JPH0630618B2 - シアリル化されたＬｅｗｉｓｘエピト−プ，抗体及び診断 - Google Patents
シアリル化されたＬｅｗｉｓｘエピト−プ，抗体及び診断Info
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- JPH0630618B2 JPH0630618B2 JP60133139A JP13313985A JPH0630618B2 JP H0630618 B2 JPH0630618 B2 JP H0630618B2 JP 60133139 A JP60133139 A JP 60133139A JP 13313985 A JP13313985 A JP 13313985A JP H0630618 B2 JPH0630618 B2 JP H0630618B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 腫瘍関連抗原に向けられたモノクローナル抗体について
今まで多くの報告がある。しかしながら、これらのうち
少数の抗体のみが血清中の腫瘍関連抗原を検出するため
に有用であると知られている。大部分、抗原が腫瘍性組
織に関連しているが、隣接の正常組織には関連しないこ
とが見出される場合において、その抗原は他の部位では
正常組織に存在していることがその後見出される。従っ
て、多くの場合誤った陽性の程度が診断として抗原の検
出に対してどんな価値をも破壊する。
今まで多くの報告がある。しかしながら、これらのうち
少数の抗体のみが血清中の腫瘍関連抗原を検出するため
に有用であると知られている。大部分、抗原が腫瘍性組
織に関連しているが、隣接の正常組織には関連しないこ
とが見出される場合において、その抗原は他の部位では
正常組織に存在していることがその後見出される。従っ
て、多くの場合誤った陽性の程度が診断として抗原の検
出に対してどんな価値をも破壊する。
技術の現状において、生理液体中の抗原の検出が癌の完
全な予言者であることは必要でない。
全な予言者であることは必要でない。
腫瘍が取り除かれる多くの場合、腫瘍の効果的除去又は
腫瘍が引き続き存在しているかの診断として、特異エピ
トピックマーカーの生理液体中における存在の変化をだ
れでもがモニターすることができる。他の場合におい
て、確実に腫瘍状態を見分けるために２又はそれ以上の
マーカーが使用されるかも知れない。さらに他の場合に
おいて、腫瘍を見分けるために、マーカーが正常な細胞
と比較して腫瘍細胞の表面上に、十分に多く分布するこ
とのみが必要であるということが想像される。
腫瘍が引き続き存在しているかの診断として、特異エピ
トピックマーカーの生理液体中における存在の変化をだ
れでもがモニターすることができる。他の場合におい
て、確実に腫瘍状態を見分けるために２又はそれ以上の
マーカーが使用されるかも知れない。さらに他の場合に
おいて、腫瘍を見分けるために、マーカーが正常な細胞
と比較して腫瘍細胞の表面上に、十分に多く分布するこ
とのみが必要であるということが想像される。
従って、腫瘍に関する特異エピトープを定義することが
できることは非常に価値があり、このエピトープとは、
生理液体（たとえば血液又は血清）における腫瘍の診断
を、合理的な正確さで可能にし、この場合、マーカーは
単独で又は、他のマーカーと接合において用いられる。
できることは非常に価値があり、このエピトープとは、
生理液体（たとえば血液又は血清）における腫瘍の診断
を、合理的な正確さで可能にし、この場合、マーカーは
単独で又は、他のマーカーと接合において用いられる。
コプロウスキィ，など．，ランセット(Lancet)（１９８
２）｜：１３３２〜１３３３は、消化管癌の指標として
のLewis血液型の診断に関する１９−９と称するモノク
ローナル抗体を報告している。この抗体は、結腸癌患者
からの血清の約60％と反応する。マグナニ，など．，キ
ャンサー リサーチ(Cancer Research)（１９８３）４
３：５４８９〜９２は、１９−９が結合する抗原が、癌
患者の血清中に放出されるムチン上に存在するエピトー
プ又はリアリレイトLewisa構造であることを報告した。
バスト，など．，ニュー イングランド ジャーナル
オブ メディスン(New England Journal of Medicine)
（１９８３）３０９：８８３〜８８７は、高分子量グリ
コタンパク質でありそして卵巣癌腫をもつ患者の血清中
に８２％見出されるＣＡ１２５と称する抗原と反応する
モノクローナル抗体を報告している。ラウバラ，ジャー
ナル オブ ザ バイオロジカル ケミストリイ(Journ
al of the Biological Chemistry)（１９７６）２５
１：７５１７〜７５２０は、ヒト腎臓の新しいガングリ
オシドとしてラクト−Ｎ−フコペンタオースIIIのシア
リル化(Sialylated)誘導体（これはシアリル（Lexと呼
ばれる）を公表している。
２）｜：１３３２〜１３３３は、消化管癌の指標として
のLewis血液型の診断に関する１９−９と称するモノク
ローナル抗体を報告している。この抗体は、結腸癌患者
からの血清の約60％と反応する。マグナニ，など．，キ
ャンサー リサーチ(Cancer Research)（１９８３）４
３：５４８９〜９２は、１９−９が結合する抗原が、癌
患者の血清中に放出されるムチン上に存在するエピトー
プ又はリアリレイトLewisa構造であることを報告した。
バスト，など．，ニュー イングランド ジャーナル
オブ メディスン(New England Journal of Medicine)
（１９８３）３０９：８８３〜８８７は、高分子量グリ
コタンパク質でありそして卵巣癌腫をもつ患者の血清中
に８２％見出されるＣＡ１２５と称する抗原と反応する
モノクローナル抗体を報告している。ラウバラ，ジャー
ナル オブ ザ バイオロジカル ケミストリイ(Journ
al of the Biological Chemistry)（１９７６）２５
１：７５１７〜７５２０は、ヒト腎臓の新しいガングリ
オシドとしてラクト−Ｎ−フコペンタオースIIIのシア
リル化(Sialylated)誘導体（これはシアリル（Lexと呼
ばれる）を公表している。
新生物におけるシアリル化(Sialylation)の重要性は多
くの報告の主題であった。たとえば次の文献を参照のこ
と：ウオレン，など．，プロヌィーディング オブ ザ
ナショナル アカデミィ オブ サイアンス オブ
ザ USA(Proceedings of the National Academy of Sei
ences of the USA)（１９７２）６９：１８３８〜184
2；ヴァンビーク，など．，ブリティッシュ ジャーナ
ル オブ キャンサー(British Journal of Cancer)
（１９７７）３６：１５７〜１６５；ウォレン，な
ど．，バイオケミカバイオフィジカアクタ(Biochemica
et Biophysica Acta)（１９７８）５１６：９７〜１２
７；グリック，バイオケミストリイ(Biochemistyy)(197
9)１８：２５２５〜２５３２；及びユージィースウォレ
ン及びタオ，バイオケミカル アンド バイオフィジカ
ル リサーチ コミュニケーション (Biochemical and Biophysical Research Communicatio
ns)（１９８０）９５：１４５２〜１４６０．癌細胞に
対して生ずる多くのモノクローナル抗体はシアリル化さ
れたLewisa〔マグナニ，など．，ジャーナル オブ ザ
バイオロジカル ケミストリイ(Journal of the Biol
ogical Chemistry)（１９８２）２５７：１４３６５〜
１４３６９；〕；Lewisb〔ブロックハウス，など．，イ
ビド(ibid)（１９８１）２５６：１３２２３〜１３２２
５〕；及びLewisx〔ハコモリ，など．，バイオケミカル
アンド バイオフイズィカル リサーチ コミュニィ
ケーション (Biochemical and Biophysical Research Communicatio
ns)（１９８１）１００：1578〜１５８６〕のような末
