JPH06298798A - Production of elcatonin - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain the subject compound having serum calcium depressing action on mammals and human on an industrial scale at a low cost by carrying out a peptide condensation reaction while reacting a ring-forming site having protecting group with diphenylphosphoric acid azide, thereby forming a ring. CONSTITUTION:After synthesizing a straight-chain peptide chain by a peptide condensation reaction, the peptide is dissolved in dimethylamide and the solution is incorporated with diphenylphosphoric acid azide and sodium bicarbonate. The mixture is cooled to 0 deg.C and made to react at 4 deg.C for 2 days to effect the cyclization reaction of the ring-forming site expressed by formula I and obtain a ring expressed by formula II. The solvent is distilled off under reduced pressure, diethyl ether is added to the residue and the formed solid is collected by filtration. The solid is recrystallized with dimethylformamide/diethyl ether to obtain elcatonin expressed by formula III and having serum calcium depressing action on mammals and human in high production efficiency.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】この発明はエルカトニンの製造方
法に関するものである。さらに詳しくは、この発明は、
哺乳動物、ヒトの血清カルシウム低下活性を有するエル
カトニンの高効率、高純度での取得を可能とする新規製
造方法に関するものである。FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a method for producing elcatonin. More specifically, the present invention is
The present invention relates to a novel method for producing elcatonin, which has a serum calcium lowering activity in mammals and humans, with high efficiency and high purity.

【０００２】[0002]

【従来の技術とその課題】従来より、哺乳動物、ヒトの
血清カルシウム低下活性を有する生理活性物質として次
式（１）2. Description of the Related Art Conventionally, the following formula (1) has been used as a physiologically active substance having a serum calcium lowering activity in mammals and humans.

【０００３】[0003]

【化４】 [Chemical 4]

【０００４】で表されるエルカトニンが知られている。
このエルカトニンについては、上記式（１）のアミノ酸
順序を個々のアミノ酸および２〜４個のアミノ酸からな
る低級ペプチドの縮合により構成し、反応の任意の過程
で生成した次式Elcatonin represented by the following formula is known.
For this elcatonin, the amino acid sequence of the above formula (1) is formed by condensation of individual amino acids and a lower peptide consisting of 2 to 4 amino acids, and the following formula produced in any process of the reaction

【０００５】[0005]

【化５】 [Chemical 5]

【０００６】（Ｒは活性エステル残基を示す）を含む構
成単位を環化反応させ、任意の過程で保護基を脱離して
製造する方法がすでに知られている（特開昭５１−１２
８９９３）。この方法は、上記環化反応とともに、常法
手段によってペプチド縮合、保護基の着脱を繰り返すこ
とを特徴としているが、この方法は、環化反応をはじ
め、各々の反応工程が面倒で、反応効率、純度等の点に
おいて必ずしも実用上満足できるものではなく、改善す
べき課題をかかえていた。A method is known in which a structural unit containing (R represents an active ester residue) is subjected to a cyclization reaction, and the protecting group is eliminated in an arbitrary process to produce the compound (JP-A-51-12).
8993). This method is characterized by repeating peptide condensation and attachment / detachment of a protecting group by conventional means together with the above cyclization reaction, but this method is troublesome in each reaction step including the cyclization reaction and has a high reaction efficiency. In terms of purity, etc., it was not always satisfactory in practice, and there were problems to be improved.

【０００７】このような事情から、優れた生理活性を有
するエルカトニンについては、これらの従来方法の欠点
を解消し、より簡便な操作で、しかも高純度なエルカト
ニンを安価に製造することのできる新しい製造方法を実
現することが強く望まれていた。この発明は、以上の通
りの事情を踏まえてなされたものであり、血清カルシウ
ムの低下が望まれる諸症状に対して優れた活性を有する
エルカトニンを、より安価に製造して供給することので
きる新しい製造方法を提供することを目的としている。Under such circumstances, a new production of elcatonin having excellent physiological activity can be carried out by eliminating the disadvantages of these conventional methods, by a simpler operation, and by highly inexpensive elcatonin production. There was a strong desire to realize the method. The present invention has been made in view of the circumstances as described above, and new elcatonin having excellent activity against various symptoms in which reduction of serum calcium is desired can be manufactured and supplied at a lower cost. It is intended to provide a manufacturing method.

【０００８】[0008]

【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するものとして、ペプチド縮合反応により次式
（１）Means for Solving the Problems The present invention is achieved by solving the above-mentioned problems by the following formula (1) by a peptide condensation reaction.

