic salts.

本発明の最も好ましいＧＲＦペプチドは１１ｅ２Ｓｅｒ’＾Ｌａ”　Ｖａｌ”　 Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”Ｈｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨＥｔである。The most preferred GRF peptide of the present invention is 11e2Ser'^La"Val" Leu"Ser"Hse"bGRF(1-30)NHEt.

さらに本発明のもう１つの具体例は、例えば、Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−＾１ａ−Ｐｈ ｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−＾１ａ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ２Ｓｅｒ’＾ｌａ　”　Ｉ　 ｌｅ　”　Ｌｅｕ　２７Ｓｅｒ　２’　ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２；　Ｎ− ａ−（Ｌｅ普|Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ− Ａ　１ａ）−Ｔｙｒ　’　Ｔｈｒ　２Ｓｅｒ”Ａ　ｌａ　”　Ｖａｌ　’　”　 Ｌｅｕ　”　７Ｓｅｒ　２’ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２G　Ｎ−ａ−（Ａａ ｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ）　ｒＴｙｒ　’　Ｖａｔ　２Ｓ ｅｔ’Ａｌａ　”　Ｉｌｅ　’　”Ｌｅｕ”　’Ｓｅｔ”Ｈｓｅ’　”ｂＧＲＦ （１−３２jＮＯ２；Ｎ−ａ−（Ｌｅｕ−Ｐｒ ｏ−Ｔｙｒ−＾１ａ−Ｔｙｒ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ’　１１ｅ”Ｓｅｒ’＾ｌａ” 　Ｖａｌ　”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”ｂＧＲＦ（１−２９）ＮｌP２　；Ｎ−ｒ（Ｈ ｉ ｓ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ’　１１ｅ”Ｓｅｒ” Ａｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”ｂＧＲＦ（１−２X）Ｎｉｌ”；Ｎ− ａ −（Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａ　１ａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−ｔｌｉｓ−Ａ　１ａ ）−Ｔｙｒ　’　Ｉ　ｌｅ　２Ｓｅｒ’Ａ１ａ　”　Ｖａｌ@”　Ｌｅｕ　！７ Ｓｅｒ２’　ｂＧＲＦ　（１−２９）Ｎ１１１２；Ｎ−ａ−（Ｈｉｓ−Ｐｒｏ− Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−＾１ａ−Ｔｙｒ−＾１ａ）−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ２Ｓｅ ｒ’Ａ１＝h　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ” ’　Ｓｅｔ　”　’　ｂＧＲＦ　（１−３７）ＮＨ２；　Ｎ−ａ　−（Ｔｙｒ− Ａ　１ａ−Ｇｌ　ｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａ@ｌａ）　２−Ｔｙ ｒ　’　Ｉｌｅ　２Ｓｅｒ”　Ａｌａ　”　Ｖａｌ　’　”Ｌｅｕ　２’　Ｓｅ ｒ　２８Ｈｓｅ３２ｂＧＲＦ　（１−３２）ＮＨ２；　Ｎ−ａ−（Ｖａｌ−Ｐｒ ｏ−Ａｒｇ−oｒｏ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−３ ｅｒ）−Ｔｙｒ’ｖａｌ”Ｓｅｒ”Ａｌａ”　ｒｌｅ　”　Ｌｅｕ　２’Ｓｅｒ ”ｕｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨＥｔ　：　Ｎ−ａ−iＡｒｇ−Ｐｒｏ− Ｔｙｒ −Ａｌａ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ’　１１ｅ２Ｓｅｒ’＾ ｌａ”　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”Ｈｓｅ３°−ｂＧＲＦi１−３０）ＮＥＩ Ｅｔ；Ｎ−ａ−（Ｔｙｒ−Ａｌａ）４−Ｔｙｒ’Ｖａｌ”Ｓｅｒ”Ａｌａ”　Ｖ ａｌ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”１ｌｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３４jＮＨＣＨ２；Ｎ −ａ−＜　ｌ１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ａｌａ）−Ｔｙｒ　’　 Ｉ　ｌｅ　”Ｓｅｔ’　Ａｌａ　”　Ｖａｔ　”　Ｌｅｕ　Q７Ｓｅｒ”　’　 ｂＧＲＦ　（１−３７）ＮＨ２を包含するＮ−末端伸長ペプチドである。Furthermore, another specific example of the present invention is, for example, N-a-(Tyr-^1a-Ph e-Pro-Phe-^1a)-Tyr’　Thr2Ser’^la　”　I　 le　Leu　Leu　27Ser　2’ bGRF　(1-29)NH2;　N- a-(Le Fu|Pro-Gly-Pro-Tyr- A 1a)-Tyr' Thr 2Ser"A la" Val Leu　7Ser　2’bGRF　(1-29)NH2G　N-a-(Aa l-Pro-Gly-Pro-Tyr-Ser) rTyr’ Vat 2S et’Ala　”　Ile　’　”Leu”　’Set”Hse’　”bGRF (1-32jNO2;N-a-(Leu-Pr o-Tyr-^1a-Tyr-Ala)-Tyr' 11e"Ser'^la" Val”Leu”Ser”bGRF(1-29)NlP2;N-r(H i s-Ala-Tyr-Pro-Tyr-Ala)-Tyr' 11e"Ser" Ala”　Ile”　Leu27Ser”bGRF(1-2X)Nil”;N- a -(Glu-Pro-Phe-A 1a-Tyr-Pro-tlis-A 1a )-Tyr　’　I　le　2Ser’A1a　”　Val@”　Leu! 7 Ser2' bGRF (1-29) N1112; N-a-(His-Pro- His-Pro-His-^1a-Tyr-^1a)-Tyr' Thr2Se r’A1=h Val”Leu” ’　Set　”　’　bGRF　(1-37)NH2;　N-a　-(Tyr- A 1a-Gl y-Pro-Leu-Pro-Phe-A@la) 2-Ty r　’　Ile　2Ser”　Ala　”　Val　’　”Leu　2’　Se r　28Hse32bGRF　(1-32)NH2;　N-a-(Val-Pr o-Arg-oro-Phe-Pro-Tyr-3 er)-Tyr’val”Ser”Ala”　rle　”　Leu　2’Ser ”use33bGRF(1-33)NHEt: N-a-iArg-Pro- Tyr -Ala-11e-Pro-Phe-Ala)-Tyr' 11e2Ser'^ la"Val"Leu"Ser"Hse3°-bGRFi1-30) NEI Et;N-a-(Tyr-Ala)4-Tyr'Val"Ser"Ala"　V al”Leu27Ser”1lse”bGRF(1-34jNHCH2;N -a-<l1e-Pro-Glu-Ala-Tyr-Ala)-Tyr’ I le “Set’ Ala” “Vat” “Leu Q7Ser”’ bGRF (1-37) is an N-terminal extended peptide encompassing NH2.

本発明のもう１つの具体例は、３位および／または２５位、好ましくは３位のＡ ｓｐの代わりにＣｙａで置換された前記のうちのいずれかである。Another embodiment of the invention is that A at position 3 and/or 25, preferably at position 3. Any of the above substituted with Cya in place of sp.

本発明のＶａｌ”およびＩｌｅ”化合物は、その対応するＡ１ａ１９対応体とｉ ｎ　ｖｉｔｒｏにてのＧＨ放出（ラット下垂体細胞）において同程度活性であり （また、しばしばより活性である）（表Ｉおよび図１）。ウシ血漿中でインキュ ベートした場合、それらは蛋白分解に対してより安定である。（化合物Ｌｅｕ” ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２が具体例である天然ＧＲＦ配列と比較して）本発明 の化合物の改良された代謝安定性の証拠は、提示するｉｎ　ｖｉｔｒｏ安定性デ ータにより表Ｈによって示される。本発明の化合物は、３　Ｑ　ｐｍｏｌ／ｋｇ にて去勢雄牛でテストすると、Ｌｅｕ”アナログ（図２）よりも１０ｐｍｏｌ／ ｋｇにてｉｎ　ｖｉｖｏでより活性であり、一般により多（の成長ホルモンを放 出し、Ａｌａ”およびＬｅｕ”アナログよりも持続する効果を有する（表■）。The Val" and Ile" compounds of the present invention can be combined with their corresponding A1a19 counterparts It is equally active in GH release (rat pituitary cells) in vitro. (also often more active) (Table I and Figure 1). Incubated in bovine plasma When vated, they are more stable to proteolysis. (Compound Leu” bGRF(1-29)NH2 is a specific example) of the present invention Evidence of improved metabolic stability of the compound is provided by the in vitro stability data presented. The data are shown in Table H. The compound of the present invention is 3 Q pmol/kg When tested in steers at kg is more active in vivo and generally releases more growth hormone. and has a longer lasting effect than the Ala'' and Leu'' analogues (Table ■).

図１および２（トリフルオロ酢酸塩として化合物をテストした）において、Ｉ２ はＴｈｒ２を意味し、Ａ１５はＡｈａ”を意味し、Ｌ２７はＬｅｕ”を意味し、 ｌ１ｅはＬｅｕ”を意味し、Ｖ１９はＶａ１１９を意味し、および１１９はＩｌ ｅ”を意味する。In Figures 1 and 2 (compounds were tested as trifluoroacetate salts), I2 means Thr2, A15 means Aha", L27 means Leu", l1e means "Leu", V19 means Va119, and 119 means Il means "e".

ＲＩＱがＶａｌまたはＩｌｅである本発明の化合物の増強されたｉｎ　ｖｉｖｏ 能は表面および図２に示す。例えば、当業者ならば（１０ｐｍｏｌ／ｋｇ用量に おける４図２））相対的ｉｎ　ｖｉｖｏ能から、Ｔｈｒ２．Ａｌａ”Ｖａ　ｌ” Ｌｅｕ２７ｂＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ２、トリフルオロ酢酸塩、およびＴｈｒ ”ＡＩａＩｓＩ　ＩｅＩ９Ｌｅｕ”フｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、トリフルオ ロ酢酸塩および同様に（３０ｐｍｏｌ／ｋｇ用量にて（表１））Ｖａ　Ｉｌｅお よびｌ１ｅ１９化合物は天然ＧＲＦよりも活性であることを認識するであろう。Enhanced in vivo of compounds of the invention whose RIQ is Val or He The performance is shown on the surface and in Figure 2. For example, if a person skilled in the art (at a dose of 10 pmol/kg) 4 Figure 2)) From the relative in vivo ability, Thr2. Ala"Va　" Leu27bGRF (1-29) NH2, trifluoroacetate, and Thr "AIaIsI IeI9Leu" bGRF (1-29) NH2, trifluoro roacetate and similarly (at a dose of 30 pmol/kg (Table 1)) VaIle and and l1e19 compounds will be recognized to be more active than native GRF.

商業的生産方法の目的では、カルボキシ末端残基は好ましくはホモセリン、ホモ セリンラクトン、ホモセリンアミド、またはＣ＋　Ｃａアルキル（好ましくは０ ｌ−Ｃ４アルキル）、ホモセリンの第２級または第３級アミドである。For purposes of commercial production methods, the carboxy-terminal residue is preferably homoserine, homoserine, serine lactone, homoserinamide, or C+ Ca alkyl (preferably 0 l-C4 alkyl), a secondary or tertiary amide of homoserine.

合成ＧＲＦペプチドアナログは、例えば、米国特許第４５２９５９５号（第２欄 、３５行ないし第５欄６４行）および米国特許第４６８９３１８号（第２欄２３ 行ないし第９１１１３行）に開示されている方法を含む適当な方法によって合成 され、ここにそれらの各々を参照のために挙げる。Synthetic GRF peptide analogs are described, for example, in U.S. Pat. No. 4,529,595 (column 2). , line 35 to column 5, line 64) and U.S. Pat. No. 4,689,318 (column 2, line 23) (lines 91113) and each of them is listed here for reference.

手法Ａは本発明のＧＲＦペプチドアナログを合成する方法を記載する。Method A describes a method for synthesizing the GRF peptide analogs of the invention.

土床Ａ 該ペプチドは、アプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓ ｔｅｍｓ）　４３０Ａペプチド合成機（アプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐ ｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）　４３、フォスター・シティ（Ｆｏｓｔｅｒ 　Ｃ１ｔｙ）、カリフォルナア州）およびアプライド・パイオンステムズ（Ａｐ ｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって供給された合成サイクルを利用し 、固相法によって合成する。ＢＯアミノ酸および他の試薬はアプライド・バイオ システムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および他の商業的入手源 から供給された。Soil bed A The peptide was manufactured by Applied Biosystems. TEMS) 430A Peptide Synthesizer (Applied Biosystems (App Lied Biosystems) 43, Foster City C1ty), California) and Applied Pion Stems (Ap using a synthesis cycle supplied by Biosystems (Plied Biosystems). , synthesized by solid phase method. BO amino acids and other reagents are available from Applied Bio. Applied Biosystems and other commercial sources Supplied by.