端炭水化物構造に対してその主たる活性を持つものとし
て報告されている。
くの報告の主題であった。たとえば次の文献を参照のこ
と：ウオレン，など．，プロヌィーディング オブ ザ
ナショナル アカデミィ オブ サイアンス オブ
ザ USA(Proceedings of the National Academy of Sei
ences of the USA)（１９７２）６９：１８３８〜184
2；ヴァンビーク，など．，ブリティッシュ ジャーナ
ル オブ キャンサー(British Journal of Cancer)
（１９７７）３６：１５７〜１６５；ウォレン，な
ど．，バイオケミカバイオフィジカアクタ(Biochemica
et Biophysica Acta)（１９７８）５１６：９７〜１２
７；グリック，バイオケミストリイ(Biochemistyy)(197
9)１８：２５２５〜２５３２；及びユージィースウォレ
ン及びタオ，バイオケミカル アンド バイオフィジカ
ル リサーチ コミュニケーション (Biochemical and Biophysical Research Communicatio
ns)（１９８０）９５：１４５２〜１４６０．癌細胞に
対して生ずる多くのモノクローナル抗体はシアリル化さ
れたLewisa〔マグナニ，など．，ジャーナル オブ ザ
バイオロジカル ケミストリイ(Journal of the Biol
ogical Chemistry)（１９８２）２５７：１４３６５〜
１４３６９；〕；Lewisb〔ブロックハウス，など．，イ
ビド(ibid)（１９８１）２５６：１３２２３〜１３２２
５〕；及びLewisx〔ハコモリ，など．，バイオケミカル
アンド バイオフイズィカル リサーチ コミュニィ
ケーション (Biochemical and Biophysical Research Communicatio
ns)（１９８１）１００：1578〜１５８６〕のような末
端炭水化物構造に対してその主たる活性を持つものとし
て報告されている。
血清中のシアリル化されたLexエピトープ又は構造を含
む分子の検出が診断として使用される。シアリル化され
たLex（構造）に対するモノクローナル抗体は、種々の
用途において、すなわち診断及び治療におけるin vitro
及びin vivoの両者において使用されうる。モノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドマは、他の細胞を形質転
換し、その細胞をモノクローナル抗体産生性にするため
に、又は免疫グロブリンの発現のための遺伝子源として
用いられることができる。
む分子の検出が診断として使用される。シアリル化され
たLex（構造）に対するモノクローナル抗体は、種々の
用途において、すなわち診断及び治療におけるin vitro
及びin vivoの両者において使用されうる。モノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドマは、他の細胞を形質転
換し、その細胞をモノクローナル抗体産生性にするため
に、又は免疫グロブリンの発現のための遺伝子源として
用いられることができる。
新しい方法及び組成物が、次のような構造、 を持ち、そして／又はCSLEX1と命名されたモノクローナ
ル抗体に結合しているエピトープの存在の検出のために
提供される。このエピトープは腫瘍細胞、及び相当数の
正常組織上に高発生率で存在していることが見出され
る。
ル抗体に結合しているエピトープの存在の検出のために
提供される。このエピトープは腫瘍細胞、及び相当数の
正常組織上に高発生率で存在していることが見出され
る。
エピトープはLewisx構造のシアリル化型であることによ
って特徴づけられている。それは一般的にCSLEX1抗体に
よる、細胞性テストによって決定されるように顆粒球上
に見つけられるがしかし、同じ細胞毒性テストによって
明らかなように、リンパ球、単球、血小板及び赤血球細
胞に関連していることは見出されない。それは、またほ
とんどの白血病−リンパ腫系上でも、明らかでない。
って特徴づけられている。それは一般的にCSLEX1抗体に
よる、細胞性テストによって決定されるように顆粒球上
に見つけられるがしかし、同じ細胞毒性テストによって
明らかなように、リンパ球、単球、血小板及び赤血球細
胞に関連していることは見出されない。それは、またほ
とんどの白血病−リンパ腫系上でも、明らかでない。
シアリル化されたLexエピトープは、正常組織及び食堂
の腺と粘膜、いくらか膵臓の腺房細胞及び結腸の深陰窩
の限定部位、及びHenleの近位細管及び下降係蹄におい
て見出すことができる。抗原は、胃、肺、脳、胸腺、皮
膚、卵巣、子宮、副腎、及び筋肉のテストされた正常組
織においては検出されない。
の腺と粘膜、いくらか膵臓の腺房細胞及び結腸の深陰窩
の限定部位、及びHenleの近位細管及び下降係蹄におい
て見出すことができる。抗原は、胃、肺、脳、胸腺、皮
膚、卵巣、子宮、副腎、及び筋肉のテストされた正常組
織においては検出されない。
シアリル化されたLexエピトープは、胃、結腸及び膵臓
の腺癌を含むいろいろな癌、並びに食道、胸、及び卵巣
の腫瘍上に存在する。
の腺癌を含むいろいろな癌、並びに食道、胸、及び卵巣
の腫瘍上に存在する。
エピトープは、またCFU-C上のCSLEX1抗体の効果によっ
て立証されているように、顆粒球の前駆細胞上に見つけ
られる。
て立証されているように、顆粒球の前駆細胞上に見つけ
られる。
シアロシル ラクト フコペンタオシル(III)セラミド
及びシアロシルジフコシル ガングリオシド(VIB)とし
てシアリレイトLex構造は、検出されそして、他の多く
のガングリオシド類、セラミド類及びグロボシド類から
区別され得る。
及びシアロシルジフコシル ガングリオシド(VIB)とし
てシアリレイトLex構造は、検出されそして、他の多く
のガングリオシド類、セラミド類及びグロボシド類から
区別され得る。
シアリル化されたLex構造はヒト腎臓に存在するグリコ
リピッド上で検出された（ラウバラ，ジャーナル オブ
ザ バイオロジカル ケミストリ(Journal of the Bi
ological Chemistry)（１９７６）２５１：7517〜752
0）。そしてプロナーゼによる活性の部分的低下及び結
腸腺癌における管の管腔含有物中におけるそのムチンの
存在によって明確なようにたぶんムチン上に存在する。
リピッド上で検出された（ラウバラ，ジャーナル オブ
ザ バイオロジカル ケミストリ(Journal of the Bi
ological Chemistry)（１９７６）２５１：7517〜752
0）。そしてプロナーゼによる活性の部分的低下及び結
腸腺癌における管の管腔含有物中におけるそのムチンの
存在によって明確なようにたぶんムチン上に存在する。
シアリル化された型のLexは、広く種々の方法において
用いられ得る。シアリル化されたLexに対するポリクロ
ーンナル抗血清の生成のための又は好ましくはシアリル
化されたLexに対するモノクローンナル抗体のための免
疫原を得るための抗原と接合したパプテンとして、それ
を用いることができる。この抗体はIgM,IgG又はIgA、特
にIgM又はIgGである。抗体は、血液中に存在する補体又
は他の細胞溶解活性との組み合せにおいて、細胞毒性又
は非細胞毒性を示すかも知れない。
用いられ得る。シアリル化されたLexに対するポリクロ
ーンナル抗血清の生成のための又は好ましくはシアリル
化されたLexに対するモノクローンナル抗体のための免
疫原を得るための抗原と接合したパプテンとして、それ
を用いることができる。この抗体はIgM,IgG又はIgA、特
にIgM又はIgGである。抗体は、血液中に存在する補体又
は他の細胞溶解活性との組み合せにおいて、細胞毒性又
は非細胞毒性を示すかも知れない。
シアリル化されたLexは、診断検定において試薬として
使用のために修飾することができる。すなわち検出可能
なシグナルを供給するラベルに、受容体（たとえば抗
体）を通して共有的に又は非共有的にハプテンが接合さ
れる。例示的ラベルは、放射性同位元素（たとえば3H,
