JPH0645615B2 - Kazusamycin B, its production method and its use - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、抗腫瘍作用および抗真菌作用を有する新規な
カズサマイシンＢ、その製造法およびそれを含有してな
る抗腫瘍剤又は抗真菌剤に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial Field of Application] The present invention relates to a novel kazusamycin B having antitumor and antifungal activity, a method for producing the same, and an antitumor or antifungal agent containing the same. It is about.

〔従来の技術〕[Conventional technology]

抗腫瘍作用および抗真菌作用を有する微生物産生の抗生
物質としては、例えば制癌性抗生物質８１−４８４〔特
開昭６０−１４１２９３号公報、ジャーナル・オブ・ア
ンティバイオティクス(Journal of Antibiotics)第３７
巻、第７０６頁−第７１１頁（１９８３年）参照〕が知
られている。またこの抗生物質と類似した構造を有し、
かつ抗真菌作用を有する微生物産生の抗生物質として
は、レプトマイシン類〔特開昭５５−１１８４９９号公
報；ジャーナル・オブ・アンティバイオティクス(Journ
al of Antibiotics)第３６巻、第６３９頁−第６５０頁
（１９８３年）〕が知られている。Examples of microorganism-produced antibiotics having an antitumor action and an antifungal action include, for example, anticancer antibiotics 81-484 [JP-A-60-141293, Journal of Antibiotics No. 37].
Vol., Pp. 706-711 (1983)]. It also has a structure similar to this antibiotic,
And as microorganism-produced antibiotics having antifungal action, leptomycins [JP-A-55-118499; Journal of Antibiotics (Journ
al of Antibiotics, Vol. 36, pp. 639-650 (1983)].

〔発明が解決しようとする問題点〕[Problems to be solved by the invention]

本発明は新規で有用な抗腫瘍生抗生物質を提供すること
を目的とするものである。The present invention aims to provide a novel and useful antitumor antibiotic.

〔問題点を解決するための手段〕[Means for solving problems]

本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として種々
の土壌から菌株を分離し、その生産する代謝産物につい
て研究を続けた結果、千葉県で採取した土壌から分離し
た菌株８１−４８４の培養物中に、一部の真菌類に対し
て抗菌活性を示し、しかもＰ３８８マウス白血病および
ザルコーマ１８０細胞の増殖抑制作用を有する物質が産
生されることを見い出した。さらにまた、本発明のカズ
サマイシンＢは、抗生物質８１−４８４よりも安全域の
広い抗腫瘍剤であることを見い出した。その理化学的性
質を有する物質は他に報告がないことから、この物質を
カズサマイシンＢと呼称することにした。本発明は、か
かる知見に基いて完成されたものである。The present inventors isolated strains from various soils for the purpose of searching for new antibiotics, and as a result of continuing research on metabolites produced by the strains, strain 81-484 isolated from soils collected in Chiba Prefecture It was found that a substance having antibacterial activity against some fungi and having a growth inhibitory action on P388 mouse leukemia and Sarcoma 180 cells was produced in the culture. Furthermore, it was found that the kazusamycin B of the present invention is an antitumor agent having a wider safety margin than the antibiotic 81-484. Since there is no other report of the substance having the physicochemical properties, this substance is called Kazusamycin B. The present invention has been completed based on such findings.

本発明は、後記の化学構造式及び理化学的性質を有する
カズサマイシンＢまたはその塩、ストレプトマイセス属
に属するカズサマイシンＢ生産菌を栄養培地に培養し、
該培養中にカズサマイシンＢを蓄積せしめ、該培養物か
らカズサマイシンＢを採取することを特徴とするカズサ
マイシンＢまたはその塩およびカズサマイシンＢまたは
その塩を有効成分として含有することを特徴とする抗腫
瘍剤または抗真菌剤に関するものである。The present invention cultivates kazusamycin B or a salt thereof having the chemical structural formula and physicochemical properties described below, a kazusamycin B-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces in a nutrient medium,
Kazusamycin B is accumulated in the culture, and Kazusamycin B is collected from the culture, which contains Kazusamycin B or a salt thereof and Kazusamycin B or a salt thereof as an active ingredient. It relates to an antitumor agent or an antifungal agent.

カズサマイシンＢ生産菌は、ストレプトマイセス属に属
するが、例えば本発明者らが分離したストレプトマイセ
ス属に属する菌株８１−４８４は、本発明に最も有効に
使用される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性質を
示すと次ぎの通りである。Kazusamycin B-producing bacteria belong to the genus Streptomyces. For example, the strain 81-484 belonging to the genus Streptomyces isolated by the present inventors is an example of the strain most effectively used in the present invention. The mycological properties of this strain are as follows.

(a)．形態的特徴 ８１−４８４菌株は多くの寒天平板培地上で菌糸状で豊
富に発育し、その基生菌糸の分断は観察されない。気菌
糸が形成される場合は、その胞子柄が直線状またはいわ
ゆる不完全型のら線状であり、その先端の２０個以上の
連鎖状の胞子が観察され、胞子のうは観察されない。そ
の胞子の表面は平滑であり、長径約０．８μｍ×短径約
０．４μの楕円径である。(a). Morphological features The 81-484 strain develops in a hyphaeous and abundant manner on many agar plates, and no disruption of the basal hyphae is observed. When aerial hyphae are formed, the spore stalk is linear or a so-called incomplete type of streak, 20 or more linked spores at the tip thereof are observed, and sporangia are not observed. The surface of the spores is smooth and has an elliptic diameter with a major axis of about 0.8 μm and a minor axis of about 0.4 μm.

(b)．次の各培地における生育状態 各培地における生育状態（２７℃で３週間培養後の各培
地における生育状態）の観察は第１表の通りである。(b). Table 1 below shows the observation of the growth state in each medium (growth state in each medium after culturing at 27 ° C for 3 weeks).

(c)．次の各生理学的性質 生育温度範囲：２０〜３０℃で生育が可能であり、２
７℃付近が最適である。 (c). The following physiological properties: Growth temperature range: It is possible to grow at 20 to 30 ° C.
The optimum temperature is around 7 ° C.

ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチン培
地上）：陰性 スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
上）：陰性 脱脂牛乳の凝固、ペチトン化（１０％スキムミルク培
地上）：凝固は陰性であり、ペプトン化は陽性である。Liquefaction of gelatin (on glucose / peptone / gelatin medium): Negative Hydrolysis of starch (on starch / inorganic salt agar medium): Negative Coagulation of defatted milk, pettitonization (on 10% skim milk medium): Negative coagulation, Peptonization is positive.

メラニン様色素の生成（チロシン寒天培地およびペプ
トン・イースト・鉄寒天培地上）：陰性 硫化水素の生成（ペプトン・イースト鉄寒天培地
上）：陰性 亜硫酸塩の生成（硫酸塩培地上）：陽性 (d)．次の各炭素源の利用性 炭素源の利用性は、プリドハム・コドリープ寒天培地上
２７℃で１ケ月間培養した後に観察した。なお、はよ
く利用する。＋は利用する。−は利用しない意味をそれ
ぞれ示す。Formation of melanin-like pigment (on tyrosine agar and peptone-yeast-iron agar): negative Hydrogen sulfide production (on peptone-yeast iron agar): negative Sulfite formation (sulfate medium): positive (d ). The following availability of carbon sources The availability of carbon sources was observed after culturing on Pridham-Koridoup agar medium at 27 ° C. for 1 month. In addition, is often used. + Is used. -Indicates meanings not used.

Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース Ｄ−フラクトース − シュクロース − イノシトール ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ラフィノース − Ｄ−マンニトール − (e)．細胞壁の組成 Beckerらの方法〔Applied Microbiology，第１３巻、第
２３６頁−第２４３頁（１９６５年）〕に基づいて分析
した結果、．ｃ．型のジアミノピメリン酸が検出され
た。L-arabinose-D-xylose-D-glucose D-fructose-sucrose-inositol + L-rhamnose + raffinose-D-mannitol- (e). Cell wall composition As a result of analysis based on the method of Becker et al. [Applied Microbiology, 13: 236-243 (1965)] ,. c. A form of diaminopimelic acid was detected.

以上の菌学的性質から、本８１−４８４菌株はストレプ
トマイセス属に属する菌株であることは明らかである。
しかしながら、どの種に属するかは明らかにできないの
で、取りあえず本菌株をストレプトマイセス（Streptom
yces）８１−４８４と命名することにする。なお、本菌
株は、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に微
工研菌条寄第５７１号（ＦＥＲＭ−ＢＰ５７１）として
寄託されている。From the above-mentioned mycological properties, it is clear that the 81-484 strain belongs to the genus Streptomyces.
However, since it cannot be clarified to which species it belongs, we decided to use this strain for the time being.
yces) 81-484. This strain has been deposited in the Institute of Microbial Technology, Ministry of International Trade and Industry, Institute of Microbial Technology, as Microindustrial Research Institute of Microbiology No. 571 (FERM-BP571).

以上、カズサマイシンＢについて説明したが、放線菌の
一般的性状として菌学上の性状は極めて変異し易く、一
定したものではなく、自然的にあるいは通常行われる紫
外線照射、Ｘ線照射または変異誘導剤、例えばＮ−メチ
ル−Ｎ′−トリロソグアニジン、エチルメタンスルホネ
ートなどを用いる人工的変異手段により変異することは
周知の事実であり、このような人工的変異株も含め、ス
トレプトマイセス属に属し、カズサマイシンＢを生産す
る能力を有する菌株はすべて本発明に使用することがで
きる。As described above, Kazusamycin B has been described. However, as a general property of actinomycetes, the mycological properties are highly variable and are not constant, and the UV irradiation, X-ray irradiation, or mutation induction that is performed naturally or normally is performed. It is a well-known fact that mutation is carried out by an artificial mutagenesis method using an agent, for example, N-methyl-N'-trirosoguanidine, ethyl methanesulfonate, etc., and such artificial mutant strains also belong to the genus Streptomyces. All strains belonging to the family and capable of producing kazusamycin B can be used in the present invention.

本発明において、先ずストレプトマイセス属に属するカ
ズサマイシンＢ生産菌が適当な培地に培養される。本菌
の培養においては、通常放線菌の培養に使用される培地
ならばいずれも使用することができる。培地としては、
微生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒素源、さらに
必要に応じて無機酸塩等を含有させた栄養培地が使用さ
れる。同化し得る炭素源としては、ブドウ糖、糖蜜、澱
粉、デキストリン、セルロース、コーン・スティープ・
リカー、グリセリン、有機酸などが用いられる。同化し
得る窒素源としては、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・スティープ・リカー、
綿実粕、カゼイン、大豆、蛋白分解物、アミノ酸、尿素
などの有機窒素源、硝酸塩、アンモニウム塩などの無機
窒素化合物が単独または組み合わせて用いられる。その
他、必要に応じてナトリウム塩、カリウム塩、リン酸
塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などの無機塩類が添
加される。さらに、培地には、必要に応じて、本菌の生
育やカズサマイシンＢの生産を促進する微量栄養素、発
育促進物質を適当に添加してもよい。In the present invention, first, a kazusamycin B-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces is cultured in an appropriate medium. In culturing the present bacterium, any medium can be used as long as it is a medium usually used for culturing actinomycetes. As the medium,
A nutrient medium containing a carbon source that can be assimilated by microorganisms, a nitrogen source that can be digested, and, if necessary, an inorganic acid salt is used. Assimilable carbon sources include glucose, molasses, starch, dextrin, cellulose, corn steep
Liquor, glycerin, organic acid and the like are used. As nitrogen sources that can be assimilated, peptone, meat extract, yeast extract, dry yeast, soybean powder, corn steep liquor,
Organic nitrogen sources such as cottonseed meal, casein, soybeans, proteolytic products, amino acids and urea, and inorganic nitrogen compounds such as nitrates and ammonium salts are used alone or in combination. In addition, inorganic salts such as sodium salt, potassium salt, phosphate salt, calcium salt, magnesium salt and the like are added if necessary. Furthermore, if necessary, a micronutrient or a growth promoting substance that promotes the growth of the bacterium or the production of kazusamycin B may be appropriately added to the medium.

