JPH06502494A - How to detect and follow the course of cancer, pregnancy and trophic cell diseases - Google Patents
How to detect and follow the course of cancer, pregnancy and trophic cell diseasesInfo
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- JPH06502494A JPH06502494A JP4500676A JP50067692A JPH06502494A JP H06502494 A JPH06502494 A JP H06502494A JP 4500676 A JP4500676 A JP 4500676A JP 50067692 A JP50067692 A JP 50067692A JP H06502494 A JPH06502494 A JP H06502494A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.
Description
【発明の詳細な説明】 癌、妊娠および栄養化細胞病の経過を検出し追従する方法政府の権利 本発明は国立癌研究所からの認可ＣＡ−４４１３１およびＣＡ−５３８２８の元 で合衆国政府の支持により行なわれた。それゆえ、合衆国政府は本発明において 確実な権利を有する。[Detailed description of the invention] How to detect and follow the course of cancer, pregnancy and trophic cell diseases Government rights This invention is made under Grants CA-44131 and CA-53828 from the National Cancer Institute. It was carried out with the support of the United States government. Therefore, the United States Government have certain rights.
発明の背景 産業上の利用分野 本発明は、全血、血漿または血清を血清ゴナドトロピンペプチド複合体またはそ の成分の存在について分析することにより、癌、妊娠および栄養化細胞病の経過 を検出し追従する方法に関するものである。Background of the invention Industrial applications The present invention provides a method for converting whole blood, plasma or serum into serum gonadotropin peptide complexes or the like. The course of cancer, pregnancy and trophic cell diseases by analyzing for the presence of components of It concerns a method of detecting and tracking.
従来技術 栄養化細胞は、妊娠の間中、ホルモンｈＣＧ （ヒト柔毛膜性ゴナドトロピン） および小さな分子、すなわちβコア断片（ｒＢＣＦＪ）（ｈＣＧ分子の部分であ る２つの小さなペプチドからなる）を分泌する。分子ｈＣＧは、妊娠の経過を検 出し追従するのに用いられるただひとつのマーカーである。ｈＣＧは、妊娠面／ 血清および尿中に高水準で検出される一方、βコア断片は尿中のみで検出される 。従来、そのβコア断片は血／血清中には検出できなかった。Conventional technology Nutrient cells are exposed to the hormone hCG (human chorionic gonadotropin) throughout pregnancy. and a small molecule, namely the β core fragment (rBCFJ), which is part of the hCG molecule. (consisting of two small peptides). The molecule hCG can be used to monitor the progress of pregnancy. It is the only marker used to track the launch. hCG is pregnancy side/ High levels detected in serum and urine, while β-core fragment is detected only in urine . Previously, the β core fragment could not be detected in blood/serum.
このことは、妊娠の管理および癌による異所性産生の検出におけるβコア断片の 診断用途を大きく制限している。This has implications for the use of β-core fragments in the management of pregnancy and in the detection of ectopic production by cancer. This greatly limits diagnostic use.
ｈＣＧ βサブユニットは１４５のアミノ酸からなるポリペプチド（分子ｊ１− ２２，２００）である。βコア断片は、ｈＣＧ βサブユニットの断片（残基５ ５−９２に二値化物連結した残基６−４０）からなり、約半分の分子量（１０， ３００）である。２つのＮ連結糖鎖はＡｓｎ １３とＡｓｎ ３０でβコア断片 と連結している；これらはシアル酸が欠損しており、ｈＣＧ βサブユニツト上 の相同位置での糖鎖に対して異なる構造のものである（バーケン、Ｓ３、アーム ストロング Ｅ、 Ｇ、 、ガイノイッチーコルクス、 Ｍ、 Ａ、 、コール 、Ｌ、 Ａ、 、アゴスト、Ｇ。hCG β subunit is a polypeptide (molecule j1- 22,200). The β core fragment is a fragment of hCG β subunit (residue 5 It consists of residues 6-40) linked to binary residues 5-92 and has a molecular weight of about half (10, 300). The two N-linked sugar chains are Asn 13 and Asn 30, forming a β core fragment. These are deficient in sialic acid and are linked to the hCG β subunit. (Birken, S3, arm Strong E, G, Gynoitchy Corcus, M, A, Cole ,L., ,A., ,Agosto, ,G.
Ｍ２、クリシェフスキー、Ａ９、パイツカイチス、Ｊ、Ｌｌ、キャンフィールド 、Ｒ，Ｅ、、ｒ妊娠尿からのヒト柔毛膜性ゴ六トドロピンβサブユニット断片の 構造Ｊ、内分泌学、（１９８８）１２３ ： ３７２−８３ ；コール、Ｌ、Ａ 。M2, Krzyzewski, A9, Paitsukaitis, J, Ll, Canfield ,R,E,,r Human chorionic gorix todropin β subunit fragment from pregnancy urine Structure J, Endocrinology, (1988) 123: 372-83; Cole, L, A .
、バーケン、Ｓｌ、「ヒト柔毛膜性ゴナドトロピンβサブユニツトコア断片の起 源および発生」、モル エンドクリノール、（１９８８）２ ：８２５−３０ ；およびブリス。, Berken, Sl, “Origin of the human chorionic gonadotropin β subunit core fragment.” Source and Occurrence”, Mol Endocrinol, (1988) 2:825-30 ; and Bliss.
Ｄ、Ｌ、 、ライ−マン、 Ｒ，Ｅ、 、ニスラ、Ｂ、Ｃ，、「炭化水素組成物 およびβコア」、内分泌学、（１９８９）１２５ ： ２２６７−７２）。D.L., Reiman, R.E., Nisler, B.C., “Hydrocarbon Compositions and β-core”, Endocrinology, (1989) 125: 2267-72).
近年の研究により、尿中のβコア断片は複合体として２つの小さなペプチドと結 合していることが示されている（カーダナら、出版に提出）。Recent research has shown that the beta core fragment in urine is linked to two small peptides as a complex. (Cardana et al., submitted for publication).
高水準のβコア断−片が、妊娠、栄養化細胞病およびある癌の女性の尿中に検出 されている（バーケンら、前出；コールら、前出；コーラ、Ｌ、Ａ、 、ワン Ｙ１エリオツド、Ｍ、Ｅ、、ラチフ１Ｍ２、チャンパース、Ｔ、チャンパース、 Ｓｌ、シュワルツ、Ｐ、Ｅ、 、ｒβサブユニットとβコア断片を含まない尿の ｈＣＧ：婦人科癌の新たなマーカー」、癌Ｒｅ ｓ、、（１９８８）４８：１３ ５６−６０ 。High levels of beta-core fragments found in urine of women with pregnancy, trophic cell disease and some cancers (Berken et al., supra; Cole et al., supra; Cora, L.A., Wang Y1 Eliots, M, E,, Latif 1M2, Champers, T, Champers, Sl, Schwartz, P, E, Urine that does not contain rβ subunits and β core fragments. hCG: a new marker for gynecological cancer”, Cancer Res, (1988) 48:13 56-60.
ライ−マン、Ｒ，Ｅ、 、ニスラ、Ｂ、Ｃ，、ｒヒト中のヒト柔毛膜性ゴナドト ロピンβサブユニットの個別の分解産生物の特徴付け」、Ｊ、タリン内分泌代謝 、（１９８０）５１ ：１０１−５ ；ナム、Ｊｏ、コール、Ｒ７、チャンパー ス、Ｊｌ、シュワルツ、ｐ、、ｒ尿のゴナドトロピン断片、新たな腫瘍マーカー 」、婦人科腫瘍学、（１９９０）３６ ： ３８３−９０ ；シニＬ／−ダー、 Ｈ，、ハに９ ＋、ｃ。Reimann, R.E., Nissla, B.C., Human chorionic gonadotes in humans. “Characterization of individual degradation products of the lopin β subunit”, J. Talin Endocrine Metabolism , (1980) 51:101-5; Nam, Jo, Cole, R7, Champer. S, Jl, Schwartz, p, r urine gonadotropin fragments, new tumor marker ”, Gynecological Oncology, (1990) 36: 383-90; H,, C to 9 +, c.
、「通常の妊娠中に尿に存在するホルモンおよび免疫反応性断片のヒトβ柔毛膜 性ゴナドトロピン検定の特異性」、臨床化学、（１９８３）２９ ： ６６７− ７１ 、パパペトラウ、 Ｐ、 Ｄ、 、ニコボーロー、ｓ、ｃ、、「癌患者の 尿中のヒト柔毛膜性ゴナドトロピンβだんぺんの起源」、アクタ エンドクリノ ール（１９８６）１１２：４１５−２２；メイジャー、Ｈ５、ジャフィー、Ｗｌ 、シラケル１Ｍ１、バーケン、Ｓｌ、キャンフィールド、Ｒ８、ファイッカイチ ス、Ｊ、、ｒ通常胎盤およびｈＣＧ分泌腫瘍により産生された小分子サイズ尿免 疫反応性ｈＣＧ状物質の特徴付けＪ、臨床内分泌代謝ジャーナル、（１９８１） ５３ ： １０１４−２０ 、クリシェフスキー、Ａ９、アームストロング。, “Hormonal and immunoreactive fragments of human beta chorion present in urine during normal pregnancy. “Specificity of sexual gonadotropin assay”, Clinical Chemistry, (1983) 29: 667- 71, Papapetrou, P., D., Nikoboulou, S.C., “Cancer patients "Origin of human chorionic gonadotropin β-dumpling in urine", Acta Endocrino (1986) 112:415-22; Major, H5, Jaffee, Wl. , Shirakel 1M1, Birken, Sl, Canfield, R8, Faikaichi S, J., r Small molecule size urinary immune system produced by normal placenta and hCG-secreting tumors. Characterization of epidemiologically reactive hCG-like substances J, Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, (1981) 53: 1014-20, Krzyzewski, A9, Armstrong.
Ｒ９、シュラタラ−１Ｊ１、バーケン、Ｓ。、オコナー。R9, Shratala-1J1, Birken, S. , O'Connor.
Ｊｏ、ビケル、に０、シルバーベルブ、Ｓ１、ラストベイダー、Ｊ３、キャンフ ィールド、 Ｒ，、ｒヒト柔毛膜性ゴナドトロピンβサブユニットの尿断片に対 する抗体の調製および特徴付け」、内分泌学（１９８８）１２３ ： ５８４− ９３；アカ−、Ａ、Ｈ，、ウィーマンナ、Ｒ，Ｅ、 、ブリス、Ｄ、Ｌ、 、ブ ラッカー、Ｃ１、ニスラ、Ｂ、Ｃ，、「ヒト柔毛膜性ゴナドトロピンβサブユニ ットのコア断片のラジオイムノアッセイ」、臨床内分泌代謝ジャーナル、（１９ ８８）６６ ： ５３８−４５ 、グツド、Ａｏ、ラモスーユリベ１Ｍ１、ライ アン、 Ｒ，Ｊ、 、ケンバース、Ｒ２Ｏ３、「血清、尿および胎盤抽出物中の ヒト柔毛膜性ゴナドトロピンの分子形態」、好性不妊性、（１９７７）２Ｂ：８ ４６−５０ 、オコナー、Ｊ９、シュラタラ−９Ｊ６、バーケン、Ｓ９、クリシ ェフスキー、Ａｏ、アームストロング、Ｅｏ、マツクマホン、Ｄ１、キャンフィ ールド、Ｒｏ、「尿中のｈＣＧ、そのβサブユニットおよびβコア断片を測定す る高感度免疫学的検定の発達：悪性度への応用」、癌Ｒｅｓ、（１９８８）４８ ：１３６１−６６）。Jo, Bikel, Ni0, Silver Velvet, S1, Last Vader, J3, Campf Field, R, , r for human chorionic gonadotropin β subunit urine fragment. "Preparation and characterization of antibodies for 93; Aka-, A.H., Weemanna, R.E., Bliss, D.L., B. Rucker, C1, Nisla, B, C, “Human chorionic gonadotropin β subunit. "Radioimmunoassay of the core fragments of the 88) 66: 538-45, Gutsudo, Ao, Ramosu Uribe 1M1, Rai Ann, R.J., Kenbers, R2O3, “In serum, urine and placental extracts. "Molecular form of human chorionic gonadotropin", Fertility, (1977) 2B:8 46-50, O'Connor, J9, Shlatala-9J6, Birken, S9, Krishi Evsky, Ao, Armstrong, Eo, Matsumahon, D1, Campy Old, Ro, “Measurement of hCG, its β subunit and β core fragment in urine” "Development of highly sensitive immunoassays: Application to malignancy", Cancer Res, (1988) 48 :1361-66).