125I,131I）；螢光物（たとえばフルオレスセイン，フ
ィコビリタンパク質，稀土類キレート，ダンシル，ロダ
ミン、等）；酵素基質及び酵素阻害物質；酵素（たとえ
ばホースラディシュ パーオキシダーゼ，グルコース
オキシダーゼ，グルコース−６−ホスフェートデヒドロ
ジナーゼ，アセチルコリン−エステラーゼ、等）；粒子
（たとえば、デキストラン，アガローズ，金属粒子，磁
気粒子，ポリスチレン粒子、等）もしくは、同様の物を
含んでいる。種種のラベルにハプテンを接合する方法
は、広く文献に記載されている。たとえば、アメリカ特
許番号3,817,837；4,134,791；及び 4,220,722を参照のこと。結合の部位は、シアリル化さ
れたラクト−Ｎ−フコペンタオースIIIである必要はな
いが、しかしLex抗原に接触した基（たとえばホスフォ
リピッド，結合基、もしくは同様の物）に接触した基を
通して、結合されるかも知れない。
使用のために修飾することができる。すなわち検出可能
なシグナルを供給するラベルに、受容体（たとえば抗
体）を通して共有的に又は非共有的にハプテンが接合さ
れる。例示的ラベルは、放射性同位元素（たとえば3H,
125I,131I）；螢光物（たとえばフルオレスセイン，フ
ィコビリタンパク質，稀土類キレート，ダンシル，ロダ
ミン、等）；酵素基質及び酵素阻害物質；酵素（たとえ
ばホースラディシュ パーオキシダーゼ，グルコース
オキシダーゼ，グルコース−６−ホスフェートデヒドロ
ジナーゼ，アセチルコリン−エステラーゼ、等）；粒子
（たとえば、デキストラン，アガローズ，金属粒子，磁
気粒子，ポリスチレン粒子、等）もしくは、同様の物を
含んでいる。種種のラベルにハプテンを接合する方法
は、広く文献に記載されている。たとえば、アメリカ特
許番号3,817,837；4,134,791；及び 4,220,722を参照のこと。結合の部位は、シアリル化さ
れたラクト−Ｎ−フコペンタオースIIIである必要はな
いが、しかしLex抗原に接触した基（たとえばホスフォ
リピッド，結合基、もしくは同様の物）に接触した基を
通して、結合されるかも知れない。
すでに指摘したようにハプテンは、抗体を誘発するだろ
うイムノゲンを供給する抗原と接合することができる。
一方、ハプテンを担持する細胞（元のままの又はフラグ
メントとしていづれかの）は、適切な背推動物において
免疫反応を誘発するために、使用され得る。特に、通常
の技法（コフラー及びミルスティン，ネイチュアー(Nat
ure)（１９７５）２５６：４９５〜４９７）に従ってパ
プテンに対して特異なモノクローナル抗体を産生するこ
とが望ましいだろう。どの種かが、モノクローナル抗体
を調製するために用いられる場合、最とも便利であり及
び有用に利用可能な融合パートナーを持つので、大部分
マウスが使用されるだろう。しかしながら、人間の治療
において又は人間においてインビボイメージングにおい
て使用のために、ヒトモノクローナル抗体を調製するこ
とが望ましいかも知れない。例示的なヒト融合パートナ
ーは、１９８１年３月２６日に提出された出願番号247,
652及び１９８２年１月２７日に公表されたヨーロッパ
特許出願００４４７２２に見い出される。宿主の免疫
化、融合、クローン化、選択及びモノクローナル抗体の
単離のための技法は、十分に確立されていてそしてさら
にここで説明する必要はない。この目的のために、この
開示を引用によりこの明細書中に組み入れる。
うイムノゲンを供給する抗原と接合することができる。
一方、ハプテンを担持する細胞（元のままの又はフラグ
メントとしていづれかの）は、適切な背推動物において
免疫反応を誘発するために、使用され得る。特に、通常
の技法（コフラー及びミルスティン，ネイチュアー(Nat
ure)（１９７５）２５６：４９５〜４９７）に従ってパ
プテンに対して特異なモノクローナル抗体を産生するこ
とが望ましいだろう。どの種かが、モノクローナル抗体
を調製するために用いられる場合、最とも便利であり及
び有用に利用可能な融合パートナーを持つので、大部分
マウスが使用されるだろう。しかしながら、人間の治療
において又は人間においてインビボイメージングにおい
て使用のために、ヒトモノクローナル抗体を調製するこ
とが望ましいかも知れない。例示的なヒト融合パートナ
ーは、１９８１年３月２６日に提出された出願番号247,
652及び１９８２年１月２７日に公表されたヨーロッパ
特許出願００４４７２２に見い出される。宿主の免疫
化、融合、クローン化、選択及びモノクローナル抗体の
単離のための技法は、十分に確立されていてそしてさら
にここで説明する必要はない。この目的のために、この
開示を引用によりこの明細書中に組み入れる。
モノクローナル抗体は診断、治療、インビボイメージン
グ、もしくは同様の事に使用される。特定の使用に依存
して、抗体は、独自に又は、共有的に又は非共有的に抗
体に接合した他の物質と共に用いることができる。ハプ
テンと共に使用のために、すでに記載したのと同タイプ
のラベルを、診断検定において用いるために、抗体と共
に使用することができる。インビトロイメージングのた
めに、ここで記載されたもの以外の放射性核種（特にテ
クネチウム，ヨードもしくは同様の物）が使用されるだ
ろう。
グ、もしくは同様の事に使用される。特定の使用に依存
して、抗体は、独自に又は、共有的に又は非共有的に抗
体に接合した他の物質と共に用いることができる。ハプ
テンと共に使用のために、すでに記載したのと同タイプ
のラベルを、診断検定において用いるために、抗体と共
に使用することができる。インビトロイメージングのた
めに、ここで記載されたもの以外の放射性核種（特にテ
クネチウム，ヨードもしくは同様の物）が使用されるだ
ろう。
使用されるラベル化は通常の技法に従いそして抗体当り
のラベルの数は、ラベルの性質、所望のシグナルの感
度、ラベル化の目的、及び同様の事に依存して変わるだ
ろう。血液，血清又は血漿中のシアリル化されたLexハ
プテンを含む分子の検出のための多くの種々の診断検定
においてモノクローナル抗体が使用される。多くの検定
は、広範囲ないろいろのハプテン（これはこの発明にお
いて適用される）の検出のために抗体とともに使用する
方法に開発されてる。上で引用したアメリカ特許を参照
のこと。
のラベルの数は、ラベルの性質、所望のシグナルの感
度、ラベル化の目的、及び同様の事に依存して変わるだ
ろう。血液，血清又は血漿中のシアリル化されたLexハ
プテンを含む分子の検出のための多くの種々の診断検定
においてモノクローナル抗体が使用される。多くの検定
は、広範囲ないろいろのハプテン（これはこの発明にお
いて適用される）の検出のために抗体とともに使用する
方法に開発されてる。上で引用したアメリカ特許を参照
のこと。
調製されるハイブリドマは、種々の方法において、たと
えば特定の抗体についての遺伝子コード源として所望の
抗体を作る新ハイブリドマを付与する他の融合パートナ
ーとの融合のために、ハイブリドマ以外のものによる抗
体の製造法を開発するために使用するために、又はハイ
ブリドマの結合部位が検定に使用される場合の試薬とし
ての使用目的のために使用することができる。
えば特定の抗体についての遺伝子コード源として所望の
抗体を作る新ハイブリドマを付与する他の融合パートナ
ーとの融合のために、ハイブリドマ以外のものによる抗
体の製造法を開発するために使用するために、又はハイ
ブリドマの結合部位が検定に使用される場合の試薬とし
ての使用目的のために使用することができる。
完全な抗体を、使用する必要はなく、むしろ単にフラグ
メント（たとえばFab,(Fab′）２，Fvv2もしくは同様の
もの）が使用される。
メント（たとえばFab,(Fab′）２，Fvv2もしくは同様の
もの）が使用される。
ネズミモノクローナルIgM(CSLEX1と命名された）が特に
興味の対照である。
興味の対照である。
次の例は、限定的でなく、例示的に提供される。
実験方法及び材料 免疫化及び体細胞の雑種形成 生後４〜６週間の雌のBALB/cマウスを、フロイント完全
アジュバント中に乳化された胃腺癌組織（３２−ＯＰ−
Ｔ−ＳＴ）からの0.5mg膜タンパク質を用いて皮下に免
疫化した。同量の膜タンパク質による２回の追加粘液注
