JPH0644868B2 - Ａｔｐシンターゼのサブユニットｃ用の大腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロン性ｄｎａ配列を含むｄｎａ、それを有する発現ベクター及びバクテリア - Google Patents
Ａｔｐシンターゼのサブユニットｃ用の大腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロン性ｄｎａ配列を含むｄｎａ、それを有する発現ベクター及びバクテリアInfo
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- JPH0644868B2 JPH0644868B2 JP60157134A JP15713485A JPH0644868B2 JP H0644868 B2 JPH0644868 B2 JP H0644868B2 JP 60157134 A JP60157134 A JP 60157134A JP 15713485 A JP15713485 A JP 15713485A JP H0644868 B2 JPH0644868 B2 JP H0644868B2
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- subunit
- dna
- atp synthase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/565—IFN-beta
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、ＤＮＡを発現に使用すること、より詳しく言
うと、ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用の大腸菌の
エー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロン性
ＤＮＡ配列を含むＤＮＡ、それを有する発現ベクター及
びバクテリアに関する。
うと、ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用の大腸菌の
エー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロン性
ＤＮＡ配列を含むＤＮＡ、それを有する発現ベクター及
びバクテリアに関する。
ｍＲＮＡのどの性質が、リボゾームの最適結合、従っ
て、細胞内のタンパク質へ向けての最大の翻訳を可能に
するのかということは、大部分が、依然として不明であ
る。最近の研究によれば、開始コドンから正しい距離の
ところに配置されなければならないＳＤ配列（シャイン
−デルガノの配列、リボゾーム結合部位）の重要性と、
翻訳の開始を抑制するｍＲＮＡの２次構造の重要性が強
調されている。しかしながら、ｍＲＮＡの別の配列要素
(sequence elements) が、開始複合体の有効な形成、従
って、最適な翻訳にとって必要であることが、数多く指
摘されている。しかしながら、これらの配列要素は、ま
だ明らかにされていない。
て、細胞内のタンパク質へ向けての最大の翻訳を可能に
するのかということは、大部分が、依然として不明であ
る。最近の研究によれば、開始コドンから正しい距離の
ところに配置されなければならないＳＤ配列（シャイン
−デルガノの配列、リボゾーム結合部位）の重要性と、
翻訳の開始を抑制するｍＲＮＡの２次構造の重要性が強
調されている。しかしながら、ｍＲＮＡの別の配列要素
(sequence elements) が、開始複合体の有効な形成、従
って、最適な翻訳にとって必要であることが、数多く指
摘されている。しかしながら、これらの配列要素は、ま
だ明らかにされていない。
大腸菌(Escherichia coli)のエー・ティー・ピー・オペ
ロン（atp operon）は、ＡＴＰシンターゼ(ATP synthas
e)（アデノシン三リン酸シンターゼ）の８つのサブユニ
ット（subunit）（ａ、ｂ、ｃ、デルタ、アルファ、ガ
ンマ、ベータ及びイプシロン）をコード化する８つの遺
伝子からなることが知られている。エー・ティー・ピー
・オペロンは、サブユニットが翻訳即ち異なったモル量
で合成される単一の多シストロン性のｍＲＮＡに転写さ
れる。最大の翻訳速度（translationrate）は、サブユ
ニットｃの場合に観察することができる。
ロン（atp operon）は、ＡＴＰシンターゼ(ATP synthas
e)（アデノシン三リン酸シンターゼ）の８つのサブユニ
ット（subunit）（ａ、ｂ、ｃ、デルタ、アルファ、ガ
ンマ、ベータ及びイプシロン）をコード化する８つの遺
伝子からなることが知られている。エー・ティー・ピー
・オペロンは、サブユニットが翻訳即ち異なったモル量
で合成される単一の多シストロン性のｍＲＮＡに転写さ
れる。最大の翻訳速度（translationrate）は、サブユ
ニットｃの場合に観察することができる。
本発明の基礎をなす実験においては、サブユニットｃの
遺伝子が単離され、発現ベクターにおいてクローンされ
た。最大の翻訳速度は、シャイン−デルガノ配列の前に
ある約４０の塩基対のＤＮＡ配列もクローンされた場合
にだけ、維持できることがわかった。
遺伝子が単離され、発現ベクターにおいてクローンされ
た。最大の翻訳速度は、シャイン−デルガノ配列の前に
