JPH06234783A - New physiologically active substance mer-w8020a and mer-w8020b and their production - Google Patents
New physiologically active substance mer-w8020a and mer-w8020b and their productionInfo
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- JPH06234783A JPH06234783A JP5041790A JP4179093A JPH06234783A JP H06234783 A JPH06234783 A JP H06234783A JP 5041790 A JP5041790 A JP 5041790A JP 4179093 A JP4179093 A JP 4179093A JP H06234783 A JPH06234783 A JP H06234783A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は抗リウマチ作用を示す新
規生理活性物質およびそれらの製造方法に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a novel physiologically active substance having an antirheumatic effect and a method for producing them.
【０００２】[0002]
【従来の技術】従来より自己免疫疾患（例えば、慢性関
節リウマチ等）の治療薬剤としてはステロイドホルモン
剤、金製剤、D-ペニシラミンおよび酸性抗炎症剤等が使
用されているが、これらの薬剤は副腎機能不全、感染
症、腎障害、造血障害または胃腸障害等、時として重篤
な副作用を起こすので、使用にあたって大きな制約とな
っている。また既存の薬剤の化学修飾による毒性の軽減
や薬効の増強にも限界があり、新規な薬剤の開発が求め
られている。Conventionally, steroid hormones, gold preparations, D-penicillamine and acidic anti-inflammatory agents have been used as therapeutic agents for autoimmune diseases (for example, rheumatoid arthritis). Since it sometimes causes serious side effects such as adrenal insufficiency, infectious diseases, renal disorders, hematopoietic disorders, gastrointestinal disorders, etc., it is a big limitation in use. In addition, there is a limit to the toxicity reduction and enhancement of drug efficacy of existing drugs by chemical modification, and development of new drugs is required.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、優れた抗リ
ウマチ作用を有し、かつ低毒性で安全に使用できる新規
生理活性物質およびそれらの製造法を提供するものであ
る。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention provides a novel physiologically active substance having excellent antirheumatic activity, low toxicity and safe use, and a method for producing the same.
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗リウマ
チ作用を有する新規物質の探索を目的として種々の土壌
から菌株を分離し、その生産する代謝産物について研究
を重ねた結果、新たに分離したストレプトミセス(Strep
tomyces)属に属する菌株が培養液中に、慢性関節リウマ
チのモデルであるラットのアジュバント関節炎を抑制す
る物質を生産していることを見出した。該培養液から有
効物質を分離精製し、その理化学的性質を調べたとこ
ろ、該有効物質は従来の文献に未載の新規物質であり、
かつ優れた抗リウマチ作用を有することを見出し、本発
明を完成した。[Means for Solving the Problems] The present inventors have isolated strains from various soils for the purpose of searching for novel substances having antirheumatic activity, and have conducted research on metabolites produced by the strains. Isolated Streptomyces
It was found that a strain belonging to the genus tomyces produces a substance that suppresses adjuvant arthritis in rats, which is a model of rheumatoid arthritis, in a culture solution. When the active substance was separated and purified from the culture solution and its physicochemical properties were examined, the active substance was a novel substance not yet published in conventional literature,
Moreover, they have found that they have an excellent anti-rheumatic effect and completed the present invention.
【０００５】すなわち、本発明は、下記の理化学的性質
を有する生理活性物質Mer-W8020Aを提供するものであ
る。 (1)色および形状：白色結晶 (2)高分解能FABマススペクトル m/z:1472.8760(M+H)+ (3)FABマススペクトル (マトリックス；m-ニトロベンジ
ルアルコール) m/z:1472(M+H)+ (4)融点 178-181℃ (5)旋光度 ［α］24 D -150.5゜(c 0.4、メタノール)That is, the present invention provides a physiologically active substance Mer-W8020A having the following physicochemical properties. (1) Color and shape: white crystal (2) High resolution FAB mass spectrum m / z: 1472.8760 (M + H) + (3) FAB mass spectrum (matrix; m-nitrobenzyl alcohol) m / z: 1472 (M + H) + (4) Melting point 178-181 ° C (5) Optical rotation [α] 24 D -150.5 ° (c 0.4, methanol)
【０００６】(6)紫外部吸収スペクトル メタノール中で測定した結果は、図１に示す通りであ
る。 (7)赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤中で測定した結果は、図２に示す通り
である。 (8)1H-NMRスペクトル(400MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図３に示す通りであ
る。 (9)13C-NMRスペクトル(100MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図４に示す通りであ
る。 (10)溶解性 クロロホルム、アセトン、メタノール、酢酸エチルに可
溶、ヘキサン、水に不溶。(6) Ultraviolet absorption spectrum The results measured in methanol are shown in FIG. (7) Infrared absorption spectrum The results measured in potassium bromide tablets are as shown in FIG. (8) 1 H-NMR spectrum (400 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. (9) 13 C-NMR spectrum (100 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. (10) Solubility Soluble in chloroform, acetone, methanol and ethyl acetate, insoluble in hexane and water.