培養は通常振盪または通気攪拌培養などの好気的条件下
で行うのが好ましい。工業的には深部通気攪拌培養を行
うのが好ましい。培地のpHは中性付近で培養を行うのが
好ましい。培養温度は２０〜３７℃でも行い得るが、通
常は２４〜３０℃、好ましくは２７℃に保つのがよい。
培養時間、液体培養の場合、通常４〜６時間培養を行う
と、本発明によるカズサマイシンＢが生産蓄積される。
好ましくは、培養液中の蓄積量が最大に達した時に培養
を終了すればよい。これらの培地組成、培地の液性、培
養温度、攪拌温度、通気量などの培養条件は使用する菌
株の種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得ら
れるように適宜調節、選択されることはいうまでもな
い。液体培養において発泡があるときは、シリコン油、
植物油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用してもよ
い。このようにして得られた培養物中に蓄積されたカズ
サマイシンＢは主として培養濾液中に含有されているの
で、培養物を必要に応じて濾過補助剤例えばセライト、
ハイフロスーパーセルなどを加えて濾過するか、又は遠
心分離して培養濾液と菌体とに分離し、その培養濾液か
らカズサマイシンＢを採取するのが有利である。Culturing is preferably carried out under aerobic conditions such as shaking or aeration-agitation culture. Industrially, it is preferable to carry out deep aeration stirring culture. It is preferable to culture the medium at a pH of around neutral. The culture temperature may be 20 to 37 ° C., but it is usually 24 to 30 ° C., preferably 27 ° C.
Cultivation time, in the case of liquid culture, usually, when the culture is performed for 4 to 6 hours, the kazusamycin B according to the present invention is produced and accumulated.
Preferably, the culture may be terminated when the accumulated amount in the culture medium reaches the maximum. Culture conditions such as medium composition, medium liquidity, culture temperature, stirring temperature, and aeration amount should be appropriately adjusted and selected so as to obtain preferable results depending on the type of strain to be used and external conditions. Needless to say. When there is foaming in liquid culture, silicone oil,
Defoaming agents such as vegetable oils and surfactants may be used as appropriate. Since the kazusamycin B accumulated in the culture thus obtained is mainly contained in the culture filtrate, the culture may be filtered with a filter aid such as Celite, if necessary.
It is advantageous to add Hyflo Supercell or the like to filter or centrifuge to separate into a culture filtrate and cells and collect Kazusamycin B from the culture filtrate.

また、本発明のカズサマイシンＢは菌体にも含まれるの
で、菌体からメタノールなどの低級アルコール、アセト
ンなどでカズサマイシンＢを抽出し、得られた抽出液を
減圧濃縮して該有機溶媒を除去した後、以下に述べる培
養濾過からの精製を進めることができる。培養濾液から
カズサマイシンＢの分離精製を行うためには、カズサマ
イシンＢが後述のようにヘキサンおよび水に不溶であ
り、メタノール、エタノールなどのアルコール系溶媒、
ジクロルメタン、クロロホルムなどの塩素化メタン系溶
媒、アセトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン系
溶媒などの多くの有機溶媒に可溶である酸性物質である
ので、これらの性質を利用した精製法が用いられる。通
常、培養濾液を非親水性有機溶媒、例えばクロロホル
ム、メチルイソブチルケトン、酢酸エチル、酢酸ブチル
などで抽出することにより、カズサマイシンＢが有機溶
媒層に転溶される。上記抽出操作を行う際に、培養濾液
を予め、pH３．０〜５．０の範囲に調節するのが好まし
い。このようにして得られた有機溶媒層は、必要に応じ
て金属イオンなどを除去するために希薄なエチレンジア
ミン四酢酸塩水溶液で洗浄した後、種々の脱水剤例えば
無水硫酸ナトリウム、無水硫酸マグネシウム、ビーズゲ
ルなどを加えて脱水される。脱水された有機溶媒層を減
圧下で濃縮する。この濃縮操作においてカズサマイシン
Ｂは安定な物質であるが、通常加熱温度を６０℃以下と
なるように行うのが好ましい。残渣にヘキサン、石油エ
ーテルなどの有機溶媒を加えてカズサマイシンＢを沈澱
させることができる。得られた沈澱物を数回ヘキサンな
どで洗浄後、吸引濾過または遠心分離によりカズサマイ
シンＢを褐色の粗製物として採取することができる。Further, since the kazusamycin B of the present invention is also contained in the bacterial cells, the kazusamycin B is extracted from the bacterial cells with a lower alcohol such as methanol or acetone, and the obtained extract is concentrated under reduced pressure to remove the organic solvent. After removal, purification from culture filtration as described below can proceed. In order to separate and purify kazusamycin B from the culture filtrate, kazusamycin B is insoluble in hexane and water as described below, and an alcohol solvent such as methanol or ethanol,
Since it is an acidic substance that is soluble in many organic solvents such as chlorinated methane-based solvents such as dichloromethane and chloroform, ketone-based solvents such as acetone and methyl isobutyl ketone, purification methods utilizing these properties are used. Usually, the kazusamycin B is redissolved in the organic solvent layer by extracting the culture filtrate with a non-hydrophilic organic solvent such as chloroform, methyl isobutyl ketone, ethyl acetate or butyl acetate. When performing the above extraction operation, it is preferable to adjust the culture filtrate in advance to a pH range of 3.0 to 5.0. The organic solvent layer thus obtained is washed with a dilute aqueous solution of ethylenediaminetetraacetate to remove metal ions and the like, if necessary, and then various dehydrating agents such as anhydrous sodium sulfate, anhydrous magnesium sulfate and bead gel. It is dehydrated by adding. The dehydrated organic solvent layer is concentrated under reduced pressure. In this concentration operation, kazusamycin B is a stable substance, but it is usually preferable to carry out heating at a temperature of 60 ° C. or lower. Kazusamycin B can be precipitated by adding an organic solvent such as hexane or petroleum ether to the residue. After washing the obtained precipitate several times with hexane or the like, kazusamycin B can be collected as a brown crude product by suction filtration or centrifugation.