ある約４０の塩基対のＤＮＡ配列もクローンされた場合
にだけ、維持できることがわかった。
本発明によれば、技術的に培養することができるバクテ
リアにおける構造遺伝子に関する発現速度は、大腸菌の
エー・ティー・ピー・オペロンの下記のインターシスト
ロン性（intercistronic）ＤＮＡ配列が、ＡＴＰシンタ
ーゼのサブユニットｃに使用される場合に、大きくな
る。このインターシストロン性のＤＮＡ配列は、 によって表わされ、上記インターシストロン性ＤＮＡ配
列はアミノ酸をコードするものではないが、上記配列に
おいて塩基トリプレット(base triplet)は同一のアミノ
酸を一般にコードするものとして知られる他の塩基トリ
プレットによって置き換えることができ）ＡＴＰシンタ
ーゼのサブユニットａ用でかつＡＴＰシンターゼのサブ
ユニットａの直前に挿入された停止コドンを任意に有
し、前記ＤＮＡ配列の直後に挿入されたシャイン−デル
ガノの配列を任意に有し、かつ、ＡＴＰシンターゼのサ
ブユニットｃ用でかつシャイン−デルガノ配列の直後に
挿入された開始コドンを任意に有し、又は一重鎖（sing
le strands）がインターシストロン性配列の一重鎖と
（好ましくは、少なくとも２０℃の温度で、特に１ＭＮ
ａＣｌの濃度で、かつ、少なくとも２５℃の温度で）混
成形成されることができるＤＮＡ配列が使用される。本
発明の前記インターシストンロン性配列を有するＤＮＡ
において、その一重鎖は、本発明の前記ＤＮＡと同じ作
用を有するハイブリッドを形成するのに用いることがで
きる。
リアにおける構造遺伝子に関する発現速度は、大腸菌の
エー・ティー・ピー・オペロンの下記のインターシスト
ロン性（intercistronic）ＤＮＡ配列が、ＡＴＰシンタ
ーゼのサブユニットｃに使用される場合に、大きくな
る。このインターシストロン性のＤＮＡ配列は、 によって表わされ、上記インターシストロン性ＤＮＡ配
列はアミノ酸をコードするものではないが、上記配列に
おいて塩基トリプレット(base triplet)は同一のアミノ
酸を一般にコードするものとして知られる他の塩基トリ
プレットによって置き換えることができ）ＡＴＰシンタ
ーゼのサブユニットａ用でかつＡＴＰシンターゼのサブ
ユニットａの直前に挿入された停止コドンを任意に有
し、前記ＤＮＡ配列の直後に挿入されたシャイン−デル
ガノの配列を任意に有し、かつ、ＡＴＰシンターゼのサ
ブユニットｃ用でかつシャイン−デルガノ配列の直後に
挿入された開始コドンを任意に有し、又は一重鎖（sing
le strands）がインターシストロン性配列の一重鎖と
（好ましくは、少なくとも２０℃の温度で、特に１ＭＮ
ａＣｌの濃度で、かつ、少なくとも２５℃の温度で）混
成形成されることができるＤＮＡ配列が使用される。本
発明の前記インターシストンロン性配列を有するＤＮＡ
において、その一重鎖は、本発明の前記ＤＮＡと同じ作
用を有するハイブリッドを形成するのに用いることがで
きる。
本発明によれば、ＤＮＡの構造遺伝子又はタンパク質の
遺伝情報をコードするＤＮＡ配列の直前に挿入された、
このような末端ＤＮＡ配列を有するＤＮＡもまた、この
目的のために提供される。
遺伝情報をコードするＤＮＡ配列の直前に挿入された、
このような末端ＤＮＡ配列を有するＤＮＡもまた、この
目的のために提供される。
本発明によれば、前記したＤＮＡを含む発現ベクター及
びその発現ベクターを含んでなるバクテリアもまた提供
される。形質転換に用いられる発現ベクター及びバクテ
リアとしては特に制限はなく、通常の、種々のバクテリ
ア、及びバクテリア内で構造遺伝子を発現することがで
きる種々のベクターを用いることができる。このような
ベクターとしては例えばｐＤＲ５４０を、またバクテリ
アとしては例えば大腸菌（例えば、大腸菌株ＪＭ１０
３）を用いることができる。
びその発現ベクターを含んでなるバクテリアもまた提供
される。形質転換に用いられる発現ベクター及びバクテ
リアとしては特に制限はなく、通常の、種々のバクテリ
ア、及びバクテリア内で構造遺伝子を発現することがで
きる種々のベクターを用いることができる。このような
ベクターとしては例えばｐＤＲ５４０を、またバクテリ
アとしては例えば大腸菌（例えば、大腸菌株ＪＭ１０
３）を用いることができる。
実施例 次に本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明する。
実施例１ 前記サブユニット（ａ）用の停止コドン、シャイン−デ
ルガノの配列、サブユニット（ｃ）用の開始コドンを有
するインターシストロン性のＤＮＡ配列のエー・ティー
・ピー（ａ）−テー・ティー・ピー（ｃ）を有するＤＮ
Ａを、インターロイキン−２用のｃＤＮＡと再結合させ
た。この合成ＤＮＡを発現ベクターｐＤＲ５４０へ組込
み、この発現ベクターにより大腸菌株ＪＭ１０３の形質
転換を行った。ここで前記発現ベクターｐＤＲ５４０
は、例えば、ラッセル及びベネット（D. R.Russell and
G.N.Bennett，ジーン(Gene),20,231-243,1982）の方法
で得られる。また大腸菌株ＪＭ１０３は、例えば、メッ
シングら（J.Messing et al.，ヌクレイック・アシッド
・リサーチ(Nucleic Acids Research),9,309-321,1981
）の方法により得られ、又はラッセル及びベネット