【０００７】(11)呈色反応 ライドン−スミス試薬、リンモリブデン酸試薬、エーリ
ッヒ試薬で呈色する。ドラーゲンドルフ試薬、ニンヒド
リン試薬で呈色しない。 (12)薄層クロマトグラフィーのRf値 シリカゲルプレートF-254(メルク社製)にて 0.30 (展開溶媒は、クロロホルム：メタノール：水＝80:10:
1)(11) Color reaction The color is developed with the Reidon-Smith reagent, the phosphomolybdic acid reagent and the Erich reagent. Does not develop color with Dragendorff reagent or ninhydrin reagent. (12) Rf value of thin layer chromatography 0.30 on silica gel plate F-254 (manufactured by Merck) (developing solvent: chloroform: methanol: water = 80: 10:
1)
【０００８】さらに本発明は、下記の理化学的性質を有
する生理活性物質Mer-W8020Bを提供するものである。 (1)色および形状：白色結晶 (2)高分解能FABマススペクトル m/z:1458.8956(M+H)+ (3)FABマススペクトル (マトリックス；m-ニトロベンジ
ルアルコール) m/z:1458(M+H)+ (4)融点 174-177℃ (5)旋光度 ［α］24 D -145゜(c 0.4、メタノール)The present invention further provides a physiologically active substance Mer-W8020B having the following physicochemical properties. (1) Color and shape: white crystal (2) High-resolution FAB mass spectrum m / z: 1458.8956 (M + H) + (3) FAB mass spectrum (matrix; m-nitrobenzyl alcohol) m / z: 1458 (M + H) + (4) Melting point 174-177 ° C (5) Optical rotation [α] 24 D -145 ° (c 0.4, methanol)
【０００９】(6)紫外部吸収スペクトル メタノール中で測定した結果は、図５に示す通りであ
る。 (7)赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤中で測定した結果は、図６に示す通り
である。 (8)1H-NMRスペクトル(400MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図７に示す通りであ
る。 (9)13C-NMRスペクトル(100MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図８に示す通りであ
る。 (10)溶解性 クロロホルム、アセトン、メタノール、酢酸エチルに可
溶、ヘキサン、水に不溶。(6) Ultraviolet absorption spectrum The results of measurement in methanol are shown in FIG. (7) Infrared absorption spectrum The results measured in a potassium bromide tablet are as shown in FIG. (8) 1 H-NMR spectrum (400 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. 7. (9) 13 C-NMR spectrum (100 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. (10) Solubility Soluble in chloroform, acetone, methanol and ethyl acetate, insoluble in hexane and water.
【００１０】(11)呈色反応 ライドン−スミス試薬、リンモリブデン酸試薬、エーリ
ッヒ試薬で呈色する。ドラーゲンドルフ試薬、ニンヒド
リン試薬で呈色しない。 (12)薄層クロマトグラフィーのRf値 シリカゲルプレートF-254(メルク社製) にて 0.26 (展開溶媒は、クロロホルム：メタノール：水＝80:10:
1)(11) Color reaction The color is developed with the Reidon-Smith reagent, the phosphomolybdic acid reagent and the Erich reagent. Does not develop color with Dragendorff reagent or ninhydrin reagent. (12) Rf value of thin layer chromatography 0.26 on silica gel plate F-254 (Merck) (developing solvent: chloroform: methanol: water = 80: 10:
1)
【００１１】さらに本発明は、ストレプトミセス(Strep
tomyces)属に属し、生理活性物質Mer-W8020AおよびMer-
W8020Bを生産する能力を有する微生物を培養し、培養物
から該生理活性物質を採取する該新規生理活性物質の製
造方法を提供するものである。The present invention further relates to Streptomyces (Strep
tomyces), a physiologically active substance Mer-W8020A and Mer-
It is intended to provide a method for producing the novel physiologically active substance, which comprises culturing a microorganism capable of producing W8020B and collecting the physiologically active substance from the culture.