上記の粗製物をさらに精製するためには、カズサマイシ
ンＢと混合物との溶解度の差や、混じり合わない二液層
間の分配率の差や、各種吸着担体に対する吸着力の差を
利用したクロマトグラフィーなど多くの手段が可能であ
るが、特にクロマトグラフィーはカズサマイシンＢの精
製には非常に有効な方法である。カズサマイシンＢの精
製に有効なクロマトグラフィーとしては、例えばシリカ
ゲル、アルミナ、活性炭、セルロース、ヒドロキシアパ
タイド、ＨＰ−２０などの吸着剤による吸着クロマトグ
ラフィー、シラン化シリカゲル、オクタデシルシラン化
シリカゲルなどを用いる逆相分配クロマトグラフィー、
セファデックスＬＨ−２０、トヨパールなどを用いる分
子篩にもとずくゲル濾過クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ
セルロース、ＤＥＡＥセファデックス、ＤＥＡＥトヨパ
ールなどを用いるイオン交換クロマトグラフィーなどが
あげられる。In order to further purify the above crude product, chromatography using the difference in solubility between Kazusamycin B and the mixture, the difference in distribution ratio between immiscible two liquid layers, and the difference in adsorption force for various adsorption carriers. Although many means are possible, chromatography in particular is a very effective method for purifying kazusamycin B. Chromatography effective for the purification of Kazusamycin B includes, for example, adsorption chromatography using an adsorbent such as silica gel, alumina, activated carbon, cellulose, hydroxyapatide, HP-20, silanized silica gel, octadecyl silanized silica gel and the like. Phase partition chromatography,
Gel filtration chromatography based on molecular sieves such as Sephadex LH-20, Toyopearl, DEAE
Examples include ion exchange chromatography using cellulose, DEAE Sephadex, DEAE Toyopearl and the like.

カズサマイシンＢは、これらのクロマトグラフィーや電
気泳動、向流分配、限外濾過、蒸溜などの手段を単独あ
るいは任意の順序に組み合わせるか、または反復して用
いることにより分離精製することができる。例えば前記
粗製物を少量のクロロホルム、ベンゼンなどに溶かし、
これを予め充填されたシリカゲルのカラムに吸着させ、
ヘキサン−アセトン系混合溶媒を用いてカラムクロマト
グラフィーを行い、その活性画分を集め、減圧濃縮せし
める。これをさらに少量のクロロホルムなどに溶解し、
シリカゲルに吸着させ、クロロホルム−メタノール系混
合溶媒を用いてカラムクロマトグラフィーを行い、その
活性画分を集め、減圧濃縮後、少量のメタノールに溶か
し、これを逆層シリカゲルカラムに吸着させ、メタノー
ル−水系混合溶媒でカラムクロマトグラフィーを行うこ
とによりカズサマイシンＢを分離精製することができ
る。Kazusamycin B can be separated and purified by these means such as chromatography, electrophoresis, countercurrent distribution, ultrafiltration, distillation and the like, alone or in combination in any order, or by repeatedly using them. For example, dissolve the crude product in a small amount of chloroform, benzene, etc.,
Adsorb this to a pre-packed silica gel column,
Column chromatography is performed using a hexane-acetone mixed solvent, and the active fractions are collected and concentrated under reduced pressure. Dissolve this in a small amount of chloroform,
Adsorb on silica gel, perform column chromatography using a chloroform-methanol mixed solvent, collect the active fractions, concentrate under reduced pressure, dissolve in a small amount of methanol, and adsorb this on a reverse layer silica gel column, and then methanol-water system. Kazusamycin B can be separated and purified by performing column chromatography with a mixed solvent.

このようにして得られたカズサマイシンＢは酸性物質で
あるから、公知の方法により塩に変換し得る。The thus-obtained Kazusamycin B is an acidic substance, and thus can be converted into a salt by a known method.

このような塩としては、医薬的に許容し得る非毒性塩が
あげられ、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアル
カリ金属塩、カルシウム塩、公知の有機アミンとの塩な
どがあげられる。Examples of such a salt include pharmaceutically acceptable non-toxic salts such as alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, calcium salt, and known salts with organic amines.

次に、以上の如くして得られたカズサマイシンＢの理化
学的性質について述べる。Next, the physicochemical properties of Kazusamycin B obtained as described above will be described.

元素組成；C₃₂H₄₆O₇（高分解能マススペクトルによ
る） 分子量；５４２〔ＦＤＳＩマススペクトルによる〕 融点；５２〜５５℃ 比旋光度：▲〔α〕²⁰ _D▼＝−８６．９５℃（ｃ＝
０．１、メタノール） 紫外線吸収スペクトル；第１図の通り（メタノール中
で測定） 赤外線吸収スペクトル；第２図の通り（ＫＢｒディス
ク法で測定）^１ Ｈ−NMRスペクトル；第３図の通り（重クロロホル
ム中３６０MHzで測定）^１３ ｃ−NMRスペクトル；第４図の通り（重クロロホ
ルム中９０．５６MHzで測定） 溶剤に対する溶解性；ジエチルエーテル、メタノー
ル、エタノール、ジクロロメタン、クロロホルム、酢酸
エチル、酢酸ブチル、アセトンおよびベンゼンに可溶、
ヘキサン、水に不溶。Elemental composition: C ₃₂ H ₄₆ O ₇ (according to high resolution mass spectrum) Molecular weight: 542 [according to FDSI mass spectrum] Melting point: 52 to 55 ° C. Specific rotation: ▲ [α] ²⁰ _D ▼ = −86.95 ° C. (c =
0.1, methanol) UV absorption spectrum; as shown in FIG. 1 (measured in methanol) infrared absorption spectrum; as shown in FIG. 2 (measured by KBr disk method) ¹ H-NMR spectrum; as shown in FIG. ¹³ c-NMR spectrum; as shown in FIG. 4 (measured in deuterated chloroform at 90.56 MHz) Solubility in solvent; diethyl ether, methanol, ethanol, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, butyl acetate, acetone And soluble in benzene,
Insoluble in hexane and water.

塩基性、酸性、中性の区別；酸性物質 物質の色；淡黄色の粉末 呈色反応；ヨード発色、三塩化アンチモン反応に陽
性。Distinction between basic, acidic and neutral; acidic substance Color of substance; pale yellow powder Color reaction; iodine color development, antimony trichloride reaction positive.

ニンヒドリン反応、アントロン−硫酸反応、塩化第二鉄
反応に陰性。Ninhydrin reaction, anthrone-sulfuric acid reaction, ferric chloride reaction negative.

