JPH0646936B2 - Methods and means for carrying out biochemical reactions - Google Patents
Methods and means for carrying out biochemical reactionsInfo
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- JPH0646936B2 JPH0646936B2 JP3110423A JP11042391A JPH0646936B2 JP H0646936 B2 JPH0646936 B2 JP H0646936B2 JP 3110423 A JP3110423 A JP 3110423A JP 11042391 A JP11042391 A JP 11042391A JP H0646936 B2 JPH0646936 B2 JP H0646936B2
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Abstract
Description
【０００１】本発明は、生化学的反応を実施するための
方法に関し、またその方法に使用するための毛細管と反
応容器の組合せに関する。The present invention relates to a method for carrying out biochemical reactions, and to a combination of capillaries and reaction vessels for use in the method.
【０００２】本発明は、試薬を前もって混合することが
できない小容量のすべての生化学的反応に適用すること
ができる。とくに、本発明は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連
鎖反応）方を意図するものである。The invention is applicable to all biochemical reactions of small volume in which the reagents cannot be premixed. In particular, the present invention contemplates the PCR (Polymerase Chain Reaction) method.
【０００３】最近開発されたＰＣＲ法は、多数の重要な
診断領域、たとえば多くの様々な疾患の診断、父子鑑
別、法医学等に著しい進歩をもたらした。ＲＮＡの検出
を所望の場合、必要な予備段階は、逆転写酵素によるＲ
ＮＡのＤＮＡへの変換である。エイズの診断は定常的に
は、血中のＨＩＶ−ウイルスに対する抗体のＥＬＩＳＡ
（固相酵素免疫吸着検定）試験による検出によって行わ
れている。しかしながら、患者がたとえば疾患の初期段
階にあると、抗体が存在しなくても、ＨＩＶ腸性の可能
性がある。この場合、ＥＬＩＳＡ試験は陰性の結果を与
え、この患者は不本意にも他人への感染症の伝播の危険
を冒すことになる。したがって、よりよい、すなわちさ
らに感受性の高いＨＩＶ試験の必要性はきわめて大き
い。以前は培養に長時間を要した他のウイルスの診断も
ＰＣＲ法によって改良された。The recently developed PCR method has made significant progress in a number of important diagnostic areas, such as the diagnosis of many different diseases, paternity discrimination, forensic medicine and the like. If detection of RNA is desired, the necessary preliminary step is R with reverse transcriptase.
Conversion of NA to DNA. The diagnosis of AIDS is routinely made by ELISA of antibodies to HIV-virus in the blood.
(Solid phase enzyme immunosorbent assay) The detection is performed by a test. However, if the patient is in an early stage of the disease, for example, it may be HIV enteric even in the absence of antibodies. In this case, the ELISA test gives a negative result and the patient unwillingly risks the transmission of the infection to others. Therefore, there is a great need for better, or more sensitive HIV tests. The diagnosis of other viruses that previously took a long time to culture was also improved by the PCR method.
【０００４】実際の操作に関しては、ＰＣＲ診断は以下
の３段階からなる。 1) 反応混合物の調製、すなわち試験すべきサンプルの
調製 2) 実際の増幅、すなわちＤＮＡ分子が指数的に複製さ
れる連鎖反応、 3) 電気泳動またはハイブリダイゼーションによる陽性
サンプルの検出Regarding actual operation, PCR diagnosis consists of the following three stages. 1) Preparation of the reaction mixture, i.e. preparation of the sample to be tested 2) Actual amplification, i.e. chain reaction in which the DNA molecules are replicated exponentially, 3) Detection of positive samples by electrophoresis or hybridization
【０００５】本発明者らが除去を目的とするＰＣＲ法の
欠点は、主として試薬を前もって混合できないことによ
り、段階1)に時間と手間のかかることであり、その結
果、多くの誤差の原因を生じることである。段階2)の増
幅および段階3)の検出結果は、段階1)の信頼性に絶対的
に依存するので、段階1)を十分な注意をもって正確に実
施することは、きわめて重要である。The drawback of the PCR method, which the present inventors intend to remove, is that the step 1) is time-consuming and tedious, mainly because the reagents cannot be mixed in advance, and as a result, causes of many errors. It happens. Since the amplification of step 2) and the detection result of step 3) absolutely depend on the reliability of step 1), it is extremely important to carry out step 1) accurately and with caution.