【００１２】本発明に使用される微生物は、ストレプト
ミセス(Streptomyces)属に属し、生理活性物質Mer-W802
0AおよびMer-W8020Bを生産する能力を有する菌株であれ
ばよい。例えば、本発明者らが神奈川県藤沢市引地川河
畔の土壌より分離したMer-W8020菌株を挙げることがで
きるが、この菌株に限らず、ストレプトミセス(Strepto
myces)属に属し、生理活性物質Mer-W8020AおよびMer-W8
020Bを生産する能力を有する菌株であれば、それらの変
異株を含めてすべて本発明に使用することができる。The microorganism used in the present invention belongs to the genus Streptomyces, and is a physiologically active substance Mer-W802.
Any strain having the ability to produce 0A and Mer-W8020B may be used. For example, the present inventors can include the Mer-W8020 strain isolated from the soil on the bank of the Hikiji River, Fujisawa City, Kanagawa Prefecture, but not limited to this strain, Streptomyces (Strepto
myces), physiologically active substances Mer-W8020A and Mer-W8
All strains having the ability to produce 020B, including their mutant strains, can be used in the present invention.
【００１３】以下にMer-W8020菌株の菌学的性状を説明
する。 (1)形態的性質 良く分岐した基菌糸よりラセン状(spiral)の気菌糸を伸
長する。成熟した気菌糸の先に10〜50個の楕円〜円筒形
の胞子からなる胞子鎖を形成する。胞子のうは認められ
ない。胞子の大きさは、0.4〜0.5×0.8〜1.0ミクロン位
で、胞子の表面は平滑状(smooth)を示し、鞭毛は認めら
れない。The mycological properties of the Mer-W8020 strain will be described below. (1) Morphological properties Spiral aerial hyphae are elongated from well-branched basal hyphae. At the end of the mature aerial hyphae, spore chains consisting of 10 to 50 elliptic to cylindrical spores are formed. No sporangia is observed. The size of spores is about 0.4-0.5 x 0.8-1.0 micron, the surface of spores is smooth, and no flagella are observed.
【００１４】(2)各種培地における生育状態 培養は全て28℃で行った。色調の記載はコンティナー・
コーポレーション・オブ・アメリカ(Container Corpora
tion of America)のカラー・ハーモニー・マニュアル(C
olor Harmony Manual)の()内に示す符号で表示する。 (2-1)イースト・麦芽寒天培地 生育は良好で、気菌糸も良く発達する。気菌糸の色はク
リーム色であるが、その上に赤灰色(5dc)の胞子を産す
る。培養裏面は無色ないしは薄いオリーブ色である。黒
紫色ないしは黒褐色の溶解性色素を大量に産生する。(2) Growth state in various media All cultures were performed at 28 ° C. The description of the color tone is
Corporation of America
tion of America) Color Harmony Manual (C
It is displayed with the code shown in () of the olor Harmony Manual. (2-1) Yeast / malt agar medium Growth is good and aerial hyphae are well developed. The color of the aerial mycelium is cream, but it produces red-gray (5dc) spores on it. The reverse side of the culture is colorless or pale olive color. It produces a large amount of black-purple or black-brown soluble pigments.
【００１５】(2-2)スターチ・無機塩寒天培地 生育は良好で、多くの気菌糸と胞子を着生し、コロニー
表面の色および裏面色調はイースト・麦芽寒天培地にお
けるものと同様である。溶解性色素の量は少ない。 (2-3)チロシン寒天培地 生育は中程度である。気菌糸と胞子を着生する。培地中
に溶解性色素を生成する。それらの色調はイースト・麦
芽寒天培地におけるものと同様である。(2-2) Starch / inorganic salt agar medium The growth is good and many aerial mycelia and spores are settled, and the color and the color tone of the colony surface are the same as those on the yeast / malt agar medium. The amount of soluble dye is small. (2-3) Tyrosine agar medium Medium growth. Set aerial hyphae and spores. It produces a soluble dye in the medium. Their colors are similar to those on yeast-malt agar.