シリカゲル薄層クロマトグラフィー：（担体メルク社
製、シリカゲル６０）；Ｒｆ値＝０．１７（展開溶媒：
クロロホルム−メタノール＝１０：１）；Ｒｆ値＝０．
２３（展開溶媒：酢酸エチル−メタノール＝４０：１） 以上の理化学的性質から、本発明のカズサマイシンＢの
化学構造は式〔Ｉ〕の如く決定される。Silica gel thin layer chromatography: (Carrier Merck, silica gel 60); Rf value = 0.17 (developing solvent:
Chloroform-methanol = 10: 1); Rf value = 0.
23 (developing solvent: ethyl acetate-methanol = 40: 1) Based on the above physicochemical properties, the chemical structure of kazusamycin B of the present invention is determined by the formula [I].

その名称は、１９−（３，６−ジヒドロ−３−メチル−
６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−６−ヒドロキ
シ−９−ヒドロキシメチル−３，５，７，１１，１５，
１７−ヘキサメチル−８−オキソ−２，１０，１２，１
６，１８−ノナデカペンタン酸である。 Its name is 19- (3,6-dihydro-3-methyl-
6-oxo-2H-pyran-2-yl) -6-hydroxy-9-hydroxymethyl-3,5,7,11,15,
17-hexamethyl-8-oxo-2,10,12,1
It is 6,18-nonadecapentanoic acid.

上記の通り、本発明のカズサマイシンＢは、抗真菌作用
および抗腫瘍作用を有することから、真菌感染症および
腫瘍の治療剤として有用である。As described above, the kazusamycin B of the present invention has an antifungal action and an antitumor action, and thus is useful as a therapeutic agent for fungal infections and tumors.

前記の理化学的性質を有するカズサマイシンＢと比較的
類似している物質としては抗生物質８１−４８４および
抗生物質レプトマイシン類があげられる。しかしなが
ら、カズサマイシンＢの¹Hおよび¹³C−ＮＭＲスペクト
ルがこれらの物質のものとは明らかに異ることから、本
発明のカズサマイシンＢは新規な抗腫瘍性物質であると
認められる。The substances relatively similar to kazusamycin B having the above-mentioned physicochemical properties include antibiotics 81-484 and antibiotics leptomycins. However, since the ¹ H- and ¹³ C-NMR spectra of kazusamycin B are clearly different from those of these substances, the kazusamycin B of the present invention is recognized as a novel antitumor substance.

本発明のカズサマイシンＢまたはその塩を有効成分とし
て抗腫瘍剤または抗真菌剤として使用する場合は、相容
性の薬学的に許容し得る担体とともに薬学的組成物とす
ることができる。これらの組成物は、所望の投与方法に
対して適当な薬学的形態のいずれかになし得る。このよ
うな形態の例としては、錠剤、カプセル、ピル、粉剤お
よび顆粒のような経口投与に対する固体形態、溶液、懸
濁液、シロップおよびエリキサーのような局所または経
口投与に対する液状形態および滅菌溶液、懸濁液または
エマルジョンのような非経口投与に適した形態を包含す
る。When the kazusamycin B of the present invention or a salt thereof is used as an active ingredient as an antitumor agent or antifungal agent, it can be made into a pharmaceutical composition together with a compatible pharmaceutically acceptable carrier. These compositions may be in any pharmaceutical form suitable for the desired mode of administration. Examples of such forms are solid forms for oral administration such as tablets, capsules, pills, powders and granules, liquid forms for topical or oral administration such as solutions, suspensions, syrups and elixirs and sterile solutions, It includes forms suitable for parenteral administration such as suspensions or emulsions.

本発明の有効成分を用いて薬学的組成物を調整する場合
に使用される相容性の薬学的に許容し得る担体は、固体
または液体である。固体形態の製剤は、粉剤、錠剤、分
散性顆粒、カプセル、カシエーおよび坐剤を包含する。
固体の担体は希釈剤、風味剤、可溶化剤、結合剤または
錠剤崩壊剤として作用する１種またはそれ以上の物質で
あり得る。また、それはカプセル化物質であってもよ
い。粉剤においては、微細な活性化合物と混合される微
細な固体である。錠剤においては、活性化合物を必要な
結合性を有する担体と適当な割合で混合し、そして所望
の形状および大きさに圧搾する。粉剤および錠剤は、好
適な有効成分５ないし７０％を含有する。適当な固体担
体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、
タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱
粉、ゼラチン、トラガントゴム、メチルセルロース、ナ
トリウム、カルボキシメチルセルロース、低融点ワック
ス、ココアバターなどである。Compatible pharmaceutically acceptable carriers used in preparing pharmaceutical compositions with the active ingredients of the present invention are solids or liquids. Solid form preparations include powders, tablets, dispersible granules, capsules, cachets and suppositories.
Solid carriers can be one or more substances that act as diluents, flavoring agents, solubilizers, binders or tablet disintegrating agents. It may also be an encapsulating material. In powders, a finely divided solid that is in admixture with the finely divided active compound. In tablets, the active compound is mixed with the carrier having the necessary binding properties in suitable proportions and compacted in the shape and size desired. Dusts and tablets contain suitable active ingredients in the range 5 to 70%. Suitable solid carriers are magnesium carbonate, magnesium stearate,
Talc, sugar, lactose, pectin, dextrin, starch, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium, carboxymethylcellulose, low melting wax, cocoa butter and the like.

坐剤の製造に対しては、脂肪酸グリセライドまたはココ
アバターの混合物のような低融点ワックスを始めに融解
し、そして活性成分を攪拌によってその中に均等に分散
させる。次に融解した均質な混合物を所定の大きさの型
に注入し、冷却し、固化させる。For the production of suppositories, a low melting wax, such as a mixture of fatty acid glycerides or cocoa butter, is first melted and the active ingredient is dispersed evenly therein by stirring. The molten homogeneous mixture is then poured into molds of a given size, cooled and solidified.