【０００６】生化学的反応、たとえば上述のＰＣＲのた
めの試薬を準備する様々な段階には、別個の反応容器ま
たは試験管の間での交差汚染の危険がある。The various steps of preparing reagents for biochemical reactions, such as the PCR described above, run the risk of cross-contamination between separate reaction vessels or test tubes.
【０００７】ＰＣＲ反応の準備に際しては、さらに、サ
ンプルを取扱う人からの、いわゆる「キャリーオーバー
汚染」の危険がある。これはとくに、特異的ＤＮＡを検
出するための定常的分析において、同じ人がＰＣＲ反応
前のすべての段階を実施し、またＰＣＲ生成物を取扱う
場合にいえる。皮膚、毛髪または実験衣に、以前に実施
した増幅からのＣＰＲ生成物の一部が付着し、それが
「偽」陽性を生じる可能性がある。偽陽性の危険は試験
の感度が高いほど大きくなる。ＨＩＶの試験はきわめて
高感度であり、偽陽性の結果がそれを指摘された人に不
必要な悲嘆を生じることはいうまでもない。In preparing the PCR reaction, there is also the risk of so-called "carryover contamination" from the person handling the sample. This is especially true when the same person performs all steps prior to the PCR reaction and handles PCR products in a routine assay for detecting specific DNA. It is possible that some of the CPR product from the previously performed amplification will adhere to the skin, hair or lab coat, which will give rise to "false" positives. The risk of false positives increases with the sensitivity of the test. It goes without saying that the HIV test is extremely sensitive and that false-positive results cause unnecessary grief for the person who points it out.
【０００８】本発明の目的は、汚染の危険を低下させる
と同時に、試薬を前もって混合しておくことができず、
その準備に時間を要する特定の生化学的反応のための小
容量の試薬の準備に必要な時間を短縮させることを目的
とするものである。The object of the present invention is to reduce the risk of contamination while at the same time not allowing the reagents to be premixed,
It is intended to reduce the time required to prepare a small volume of reagent for a particular biochemical reaction that requires time to prepare.
【０００９】この目的は、それぞれ「請求項１」および
「請求項６」による毛細管および反応容器を組合わせて
使用することによって達成される。This object is achieved by the combined use of capillaries and reaction vessels according to "claim 1" and "claim 6" respectively.
【００１０】ＤＤ−Ａ１−２２５ ７８８号には、数個
の試薬が中間に置かれた疎水性液体、たとえばパラフィ
ン、油脂、アルカンによって分離されて含まれている毛
細管が記載されている。この毛細管中で、試薬の保存な
らびにサンプルとの反応が行われる。サンプルを毛細管
に添加し、ついで毛細管を一端で熔融する。サンプルと
試薬の混合は、毛細管内に鋼製のピンが挿入され、磁石
を毛細管の外側に沿って上下方向に移動させることによ
って行われる。適当なインキュベーション期間後に毛細
管を遠心分離して、反応溶液と疎水性液体を分離した２
相として得る。反応溶液を分析できるためには、毛細管
はシールされた末端とさらに疎水性液体−反応溶液の境
界で切断しなければならず、ついで反応溶液等を、たと
えばＵＶ吸収の測定のためにキュベットに移す。DD-A1-225 788 describes capillaries containing several reagents separated by a hydrophobic liquid, such as paraffins, oils and alkanes, in the middle. In this capillary, storage of the reagents and reaction with the sample take place. The sample is added to the capillary and then the capillary is melted at one end. The sample and the reagent are mixed by inserting a steel pin into the capillary and moving the magnet in the vertical direction along the outside of the capillary. After an appropriate incubation period, the capillary was centrifuged to separate the reaction solution and the hydrophobic liquid.