免疫組織化学を用いて、異なる腫瘍部分の栄養化細胞組織中に９３％（７７／８ ３）でβコア断片が検出されている（カーダナ、Ａ６、ティラーＭ２、サウスオ ール、Ｐ１、ボクサー、Ｇ１、ロワン、Ａ１、バグレヤウ、に、、「尿ゴナドト ロピンペプチド単離および精製、並びに通常組織と腫瘍組織によるその免疫組織 化学分布ＪＢｒ ｌ 癌（１９８８）５８ ： ２８１−６）。Using immunohistochemistry, 93% (77/8 β-core fragments have been detected in 3) (Cardana, A6, Tiller M2, South Rule, P1, Boxer, G1, Rowan, A1, Bagleyau, ``Urine Gonadoto'' Lopin peptide isolation and purification and its immunohistochemistry with normal and tumor tissues. Chemical Distribution JBr Cancer (1988) 58: 281-6).
高水準のβコア断片が尿と組織試料中に報告されている一方、βコア断片のサイ ズの免疫反応性分子はほとんどまたは全く血清中に発見されていない（コールら 、癌Ｒｅ５１、 （１９８８） 、４８ ：１３５６−６０ ；ライ−マン、Ｒ ９、ブリス、Ｄ１、アカ−１Ｈ１、ニスラ、Ｂ、、ｒ妊娠尿と血清中のβコア水 準の間の不一致：尿βコアの起源の関係ｊ％臨床内分泌代謝ジャーナル、（１９ ９０）７０ ： ３７１−７８およびアルフサン、Ｈ０、ステフアン、Ｕ５、「 妊娠血清はヒト柔毛膜性ゴナドトロピンのβコア断片を含有する」、臨床内分泌 代謝ジャーナル、（１９９０）７０ ： ７８３−８７）。While high levels of beta-core fragments have been reported in urine and tissue samples, Few or no immunoreactive molecules have been found in serum (Cole et al. , Cancer Re51, (1988), 48:1356-60; Lyman, R. 9, Bliss, D1, Aka-1H1, Nisla, B,, r β-core water in pregnancy urine and serum Disagreements between associations: the relationship between the origins of the urinary β-core Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, (19 90) 70: 371-78 and Alfsan, H0, Stefan, U5, “ "Pregnancy serum contains the beta-core fragment of human chorionic gonadotropin", Clinical Endocrinology Metabolic Journal, (1990) 70: 783-87).
妊娠血清のβコア断片水準は、著しく低い、０．０２−０．３％のｈＣＧ水準で あると報告されている（ライ−マンら、前出；アルフサンら、前出）。このこと により、血清水準では尿中で発見される高水準の説明はできず、それゆえβコア 断片が、循環するｈＣＧまたはβサブユニットの腎臓での分解の結果となるとい う結論が導かれる。そのように、βコア断片は、循環するｈＣＧまたはそのβサ ブユニットの、腎臓による分解産生物か、細胞の分泌産生物かという論議があっ た。Beta core fragment levels in pregnancy serum are significantly lower, with hCG levels of 0.02-0.3%. It has been reported that there are (Reiman et al., supra; Alfsan et al., supra). this thing Therefore, serum levels cannot explain the high levels found in urine, and therefore β-core The fragments may result from renal degradation of circulating hCG or beta subunits. A conclusion is drawn. As such, the β-core fragment is isolated from circulating hCG or its β-core fragment. There is a debate as to whether the unit is a breakdown product of the kidneys or a secreted product of cells. Ta.
２つの最近の研究により、尿中のβコア断片の水準は妊娠の１２−１６週間で最 高となることが分かり、そのとき血清ｈＣＧおよびβサブユニットの水準が続い て減少する（コールら、モル エンドクロノール、１９８８；２：８２５−３０ および加藤、Ｙ１、ブラウンスタイン、Ｇ、Ｄ。Two recent studies have shown that urinary beta-core fragment levels peak between 12 and 16 weeks of pregnancy. serum hCG and β-subunit levels are found to be high. (Cole et al., Mol Endocronol, 1988; 2:825-30 and Kato, Y1, Brownstein, G.D.
、「βコア断片はヒト妊娠における免疫反応性尿柔毛膜性ゴナドトロピンの主な 形態である」、臨床内分泌代謝ジャーナル、（１９８８）６６：１１９７−１２ ０１）。このことは、これらの分子の水準間での不一致、および血清βサブユニ ット／ＨＣＧが尿β断片の供給源ではないことを示した。, “The β-core fragment is the main immunoreactive urinary chorionic gonadotropin in human pregnancy. ', Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, (1988) 66:1197-12 01). This reflects the discrepancy between the levels of these molecules and the serum β subunit. It was shown that HCG/HCG is not the source of urinary β fragments.
免疫細胞化学により、βコア断片が腫瘍部分に分類される栄養化細胞組織中に９ ３％（７７／８３）で検出されている（カーダナら、Ｂｒ、Ｊ、癌、１９８８． ５８ ： ２８１−６）。βコア断片の形態もまたＤｏＴおよびＣａ５ｋｉ頚部 癌細胞系統の培養中に検出された（ヒユーザ、Ｒ１０９、フェイン、 Ｉ（、Ｇ 、 、バチ口Ｒ，Ａ、 、ナゲルベルク、Ｓ、Ｂ、 、ロセン、Ｓ、Ｗ、、ウェ イントラウブ、Ｂ。Immunocytochemistry shows that β-core fragments are found in trophic cell tissues classified into tumor parts. 3% (77/83) (Cardana et al., Br, J. Cancer, 1988. 58:281-6). The morphology of the β core fragment is also found in DoT and Ca5ki cervix. Detected during culture of cancer cell lines (Hiuser, R109, Fein, I(, G , ,Bachiguchi R,A, ,Nagelberg, S.B., ,Rosen, S.W., ,W. Intraub, B.
Ｄ５、ラドンＲ，Ｗ、 、コール、Ｌ、Ａ、、ｒ頚部力ルチノーバ細胞により産 生されたヒト柔毛膜性ゴナビトロコンβサブユニツト状物質の特有形状」、癌Ｒ ｅｓ、（１９８６）４６ ： １９８４−５４）。さらに、高水準のβコア断片 が２４時間の栄養化細胞有機培養の流体中に示された（コールら、モル エンド クリノール、１９８８；２：８２５−３０）。D5, Radon R, W, Cole, L, A, , produced by cervical force Rutinova cells. “The unique shape of human chorionic gonavitrocon β subunit-like substance”, Cancer R es, (1986) 46: 1984-54). In addition, high levels of β-core fragments was shown in the fluid of a 24-hour vegetative cell organic culture (Cole et al. Clinol, 1988; 2:825-30).
研究により、ヒトに注入された尿βコア断片は非常に急速な代謝浄化速度を有す ることが示された（ライ−マン。Study shows that urinary beta core fragments injected into humans have a very rapid metabolic clearance rate It was shown that (Lyman)
Ｒ，Ｅ、 、ブリス、Ｄ、Ｌ、 、フラッフ、Ｍ、Ｒ，、ニスラ、Ｂ、 Ｃ，、 ｒ精製βコアの尿浄化および代謝浄化速度」、（１９８９）６９：５１０−１７ ）。しかしながら、これらの研究には２つの主な制限がある。第１に、それらの 研究では注入物質の８％しか回収していない。第２に、精製した尿βコア断片は すでに排出のために処理されている。R,E,,Bliss,D,L,,Fluff,M,R,,Nisla,B,C,, "Urinary purification and metabolic clearance rate of r-purified β-core", (1989) 69:510-17 ). However, these studies have two major limitations. First, those The study recovered only 8% of the injected material. Second, the purified urinary β core fragment Already processed for discharge.
より正確な浄化速度の評価は、血清βコア断片複合体の分娩後消失を測定するこ とにより得られ、このことは血清中に発見された主な形態を表す。A more accurate assessment of clearance rate is to measure the postpartum disappearance of serum β-core fragment complexes. This represents the main form found in serum.
１９８８年６月８日に出願された米国特許同時系属出願第０７／２０４，４４７ 号は、尿試料をｈＣＧ βサブユニットまたはβコア断片について検定すること により婦人癌の発病、進行および退行を検出する方法を記載している。U.S. Patent Concurrent Application No. 07/204,447 filed June 8, 1988 The issue is to assay urine samples for hCG β subunit or β core fragment. describes a method for detecting the onset, progression, and regression of female cancer.
頚部癌は女性を苦しめる最もよくあるの悪性腫瘍の１つである（Ｅ、 シルバー ベルブ、「癌統計学Ｊ、ＣＡ−Ａ癌Ｊ、クリニシャンズ、６．９−２６、（１９ ８６））。パブ（ババニコラウ）スミアは早期診断を導き、この病気に報告され た生存の全体の改善の主な原因である（ヤジマ。Cervical cancer is one of the most common malignant tumors afflicting women (E, Silver) Berb, “Cancer Statistics J, CA-A Cancer J, Clinicians, 6.9-26, (19 86)). Pav (Baba Nikolaou) smear leads to early diagnosis and is reported in this disease is primarily responsible for the overall improvement in survival (Yajima).
Ａ１、モリ、Ｔ９、サトウ、Ｓ３、ワキサカ、Ｔ２、およびスズキ、Ｍ、、ｒ頚 カルシノーマの検出における細胞学スクリーニングの効果Ｊ、オブステット シ ネコール、５つ、５６５−５６８ （１９８２））。しかしながら、パブスミア スクリーニングを経験できないまたは経験したくない患者は、症状（痛み、出血 および／またはうみの***）が進行するのを待つ場合には、不成功となる処理の 危険を冒すことになる。これはしばしば、頚部癌を進行させる最も高い危険のあ る疫学群の女性に関する状況である。例えば、ペルーの国立癌研究所は最近、毎 年見る１、１００人の新たな頚部癌患者の８０％がＩＩＩ段階またはＩＶ段階の 病気であることを報告している。定期的なパブスミアスクリーニングを受けない 患者にとって、生存は著しく低い（カスチラノ、Ｃ，、「Ｍａｎｅｊｏ Ｄｅｌ Ｐａｃｔｅｎｔｅ Ｃｏｎ Ｃｉｔｏｌｏｇｉａ ＡｎｏｒｍａｌＪ９会期、 ペルーにおける癌、リマ、（１９８５））。A1, Mori, T9, Sato, S3, Wakisaka, T2, and Suzuki, M,, r neck Effect of cytological screening in the detection of carcinoma J, Obsted Sys. Necor, 5, 565-568 (1982)). However, pub smear Patients who are unable or unwilling to undergo screening may and/or fecal excretion) to proceed, an unsuccessful treatment may occur. You will be taking risks. This is often the area with the highest risk of developing cervical cancer. This is the situation regarding women in the epidemiological group. For example, Peru's National Cancer Institute recently Of the 1,100 new cervical cancer cases each year, 80% are stage III or IV. Reporting to be sick. Not undergoing regular pub smear screening For patients, survival is extremely poor (Castilano, C., “Manejo Del. Pactente Con Citologia Anormal J9 session, Cancer in Peru, Lima, (1985)).