非経口または経口投与に使用される液状形態の製剤とし
ては、例えば溶液、懸濁液およびエマルジョンがあげら
れる。より具体的にはその非経口投与に使用される液状
製剤としては、水また水−プロピレングリコール溶液を
あげることができ、一方経口使用に適した液状製剤とし
ては、所望に応じて適当な着色剤、風味剤、安定剤およ
び濃化剤を加えることのある、水溶液、並びに微細な活
性成分を粘稠な物質、例えば天然または合成ゴム、樹
脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセ
ルロースおよび他の公知の懸濁剤とともに水に分散した
水性懸濁液があげられる。これらの液状形態の製剤は、
適当な溶剤に分散または溶解させることにより容易に調
整される。Liquid form preparations used for parenteral or oral administration include, for example, solutions, suspensions and emulsions. More specifically, the liquid preparation used for parenteral administration may be water or water-propylene glycol solution, while the liquid preparation suitable for oral use may be a suitable coloring agent as desired. Aqueous solutions, with the addition of flavors, stabilizers and thickeners, as well as finely divided active ingredients, viscous substances such as natural or synthetic gums, resins, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and other known suspending agents. In addition, an aqueous suspension dispersed in water can be given. These liquid formulations are
It is easily adjusted by dispersing or dissolving it in a suitable solvent.

製剤の単位使用における有効成分の量は、約０．１〜５
００mg、好適には１〜１００mgである。なお。これらの
製剤は、必要ならば、他の相容性の治療剤、例えば他の
抗腫瘍剤、抗菌剤または抗真菌剤を含有することもでき
る。The amount of the active ingredient in the unit use of the preparation is about 0.1-5.
The amount is 00 mg, preferably 1 to 100 mg. Incidentally. These formulations may, if desired, also contain other compatible therapeutic agents such as other anti-tumor, antibacterial or antifungal agents.

治療に供する場合における使用量の範囲は、経口投与の
場合における１日あたり体重１kgに付１〜５００mgであ
り、一方経口投与の場合には１日あたり体重１kgに付
０．１〜１００mgである。しかしながら、この使用量は
患者の年齢、性別、体重、症状などにより適宜増減させ
ることができる。When used for treatment, the dose range is 1 to 500 mg / kg body weight / day for oral administration, while 0.1-100 mg / kg body weight / day for oral administration. . However, this amount of use can be appropriately increased or decreased depending on the age, sex, weight, symptoms of the patient.

〔発明の効果〕〔The invention's effect〕

次に本発明のカズサマイシンＢの生物学的性質について
述べる。Next, the biological properties of the kazusamycin B of the present invention will be described.

(1)抗菌スペクトル 試験化合物のＭＩＣは寒天希釈法により決定された。即
ち、順次希釈された試験化合物の水溶液１．０ｍをシ
ャーレに注ぎ、次に試験菌が細菌である場合にはミュー
ラ・ヒントン寒天培地９．０ｍを、一方試験菌が真菌
である場合には、サブロー寒天培地９．０ｍを注いで
混ぜる。その混合寒天プレート上に、試験菌の混濁液
（約１０^６ＣＦＵ／ｍ）を塗沫する。３７℃で一夜培
養した後、試験菌の増殖を完全に阻害する試験化合物の
濃度を、最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）とする。その測定
結果を第２表に示す。なお、（＊）印を付した試験菌に
ついては、栄養寒天培地（日水製）を用いて、２８℃で
２日間培養して測定した。(1) Antibacterial spectrum The MIC of the test compound was determined by the agar dilution method. That is, 1.0 m of a serially diluted aqueous solution of a test compound was poured into a petri dish, and then, when the test bacterium was a bacterium, 9.0 m of Mueller Hinton agar medium, while when the test bacterium was a fungus, Pour 9.0 m of Sabouraud agar medium and mix. A suspension (about 10 ⁶ CFU / m) of the test bacteria is spread on the mixed agar plate. After culturing at 37 ° C. overnight, the concentration of the test compound that completely inhibits the growth of the test strain is defined as the minimum growth inhibitory concentration (MIC). The measurement results are shown in Table 2. The test bacteria marked with (*) were measured by culturing at 28 ° C for 2 days using a nutrient agar medium (manufactured by Nissui).

上記の第２表から明らかな如く、カズサマイシンＢは、
一部の真菌類に対して抗菌活性を示すが、細菌に対して
は抗菌活性を示さない。 As is clear from Table 2 above, Kazusamycin B is
It shows antibacterial activity against some fungi, but not against bacteria.

(2)Ｐ３８８マウス白血病に対する治療効果 ＢＤＦ_１マウス（雌、６週令）の腹腔内Ｐ３８８細胞１
×１０^５個を移植後、１日、５日および９日目に１日１
回所定の投与量の試験化合物を腹腔内に注射し、移植後
の生存日数を指標に試験化合物の抗腫瘍効果を検討し
た。なお、延命率は下記の計算式により求め、その結果
を第３表に示す。(2) Therapeutic effect on P388 mouse leukemia Intraperitoneal P388 cell 1 of BDF ₁ mouse (female, 6 weeks old)
1 day on the 1st, 5th and 9th day after transplantation of 10 ⁵ cells.
A predetermined dose of the test compound was intraperitoneally injected, and the antitumor effect of the test compound was examined using the survival days after transplantation as an index. The life extension rate was calculated by the following formula, and the results are shown in Table 3.

(3)急性毒性試験 ＩＣＲマウス（雌、５週令）に試験化合物を種々の投与
量で腹腔内に注射後、１週間観察し、急性毒性について
検討した。Litchfield-Wilcoxon法により５０％致死濃
度（ＬＤ_５０）を求めた。その結果を第４表に示す。 (3) Acute toxicity test ICR mice (female, 5 weeks old) were intraperitoneally injected with the test compound at various doses and observed for 1 week to examine the acute toxicity. The 50% lethal concentration (LD ₅₀ ) was determined by the Litchfield-Wilcoxon method. The results are shown in Table 4.

以上第３表および第４表の結果から、Ｐ３８８白血病マ
ウスの治療効果において、本発明のカズサマイシンＢは
抗生物質８１−４８４よりもすぐれ、さらに、抗生物質
８１−４８４投与群においてマウスの毒性死が観察され
る投与量と同じ投与量の本発明のカズサマイシンＢの投
与群ではマウスの毒性死が観察されないことおよび急性
毒性においても本発明のカズサマイシンＢは抗生物質８
１−４８４よりも低いことから、本発明のカズサマイシ
ンＢは抗生物質８１−４８４よりも広い投与量の安全域
を有する。 From the results of Tables 3 and 4 above, in the therapeutic effect on P388 leukemia mice, the kazusamycin B of the present invention is superior to the antibiotic 81-484, and further, the toxic death of mice in the antibiotic 81-484 administration group was observed. In the administration group of the kazusamycin B of the present invention having the same dose as that in which no mortality was observed, no toxic death was observed in the mice and the acute toxicity of the kazusamycin B of the present invention indicates that the kazusamycin B of the present invention is antibiotic 8.
Because it is lower than 1-484, the kazusamycin B of the present invention has a broader safety margin than antibiotic 81-484.