入を、２週間隔で行なった。３日後、脾臓細胞の融合
を、脾臓ブラスト細胞のPercollグラジィエント濃縮を
使用しながら、Kohler及びMllateinの修飾された方法に
よって骨髄腫Ｐ３−Ｘ６３−Ag8.653（カーニイ，な
ど．，ジャーナル オブ ザ イミュノロジイ(Journal
of the Immunology)（１９７９）１２３：１５４８〜
１５５０）と共に行なった。
アジュバント中に乳化された胃腺癌組織（３２−ＯＰ−
Ｔ−ＳＴ）からの0.5mg膜タンパク質を用いて皮下に免
疫化した。同量の膜タンパク質による２回の追加粘液注
入を、２週間隔で行なった。３日後、脾臓細胞の融合
を、脾臓ブラスト細胞のPercollグラジィエント濃縮を
使用しながら、Kohler及びMllateinの修飾された方法に
よって骨髄腫Ｐ３−Ｘ６３−Ag8.653（カーニイ，な
ど．，ジャーナル オブ ザ イミュノロジイ(Journal
of the Immunology)（１９７９）１２３：１５４８〜
１５５０）と共に行なった。
融合の後２週間、上清液を、ELISA及び微細胞毒性テス
トによって、抗体生成について分析した。１３８の肉眼
的なクローンを、融合の後同定し、これらのうち１７個
は、免疫組織と反応するが、しかし正常な胃及び結腸と
は反応しない。このハイブリドクローンを、限界希釈法
によって二度サブクローンし、そしてBALB/cマウス中に
継代接種し、腹水を生成せしめた。
トによって、抗体生成について分析した。１３８の肉眼
的なクローンを、融合の後同定し、これらのうち１７個
は、免疫組織と反応するが、しかし正常な胃及び結腸と
は反応しない。このハイブリドクローンを、限界希釈法
によって二度サブクローンし、そしてBALB/cマウス中に
継代接種し、腹水を生成せしめた。
組織．いろいろな器管からのヒト腫瘍組織を手術で得、
そして−８０℃で保存した。正常なヒト組織を、死体腎
臓提供者及び腫瘍性疾患を有しない患者の死体解剖から
得、その次即座にイソペンタンドライアイスの混合物中
で冷凍しそして−８０℃に保存した。
そして−８０℃で保存した。正常なヒト組織を、死体腎
臓提供者及び腫瘍性疾患を有しない患者の死体解剖から
得、その次即座にイソペンタンドライアイスの混合物中
で冷凍しそして−８０℃に保存した。
細胞系．胃癌細胞系（Ｈ．ホンジョーによって確立され
たMKN1,MKN28,MKN45、及びMKN74並びにＭ．セキグチに
よって確立されたKATO-III)を、日本の新潟大学（Ｈ．
ワタナベ教授）の第１病理学課から得た。胃癌系ＭＫ−
９２はＳ．ムカイ及びＹ．クロス（日本大学，日本）に
よって確立された。肺及び結腸癌系（ＰＣ−１，ＰＣ−
３，ＰＣ−６，ＰＣ−７，ＰＣ−８，ＰＣ−９，ＰＣ−
１０，ＰＣ−１２，ＰＣ−１３，ＰＣ−１４，ＱＧ−５
６及びＣ−１）を、Ｙ．ハヤタ（東京医科大学，日本）
及びＫ．タナカ（九州大学，日本）から得た。結腸細胞
系Ｍ−７６０９を、Ｍ．フクシマ（弘前大学，日本）か
ら得た。食道癌系（ＴＥ−１及びＳＨ１）は、Ｔ．ニシ
ヒラ（東北大学，日本）及びイイズカ（国立癌センタ
ー，日本）によって確立された。この研究において使用
される他の細胞系を、American type Culture Collecti
onから得た。すべての細胞系を１５％の子牛の胎児血清
(FCS)、ペニシリン及びストレプトマイシンによって補
われたRPMI-1640培地での培養によって維持した。
たMKN1,MKN28,MKN45、及びMKN74並びにＭ．セキグチに
よって確立されたKATO-III)を、日本の新潟大学（Ｈ．
ワタナベ教授）の第１病理学課から得た。胃癌系ＭＫ−
９２はＳ．ムカイ及びＹ．クロス（日本大学，日本）に
よって確立された。肺及び結腸癌系（ＰＣ−１，ＰＣ−
３，ＰＣ−６，ＰＣ−７，ＰＣ−８，ＰＣ−９，ＰＣ−
１０，ＰＣ−１２，ＰＣ−１３，ＰＣ−１４，ＱＧ−５
６及びＣ−１）を、Ｙ．ハヤタ（東京医科大学，日本）
及びＫ．タナカ（九州大学，日本）から得た。結腸細胞
系Ｍ−７６０９を、Ｍ．フクシマ（弘前大学，日本）か
ら得た。食道癌系（ＴＥ−１及びＳＨ１）は、Ｔ．ニシ
ヒラ（東北大学，日本）及びイイズカ（国立癌センタ
ー，日本）によって確立された。この研究において使用
される他の細胞系を、American type Culture Collecti
onから得た。すべての細胞系を１５％の子牛の胎児血清
(FCS)、ペニシリン及びストレプトマイシンによって補
われたRPMI-1640培地での培養によって維持した。
膜調製法．粗膜分画を、冷凍組織から分離した。要約す
れば、検体を、１mMフェニルメチルスルフォニルフルオ
ライド(PMSF)及び２mM塩化カルシウムを含む、pH7.4
で、４℃のPBS中で、解凍した。細かくした後、細胞
を、細胞破壊ボンベにおいて破壊し、次に破壊された細
胞の分別遠心分離を行なった。この粗膜分画を、PBS中
に再懸濁しそして−８０℃で保存した。
れば、検体を、１mMフェニルメチルスルフォニルフルオ
ライド(PMSF)及び２mM塩化カルシウムを含む、pH7.4
で、４℃のPBS中で、解凍した。細かくした後、細胞
を、細胞破壊ボンベにおいて破壊し、次に破壊された細
胞の分別遠心分離を行なった。この粗膜分画を、PBS中
に再懸濁しそして−８０℃で保存した。
ELISAによるモノクローナル抗体のスクリーニング ミクロ−ELISAテストのために、テラサキ組織培養平板
(Falcon)を種々の膜分画（pH9.6の重炭酸塩緩衝液にお
いて２５μｇ／ｍで）により４℃で１晩被覆した。PB
S-0.05％Tween20中で洗浄の後、ウエルを重炭酸塩緩衝
液中、１％オバルブミンにより、３７℃で１時間被覆オ
バルブミンの除去の後、５μのサンプルを添加しそし
て３７℃で２時間インキュベートした。３回の洗浄（PB
S-0.05％Tween２０により）の後、５μのパーオキシ
ダーゼでラベルされたヤギ抗マウスIg(IgG＋IgM)(KPLラ
ボラトリイズ）を、反応させるために３７℃で１時間放
置した。５回の洗浄の後、５μのＯ−フェニレンジア
ミンを、室温で添加し１５分間置いた。この反応を2.5
Ｍ硫酸で止められた。光学濃度を、DynatechＴＲ２００
リーダーにより４９２nmで測定した。
(Falcon)を種々の膜分画（pH9.6の重炭酸塩緩衝液にお
いて２５μｇ／ｍで）により４℃で１晩被覆した。PB
S-0.05％Tween20中で洗浄の後、ウエルを重炭酸塩緩衝
液中、１％オバルブミンにより、３７℃で１時間被覆オ
バルブミンの除去の後、５μのサンプルを添加しそし
て３７℃で２時間インキュベートした。３回の洗浄（PB
S-0.05％Tween２０により）の後、５μのパーオキシ
ダーゼでラベルされたヤギ抗マウスIg(IgG＋IgM)(KPLラ
ボラトリイズ）を、反応させるために３７℃で１時間放
置した。５回の洗浄の後、５μのＯ−フェニレンジア
ミンを、室温で添加し１５分間置いた。この反応を2.5
Ｍ硫酸で止められた。光学濃度を、DynatechＴＲ２００
リーダーにより４９２nmで測定した。
マイクロサイトトキシティテスト 補体依存のマイクロサイトトキシティテストを、標準ミ
クロ技法（テラサキ、など、アメリカンジャーナル オ
ブ クリニカル パソロジイ(American Journal of Cli
nical Pathelegy)（１９７８）６９：１０３〜１２０）
により実施した。要約すれば、１μの抗体を、約１５
００目標細胞と３０分間インキュベートし、次にウサギ
補体と共に２５℃で１時間インキュベートした。生存
は、染料排除によって査定された。
クロ技法（テラサキ、など、アメリカンジャーナル オ
ブ クリニカル パソロジイ(American Journal of Cli
nical Pathelegy)（１９７８）６９：１０３〜１２０）
により実施した。要約すれば、１μの抗体を、約１５
００目標細胞と３０分間インキュベートし、次にウサギ
補体と共に２５℃で１時間インキュベートした。生存
は、染料排除によって査定された。
間接的免疫螢光検定 ５０μのおおまかに希釈した抗体と、細胞を室温で３
０分間反応することによって、間接的免螢光法を実施し
