JPH0630626B2 - Indole productivity test reagent - Google Patents
Indole productivity test reagentInfo
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- JPH0630626B2 JPH0630626B2 JP18340787A JP18340787A JPH0630626B2 JP H0630626 B2 JPH0630626 B2 JP H0630626B2 JP 18340787 A JP18340787 A JP 18340787A JP 18340787 A JP18340787 A JP 18340787A JP H0630626 B2 JPH0630626 B2 JP H0630626B2
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、微生物のインドール産生能検査用試薬に関す
る。さらに詳しくは、本発明は、マイクロプレートを用
いるインドール産生能検査に適した試薬に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial application] The present invention relates to a reagent for inspecting a microorganism for indole production. More specifically, the present invention relates to a reagent suitable for indole production ability test using a microplate.
［従来の技術］ 病原菌同定のための生化学的性状検査法の１つとして、
グルコース非発酵性グラム陰性桿菌に関するインドール
産生能の検査がある。この検査は、細菌がトリプトファ
ンからインドールを産生できるかどうかを調べるための
テストである。インドールが産生したか否かはｐ−ジメ
チルアミノベンズアルデヒドを含む試薬を用いて判定
し、このような試薬としてエールリッヒ試薬とコバック
試薬がある。[Prior Art] As one of biochemical property inspection methods for identifying pathogenic bacteria,
There is a test for indole production for glucose non-fermenting Gram-negative bacilli. This test is a test to determine whether bacteria can produce indole from tryptophan. Whether or not indole is produced is determined using a reagent containing p-dimethylaminobenzaldehyde, and such reagents include Ehrlich reagent and Kovac reagent.
検査は通常試験管内で行なわれるが、マイクロプレート
を用いる場合には、それらの試薬中に含まれる溶媒がマ
イクロプレート本体を溶かしたり（エールリッヒ試薬中
のエーテルまたはキシレン）、また水層と分離して上層
のウェル周辺部に発色が起ったりして（コバック試薬中
のイソアミルアルコール）検査を有効に行なうことがで
きない。The test is usually performed in a test tube, but when using a microplate, the solvent contained in these reagents dissolves the microplate body (ether or xylene in Ehrlich reagent) or separates it from the aqueous layer. Coloring may occur around the wells in the upper layer (isoamyl alcohol in Kovac reagent), and the test cannot be performed effectively.
［発明が解決しようとする問題点］ 本発明は、上記従来のインドール産生能検査用試薬の欠
点を解決せんとするものであり、マイクロプレートに影
響を与えず、しかも液層全体に発色してその発色反応が
観察しやすいような試薬を提供することを目的とする。[Problems to be Solved by the Invention] The present invention is intended to solve the above-mentioned drawbacks of the conventional reagents for indole production test, and does not affect the microplate, and moreover, the entire liquid layer is colored. It is an object of the present invention to provide a reagent whose color reaction is easy to observe.
［問題点を解決するための手段］ 上記目的は、以下の構成からなる本発明により達成され
る。[Means for Solving Problems] The above object is achieved by the present invention having the following configurations.
１）ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドと濃塩酸とア
ルコール成分とを含有するインドール産生能検査用試薬
であって、該アルコール成分はベンジルアルコールと水
溶性アルコールとの混液であることを特徴とするインド
ール産生能検査用試薬。1) A reagent for indole producing ability test, which comprises p-dimethylaminobenzaldehyde, concentrated hydrochloric acid and an alcohol component, wherein the alcohol component is a mixed solution of benzyl alcohol and a water-soluble alcohol. Testing reagent.
２）ベンジルアルコールと水溶性アルコールは、インド
ール産生能があることが検知されたときに、液層全体が
発色しうる量で混合されてなる第１項記載の試薬。2) The reagent according to item 1, wherein the benzyl alcohol and the water-soluble alcohol are mixed in an amount such that the entire liquid layer can develop color when it is detected that it has an indole-producing ability.