二重カップリングプロトコルを用いる続いてのＢｏｃ化学を、Ｃ末端カルボキシ アミドの生産のために出発ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂に適用する。Ｃ 末端酸の生産のために、対応するＰＡＭ樹脂を用いる。予め形成したヒドロキシ ベンズトリアゾールエステルを用いてアスパラキン、グルタミン、およびアルギ ニンをカップリングさせる。予め形成した対称Ｂｏアミノ酸無水物を用い、すべ ての他のアミノ酸をカップリングさせる。Subsequent Boc chemistry using a double coupling protocol Apply to the starting p-methylbenzhydrylamine resin for the production of amide. C For the production of terminal acids, the corresponding PAM resins are used. preformed hydroxy Asparaquine, Glutamine, and Algium using Benztriazole Esters Coupling the nin. Using preformed symmetrical Bo amino acid anhydrides, all Coupling other amino acids.

以下の側鎖保護を用いる Ｃｙｓ、４−メチルベンジル、 Ｔｙｒ、４−ブロモカルボベンゾキシ、Ｌｙｓ、２−クロロカルボベンゾキシ。Use the following side chain protection Cys, 4-methylbenzyl, Tyr, 4-bromocarbobenzoxy, Lys, 2-chlorocarbobenzoxy.

塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）でＢｏｃ脱保護を行う。含Ｈｓｅ アナログを所望する場合、Ｍｅｔは固相により取り入れるべきであり、当該分野 でよく知られた方法により、ＨＦ切断の後に臭化シアンで修飾する。この臭化シ アン切断により、該ＭｅｔをＣ−末端Ｈｓｅラクトンペプチドに変換する。これ は、メタノールまたはジメチルホルムアミドのごとき溶媒中、適当なアミンでの 処理によってＨｓｅアミドペプチドに変換できる。［ケンペ（Ｋｅｍｐｅ）ら、 ＢＩＯ／ＴＥ（ＨＮＯＬＯＧＹ、　４巻、６５６−５６８頁（１９８６）に開示 されている方法によってＣ−末端Ｈｓｅ（ラクトン）、ＨｓｅＯＨおよびＨｓｅ Ｎ（Ｒ−）（Ｒ−）アナログを調製できるコ。合成の完了の後、ペプチドを脱保 護し、１０％ｐ−クレゾールを含有する無水フッ化水素で樹脂から切断する。側 鎖保護基（類）の切断およびペプチドの樹脂からの切断は、０℃またはそれ未満 にて行い、好ましくは、−２０℃で３０分間、続いて０℃で３０分間行う。ＨＦ の除去の後、ペプチド／樹脂をエーテルで洗浄し、ペプチドを氷酢酸で抽出し、 凍結乾燥する。精製の前に、スチュワード（Ｓｔｅｖａｒｔ）ら［固相ペプチド 合成（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）、１１ ３頁、ピエス・ケミカル・カラム＝　−（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃ ｏｍｐａｎｙ）、ロックフォード、イリノイ州、１９８４］によって記載されて いるごとくに、過キ酸を用い、−］Ｇ０ないし１０℃、好ましくは０℃にて、含 システィン粗製ペプチドを対応する含システィン酸化合物まで酸化する。Ｃ−末 端ＨｓｅラクトンおよびＨｓｅアミドへの変換は前記したごとくに行う。Boc deprotection is performed with trifluoroacetic acid (TFA) in methylene chloride. Contains Hse If an analog is desired, Met should be incorporated by solid phase, as described in the art. HF cleavage is followed by modification with cyanogen bromide by methods well known in the art. This bromide Anne cleavage converts the Met into a C-terminal Hse lactone peptide. this with a suitable amine in a solvent such as methanol or dimethylformamide. It can be converted to Hse amide peptide by processing. [Kempe et al. Disclosed in BIO/TE (HNOLOGY, Volume 4, Pages 656-568 (1986) C-terminal Hse (lactone), HseOH and Hse N(R-)(R-) analogs can be prepared. After synthesis is complete, decapsulate the peptide cleaved from the resin with anhydrous hydrogen fluoride containing 10% p-cresol. ~ side Cleavage of the chain protecting group(s) and cleavage of the peptide from the resin is performed at or below 0°C. It is preferably carried out at -20°C for 30 minutes, followed by 30 minutes at 0°C. HF After removal, the peptide/resin was washed with ether, the peptide was extracted with glacial acetic acid, Freeze dry. Prior to purification, Steward et al. Synthesis (Solid Phase Peptide 5 synthesis), 11 Page 3, Pierce Chemical Column = - (Pierce Chemical C Company), Rockford, IL, 1984] using peroxylic acid at -]G0 to 10°C, preferably 0°C. The cysteine crude peptide is oxidized to the corresponding cysteine-containing compound. C-end Conversion to terminal Hse lactones and Hse amides is performed as described above.

精製は、シンクロプレブ（Ｓｙｎｃｈｒｏｐｒｅｐ）　Ｓ　−３００（ジンクロ ム・インコーホレイテッド（ＳｙｎＣｈｒｏｍ　Ｉｎｃ、　）、リンデン（Ｌｉ ｎｄｅｎ）、インディアナ州）カチオン交換カラム上のイオン交換クロマトグラ フィーによって行う。２０％アセトニトリル中の２０ミリモルＴＲＩ　Ｓ　（ｐ Ｈ６，８）の緩衝液を用いて該ペプチドを適用し、同溶媒中の０〜０．３モル塩 化ナトリウムのグラジェントを用いて溶出する。さらに、化合物を精製し、各相 が０．１％ＴＦＡを含有する水：アセセトニトリルグラジェントを用い、Ｖｙｄ ａｃ　Ｃ−１８（セパレーンヨンズ・グループ（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　Ｇｒ ｏｕｐ）、ヘスペリア（Ｈｅｓｐｅｒｏａ）、カリフォルニア州）カラムでの逆 相液体クロマトグラフィーによって脱塩する。所望の画分をプールし、凍結乾燥 して所望のＧＲＦペプチドをそのトリフルオロ酢酸塩として得る。該トリフルオ ロ酢酸塩は、所望ならば、よく知られたイオン交換法によって、他の適当な塩に 変換できる。Purification was performed using Synchroprep S-300 (Zincroprep). SynChrom Inc., Linden Inc. Ion exchange chromatography on a cation exchange column It is done by fee. 20 mmol TRIS in 20% acetonitrile (p Apply the peptide using a buffer of 0 to 0.3 molar salt in the same solvent. Elute using a gradient of sodium chloride. Furthermore, the compound is purified and each phase using a water:acecetonitrile gradient containing 0.1% TFA. ac C-18 (Separations Group) oup), Hesperoa, California) column Desalt by phase liquid chromatography. Pool desired fractions and lyophilize The desired GRF peptide is obtained as its trifluoroacetate salt. The trifluoro The roacetate salt can be converted to other suitable salts, if desired, by well-known ion exchange methods. Can be converted.

スカベンジャーとしてのフェノールの存在下、定沸騰ＨＣＩ（ビエス（Ｐｉｅｒ ｃｅ））を用い、ピコ−タッグ・ワーク・ステーション（Ｐｉｃｏ−Ｔａｇ　ｆ ｏｒｋ　５ｔａｔｉｏｎ）　（ウォーターズ（ｆａｔｅｒｓ））における蒸気相 によって、真空下で１１０℃で２４時間ペプチドを凍結乾燥する。ベックマン・ アミノ酸アナライザー（Ｂｅｃｋａ＋ａｎ　Ａｍ１ｎｏ　Ａｃ１ｄ＾ｎａｌｙｚ ｅｒ）、モデル６３００で加水分解物を分析する。内部標準として既知の濃度の ノルロイシンを用い、ペプチド定数を計算する。In the presence of phenol as a scavenger, constant boiling HCI (Pier ce)), using a Pico-Tag work station (Pico-Tag f vapor phase in ork 5tation (waters) Lyophilize the peptide for 24 hours at 110° C. under vacuum. beckman Amino acid analyzer (Becka+an Am1no Ac1d^nalyz er), analyze the hydrolyzate on a model 6300. of known concentration as an internal standard. Calculate the peptide constant using norleucine.

アプライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）のＴ ｉｍｅ　ｏｆ　Ｆｌｉｇｈｔ　ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを用いてマス スペクトルを得た。Applied Biosystems T ime of Flight Mass Spectrometer Obtained the spectrum.

物Ｎｏ、１ （ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩としての）式　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−＾ｓｐ−＾１ａ（ｌｅ −Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ −＾１ａ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｖａｌ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ −Ｇｌｎ−＾５ｐ−１１■|Ｌｅｕ−＾ｓｎ −Ａｒｇ−ＮＢ２を有するＧＲＦアナログペプチドの合成を手法Ａにおける段階 的手法で行う。アミノ酸分析、括弧中の理論値；Ａｓｐ４．０６　（４）；Ｔｈ ｒｌ、５７（２）：５ｅｒ１．６４　（２）；Ｇｌｕ２．１０　（２）；ＡＩａ ２．２５　（２）；Ｖａｌ２．００　（２）；　ｌ１ｅ１．６８　（２）；Ｌｅ ｕ５．１５　（５）：Ｔｙｒｌ。Item No. 1 (CF, as C0OH salt) Formula H-Tyr-Thr-^sp-^1a (le -Phe-Thr-Asn-3er-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu -^1a-Gln-Leu-3er-Val-^rg-Lys-Leu-Leu -Gln-^5p-11■|Leu-^sn - Synthesis of GRF analog peptide with Arg-NB2 in step in method A Do it using a method. Amino acid analysis, theoretical value in parentheses; Asp4.06 (4); Th rl, 57(2):5er1.64 (2); Glu2.10 (2); AIa 2.25 (2); Val2.00 (2); l1e1.68 (2); Le u5.15 (5): Tyrl.

８８　（２）；Ｐｈｅｏ、９４　（１）：Ｌｙｓ２．ＯＯ（２）；Ａｒｇ２．９ ４　（３）実施例２　：Ｔｈｒ２ＡＩ　ａ’Ｊ　Ｉ　ｅ”Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ　 （１−２９）ＮＢ２、トリフルオロ酢酸塩、化合物Ｎ０９２ （ＣＦ３ＣＯＯＨ塩としての）式　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−１１ ｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａ　１−Ｌ ｅｕ−Ａ　１ａ−Ｇ　１ｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｉ　１　ｅ−Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ− Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌ　ｎ|＾５ｐ−１１ｅ−Ｌｅｕ−＾ｓｎ −＾ｒｇ−Ｎｔ１２を有するＧＲＦアナログペプ千ドの合成を手法Ａの段階的方 法で行う。88 (2); Pheo, 94 (1): Lys2. OO(2); Arg2.9 4 (3) Example 2: Thr2AI a’J Ie”Leu”-bGRF (1-29) NB2, trifluoroacetate, compound N092 Formula (as CF3COOH salt) H-Tyr-Thr-Asp-Ala-11 e-Phe-Thr-Asn-3er-Tyr-＾rg-Lys-Va　1-L eu-A 1a-G 1n-Leu-3er-I 1 e-A rg-Lys- Leu-Leu-Gl　n|^5p-11e-Leu-^sn Synthesis of GRF analog peptides with -ﾆrg-Nt12 using step-by-step method A Do it by law.

アミノ酸分析、括弧中の理論値：Ａｓｐ４．０９　（４）：Ｔｈｒｌ、９８　（ ２）　、５ｅｒ１．６４　（２）；ＧＩｕ２．０５　（２）；ＡＩａ２．２５　 （２）；Ｖａｌｌ。Amino acid analysis, theoretical value in parentheses: Asp4.09 (4): Thrl, 98 ( 2), 5er1.64 (2); GIu2.05 (2); AIa2.25 (2); Vall.