Get as a phase. In order to be able to analyze the reaction solution, the capillaries must be cut at the sealed end and also at the boundary of the hydrophobic liquid-reaction solution, which is then transferred to a cuvette, for example for measuring UV absorption. .
【００１１】この既知の毛細管は、前もって調製できな
い試薬の準備の問題は解決している。しかしながら、上
述の処理段階のために、慣用のピペットによる採取法と
比べて、時間の節減も汚染の危険の低下も達成されては
いない。This known capillary solves the problem of reagent preparation, which cannot be prepared in advance. However, because of the processing steps described above, neither time savings nor a reduced risk of contamination have been achieved compared to conventional pipetting methods.
【００１２】本発明を以下に、添付の図面を参照しなが
ら、さらに詳細に説明する。The present invention will now be described in further detail with reference to the accompanying drawings.
【００１３】図１は、試薬を含んだ試薬毛細管を包含す
る反応容器の概略図である。図２は、別の実施態様の試
薬毛細管を包含する別の実施態様の反応容器の概略図で
ある。図３は、図２に示した実施態様の平面図である。
図４は、図１に示した試薬毛細管の拡大図である。図５
は、図２に示した試薬毛細管の拡大図である。FIG. 1 is a schematic diagram of a reaction vessel containing a reagent capillary containing a reagent. FIG. 2 is a schematic diagram of another embodiment of a reaction vessel including another embodiment of a reagent capillary. FIG. 3 is a plan view of the embodiment shown in FIG.
FIG. 4 is an enlarged view of the reagent capillary tube shown in FIG. Figure 5
FIG. 3 is an enlarged view of the reagent capillary tube shown in FIG. 2.
【００１４】図１には、本発明による予め調製した反応
容器１を示す。反応容器１、たとえばエッペンドルフ管
の内部には、試薬毛細管３が配置されている。試薬毛細
管３には、所望の反応に適当な任意の種類の数種の試薬
が配置されている。反応容器１の底部には、以後の試薬
の希釈のための水または緩衝液２を配置することができ
る。FIG. 1 shows a pre-prepared reaction vessel 1 according to the invention. A reagent capillary tube 3 is arranged inside the reaction container 1, for example, an Eppendorf tube. In the reagent capillary tube 3, several kinds of reagents of an arbitrary type suitable for a desired reaction are arranged. At the bottom of the reaction vessel 1, water or buffer solution 2 for the subsequent dilution of reagents can be placed.
【００１５】図２には、反応容器１および試薬毛細管３
の別の好ましい実施態様に示す。反応容器１には孔部４
ａを有する蓋４が設けられている。孔部４は通過可能な
膜４ｂで覆われている。膜が適合された孔部４ａは示さ
れた実施態様では蓋４の中央に位置しているが、これは
必須の特徴ではない。実際、所望により２種以上の試薬
毛細管を入れることができるように、蓋に数個の孔部を
設けることも可能である。孔部４ａは、図５による試薬
毛細管３に対しては止め輪にもなるが、これについては
以下に詳述する。FIG. 2 shows a reaction vessel 1 and a reagent capillary tube 3.
Another preferred embodiment of The reaction vessel 1 has a hole 4
A lid 4 having a is provided. The hole 4 is covered with a permeable membrane 4b. The membrane-fitted aperture 4a is located in the center of the lid 4 in the embodiment shown, but this is not an essential feature. Indeed, it is also possible to provide the lid with several holes so that more than one reagent capillary can be accommodated if desired. The hole 4a also serves as a retaining ring for the reagent capillary tube 3 according to FIG. 5, which will be described in detail below.