３）該水溶性アルコールはエチルアルコールである第１
項に記載の試薬。3) The water-soluble alcohol is ethyl alcohol
The reagent according to item.
４）該水溶性アルコールはベンジルアルコール１容量部
に対し、１〜９容量部の割合で含有されてなる第１項な
いし第３項のいずれかに記載の試薬。4) The reagent according to any one of items 1 to 3, wherein the water-soluble alcohol is contained in a proportion of 1 to 9 parts by volume with respect to 1 part by volume of benzyl alcohol.
インドール産生能検査は、培地中に含まれるトリプトフ
ァンから細菌が盛っているトリプトファナーゼを触媒と
してインドールが産生されることを調べるものであり、
インドールの生成を試薬により判定するものである。イ
ンドールは試薬中に含まれるアルデヒドと結合して赤紫
色の複合体となり、アルコール層に抽出される。The indole productivity test is to check that indole is produced from tryptophan contained in the medium by using tryptophanase, which is a bacterium, as a catalyst.
The production of indole is judged by a reagent. Indole combines with the aldehyde contained in the reagent to form a reddish purple complex, which is extracted into the alcohol layer.
本発明者はこのアルコール層を構成するアルコールとし
て本発明の目的を達成しうるものを調べた結果、ベンジ
ルアルコールが最も優れた効果を達成しうることを見出
した。ただし、ベンジルアルコールは水に難溶性であ
り、水層に白濁を生じさせるという欠点を有するので、
ベンジルアルコールの水溶性アルコール溶液を用いるこ
とによって本発明の目的が達成される。As a result of investigating alcohols that can achieve the object of the present invention as alcohols constituting the alcohol layer, the present inventor has found that benzyl alcohol can achieve the most excellent effect. However, since benzyl alcohol is poorly soluble in water and has the drawback of causing cloudiness in the aqueous layer,
The object of the present invention is achieved by using an aqueous alcoholic solution of benzyl alcohol.
水溶性アルコールは、培養液とベンジルアルコールとを
白濁させずに混和するために添加するものであるから、
この目的を果たすことができるものであればメタノー
ル、エタノール、ブタノール等が適宜使用される。The water-soluble alcohol is added in order to mix the culture solution and benzyl alcohol without clouding,
Methanol, ethanol, butanol or the like is appropriately used as long as it can fulfill this purpose.
ベンジルアルコールの使用量は同定しようとする菌の種
類に応じて大幅に異なるので種類に応じて変更する必要
があり、例えばMorganella morganii IID 602ではｐ−
ジメチルアミノベンズアルデヒド１ｇあたり、好ましく
は1.5〜7.5ml、さらに好ましくは２〜６ml添加する。The amount of benzyl alcohol used varies greatly depending on the type of the bacterium to be identified, so it is necessary to change it according to the type. For example, in Morganella morganii IID 602, p-
The amount is preferably 1.5 to 7.5 ml, more preferably 2 to 6 ml, per 1 g of dimethylaminobenzaldehyde.
また、水溶性アルコールはベンジルアルコール１容量部
あたり好ましくは１〜９容量部、更に好ましくは1.5〜
2.5容量部添加する。１〜９容量部の範囲であれば白濁
を良好に抑えることができ、かつ菌が陽性の場合、十分
な発色を得ることができる。The water-soluble alcohol is preferably 1 to 9 parts by volume, and more preferably 1.5 to 1 part by volume per 1 part by volume of benzyl alcohol.
Add 2.5 parts by volume. If it is in the range of 1 to 9 parts by volume, white turbidity can be satisfactorily suppressed, and if the bacterium is positive, sufficient color development can be obtained.
水溶性アルコールとしてエタノールを使用した場合のベ
ンジルアルコールとエタノールの混合比は次のとおりで
ある。The mixing ratio of benzyl alcohol and ethanol when ethanol is used as the water-soluble alcohol is as follows.