上記の通り、本発明のカズサマイシンＢは、抗真菌作用
および抗腫瘍作用を有することから、真菌感染症および
腫瘍の治療剤として有用である。As described above, the kazusamycin B of the present invention has an antifungal action and an antitumor action, and thus is useful as a therapeutic agent for fungal infections and tumors.

実施例 次に実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、こ
れにより本発明を限定するものではない。EXAMPLES Next, the present invention will be specifically described with reference to examples, but the present invention is not limited thereby.

実施例１ ８１−４８４菌の培養 ５００ｍ容坂口フラスコにグルコース２．０％、ペプ
トン０．５％、肉エキス０．５％、乾燥酵母０．３％、
食塩０．５％、炭酸カルシウム０．３％を含む液体培地
（pH７．０）１００ｍを滅菌し、これにグルコース
０．４％、麦芽エキス１．０％、イーストエキス０．４
％、寒天１．５％を含む寒天斜面培地（pH７．０）上
で、２７℃で６日間培養したストレプトマイセス８１−
４８４の斜面培養から一白金耳を接種し、振幅１７cm毎
分１２０回往復するレシプロシェーカーにより２７℃で
７２時間振盪培養して種母を得た。次に２００容ジャ
ーファーメンターにグルコース３．０％、肉エキス０．
７５％、乾燥酵母０．３％、硫酸マグネシウム０．２％
を含む液体培地（pH７．０）１２０を仕込み、滅菌し
た後、前記方法で得られた種母２．５を無菌的に接種
し、通気量１３０／分、攪拌２３８rpm、２８℃で１
４６時間培養し、培養液約１１０を得た。Example 1 Culture of 81-484 bacteria In a 500 m Sakaguchi flask, glucose 2.0%, peptone 0.5%, meat extract 0.5%, dry yeast 0.3%,
100 m of liquid medium (pH 7.0) containing 0.5% of salt and 0.3% of calcium carbonate was sterilized, and glucose 0.4%, malt extract 1.0%, yeast extract 0.4
%, Streptomyces 81-cultured for 6 days at 27 ° C. on an agar slant medium (pH 7.0) containing 1.5% agar.
One platinum loop was inoculated from the slope culture of 484, and shake culture was carried out at 27 ° C. for 72 hours with a reciprocating shaker reciprocating 120 times per minute with an amplitude of 17 cm to obtain a seed mother. Next, in a 200 volume jar fermenter, glucose 3.0%, meat extract 0.
75%, dry yeast 0.3%, magnesium sulfate 0.2%
A liquid medium (pH 7.0) containing 120 was charged and sterilized, and then seed seed 2.5 obtained by the above method was aseptically inoculated, and the aeration rate was 130 / min, stirring was 238 rpm, and the temperature was 1 at 28 ° C.
After culturing for 46 hours, a culture solution of about 110 was obtained.

実施例２ 培養物からのカズサマイシンＢの抽出 実施例１で得た培養液１１０に濾過補助剤４．５kgを
加え濾過し、菌体ケーキ約１２kgと濾液および洗液１２
０を得た。Example 2 Extraction of Kazusamycin B from Cultured Medium To the culture broth 110 obtained in Example 1, 4.5 kg of a filter aid was added and filtered, and about 12 kg of the bacterial cell cake, filtrate and washing solution 12
I got 0.

この濾液および洗液を５容のアンバーライトＸＡＤ−
７カラムに通過させ、活性成分を吸着させた。このカラ
ムを水１０および２０％メタノール−水１０にて洗
浄した後、６０％メタノール−水で活性成分を溶出させ
た。得られた溶出液２５を約３まで減圧濃縮し、溶
出濃縮液を得た。The filtrate and washing solution were mixed with 5 volumes of Amberlite XAD-
It was passed through 7 columns to adsorb the active ingredient. After washing this column with water 10 and 20% methanol-water 10, the active ingredient was eluted with 60% methanol-water. The obtained eluate 25 was concentrated under reduced pressure to about 3 to obtain an eluate concentrate.

他方、該菌体ケーキをメタノール４５に懸濁し、約１
時間攪拌した後、濾過し、さらに得られたケーキをメタ
ノール５で洗浄した。得られた濾液および洗液５０
を３まで減圧濃縮し、菌体抽出濃縮液を得た。On the other hand, the cell cake is suspended in methanol 45, and about 1
After stirring for an hour, the mixture was filtered, and the obtained cake was washed with methanol 5. Obtained filtrate and washing liquid 50
Was concentrated to 3 under reduced pressure to obtain a bacterial cell extract concentrate.

前記の如くして得られた溶出濃縮液と菌体抽出濃縮液を
合わせて、３０％硫酸を加えてpH６．８に調節し、次い
で酢酸エチル１２を加え、充分に攪拌した。生成した
沈澱物を濾去した後、酢酸エチル層を分取し、無水硫酸
ナトリウムで脱水後減圧濃縮し、カズサマイシンＢを含
む茶褐色の油状物３１．３ｇを得た。The eluate concentrate and the bacterial cell extract concentrate obtained as described above were combined, 30% sulfuric acid was added to adjust the pH to 6.8, and then ethyl acetate 12 was added and stirred sufficiently. After the formed precipitate was filtered off, the ethyl acetate layer was separated, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to obtain 31.3 g of a brown oily substance containing kazusamycin B.