た。PBS-0.01％ナトリウムアジドによる３回の洗浄の
後、細胞を、FITC−接合されたヤギ抗マウスIgMの５０
μ中において、４℃で、３０分間インキュベートし、
次に３回洗浄した。細胞を螢光顕微鏡法により試験し、
１０〜２０μｇ／ｍのマウス骨髄種IgMを負対照とし
て用いた。
０分間反応することによって、間接的免螢光法を実施し
た。PBS-0.01％ナトリウムアジドによる３回の洗浄の
後、細胞を、FITC−接合されたヤギ抗マウスIgMの５０
μ中において、４℃で、３０分間インキュベートし、
次に３回洗浄した。細胞を螢光顕微鏡法により試験し、
１０〜２０μｇ／ｍのマウス骨髄種IgMを負対照とし
て用いた。
イムパーオキシターゼ染色法 イムパーオキシターゼ染色法によって、反応性抗原の免
疫化学的局在定位を検査するために正常な及び腫瘍性の
新鮮な組織を用いた。Tris−緩衝溶液(TBS)中、４％ホ
ルマリンにおいて、1.5〜５分間固定され、低温槽で製
造された組織断片を、１％ウシ血清アルブミン(BSA)を
含むTBS中に希釈されたモノクローナル抗体と共に室温
で１時間培養した。５〜１０μｇ／ｍのマウス骨髄種
IgMを、負対照として用いた。PBS中で洗浄の後１：１０
０に希釈された、ヤギ抗マウスIgG＋IgM(KPLラボラトリ
イズ）のパーオキシターゼ接合F(ab′）２を、室温で４
５分間組織断片に加えた。PBS中で洗浄の後、pH5.2及び
0.01％H2O2で、0.02Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液中、0.021
％ｗ／ｖ３−アミノ−９−エチルカルボゾル（Sigma Ch
emical）において、６分間スライドを処理し、次に、ヘ
マトキシリンにより対比染色しそしてグリセロール／PB
Sにおいて固定した。
疫化学的局在定位を検査するために正常な及び腫瘍性の
新鮮な組織を用いた。Tris−緩衝溶液(TBS)中、４％ホ
ルマリンにおいて、1.5〜５分間固定され、低温槽で製
造された組織断片を、１％ウシ血清アルブミン(BSA)を
含むTBS中に希釈されたモノクローナル抗体と共に室温
で１時間培養した。５〜１０μｇ／ｍのマウス骨髄種
IgMを、負対照として用いた。PBS中で洗浄の後１：１０
０に希釈された、ヤギ抗マウスIgG＋IgM(KPLラボラトリ
イズ）のパーオキシターゼ接合F(ab′）２を、室温で４
５分間組織断片に加えた。PBS中で洗浄の後、pH5.2及び
0.01％H2O2で、0.02Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液中、0.021
％ｗ／ｖ３−アミノ−９−エチルカルボゾル（Sigma Ch
emical）において、６分間スライドを処理し、次に、ヘ
マトキシリンにより対比染色しそしてグリセロール／PB
Sにおいて固定した。
酵素処理 プロナーゼ（６０μｇ／0.1ｍ、Calbiochem-Behring,
San Diego.CA)，トリプシン （５００μｇ／0.1ｍ，Werchington Biochemical,Fre
ehold,NJ)，フィシン（１０μｇ／0.1ｍ，Sigma Chem
ical,St.Louis,MO)，ノイラミニダーゼ（0.5IU／ｍ，
0.1IU／ｍ，0.02IU／ｍ，V,Chorea,Calbiochemから
の）、及び過ヨウ素酸ナトリウム（５mM)を使用して、
標準ELISA技法によって、免疫化用胃腺癌組織の酵素処
理を行なった。この酵素反応は、３７℃で１時間行っ
た。
San Diego.CA)，トリプシン （５００μｇ／0.1ｍ，Werchington Biochemical,Fre
ehold,NJ)，フィシン（１０μｇ／0.1ｍ，Sigma Chem
ical,St.Louis,MO)，ノイラミニダーゼ（0.5IU／ｍ，
0.1IU／ｍ，0.02IU／ｍ，V,Chorea,Calbiochemから
の）、及び過ヨウ素酸ナトリウム（５mM)を使用して、
標準ELISA技法によって、免疫化用胃腺癌組織の酵素処
理を行なった。この酵素反応は、３７℃で１時間行っ
た。
イムパーオキシターゼによるノイラミニターゼ処理も、
ノイラミニターゼ（アースロバクターウレアファシエン
ス(Arthrobactor ureafaciens)由来，Calbiochem）を用
いて、３７℃、２時間のインキュベートにより行なっ
た。
ノイラミニターゼ（アースロバクターウレアファシエン
ス(Arthrobactor ureafaciens)由来，Calbiochem）を用
いて、３７℃、２時間のインキュベートにより行なっ
た。
CFU-C検定 CFU-C検定のために、１０％FCSを含むRPMI1640培地中３
×１０６／ｍでの骨髄細胞懸濁液５０μを、いろい
ろな希釈のモノクローナル抗体の溶液２５μと共に３
７℃で３０分間インキュベートした。正常のウサギ血清
を、補体源として添加しそして６０分間続けてインキュ
ベートした。この処理された細胞（１×１０５）を、２
０％FCS，２０％PHA-LCM（フィトヘムアダルチニン）及
び0.3％寒天を含むα培地と共に混合しそして次にミク
ロプレート上に置いた。５％の二酸化炭素空気中、３７
℃で１０日間の培養の後コロニーにつき４０細胞以上を
有するコロニーの数を計数した。この結果は対照と比較
してコロニー形成細胞の％回収として表した。
×１０６／ｍでの骨髄細胞懸濁液５０μを、いろい
ろな希釈のモノクローナル抗体の溶液２５μと共に３
７℃で３０分間インキュベートした。正常のウサギ血清
を、補体源として添加しそして６０分間続けてインキュ
ベートした。この処理された細胞（１×１０５）を、２
０％FCS，２０％PHA-LCM（フィトヘムアダルチニン）及
び0.3％寒天を含むα培地と共に混合しそして次にミク
ロプレート上に置いた。５％の二酸化炭素空気中、３７
℃で１０日間の培養の後コロニーにつき４０細胞以上を
有するコロニーの数を計数した。この結果は対照と比較
してコロニー形成細胞の％回収として表した。
固層放射免疫測定法 決定は、カアーニギ，など．，キャンサー リサーチ(C
ancer Research)（１９８３）４３：４９９７〜５００
５により記載された方法によりなされた。おのおののウ
エルを、１０ngの糖脂質、並びに５０ngのレシチン及び
３０ngのクロレステロールにより被覆した。この固層放
射免疫測定法において使用される種々の糖脂質の構造並
びに、下記のTLC免疫染色検定において使用される種々
の糖脂質の構造は、第６表に示されている。
ancer Research)（１９８３）４３：４９９７〜５００
５により記載された方法によりなされた。おのおののウ
エルを、１０ngの糖脂質、並びに５０ngのレシチン及び
３０ngのクロレステロールにより被覆した。この固層放
射免疫測定法において使用される種々の糖脂質の構造並
びに、下記のTLC免疫染色検定において使用される種々
の糖脂質の構造は、第６表に示されている。
TLC免疫染色法 TLC免疫染色法を、マグナニ，など．，アナライティカ
ルバイオケミストリイ(Analytical Biochemistry)（１
９８０）１０９：３９９〜４０２の方法を用いて、Bake
rのHPTLCミニープレート（５×６cm）上で行なった。抗
体を300倍に希釈しそして非特異染色を最小にするため
にTLCプレート上に適用した。
ルバイオケミストリイ(Analytical Biochemistry)（１
９８０）１０９：３９９〜４０２の方法を用いて、Bake
rのHPTLCミニープレート（５×６cm）上で行なった。抗
体を300倍に希釈しそして非特異染色を最小にするため
にTLCプレート上に適用した。
結果 正常な末梢血液細胞及び白血病−リンパ種系に対する反
応性 第１表に示めされるように正常なパネル細胞及び白血病
−リンパ腫系によりCSLEX1モノクローナル抗体の細胞毒
活性を検査した。
応性 第１表に示めされるように正常なパネル細胞及び白血病
−リンパ腫系によりCSLEX1モノクローナル抗体の細胞毒
活性を検査した。
IgM抗体（腹水力価１：１０４）は、テストされる顆粒
球に対して細胞毒性を示し、そしてテストされるリンパ