【０００９】[0009]

【化６】 [Chemical 6]

【００１０】で表わされるエルカトニンまたはその酸付
加塩もしくは錯体を製造するに際し、反応の過程におい
て、保護基を有する次式（２）In the production of elcatonin represented by the formula (1) or an acid addition salt or complex thereof, the following formula (2) having a protecting group in the course of reaction is used.

【００１１】[0011]

【化７】 [Chemical 7]

【００１２】の構成部を、次式The constituent part of

【００１３】[0013]

【化８】 [Chemical 8]

【００１４】のジフェニルリン酸アジド（ＤＰＰＡ）と
反応させて次式（３）By reacting with diphenylphosphoric azide (DPPA) of the following formula (3)

【００１５】[0015]

【化９】 [Chemical 9]

【００１６】の環化部を生成させることを特徴とするエ
ルカトニンの製造方法を提供する。もちろんこの発明の
製造方法においては、全体としてペプチド縮合反応が採
用されており、反応の任意の過程では各種の保護基が用
いられる。この保護基としては、ペプチド合成に通常使
用され、加水分解、酸分解、還元、アミノリシス、ある
いはヒドラジンとの反応等によって容易に脱離すること
のできる任意の保護基を用いることができる。その各々
について具体的に例示するまでもない。There is provided a method for producing elcatonin, which comprises producing the cyclized part of Of course, in the production method of the present invention, a peptide condensation reaction is adopted as a whole, and various protective groups are used in any process of the reaction. As this protecting group, any protecting group which is commonly used in peptide synthesis and which can be easily eliminated by hydrolysis, acidolysis, reduction, aminolysis, reaction with hydrazine or the like can be used. It goes without saying that each of them will be specifically exemplified.

【００１７】ペプチド縮合反応の過程において、上記の
通りの式（２）の構成部をジフェニルリン酸アジドと反
応させて式（３）の環化部を生成させることがこの発明
の特徴であって、他の反応工程については、上記の保護
基の選択とともに従来公知のペプチド縮合反応の手法に
よって適宜に実施することができる。より好ましい態様
としてこの発明を例示すると、たとえば次式It is a feature of the present invention that in the course of the peptide condensation reaction, the constituent part of formula (2) as described above is reacted with diphenylphosphoric acid azide to form the cyclized part of formula (3). The other reaction steps can be appropriately carried out by a conventionally known method of peptide condensation reaction together with the selection of the above protecting groups. To illustrate the present invention as a more preferred embodiment, for example, the following formula

【００１８】[0018]

【化１０】 [Chemical 10]

【００１９】のアミノカルボン酸から式（２）のペプチ
ド構成部を生成させ、ジフェニルリン酸アジドによって
環化反応させて生成させた式（３）の環化部を有する化
合物を、適宜な長さのペプチド鎖を有する樹脂担持ペプ
チドと反応させる方法が挙げられる。この方法は、固相
ペプチド合成の方法でもある。樹脂担持ペプチドは、公
知のペプチド鎖の伸長方法によって製造することができ
る。A compound having a cyclized portion of the formula (3), which is produced by cyclizing a peptide constituent portion of the formula (2) from the aminocarboxylic acid of the formula (2) and cyclized with diphenylphosphoric acid azide, is used. And a resin-supported peptide having the peptide chain of 1. This method is also a method of solid phase peptide synthesis. The resin-supported peptide can be produced by a known peptide chain extension method.

【００２０】あるいはまた、式（２）の構成部を有する
エルカトニン構成ペプチドを全て樹脂担体に固定し、次
いでジフェニルリン酸アジドによって環化反応させるこ
とでエルカトニンに導いてもよい。もちろん、固相合成
に限られることなく、液相法によってもよい。たとえば
以上の方法によって製造したエルカトニンは、次いで治
療用に使用することのできる酸付加塩、または錯体とす
ることができる。たとえば、塩酸、臭化水素酸、リン
酸、硫酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、
ピルビン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、安息香
酸、サリチル酸、ベンゼンスルホン酸塩等の付加塩に、
あるいは、カルシウム、マグネシウム、リン酸、デキス
トラン、ＣＭＣ、プロタミン等との錯体とすることがで
きる。Alternatively, all the elcatonin-constituting peptides having the constituent part of formula (2) may be immobilized on a resin carrier, and then cyclized with diphenylphosphoric acid azide to lead to elcatonin. Of course, the solid phase synthesis is not the only method, and a liquid phase method may be used. For example, the elcatonin produced by the above method can be made into an acid addition salt or complex which can then be used therapeutically. For example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, lactic acid,
To addition salts such as pyruvic acid, oxalic acid, succinic acid, citric acid, benzoic acid, salicylic acid, benzene sulfonate,
Alternatively, it can be a complex with calcium, magnesium, phosphoric acid, dextran, CMC, protamine or the like.