実施例３ シリカゲルクロマトクラフィーによるカズサマイシンＢ
の精製 実施例２で得られた油状物を予めヘキサンで充填された
シリカゲルＣ−２００（和光純薬製）カラム（３０６×
５０cm）に吸着せしめ、ヘキサン１．５とヘキサン−
アセトン（１：１）混液によるグラジェント溶出クロマ
トグラフィーを行った。得られた活性画分１．３を減
圧濃縮し、茶褐色の油状残渣４．４９ｇを得た。これを
予め、酢酸エチルで充填されたシリカゲル（和光純薬
製，Ｃ−２００））のカラム（５．０×５１cm）に吸着
させ、展開液として酢酸エチルを用い、クロマトグラフ
ィーを行い、得られた活性画分１．８を減圧濃縮し
て、純度５０％程度の淡黄色のカズサマイシンＢの粗製
固形物９４５mgを得た。Example 3 Kazusamycin B by silica gel chromatography
Purification of the oily substance obtained in Example 2 silica gel C-200 (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) column (306 ×
50 cm) and hexane 1.5 and hexane-
Gradient elution chromatography was performed using a mixed solution of acetone (1: 1). The obtained active fraction 1.3 was concentrated under reduced pressure to obtain 4.49 g of a dark brown oily residue. This was adsorbed on a column (5.0 × 51 cm) of silica gel (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, C-200) packed with ethyl acetate in advance, and chromatography was performed using ethyl acetate as a developing solution. The active fraction 1.8 was concentrated under reduced pressure to obtain 945 mg of a pale yellow crude solid of kazusamycin B having a purity of about 50%.

実施例４ 高速液体クロマトグラフィーによるカズサマイシンＢの
単離 実施例３で得たカズサマイシンＢの粗製固形物をさらに
精製して、その純品を得るために、高速液体クロマトグ
ラフィー（日本分光TRIROTAR-V,UVIDEC-100-V）を行っ
た。その際、使用したカラムはステンレス製パックドカ
ラムＹＭＣ−Ａ−３４３（ＯＤＳ−５，内径２０mm×長
さ２５０mm，山村化学研究所製）を用いた。Example 4 Isolation of Kazusamycin B by High Performance Liquid Chromatography In order to further purify the crude solid of kazusamycin B obtained in Example 3 and obtain its pure product, high performance liquid chromatography (JASCO TRIOTAR- V, UVIDEC-100-V) was performed. At this time, the packed column used was a stainless steel packed column YMC-A-343 (ODS-5, inner diameter 20 mm x length 250 mm, manufactured by Yamamura Chemical Laboratory).

実施例３で得たカズサマイシンＢの粗製品１２０mgをメ
タノール１ｍに溶解した試料を注入し、展開溶媒とし
て０．０５Ｍリン酸−メタノール混液（１：３，高速液
体クロマトグラフィー用溶媒）を用いて分画を行った。
２２０nmの紫外部吸収でカズサマイシンＢに該当するピ
ークを集め、これを減圧下メタノールを留去した。残渣
に酢酸エチルを加え、５％水酸化ナトリウム水溶液でpH
６．５ち調節し酢酸エチル層に転溶させた。酢酸エチル
層を精製水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した
後、濃縮乾固して淡黄色のカズサマイシンＢの純品４４
mgを得た。A sample prepared by dissolving 120 mg of the kazusamycin B crude product obtained in Example 3 in 1 m of methanol was injected, and a 0.05 M phosphoric acid-methanol mixed solution (1: 3, solvent for high performance liquid chromatography) was used as a developing solvent. Fractionation was performed.
A peak corresponding to kazusamycin B was collected by ultraviolet absorption at 220 nm, and methanol was distilled off under reduced pressure. Ethyl acetate was added to the residue and pH was adjusted with 5% aqueous sodium hydroxide solution.
It was adjusted to 6.5 and transferred to the ethyl acetate layer. The ethyl acetate layer was washed with purified water, dehydrated with anhydrous sodium sulfate, and then concentrated to dryness to give pale yellow Kazusamycin B pure product 44
to obtain mg.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

第１図はメタノール中で測定したカズサマイシンＢの紫
外線吸収スペクトルを、第２図は該物質のＫＢｒディス
ク法で測定した赤外線吸収スペクトルを、第３図に該物
質の重クロロホルム中３６０MHzで測定した^１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを、第４図は該物質の重クロロホルム中９
０．５６MHzで測定した^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルをそ
れぞれ示す。FIG. 1 shows the ultraviolet absorption spectrum of kazusamycin B measured in methanol, FIG. 2 shows the infrared absorption spectrum of the substance measured by the KBr disk method, and FIG. 3 shows the measured infrared absorption spectrum of the substance in deuterated chloroform at 360 MHz. ¹ H-NM
The R spectrum is shown in FIG.
Respectively the ¹³ C-NMR spectrum measured at 0.56MHz.

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 岡部 隆義 千葉県市川市福栄３丁目19番15−205号 (72)発明者 森島 甫 東京都目黒区中目黒１丁目１番32−301号Continuation of front page (51) Int.Cl. ⁵ Identification number Office reference number FI technology display location (C12P 17/06 C12R 1: 465) (C12N 1/20 C12R 1: 465) (72) Inventor Takayoshi Okabe Chiba 3-19-15-205, Fukuei, Ichikawa-shi, Japan (72) Inventor Hajime Morishima 1-23-1-302, Nakameguro, Meguro-ku, Tokyo

Claims (5)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】下記の構造式で表されるカズサマイシンＢ
またはその塩。 1. Kazusamycin B represented by the following structural formula:
Or its salt. 【請求項２】ストレプトマイセス属に属するカズサマイ
シンＢ生産菌を栄養培地に培養し、培養物中にカズサマ
イシンＢを蓄積せしめ、該培養物中からカズサマイシン
Ｂを採取することを特徴とするカズサマイシンＢ、また
はその塩の製造法。2. A method for producing kazusamycin B which belongs to the genus Streptomyces by culturing in a nutrient medium to accumulate kazusamycin B in the culture, and collecting kazusamycin B from the culture. A process for producing kazusamycin B or a salt thereof. 【請求項３】ストレプトマイセス属に属するカズサマイ
シンＢ生産菌がストレプトマイセス８１−４８４株（Ｆ
ＥＲＭ−ＢＰ５７１）である特許請求の範囲第２項記載
の製造法。3. A kazusamycin B-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces is Streptomyces 81-484 strain (F
The manufacturing method according to claim 2, which is ERM-BP571). 【請求項４】カズサマイシンＢまたはその塩を有効成分
として含有することを特徴とする抗腫瘍剤。4. An antitumor agent containing kazusamycin B or a salt thereof as an active ingredient. 【請求項５】カズサマイシンＢまたはその塩を有効成分
として含有することを特徴とする抗真菌剤。5. An antifungal agent comprising kazusamycin B or a salt thereof as an active ingredient.