０　（１）；　Ｉ　１ｅ２．８４　（３）；　Ｌｅｕ５．０７　（５）；Ｔｙｒ ｌ、８７　（２）；Ｐｈｅｏ、９２　（１）；Ｌｙｓｌ、９７　（２）；Ａｒｇ ２．９４　（３）実施例３　：Ｔｈｒ”ＡＩａ”Ｌｅｕ】９Ｌｅｕ２丁−ｂＧＲ Ｆ　（１−２９）ＮＢ２、トリフルオロ酢酸塩、化合物Ｎ０９３の調製（ＣＦ３ ＣＯＯＨ塩としての）式：　［１−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ａｌａ−１１ｅ− Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−＾ｒｇ−ＬｙｓＪａｌ−Ｌｅｕ−Ａ ｌａ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ ｉｎ−Ａｓｐ−１１ｅ|Ｌｅｕ−＾ｓｎ −＾ｒｇｅ−ＮＨ２を有するＧＲＦアナログペプチドの合成を手法Ａの段階的方 法で行う。0 (1); I 1e2.84 (3); Leu5.07 (5); Tyr l, 87 (2); Pheo, 92 (1); Lysl, 97 (2); Arg 2.94 (3) Example 3: Thr”AIa”Leu] 9Leu2-bGR F (1-29)NB2, trifluoroacetate, preparation of compound N093 (CF3 ) Formula as COOH salt: [1-Tyr-Thr-Asp-Ala-11e- Phe-Thr-Asn-3er-Tyr-^rg-LysJal-Leu-A la-Gin-Leu-3er-Leu-^rg-Lys-Leu-Leu-G in-Asp-11e|Leu-^sn Synthesis of GRF analog peptides with -^rge-NH2 using stepwise method A. Do it by law.

アミノ酸分析、括弧中の理論値Ａｓｐ４．０８　（４）；Ｔｈｒｌ、８７　（２ ）：５ｅｒ１．７２　（２）；Ｇｌｕ２．０７　（２）：ＡＩａｌ、９３　（２ ）；Ｖａｌｌ。Amino acid analysis, theoretical value in parentheses Asp4.08 (4); Thrl, 87 (2 ): 5er1.72 (2); Glu2.07 (2): AIal, 93 (2 ); Vall.

０４　（１）：Ｉ　Ｉｅｌ、８８　（２）；Ｌｅｕ６．１１　（６）＋Ｔｙｒ１ ．９０　（２）；Ｐｈｅｏ、９３　（１）：Ｌｙｓ２．０３　（２）：Ａｒｇ３ ．０’９　（３）実施例４　：Ｖａ　Ｉ’ＡＩａＩ５Ｌｅｕ”Ｌｅｕ２７−ｂＧ ＲＦ　（１−２９）ＮＢ２、トリフルオロ酢酸塩、化合物Ｎｏ、４の調製（ＣＦ ３ＣＯＯＨ塩としての）式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−＾１ａ−１１ｅ− Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−＾５ｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａ　１−Ｌｅｕ −Ａ　１　ａ−Ｇ　１　ｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ −Ｌｅｕ　−Ｇ　１　氏|＾５ｐ−１１ｅ−Ｌｅｕ−＾ｓｎ −Ａｒｇ−ＮＨｚを有するＧＲＦアナログペプチドの合成を処方Ａの段階的方法 で行う。04 (1): I Iel, 88 (2); Leu6.11 (6) + Tyr1 ．． 90 (2); Pheo, 93 (1): Lys2.03 (2): Arg3 ．． 0’9 (3) Example 4: Va I’AIaI5Leu”Leu27-bG RF (1-29) NB2, trifluoroacetate, compound No., preparation of 4 (CF ) Formula as 3COOH salt: H-Tyr-Val-Asp-^1a-11e- Phe-Thr-^5n-3er-Tyr-^rg-Lys-Va　1-Leu -A 1 a-G 1 n-Leu-3er-Leu-Arg-Lys-Leu -Leu -Mr.G1|^5p-11e-Leu-^sn Step-by-step method of formulating A for the synthesis of GRF analog peptides with -Arg-NHz Do it with

マススペクトル分析（Ｃｆ−２５２プラズマ脱着法）、［Ｍ十Ｈ］゛についての ｍ／ｚ：観測値３４５４．６；理論値５４５２．１゜アミノ酸分析、括弧中の理 論値：Ａｓｐ４．０１（４）：ＴｈｒＯ，９３（１）；５ｅｒ１．６８　（２） ；Ｇｌｕ２．０３（２）；ＡＩａ２．ＯＯ（２）；Ｖａｌｌ、８５　（２）；　 Ｉ　Ｉｅｌ、８８（２）；Ｌｅｕ６．１１　（６）；Ｔｙｒｌ、９４　（２）＋ Ｐｈｅ０．９４　（１）；Ｌｙｓｌ、９７　（２）：、Ａｒｇ３．１１　（３） 実施例５　：　Ｉ　１ｅ２Ａｌａ１５Ｌｅｕ”Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ　（１−２９ ）ＮＢ２、トリフルオロ酢酸塩、化合物Ｎ０１５の調製（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ塩とし ての）式：　Ｈ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ａｓｐ−＾１ａ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ− Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ　−Ｖａ　１−Ｌｅｕ−Ａ　１　ａ− Ｇ　ｉｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｌ 　ｎ|＾５ｐ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ −＾ｒｇ−ＮＢ２を有するＧＲＦアナログペプチドの合成を手法Ａの段階的方法 で行う。Mass spectrum analysis (Cf-252 plasma desorption method), about [M0H]゛ m/z: Observed value 3454.6; Theoretical value 5452.1° Amino acid analysis, logic in parentheses Logical value: Asp4.01 (4): ThrO, 93 (1); 5er1.68 (2) ;Glu2.03(2);AIa2. OO (2); Vall, 85 (2); I Iel, 88 (2); Leu6.11 (6); Tyrl, 94 (2) + Phe0.94 (1); Lysl, 97 (2):, Arg3.11 (3) Example 5: I1e2Ala15Leu”Leu”-bGRF (1-29 ) NB2, trifluoroacetate, preparation of compound N015 (CF, as C0OH salt) ) Formula: H-Tyr-11e-Asp-^1a-11e-Phe-Thr- Asn-3er-Tyr-＾rg-Lys　-Va　-Leu-A　1　a- G in-Leu-Ser-Leu-Arg-Lys-Leu-Leu-G L 　n|＾5p-11e-Leu-Asn Step-by-step method for synthesis of GRF analog peptides with −^rg-NB2 using Method A Do it with

マススペクトル分析（Ｃｆ−２５２プラズマ説着法）、［Ｍ＋Ｈコ゛としてのｍ ／、ｚ、観測値３４６８．６：理論値３４６６．１アミノ酸分析、括弧中の理論 値：Ａｓｐ４．０２　（４）；ＴｈｒＯ，９４（１）：５ｅｒ１．６７　（２） ：Ｇｌｎ２．０５　（２）；ＡＩａ２．ＯＯ（２）；Ｖａｌｏ。Mass spectral analysis (Cf-252 plasma impregnation method), [m as M+H co /, z, observed value 3468.6: theoretical value 3466.1 Amino acid analysis, theory in parentheses Value: Asp4.02 (4); ThrO,94 (1):5er1.67 (2) :Gln2.05 (2); AIa2. OO(2); Valo.

９４　（１）；　Ｉ　１ｅ２．８３（３）；Ｌｅｕ６．１２　（６）：Ｔｙｒｌ 、９２（２）：ＰｈｅＯ，９５（１）；Ｌｙｓｌ、９９　（２）；Ａｒｇ３．１ ３　（３）実施例６　：Ｖａ　Ｉ２Ａｌ　ａ’Ｊ　Ｉ　ｅ１９Ｌｅｕ”−ｂＧＲ Ｆ　（１−２９）ＮＢ２、トリフルオロ酢酸塩、化合物Ｎ０８６の調製（ＣＦ、 Ｃ０ＯＨ塩としての）式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｐ ｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｍａｌ−Ｌｅｕ−Ａ ｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−１１ｅ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ ｉｎ−Ａｓｐ−１１■|Ｌｅｕ−Ａｓｎ −Ａｒｇ−ＮＢ２を有するＧＲＦアナログペプチドの合成を手法Ａの段階的法で 行う。マススペクトル分析（Ｃｆ−２５２プラズマ脱看法）、［Ｍ＋Ｈ］　゛と してのｍ／Ｚ　観測値３４５３．４；理論値３４５２．１アミノ酸分析、括弧中 の理論値＋Ａｓｐ４．０３　（４）＋ＴｈｒＯ，９４（１）Ｓｅｒｌ、６９　（ ２）；Ｇ１ｎ２．０３　（２）；ＡＩａ２．０１　（２）：Ｖａｌｌ。94 (1); I 1e2.83 (3); Leu6.12 (6): Tyrl , 92(2): PheO, 95(1); Lysl, 99(2); Arg3.1 3 (3) Example 6: Va I2Al a’J I e19Leu”-bGR F (1-29)NB2, trifluoroacetate, preparation of compound N086 (CF, ) Formula as C0OH salt: H-Tyr-Val-Asp-Ala-11e-P he-Thr-Asn-8er-Tyr-^rg-Lys-Mal-Leu-A la-Gln-Leu-3er-11e-^rg-Lys-Leu-Leu-G in-Asp-11■|Leu-Asn Synthesis of GRF analog peptide with -Arg-NB2 by stepwise method of method A conduct. Mass spectrum analysis (Cf-252 plasma removal method), [M+H] m/Z Observed value 3453.4; Theoretical value 3452.1 Amino acid analysis, in parentheses Theoretical value of + Asp4.03 (4) + ThrO, 94 (1) Serl, 69 ( 2); G1n2.03 (2); AIa2.01 (2): Vall.

８９　（２）；Ｉ　ｌ　Ｇ２．８５　（３）；Ｌｅｕ５．１１　（５）；Ｔｙｒ ｌ、９５　（２）：Ｐｈｅｏ、９５　（１）＋Ｌｙｓ１．９９　（２）：Ａｒｇ ３．０８　（３）実施例７：ｌ１ｅ２Ａｌａ１５１１ｅ”Ｌｅｕ”ツーｂＧＲＦ 　（１２９）ＮＢ２、トノフルオロ酢酸塩、化合物Ｎ０１７の調製（ＣＦ３ＣＯ ＯＨ塩としての）式：　Ｈ−Ｔｙｒ（ｌｅ−Ａｓｐ−＾１ａ−１１ｅ−Ｐｈｅ− Ｔｈｒ−＾ｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−１’ａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ −Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−１１ｅ−＾ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ −Ａｓｐ−ｒ@１ｅ−Ｌｅｕ−＾ｓｎ −Ａｒｇ−ＮＵ２を有するＧＲＦアナログペプチドの合成を手法Ａの段階的方法 で行う。89 (2); I l G2.85 (3); Leu5.11 (5); Tyr l, 95 (2): Pheo, 95 (1) + Lys1.99 (2): Arg 3.08 (3) Example 7: l1e2Ala1511e"Leu" two bGRF (129) NB2, tonofluoroacetate, preparation of compound N017 (CF3CO ) Formula as OH salt: H-Tyr(le-Asp-^1a-11e-Phe- Thr-^sn-3er-Tyr-Arg-Lys-1'al-Leu-Ala -Gin-Leu-3er-11e-^rg-Lys-Leu-Leu-Gln -Asp-r@1e-Leu-^sn - Step-by-step method for synthesis of GRF analog peptides with Arg-NU2 using Method A Do it with

マススペクトル分析（Ｃｆ−２５２プラズマ脱着法）、［Ｍ＋Ｈ］’としてのｍ ／Ｚ：観測値３４６９．７；理論値３４６６．１アミノ酸分析、括弧中の理論値 ＋Ａｓｐ４．０３　（４）；ＴｈｒＯ，９４（１）；５ｅｒ１．６９　（２）； ＧＩｕ２．０６　（２）；ＡＩａ２．０４　（２）＋Ｖａ１０゜９４（１）；　 Ｉ　ｌｅ３．７８　（２）；Ｌｅｕ５．１２　（５）：Ｔｙｒｌ、９４（２）： Ｐｈｅｏ、９５　（１）；Ｌｙｓｌ、９８　（２）：Ａｒｇ３．０９　（３）実 施例Ｆ３　：Ｖａ１２Ａｌ　ａ１５Ｖａ　ｌ”Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ　（１−２ ９）ＮＢ２、トリフルオロ酢酸塩、化合物番号Ｎｏ、８の調製（ＣＦ、Ｃ０ＯＨ 塩しての）式：　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−＾１ａ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈ ｒ−Ａｓｎ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａ　１−Ｌｅｕ−Ａ　ｌ　 ａ−Ｇ　１　ｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒＪａｌ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ ｌｎ−Ａｓ吹|ｒ　１ｅ−Ｌｅｕ−＾ｓｎ− ＾ｒｇ−ＮＨ２を有するＧＲＦアナログペプチドの合成を手法Ａの段階的方法で 行う。Mass spectrum analysis (Cf-252 plasma desorption method), m as [M+H]' /Z: Observed value 3469.7; Theoretical value 3466.1 Amino acid analysis, theoretical value in parentheses +Asp4.03 (4); ThrO,94 (1); 5er1.69 (2); GIu2.06 (2); AIa2.04 (2) + Va10°94 (1); I le3.78 (2); Leu5.12 (5): Tyrl, 94 (2): Pheo, 95 (1); Lysl, 98 (2): Arg3.09 (3) Real Example F3: Va12Al a15Va l”Leu27-bGRF (1-2 9) Preparation of NB2, trifluoroacetate, compound number No. 8 (CF, C0OH (as salt) Formula: H-Tyr-Val-Asp-^1a-11e-Phe-Th r-Asn-3er-Tyr-A rg-Lys-Va 1-Leu-A l a-G 1 n-Leu-3erJal-Arg-Lys-Leu-Leu-G ln-Asbuki|r 1e-Leu-^sn- Synthesis of GRF analog peptide with ^rg-NH2 by stepwise method of method A conduct.