【００２１】以下、実施例を示し、この発明の高効率、
高純度エルカトニンの製造方法についてさらに詳しく説
明する。Examples will be shown below to show the high efficiency of the present invention.
The method for producing high-purity elcatonin will be described in more detail.

【００２２】[0022]

【実施例】実施例１ ＜Ａ＞Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｕ−Ｖａｌ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＯＰａｃ６００ｍｇおよびアニソール
２２６μｌを０°Ｃの温度下にトリフルオロ酢酸６ｍｌ
に溶解し１時間攪拌する。室温下にトリフルオロ酢酸を
減圧留去し、残査にジエチルエーテルを加え、生ずる沈
澱をろ取し、減圧下に乾燥する。EXAMPLES Example 1 <A> Boc-Ser (Bzl) -Asn-Leu-S
er (Bzl) -Thr (Bzl) -Asu-Val-
600 mg of Leu-Gly-OPac and 226 μl of anisole were added to 6 ml of trifluoroacetic acid at a temperature of 0 ° C.
And stir for 1 hour. At room temperature, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, diethyl ether was added to the residue, and the resulting precipitate was collected by filtration and dried under reduced pressure.

【００２３】＜Ｂ＞ジフェニルりん酸アジド３５７μ
ｌ、炭酸水素ナトリウム２４３ｍｇをジメチルホルムア
ミド４２ｍｌに溶解し、０℃に冷却する。上記＜Ａ＞の
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｕ−Ｖａｌ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｙ−ＯＰａｃ６００ｍｇのＢｏｃ脱保護体をジ
メチルホルムアミド１６ｍｌに溶解し滴下する。滴下ロ
ートを１６ｍｌのジメチルホルムアミドで洗い込み４°
Ｃの温度で反応させ、翌日ジフェニルりん酸アジド３５
７μｌを追加し、さらに４℃の温度で２日間反応させ
る。減圧下溶媒を留去し、ジエチルエーテルを加え生ず
る固体をろ取する。その後、ジメチルホルムアミド／１
Ｍ酢酸、次いでジメチルホルムアミド／ジエチルエーテ
ルで再結晶して次式の化合物を得る。<B> 357 μ of diphenylphosphoric acid azide
1, 243 mg of sodium hydrogen carbonate are dissolved in 42 ml of dimethylformamide, and cooled to 0 ° C. Boc-Ser (Bzl) -Asn-Leu-Ser of the above <A>
(Bzl) -Thr (Bzl) -Asu-Val-Le
U-Gly-OPac 600 mg Boc deprotected form is dissolved in 16 ml of dimethylformamide and added dropwise. Rinse the dropping funnel with 16 ml of dimethylformamide at 4 °
The reaction was carried out at a temperature of C, and the next day, diphenylphosphoric acid azide 35
Add 7 μl and react at a temperature of 4 ° C. for 2 days. The solvent is distilled off under reduced pressure, diethyl ether is added, and the resulting solid is collected by filtration. Then dimethylformamide / 1
Recrystallisation from M acetic acid then dimethylformamide / diethyl ether gives the compound of formula

【００２４】[0024]

【化１１】 [Chemical 11]