【００１６】図４に示した試薬毛細管３は、図１に示し
た試薬容器１内に挿入するように設計されている。試薬
毛細管３には、特定の生化学的反応用の異種の試薬６〜
１３が配置されている。各試薬の量はこの特定の反応の
ためのみに計算され、意図されたものである。ＰＣＲ反
応を実施しようとする場合には、試薬溶液６〜１３は、
すべて特定のＰＣＲ反応のために計算された試薬、ＰＣ
Ｒ緩衝液、ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＡＴＰ，ｄＴＴＰお
よび２種以上のオリゴヌクレオチド、ならびに熱安定性
ＤＮＡポリメラーゼからなる。試薬間には空気または不
活性流体を置く。通常、相互の順序は任意である。The reagent capillary tube 3 shown in FIG. 4 is designed to be inserted into the reagent container 1 shown in FIG. The reagent capillaries 3 contain different types of reagents 6 to 6 for specific biochemical reactions.
13 are arranged. The amount of each reagent is calculated and intended only for this particular reaction. When carrying out the PCR reaction, the reagent solutions 6 to 13 are
Reagents, PC, all calculated for a particular PCR reaction
It consists of R buffer, dCTP, dGTP, dATP, dTTP and two or more oligonucleotides, and a thermostable DNA polymerase. Place air or an inert fluid between the reagents. Usually, the mutual order is arbitrary.
【００１７】図５には改良された試薬毛細管３を示す。
この試薬毛細管は、図２の反応容器に挿入するように設
計されたものである。この試薬毛細管は、図４に示した
試薬毛細管とは、毛細管の下方部に環状の固定溝５が孔
部４ａにぴったりはまるように設けられている点で異な
っている。さらに、毛細管の上方端には保護カバー１５
がはめ込まれている。図２による反応容器と図６による
試薬毛細管は使用時まで別個に保存される。使用に際し
ては、毛細管３の下方端を、反応容器１の蓋４における
通過可能な膜４ｂを貫いて押し込み、固定溝５を孔部４
ａによって形成された止め輪にはめ込む。保護カバー１
５は、反応容器１へ試薬毛細管３を挿入し、押し込む過
程での汚染から、試薬毛細管３の内容物を保護する。試
薬毛細管３内の試薬溶液が解凍されている場合には、つ
いでこれらを遠心分離に付して、互いにまた必要な場合
には容器１の底部の希釈と混合する。遠心分離後、蓋４
から毛細管３をはずさないまま、蓋４を開くことができ
る。この利点は、所望により物質を反応容器に容易に加
えること、また反応容器から容易に物質を抽出すること
を可能にする。FIG. 5 shows an improved reagent capillary tube 3.
This reagent capillary is designed to be inserted into the reaction vessel of FIG. This reagent capillary tube is different from the reagent capillary tube shown in FIG. 4 in that an annular fixing groove 5 is provided in the lower portion of the capillary tube so as to fit into the hole 4a. Further, a protective cover 15 is provided on the upper end of the capillary tube.
Is inset. The reaction vessel according to FIG. 2 and the reagent capillary according to FIG. 6 are stored separately until use. In use, the lower end of the capillary tube 3 is pushed through the permeable membrane 4b in the lid 4 of the reaction vessel 1 and the fixing groove 5 is formed in the hole portion 4.
Fit into the retaining ring formed by a. Protective cover 1
5 protects the contents of the reagent capillary tube 3 from contamination during the process of inserting and pushing the reagent capillary tube 3 into the reaction container 1. If the reagent solutions in the reagent capillaries 3 are thawed, they are then subjected to centrifugation and mixed with each other and, if necessary, with the dilution of the bottom of the container 1. After centrifugation, lid 4
The lid 4 can be opened without removing the capillary tube 3. This advantage makes it possible to easily add substances to the reaction vessel if desired and to easily extract the substances from the reaction vessel.
【００１８】試薬毛細管を製造したのち、すなわち、手
動または自動で各種試薬をその間に空気または不活性流
体を置いて吸引したのち、それらを別個にまたは反応容
器内に入れて包装し、特定の生化学的反応を実施するた
めのキッドとすることができる。もちろん、これらの包
装は滅菌条件下に行われる。After the reagent capillaries have been manufactured, that is, after the various reagents have been manually or automatically aspirated with air or an inert fluid in between, they are packaged either individually or in a reaction container and packed to the specified volume. It can be a kid for carrying out a chemical reaction. Of course, these packagings are done under sterile conditions.