マススペクトル（Ｃｆ−２５２プラズマ脱看法）、［Ｍ十Ｈ］　′″としてのｍ ／ｚ：観測値３４４０．６；理論値３４３８．１アミノ酸分析、括弧中の理論値 ：Ａｓｐ４．０２　（４）；Ｔｈｒｏ、９３　（１）：５ｅｒ１．６７　（２） ：Ｇｌｕ２．０３　（２）；ＡＩａ２．ＯＯ（２）；Ｖａｌ２゜７８（３）＋　 Ｉ　１ｅ１．８６（２）；Ｌｅｕ５．０９　（５）：Ｔｙｒｌ、９２　（２）； Ｐｈｅｌ、０４　（１）；Ｌｙｓｌ、９８　（２）：Ａｒｇ３．０５　（３）実 施例９　１１ｅ２Ａｌａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２、ト リフルオロ酢酸塩、化合物Ｎｏ、９の調製（ＣＦｇＣ００Ｈ塩としての）式　Ｂ −Ｔｙｒ−１１ｅ−Ａｓｐ−Ａｌａ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−＾５ｎ−３ｅｒ −Ｔｙｒ−＾ｒｇ−ＬｙｓＪａｌ−Ｌｅｕ−＾１ａ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−３ｅｒ− Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−＾５ｐ−Ｉｌｅ|Ｌｅｕ− ＾ｓｎ −Ａｒｇ−ＮＦｂを有するＧＲＦアナログペプチドの合成を手法Ａの段階的方法 で行う。Mass spectrum (Cf-252 plasma degassing method), m as [M0H]''' /z: Observed value 3440.6; Theoretical value 3438.1 Amino acid analysis, theoretical value in parentheses :Asp4.02 (4);Thro,93 (1):5er1.67 (2) :Glu2.03 (2); AIa2. OO(2); Val2゜78(3)+ I 1e1.86 (2); Leu5.09 (5): Tyrl, 92 (2); Phel, 04 (1); Lysl, 98 (2): Arg3.05 (3) Real Example 9 11e2Ala”Val”Leu”-bGRF(1-29)NH2, Preparation of refluoroacetate, compound No. 9 (as CFgC00H salt) Formula B -Tyr-11e-Asp-Ala-11e-Phe-Thr-^5n-3er -Tyr-^rg-LysJal-Leu-^1a-Gln-Leu-3er- Val-Arg-Lys-Leu-Leu-Gin-^5p-Ile|Leu- ^sn - Step-by-step method for synthesis of GRF analog peptides with Arg-NFb using Method A Do it with

マススペクトル分析（Ｃｆ−２５２プラズマ脱看法）、［Ｍ＋Ｈ］゛としてのｍ ／２：観測ｍ３４５４．９：理論１３４５２．１アミノ酸分析、括弧中の理論値 ：Ａｓｐ４．０２　（４）：Ｔｈｒｏ、９３　（１）：５ｅｒ１．６９　（２） ；ＧＩｕ２．０４　（２）：Ａｌａ２．０６　（２）；Ｖａｌ１８６（２）；　 Ｉ　ｌｅ２．８４　（３）；Ｌｅｕ５．１０　（５）；Ｔｙｒｌ、９４（２）： ＰｈｅＯ，９４（１）；Ｌｙｓｌ、９８　（２）：Ａｒｇ３．０７　（３）手法 Ａの段階的方法により、以下のペプチドもまた合成できる。Mass spectrum analysis (Cf-252 plasma deconception method), m as [M+H]゛ /2: Observation m3454.9: Theory 13452.1 amino acid analysis, theoretical value in parentheses :Asp4.02 (4):Thro,93 (1):5er1.69 (2) ; GIu2.04 (2): Ala2.06 (2); Val186 (2); I le2.84 (3); Leu5.10 (5); Tyrl, 94 (2): PheO, 94 (1); Lysl, 98 (2): Arg3.07 (3) method By the stepwise method of A, the following peptides can also be synthesized.

１１ｅ”Ｓｅｒ’Ａ１ａ”ｖａｌ”Ｌｅｕ”フＳｅｒ”Ｂｓｅ”ｂＧＲＦ（１− ３０）Ｎｌ１２１１ｅ２Ｓｅｒ”Ａｌａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ２フＳｅｒ”Ｅｌｓｅ ”ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨ２Ｉ　ｌｅ　２Ｓｅｒ”Ａｌａ　”　Ｖａｌ　”　 Ｌｅｕ　２７Ｓｅｒ２’ｕｓｅ”　７ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＢ２１１ｅ”Ｓｅ ｔ’＾ｌａ”　Ｖａｌ　’　”Ｌｅｕ”Ｓｅｔ”Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−４４ ）ＮＥｚＶａ１２Ｓｅｒ’＾ｌａ”　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”Ｈｓｅ３°ｂ ＧＲＦ（１−３０）ＮｌｌＩ２Ｖａｌ　２Ｓｅｒ’Ａ１ａ　”　Ｖａｌ　”　Ｌ ｅｕ　２７Ｓｅｒ２’１ｌｓｅ３３ｂＧＲＦ　（１−３３）ＮＨｚＶａｌ”Ｓｅ ｔ’＾ｌａ”　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”Ｈｓｅ３７ｂＧＲＦ（１−３７）Ｎ ＢｚＶａ１２Ｓｅｒ’Ａ１ａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ２フＳｅｒ”ｕｓｅ”ｂＧＲＦ（ １−４４）Ｎｌｌ１２１１ｅ２Ｓｅｒ’Ａｌａ”Ｉｌｅ”Ｌｅｕ”フＳｅｒ”Ｈ ｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＢ２１１ｅ”Ｓｅｔ’＾ｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅ ｕ”Ｓｅｒ”Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＢ１１ｅ”Ｓｅｒ＠＾ｌａ”Ｉ ｌｅ”Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ”口５ｅ３７ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＢ２１１ｅ”Ｓｅ ｔ’＾ｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”ｕｓｅ”ｂＧＲＦ（１−４４）ＮＨ ｚＶａｌ”Ｓｅｔ”Ａｌａ”Ｉｌｅ”Ｌｅｕ”フＳｅｒ”Ｕｓｅ”ｂＧＲＦ（１ −３０）ＮＨｚＶａｌ　”Ｓｅｔ”Ａｌａ　”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ２７Ｓｅｒ” Ｅｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＨｚＶａｌ”Ｓｅｒ’＾ｌａ”Ｉｌｅ”Ｌｅ ｕ”Ｓｅｔ”Ｕｓｅ３フｂＧＲＦ（１−３７）ＮＨ２Ｖａ１２Ｓｅｒ”：へｌａ ”Ｉｌｅ”Ｌｅｕ２フＳｅｒ”ｕｓｅ”ｂＧＲＦ（１−４４）ＮＨ２Ｔｈｒ２Ｓ ｅｒ’＾ｌａ”　Ｖａｌ　”　Ｌｅｕ”５ｅｒ２８）Ｉｓｅ３０ｂＧＲＦ（１− ３０）ＮＦＩ２Ｔｈｒ２Ｓｅｔ’Ａ１ａ　”　Ｖａｌ　”　Ｌｅｕ　”　７Ｓｅ ｒ”　’Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ（１−３３）ＮＵ　２Ｔｈｒ　２Ｓｅｒ”　Ａｌａ 　”　Ｖａｌ　’　”Ｌｅｕ　”　’Ｓｅｒ　２”　Ｕｓｅ”　’ｂＧＲＦ（１ −３７）Ｎｕ　２Ｔｈｒ２Ｓｅｒ’Ａ１ａ　”　Ｖａｌ　’　”　Ｌｅｕ　”　 ’５ｅｒ２’ｕｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−４４）ＮＨ２Ｔｈｒ２Ｓｅｒ”Ａｌａ” 　Ｉｌｅ’　”Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”ｕｓｅ”°ｂＧＲＦ（１−３０）ＮＨ２Ｔｈｒ ２Ｓｅｒ’＾ｌａ”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ”Ｓｅｒ”Ｕｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３３ ）ＮＨ２Ｔｈｒ２Ｓｅｒ’Ａ１ａ”　Ｉ　１　ｅ”　Ｌｅｕ　２７Ｓｅｒ”　” 　ｕｓｅ３７ｂＧＲＦ（１−３７）ＮＢ２１１ｅ　”Ｓｅｔ’Ａ１ａ”　Ｉ　ｌ ｅ”　Ｌｅｕ　”　７Ｓｅｒ”　’Ｈｓｅ”　ｂＧＲＦ（１−４４）ＮＵ　２Ｔ ｈｒ２Ｓｅｒ’Ａ１ａ　”　Ｉｌｅ”　Ｌｅｕ　２’Ｓｅｒ　２８ｕｓｅ”　ｂ ＧＲＦ（１−３０）ＮＨＥｔＴｈｒ”Ｓｅｒ’Ａｌａ　”　Ｉ　ｌｅ　”　Ｌｅ ｕ　２’Ｓｅｒ”Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ　（１−３３）ＮＩＴＥｔＩ　ｌｅ　２Ｓ ｅｒ’　Ａｌａ　”　Ｖａｌ　”　Ｌｅｕ　２７Ｓｅｒ”　’Ｈｓｅ”　０ｂＧ ＲＦ　（１−３０）Ｎｌ１２１１ｅ２Ｓｅｒ’　Ａｌａ　”　Ｖａｌ　’　”Ｌ ｅｕ　”　’Ｓｅｔ”　’Ｈｓｅ３３ｂＧＲＦ　（１−３３）ＮＨＥｔＶａｌ” Ｓｅｔ”Ａｌａ”１１ｅ”Ｌｅｕ２フＳｅｒ”１ｌｓｅ”ｂＧＲＦ（１−３７） Ｎｉｌ−ｎ−プロピル手法 手法Ｂ 固相法によるＧＲＦアナログの調製に加え、Ａｌａ２、Ａｓｎ’、ＧｌｙＩＳお よびＡｓｎ”についてのコドンを、例えば、各々、（ＡＣＴ）Ｔｈｒ”または（ ＡＴＴ）Ｉ　ｌ　ｅ”または（ＧＴＴ）Ｍｏ１２、（ＡＧＴ）Ｓｅｒ”、（ＧＣ Ｔ）Ａｌａ”、（ＡＧＴ）Ｓｅｒ”で置き換えるという、ｂＧＲＦ　（１−４４ ）ＯＨにつきコードするＤＮＡのセグメントにおける以下の修飾を施した、Ｌｅ ｕ”ｂＧＲＦ　（１−４４）ＯＨ（欧州特許出願第０２１２５３１号）につき記 載されている手法による組換えＤＮＡ法によってアナログを得ることができる。11e"Ser'A1a"val"Leu"FSer"Bse"bGRF(1- 30) Nl1211e2Ser”Ala”Val”Leu2fuSer”Else "bGRF(1-33)NH2Ile2Ser"Ala""Val" Leu　27Ser2’use”　7bGRF(1-37)NB211e”Se t’^la” Val’ “Leu”Set”Hse” bGRF(1-44 )NEzVa12Ser’^la” Val”Leu”Ser”Hse3°b GRF (1-30) NllI2Val 2Ser’A1a “Val” L eu　27Ser2’1lse33bGRF　(1-33)NHzVal”Se t'^la"Val"Leu"Ser"Hse37bGRF(1-37)N BzVa12Ser’A1a”Val”Leu2FSer”use”bGRF( 1-44) Nll1211e2Ser'Ala"Ile"Leu"FSer"H se"bGRF(1-30)NB211e"Set'^la"　Ile"　Le u”Ser”Hse33bGRF(1-33)NB11e”Ser@＾la”I le"Leu27Ser"口5e37bGRF(1-37)NB211e"Se t’^la”　Ile”　Leu”Ser”use”bGRF(1-44)NH zVal”Set”Ala”Ile”Leu”FSer”Use”bGRF(1 -30) NHzVal “Set” Ala “Ile” Leu27Ser” Ese33bGRF(1-33)NHzVal”Ser’^la”Ile”Le u”Set”Use3fu bGRF(1-37)NH2Va12Ser”: To la “Ile”Leu2FSer”use”bGRF(1-44)NH2Thr2S er'^la"Val""Leu"5er28)Ise30bGRF(1- 30) NFI2Thr2Set’A1a　”　Val　”　Leu　”7Se r"'Hse33bGRF (1-33) NU 2Thr 2Ser" Ala “” Val “Leu” “Ser 2” “Use” “bGRF(1 -37) Nu　2Thr2Ser’A1a　”　Val　’　”　Leu　” '5er2'use" bGRF (1-44) NH2Thr2Ser"Ala" Ile’”Leu”Ser”use”°bGRF(1-30)NH2Thr 2Ser’^la”　Ile”　Leu”Ser”Use”bGRF(1-33 ) NH2Thr2Ser’A1a” I 1 e” Leu 27Ser”” use37bGRF(1-37)NB211e “Set’A1a” Il e"Leu"7Ser"'Hse"bGRF(1-44)NU 2T hr2Ser’A1a　”　Ile”　Leu　2’Ser　28use”　b GRF (1-30) NHEtThr”Ser’Ala　”　I　le　　”　Le u　2’Ser”Hse33bGRF　(1-33)NITEtI　le　2S er’　Ala　”　Val　”　Leu　27Ser”　’Hse”　0bG RF (1-30) Nl1211e2Ser' Ala　" Val　'"L eu “’Set”’Hse33bGRF (1-33)NHEtVal” Set"Ala"11e"Leu2fuSer"1lse"bGRF(1-37) Nil-n-propyl method Method B In addition to the preparation of GRF analogs by solid-phase methods, Ala2, Asn', GlyIS and and Asn”, for example, (ACT)Thr” or ( ATT) I l e” or (GTT) Mo12, (AGT) Ser”, (GC bGRF (1-44 ) OH with the following modifications in the segment of the DNA encoding Le. u”bGRF　(1-44)OH (European Patent Application No. 0212531) Analogs can be obtained by recombinant DNA methods according to the techniques described.