（ジーン,20,231-243,1982）は記載のように入手され
る。
ルガノの配列、サブユニット（ｃ）用の開始コドンを有
するインターシストロン性のＤＮＡ配列のエー・ティー
・ピー（ａ）−テー・ティー・ピー（ｃ）を有するＤＮ
Ａを、インターロイキン−２用のｃＤＮＡと再結合させ
た。この合成ＤＮＡを発現ベクターｐＤＲ５４０へ組込
み、この発現ベクターにより大腸菌株ＪＭ１０３の形質
転換を行った。ここで前記発現ベクターｐＤＲ５４０
は、例えば、ラッセル及びベネット（D. R.Russell and
G.N.Bennett，ジーン(Gene),20,231-243,1982）の方法
で得られる。また大腸菌株ＪＭ１０３は、例えば、メッ
シングら（J.Messing et al.，ヌクレイック・アシッド
・リサーチ(Nucleic Acids Research),9,309-321,1981
）の方法により得られ、又はラッセル及びベネット
（ジーン,20,231-243,1982）は記載のように入手され
る。
その結果、このタンパク質の翻訳が、前記インターシス
トロン性ＤＮＡ配列を有さない場合に対して著しく増加
していることがわかった。
トロン性ＤＮＡ配列を有さない場合に対して著しく増加
していることがわかった。
実施例２ 前記サブユニット（ａ）用の停止コドン、シャイン−デ
ルガノの配列、サブユニット（ｃ）用の開始コドンを有
するインターシストロン性のＤＮＡ配列のエー・ティー
・ピー（ａ）−エー・ティー・ピー（ｃ）を有するＤＮ
Ａを、β−インターフェロン用のｃＤＮＡと再結合させ
た。この合成ＤＮＡを発現ベクターｐＤＲ５４０へ組込
み、この発現ベクターにより大腸菌株ＪＭ１０３の形質
転換を行った。
ルガノの配列、サブユニット（ｃ）用の開始コドンを有
するインターシストロン性のＤＮＡ配列のエー・ティー
・ピー（ａ）−エー・ティー・ピー（ｃ）を有するＤＮ
Ａを、β−インターフェロン用のｃＤＮＡと再結合させ
た。この合成ＤＮＡを発現ベクターｐＤＲ５４０へ組込
み、この発現ベクターにより大腸菌株ＪＭ１０３の形質
転換を行った。
その結果、β−インターフェロンの収率が、前記インタ
ーシストロン性ＤＮＡ配列を有さない場合に対して実施
例１と同様に著しく増加していることがわかった。
ーシストロン性ＤＮＡ配列を有さない場合に対して実施
例１と同様に著しく増加していることがわかった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｆ 8214−4Ｂ Ｋ 8214−4Ｂ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）
Claims (4)
- 【請求項１】ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用の大
腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシスト
ロン性ＤＮＡ配列 （上記配列において塩基トリプレットは同一のアミノ酸
をコードするものとして知られる他の塩基トリプレット
によって置き換えることができる） を有し、 ＡＴＰシンターゼのサブユニットａ用でかつ前記ＤＮＡ
配列の直前に挿入された停止コドンを任意に有し、 前記ＤＮＡ配列の直後に挿入されたシャイン−デルガノ
の配列を任意に有し、かつ ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用でかつ前記シャイ
ン−デルガノの配列の直後に挿入された開始コドンを任
意に有する ことを特徴とするＤＮＡ。 - 【請求項２】ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用の大
腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシスト
ロン性ＤＮＡ配列 （上記配列において塩基トリプレットは同一のアミノ酸
をコードするものとして知られる他の塩基トリプレット
によって置き換えることができる） を有し、 ＡＴＰシンターゼのサブユニットａ用でかつ前記ＤＮＡ
配列の直前に挿入された停止コドンを任意に有し、 前記ＤＮＡ配列の直後に挿入されたシャイン−デルガノ
の配列を任意に有し、かつ ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用でかつ前記シャイ
ン−デルガノの配列の直後に挿入された開始コドンを任
意に有する ＤＮＡを含むことを特徴とする発現ベクター。 - 【請求項３】ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用の大
腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシスト
ロン性ＤＡＮ配列 （上記配列において塩基トリプレットは同一のアミノ酸
をコードするものとして知られる他の塩基トリプレット
によって置き換えることができる） を有し、 ＡＴＰシンターゼのサブユニットａ用でかつ前記ＤＮＡ
配列の直前に挿入された停止コドンを任意に有し、 前記ＤＮＡ配列の直後に挿入されたシャイン−デルガノ
の配列を任意に有し、かつ ＡＴＰシンターゼのサブユニットｃ用でかつ前記シャイ
ン−デルガノの配列の直後に挿入された開始コドンを任
意に有する ＤＮＡを含む発現ベクターを含んでなることを特徴とす