【００１６】(3)各種炭素源の同化性 プリードハム・ゴトリーブ寒天培地に各種の炭素源を加
え生育を見た。 (3-1) L-アラビノース ＋ (3-2) D-キシロース ＋ (3-3) D-グルコース ＋ (3-4) D-フルクトース ＋ (3-5) シュークロース − (3-6) イノシトール − (3-7) L-ラムノース ＋ (3-8) ラフィノース − (3-9) D-マンニトール ＋ ＋は同化
する、−は同化しない(3) Assimilation of various carbon sources Various carbon sources were added to Predham-Gotrieve agar medium, and growth was observed. (3-1) L-arabinose + (3-2) D-xylose + (3-3) D-glucose + (3-4) D-fructose + (3-5) sucrose − (3-6) inositol -(3-7) L-rhamnose + (3-8) raffinose- (3-9) D-mannitol ++ assimilates, -does not assimilate
【００１７】(4)細胞壁成分の性状 細胞を加水分解したものをセルロースの薄層クロマトグ
ラフィーによって分析したところ、本菌の細胞壁成分の
ジアミノピメリン酸(diamino pimeric acid)の異性体型
はLL-型であり、糖成分には特徴が無かった。(4) Properties of cell wall components Hydrolyzed cells were analyzed by thin layer chromatography of cellulose, and the isomer form of diamino pimeric acid of the cell wall components of this bacterium was LL-type. The sugar component had no characteristics.
【００１８】以上の菌学的性質から本菌はストレプトミ
セス(Streptomyces)属の菌であることは明確であり、イ
ンターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティク
・バクテリオロジー,18巻,2号,1968(International Jou
rnal of Systematic Bacteriology,vol.18,No.2,1968)
において、インターナショナル・ストレプトミセス・プ
ロジェクト(International Streptomyces Project)が承
認したストレプトミセス(Streptomyces)属菌株の記載性
状と比較したところ、ストレプトミセス・グリセオビリ
ディス(Streptomyces griseoviridis)の記載とは、本菌
が溶解性色素を多量に産生し、培養裏面の色がほとんど
無いことを除けば、ほぼ一致した。From the above-mentioned mycological properties, it is clear that the present bacterium is a bacterium of the genus Streptomyces, and International Journal of Systematic Bacteriology, Vol. 18, No. 2, 1968 (International Jou
(rnal of Systematic Bacteriology, vol.18, No.2, 1968)
In, in comparison with the description properties of Streptomyces (Streptomyces) strains approved by International Streptomyces Project (International Streptomyces Project), the description of Streptomyces griseoviridis (Streptomyces griseoviridis), the bacterium is lysed Almost the same, except that a large amount of sex pigment was produced and there was almost no color on the back surface of the culture.
【００１９】そこで本発明者らは、本菌株をストレプト
ミセス・グリセオビリディス(Streptomyces griseoviri
dis) Mer-W8020と命名し、平成5年1月19日付けで工業技
術院生命工学工業技術研究所に、FERM-P13374の番号で
寄託した。Therefore, the present inventors have confirmed that the strain of the present invention is Streptomyces griseoviri.
dis) Mer-W8020, and deposited on January 19, 1993, at the Institute of Biotechnology, Institute of Industrial Science and Technology with a number of FERM-P13374.
【００２０】本発明の生理活性物質Mer-W8020AおよびMe
r-W8020Bは、上記菌株を栄養源含有培地に接種し、好気
的に培養することにより製造される。上記微生物の培養
方法は、原則的には一般微生物の培養方法に準ずるが、
通常は液体培養による振盪培養、通気攪拌培養などの好
気的条件下で実施するのが好ましい。The physiologically active substances Mer-W8020A and Me of the present invention
r-W8020B is produced by inoculating a nutrient-containing medium with the above strain and aerobically culturing. The method for culturing the above-mentioned microorganism is basically similar to the method for culturing a general microorganism,
Usually, it is preferably carried out under aerobic conditions such as shaking culture by liquid culture and aeration stirring culture.
【００２１】培養に用いられる培地としては、ストレプ
トミセス(Streptomyces)属に属する微生物が利用できる
栄養源を含有する培地であればよく、各種の合成、半合
成培地、天然培地などいずれも利用可能である。培地組
成としては炭素源としてのグルコース、シュークロー
ス、フルクトース、グリセリン、デキストリン、澱粉、
糖蜜等を単独または組み合わせて用いることができる。The medium used for culture may be any medium containing a nutrient source that can be utilized by microorganisms belonging to the genus Streptomyces, and various synthetic, semi-synthetic medium, natural medium and the like can be used. is there. As the medium composition, glucose as a carbon source, sucrose, fructose, glycerin, dextrin, starch,
Molasses and the like can be used alone or in combination.