ベンジルアルコール：エタノール＝100〜50：０〜50
（％）の溶液の場合は、反応が陽性の場合、強い発色を
呈するが、白濁が強く、吸光度等機器による測定は困難
である。Benzyl alcohol: ethanol = 100-50: 0-50
In the case of the (%) solution, when the reaction is positive, strong coloration is exhibited, but the white turbidity is strong, and it is difficult to measure with an instrument such as absorbance.
ベンジルアルコール：エタノール＝50〜10：50〜90
（％）の溶液の場合は反応性が強く、ベンジルアルコー
ルによる白濁も抑えられており、判定に適している。Benzyl alcohol: ethanol = 50 to 10: 50 to 90
In the case of the (%) solution, the reactivity is strong and the cloudiness due to benzyl alcohol is suppressed, which is suitable for the determination.
ベンジルアルコール：エタノール＝10〜０：90〜100
（％）の溶液の場合は白濁はみられないが、反応性が従
来のものより弱い。Benzyl alcohol: ethanol = 10-0: 90-100
In the case of the (%) solution, white turbidity is not observed, but the reactivity is weaker than the conventional one.
ベンジルアルコールとエタノールの最適混合比はベンジ
ルアルコール：エタノール＝40〜30：60〜70（％）であ
る。The optimum mixing ratio of benzyl alcohol and ethanol is benzyl alcohol: ethanol = 40-30: 60-70 (%).
尚、本発明の試薬を用いるインドール産生能検査におい
ては、インドール産生能検査に通常用いられる培地を使
用することができる。例えばトリプティケースペプトン
ブイヨン（ＢＢＬ）やトリプトン培地（Difco）などが
ある。In addition, in the indole production ability test using the reagent of the present invention, a medium usually used in the indole production ability test can be used. Examples include trypticase peptone broth (BBL) and tryptone medium (Difco).
また検査は通常の操作に従って行なわれる。Further, the inspection is performed according to a normal operation.
以下本発明を実施例及び比較例をあげて詳しく説明す
る。Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Comparative Examples.
実施例１ 表１に示す組成を有する乾燥培地の入ったマイクロプレ
ートにマックファーランドNO.3.0に調整したMorganella
morganii IID 602（インドール弱陽性）及びEnterobac
ter cloacae IAM 1624（インドール陰性）50μを分注
して37℃で４時間培養した。Example 1 Morganella adjusted to McFarland NO.3.0 in a microplate containing a dry medium having the composition shown in Table 1.
morganii IID 602 (weakly positive indole) and Enterobac
50 μm of ter cloacae IAM 1624 (indole negative) was dispensed and cultured at 37 ° C. for 4 hours.
培養後、表２に示す組成を有する試薬50μを滴下して
発色させ、吸光度の測定を行なった。 After culturing, 50 μm of a reagent having the composition shown in Table 2 was dropped to develop a color, and the absorbance was measured.
表２ 試薬組成 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド 0.5ｇ 濃塩酸 2.5ml ベンジルアルコール 2.5ml エタノール 5.0ml 比較例１ 表３に示す組成のコバック試薬を用いたこと以外は、実
施例１と同様の操作を行なった。上記結果を第１図及び
第２図に示す。Table 2 Reagent composition p-Dimethylaminobenzaldehyde 0.5 g Concentrated hydrochloric acid 2.5 ml Benzyl alcohol 2.5 ml Ethanol 5.0 ml Comparative Example 1 The same operation as in Example 1 was performed except that the Kovac reagent having the composition shown in Table 3 was used. . The above results are shown in FIGS. 1 and 2.
表３ 試薬組成 ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド 0.5ｇ 濃塩酸 2.5ml イソアミルアルコール 7.5ml 第１図に示されるように、本発明の試薬を用いた検査に
おいては、580nm付近での吸光度が大きい。Table 3 Reagent composition p-Dimethylaminobenzaldehyde 0.5 g Concentrated hydrochloric acid 2.5 ml Isoamyl alcohol 7.5 ml As shown in Fig. 1, in the test using the reagent of the present invention, the absorbance around 580 nm is large.