頚部癌のスクリーニング技術としてのパブスミアはまた不正確であり得る。バブ スミアの誤った反対の評価は１２゜５％から４５％までおおいに変化する（Ｃ， カステラーノ、前出；ジョーダン、Ｓ、 Ｗ、 、スミス Ｎ、 Ｌ、 、およ びダイク、Ｌ、Ｓ、、ｒ頚部細胞学形成異常」、アクタ シトール、２５．２３ ７−２４４、 （１９８１））。Pub smear as a screening technique for cervical cancer can also be inaccurate. bub Smear false negative ratings vary widely from 12°5% to 45% (C, Castellano, supra; Jordan, S., W., Smith N., L., and Bidyk, L.S., Cervical Cytology Dysplasia, Acta Sitol, 25.23 7-244, (1981)).
米国の女性の中では、卵巣は女性の癌の２番目にありふれた部位である（Ｅ、シ ルバーベルブ、前出）。上皮卵巣癌は早期の警告症状がなく、バブスミアのよう な早期検出の定期的な試験がない。卵巣癌は通常、骨盤塊が存在するまで疑われ ず、進行段階まで検出されない場合には、はとんどいつも致命的である（シュワ ルツ、Ｐ、Ｅ、 、ｒ女性の癌Ｊ、Ｊ、Ａ、 スビトル、Ｊｒ−１臨床医学、頁 １−４４、フィラデルフィア：ハーパーおよびロー、（１９８５））。Among women in the United States, the ovary is the second most common site of cancer in women (E, rhubarb, supra). Epithelial ovarian cancer has no early warning symptoms and looks like a Babs smear. There are no regular tests for early detection. Ovarian cancer is usually not suspected until a pelvic mass is present. is almost always fatal if not detected until an advanced stage (Schwarzenegger). Ruth, P. E., r Women's Cancer J. J. A. Subitl, Jr., Clinical Medicine, p. 1-44, Philadelphia: Harper and Row, (1985)).
女性の悪性腫瘍、特に頚部癌と卵巣癌を宵するという多大な危険にある女性の検 出を助ける、容易に受けられる血液検査は、進行段階の病気がほとんどいつも致 命的である患者にとって将来主要な手段となる。そのような検査により骨盤試験 とバブスミアの必要がなくなる。さらに、血液検査は骨盤試験とバブスミアに要 求したような熟練した医師を必要としない。Screening of women at great risk of developing malignant tumors, especially cervical and ovarian cancer. Easily available blood tests that can help diagnose the disease in its advanced stages are almost always treatable. It will become the main tool in the future for life-threatening patients. Pelvic exam with such tests This eliminates the need for Babsmear. In addition, blood tests are required for a pelvic exam and Babs smear. You don't need a skilled doctor like you asked for.
再発する婦人癌を有する患者を処理する効能は、再発が文書で証明された時間で の再発した病気の部位の癌の容量に反映される。患者が臨床の徴候または症状を 有するまで再発の病気が認識されない場合、療法はわずかじか価値がない。持続 性の癌または再発性の癌の早期発見はより効果的な療法介在を導（。Efficacy in treating patients with recurrent gynecological cancers is limited by the time recurrence is documented. The recurrence of disease is reflected in the cancerous capacity of the site. If the patient has clinical signs or symptoms If recurrent disease is not recognized until the disease is present, therapy is of little value. duration Early detection of sexual or recurrent cancer can lead to more effective therapeutic interventions.
徹底的な手術の形態の手術の介在は、頚部癌の主要な再発の患者を治療する。放 射線分野の継続性または再発性の主要な病気の診断は、細胞学または生検技術に より確認することが困難である。頚部癌の正確な腫瘍マーカーは、いっそうの早 期発見およびより急速な診断と処置を導く。Surgical intervention in the form of radical surgery treats patients with major recurrences of cervical cancer. release Diagnosis of persistent or recurrent major diseases in the radiological field is based on cytological or biopsy techniques. It is more difficult to confirm. Accurate tumor markers for cervical cancer are needed even earlier. leading to period detection and more rapid diagnosis and treatment.
以前の経験により、扁平上皮癌抗原（ＳＣＣ）に関してではなく、この点では脂 質関連シアル酸（ＬＡＳＡ）の役−割が示唆された（シュワルツ、Ｐ、Ｅ、、フ ォーメル、Ｒ８５２、チャンパース、Ｓ、に、 、およびチャンパース、Ｊ。Due to previous experience, we are not concerned with squamous cell carcinoma antigen (SCC), but with regard to lipids in this regard. A role for quality-related sialic acid (LASA) has been suggested (Schwartz, P.E., F. Ormel, R852, Champers, S., and Champers, J.
Ｔｏ、「頚部癌を有する患者をモニタリングの脂質関連シアル酸（ＬＳＡ）と扁 平上皮癌抗原（ＳＣＣ）の評価」、Ｐｒｏｃ、Ａｍ、Ｓｏｃ、ＣＩ ｉｎ、０ｎ ｃｏ１．．６．１１３、（１９８７））。To, “Monitoring lipid-related sialic acids (LSA) and cancer in patients with cervical cancer.” "Evaluation of squamous cell carcinoma antigen (SCC)", Proc, Am, Soc, CI in, On co1. ．． 6.113, (1987)).
再発性または持続性子宮内膜癌の早期発見により、可能性のあるより効果的な組 合せの化学療法でのより急速な処置が導かれる（セスキ、Ｊ、 Ｃ，、カスバー 、 Ｇ、Ｌ、、およびクンシュカー、Ａ、Ｊ、、ｒ診断および処置戦略における 子宮膜内癌の化学療法Ｊ （Ｆ、 Ｎ、ラドレッジ、Ｒ９Ｓ、フリートマン、お よびり、 Ｍ、ガーシエンソン、出版）、テキサス大学出版、オースチン、頁３ ２７−３３４ （１９８７））。Early detection of recurrent or persistent endometrial cancer can lead to potentially more effective treatment options. Leading to more rapid treatment with combination chemotherapy (Seski, J. C., Kasbar , G.L., and Kunschker, A.J., r in diagnosis and treatment strategies. Chemotherapy for intrauterine cancer J (F, N, Rudledge, R9S, Friedman, O M. Gersienson, Publisher), University of Texas Press, Austin, p. 3 27-334 (1987)).
多重循環マーカーが上皮卵巣癌患者の取扱いにおいて評価されており、その最も 有望なマーカーはＣＡ１２５である（ラスト、Ｒ，Ｃ，、クン、Ｖ、Ｒ，、セン トジョーン。Multiple circulating markers have been evaluated in the treatment of patients with epithelial ovarian cancer, and the most A promising marker is CA125 (Last, R, C, Kun, V, R,, Sen. Tojon.
Ｅｌ、ジエニソン、Ｅ１、二ロフ、Ｊ、Ｍ、 、ラザラス。El, Jennison, E1, Nirof, J.M., Lazarus.
Ｈｌ、バーコウィッツ、Ｒ１、リービット、Ｔ１、グリフイス、Ｔ６、バーカー 、Ｌｌ、ズライスキー、Ｖ、 Ｒ，、およびナツプ、 Ｒ，Ｃ，、ｒ単りローン 性抗体を用いて上皮卵巣癌の経過を監視するラジオイムノアッセイ」、Ｎ。Hl, Berkowitz, R1, Leavitt, T1, Griffiths, T6, Barker. , Ll, Zuraisky, V, R, and Nap, R, C,, r single loan "Radioimmunoassay to monitor the course of epithelial ovarian cancer using sexual antibodies", N.
Ｅｎｇｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、 、３０９．８８３−８８７ （１９８３））。Engl, J. Med, 309.883-887 (1983)).
非粘液性卵巣癌を存する。患者の８０％はどは、その血清中に上昇した水準のＣ Ａ１２５を有し、そのことにより処理に対応した癌として検出不可能となる。不 幸なことに、卵巣癌の取扱いにＣＡ１２５を用いた最近報告された臨床実験にお いて、臨床的に病気ではなく、通常の範囲にあるＣＡ１２５水準を有した患者１ １人中６人（５５９６）が、第２ルツク（ｓｅｃｏｎｄ−１ｏｏｋ）の検査で持 続性癌を有することが分かった（アタック、 Ｄ、Ｂ、 、ニスカー。She has non-mucinous ovarian cancer. 80% of patients have elevated levels of C in their serum. A125, which makes it undetectable as a treatment-compatible cancer. No Fortunately, recently reported clinical experiments using CA125 to treat ovarian cancer patient 1 who was not clinically ill and had a CA125 level in the normal range. 6 out of 1 (5596) people passed the test in the second-1st look. It was discovered that he had persistent cancer (Attack, D, B, Nisker).
Ｊ、Ａ、 、アレン、 Ｈ，Ｈ，、タスタノフ、Ｅ、 Ｒ，、およびレビン、Ｌ 、、ｒ卵巣カルシノーマにおけるＣＡ１２５監視および第２ルツク開腹ＪＡｍ、 Ｊ、オブステット。J.A., Allen, H.H., Tastanov, E.R., and Levin, L. , CA125 monitoring and second laparotomy in ovarian carcinoma JAm, J, Ofstedt.
シネコール、、１５４．２８７−２８９ （１９８６））。Cinecol, 154.287-289 (1986)).
同様に、二−ルーニューハブン病院において、第２ルツク外科処置で発表された ＣＡ １２５ （３’ｙＵ／ｍ Ｉカットオフ）の偽陰性比は４０％である（シ ュワルツ、Ｐ、Ｅ、、チャンパース、Ｓ、に、 、チャンパース、Ｊ、Ｔ、 、 ガツトマン、Ｊｌ、カトボジス、Ｎ１、およびフォーメル、Ｒ１５３、「婦人科 悪性腫瘍の監視における循環腫瘍マーカー」、癌、６０．３５３−３６１ （１ ９８７））。別の初期の臨床実験により、卵巣癌患者の減少するＣＡ１２５水準 は必ずしも退化する病気を示すものではないことが分かった（アルバレツ、Ｒ， Ｄ、 、）、Ａ、 、ブーツ、Ｌ、Ｒ，、シンブレトン、Ｈ，Ｍ、 、ハツチ、 に、Ｄ、 、ハバード。Similarly, at the New Haven Hospital, the second Lutsk surgical procedure was presented. The false negative rate of CA 125 (3'yU/m I cutoff) is 40% (series Kwaltz, P.E., Champers, S., Ni, Champers, J.T. Guttmann, Jl, Katbozis, N1, and Vomel, R153, “Gynecology. "Circulating tumor markers in the surveillance of malignant tumors", Cancer, 60.353-361 (1 987)). Another early clinical experiment shows decreased CA125 levels in ovarian cancer patients It turns out that this does not necessarily indicate a degenerative disease (Alvarez, R. D, ,), A, , Boots, L, R,, Shinbreton, H, M, , Hatsuchi, In, D., Hubbard.
Ｊｏ、スーン、Ｓ、Ｊ、およびボッター、 Ｍ、Ｅ、 、ｒ卵巣悪性腫瘍１こお ける乏しい予後の血清マーカーとしてのＣＡ１２５Ｊ、婦人科＠瘍学、２６．２ ８４−３０９ （１９８７））。Jo, Soon, S. J., and Botter, M. E., 1 ovarian malignant tumor. CA125J as a serum marker of poor prognosis, Gynecology@Oncology, 26.2 84-309 (1987)).
一度卵巣癌の診断が下されると、現在利用できる臨床マーカーは、並列（ｐａｒ ａｌｌｅｌ）臨床試験の発見となる傾向にあり、臨床的に病気のない患者におけ る処理の効能を保証することもなく、第２ルツク操作の使用を避けるほど十分に 敏感でもない。Once a diagnosis of ovarian cancer is made, currently available clinical markers are allel) clinical trial findings, in clinically disease-free patients. without guaranteeing the efficacy of the treatment and sufficiently sufficient to avoid the use of second-look operations. Not sensitive either.