【００１９】毛細管を製造する別の方法としては、試薬
を間に空気または不活性流体をはさんで毛細管内に吸引
し、毛細管を凍結させ、毛細管を空気の区画で切断し、
所望の毛細管片を、その毛細管片の外径に相当する内径
を有する１つの共通の毛細管に入れる。これは試薬を任
意の所望の方法で組合せることを可能にする。Another method of producing capillaries is to draw the reagents into the capillaries with air or an inert fluid in between, freeze the capillaries and cut the capillaries in an air compartment,
The desired capillary piece is placed in one common capillary tube having an inner diameter corresponding to the outer diameter of the capillary piece. This allows the reagents to be combined in any desired manner.
【００２０】試薬毛細管は反応容器とともにまたはそれ
とは別個に、使用時まで凍結して保存する。使用に際し
ては、試薬毛細管を解凍し、その内容物を下方に反応容
器中で遠心分離して互いに、また希釈液があればそれと
混合させる。ＰＣＲ反応を実施する場合には、熱安定性
ＤＮＡポリメラーゼを含めた全試薬が反応容器中に存在
し、増幅を行う前にさらに必要なことは、サンプルたと
えば血液の添加のみである。The reagent capillaries, either with or without the reaction vessel, are frozen and stored until use. In use, the reagent capillaries are thawed and their contents are centrifuged down in the reaction vessel to mix with each other and with any diluent. When performing a PCR reaction, all reagents, including the thermostable DNA polymerase, are present in the reaction vessel and all that is further required before amplification is the addition of sample, eg blood.
【００２１】サンプルは、本出願人の係属中のスエーデ
ン特許出願ＳＥ９１ ０７２６−０号に記載されている
添加システムを用いて加えるのが好ましい。略述すれ
ば、サンプルを、反応毛細管３と同じ種類の毛細管内へ
毛細管作用によって吸い込ませる。ついでサンプル毛細
管を反応容器の蓋４に設けた未使用の孔部４ａ内に挿入
し、その後に容器をもう一度遠心分離する。The samples are preferably added using the dosing system described in Applicant's pending Swedish patent application SE 91 0726-0. Briefly, the sample is drawn into the same type of capillary as the reaction capillary 3 by capillary action. Then, the sample capillary tube is inserted into an unused hole portion 4a provided in the lid 4 of the reaction container, and then the container is centrifuged again.
【００２２】増幅反応の最初の検出については、ＵＶ光
を吸収しないあるいはほとんど吸収しない反応容器の材
料を用いることが提案される。もし反応後にエチジウム
ブロマイドを加えた場合には、ＵＶ照射した容器を肉眼
で見ることによってＤＮＡが増幅されたか否かを検出す
ることができる。好ましくは、上記したサンプルの添加
と同様にしてエチジウムブロマイドを添加することがで
きる。図に示された試薬毛細管３は、特定のサンプル容
量と特定の生化学的反応に応じて製造されたものである
ことを理解すべきである。別の反応では異なる容量およ
び異なる数の試薬が必要になる。For the initial detection of the amplification reaction, it is proposed to use a material for the reaction vessel which absorbs little or no UV light. If ethidium bromide is added after the reaction, it is possible to detect whether or not the DNA is amplified by visually observing the UV-irradiated container. Preferably, ethidium bromide can be added in the same manner as the above sample addition. It should be understood that the reagent capillaries 3 shown in the figures were manufactured according to a particular sample volume and a particular biochemical reaction. Different reactions require different volumes and different numbers of reagents.
【００２３】本発明によれば、多くの因子たとえばピペ
ットによる採取、ピペット先端の交換、手袋の交換、容
器の開閉の反復等が不要になり、誤差の多くの原因が実
質的に減少し、試験は信頼性が高まり、迅速かつ安価に
なる。ＰＣＲにおける偽陽性の結果の問題はこのように
して著しく軽減される。The present invention eliminates many factors, such as pipetting, pipette tip replacement, glove replacement, repeated container opening / closing, etc., which substantially reduces many sources of error, and Is more reliable, faster and cheaper. The problem of false positive results in PCR is thus significantly reduced.