【００２２】窒素源としてはファーマメディア、ペプト
ン、肉エキス、大豆粉、カゼイン、アミノ酸、酵母エキ
ス、尿素等の有機窒素源、硝酸ナトリウム、硫酸アンモ
ニウム等の無機窒素源を、単独または組み合わせて用い
ることができる。その他例えば塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、リン酸ナ
トリウム、リン酸カリウム、塩化コバルト等の塩類、重
金属類塩、ビタミンBおよびビオチン等のビタミン類も
必要に応じ添加使用することができる。なお、培養中発
泡が著しい場合には、公知の各種消泡剤を適宜培地中に
添加することもできる。消泡剤の添加にあたっては、目
的物質の生産に悪影響を与えない濃度とする必要があ
り、たとえば使用濃度としては0.05％以下が望ましい。As the nitrogen source, it is possible to use pharmacological media, peptone, meat extract, soybean powder, casein, amino acids, yeast extract, organic nitrogen sources such as urea, and inorganic nitrogen sources such as sodium nitrate and ammonium sulfate, alone or in combination. it can. Others, for example, salts such as sodium chloride, potassium chloride, calcium carbonate, magnesium sulfate, sodium phosphate, potassium phosphate, cobalt chloride, heavy metal salts, vitamins such as vitamin B and biotin can be added and used as necessary. . When foaming is remarkable during culture, various known defoaming agents can be appropriately added to the medium. When adding the defoaming agent, it is necessary to have a concentration that does not adversely affect the production of the target substance, and for example, the use concentration is preferably 0.05% or less.
【００２３】培養条件は、該菌株が良好に生育して上記
物質を生産し得る範囲内で適宜選択し得る。例えば培地
のpHは5〜9程度、通常中性付近とするのが望ましい。培
養温度は、通常20〜40℃、好ましくは28〜35℃に保つの
がよい。培養日数は2〜8日程度で、通常3〜5日である。
上述した各種の培養条件は、使用微生物の種類や特性、
外部条件等に応じて適宜変更でき、最適条件を選択でき
るのはいうまでもない。The culture conditions can be appropriately selected within a range in which the strain can grow well and produce the above substances. For example, the pH of the medium is preferably about 5 to 9, usually around neutral. The culture temperature is usually maintained at 20 to 40 ° C, preferably 28 to 35 ° C. The culture period is about 2 to 8 days, usually 3 to 5 days.
The various culture conditions described above, the type and characteristics of the microorganism used,
It goes without saying that the optimum conditions can be selected and can be changed appropriately according to external conditions and the like.
【００２４】培養液中に蓄積された生理活性物質Mer-W8
020AおよびMer-W8020Bは、濾過、遠心分離等の既知の通
常の固液分離手段によって菌体を分離し、その菌体から
の抽出により回収可能である。Mer-W8, a physiologically active substance accumulated in culture medium
020A and Mer-W8020B can be recovered by separating bacterial cells by a known ordinary solid-liquid separation means such as filtration and centrifugation, and extracting from the bacterial cells.
【００２５】生理活性物質Mer-W8020AおよびMer-W8020B
の分離、精製は既知の種々の方法を選択、組み合わせて
行うことができる。例えば、メタノール、酢酸エチル、
n-ブタノール等を用いた溶媒抽出、活性炭、アンバーラ
イトXAD(ローム・アンド・ハース社製)、ダイアイオンH
P-20(三菱化成社製) 等への吸着と含水アルコール、含
水アセトン等による溶出、セファデックスLH-20(ファル
マシア社製)、バイオ・ゲルP-2(バイオ・ラッド社製)等
によるゲル濾過、シリカゲル、アルミナ等によるカラム
法あるいは薄層クロマトグラフィー、順相あるいは逆相
カラムを用いた分取用高速液体クロマトグラフィー(分
取HPLC)等を、単独あるいは適宜組み合わせ、場合によ
り反復使用することで分離、精製することができる。Bioactive substances Mer-W8020A and Mer-W8020B
Separation and purification can be performed by selecting and combining various known methods. For example, methanol, ethyl acetate,
Solvent extraction using n-butanol, activated carbon, Amberlite XAD (Rohm and Haas), Diaion H
Adsorption to P-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei) etc. and elution with hydrous alcohol, hydrous acetone, etc., gel with Sephadex LH-20 (Pharmacia), Bio-gel P-2 (Bio-Rad) etc. Filtration, column method using silica gel, alumina, etc. or thin layer chromatography, preparative high performance liquid chromatography using normal phase or reverse phase column (preparative HPLC), etc., alone or in appropriate combination, and repeatedly used as the case may be. Can be separated and purified by.