ヒト柔毛膜性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）は、以下の２つの異なるサブユニット： 非共有結合した、アルファ９２アミノ酸長さくｌｏｎｇ）、ベータ１４５アミノ 酸長さからなる糖タンパク質ホルモンである。ｈＣＧは通常栄養化細胞により産 生され、妊娠または栄養化細胞病の女性の血液および尿中で検出される。産生き れた全量の９０９６の割合を占めるｈＣＧアルファおよびベータサブユニットの 遊離形態がまた、妊娠と栄養化細胞病の血液と尿中で発見される（コール、Ｌ、 Ａ、 、クロール、 Ｔ、 Ｇ、 、ラドン、Ｒ９Ｗ１、およびバッサ、 Ｒ， ０，、ｒ妊娠血清中のヒト柔毛膜性ゴナドトロピンのｉｌＭＢとｉ１＃Ａサブユ ニットの差異発生ｊ、臨床内分泌代謝ジャーナル、５８．１２００−１２０２ （１９８４））；コール、Ｌ、Ａ、 、ｒ糖タンパク質ホルモンの微変異性にお ける、糖タンパク質ホルモン遊離サブユニットの発生と特性」 （Ｈ，グロジャ ンおよびＢ。Human chorionic gonadotropin (hCG) is composed of two different subunits: Non-covalently linked, alpha 92 amino acids long), beta 145 amino acids It is a glycoprotein hormone consisting of acidic lengths. hCG is normally produced by trophic cells. It is detected in the blood and urine of women who are pregnant or have trophic cell disease. birth life hCG alpha and beta subunits accounted for 9096 of the total amount Free forms are also found in the blood and urine of pregnancy and trophic cell diseases (Cole, L. A, , Kroll, T, G, , Radon, R9W1, and Bassa, R, ilMB and i1#A subunits of human chorionic gonadotropin in pregnancy serum Differential occurrence of knits, Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 58.1200-1202 (1984)); Cole, L.A., r on the microvariability of glycoprotein hormones. ``Generation and properties of glycoprotein hormone free subunits'' (H, Groja) N and B.
キール、）ＣＲＣブレス、ニューヨーク：コール、Ｌ、Ａ。Kiel,) CRC Brace, New York: Cole, L.A.
−ハードル、 Ｒ，Ｊｌ、ラフエラ、Ｊ、Ｊ、 、およびラドン、Ｒ，Ｗ、、ｒ 通常および悪性腫瘍栄養化細胞の培養、妊娠血清、および絨毛癌患者の血清中の ヒト柔毛膜性ゴナドトロピンの遊離ベータサブユニットの検出」、内分泌学、１ １３．１１７６−１１７８ （１９８３））。-Hurdle, R, Jl, Lahuela, J, J, and Radon, R, W,, r in cultures of normal and malignant trophic cells, pregnancy serum, and serum of choriocarcinoma patients. “Detection of the free beta subunit of human chorionic gonadotropin”, Endocrinology, 1 13.1176-1178 (1983)).
数多くの研究者が、ヒト柔毛膜性ゴナドトロピンは癌の女性に約２０％の普及率 で存在することを示している。癌に陽性を示す低い百分率のために、ヒト柔毛膜 性ゴナドトロピンは婦人科癌のマーカーとして用いられていない。Numerous researchers have found that human chorionic gonadotropin has a prevalence of about 20% in women with cancer. shows that it exists. Due to the low percentage testing positive for cancer, human chorion Sex gonadotropins have not been used as markers for gynecological cancer.
遊離ベータサブユニット、アシアロ遊離ベータおよびアジアロベータサブユニッ トのコア断片はともにｒＵＧＦＪと呼ばれ、循環から著しく清浄され、血清試料 よりも尿中でより容易に検出される（シュレーダー、Ｈ，Ｒ，、およびハルター 、Ｃ，Ｍ、 、ｒ通常の妊娠中における尿中に存在する免疫反応性断片の、およ びホルモンのヒトベータ絨毛ゴナドトロピン検定の特異性」、臨床化学、２９． ６６７−６７１ （１９８３））；レフオートＧ、Ｐ、 、ストーク、Ｊ、Ｍ、 、およびニスラ、Ｂ、Ｃ，、ｒラット中のヒト絨毛ゴナドトロピンの腎臓代謝 」、内分泌学、１１９．９２４−９３１ （１９８６））；ライ−マン、Ｒ，Ｅ 、、およびニスラ、Ｂ、Ｃ，、ｒヒトのヒト柔毛膜性ゴナドトロピンのサブユニ ットの代謝浄化比率」、臨床ない分泌代謝ジャーナル、４８．７５３−７５９ （１９７９））。free beta subunit, asialo free beta and asialo beta subunit Both core fragments, called rUGFJ, are significantly cleared from the circulation and are found in serum samples. (Schroeder, H.R., & Halter). , C, M, , r of immunoreactive fragments present in urine during normal pregnancy. "Specificity of the Human Beta Chorionic Gonadotropin Assay for the Hormone", Clinical Chemistry, 29. 667-671 (1983)); Lefauto G, P., Stork, J. M. , and Nisula, B, C, , r Renal metabolism of human chorionic gonadotropin in rats. ”, Endocrinology, 119.924-931 (1986)); Lyman, R.E. , , and Nissla, B.C., ,r subunits of human chorionic gonadotropin. "Metabolic purification ratio of the human body", Journal of Clinical Secretion and Metabolism, 48.753-759 (1979)).
異所性ｈＣＧは、非栄養化細胞癌、とりわけ婦人科悪性腫瘍を存する患者−の血 液と組織中に検出される（Ｒ，Ｏ。Ectopic hCG is present in the blood of patients with non-trophic cell carcinomas, especially gynecological malignancies. Detected in fluids and tissues (R,O.
バッサ、「ヒト柔毛膜性ゴナドトロピン、臨床マーカー：その生合成の調査」、 リガンド調査、３．１−４３、（１９８１） ）。Bassa, “Human chorionic gonadotropin, clinical marker: investigation of its biosynthesis”, Ligand Research, 3.1-43, (1981)).
３８の別々の研究（ｎ−６９２）の最近の編集物において、頚部癌の女性の３６ ％、子宮内膜癌の女性の２７％、および外陰部癌の女性の１３％が、ラジオイム ノアッセイで検出可能な水準のｈＣＧを有することが分かった。しかしながら、 検出可能な水準の低い百分率と関連する低い滴定量により、婦人科癌の治療の検 出および追従におけるｈＣＧの使用が制限されている。ハイブリチック（）ｌｙ ｂｒｉｔｅｃｈ）ｒタンデムＪ ｈＣＧ特異免疫ラジオメトリック測定法（＜０ ． １％ｈＬＤおよび遊離ユニット交差反応性（ｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｖｉｔ ｙ））を用いた婦人科癌を有する女性の研究において、６４のうち１１のみ（１ ７％）がｈＣＧの検出可能な血清水準（＞０．２ｎｇ／ｍ１、＞２．０ｍ１Ｕ／ ｍｌと等ｊｌ）を有することが分かった（ワン、Ｙｌ、シュワルツ、Ｐ、Ｅ、 、コール、Ｌ、 Ａ。In a recent compilation of 38 separate studies (n-692), 36 %, 27% of women with endometrial cancer, and 13% of women with vulvar cancer It was found to have detectable levels of hCG in the assay. however, The low titer associated with the low percentage of detectable levels makes it difficult to test gynecological cancer treatments. The use of hCG in output and follow-up is limited. hybridic()ly britech) r Tandem J hCG-specific immunoradiometric assay (<0 ．． 1% hLD and free unit crossreactivity In a study of women with gynecological cancer using 7%) with detectable serum levels of hCG (>0.2 ng/ml, >2.0 ml U/ ml and jl) (Wang, Yl, Schwartz, P, E, , Cole, L., A.
、「非栄養化細胞癌を有する患者の血清ｈＣＧ探求」、Ｊ。, “Serum hCG exploration in patients with non-trophic cell carcinoma”, J.
オブステット シネコール、中国、出版）。平均水準はちょうど０． ３０ ｎ ｇ／ｍ ｌ （３ｍ Ｉ Ｕ／ｍ ｌと等ｊ１）であることが分かった。上昇 したｈＣＧ水準を有する１４人の癌患者からの一連の血清試料を試験した。水準 は最初に測定し、次いで治療を行なった。奇妙なことに、進行性の癌と増大する 腫瘍の塊を有する女性１０人のうち８人において、ｈＣＧ水準が下がった（ワン ら、前出）。さらに、後退した病気と減少した腫瘍の塊を有する４人のうち４人 において、ｈＣＧ水準が上昇した。明らかに、血清ｈＣＧは、婦人科癌を有する 患者のスクリーニングと取扱いにおいて限られた値を有するものである。Ofsted Cinecor, China, Publishing). The average level is exactly 0. 30n g/ml (equivalent to 3 m I U/ml). rise A series of serum samples from 14 cancer patients with hCG levels were tested. level was first measured and then treated. Strangely enough, the cancer is progressive and growing. hCG levels decreased in 8 out of 10 women with tumor masses (one et al., supra). Additionally, 4 out of 4 people with regressed disease and reduced tumor mass hCG levels were elevated. Apparently, serum hCG has gynecological cancer It has limited value in patient screening and handling.
ｈＣＧ遊離ベータサブユニットとコア断片、Ｕ Ｇ Ｆ ７＞＜、非栄養化細胞 癌を有する患者においても検出された（パパベトロウ、Ｐ、Ｄ、 、およびニコ ポーロウ、Ｓ、Ｃ１、ｒ癌患者の尿中のヒト柔毛膜生ゴナドトロピンベータサブ ユニットコア断片の起源」、内分易学、１１２．４１５−４２２ （１９８６） ）；ワイッケイチス、Ｊ、Ｌ、、ｒ通常のブラセンタにより、およびｈＣＧ分泌 ネオブラスムにより産生きれた小分子サイズの尿免疫反応性ヒト柔毛膜生ゴナド トロピン（ｈＣＧ）状物質の特性」、臨床内分泌代謝ジャーナル、５３．１０１ ４−２０ （１９８１））。hCG free beta subunit and core fragment, UGF7><, non-trophic cells It was also detected in patients with cancer (Papabetlou, P., D., and Niko et al. Polow, S, C1, rHuman chorionic gonadotropin beta sub in the urine of cancer patients. "Origin of Unit Core Fragments", Naibunikigaku, 112.415-422 (1986) ); Wykkaitis, J.L., r by normal blastenta and hCG secretion. Small urinary immunoreactive human chorionic gonado produced by Neoblasm "Characteristics of Tropine (hCG)-like Substances", Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 53.101 4-20 (1981)).
尿中にＵＧＦを有する患者において、ＵＧＦは癌組織そのものが起こるという事 実は、腫瘍組織ホモゲネート５つのうち５つにおいて、著しい水準（平均１．０ ｎｇ／ｍｇタンパク質）の発見により確立されている。患者の尿中のＵＧＦの予 備的な研究において（コール、Ｌ、Ａ、 、’）＞。In patients with UGF in the urine, UGF is produced by the cancer tissue itself. In fact, five out of five tumor tissue homogenates showed a remarkable level (average of 1.0 ng/mg protein). Prediction of UGF in patient's urine In preliminary research (Cole, L.A., ')>.
Ｙｏ、エリオツド、Ｍｌ、ラチフ１Ｍ８、チャンパース。Yo, Eliots, Ml, Latif 1M8, Champers.
Ｊ、Ｔ、 、チャンパース、Ｓ、に、 、およびシュワルツ。J., T., Champers, S., and Schwartz.