球、単球、血小板、及び赤血球に対して、非サイトトキ
シィーであった白血病−リンパ腫系において、それは、
２つの細胞系、検定されるAPL系(HL-60)及び組織球リン
パ腫系(U-937)だけに反応性を示すが、しかし、検定さ
れるT-ALL系（８４０２，CEM,MOLT-4,HPB-MLT)，Ｂ−リ
ンパ腫系（Daudi,Ramos,Raji,Wel）、及びCALL系（ＫＭ
−３，Reh）には反応性を示さなかった。これらの白血
病−リンパ腫系に対するCSLEX1の免疫螢光法は同一の結
果を得た。
球に対して細胞毒性を示し、そしてテストされるリンパ
球、単球、血小板、及び赤血球に対して、非サイトトキ
シィーであった白血病−リンパ腫系において、それは、
２つの細胞系、検定されるAPL系(HL-60)及び組織球リン
パ腫系(U-937)だけに反応性を示すが、しかし、検定さ
れるT-ALL系（８４０２，CEM,MOLT-4,HPB-MLT)，Ｂ−リ
ンパ腫系（Daudi,Ramos,Raji,Wel）、及びCALL系（ＫＭ
−３，Reh）には反応性を示さなかった。これらの白血
病−リンパ腫系に対するCSLEX1の免疫螢光法は同一の結
果を得た。
種々の固形腫瘍細胞系に対する反応性 ３４の種々の腫瘍細胞系が、第２表に示されるように、
ミクロサイトキシティー、免疫螢光法及び免疫パーオキ
シターゼ染色法によって反応性について検出された。CS
LEX1は、２つの胃癌系（KATO-III及びMKN28)，１つの肺
腺癌系（ＰＣ−３），３つの肺鱗状細胞癌系（ＰＣ−
１，ＰＣ−９，ＱＧ−５６），５つの結腸腺癌系（Ｃ−
１，Ｍ７６０９，COLO２０５，WiDr,COLO３２０），２
つの肺癌系（ＳＫ−ＢＲ−２III及びＢＴ−２０），及
び１つの食道腫瘍系（ＴＥ−１）により生じる。３４細
胞系のうち合計１４（４１％）と共に陽性反応を示し
た。特に高頻度の陽性反応性は、結腸腺癌系に観察され
た（７のうち６又は７１％）。
ミクロサイトキシティー、免疫螢光法及び免疫パーオキ
シターゼ染色法によって反応性について検出された。CS
LEX1は、２つの胃癌系（KATO-III及びMKN28)，１つの肺
腺癌系（ＰＣ−３），３つの肺鱗状細胞癌系（ＰＣ−
１，ＰＣ−９，ＱＧ−５６），５つの結腸腺癌系（Ｃ−
１，Ｍ７６０９，COLO２０５，WiDr,COLO３２０），２
つの肺癌系（ＳＫ−ＢＲ−２III及びＢＴ−２０），及
び１つの食道腫瘍系（ＴＥ−１）により生じる。３４細
胞系のうち合計１４（４１％）と共に陽性反応を示し
た。特に高頻度の陽性反応性は、結腸腺癌系に観察され
た（７のうち６又は７１％）。
正常及び悪性組織におけるCSLEX1抗原の組織分布 免疫パーオキシダーゼ染色法によって、CSLEX1抗体反応
性抗原の組織分布は、第３表に与えられている。正常組
織の強い陽性染色は、食道腺及び食道粘膜において、並
びに腎臓のHenleの近位細管及び下降係蹄において観察
される。弱い染色は、結腸の深陰窩のひじょうに限定さ
れた部分に、膵臓の腺房細胞に、肝臓の肝細胞及びKupf
fer細胞、及び顆粒球において観察された。抗原は、検
定される胃，肺（肺胞のマクロファージを除く）、脳，
胸腺，皮膚，卵巣，子宮，副腎，筋肉、もしくは結合組
織において検出されなかった。
性抗原の組織分布は、第３表に与えられている。正常組
織の強い陽性染色は、食道腺及び食道粘膜において、並
びに腎臓のHenleの近位細管及び下降係蹄において観察
される。弱い染色は、結腸の深陰窩のひじょうに限定さ
れた部分に、膵臓の腺房細胞に、肝臓の肝細胞及びKupf
fer細胞、及び顆粒球において観察された。抗原は、検
定される胃，肺（肺胞のマクロファージを除く）、脳，
胸腺，皮膚，卵巣，子宮，副腎，筋肉、もしくは結合組
織において検出されなかった。
７４の種々のテストされた腫瘍組織が第４表に示されて
いる。驚くことに、CSLEX1抗体によって認識される抗原
が多くの癌において検出することができた−１７の胃腺
癌のうち１６，１７の結腸腺癌のうち13,１６の肺腫瘍
のうち１０、４の食道腫瘍のうち２、３の膵臓腺癌のう
ち３、８の胸腫瘍のうち２、及び６の卵巣腫瘍のうち３
である。マウス骨髄腫IgM（５〜１０μｇ／ｍ）は、
コントロールとして用いられそしてこれらの組織のどれ
とも反応しなかった。すべてのサンプルは腫瘍組織だけ
を含んでいたが、しかし、１７の結腸腺癌サンプルのう
ち６が腫瘍組織及び隣接の正常組織を含んでいた。これ
らの６のサンプルのうち５において、正常の組織部が染
色されなかった。陽性に反応する結腸腺癌サンプルの癌
性部は、管癌の先端の細胞質及び管腔含有物において染
色を示した。ムチンレイクを含む４の胃サンプルのうち
３及び８の結腸サンプルのうち８が、だいぶムチン上の
抗原の存在によって、この抗体と陽性反応を示した。CS
LEX1による腫瘍組織の高頻度の陽性染色は癌細胞の分化
度には関係なく、腺癌、たとえば胃，結腸、及び肺にお
いて観察された。陽性染色性は、またいくらかの鱗状細
胞癌サンプル中において観察された。CSLEX1抗体は、テ
ストされる７４腫瘍のうち５０（６８％）と反応した。
いる。驚くことに、CSLEX1抗体によって認識される抗原
が多くの癌において検出することができた−１７の胃腺
癌のうち１６，１７の結腸腺癌のうち13,１６の肺腫瘍
のうち１０、４の食道腫瘍のうち２、３の膵臓腺癌のう
ち３、８の胸腫瘍のうち２、及び６の卵巣腫瘍のうち３
である。マウス骨髄腫IgM（５〜１０μｇ／ｍ）は、
コントロールとして用いられそしてこれらの組織のどれ
とも反応しなかった。すべてのサンプルは腫瘍組織だけ
を含んでいたが、しかし、１７の結腸腺癌サンプルのう
ち６が腫瘍組織及び隣接の正常組織を含んでいた。これ
らの６のサンプルのうち５において、正常の組織部が染
色されなかった。陽性に反応する結腸腺癌サンプルの癌
性部は、管癌の先端の細胞質及び管腔含有物において染
色を示した。ムチンレイクを含む４の胃サンプルのうち
３及び８の結腸サンプルのうち８が、だいぶムチン上の
抗原の存在によって、この抗体と陽性反応を示した。CS
LEX1による腫瘍組織の高頻度の陽性染色は癌細胞の分化
度には関係なく、腺癌、たとえば胃，結腸、及び肺にお
いて観察された。陽性染色性は、またいくらかの鱗状細
胞癌サンプル中において観察された。CSLEX1抗体は、テ
ストされる７４腫瘍のうち５０（６８％）と反応した。
CSLEX1反応性抗原の酵素処理 ノイラミニダーゼ及びナトリウムパーヨーデイト免疫性
胃腺癌の処理は、CSLEX1の結合を完全に減じた。プロナ
ーゼによる処理は、一部、結合を減少させた（第５−Ａ
表）。これらの結果は、免疫性組織上の抗原がシアリル
化された糖タンパク質であることを示唆する。
胃腺癌の処理は、CSLEX1の結合を完全に減じた。プロナ
ーゼによる処理は、一部、結合を減少させた（第５−Ａ
表）。これらの結果は、免疫性組織上の抗原がシアリル
化された糖タンパク質であることを示唆する。
CSLEX1を有する正常な腎臓管及び食道組織のイムノパー
オキシダーゼ染色法は、ノイラミニダーゼ処理によって
廃止された（第５−Ｂ表）。
オキシダーゼ染色法は、ノイラミニダーゼ処理によって
廃止された（第５−Ｂ表）。
Lexに対して向けられた抗体(CSLEX1)によって検出され
る抗原は、ノイラミニダーゼ処理によって、影響されな
かった。
る抗原は、ノイラミニダーゼ処理によって、影響されな
かった。
CFU-C検定 モノクローナル抗体がCFU-C上に効果を持っていた。CFU
-Cの回収率は、ウサギ補体による処理の後、１：１０４
の希釈で２８％であった。これは、CSLEX1がCFU-C、す
なわち顆粒球の前駆体と反応するということを示してい
る。
-Cの回収率は、ウサギ補体による処理の後、１：１０４
の希釈で２８％であった。これは、CSLEX1がCFU-C、す
なわち顆粒球の前駆体と反応するということを示してい
る。
種々のガングリオシドとのCSLEX1の反応性 異なった抗体希釈度でのガングリオシドとの反応性を、
固層イムノラジオアッセイによって決定した。シアロシ
ルラクトフコペンタオシル(III)セラミド（Rauvala）及