【００２６】以上のようにして得られる生理活性物質Me
r-W8020AおよびMer-W8020Bは以下に示す物理化学的性質
を有する。本発明の生理活性物質Mer-W8020Aの理化学的
性状は、次の通りである。 (1)色および形状：白色結晶 (2)高分解能FABマススペクトル m/z:1472.8760(M+H)+ (3)FABマススペクトル (マトリックス；m-ニトロベンジ
ルアルコール) m/z:1472(M+H)+ (4)融点 178-181℃ (5)旋光度 ［α］24 D -150.5゜(c 0.4、メタノール)The physiologically active substance Me obtained as described above
r-W8020A and Mer-W8020B have the following physicochemical properties. The physicochemical properties of the physiologically active substance Mer-W8020A of the present invention are as follows. (1) Color and shape: white crystal (2) High resolution FAB mass spectrum m / z: 1472.8760 (M + H) + (3) FAB mass spectrum (matrix; m-nitrobenzyl alcohol) m / z: 1472 (M + H) + (4) Melting point 178-181 ° C (5) Optical rotation [α] 24 D -150.5 ° (c 0.4, methanol)
【００２７】(6)紫外部吸収スペクトル メタノール中で測定した結果は、図１に示す通りであ
り、極大吸収は下記に示す通りである。 λmax nm(ε)：218(50500),269(5700),281(4900),292(4
700) (7)赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤中で測定した結果は、図２に示す通り
であり、特徴的な吸収は下記に示す通りである。 νmax cm-1：3426,3354,2965,1730,1640,1510 (8)1H-NMRスペクトル(400MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図３に示す通りであ
り、明確な吸収は下記に示す通りである。(ppm、多重
度、結合定数) 7.23(5H,m),6.95(2H,m),6.70(1H,s),6.44(1H,d,J=7.3H
z),5.79(1H,m),5.36(1H,s),5.21(1H,d,J=2.2Hz),5.01(1
H,d,J=4.0Hz),3.83(3H,s),3.12(3H,s),2.32(3H,s),0.33
(3H,d,J=6.6Hz),0.13(3H,d,J=6.6Hz)(6) Ultraviolet absorption spectrum The result of measurement in methanol is as shown in FIG. 1, and the maximum absorption is as shown below. λ max nm (ε): 218 (50500), 269 (5700), 281 (4900), 292 (4
700) (7) Infrared absorption spectrum The results of measurement in potassium bromide tablets are as shown in Fig. 2, and the characteristic absorptions are as shown below. ν max cm −1 : 3426,3354,2965,1730,1640,1510 (8) 1 H-NMR spectrum (400 MHz) The results measured in deuterated methanol are as shown in FIG. 3, and the clear absorption is shown below. As shown. (ppm, multiplicity, coupling constant) 7.23 (5H, m), 6.95 (2H, m), 6.70 (1H, s), 6.44 (1H, d, J = 7.3H
z), 5.79 (1H, m), 5.36 (1H, s), 5.21 (1H, d, J = 2.2Hz), 5.01 (1
H, d, J = 4.0Hz), 3.83 (3H, s), 3.12 (3H, s), 2.32 (3H, s), 0.33
(3H, d, J = 6.6Hz), 0.13 (3H, d, J = 6.6Hz)
【００２８】(9)13C-NMRスペクトル(100MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図４に示す通りであ
り、明確な吸収は下記に示す通りである。(ppm、多重
度) 174.9s,174.2s,174.0s,172.0s,171.7s,171.3s,171.0s,1
55.4s,142.7s,140.0s,129.5d,128.5d,127.2d,124.0d,12
3.5d,118.5s,112.6s,106.1d,99.9d,73.1d,71.5d,71.2d,
70.4d,66.9d,63.1d,59.6d,59.3d,58.6d,56.9d,55.8q,5
3.4d,41.0q,40.5q,39.5t,38.0d,27.1t,26.0t,19.8q,19.