加えて、含Ｃｙｓ３ＧＲＦアナログについては、コドンＧＡＴ　（Ａｓｐ３）を Ｃｙｓ”についてのコドンＴＧＴによって置き換える。前記欧州特許出願に記載 されている蛋白の発現およびギ酸中の臭化シアンでの切断の後、約０℃で過酸化 水素を該溶液に添加してＣｙｓ残基をＣｙａに酸化する。次いで、該ペプチドを 記載した方法で精製する。In addition, for Cys3-containing GRF analogs, the codon GAT (Asp3) Replaced by the codon TGT for “Cys” as described in the European patent application After expression of the protein and cleavage with cyanogen bromide in formic acid, peroxidation at approximately 0 °C Hydrogen is added to the solution to oxidize Cys residues to Cya. Then, the peptide Purify as described.

さらに、Ｎ−末端伸長ＧＲＦアナログについては、伸長につきコードするＤＮＡ セグメントを以下のごと（Ｎ−末端に付加する：Ｔｙｒ−Ｔｈｒについての（Ｔ ＡＴＡＣＴ）、（Ｔｙ　ｒ−Ｔｈ　ｒ）　、についての（ＴＡＴＡＣＴ）　謙た はＴｙｒ−Ｓｅｒについての（ＴＡＴＡＧＴ）、（Ｔｙｒ−３ｅｒ）、について の（ＴＡＴＡＧＴ）、、またはＴｙｒ−８ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒについての（Ｔ ＡＴＡＧＴＴＡＴＡＣＴ）またはＴｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−３ｅｒについての（ ＴＡＴ、ＡＣＴＴＡＴ、ＡＧＴ）　、Ａｓｐ−Ａｌ　ａについての（ＧＡＴＯＣ Ｔ）等。前駆体蛋白についての遺伝子をイー・コリ（Ｅ、　ｃｏｌｉ）発現ベク ターに挿入する。封入体の蛋白単離の発現、続いての前記欧州特許出願に記載さ れているギ酸中での臭化シアンでのその切断の後、ギ酸を減圧下で除去する。次 いで、粗製ペプチドを記載されている方法によって精製する。Additionally, for N-terminally extended GRF analogs, the DNA encoding the extension Add segments as follows (at the N-terminus: (T for Tyr-Thr) ATACT), (Tyr-Thr), (TATACT) humble is for Tyr-Ser (TATAGT), (Tyr-3er), (TATAGT), or (TATAGT) for Tyr-8er-Tyr-Thr. ATAGTTATACT) or (for Tyr-Thr-Tyr-3er) TAT, ACTTAT, AGT), (GATOC for Asp-Al a) T) etc. The gene for the precursor protein was placed in an E. coli expression vector. Insert it into the computer. Expression of protein isolation of inclusion bodies, as described in the subsequent European patent application. After its cleavage with cyanogen bromide in formic acid, the formic acid is removed under reduced pressure. Next The crude peptide is then purified by the method described.

特許請求するペプチドは全部天然に存在するアミノ酸より構成されるので、公知 の組換えＤＮ、Ａ技術による本発明の化合物の産生は可能である。これは、Ｄ− Ａｌａおよび／またはデスアミノＴｙｒのごとき非−ＤＮＡコード成分を含有し 、しかも、いずれの大規模生産についても、費用のかかる化学合成または化学的 手法と遺伝子工学との組合せを要する公知のアナログとは対照的である。The claimed peptide is composed entirely of naturally occurring amino acids, so it is not a known peptide. The production of the compounds of the invention by recombinant DNA, A technology is possible. This is D- Contains non-DNA-encoded components such as Ala and/or desamino Tyr , and any large-scale production requires expensive chemical synthesis or In contrast to known analogs, which require a combination of techniques and genetic engineering.

本発明で用いる組換え宿主微生物は、当業者によく知られた組換えＤＮＡ技術、 例えば、ここに参照のために挙げるモレキュラー・クローニングＱｌｏｌｅｃｕ ｌａｒＣ１ｏｎｉｎｇ）、ティ・マニアティス（Ｔ、　Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、 コールドハーバ−スプリング研究所、（１９８２）およびビイ・ペルパル（Ｂ、 　Ｐｅｒｂａｌ）、ア・プラクティカル・ガイド・トウ・モレキュラー・クロー ニング（Ａ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌ ｏｎｉｎｇ）、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆ 　５ｏｎｓ）　（１９８４）中の技術によって作成される。The recombinant host microorganism used in the present invention can be prepared using recombinant DNA techniques well known to those skilled in the art. For example, the molecular cloning Qloecu listed here for reference. larC1oning), T. Maniatis et al. Cold Harbor Spring Institute, (1982) and B. Perpal (B. Perbal), A Practical Guide to Molecular Claws (A Practical Guide to MolecularCl oning), John Wiley & Sons (1984).

Ｃ−末［Ｈｓｅ（ラクトン）、ＨｓｅＯＨおよびＨｓｅＮ（Ｒ，ＸＲ−ンアナロ グは、ケムベ（Ｋｅｍｐｅ）ら、ＢＩＯ／ＴＥＣＢＮＯＬＯＧＹ、　４巻、５６ ５−５６８　（１９８６）に開示されている方法によって！ＩＩできる。C-terminal [Hse (lactone), HseOH and HseN (R, Kempe et al., BIO/TECBNOLOGY, Volume 4, 56. 5-568 (1986)! II can do it.

手法に の手法では本発明に記載されているＮ−アルキル化ＧＲＦアナログの調製を扱う 。ペプチドは化学的またはバイオテクノロジー法（各々、手法Ａまたは手法Ｂ） いずかを用いて作成する。次いで、公知の方法、例えば、マーコイ・ダブりニー ・エイおよびコイ・ディ・エイチＱｌｕｒｐｈｙ、　ｆ、　Ａ、ａｎｄ　Ｃｏｙ 、　Ｄ、　Ｈ，）、成長ホルモン−放出因子の優れた長期間作用アルキル化アナ ログ、ペプチド・リサーチ（Ｐｒｐｔｉｄｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）１．３６−４ １　（１９８８）　、ブイ・シチアムーシイ（Ｖ、　Ｓｙｔｈｙｍｏｏｒｔｈｙ ）ら、ポツリヌス神経毒素タイプＡおよびＢの還元的メチル化（Ｒｅｄｕｃｔｉ ｖｅ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｔｕｌｉｎｉｕｍ　ｎｅｕｒｏｔｏ ｘｉｎｔｙｐｅ　Ａ　ａｎｄ　Ｂ）、モレLュ ラー・アンド・セリュシー・バイオケミストリー（Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｍｉ ｏｃｈｅｍ、　）、８３．６５−７２　（１９８８）によってＮ−アルキル化が 達成される。to the method The method deals with the preparation of N-alkylated GRF analogs described in the present invention. . Peptides can be produced by chemical or biotechnological methods (Method A or Method B, respectively) Create using one of the following. Then, using known methods, e.g. ・Qlurphy, f, A, and Coy , D, H,), an excellent long-acting alkylating analyte of growth hormone-releasing factor. Log, Peptide Research 1.36-4 1 (1988), V, Sythymoorthy ) et al., Reductive Methylation of Potulinum Neurotoxin Types A and B ve methylation of botulinium neuroto xintype A and B), More L Ra and Cellucy Biochemistry (Mo1.Ce11.Mi N-alkylation was carried out by Ochem, ), 83.65-72 (1988). achieved.

手法Ｃにより、以下のペプチドもまた調製できる。By method C, the following peptides can also be prepared.

Ｎ−ｔ−１Ｐｒ−Ｔｙｒ’　Ｔｈｒ２Ｓｅｒ”Ｎ−ｔ−４Ｐｒ−Ｌｙｓ　’　” 　□　”’　Ｖａｌ　”Ｉｌｅ”Ｌｅｕ２フＳｅｒ”ｂＧＲe（１−２９）ＮＩ Ｈ２、 Ｎ−＋−１Ｐｒ−Ｔｙｒ’Ｔｈｒ２Ｓｅｒ”Ｎ−＋−１Ｐｒ−Ｌｙｓ”　”Ａｌ ａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ２フｂＧＲＦ（１−４０）ＮＨｚ、Ｎ−ｔ−Ｂｚｌ−Ｔｙｒ ’　Ｔｈｒ”５ｅｒ８Ｎ−ｔ−Ｂｚｌ−Ｌｙｓ’　２・２’　Ｖａｌ　’　５Ｉ ｌｅ”ｌ１ｅ２フＳｅｒ”ｂＧＲＦi１−３２）ＮＢｚ、 Ｎ−＋−１Ｐｒ−Ｔｙｒ’１１ｅ２Ｓｅｒ’Ｎ−＋−１Ｐｒ−Ｌｙｓ’　”’＾ ｌａ”　Ｖａｌ”　Ｌｅｕ”ｂＧＲＦ（１−４０）ＮＢ２、Ｎ−ｉ　−Ｂｚｌ− Ｔｙｒ’　１ｌａｌ　２Ｓｅｔ”Ｎ−ｒ−Ｂｚｌ−Ｌｙｓ　’　”　・”　’　 Ｖａｌ　”　Ｖａｌ　”　ｌ１ｅ２’Ｓ■秩h　”ｂＧＲＦ（１−３２）ＮＩＬ Ｏ実施例で調製されたペプチドを含めて本発明の合成ＧＲＦペプチドのすべては 生物学的に活性であると考えられ、下垂体によるＧＨの放出を刺激するのに有用 である。N-t-1Pr-Tyr’　Thr2Ser”N-t-4Pr-Lys　’” □”’ Val “Ile”Leu2fuSer”bGRe (1-29) NI H2, N-+-1Pr-Tyr'Thr2Ser"N-+-1Pr-Lys""Al a"Val"Leu2fu bGRF (1-40) NHz, N-t-Bzl-Tyr 'Thr"5er8N-t-Bzl-Lys'2・2'Val'5I le"l1e2fuSer"bGRFi1-32)NBz, N-+-1Pr-Tyr'11e2Ser'N-+-1Pr-Lys'"'^ la” Val” Leu”bGRF (1-40) NB2, N-i -Bzl- Tyr’　1lal　2Set”N-r-Bzl-Lys　’”　・”　’ Val　　Val　”l1e2’S■Chichih　”bGRF(1-32)NIL All of the synthetic GRF peptides of the present invention, including the peptides prepared in Example O. Considered to be biologically active and useful in stimulating the release of GH by the pituitary gland It is.