Ｐ、Ｅ、 、ｒ尿ヒト柔毛膜性ゴナドトロピン遊離ベータサブユニットおよびベ ータコア断片：婦人科癌の新たなマーカー」、癌調査書、４８．１３５６−１３ ６０、（１９８８））、水準は５０人の健康な女性および活性婦人科癌を有する ６８人の女性からのスポット試料で測定した。上昇した水準（＞０．２ｎｇ／ｍ ｌベータサブユニット、または等モルのベータコア断片）が対照の３つと癌試料 の５０において検出された。尿濃度の調整（クレアチニン水準）は行なわなかっ たが、婦人科癌のＵＧＦの９４％の特異性および７４％の感度が示唆された。こ れらの予備的な発見により、婦人科癌はｈＣＧよりもａｌｌサブユニットまたは ベータコア断片をより普通に産生ずること、および腫瘍マーカーとしてのＵＧＦ の使用がさらなる探求を保証することが示された。P, E, urinary human chorionic gonadotropin free beta subunit and vector "Tacore Fragment: A New Marker for Gynecological Cancer", Cancer Research Report, 48.1356-13 60, (1988)), the standard was 50 healthy women and those with active gynecological cancer. Measurements were made on spot samples from 68 women. Elevated levels (>0.2ng/m l beta subunit, or equimolar beta core fragments) in three control and cancer samples. It was detected in 50 of the cases. No adjustment of urine concentration (creatinine level) However, a specificity of 94% and sensitivity of 74% for UGF for gynecological cancer was suggested. child These preliminary findings suggest that gynecological cancers are more susceptible to all subunit or hCG than hCG. More common production of beta-core fragments and UGF as a tumor marker It was shown that the use of
定義 ｈＣＧ −ヒト柔毛膜性ゴナドトロピン腫瘍マーカー −特定の腫瘍を特異的に 認識する分子ｒｓＧＰｃＪまたはｒＳＧＰ複合体」または「血清ゴナドトロピン ペプチド複合体」 −１つまたは２つの分子の複合体、主にβコア断片（ｈＣＧ の完全βサブユニットから作られないｈＣＧのプレβサブユニットの分子向後翻 訳工程産生物）、または担体タンパク質を有する単量体βコア断片（β断片と同 一の起源）；分子は癌細胞ラインの分類における培養液体に異なる量で存在する ：担体タンパク質は、従来の方法により検出できないようにこれら２つの分子の エピトープをマスクする、すなわち分子は、現在存在する（１）ｈＣＧ、（２） ｈＣＧベータサブユニット（また「ベータサブユニット」と呼ばれる）、（３） ｈＣＧベータサブユニットコア断片（また「ベータコア断片」と呼ばれる）また は（４）ｈＣＧベータサブユニットＣ末端ペプチドまたは他のｈＣＧ抗原であり 、現在の免疫学的検定により検出できない：これらの２つの分子の物理的特性（ 解離した分子に基づいた物理的特性のような）により、βコア断片がｈＣＧベー タサブユニット残基５５から９２に連結され、ｈＣＧまたはそのベータサブユニ ットと比較して区域的に異なるオリゴ糖構造を有するｈＣＧベータサブユニット 残基６−４０のジスルフィドに類似することが示された；単量体βコア断片は１ から９２までまたは６から９２までのベータサブユニット残基と類似またはおそ らくはそれを示すもののようであるか、ｈＣＧまたはそのβサブユニットと比較 して異なるオリゴ糖類構造を有する単量体である；血清に存在するような複合体 は約７０，０００ダルトンまたはｈＣＧよりやや大きい分子サイズを有する。definition hCG - human chorionic gonadotropin tumor marker - specific for specific tumors molecules that recognize rsGPcJ or rSGP complex" or "serum gonadotropin ``Peptide complexes'' - complexes of one or two molecules, mainly β-core fragments (hCG The molecular orientation of the pre-β subunit of hCG, which is not made from the complete β-subunit of monomeric β-core fragment with carrier protein (same as β-fragment) (origin of one); molecules are present in different amounts in the culture fluid in classification of cancer cell lines :The carrier protein binds these two molecules together so that they cannot be detected by conventional methods. Masking the epitope, i.e. molecules currently present (1) hCG, (2) hCG beta subunit (also called "beta subunit"), (3) hCG beta subunit core fragment (also called "beta core fragment") or (4) is an hCG beta subunit C-terminal peptide or other hCG antigen; , cannot be detected by current immunoassays: the physical properties of these two molecules ( (such as physical properties based on dissociated molecules), the β-core fragment is hCG-based. hCG or its beta subunit residues 55 to 92. The hCG beta subunit has a regionally different oligosaccharide structure compared to the hCG beta subunit. Residues 6-40 were shown to resemble disulfides; the monomeric β core fragment to 92 or 6 to 92 beta subunit residues similar or likely. Comparison with hCG or its β subunit monomers with different oligosaccharide structures; complexes such as those present in serum has a molecular size of approximately 70,000 Daltons or slightly larger than hCG.
ｒＳＧＰＪまたは「血清ゴナドトロピンペプチド」 −担体タンパク質（以前に 「分子」として記載した）を含まない５ＧＰＣの部分からなる分子；分析をめら れる５ＧＰＣの非マスク部分、ＳＰＧを構成する２つのペプチドがあると考えら れる、すなわち、（１）βコア断片、ヒト柔毛膜性ゴナドトロピンベータサブユ ニットの１か９１４５のアミノ酸配列のうち５５から９２のアミノ酸のペプチド にジスルフィド橋により結合した６から４０のアミノ酸のペプチドおよび（２） 単量体βコア断片、ヒト柔毛膜性ゴナドトロピンベータサブユニットの１から１ ４５のアミノ酸配列のうち６から９２または１から９２のアミノ酸であり、それ ぞれがｈＣＧまたはそのβサブユニットに異なって付けられたオリゴ糖を有する 。rSGPJ or "serum gonadotropin peptide" - carrier protein (previously A molecule consisting of the 5GPC part that does not contain any It is thought that there are two peptides that make up the unmasked portion of 5GPC, SPG. (1) β core fragment, human chorionic gonadotropin beta subunit; Peptides of amino acids 55 to 92 of the 1 or 9145 amino acid sequence of Nit a peptide of 6 to 40 amino acids linked by a disulfide bridge to and (2) Monomeric beta core fragment, human chorionic gonadotropin beta subunit 1 to 1 6 to 92 or 1 to 92 amino acids out of the 45 amino acid sequence; Each has oligosaccharides differently attached to hCG or its β subunit .
ｒＵＧＦＪ −遊離ベータサブユニット、アシアロ遊離ベータおよびアシアロベ ータサブユニットのコア断片をともにＵＧＦと称する。rUGFJ - free beta subunit, asialo free beta and asialobe The core fragments of the data subunits are collectively referred to as UGF.
発明の概要 本発明の目的は、血液またはその液体を分析することにより癌、例えば栄養化細 胞癌、の経過を検出して追従する方法を提供することにある。Summary of the invention The purpose of the present invention is to diagnose cancer, e.g. nutritional deficiencies, by analyzing blood or its fluids. The purpose of the present invention is to provide a method for detecting and following the progress of cell carcinoma.
さらに本発明の目的は、血液またはその液体を分析することにより妊娠または栄 養化細胞病の経過を検出して追従する方法を提供することにある。Furthermore, it is an object of the present invention to detect pregnancy or pregnancy by analyzing blood or its fluids. The object of the present invention is to provide a method for detecting and following the progress of trophic cell disease.
さらに本発明の別な目的は、血清ゴナドトロピンペプチド複合体を分解して、血 清ゴナドトロピンペプチド中でその１つ以上のエピトープを露出することにある 。Yet another object of the present invention is to degrade serum gonadotropin peptide complexes to consists in exposing one or more of its epitopes in a clear gonadotropin peptide .
これらの目的並びに別の目的および長所は本発明により請たされる。These objects and other objects and advantages are achieved by the present invention.
出願者は、ここに「血清ゴナドトロピンペプチド複合体」と呼ばれているものの ともに一部である規則的および単量体ベータコア断片は実際に血液／血清／血漿 中に高水準で存在するが、より相当大きく同族ではない分子に堅く結合しており 、そのためにそれらの断片はｈＣＧ％ｈＣＧβサブユニットおよびβコア断片試 験による全ての認識を不正確にしていることを発見した。出願者はこの複合体を 分解して露出し、それゆえこの重要な分子を定量すること方法を発見した。Applicant has disclosed that what is herein referred to as a "serum gonadotropin peptide complex" Regular and monomeric beta core fragments that are both part of blood/serum/plasma present at high levels in the , so those fragments are hCG%hCGβ subunit and β core fragment samples. It was discovered that all recognition by experiment was inaccurate. The applicant has this complex We have discovered a way to degrade, expose, and therefore quantify this important molecule.
本発明は、血清ゴナドトロピンペプチド複合体または血清ゴナドトロピンペプチ ド複合体の成分の存在について全血または全血の液体を分析することからなる、 癌、例えば非栄養化細胞癌の経過を検出して追従する方法に関し、ここで、血清 ゴナドトロピンペプチド複合体またはその成分は、癌、例えば血液または全血の 液体を得た患者の非栄養化細胞癌、妊娠または栄養化細胞病の存在を示すもので ある。The present invention provides serum gonadotropin peptide complexes or serum gonadotropin peptide complexes. consists of analyzing whole blood or whole blood fluid for the presence of components of the complex, Regarding a method for detecting and following the course of cancer, e.g. The gonadotropin peptide complex or its components can be used to treat cancer, e.g. blood or whole blood. Fluid in patients with non-trophic cell carcinoma, indicating the presence of pregnancy or trophic cell disease be.
本発明はまた、血清ゴナドトロピンペプチド複合体または同一の複合体を含有す る液体を解離剤と接触せしめること、または６０℃より高い温度での加熱による 解離からなる、血清ゴナドトロピンペプチド複合体を分解して１つ以上のそのエ ピトープを露出する方法に関するものである。The present invention also provides serum gonadotropin peptide complexes or other compounds containing the same complexes. by contacting the liquid with a dissociating agent or by heating at a temperature higher than 60°C. dissociation of the serum gonadotropin peptide complex and one or more of its peptides. It concerns a method of exposing the pitope.
さらに詳しくは、本発明のこの面は、血液、血清または血漿を解離剤、すなわち 、洗浄剤、カオトロピック剤、２から３のｐＨを有する酸または有機酸と接触さ せること、または血液、血漿または血清を所定の温度より高く加熱して分離を行 ない、解離剤を除去するまたは血清ゴナドトロピンペプチド複合体またはその成 分を識別することに関する。More particularly, this aspect of the invention provides for treating blood, serum or plasma with a dissociating agent, i.e. , cleaning agents, chaotropic agents, acids with a pH of 2 to 3 or organic acids. separation by heating the blood, plasma, or serum above a specified temperature. Do not remove dissociating agents or remove serum gonadotropin peptide complexes or their constituents. Concerning identifying the minutes.