びシアロシルジフコシルガングリオシド（６Ｂ）と、抗
体は反応したが、テストされた他の物とは反応しなかっ
た。CSLEX1抗体によるガングリオシドのTLC免疫染色パ
ターンも、決定した。CSLEX1は、６Ｂガングリオシド及
びRauvalaのガングリオシドの両方と反応したが、しか
し、シアロシルLaa分画とも他のガングリオシドとも反
応しなかった。
固層イムノラジオアッセイによって決定した。シアロシ
ルラクトフコペンタオシル(III)セラミド（Rauvala）及
びシアロシルジフコシルガングリオシド（６Ｂ）と、抗
体は反応したが、テストされた他の物とは反応しなかっ
た。CSLEX1抗体によるガングリオシドのTLC免疫染色パ
ターンも、決定した。CSLEX1は、６Ｂガングリオシド及
びRauvalaのガングリオシドの両方と反応したが、しか
し、シアロシルLaa分画とも他のガングリオシドとも反
応しなかった。
第６表は、CSLEX1抗体に対してテストされたフコガング
リオシドを示している。モノクローナル抗体は、シアロ
シルLewisxハプテンを含む、最初の２つのガングリオシ
ドと反応したことが見られる。この抗体は、第６表に示
されたようにわずかに異なった化学構造をもつ類似の誘
導体とは反応しなかった。
リオシドを示している。モノクローナル抗体は、シアロ
シルLewisxハプテンを含む、最初の２つのガングリオシ
ドと反応したことが見られる。この抗体は、第６表に示
されたようにわずかに異なった化学構造をもつ類似の誘
導体とは反応しなかった。
赤血球凝集テストを、２倍に希釈した血清の0.05ｍ及
び１％の敏感にされたオックス赤血球細胞の0.05ｍを
含んでいるＵ−型ウェルにおいて実施した。反応性は室
温で２時間のインキュベーションの後、読み取った。感
作された赤血球を添加する前に、患者の血清及びCSLEX1
と共にインキュベートすることにより確認テストを実施
した。第７表を参照のこと。
び１％の敏感にされたオックス赤血球細胞の0.05ｍを
含んでいるＵ−型ウェルにおいて実施した。反応性は室
温で２時間のインキュベーションの後、読み取った。感
作された赤血球を添加する前に、患者の血清及びCSLEX1
と共にインキュベートすることにより確認テストを実施
した。第７表を参照のこと。
CSLEX1抗体が、癌患者からの３１３の血清のうち２３％
の血清と反応するが一方、８０の正常人からのどの血清
とも反応しないということを、次のデータは証明してい
る。シアリル化されたLeaの場合のように、シアリル化
された形のLexは癌患者の血清中に存在するが、しかし
正常な患者の血清中には存在しない（マグナニイ，キャ
ンサー リサーチ(Cancer Research)(1983)４３：５４
８９〜５４９２）．従って、腫瘍の存在を検出し、腫瘍
をうまく除去するためにモニターに写し、及び、さらに
腫瘍の位置の徴候をもたらすために診断テストにおい
て、CSLEX1抗体は使用され得る。
の血清と反応するが一方、８０の正常人からのどの血清
とも反応しないということを、次のデータは証明してい
る。シアリル化されたLeaの場合のように、シアリル化
された形のLexは癌患者の血清中に存在するが、しかし
正常な患者の血清中には存在しない（マグナニイ，キャ
ンサー リサーチ(Cancer Research)(1983)４３：５４
８９〜５４９２）．従って、腫瘍の存在を検出し、腫瘍
をうまく除去するためにモニターに写し、及び、さらに
腫瘍の位置の徴候をもたらすために診断テストにおい
て、CSLEX1抗体は使用され得る。
この発明は、例示の方法及び明確に理解するために例に
よっていく分詳しく記載されたけれども、ある変更及び
改変を行うことができる。
よっていく分詳しく記載されたけれども、ある変更及び
改変を行うことができる。
なお、ハイブリドーマCSLEX1は、１９８４年６月２０日
にNO.ＨＢ８５８０としてA.T.C.C.に寄託された。
にNO.ＨＢ８５８０としてA.T.C.C.に寄託された。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 フクシマ，キヨヤス アメリカ合衆国，カリフオルニア 90247, ガーデナ，ウエスト ガーデナ ブールバ ード 1619 (72)発明者 ワキサカ，アケミ アメリカ合衆国，カリフオルニア 90504, トーランス，フエアビユー レーン 18224 (72)発明者 イグロ，タカシ アメリカ合衆国，カリフオルニア 90503, トーランス，７，ガーネツト 3730
Claims (8)
- 【請求項１】腫瘍状態の存否を調べるための方法であっ
て、シアリル化されたLex(Lewisx）ハプテンと前記シア
リル化されたLexハプテンに対するモノクローナル抗体
との反応により、前記シアリル化されたLexハプテンを
含む分子の血液中での存在を検出することを含んで成る
方法。 - 【請求項２】前記モノクローナル抗体がCSLEX1である特
許請求の範囲第１項記載の方法。 - 【請求項３】シアリル化されたLexハプテンに対するモ
ノクローナル抗体。 - 【請求項４】前記ハイブリドマCSLEX1から得られた特許
請求の範囲第３項に記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項５】検出可能なシグナルをもたらすことができ
る化合物に接合される特許請求の範囲第３項に記載のモ
ノクローナル抗体。 - 【請求項６】前記ラベルが螢光物である特許請求の範囲
第３項に記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項７】前記ラベルが酵素である特許請求の範囲第
３項に記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項８】前記ラベルが放射性同位体である特許請求
の範囲第３項に記載のモノクローナル抗体。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/623,309 US4752569A (en) | 1984-06-21 | 1984-06-21 | Sialylated Lewisx epitope, antibodies and diagnosis |
| US623309 | 1996-03-28 |
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|---|---|---|---|
| JP9113911A Division JP2950792B2 (ja) | 1984-06-21 | 1997-05-01 | シアリル化されたＬｅｗｉｓ（Ｘ）エピトープに対するモノクローナル抗体の断片 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6163700A JPS6163700A (ja) | 1986-04-01 |
| JPH0630618B2 true JPH0630618B2 (ja) | 1994-04-27 |
Family
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Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60133139A Expired - Lifetime JPH0630618B2 (ja) | 1984-06-21 | 1985-06-20 | シアリル化されたＬｅｗｉｓｘエピト−プ，抗体及び診断 |
| JP9113911A Expired - Lifetime JP2950792B2 (ja) | 1984-06-21 | 1997-05-01 | シアリル化されたＬｅｗｉｓ（Ｘ）エピトープに対するモノクローナル抗体の断片 |
Family Applications After (1)
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|---|---|---|---|
| JP9113911A Expired - Lifetime JP2950792B2 (ja) | 1984-06-21 | 1997-05-01 | シアリル化されたＬｅｗｉｓ（Ｘ）エピトープに対するモノクローナル抗体の断片 |