体重１キログラム（ｋｇ）当たりのこれらのペプチドの約１０ナノグラムと約５ マイクログラムとの間の用量がＧＨ分泌を引き起こすのに特に効果的であると考 えられる。About 10 nanograms of these peptides per kilogram (kg) of body weight and about 5 Doses between micrograms are considered to be particularly effective in causing GH secretion. available.

かかるペプチドによるＧＨ分泌の刺激の結果、通常のＧＨレベルと共にヒト、ウ シおよび他の動物につき成長の増加が付随する。さらに、投与により身体の脂肪 含量を変化させ、他のＧＨ−依存性代謝、免疫学的および発生学的プロセスを修 飾する。例えば、これらのアナログは火傷を受けたの後のごとき環境下でヒトに おける同化プロセスを刺激する方法として有用である。もう１つの例として、こ れらのアナログは、ペプチドの有効量を摂取させることによって成長を加速し、 脂肪に対する蛋白の比率を増加させるために、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ 、ヤギ、ウノおよびヒツジのごとき商業的温血動物に投与でき、魚類および他の 冷血動物、例えば、ウミガメおよびウナギ、および両生類を飼育する農業で用い ることができる。これらのアナログは、成長ホルモン産生の異常に起因する糖尿 病を治療するために、または骨、負傷もしくは火傷治癒、もしくは骨粗セ症の改 善のために、ヒトおよび動物で目免疫機能を刺激するのに用いることができる。Stimulation of GH secretion by such peptides results in an increase in normal GH levels in humans, It is accompanied by increased growth in animals and other animals. In addition, administration can reduce body fat content and modify other GH-dependent metabolic, immunological and embryological processes. Decorate. For example, these analogs can be used in humans under circumstances such as after receiving a burn. It is useful as a way to stimulate the assimilation process in the body. As another example, this These analogs accelerate growth by feeding effective amounts of peptides, Chickens, turkeys, and pigs to increase the protein to fat ratio. , can be administered to commercial warm-blooded animals such as goats, sea urchins, and sheep, and can be administered to fish and other Used in agriculture to raise cold-blooded animals, such as sea turtles and eels, and amphibians. can be done. These analogs are used to treat diabetes caused by abnormalities in growth hormone production. to treat disease, or to improve bone, injury or burn healing, or osteoporosis. For its benefit, it can be used to stimulate eye immune function in humans and animals.

］Ｏナノグラム／Ｋｇと約５０マイクログラム／Ｋｇ体重との間の日用量が乳分 泌、成長を増大させ、免疫機能を刺激するのに特に効果的であると考えられる。] If the daily dose is between nanograms/Kg of O and about 50 micrograms/Kg of body weight, It is believed to be particularly effective in increasing secretion, growth and stimulating immune function.

ヒトおよび動物への投与では、これらの合成ペプチドは少なくとも約９３％、好 ましくは、少なくとも９８％の純度を有すべきである。For administration to humans and animals, these synthetic peptides are at least about 93% preferred. Preferably, it should have a purity of at least 98%.

好ましくは持続放出処方としての医薬組成物を形成するための医薬上または獣医 学的に許容される担体と組み合わせたこれらの合成ペプチドまたはその非毒性塩 は、ヒトを含めた動物に、静脈内、皮下、筋肉内、経皮、例えば、鼻孔内投与で きる。該投与は、治療されるべき対象がかかる治療を要する場合にＧＨの放出を 刺激するために、医者によって使用され得る。必要な用量は、治療されるべき個 々の症状、症状の程度および所望の治療の継続で変化する。Pharmaceutical or veterinary for forming pharmaceutical compositions, preferably as sustained release formulations These synthetic peptides or their non-toxic salts in combination with a pharmaceutically acceptable carrier. can be administered to animals including humans intravenously, subcutaneously, intramuscularly, transdermally, e.g., intranasally. Wear. The administration causes the release of GH when the subject to be treated requires such treatment. Can be used by doctors to stimulate. The required dose depends on the individual to be treated. This will vary depending on each individual's symptoms, severity of symptoms, and desired duration of treatment.

かかるペプチドは、しばしば、酸付加塩または、（本適用では塩とみなす）例え ば亜鉛、鉄等との金属錯体のごとき非毒性塩の形態で投与する。かかる酸付加塩 の例は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、 安巳香酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩等である。Such peptides are often treated as acid addition salts or analogs (considered salts in this application). It is administered in the form of non-toxic salts such as metal complexes with zinc, iron, etc. Such acid addition salts Examples are hydrochloride, hydrobromide, sulfate, maleate, acetate, citrate, These include ammizoate, succinate, malate, ascorbate, and tartrate.

有効成分を等張食塩水中にて静脈内投与すべき場合、リン酸緩衝溶液等が有効で ある。If the active ingredient should be administered intravenously in isotonic saline, phosphate buffered solutions etc. may be effective. be.

該ペプチドは医者の指導下で投与すべきであり、医薬組成物には、通常、常法に よる固体もしくは液体の医薬上許容される担体と組み合わせて該ペプチドを含有 させる。通常、非経口用量は対象の体重ＩＫｇ当たり約１００ナノグラムないし 約５０マイクログラムのペプチドとする。The peptide should be administered under the guidance of a physician, and pharmaceutical compositions typically include containing the peptide in combination with a solid or liquid pharmaceutically acceptable carrier according to let Parenteral doses usually range from about 100 nanograms per IKg of subject's body weight to Approximately 50 micrograms of peptide.

本発明をその好ましい具体例で記載してきたが、当業者に自明のごとく、添付す る請求の範囲に記載した本発明の範囲を逸脱することなく種々の変形および修飾 が可能であると理解されるべきである。例えば、ペプチド鎖の修飾、特に当該ペ プチドのＣ−末端で始まる１または２の残基の欠失は、当該ペプチドの生物学的 能力そのものの実質的部分を保持するペプチドを創製するために現在公知の実験 プラクティスにより作成でき、かかるペプチドは本発明の範囲内のものであると 考えられる。さらに、Ｃ−末端および／またはＮ−末端に付加をなすことができ 、および／または、ペプチド化学の全分野で公知であるごとく、一般に、天然に 存在する残基を同等の残基で置き換えて、化合物１〜１５で例示したもののごと く、本発明の範囲を逸脱することなく、蛋白分解に対して耐性が増大して、例え ば、特許請求するポリペプチドの能力の少なくとも実質的部分を有する他のアナ ログを生産できる。同様に、Ｃ−末端におけるカルボキシル部位における公知の 置換、例えば、低級アルキルアミドもまた同等の分子を産生ずる。Having described the present invention in its preferred embodiments, those skilled in the art will appreciate that the attached Various changes and modifications can be made without departing from the scope of the invention as set forth in the claims. It should be understood that this is possible. For example, modification of peptide chains, especially Deletion of one or two residues starting at the C-terminus of the peptide may result in the biological Currently known experiments to create peptides that retain a substantial portion of their potency and such peptides are within the scope of the present invention. Conceivable. Additionally, additions can be made at the C-terminus and/or the N-terminus. , and/or as is generally known in the entire field of peptide chemistry. As exemplified in compounds 1 to 15 by replacing the existing residues with equivalent residues. Without departing from the scope of the invention, increased resistance to proteolysis can be achieved, e.g. For example, other analogs having at least a substantial portion of the capabilities of the claimed polypeptide. Can produce logs. Similarly, the known Substitutions, such as lower alkyl amides, also produce equivalent molecules.

同様に開示する式：　Ｒ−Ｒ，−Ｒ’　２−Ｒ３−Ａｌａ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｔ ｈｒ−Ｒｇ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ’　（１−Ｒ，３−Ｌｅｕ−Ｒ，５− Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−Ｒ，＠−Ｒ，，−Ａｒｇ−Ｒ’　２１−Ｒ２２−Ｌｅｕ−Ｇｉ ｎ−Ｒ２，−Ｉｌｅ−Ｒ２？−Ｒｌｇ−`ｒｇ−Ｇｌｎ− Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｒ、４−Ｒ，５−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｒ３，−Ｒ３、− Ｒ４６−Ａｒｇ−Ｒ、２−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｚ［式中、 Ｒ′は（Ｘ−Ｙ）　−（Ｘ’−Ｙ）　、、ここに、ｎは０〜２０、好ましくは、 Ｘは天然に存在するアミノ酸：Ｙはアラニン、セリン、スレオニンまたはプロリ ン；およびｎが０である場合、Ｙはアラニン、セリンまたはスレオニンから選択 され：Ｘ゛はプロリンまたはヒドロキシプリン以外の天然に存在するアミノ酸、 Ｒ，はＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ′２はＡｌａ、Ｇｌｙ％Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ；Ｒ８はＡｓｐｌＧｌｕ またはＣｙａ； Ｒ８はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ’＋２はＬｙｓまたはＡｒｇ； Ｒ１３はＶａｌまたは１１ｅ。Similarly disclosed formula: R-R, -R' 2-R3-Ala-11e-Phe-T hr-Rg-3er-Tyr-Arg-R' (1-R, 3-Leu-R, 5- Gin-Leu-R, @-R,,-Arg-R' 21-R22-Leu-Gi n-R2, -Ile-R2? -Rlg-`rg-Gln- Gln-Gly-Glu-R, 4-R, 5-Gln-Glu-R3, -R3, - R46-Arg-R, 2-Arg-Leu-Z [wherein, R' is (X-Y) - (X'-Y), where n is 0 to 20, preferably X is a naturally occurring amino acid; Y is alanine, serine, threonine, or prolyte; and when n is 0, Y is selected from alanine, serine or threonine and: X゛ is a naturally occurring amino acid other than proline or hydroxypurine, R, is Tyr or His; R'2 is Ala, Gly%Thr, Val or He; R8 is AsplGlu or Cya; R8 is Asn or Ser; R'+2 is Lys or Arg; R13 is Val or 11e.

ＲＩＳはＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ｌｉｅまたはＧｌｙ：ＲｌｇはＳｅｒまたは Ｔｙｒ； Ｒ１，はＶａｌまたはｌｉｅ； Ｒ’　２．はＬｙｓまたは、Ａ　ｒ　ｇ　；Ｒ２２はＡｌａまたはＬｅｕ＋ Ｒ２５はＡｓｐ、ＧｌｕまたはＣｙａ：Ｒ２７はＭｅｔ、ＩｌｅまたはＬｅｕ； Ｒ２ＭはＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３４はＳｅｒまたは、八ｒｇ； Ｒ３５はＡｓｎまたはＳｅｔ： Ｒ３８はＡｒｇまたはＧｌｎ： ＲＨはＧｌｙまたは、へｒｇ。RIS is Ala, Val, Leu, lie or Gly; Rlg is Ser or Tyr; R1, is Val or lie; R'　2. is Lys or A r g; R22 is Ala or Leu+ R25 is Asp, Glu or Cya; R27 is Met, He or Leu; R2M is Asn or Ser; R34 is Ser or 8rg; R35 is Asn or Set: R38 is Arg or Gln: RH is Gly or Herg.