［発明の効果］ 以上詳しく説明したように、本発明によればインドール
産生能検査用の新規な試薬が提供される。[Effects of the Invention] As described in detail above, the present invention provides a novel reagent for indole production test.
この試薬を用いてマイクロプレートを使用するインドー
ル産生能検査を行なうと、従来の試薬のようにマイクロ
プレートを溶かすこともなく、また水層と分離すること
もないので、発色が均一に起こる。従ってマイクロプレ
ートを使用するインドール産生能検査を可能にし、かつ
操作を容易にする。When an indole production ability test using a microplate is performed using this reagent, the microplate is not dissolved unlike the conventional reagent and is not separated from the aqueous layer, so that the color is uniformly generated. Therefore, an indole production test using a microplate is possible, and the operation is easy.
また、本発明の試薬を用いると、従来の試薬を用いた場
合よりも発色が強いので、マイクロプレートを用いる場
合のみならず試験管を用いる検査においても有効に用い
られる。Further, since the color of the reagent of the present invention is stronger than that of the case of using the conventional reagent, it can be effectively used not only in the case of using a microplate but also in the inspection using a test tube.
第１図及び第２図は、実施例１及び比較例１においてマ
イクロプレートを使用して行なったインドール産生能検
査における発色を吸光度測定した結果を示すグラフであ
って、第１図は試料としてMorganella morganii IID 60
2を、第２図はEnterobacter cloacae IAM 1624を使用し
た検査の結果を示すものである。FIG. 1 and FIG. 2 are graphs showing the results of absorbance measurement of the color development in the indole production ability test performed using the microplate in Example 1 and Comparative Example 1, and FIG. 1 shows Morganella as a sample. morganii IID 60
2 and FIG. 2 show the results of the test using Enterobacter cloacae IAM 1624.
Claims (4)
塩酸とアルコール成分とを含有するインドール産生能検
査用試薬であって、該アルコール成分はベンジルアルコ
ールと水溶性アルコールとの混液であることを特徴とす
るインドール産生能検査用試薬。1. A reagent for indole production assay, comprising p-dimethylaminobenzaldehyde, concentrated hydrochloric acid and an alcohol component, wherein the alcohol component is a mixture of benzyl alcohol and a water-soluble alcohol. Reagent for indole productivity test.
は、インドール産生能があることが検知されたときに、
液層全体が発色しうる量で混合されてなる特許請求の範
囲第１項記載の試薬。2. Benzyl alcohol and water-soluble alcohol, when detected to have indole-producing ability,
The reagent according to claim 1, wherein the entire liquid layer is mixed in an amount capable of developing color.
ある特許請求の範囲第１項に記載の試薬。3. The reagent according to claim 1, wherein the water-soluble alcohol is ethyl alcohol.
１容量部に対し、１〜９容量部の割合で含有されてなる
特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかに記載の
試薬。4. The reagent according to any one of claims 1 to 3, wherein the water-soluble alcohol is contained in a proportion of 1 to 9 parts by volume with respect to 1 part by volume of benzyl alcohol.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18340787A JPH0630626B2 (en) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | Indole productivity test reagent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18340787A JPH0630626B2 (en) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | Indole productivity test reagent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6428559A JPS6428559A (en) | 1989-01-31 |
| JPH0630626B2 true JPH0630626B2 (en) | 1994-04-27 |
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ID=16135239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18340787A Expired - Lifetime JPH0630626B2 (en) | 1987-07-24 | 1987-07-24 | Indole productivity test reagent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0630626B2 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4424712A1 (en) * | 1994-07-13 | 1996-01-18 | Basf Ag | Use of benzaldehydes to mark hydrocarbons |
-
1987
- 1987-07-24 JP JP18340787A patent/JPH0630626B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6428559A (en) | 1989-01-31 |
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