【００２５】＜Ｃ＞上記＜Ｂ＞により得られた保護基を
有する環化物４００ｍｇをジメチルホルムアミド４ｍｌ
に溶解し、さらにアントラニル酸４０８ｍｇ、亜鉛２０
０ｍｇ、ピリジン１．２ｍｌを加えて５５℃の温度で３
時間攪拌する。反応液を、１Ｎ−塩酸４００ｍｌ中に注
ぎ、生成する固体をろ取する。この固体をジメチルホル
ムアミドに再溶解し、不溶性の固体を遠沈によって除去
する。上澄み溶液を濃縮後、２％ＥＤＴＡ水溶液を加
え、析出する固体をろ取する。ジメチルホルムアミド／
ジエチルエーテル混液で再結晶を行い精製する。末端保
護基Ｐａｃを脱離させ、遊離の−ＯＨとした化合物を得
る。<C> 400 mg of the cyclized product having a protecting group obtained in the above <B> is added to 4 ml of dimethylformamide.
Dissolved in, and further 408 mg anthranilic acid, 20 zinc
Add 0 mg and 1.2 ml of pyridine, and add 3 at the temperature of 55 ° C.
Stir for hours. The reaction solution is poured into 400 ml of 1N-hydrochloric acid, and the produced solid is collected by filtration. This solid is redissolved in dimethylformamide and the insoluble solid is removed by centrifugation. After concentrating the supernatant solution, a 2% aqueous EDTA solution is added, and the precipitated solid is collected by filtration. Dimethylformamide /
Recrystallize with a mixture of diethyl ether to purify. The terminal protecting group Pac is eliminated to obtain a compound in the form of free -OH.

【００２６】２７６ｍｇ（７６％） ＜Ｄ＞ＢＯ−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ−Ｚ）−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｌｅｕ−Ｈ
ｉｓ（Ｂｏｍ）−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ−Ｚ）−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｎ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−Ｚ）−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈ
ｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｒｏ−ＭＢＨＡ−樹脂２５０ｍｇをジ
クロロメタン・ジメチルホルムアミド混液で洗浄し、ジ
クロロメタン・ジメチルホルムアミド混液５ｍｌに懸濁
し、３０分間放置する。液を捨て、ジクロロメタンで３
回洗浄し、０．５Ｍメタンスルホン酸ジクロロメタン溶
液（２％アニソール含有）中で、１分間攪拌した後、液
を捨て、もう一度０．５Ｍメタンスルホン酸／ジクロロ
メタン溶液（２％アニソール含有）中で、２０分間攪拌
する。この後、 ３３％ジオキサン・ジクロロメタン混液 回 ジクロロメタン・ジメチルホルムアミド混液 ２回 ジクロロメタン ３回 ５％ジイソプロピルエチルアミン・ジクロロメタン溶液
２回 ジクロロメタン ４回 ジクロロメタン・ジメチルホルムアミド溶液 １回 で洗浄した後、上記式＜Ｃ＞の生成物８６ｍｇ、ＢＯＰ
試薬５２ｍｇ、ジイソプロピルエチルアミン２３μｌ、
Ｎ−メチル−２−ピロリドン・ジクロロメタン混液２ｍ
ｌを加えて、２５℃の温度で攪拌する。276 mg (76%) <D> BO-Lys (2-Cl-Z) -Leu-Ser
(Bzl) -Gln-Glu (OBzl) -Leu-H
is (Bom) -Lys (2-Cl-Z) -Leu-G
In-Thr (Bzl) -Tyr (2-Br-Z) -P
ro-Arg (Tos) -Thr (Bzl) -Asp
(OBzl) -Val-Gly-Ala-Gly-Th
250 mg of r (Bzl) -Pro-MBHA-resin is washed with a dichloromethane / dimethylformamide mixed solution, suspended in 5 ml of a dichloromethane / dimethylformamide mixed solution, and left standing for 30 minutes. Discard the solution, and add 3 with dichloromethane.
After washing twice and stirring in a 0.5 M methanesulfonic acid dichloromethane solution (containing 2% anisole) for 1 minute, the liquid was discarded and the solution was again added to a 0.5 M methanesulfonic acid / dichloromethane solution (containing 2% anisole). Stir for 20 minutes. After this, 33% dioxane / dichloromethane mixed solution twice, dichloromethane / dimethylformamide mixed solution twice, dichloromethane three times 5% diisopropylethylamine / dichloromethane solution twice, dichloromethane four times, dichloromethane / dimethylformamide solution once, and then the above formula <C> Product 86mg, BOP
52 mg of reagent, 23 μl of diisopropylethylamine,
N-methyl-2-pyrrolidone / dichloromethane mixture 2m
Add 1 and stir at a temperature of 25 ° C.