【００２４】本発明は、生物工学産業に、新しい種類の
「キット」、すなわち特定の反応用の試薬を含有する完
全なセットの供給の機会を提供するものである。現在、
このようなキットは多数市場に出回っているが、それら
は通常、約１００種の標準反応に適した多種の試薬を含
有するエッペンドルフ管からなるものである。各反応毎
にある容量を各管から混合しなければならない。試薬毛
細管を使用すれば、１つのキットにたとえば５００本の
毛細管を包含させることができ、そのために設計された
反応用にそれぞれをそのまま使用することができる。本
願に記載された試薬毛細管に基づくキットの利点は、使
用者が試薬をピペットで採取する必要がなく、ピンセッ
トの先で関連した反応に適当な試薬毛細管を選択するだ
けでよいことである。作業の単純化は明白であり、とく
に放射性試薬の取扱いに関しては、ピペットの汚染の危
険は消失し、放射性廃棄物による危険は低下し、スタッ
フが放射線に曝露される時間は短縮される。さらに、Ｐ
ＣＲ方における反応毛細管の経済的および操作的な利点
は、時間の節減と、多くの遺伝子工学領域における作業
者の保護という利益にある。The present invention provides the biotechnology industry with the opportunity to supply a new class of "kits", ie, complete sets containing reagents for specific reactions. Current,
Although such kits are on the market in large numbers, they usually consist of Eppendorf tubes containing various reagents suitable for about 100 standard reactions. A certain volume for each reaction must be mixed from each tube. Using reagent capillaries, one kit can include, for example, 500 capillaries, each of which can be used as such for the reactions designed for it. An advantage of the reagent capillary-based kit described herein is that the user does not have to pipette the reagent, he only has to select the appropriate reagent capillary for the relevant reaction with the tip of tweezers. The simplification of the work is obvious, especially when dealing with radioactive reagents, the risk of pipette contamination disappears, the risk of radioactive waste is reduced and the time staff is exposed to radiation is reduced. Furthermore, P
The economic and operational advantages of reactive capillaries in CR methods lie in time savings and worker protection in many genetic engineering areas.
【図１】図１は、試薬を含んだ試薬毛細管を包含する反
応器の概略図である。FIG. 1 is a schematic diagram of a reactor containing a reagent capillary containing a reagent.
【図２】図２は、別の実施態様の試薬毛細管を包含する
別の実施態様の反応容器の概略図である。FIG. 2 is a schematic diagram of another embodiment of a reaction vessel including another embodiment of a reagent capillary.
【図３】図３は、図２に示した実施態様の平面図であ
る。FIG. 3 is a plan view of the embodiment shown in FIG.
【図４】図４は、図１に示した試薬毛細管の拡大図であ
る。4 is an enlarged view of the reagent capillary tube shown in FIG. 1. FIG.
【図５】図５は、図２に示した試薬毛細管の拡大図であ
る。5 is an enlarged view of the reagent capillary tube shown in FIG. 2. FIG.
Claims (12)
応を実施するにあたり、互いに分離された試薬が充填さ
れている試薬毛細管（３）を使用する方法において、反
応容器（１）の蓋（４）に設けた第一の孔部（４ａ）に
試薬毛細管（３）を挿入し、毛細管（３）が挿入された
反応容器（１）を遠心分離に付して試薬毛細管（３）の
内容物を反応容器（１）の底部に取り出し、ついで反応
させるサンプルを反応容器（１）に加えることを特徴と
する方法。1. A method for using a reagent capillary (3) filled with reagents separated from each other in carrying out a biochemical reaction in which the reagents cannot be mixed in advance, in which a lid (4) of the reaction vessel (1) is used. The reagent capillary tube (3) is inserted into the first hole (4a) provided in the tube, and the reaction vessel (1) in which the capillary tube (3) is inserted is subjected to centrifugation to remove the contents of the reagent capillary tube (3). A method characterized in that a sample to be taken out to the bottom of the reaction vessel (1) and then reacted is added to the reaction vessel (1).