Ｒ４０はＡｈａまたはＳｅｒ； Ｒ４□はＡｌａ、ＶａｌまたはＰｈｅ；およびＺはＣ−末端におけるアミノ酸残 基のカルボキシ部位を表すものであって、基−ＣＯＯＲ，、−ＣＲ，Ｏ，−ＣＯ ＮＨＮＨＲ，、−ＣＯＮ（Ｒ，ＸＲ−）または−ＣＨ２０Ｒ１であり、Ｒ１およ びＲ５はｃ、−ｃｍアルキルまたは水素を意味するコで示されるＧＲＦペプチド 、またはＮ−末端のＲからそのＣ−末端としての２７ないし４４位いずれかの位 置における残基まで伸びるその生物学的活性断片二または前記のもののＨｓｅ（ ラクトン）、ＨｓｅＯＨまたはＨｓ　ｅ　（Ｒ、ＸＲ−）および／または前記の ものの非毒性塩は、該ペプチドの生物学的能力のその実質的部分を保持するペプ チドを創製するために現在公知の実験プラクティスにより作成でき、かかるペプ チドは本明細書中に開示する本発明のもう１つの態様であると考えられる。R40 is Aha or Ser; R4□ is Ala, Val or Phe; and Z is the amino acid residue at the C-terminus. represents the carboxy moiety of the group, -COOR,, -CR,O, -CO NHNHR,, -CON(R,XR-) or -CH20R1, where R1 and and R5 are c, -cm alkyl or hydrogen; , or any position from the N-terminal R to the 27th to 44th position as its C-terminus. Hse ( lactone), HseOH or Hse (R, XR-) and/or the aforementioned The non-toxic salts of the peptides retain a substantial portion of the biological potency of the peptides. Such peptides can be made by currently known experimental practices to create Tido is considered to be another aspect of the invention disclosed herein.

本発明によるＧＲＦペプチドの伸長部分（Ｒ゛）は式：（Ｘ−Ｙ）−（Ｘ’−Ｙ ）、のアミノ酸を有する。The extended portion (R) of the GRF peptide according to the present invention has the formula: (X-Y)-(X'-Y ), has amino acids of.

二二に、ｎは順次連結するＸ’−Ｙ基の数を表し、その数はかかる基の０ないし ２０、好ましくはＯないし１０の基を表す。22, n represents the number of sequentially connected X'-Y groups, and the number is 0 to 1 of such groups. 20, preferably O to 10 groups.

Ｘはすべての天然に存在するアミノ酸よりなる群から選択され；Ｙはプロリン、 アラニン、セリン、およびスレオニンよりなる群から選択され、ただし、ｎがＯ である場合、Ｙはアラニン、セリン、およびスレオニンよりなる群から選択され ： Ｘｏはプロリンまたはヒドロキシプロリン以外のすべての天然に存在するアミノ 酸よりなる群から選択され。X is selected from the group consisting of all naturally occurring amino acids; Y is proline; selected from the group consisting of alanine, serine, and threonine, provided that n is O , Y is selected from the group consisting of alanine, serine, and threonine. : Xo is any naturally occurring amino acid other than proline or hydroxyproline. selected from the group consisting of acids.

鎖式によると、ｎが１である場合、２つのＹ残基がある。さらに、単一の具体例 において２１のＹ残基および２０のＸ°残基まで有することが可能である。個々 のＹ残基およびＸ”残基は、各々、それから選択される群のいずれかの残基であ り得る。すなわち、個々の）′残基のすべては、任意の具体例で同一である必要 はない。同様に、１を超えるＸ゛残基具体例では、存在する各個々のＸ°残基は 、いずれかの他のＸ゛残基何の残基であるかに拘わらず、プロリンおよびヒドロ キシプロリン以外のいずれのアミノ酸残基でもあり得る。各個々のＹおよびＸ′ 残基は、各々、個々の基についての規則に適合しなければならず、必要な全ては 特別の位置における種々の個々の残基は前記した規則に従うことである。According to the chain formula, when n is 1, there are two Y residues. Furthermore, a single concrete example It is possible to have up to 21 Y residues and 20 X° residues in. individual each of the Y and X" residues of can be obtained. That is, all of the individual )′ residues must be the same in any particular instance. There isn't. Similarly, in the embodiment of more than one X' residue, each individual X' residue present is , any other X' residue, proline and hydro It can be any amino acid residue other than xyproline. each individual Y and X' Each residue must comply with the rules for the individual group, and all that is required is The various individual residues at particular positions are subject to the rules set forth above.

表Ｉ・ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるラット下垂体前葉細胞培養におけるラットＧＨ 放出に対するｂＧＲＦアナログの効果 アナログ濃度（ｎＭ） ＣＰａｌｔ　化合初冬　０．０１　０．１　１　１０（そのトルフルオロ酢酸塩 としての） ’Ｉ−１ライノ（７＋ｏグ無添加）　１９６３”　１９６３’　１９６３’　１ ９６３”Ｌｅｕ２７−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＢ２　３４７４”　７５６１’　 １５１７２ｅ１６５０６゜Ｂ９　１１ｅ”Ａｌａ”Ｍａｌ”Ｌｅｕ２フーｂＧＲ Ｆ（１−２９）Ｎ［Ｉ２５５９８”　１２０８２”　１７２３０’＃７　１１ｅ ２＾１ａ”Ｉｌｅ”Ｌｅｕ”ツーｂＧＲＦ（１−２９）Ｎ［Ｉ２　５１６２”’ 　１１００６””　１６９８０’＄８　Ｖａｌ”Ａｌａ”Ｖａｌ”Ｌｅｕ”−ｂ ＧＲＦ（１−２９）ＮＢ２　４６２９”　１１ｇ３２”’　１６５７ｇ’＄６　 Ｖａ１２＾１ａ”Ｉｌｅ”Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＢ２　４１４１” ｅ　１０６８６’　１６３７０”’＃ｌ　Ｔｈｒ２Ａ１ａＩ５Ｖａｌ”Ｌｅｕ” −ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＨｚ　３８５２’　９２５２”　１６１３８”’＄２ 　Ｔｈｒ”Ａｌａ”Ｉｌｅ”Ｌｅｕ２フーｂＧＩｌｌＦ（１−２９）ＮＢ２　２ ５４１°”　６２６３°・’　１３１２２’Ｔｈｒ”Ａｌａ”Ｌｅｕ”−ｂＧＲ Ｆ（１−２９）ＮＢ２２８３３”　５８３１°　１３３７８’＄５　１１ｅ”Ａ ｌａ”Ｌｅｕ”Ｌｅｕ２丁−ｂＧＲＦ（１−２９）Ｎ［１２５８３５’　１２２ ９ｇ’　１７２７２’８４　Ｖａｌ”＾１ａＩＳＬｅｕ１９Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ （１−２９）Ｎｕ２３９７６″９５４０’　１６４５５゜Ｂ３　Ｔｈｒ”＾１ａ ＩＳＬｅｕ”Ｌｅｕ”−ｂＧＲＦ（１−２９）ＮＢ２　２４４３’　４４８３ｂ １３０１２ｈ＊下垂体細胞培養で放出されたｒＧＨの量はラジオイムノアッセイ で測定し、ウェル／４時間当たりのｎｇで表す。フローマン（Ｆｒｏｈｍａｎ） ら、メソッズ・エンザイモル（ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ、）、　１２４． ３７１（１９８６）。Table I Rat GH in rat anterior pituitary cell culture in vitro Effect of bGRF analogs on release Analog concentration (nM) CPalt Compound Early Winter 0.01 0.1 1 10 (its trifluoroacetate as) 'I-1 Rhino (7+Og-free) 1963'' 1963' 1963' 1 963”Leu27-bGRF(1-29)NB2 3474”7561’ 15172e16506゜B9　11e"Ala"Mal"Leu2fu bGR F(1-29)N[I25598" 12082" 17230'#7 11e 2^1a”Ile”Leu”2bGRF(1-29)N[I2　5162”’ 11006"" 16980'$8 Val"Ala"Val"Leu"-b GRF (1-29) NB2 4629” 11g32”’1657g’$6 Va12^1a"Ile"Leu"-bGRF(1-29)NB2 4141" e 10686’ 16370”’#l Thr2A1aI5Val”Leu” -bGRF (1-29) NHz 3852' 9252" 16138"'$2 Thr”Ala”Ile”Leu2fu bGIllF(1-29)NB2 2 541°" 6263°・'13122'Thr"Ala"Leu"-bGR F (1-29) NB22833” 5831° 13378’$5 11e”A la"Leu"Leu2-bGRF(1-29)N[125835' 122 9g’ 17272’84 Val”^1aISLeu19Leu”-bGRF (1-29) Nu23976″9540’ 16455°B3 Thr”＾1a ISLeu"Leu"-bGRF(1-29)NB2 2443' 4483b 13012h*The amount of rGH released in pituitary cell culture was determined by radioimmunoassay. and expressed in ng per well/4 hours. Frohman et al., Methods Enzymol, 124. 371 (1986).

欄内の°・５パ山°山１、異なる肩文字はｐ＜Ｑ、　０５にて異なることを意味 する。°・5 payama °yama1 in the column, different superscripts mean different in p<Q, 05 do.

注意：Ｌｅｕ”置換はアナログＧＨ−放出能に対して有害である一方、Ｖａｌ” およびＩｌｅ”修飾の結果、各々ｉｎ　ｖｉｔｒｏにて増大したまたは変化しな いアナログが得られたが、Ｌｅｕ”アナログは活性が減少した。Ｌｅｕ”−ｂＧ ＲＦ　（１−２９）ＮＢ２はアッセイ標準として用いた。Note: Leu” substitution is detrimental to the analog GH-releasing ability, while Val” and Ile” modification, respectively increased or unchanged in vitro. The activity of the Leu'' analog was decreased.Leu''-bG RF(1-29)NB2 was used as an assay standard.

表■：１９位置換ＧＲＦのｉｎ　ｖｉｔｒｏ血漿安定血漿安定性本立した実験（ 各々二連で行った）からの平均値１・１・異なる肩文字の化合物はｐ＜９．０５ にて統計的に異なる。Table ■: In vitro plasma stability of GRF substituted at position 19, plasma stability, main experiment ( Average value from 1.1 for compounds with different superscripts (each performed in duplicate) p<9.05 statistically different.

図２ ＦｙｍＰＣ丁ハ３＾４１０１ｔｕ家−〉−ｉマー−１む會−寝）ｅｅｌｍｌ−１ １罐１１１Ｍ国際調査報告 ＵＳ　９１０８２４８ Ｓ＾　５６４２１ フロントページの続き （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。Figure 2 FymPC Dingha 3^4101tu family-〉-i-mer-1mu-sleeping)eeelml-1 1 can 111M international search report US9108248 S^　56421 Continuation of front page (81) Specified times EP (AT, BE, CH, DE.

ＤＫ、　ＥＳ、　ＦＲ，ＧＢ、　ＧＲ，ＩＴ、　ＬＵ、　ＮＬ、　ＳＥ）、０Ａ （ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、　ＭＲ，ＳＮ 、　ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　Ｃ３，ＦＩ、 　ＨＵ、ＪＰ、　ＫＰ。DK, ES, FR, GB, GR, IT, LU, NL, SE), 0A (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, SN , TD, TG), AU, BB, BG, BR, CA, C3, FI, HU, JP, KP.

ＫＲ，ＬＫ、　ＭＣ，ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　Ｎｏ、　ＰＬ、　ＲＯ，ＳＤ、 　ＳＵ、　ＵＳKR, LK, MC, MG, MN, MW, No, PL, RO, SD, SU, US

Claims (16)