【００２７】２４時間後、 Ｂｏｐ試薬５２ｍｇ ジイソプロピルエチルアミン２３μｌを追加する。 ４８時間後 ジクロロメタン・ジメチルホルムアミド混液 ２回洗浄
し、再度、同条件で、上記＜Ｃ＞の生成物８６ｍｇを加
え、Ｂｏｐ試薬５２ｍｇ、ジイソプロピルエチルアミン
２３μｌ、Ｎ−メチル−２−ピロリドン・ジクロロメタ
ン混液２ｍｌを加えて、２５℃の温度において攪拌す
る。After 24 hours, add 52 mg of Bop reagent, 23 μl of diisopropylethylamine. After 48 hours, a dichloromethane / dimethylformamide mixed solution was washed twice, and again under the same conditions, 86 mg of the product of the above <C> was added, and Bop reagent 52 mg, diisopropylethylamine 23 μl, and N-methyl-2-pyrrolidone / dichloromethane mixed solution 2 ml were added. In addition, stirring is carried out at a temperature of 25 ° C.

【００２８】７２時間後 Ｂｏｐ試薬 ５２ｍｇ ジイソプロピルエチルアミン ２３μｌを追加する。 ９６時間後 ジクロロメタン・ジメチルホルムアミド混液 ２回 ジクロロメタン ３回 メタノール ２回で洗浄した後、減圧下５０°Ｃの温度
で乾燥する。72 hours later Bop reagent 52 mg Diisopropylethylamine 23 μl are added. 96 hours later Dichloromethane / dimethylformamide mixed solution twice, dichloromethane three times, washed twice with methanol, and dried under reduced pressure at a temperature of 50 ° C.

【００２９】＜Ｅ＞得られた縮合物２５０ｍｇをｍ−ク
レゾール３００μｌに懸濁する。このまま３０分間放置
する。これにドライアイス・メタノールで冷却したフッ
化水素（ＨＦ）４ｍｌを加え、０℃の温度において１時
間攪拌反応させる。この反応によって樹脂および保護基
を脱離させる。フッ化水素を減圧留去し、残査にジエチ
ルエーテルを加え、生じた固体を取り、ジエチルエーテ
ルにて洗浄する。これを適量の水に溶解し不溶物を除去
する。ろ液は、減圧下に濃縮し、ＣＭ−セファロースイ
オン交換樹脂カラム、逆相クロマトグラフィカラム、セ
ファデックスＧ−２５カラムの順に精製し、凍結乾燥
後、目的物のエルカトニンの活性粉末１８ｍｇを得る。実施例２ ＜Ａ＞次式<E> 250 mg of the obtained condensate is suspended in 300 μl of m-cresol. Leave as it is for 30 minutes. To this, 4 ml of hydrogen fluoride (HF) cooled with dry ice / methanol was added, and the mixture was reacted with stirring at a temperature of 0 ° C. for 1 hour. The reaction removes the resin and protecting groups. Hydrogen fluoride is distilled off under reduced pressure, diethyl ether is added to the residue, the resulting solid is taken, and washed with diethyl ether. This is dissolved in an appropriate amount of water to remove insoluble matter. The filtrate is concentrated under reduced pressure and purified by a CM-Sepharose ion exchange resin column, a reverse-phase chromatography column, and a Sephadex G-25 column in this order, and after freeze-drying, 18 mg of an active powder of elcatonin, which is a target substance, is obtained. Example 2 <A> The following formula

【００３０】[0030]

【化１２】 [Chemical 12]

【００３１】のペプチド縮合物を順次、次の手順によっ
て処理し、反応させた。 ・ジクロロメタン洗浄 ……３回 ・０．５Ｍメタンスルホン酸ジクロロメタン （２％アニソール含有）中 ……１分間 ・０．５Ｍメタンスルホン酸ジクロロメタン （２％アニソール含有）中 ……２０分間 ・３３％ジオキサン・ジクロロメタン溶液洗浄……２回 ・ジクロロメタン・ＤＭＦ混液洗浄 ……２回 ・２０％ピペリジン・ＤＭＦ溶液洗浄 ……１回 ・２０％ピペリジン・ＤＭＦ溶液中 ……２０分間攪拌 ・ＤＭＦ洗浄 ……洗液が塩基性を示さなくなるまで ・メタノール洗浄 ・減圧下 ５０℃乾燥 これにより次式の保護基を有するペプチド縮合物を得
た。The peptide condensates of (1) and (2) were sequentially treated and reacted by the following procedure.・ Dichloromethane washing …… 3 times ・ 0.5M methanesulfonic acid dichloromethane (containing 2% anisole) ・ ・ ・ 1 minute ・ 0.5M methanesulfonic acid dichloromethane (containing 2% anisole) ・ ・ ・ 20 minutes ・ 33% dioxane Dichloromethane solution washing: 2 times ・ Dichloromethane / DMF mixed solution washing: 2 times ・ 20% piperidine / DMF solution washing: 1 time ・ In 20% piperidine / DMF solution: stirring for 20 minutes ・ DMF washing: washing solution Until it shows no basicity, washed with methanol, and dried at 50 ° C. under reduced pressure to obtain a peptide condensate having a protecting group of the following formula.