（１）の蓋（４）に設けた第二の孔部（４ａ）に挿入し
て、第二の遠心分離と行う「請求項１」記載の方法。2. The method according to claim 1, wherein a capillary tube containing a sample is inserted into a second hole (4a) provided in a lid (4) of a reaction container (1) and a second centrifugation is performed. the method of.
遠心分離前に解凍させる「請求項１または２」記載の方
法。3. The reagent solution (6 to 13) is frozen,
The method according to claim 1 or 2, which comprises thawing before centrifugation.
端が孔部（４ａ）内に挿入されるまでは保護カバー（１
５）が適合され、その下端は反応容器（１）内に毛細管
上の固定溝（５）が孔部（４ａ）の縁部にかみ合うまで
下方に挿入される「請求項１〜３」に記載の方法。4. A protective cover (1) on the upper end of the reagent capillary (3) until its lower end is inserted into the hole (4a).
5) is adapted, the lower end of which is inserted in the reaction vessel (1) downward until the fixing groove (5) on the capillary is engaged with the edge of the hole (4a). the method of.
通過可能の膜を通して挿入される「請求項４」記載の方
法。5. A method according to claim 4, wherein the reagent capillaries (3) are inserted through a permeable membrane covering the holes (4a).
互いに分離されている試薬毛細管（３）、およひ１個ま
たは２個以上の孔部（４ａ）が設けられた蓋（４）を有
する反応容器（１）からなり、使用時には反応容器
（１）の蓋（４）に設けられた孔部（４ａ）に試薬毛細
管（３）が挿入されることを意図した試薬毛細管と反応
容器の組合せ。6. Reagent solutions having different predetermined volumes are provided.
It comprises a reagent capillary tube (3) separated from each other , and a reaction vessel (1) having a lid (4) provided with one or more hole portions (4a), and in use, the reaction vessel (1) (2) A combination of a reagent capillary and a reaction container intended for insertion of the reagent capillary (3) into the hole (4a) provided in the lid (4).
て、試薬毛細管（３）が孔部（４ａ）に挿入される前
に、解凍される「請求項６」記載の組合せ。7. A combination according to claim 6, wherein the reagent solution (6 to 13) is frozen and thawed before the reagent capillary (3) is inserted into the hole (4a).
定溝（５）が、その上方端に保護カバー（１５）が設け
られている「請求項６または７」記載の組合せ。8. The combination according to claim 6, wherein the reagent capillary (3) is provided with a fixing groove (5) at its lower end and a protective cover (15) at its upper end.
覆われている「請求項６〜８」記載の組合せ。9. The combination according to claim 6, wherein the hole (4a) is covered with a permeable membrane (4b).
ための１種または２種以上の核酸および／または酵素か
らなる「請求項６〜９」記載の組合せ。10. The combination according to claim 6, wherein the reagent solution (6 to 13) comprises one or more nucleic acids and / or enzymes for a specific reaction.
液、すべて特定のＰＣＲ反応用に計算された試薬、ｄＣ
ＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＡＴＰ，ｄＴＴＰ，２種以上のオリ
ゴヌクレオチド、および熱安定性ＤＮＡポリメラーゼか
らなる「請求項１０」記載の組合せ。11. Reagent solutions (6-13) are PCR buffers, reagents calculated for all specific PCR reactions, dC.
The combination according to claim 10, which comprises TP, dGTP, dATP, dTTP, two or more kinds of oligonucleotides, and a thermostable DNA polymerase.
はわずかしか吸収しない材料で作られる「請求項５〜１
１」記載の組合せ。12. The reaction vessel (1) is made of a material that absorbs no or little UV light.
1 ”combination.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9001772-4 | 1990-05-16 | ||
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