Country Status (5)
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| JP (2) | JPH0630618B2 (ja) |
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| ES (1) | ES8609731A1 (ja) |
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| EP0248147A3 (en) * | 1986-03-04 | 1989-02-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method of determining the presence of cancer cells |
| NZ222509A (en) * | 1986-11-19 | 1993-03-26 | Oncogen | Hybridoma cell line producing antibodies binding to tumour-associated mucin antigen |
| US6004761A (en) * | 1986-11-19 | 1999-12-21 | Sanofi | Method for detecting cancer using monoclonal antibodies to new mucin epitopes |
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| US5122112A (en) * | 1986-11-21 | 1992-06-16 | Imre Corporation | Antigen-specific removal of circulating immune complexes |
| JPS63159763A (ja) * | 1986-12-24 | 1988-07-02 | Fujirebio Inc | 逆受身凝集反応試薬 |
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| US5079353A (en) * | 1987-12-02 | 1992-01-07 | Chembiomed, Ltd. | Sialic acid glycosides, antigens, immunoadsorbents, and methods for their preparation |
| US5075218A (en) * | 1987-12-29 | 1991-12-24 | Biomira, Inc. | Screening for antibodies which bind carbohydrate epitopes of tumor-associated antigens, and uses thereof |
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| US6307025B1 (en) | 1989-04-28 | 2001-10-23 | Biogen, Inc. | VCAM fusion proteins and DNA coding therefor |
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| IE914075A1 (en) * | 1990-11-23 | 1992-06-03 | Gen Hospital Corp | Inhibition of cell adhesion protein-carbohydrate¹interactions |
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| SG52383A1 (en) | 1993-05-17 | 1998-09-28 | T Cell Sciences Inc | Compositions comprising complement related proteins and carbohydrates and methods for producing and using said compositions |
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| NO961031D0 (no) | 1996-03-13 | 1996-03-13 | Det Norske Radiumshospital Tum | Fremgangsmåte til å drepe uönskede målceller |
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| CA2478083A1 (en) * | 2002-03-05 | 2003-09-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Biospecific contrast agents |
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| US10307471B2 (en) | 2013-05-02 | 2019-06-04 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Immunity inducer for saccharide antigens |
-
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- 1984-06-21 US US06/623,309 patent/US4752569A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-06-19 EP EP85304390A patent/EP0165811A2/en not_active Withdrawn
- 1985-06-20 ES ES85544389A patent/ES8609731A1/es not_active Expired
- 1985-06-20 JP JP60133139A patent/JPH0630618B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-21 CA CA000484922A patent/CA1277614C/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-05-01 JP JP9113911A patent/JP2950792B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| FEBS LETTERS=1976 * |
| THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY=1979 * |
| THE JOURNALOF BIOLOGICAL CHEMISTRY=1982 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4752569A (en) | 1988-06-21 |
| JP2950792B2 (ja) | 1999-09-20 |
| ES8609731A1 (es) | 1986-07-16 |
| EP0165811A2 (en) | 1985-12-27 |
| JPS6163700A (ja) | 1986-04-01 |
| CA1277614C (en) | 1990-12-11 |
| ES544389A0 (es) | 1986-07-16 |
| JPH1052269A (ja) | 1998-02-24 |
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