【特許請求の範囲】[Claims] １．１９位に通常見い出されるアミノ酸残基の代わりにＶａＩまたはＩｌｅを有 し、２位に通常見い出されるアミノ酸残基の代わりにＧｌｙ、Ｔｈｒ、Ｖａｌま たはＩｌｅを有し、かつ１５位にＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙ よりなる群から選択されるアミノ酸を有するＧＲＦペプチド。1. Having VaI or He in place of the amino acid residue normally found at position 19 and instead of the amino acid residue normally found in position 2, Gly, Thr, Val or or He, and Ala, Val, Leu, He or Gly at position 15 A GRF peptide having an amino acid selected from the group consisting of: ２．２位における該アミノ酸がＴｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅである請求の範囲第 １項記載のＧＲＦペプチド。2. The amino acid at position 2 is Thr, Val or He. GRF peptide according to item 1. ３．式： 【配列があります】 ［式中、 ＲはＨ、Ｃ１−Ｃ５アルキルまたはベンジル；Ｒ１はＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ２はＧｌｙ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ；Ｒ３はＡｓｐ、ＧｌｕまたはＣｙ ａ； Ｒ８はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ１２はＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１−Ｃ５アルキルまたはベンジル である場合は、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−ＬｙＳ；Ｒ１３は ＶａｌまたはＩｌｅ； Ｒ１５はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧＩｙ；Ｒ１８はＳｅｒまたは Ｔｙｒ； Ｒ１９はＶａｌまたはＩｌｅ； Ｒ２１はＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１−Ｃ５アルキルまたはベンジル である場合は、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ；Ｒ２２は ＡｌａまたはＬｅｕ； Ｒ２５はＡｓｐまたはＧｌｕ； Ｒ２７はＭｅｔ、ＩｌｅまたはＬｅｕ；Ｒ２８はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３４はＳｅｒまたはＡｒｇ； Ｒ３５はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３８はＡｒｇまたはＧｌｎ； Ｒ３９はＧｌｙまたはＡｒｇ； Ｒ４０はＡｌａまたはＳｅｒ； Ｒ４２はＡｌａ、ＶａｌまたたはＰｈｅ；およびＺはＣ−末端におけるアミノ酸 残基のカルボキシル部位を表すものであって、基−ＣＯＯＲａ、−ＣＲａＯ、− ＣＯＮＨＮＨＲａ、−ＣＯＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）または−ＣＨ２ＯＲａで、Ｒａお よびＲｂはＣ１−Ｃ８アルキルまたは水素を意味する］を有する請求の範囲第１ 項記載のＧＲＦペプチド；またはＮ−末端のＲからそのＣ−末端としての２７位 ないし４４位いずれかの残基まで伸びるその生物学的活性断片；または前記のも ののＨｓｅ（ラクトン）、ＨｓｅＯＨまたはＨｓｅＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）および／ または前記のものの非毒性塩。3. formula: [There is an array] [In the formula, R is H, C1-C5 alkyl or benzyl; R1 is Tyr or His; R2 is Gly, Thr, Val or He; R3 is Asp, Glu or Cy a; R8 is Asn or Ser; R12 is Lys or Arg, or R is C1-C5 alkyl or benzyl , then N-ε-alkyl- or N-ε-benzyl-LyS; R13 is Val or Ile; R15 is Ala, Val, Leu, He or GIy; R18 is Ser or Tyr; R19 is Val or Ile; R21 is Lys or Arg, or R is C1-C5 alkyl or benzyl , then N-ε-alkyl- or N-ε-benzyl-Lys; R22 is Ala or Leu; R25 is Asp or Glu; R27 is Met, He or Leu; R28 is Asn or Ser; R34 is Ser or Arg; R35 is Asn or Ser; R38 is Arg or Gln; R39 is Gly or Arg; R40 is Ala or Ser; R42 is Ala, Val or Phe; and Z is the amino acid at the C-terminus It represents the carboxyl part of the residue, and the group -COORa, -CRaO, - CONHNHRa, -CON(Ra)(Rb) or -CH2ORa, Ra or and Rb means C1-C8 alkyl or hydrogen] or from the N-terminal R to the 27th position as its C-terminus. to any of the foregoing residues; Hse (lactone), HseOH or HseN (Ra) (Rb) and/or or non-toxic salts of the foregoing. ４．Ｒ２がＴｈｒ、ＶａｌまたはＩＬｅである請求の範囲第３項記載のＧＲＦペ プチド。4. The GRF pen according to claim 3, wherein R2 is Thr, Val or ILe. Petite. ５．【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】、 【配列があります】または 【配列があります】；またはその非毒性塩よりなる群から選択される請求の範囲 第４項記載のＧＲＦペプチド。5. [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array], [There is an array] or Claims selected from the group consisting of: [The sequence is]; or a non-toxic salt thereof; GRF peptide according to item 4. ６．Ｒ１５がＡｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＩＬｅである請求の範囲第３項記載 のＧＲＦペプチド。6. Claim 3, wherein R15 is Ala, Val, Leu or ILe. GRF peptide. ７．ＲがＨであってＲ１５がＡｌａである請求の範囲第６項記載のＧＲＦペプチ ド。7. The GRF peptide according to claim 6, wherein R is H and R15 is Ala. Do. ８．Ｒ１がＴｙｒである請求の範囲第７項記載のＧＲＦペプチド。8. 8. The GRF peptide according to claim 7, wherein R1 is Tyr. ９．Ｒ８およびＲ２８がＳｅｒである請求の範囲第８項記載のＧＲＦペプチド。9. 9. The GRF peptide according to claim 8, wherein R8 and R28 are Ser. １０．Ｒ２がＶａｌである請求の範囲第６項記載のＧＲＦペプチド。10. 7. The GRF peptide according to claim 6, wherein R2 is Val. １１．Ｒ２がＩｌｅである請求の範囲第６項記載のＧＲＦペプチド。11. 7. The GRF peptide according to claim 6, wherein R2 is He. １２．Ｒ１０がＶａｌである請求の範囲第６項記載のＧＲＦペプチド。12. 7. The GRF peptide according to claim 6, wherein R10 is Val. １３．Ｒ１９がＩｌｅである請求の範囲第６項記載のＧＲＦペプチド。13. 7. The GRF peptide according to claim 6, wherein R19 is He. １４．１９位にＶａｌまたはＩｌｅを有し、２位に通常見い出されるアミノ酸残 基の代わりにＴｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ残基を有し；かつ１５位にＡｌａ、Ｖ ａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙよりなる群から選択されるアミノ酸を有する ＧＲＦペプチドの有効量を動物に投与することを特徴とする該動物において成長 ホルモンの放出を刺激する方法。14. Has Val or He at position 19 and the amino acid residue normally found at position 2. has a Thr, Val or He residue in place of the group; and Ala, V at position 15 having an amino acid selected from the group consisting of al, Leu, He or Gly growth in an animal, characterized in that an effective amount of a GRF peptide is administered to the animal; How to stimulate the release of hormones. １５．該ＧＲＦペプチドが式：【配列があります】［式中、ＲはＨ、Ｃ１−Ｃ５ アルキルまたはベンジル；Ｒ１はＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ２はＧｌｙ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ；Ｒ３はＡｓｐ、ＧｌｕまたはＣｙ ａ； Ｒ８はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ１２はＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１−Ｃ５アルキルまたはベンジル である場合は、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ；Ｒ１３は ＶａｌまたはＩｌｅ；Ｒ１５はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅまたはＧｌｙ； Ｒ１８はＳｅｒまたはＴｙｒ； Ｒ１９はＶａｌまたはＩｌｅ； Ｒ２１はＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１−Ｃ５アルキルまたはベンジル である場合は、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ；Ｒ２２は ＡｌａまたはＬｅｕ； Ｒ２５はＡｓｐまたはＧｌｕ； Ｒ２７はＭｅｔ、ＩｌｅまたはＬｅｕ；Ｒ２８はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３４はＳｅｒまたはＡｒｇ； Ｒ３５はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３８はＡｒｇまたはＧｌｎ； Ｒ３９はＧｌｙまたはＡｒｇ； Ｒ４０はＡｌａまたはＳｅｒ； Ｒ４２はＡｌａ、ＶａｌまたたはＰｈｅ；およびＺはＣ−末端におけるアミノ酸 残基のカルボキシル部位を表すものであって、基−ＣＯＯＲａ、−ＣＲａＯ、一 ＣＯＮＨＮＨＲａ、−ＣＯＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）または−ＣＨ２ＯＲａで、Ｒａお よびＲｂはＣ１−Ｃ８アルキルまたは水素を意味する］またはＮ−末端のＲから そのＣ−末端としての２７位ないし４４位いずれかの残基まで伸びるその生物学 的活性断片；または前記のもののＨｓｅ（ラクトン）、ＨｓｅＯＨまたはＨｓｅ Ｎ（Ｒａ）（Ｒｂ）および／または前記のものの非毒性塩を有する請求の範囲第 １４項記載の方法。15. The GRF peptide has the formula: [Sequence] [where R is H, C1-C5 Alkyl or benzyl; R1 is Tyr or His; R2 is Gly, Thr, Val or He; R3 is Asp, Glu or Cy a; R8 is Asn or Ser; R12 is Lys or Arg, or R is C1-C5 alkyl or benzyl , then N-ε-alkyl- or N-ε-benzyl-Lys; R13 is Val or He; R15 is Ala, Val, Leu, He or Gly; R18 is Ser or Tyr; R19 is Val or Ile; R21 is Lys or Arg, or R is C1-C5 alkyl or benzyl , then N-ε-alkyl- or N-ε-benzyl-Lys; R22 is Ala or Leu; R25 is Asp or Glu; R27 is Met, He or Leu; R28 is Asn or Ser; R34 is Ser or Arg; R35 is Asn or Ser; R38 is Arg or Gln; R39 is Gly or Arg; R40 is Ala or Ser; R42 is Ala, Val or Phe; and Z is the amino acid at the C-terminus It represents the carboxyl part of the residue, and the groups -COORa, -CRaO, - CONHNHRa, -CON(Ra)(Rb) or -CH2ORa, Ra or and Rb means C1-C8 alkyl or hydrogen] or from the N-terminal R Its biology extends to residues anywhere from position 27 to 44 as its C-terminus. or Hse (lactone), HseOH or Hse of the foregoing; N(Ra)(Rb) and/or non-toxic salts of the foregoing. The method described in item 14. １６．医薬上許容される担体と組み合わせて、式：【配列があります】［式中、 ＲはＨ、Ｃ１−Ｃ５アルキルまたはベンジル；Ｒ１はＴｙｒまたはＨｉｓ； Ｒ２はＧｌｙ、Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＩｌｅ；Ｒ３はＡｓｐ、ＧｌｕまたはＣｙ ａ； Ｒ８はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ１２はＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１−Ｃ５アルキルまたはベンジル である場合は、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ；Ｒ１３は ＶａｌまたはＩｌｅ； Ｒ１５はＡｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＩｌｅ；Ｒ１８はＳｅｒまたはＴｙｒ； Ｒ１９はＶａｌまたはＩｌｅ； Ｒ２１はＬｙｓまたはＡｒｇ、あるいはＲがＣ１−Ｃ５アルキルまたはベンジル である場合は、Ｎ−ε−アルキル−またはＮ−ε−ベンジル−Ｌｙｓ；Ｒ２２は ＡｌａまたはＬｅｕ； Ｒ２５はＡｓｐまたはＧｌｕ； Ｒ２７はＭｅｔ、ＩｌｅまたはＬｅｕ；Ｒ２８はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３４はＳｅｒまたはＡｒｇ； Ｒ３５はＡｓｎまたはＳｅｒ； Ｒ３８はＡｒｇまたはＧｌｎ； Ｒ３９はＧｌｙまたはＡｒｇ； Ｒ４０はＡｌａまたはＳｅｒ； Ｒ４２はＡｌａ、ＶａｌまたたはＰｈｅ；およびＺはＣ−末端におけるアミノ酸 残基のカルボキシル部位を表すものであって、基−ＣＯＯＲａ、−ＣＲａＯ、− ＣＯＮＨＮＨＲａ、−ＣＯＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）または−ＣＨ２ＯＲａで、Ｒａお よびＲｂはＣ１−Ｃ８アルキルまたは水素を意味する］を有するＧＲＦペプチド ；またはＮ−末端のＲからそのＣ−末端としての２７位ないし４４位いずれかの 残基まで伸びるその生物学的活性断片；または前記のもののＨｓｅ（ラクトン） 、ＨｓｅＯＨまたはＨｓｅＮ（Ｒａ）（Ｒｂ）および／または前記のものの非毒 性塩の有効量よりなる動物における成長ホルモンの放出刺激用組成物。16. In combination with a pharmaceutically acceptable carrier, a compound of the formula: R is H, C1-C5 alkyl or benzyl; R1 is Tyr or His; R2 is Gly, Thr, Val or He; R3 is Asp, Glu or Cy a; R8 is Asn or Ser; R12 is Lys or Arg, or R is C1-C5 alkyl or benzyl , then N-ε-alkyl- or N-ε-benzyl-Lys; R13 is Val or Ile; R15 is Ala, Val, Leu or He; R18 is Ser or Tyr; R19 is Val or Ile; R21 is Lys or Arg, or R is C1-C5 alkyl or benzyl , then N-ε-alkyl- or N-ε-benzyl-Lys; R22 is Ala or Leu; R25 is Asp or Glu; R27 is Met, He or Leu; R28 is Asn or Ser; R34 is Ser or Arg; R35 is Asn or Ser; R38 is Arg or Gln; R39 is Gly or Arg; R40 is Ala or Ser; R42 is Ala, Val or Phe; and Z is the amino acid at the C-terminus It represents the carboxyl part of the residue, and the group -COORa, -CRaO, - CONHNHRa, -CON(Ra)(Rb) or -CH2ORa, Ra or and Rb means C1-C8 alkyl or hydrogen] ; or from the N-terminal R to any of the 27th to 44th positions as the C-terminus. biologically active fragments thereof extending to residues; or Hse (lactones) of the foregoing; , HseOH or HseN(Ra)(Rb) and/or non-toxic A composition for stimulating the release of growth hormone in animals, comprising an effective amount of a sex salt.