本発明はさらに、血液またはその液体、例えば血漿または血清中に血清ゴナドト ロピンペプチド複合体を含まない血清ゴナドトロピンペプチドからなる組成物に 関するものである。The invention further provides that serum gonadotrophs are present in blood or its fluids, such as plasma or serum. A composition consisting of serum gonadotropin peptides that does not contain ropine peptide complexes. It is related to
本発明はさらに、含有βコア断片の少なくとも実質的な部分を免疫学的にマスク する高分子量担体分子と関連して、規則的なβコア断片および単量体β断片から なる群より洗濯される少なくとも１つのβ断片からなる実質的に純粋な（または 精製）血清ゴナドトロピンペプチド複合体に関するものであり、その複合体はざ らに： （ａ） ゲル濾過により測定された約７０，０００の分子量、および （ｂ） ３Ｍアンモニウムチオイソシアネートでの処理により約１５，０００ダ ルトンの分子量を有する少なくとも１つのβコア断片を放出する解離 により特徴付けられる。The present invention further provides for immunologically masking at least a substantial portion of the beta core fragment contained. from regular β-core fragments and monomeric β-fragments in association with high molecular weight carrier molecules that substantially pure (or purification) concerning the serum gonadotropin peptide complex, and the complex is More: (a) molecular weight of approximately 70,000 as determined by gel filtration, and (b) Approximately 15,000 Da by treatment with 3M ammonium thioisocyanate Dissociation releasing at least one β-core fragment having a molecular weight of Luton Characterized by
図面の簡単な説明 図ＩＡからＩＥは、血清のゲル濾過の結果を示すグラフである。図ＩＦからＩＪ は、血清分画のゲル濾過を示すグラフである（本発明の実施例による）。ｌ１Ｕ ＩＡからＩＪにおいて、結果は、免疫学的検定によりｈＣＧ （・・・・・・） 二遊離βサブユニット断片（−−−−−−）およびβ断片（）について試験した 分画を描いたものである。Ｉｉ！ＪＩＡ、ＩＢ、ＩＣおよびＩＤは、それぞれ初 期、中間および出産予定日の妊娠、並びに絨毛癌血清の結果を描いたものである 。図ＩＦからＩＩは、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤとマークされたプールの反復クロマト グラフィーである（アンモニウムチオシアネート、ＮＨ，ＳＣＮによる解離後） 。図ＩＥは未処理の妊娠血清の結果を描き、図１ＪはＮＨ４５ＣＮにより直接処 理した妊娠血清の結果を描いたものである（右）。尿ｈＣＧ、βサブユニットお よびβコア断片標準物の溶出位置を矢印で示し、それぞれ符号■、■および■で ブルーデキストラン（ｖｏ）、オバルブミン（分子量−４３，０００）およびミ オグロビン（分子量部１７．０００）の溶出位置を示した。Brief description of the drawing Figures IA to IE are graphs showing the results of gel filtration of serum. Figure IF to IJ is a graph showing gel filtration of serum fractions (according to an example of the invention). l1U From IA to IJ, the results are hCG (...) by immunoassay. Two free β subunit fragments (---) and a β fragment () were tested. It depicts fractions. Ii! JIA, IB, IC and ID are the first Depicts pregnancies at term, midterm and due date, as well as choriocarcinoma serum results. . Figures IF to II are replicate chromatograms of pools marked A, B, C and D. (after dissociation with ammonium thiocyanate, NH, SCN) . Figure IE depicts the results for untreated pregnancy serum and Figure 1J depicts the results for direct treatment with NH45CN. This is a depiction of the results of the pregnancy serum obtained after the test (right). Urine hCG, β subunit The elution positions of the and β core fragment standards are indicated by arrows and marked with symbols ■, ■, and ■, respectively. Blue dextran (vo), ovalbumin (molecular weight -43,000) and mi The elution position of oglobin (molecular weight part: 17.000) is shown.
発明の詳細な説明 本発明は、血清中の規則的および単量体βコア断片が他の分子と結合して高分子 量複合体を形成し、その複合体は、βサブユニットおよびβコア断片エピトープ に対する抗体として存在することにより認識を妨げるという発見に基づく。この 複合体は、例えば、３Ｍのアンモニウムチオシアネートで解離せしめて、βコア 断片を放出できる。放出されたβコア断片の水準（ｈＣＧに対する）は組織と尿 に報告された水準に匹敵する。Detailed description of the invention The present invention shows that regular and monomeric β-core fragments in serum combine with other molecules to form macromolecules. β-subunit and β-core fragment epitope This is based on the discovery that the presence of antibodies against these substances prevents recognition. this The complex can be dissociated with, for example, 3M ammonium thiocyanate to remove the β-core. Can release fragments. Levels of released β-core fragment (relative to hCG) in tissue and urine comparable to levels reported in
血清中の「遊離」βコア断片の水準は、免疫学的検定／ゲル濾過により慣習的に 検出されるように著しく低い（従来の免疫学的検定による検出以上）。しかしな がら、本出願者は、βコア断片の生な種は高分子Ｊｉ複合体（Ｍｒ＞６０．００ ０）の成分であり、その成分は免疫学的にマスクされ、解離せしめられ尿βコア 断片標準の位置でゲル濾過上および逆相ＨＰＬＣ上で溶出する分子を産生できる ということを発見した。初期の妊娠血清中に発見されたβコア断片の比率は１８ ％のｈＣＧ水準であり、妊娠の中間においては９１％であり、出産予定日におい ては５０％のｈｃＧ水準であった。比較すると、尿βコア断片の水準は、妊娠の 同じ段階においてそれぞれ、３５％、４９０％および２５０％である。Levels of “free” β-core fragments in serum are routinely determined by immunoassay/gel filtration. Significantly lower (above and beyond detection by conventional immunoassays) as detected. However However, the applicant has determined that the raw species of the β core fragment is a polymeric Ji complex (Mr > 60.00 0), whose components are immunologically masked and dissociated into the urinary β-core. Can produce molecules that elute on gel filtration and reverse phase HPLC at the location of fragment standards I discovered that. The proportion of β core fragments found in early pregnancy serum was 18 % of hCG levels, 91% at mid-pregnancy, and 91% at the due date. The hcG level was 50%. By comparison, urinary β-core fragment levels are 35%, 490% and 250% at the same stage, respectively.
本出願者は、尿βコア断片値と一致して上昇し下降する水準の（βコア断片水準 は妊娠初期で最低で１３−１６週間で最高となる）妊娠血清中のβコア断片のマ スク形態の存在を発見した。これは尿βコア断片の供給源と似ていると思われる 。血清中のマスクβコア断片（未処理５ＧＰＣ）の水準は、尿中のβコア断片の 約４分の１である。血清クレアチニン水準が尿水準の１／２０−１／４０である ことを考えると、血清中のマスクβコア断片のそのような水準は尿水準を説明す るのに十分なものである。Applicant has determined that (β-core fragment levels) (lowest in the first trimester and highest at 13-16 weeks) I discovered the existence of the Suku form. This seems to be similar to the source of urinary β-core fragments. . The level of masked β-core fragment (unprocessed 5GPC) in serum was lower than that of β-core fragment in urine. It is about one fourth. Serum creatinine level is 1/20-1/40 of urine level Given that such levels of masked β-core fragments in serum do not account for urine levels. It is sufficient to carry out
組織、血清および尿中にβコア断片の著しい水準を発見したことにより、この分 子の天然細胞様起始が示される。The discovery of significant levels of beta-core fragments in tissues, serum, and urine has led to this The native cell-like origin of the offspring is shown.
最近、ライ−マンと同僚は（ライ−マンら、臨床内分泌代謝ジャーナル、１９９ ０．−７０，３７１−７８） 、尿βコア断片を通常の血清に加え、その分子サ イズが不変である（ゲル濾過により）ことを発見した。彼等は、βコア断片免疫 学的反応性は血清因子により弱まらなかったと結論付けた。ライ−マンらにより 用いられた尿βコア断片は血清複合体を形成するものと同一ではないことが分か っているが、これらの発見は、血清複合体は任意の血清タンパク質へのβコア断 片の非特異性結合の結果ではないこと；βコア断片は血清中に複合体として存在 するだけでなく、２つの小さな未処理ペプチドと結合した尿中で一貫して検出さ れることを示唆している（カーダナら、出版のために提出）。これらの小さなペ プチドは尿βコア断片の分子サイズにほとんど影響せず、逆相ＨＰＬＣにより分 離せしめられる。おそらく尿βコアペプチド複合体はマスク血清βコア断片物質 の加工の産生物であると考えられる。Recently, Lyman and colleagues (Lyman et al., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 1999) 0. -70,371-78), add urinary β core fragment to normal serum and It was found (by gel filtration) that the They have beta core fragment immunity. We concluded that the biological reactivity was not attenuated by serum factors. By Lyman et al. It was found that the urine β core fragment used was not the same as that forming the serum complex. However, these findings suggest that serum complexes can be linked to β-core fragments of any serum protein. This is not the result of non-specific binding of the β-core fragment; the β-core fragment is present as a complex in serum. as well as consistently detected in urine combined with two small unprocessed peptides. (Cardana et al., submitted for publication). These little bae Putide has little effect on the molecular size of the urinary β core fragment and can be separated by reversed-phase HPLC. Forced to let go. Perhaps the urinary β-core peptide complex masks serum β-core fragment substances It is considered to be a product of processing.
βコア断片の話しは単純なものではないことは明確である。共存するかもしれな いが、尿分解経路を除去しない一方、血清中に高水準のβコア断片を発見するこ とにより分泌起始が重要となる。It is clear that the story of β-core fragments is not a simple one. They may coexist However, while it does not eliminate the urinary degradation pathway, it is possible to find high levels of β-core fragments in serum. Therefore, the origin of secretion becomes important.
本発明の１実施態様は、血清ゴナドトロピンペプチド複合体を分解して１つ以上 のエピトープを露出せしめることを含む。これは、Ｓ Ｇ Ｐ 、Ｃを、十分な 時間、解離剤に露出することにより達成される。それゆえ、例えば、血液、血漿 または血清を、洗浄剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、「トリトンＮ１００ Ｊ （ｒｌ−リドン」はアルキルアリルポリエーテルアルコール、スルホン酸塩 および硫酸塩に基づく界面活性剤である；非イオン型、陽イオン型および陰イオ ン型、脂溶性型および水溶性型）またはＮＰ４０（オクチルフェニルエチレンオ キシド）：カオトロピック剤、例工ば、グアニジン、アンモニウムチオシアネー トまたは尿素；２から３のｐＨを有する酸、例えば、クエン酸、ギ酸または酢酸 、もしくは有機溶媒、例えば、トルエン、アセトニトリル、アセトンまたはメタ ノールと接触せしめる。解離剤は、非共有結合タンパク質を解離するように作用 するいかなる添加剤でもよい。あるいは、血液、血漿または血清を６０℃より高 い温度に加熱する。次いで処理した血液、血漿または血清に、沈殿物を除去する 、および／または５ＧＰＣまたはその成分を１刑する、もしくは解離剤を識別す る工程を施す。分離技術は従来よりよく知られており、例えば、疎水性相互作用 カラム、ゲル濾過、逆相高圧液体クロマトグラフィー、膜の使用、浸透、電気泳 動、透析、ヒドロキシアパタイトカラム、イオン交換または遠心分離が用いられ る。One embodiment of the invention provides for degrading serum gonadotropin peptide complexes to produce one or more including exposing an epitope. This makes S G P, C sufficient This is accomplished by exposure to a dissociating agent for a period of time. Therefore, e.g. blood, plasma Or the serum can be washed with a detergent such as sodium lauryl sulfate, Triton N100 J (rl-ridone) is alkylaryl polyether alcohol, sulfonate and sulfate-based surfactants; non-ionic, cationic and anionic type, fat-soluble type and water-soluble type) or NP40 (octylphenyl ethylene oxide). oxide): Chaotropic agents, such as guanidine, ammonium thiocyanate acids with a pH of 2 to 3, such as citric acid, formic acid or acetic acid; or organic solvents such as toluene, acetonitrile, acetone or meth Bring it into contact with Knoll. Dissociation agents act to dissociate non-covalently bound proteins Any additive may be used. Alternatively, blood, plasma or serum may be heated above 60°C. Heat to a high temperature. The precipitate is then removed from the treated blood, plasma or serum. , and/or 5GPC or its components or identify the dissociating agent. Perform the process of Separation techniques are traditionally well known, e.g. Columns, gel filtration, reversed phase high pressure liquid chromatography, use of membranes, osmosis, electrophoresis dialysis, hydroxyapatite columns, ion exchange or centrifugation are used. Ru.
一度５ＧＰＣから解離されると、ＳＧＰはどのような従来のｈＣＧβサブユニッ トまたはβコア断片検定、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、染料、蛍光検定または ＥＩＭＡ（酵素免疫検定）により検出できる。Once dissociated from 5GPC, SGP can be linked to any conventional hCGβ subunit. or β core fragment assays, e.g. ELISA, RIA, dye, fluorescence assays or It can be detected by EIMA (enzyme immunoassay).