るバクテリア。 - 【請求項４】構造遺伝子を発現することができる特許請
求の範囲第３項に記載のバクテリア。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3426532A DE3426532A1 (de) | 1984-07-18 | 1984-07-18 | Verwendung einer dna-sequenz zur expression sowie dna-struktur und expressionsvektor mit der dna-sequenz |
| DE3426532.5 | 1984-07-18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6163288A JPS6163288A (ja) | 1986-04-01 |
| JPH0644868B2 true JPH0644868B2 (ja) | 1994-06-15 |
Family
ID=6240985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60157134A Expired - Lifetime JPH0644868B2 (ja) | 1984-07-18 | 1985-07-18 | Ａｔｐシンターゼのサブユニットｃ用の大腸菌のエー・ティー・ピー・オペロンのインターシストロン性ｄｎａ配列を含むｄｎａ、それを有する発現ベクター及びバクテリア |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4826764A (ja) |
| EP (1) | EP0169504B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0644868B2 (ja) |
| AU (1) | AU591457B2 (ja) |
| DE (2) | DE3426532A1 (ja) |
| DK (1) | DK326285A (ja) |
| ES (1) | ES8607393A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BG49718A3 (en) * | 1983-07-15 | 1992-01-15 | Bio Technology General Corp | Method for preparing of polypeptid with superoxiddismutasne activitty |
| MXPA01010207A (es) | 1999-04-09 | 2003-07-21 | Pharmacia & Upjohn Inc | Composiciones de vacuna antibacteriana. |
-
1984
- 1984-07-18 DE DE3426532A patent/DE3426532A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-07-17 US US06/756,136 patent/US4826764A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-17 DK DK326285A patent/DK326285A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-07-18 DE DE8585108980T patent/DE3570248D1/de not_active Expired
- 1985-07-18 EP EP85108980A patent/EP0169504B1/de not_active Expired
- 1985-07-18 AU AU45223/85A patent/AU591457B2/en not_active Ceased
- 1985-07-18 JP JP60157134A patent/JPH0644868B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-07-18 ES ES545354A patent/ES8607393A1/es not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES8607393A1 (es) | 1986-06-01 |
| AU591457B2 (en) | 1989-12-07 |
| EP0169504A1 (de) | 1986-01-29 |
| EP0169504B1 (de) | 1989-05-17 |
| DE3570248D1 (en) | 1989-06-22 |
| DE3426532A1 (de) | 1986-01-30 |
| JPS6163288A (ja) | 1986-04-01 |
| DK326285D0 (da) | 1985-07-17 |
| DK326285A (da) | 1986-01-19 |
| ES545354A0 (es) | 1986-06-01 |
| US4826764A (en) | 1989-05-02 |
| AU4522385A (en) | 1986-02-20 |
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