【００３２】[0032]

【化１３】 [Chemical 13]

【００３３】＜Ｂ＞得られた生成物をＤＭＦ０．５ｍｌ
に懸濁し、ジフェニルリン酸アジド１９μｌ、炭酸水素
ナトリウム１３ｍｇを０℃の温度において加え、４℃の
温度条件下に４３時間攪拌する。ＤＭＦ・ジクロロメタ
ン混液、ジクロロメタンで各々３回洗浄し、メタノール
で洗浄した後に減圧下に５０℃の温度で乾燥する。<B> 0.5 ml of DMF obtained
19 μl of diphenylphosphoric acid azide and 13 mg of sodium hydrogen carbonate are added at a temperature of 0 ° C., and the mixture is stirred for 43 hours under a temperature condition of 4 ° C. DMF / dichloromethane mixed solution and dichloromethane are washed three times each, washed with methanol, and then dried under reduced pressure at a temperature of 50 ° C.

【００３４】次式の保護基を有する環化物を得る。A cyclized product having a protecting group of the following formula is obtained.

【００３５】[0035]

【化１４】 [Chemical 14]

【００３６】＜Ｃ＞得られた環化物８０ｍｇにｍ−クレ
ゾール１００μｌおよびＨＦ１ｍｌを加え、０℃の温度
において１時間反応させる。反応終了後、ＨＦを減圧下
留去し、残渣にジエチルエーテルを加える。生成する白
色沈澱を遠心分離し、ジエチルエーテルで洗浄する。得
られた固体を水に懸濁し、１０％アンモニア水でＰＨ８
とし、室温で、３０分間攪拌した後に５０％酢酸でＰＨ
３として濾過する。濾液は減圧下に濃縮し、凍結乾燥し
て粉末５０ｍｇを得る。<C> To 80 mg of the obtained cyclized product, 100 μl of m-cresol and 1 ml of HF are added, and the mixture is reacted at a temperature of 0 ° C. for 1 hour. After completion of the reaction, HF is distilled off under reduced pressure and diethyl ether is added to the residue. The white precipitate that forms is centrifuged and washed with diethyl ether. The obtained solid was suspended in water, and the pH was adjusted to 8 with 10% aqueous ammonia.
After stirring for 30 minutes at room temperature, add 50% acetic acid to pH.
Filter as 3. The filtrate is concentrated under reduced pressure and freeze-dried to obtain 50 mg of powder.

【００３７】これを０．１Ｍ酢酸に溶解した後にセファ
デックスＬＨ−２０を充填したカラムに注入し、活性画
分を集めて凍結乾燥し、粉末２０ｍｇを得る。この粉末
は、さらに逆相分取クロマトグラフにより精製し、凍結
乾燥した。エルカトニンの活性粉末４ｍｇを得る。This was dissolved in 0.1 M acetic acid and then injected into a column packed with Sephadex LH-20, and the active fractions were collected and freeze-dried to obtain 20 mg of powder. This powder was further purified by reverse phase preparative chromatography and freeze-dried. 4 mg of active powder of elcatonin are obtained.

【００３８】[0038]

【発明の効果】この発明により、従来法よりも簡便な操
作によって効率的な環化が可能になるなど、エルカトニ
ン製造はより効率的に、かつ安価に可能となる。Industrial Applicability According to the present invention, elcatonin can be produced more efficiently and cheaply, for example, efficient cyclization can be performed by a simpler operation than the conventional method.

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 ペプチド縮合反応により次式（１） 【化１】 で表わされるエルカトニンまたはその酸付加塩もしくは
錯体を製造するに際し、反応の過程において、保護基を
有する次式（２） 【化２】 の構成部をジフェニルリン酸アジドと反応させて次式
（３） 【化３】 の環化部を生成させることを特徴とするエルカトニンの
製造方法。1. A peptide of the following formula (1): In producing the elcatonin represented by the formula or an acid addition salt or complex thereof, the following formula (2): By reacting the constituent part of diphenylphosphoric acid azide with the following formula (3): A method for producing elcatonin, which comprises forming a cyclized portion of