５ＧＰＣおよびＳＧＰはまた、多クローン性抗体または単クローン性抗体の使用 により非解離状態でも検出でき、その抗体は５ＧＰＣに特異的である。5GPC and SGP also support the use of polyclonal or monoclonal antibodies. 5GPC can be detected even in an undissociated state, and the antibody is specific to 5GPC.
解離および分離の２つの工程は、例えば、逆相高圧液体クロマトグラフィー（Ｈ ＰＬＣ）の使用により１つの操作に結合され、ここで用いられる溶媒は、解離剤 として作用する。The two steps of dissociation and separation can be performed, for example, by reverse phase high pressure liquid chromatography (H PLC), where the solvent used is a dissociating agent. It acts as.
本発明による癌、妊娠、または栄養化細胞病の経過の連中は、非栄養化細胞癌ま たは栄養化細胞病の進行または後退、もしくは妊娠の進行を検出することを含み 、（ａ） 患者からの血液またはその液体成分、例えば、血漿または血清中の、 例えば、５ＧＰＣの解離後に、例えば、抗体またはその成分、例えば、ＳＧＰを 用いることにより、もしくは、抗体を用いることにより、５ＧＰＣの第１の測定 を行ない、 （ｂ） 工程（ａ）に読いて、その患者からの血液またはその液体成分、例えば 、血漿または血清中の、５ＧＰＣまたはその成分、例えば、ＳＧＰを１度以上さ らに測定し、（ｃ） （ａ）からの第１の測定と（ｂ）からの測定とを比較して 、妊娠、癌または栄養化細胞病の進行（増大の場合）、もしくは癌または栄養化 細胞病の後退（減少の場・合）を支持するものとして、５ＧＰＣまたはＳＧＰが 増大または減少するかどうかを確認する各工程からなる。Those in the course of cancer, pregnancy, or trophic cell disease according to the invention are treated with non-trophic cell carcinoma or or to detect progression or regression of trophic cell disease or progression of pregnancy. , (a) in blood or its liquid components, e.g. plasma or serum, from a patient; For example, after dissociation of 5GPC, e.g. The first measurement of 5GPC by using or by using an antibody do the (b) In reference to step (a), blood or a liquid component thereof from the patient, e.g. , 5GPC or its components, such as SGP, in plasma or serum more than once. (c) Compare the first measurement from (a) and the measurement from (b). , pregnancy, cancer or trophic cell disease progression (in case of increase), or cancer or trophic cell disease 5GPC or SGP supports regression (reduction) of cellular disease. Each step consists of checking whether it increases or decreases.
本発明はまた、１つ以上の容器中に、ＳＧＰまたはＳＧＰＣｌ例えば、血液また はその液体中の抗体を検出する手段、および必要に応じて５ＧＰＣを解離する手 段、例えば、ここに記載した解離剤からなるキットを含む。The present invention also provides for the use of SGP or SGPCl, such as blood or means to detect the antibodies in the fluid, and if necessary, to dissociate the 5GPC. for example, a kit consisting of a dissociating agent as described herein.
本発明のために使用する非限定実施例を以下に示す：１、 ＩＶＦ（生体外受精 ）プログラム：ｈＣＧをＸＶＦ方法において加える。内因性ｈＣＧが検出され妊 娠が示される前に、与えられたｈＣＧは完全に循環系から除去されなければなら ない（２−３週間かかる）。感覚法の発達に関して、分離分子ベータコア断片− 担体複合体の検出は、ちょうど７−１０日後の妊娠を示す。Non-limiting examples of use for the present invention are as follows: 1. IVF (in vitro fertilization) ) Program: Add hCG in the XVF method. Endogenous hCG is detected and pregnancy The given hCG must be completely cleared from the circulatory system before pregnancy is indicated. No (takes 2-3 weeks). Regarding the development of sensory methods, isolated molecular beta core fragments - Detection of carrier complex indicates pregnancy after just 7-10 days.
２、このときの水準が区別できなく下降する後に、ｈＣＧは、妊娠の最初の８− １０週間のみを監視するのに有用である。ＳＧＰおよび５ｃｐｃの水準は、妊娠 約１６週間まで下降せず、それゆえ、妊娠／胎盤の健康を監視するｈＣＧに亘り 利点を有する。2. After this level drops indistinguishably, hCG is Useful for monitoring only 10 weeks. SGP and 5cpc levels are hCG does not decline until about 16 weeks and therefore monitors pregnancy/placental health. has advantages.
３、 ベータコア断片の仮測定（ＳＧＰの尾形Ｂ）は、卵巣、子宮および子宮内 膜癌の検出と取扱いに有用であることが証明されている。しかしながら、腫瘍マ ーカーの従来の血清／血液測定から離脱し尿の検査を開始するのに不本意なこと がある。さらに、その日の異なるときの尿濃度における２−３倍の変化からその 不本意が生じる。５ＧＰＣの発見およびその上にエピトープを露出する手段は、 血液／血清中のこの有用なマーカーを測定する手段を提供する。3. Preliminary measurement of beta core fragments (tail B of SGP) in ovary, uterus and intrauterine It has been proven useful in the detection and handling of membrane cancer. However, tumor reluctance to move away from traditional serum/blood measurements and start testing urine There is. Furthermore, the 2-3 fold change in urine concentration at different times during the day suggests that Reluctance arises. The discovery of 5GPC and the means to expose epitopes on it A means to measure this useful marker in blood/serum is provided.
４、 癌、例えば、卵巣癌、頚部癌、子宮内膜癌、乳癌、腺癌、外陰部癌、肺癌 、結腸癌、膀胱癌および膵臓癌の経過の検出および追従。4. Cancer, such as ovarian cancer, cervical cancer, endometrial cancer, breast cancer, adenocarcinoma, vulvar cancer, lung cancer , detection and tracking of the progress of colon cancer, bladder cancer and pancreatic cancer.
５、 妊娠障害、例えば、流産の恐れ、子宮外妊娠および中毒症の検出。5. Detection of pregnancy disorders, such as fear of miscarriage, ectopic pregnancy and toxicosis.
６、 現在得られるほとんどの腫瘍マーカーは、尿のものではなく血液のもので あり、そのようなマーカーいくつかを含むパネルが一般的に用いられる。ＳＧＰ は、そのようなパネル上でのそのようなマーカーの１つである。血液中の腫瘍マ ーカーの検出は、尿のサンプリングが、例えば、試験の前の個人の液体の摂取量 により影響するために、尿におけるものよりもより信頼できることが分かった。6. Most tumor markers currently available are blood-based, not urine-based. and panels containing several such markers are commonly used. SGP is one such marker on such a panel. Tumor in the blood Detection of markers can be done by urine sampling, e.g. It was found to be more reliable than that in urine due to the influence of
実施例 以下の非限定実施例を参照しながら、本発明の詳細な説明する。Example The invention will now be described in detail with reference to the following non-limiting examples.
実施例１ βコア断片の検査に血清の４つのプールを用いた： （ｉ）６つの初期妊娠血清 試料（月経徒弟５週）；（ｉｉ）２つの中間妊娠血清試料（１３および１６週） ；（ｉｉｉ）２つの出産予定日血清試料；（ｉｖ）絨毛癌の療法前の女性からの ４つの血清。各プールのアリコート（３−４ｍｌ）を、０．１Ｍアンモニウム重 炭酸塩中で平衡となったセファクリルＳ−１００ＨＨの二重カラム（連続した２ つの１゜５ｘ９Ｑｃｍのカラム）上でゲル濾過した。そのカラムを３０ｍ１／時 間で吸い出し、２ｍｌの分画を集積した。少量のβコア断片免疫的反応性（＜０ ． １％のｈＣＧ水準）を有する高分子量分画（Ｍｒ＞６０，０００）をプール して（図１）、凍結乾燥して４ｍｌの３Ｍアンモニウムチオシアネート中で再構 成した。室温で１５分後、試料を遠心分離して再度Ｓ−１００Ｉ（Ｒカラムで処 理した。即座の再結合を避けるために、３ｍｌの３Ｍアンモニウムチオシアネー トを、試料の適用の前にカラムに装填した。あるいは、固体のアンモニウムチオ シアネートを直接血清プールに加え（３Ｍまで）、室温で１５分間保持し、つい でＳ−１００ＨＲカラムで処理した。Example 1 Four pools of sera were used for β-core fragment testing: (i) 6 early pregnancy sera; Samples (menstrual apprentice 5 weeks); (ii) two mid-pregnancy serum samples (13 and 16 weeks) (iii) two due date serum samples; (iv) from a woman before therapy for choriocarcinoma; 4 serums. An aliquot (3-4 ml) of each pool was added to 0.1 M ammonium hydroxide. Dual columns of Sephacryl S-100HH equilibrated in carbonate (2 consecutive Gel filtration was performed on two 1° 5×9 Qcm columns). 30ml/hour of the column 2 ml fractions were collected. Small amounts of β-core fragment immunoreactivity (<0 ．． Pool high molecular weight fractions (Mr > 60,000) with 1% hCG level) (Figure 1), lyophilized and reconstituted in 4 ml of 3M ammonium thiocyanate. accomplished. After 15 minutes at room temperature, the sample was centrifuged and treated again with the S-100I (R column). I understood. To avoid immediate recombination, add 3 ml of 3M ammonium thiocyanate. was loaded onto the column prior to sample application. Alternatively, solid ammonium thio Cyanate was added directly to the serum pool (up to 3M), kept at room temperature for 15 minutes, and then The sample was treated with an S-100HR column.
３Ｍアンモニウムチオシアネート中のｈＣＧ標準物（ＮＩＨからのバッチＣＲ− １２７） 、３Ｍアンモニウムチオシアネートを含有する通常血清中のｈＣＧ漂 準物および３Ｍアンモニウムチオシアネート中のβサブユニツト標準物からなる 対照もまた室温で１５分間保持し、次いでＳ−１００ＨＲカラムに注いだ。少量 のゲルに非特異的に結合した分子（カラムを目盛り付けするのに用いたβコア断 片とタンパク質）からの干渉を除去するために、使用前に、そのカラムを８ｍｌ の３Ｍアンモニウムチオシアネートで機械的に搾りだした。次いで溶出物を免疫 学的検定で検査し、βコア断片のないことを示した。hCG standard in 3M ammonium thiocyanate (batch CR- from NIH) 127), hCG bleaching in normal serum containing 3M ammonium thiocyanate. and β subunit standards in 3M ammonium thiocyanate. Controls were also kept at room temperature for 15 minutes and then loaded onto the S-100HR column. small amount Molecules non-specifically bound to the gel (β-core fragment used to calibrate the column) 8 ml of the column before use to remove interferences from fragments and proteins). mechanically expressed with 3M ammonium thiocyanate. The eluate is then immunized Tested using a chemical assay and shown to be free of β core fragments.
免疫学的検定： ＨＣＧ二量体をハイブリチック（ＣＡ、サンディエゴ）からの タンデムＥキットを変更した物を用いて測定した。αおよびβサブユニットの存 在を必要とするこの検定は、遊離βサブユニットおよびβコア断片との０％の（ 重量７重ｆｆ１）交差反応性を有する。Ｊ、１１＃βサブユニツトを、ミクロタ イタ板（ハイブリチック）上に被覆された単クローン性ＩＥ５を用いた検定で測 定した。この検定は、ｈＣＧとの３％の交差反応性を有し、βコア断片とは０％ の交差反応性を有する。βコア断片を、ミクロタイタ板上に被覆された単クロー ン性Ｂ２０４ （コロンビア大学の内科医および外科医）を用いた検定で測定し た。この検定は、ｈＣＧとの０．６％の交差反応性を有し、βコア断片とは９％ の交差反応性を有する（コールら、癌調査書、１９８８４４８：１３６１−６６ 、アルフサンら、臨床内分泌代謝ジャーナル、（１９９０）７０ ： ７８３ −８７）。Immunological assay: HCG dimer was obtained from Hybridic (San Diego, CA). Measurements were made using a modified Tandem E kit. Presence of α and β subunits This assay requires 0% ( Weight 7foldff1) Has cross-reactivity. J, 11#β subunit to microcontroller Measured by assay using monoclonal IE5 coated on ita plate (hybritic). Established. This assay has 3% cross-reactivity with hCG and 0% with β-core fragment. It has cross-reactivity. The β-core fragment was coated with a single clone on a microtiter plate. Measured using test B204 (Columbia University Physicians and Surgeons). Ta. This assay has 0.6% cross-reactivity with hCG and 9% with β-core fragment. (Cole et al., Cancer Research, 1988448:1361-66 , Alfsan et al., Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, (1990) 70: 783 -87).
全て３つの免疫学的検定では、ホースラディツシュペルオキシダーゼ（ＣＡ、バ イオスパシフィック社）に結合したβサブユニツト多クローン性抗体からなる検 出器工程を用いた。All three immunoassays used horseradish peroxidase (CA, A test consisting of β-subunit polyclonal antibodies bound to EosPacific, Inc.) The extraction process was used.
結果： 初期、中間および出産予定日の妊娠血清、並びに絨毛癌血清のプールのゲル濾過 を図ＩＡ−Ｄに示す。図示するように、βコア断片標準物（Ｍｒ〜１５，０００ ）の位置における免疫反応性は、０．１モル／ｌまたは０．１％のｈＣＧ水準を 決して超えなかった。しかじなが゛ら、アンモニウムチオシアネートで解離した 高分子量分画（Ｍｒ＞６０゜０００）の反復クロマトグラフィーは、βコア断片 領域（Ｍｒ−１５，０００）における非常に大量の免疫反応性を生じた。解離後 、初期妊娠血清（１８％のｈＣＧ水準）から１９ｐモル（バイカモル）のβコア 断片を、中間妊娠血清（９１％のｈＣＧ水準）から３１１ｐモルを、そして出産 予定日の妊娠血清（５０％のｈＣＧ水準）から５８ｐモルを生じた。しかしなが ら、絨毛癌血清はちょうど５゜４ｐモル（１，３％のｈＣＧ水準）を放出した。result: Gel filtration of pools of early, midterm and term pregnancy serum and choriocarcinoma serum. are shown in Figures IA-D. β-core fragment standards (Mr ~ 15,000 ) Immunoreactivity at position 0.1 mol/l or 0.1% hCG level It was never surpassed. However, it was dissociated with ammonium thiocyanate. Repeated chromatography of high molecular weight fractions (Mr>60°000) A very large amount of immunoreactivity occurred in the region (Mr-15,000). After dissociation , 19 pmol (baikamol) of beta core from early pregnancy serum (18% hCG level) fragment, 311 pmol from mid-pregnancy serum (91% hCG level) and delivery. Pregnancy serum at term (50% hCG level) yielded 58 pmol. But long In contrast, choriocarcinoma serum released just 5.4 pmol (1.3% hCG level).
バーケンらの内分易学、（１９８８） 、１２３．５７２−８３の方法を用いた 逆相ＨＰＬＣを使用して、中間妊娠血清から放出された分子と尿βコア断片標準 物とを比較した。再度両方の分子を同位置で溶出し、放出分子をβコア断片と同 定した。Using the method of Birken et al., Uchibunkigaku, (1988), 123.572-83. Molecules released from mid-pregnancy serum and urine β-core fragment standards using reverse-phase HPLC compared with things. Again, both molecules are eluted at the same position, and the released molecule is the same as the β core fragment. Established.
初期妊娠血清を直接アンモニウムチオシアネートで処理する場合（図ＩＪ）、β コア断片（Ｍｒ−１５，０００）の位置にピークは見られなかった。そのかわり 、βコア断片免疫反応性を有するいつくかの小さなピークが検出された（Ｍｒ＝ ２０−６０，０００）、実施可能性の特定ノ理論に束縛されることなく、おそら く、血清タンパク質の付加的な塊が、分離において干渉するか、またはβコア断 片と再結合して中間複合体を形成すると思われる。When early pregnancy serum is directly treated with ammonium thiocyanate (Figure IJ), β No peak was observed at the position of the core fragment (Mr-15,000). Instead , several small peaks with β-core fragment immunoreactivity were detected (Mr= 20-60,000), without being bound by any particular theory of feasibility. additional clumps of serum proteins may interfere with the separation or interfere with the β-core fragment. It is thought that the fragments recombine to form an intermediate complex.
対照実験において、ｈＣＧまたはβサブユニツト標準物とアンモニウムチオシア ネートによる培養からは全くβコア断片が生成されなかった。このことは、その 発見がアンモニウムチオンアネートプロトコルによるｈＣＧまたはそのβサブユ ニットの解離または損傷によるものではないことを示す。In control experiments, hCG or β subunit standards and ammonium thiocyanin No β-core fragments were produced from the culture with Nate. This means that Discovery of hCG or its β subunit by ammonium thionanate protocol Indicates that this is not due to dissociation or damage to the knit.
上記結果を要約すると、最初の期間のいくつかの個人（ヒトの雌）からの血清の プールにおいて、５ＧＰＣがｈＣＧの約２０％の水準で検出された。第２の期間 のプール血清において、５ＧＰＣはｈＣＧと類似か等しい水準で発見された（尿 βコア断片水準は、妊娠の第２の期間において最も高い）。第３の期間のプール 血清において、５ＧＰＣの水準はｈＣＧの水準の約半分であった。したがって、 ３つの期間のうちで第２の期間において、より高い水準の５ＧＰＣが見られた。To summarize the above results, serum from several individuals (human females) during the first period In the pool, 5GPC was detected at a level of approximately 20% of hCG. second period 5GPC was found at similar or equal levels to hCG in pooled serum (urinary β core fragment levels are highest in the second trimester of pregnancy). Third period pool In serum, the level of 5GPC was approximately half that of hCG. therefore, Higher levels of 5GPC were seen in the second of the three periods.
実施可能性の特定の理論に束縛されることなく、このことは、ベータコア断片の 血清水準と尿水率との間の関係を示唆する。Without being bound to any particular theory of feasibility, this suggests that the Suggests a relationship between serum levels and urine water percentage.
実施例２ 血清を、進行した病気と進行した病気の臨床的発現と一致して、尿中のベータコ ア断片（ヒト柔毛膜性ゴナドトロピンベータサブユニットコア断片）に陰性（誤 って）であり、血清中に著しく上昇したＣＡ１２５を有する１人の女性を含む卵 巣癌を有する３人の女性から採取した。「誤って陰性」の女性を含む３人の女性 全ては、尿中のベータコア断片の１ｍｌ当たり３から１００フェムトモルまたは ３から１００ＸＩＯ−”モル／ｍｌに対して５ＧＰＣの比較的高い血清水準（２ ，５から３２．１ピコモル／ｍｌまたは２．５から３２．ｌＸｌ０−１２モル／ ｍｌ）を有した。Example 2 Serum was tested for urinary beta-codoses, consistent with advanced disease and clinical manifestations of advanced disease. Negative (false) for A fragment (human chorionic gonadotropin beta subunit core fragment) ), and one woman had significantly elevated CA125 in her serum. Samples were collected from three women with focal cancer. Three women, including one who tested negative by mistake All contain between 3 and 100 femtomoles per ml of beta core fragment in urine or Relatively high serum levels (2 , 5 to 32.1 pmol/ml or 2.5 to 32. lXl0-12 mol/ ml).
健康で妊娠して（（ない女性からの通常の血清の多数のプールにおいて、ベータ コア断片の血清水準は０．２５ピコモル／ｍｌまたは０．２５ｘｌＯ”１２モル ／ｍｌであることが分かった。In a large pool of normal serum from healthy, pregnant ((not) women, beta Serum level of core fragment is 0.25 pmol/ml or 0.25xlO”12 mol /ml.
２回の［プレグニル（ＰＲＥＧＮＹＬ）Ｊの注射を受けたヒトの雌において、類 似の水準の５ＧＰＣが見られた（０．３ピコモル／ｍｌまたは０．３Ｘ１０−１ ２）にの発見は、２つの分子の内因性供給源と結合する５ＧＰＣと一致した。月 経がなくなった直後の妊娠女性からの血清のプールの試験は、１２．１ピコモル ／ｍｌまたは１２，１ｘ ｌ Ｑ −１２モル／ｍｌまたは背景のほぼ５０倍の ５ＧＰＣ水準を示した。***後または生体内受精方法後１週間の５ＧＰＣ水準は 、約０．５ピコモル／ｍｌまたは０． ５Ｘ１０−１２モル／ｍｌ、もしくは妊 娠に陽性であった。In human females who received two injections of [PREGNYL] Similar levels of 5GPC were seen (0.3 pmol/ml or 0.3X10-1 The findings in 2) were consistent with 5GPC binding to endogenous sources of the two molecules. Month Testing of a pool of serum from pregnant women just after menstrual periods revealed that 12.1 pmol /ml or 12,1x l Q - 12 mol/ml or approximately 50 times background It showed the 5GPC level. The 5GPC level one week after ovulation or in vitro fertilization method is , about 0.5 pmol/ml or 0.5 pmol/ml. 5X10-12 mol/ml or pregnant It was positive for pregnancy.
２つの栄養化細胞癌細胞ラインの以下の培養液体を試験した：ＪＡＲ（栄養化細 胞）細胞ラインはｈＣＧおよび５ＧＰＣを分泌した；０ＶＣＡ（卵巣癌）細胞ラ インは５ＧＰＣのみを分泌した。実施可能性の特定の理論に束縛されることなく 、このことは、５ＧＰＣが癌細胞の直接の分泌産生物であり、５ＧＰＣはそのよ うに分泌され、生体内で５ＧＰＣを形成しない各成分を示唆する。The following culture fluids for two trophic cell carcinoma cell lines were tested: JAR (trophic cell carcinoma cell line) cell line secreted hCG and 5GPC; 0VCA (ovarian cancer) cell line secreted hCG and 5GPC; In secreted only 5GPC. without being bound by any particular theory of feasibility This means that 5GPC is a direct secreted product of cancer cells; This suggests that each component is secreted by sea urchins and does not form 5GPC in vivo.
実施例２の結果を以下の表１に要約する。The results of Example 2 are summarized in Table 1 below.
表 １ 血清中のマスク分子（解離後の５ＧＰＣ）本明細書は説明のためであり限定のた めではないこと、そして本発明の請求の範囲と目的から逸脱することなく様々な 変更を行なえることが理解されよう。Table 1 Mask molecules in serum (5GPC after dissociation) This specification is for illustrative purposes and by way of limitation. It is understood that various modifications may be made without departing from the scope and purpose of the claimed invention. It will be understood that changes can be made.
＞社＊ ｘｌ、（Ｖ、−Ｖ、、 ｍｌ）ＦＩＧ、 ＩＧ ＦＩＧ、旧 日Ｇ、ＩＩ 日Ｇ、ＩＪ 国際調査報告 Ａ ＦＯ剛 工 ２１０ ＡＲＴ工Ｌ ＩＬ ＦＩＥＩＪＳ ５ＥＡＩＩ（ＸＥＤ／５ＥＡＪＩＯＩ ＴＯＭＳ：フロン トページの続き （７２）発明者 コール、ローレンス エイアメリカ合衆国 コネティカット州 ０６４７７ オレンジ オールド サイロウロード ３６１ （７２）発明者 カーダ九アンドリューアメリカ合衆国 コネティカット州 ０６５１３ ニューヘヴン フロント ストリート２５５エイ>sha*xl, (V, -V,, ml)FIG, IG FIG, old Japan G, II Japan G, IJ international search report A FO Tsuyoshi Engineering 210 ART Engineering L IL FIEIJS 5EAII (XED/5EAJIOI TOMS: Freon Continuation of top page (72) Inventor: Cole, Lawrence A., Connecticut, United States 06477 Orange Old Silo Road 361 (72) Inventor: Andrew Kada, United States, State of Connecticut 06513 New Haven Front 255 A
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