6q,19.3q,16.8q,15.9q,11.1q (10)溶解性 クロロホルム、アセトン、メタノール、酢酸エチルに可
溶、ヘキサン、水に不溶。(9) 13 C-NMR spectrum (100 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. 4, and the clear absorption is as shown below. (ppm, multiplicity) 174.9s, 174.2s, 174.0s, 172.0s, 171.7s, 171.3s, 171.0s, 1
55.4s, 142.7s, 140.0s, 129.5d, 128.5d, 127.2d, 124.0d, 12
3.5d, 118.5s, 112.6s, 106.1d, 99.9d, 73.1d, 71.5d, 71.2d,
70.4d, 66.9d, 63.1d, 59.6d, 59.3d, 58.6d, 56.9d, 55.8q, 5
3.4d, 41.0q, 40.5q, 39.5t, 38.0d, 27.1t, 26.0t, 19.8q, 19.
6q, 19.3q, 16.8q, 15.9q, 11.1q (10) Solubility Soluble in chloroform, acetone, methanol and ethyl acetate, insoluble in hexane and water.
【００２９】(11)呈色反応 ライドン−スミス試薬、リンモリブデン酸試薬、エーリ
ッヒ試薬で呈色する。ドラーゲンドルフ試薬、ニンヒド
リン試薬で呈色しない。 (12)薄層クロマトグラフィーのRf値 シリカゲルプレートF-254(メルク社製)にて 0.30 (展開溶媒は、クロロホルム：メタノール：水＝80:10:
1)(11) Color reaction The color is developed with the Reidon-Smith reagent, the phosphomolybdic acid reagent and the Erich reagent. Does not develop color with Dragendorff reagent or ninhydrin reagent. (12) Rf value of thin layer chromatography 0.30 on silica gel plate F-254 (manufactured by Merck) (developing solvent: chloroform: methanol: water = 80: 10:
1)
【００３０】本発明の生理活性物質Mer-W8020Bの理化学
的性状は、次の通りである。 (1)色および形状：白色結晶 (2)高分解能FABマススペクトル m/z:1458.8956(M+H)+ (3)FABマススペクトル (マトリックス；m-ニトロベンジ
ルアルコール) m/z:1458(M+H)+ (4)融点 174-177℃ (5)旋光度 ［α］24 D -145゜(c 0.4、メタノール)The physicochemical properties of the physiologically active substance Mer-W8020B of the present invention are as follows. (1) Color and shape: white crystal (2) High-resolution FAB mass spectrum m / z: 1458.8956 (M + H) + (3) FAB mass spectrum (matrix; m-nitrobenzyl alcohol) m / z: 1458 (M + H) + (4) Melting point 174-177 ° C (5) Optical rotation [α] 24 D -145 ° (c 0.4, methanol)
【００３１】(6)紫外部吸収スペクトル メタノール中で測定した結果は、図５に示す通りであ
り、極大吸収は下記に示す通りである。 λmax nm(ε)：218(48200),268(5400),282(4600),292(4
500) (7)赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤中で測定した結果は、図６に示す通り
であり、特徴的な吸収は下記に示す通りである。 νmax cm-1：3324,3356,2965,1730,1638,1510 (8)1H-NMRスペクトル(400MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図７に示す通りであ
り、明確な吸収は下記に示す通りである。(ppm、多重
度、結合定数) 7.23(5H,m),6.95(2H,m),6.70(1H,s),6.44(1H,d,J=7.3H
z),5.79(1H,m),5.36(1H,s),5.21(1H,d,J=2.2Hz),5.01(1
H,d,J=4.4Hz),3.83(3H,s),3.60(3H,s),3.12(3H,s),2.34
(3H,s),0.33(3H,d,J=6.6Hz),0.13(3H,d,J=6.6Hz)(6) Ultraviolet absorption spectrum The result of measurement in methanol is as shown in FIG. 5, and the maximum absorption is as shown below. λ max nm (ε): 218 (48200), 268 (5400), 282 (4600), 292 (4
500) (7) Infrared absorption spectrum The results of measurement in potassium bromide tablets are as shown in FIG. 6, and the characteristic absorptions are as shown below. ν max cm -1 : 3324,3356,2965,1730,1638,1510 (8) 1 H-NMR spectrum (400MHz) The results measured in deuterated methanol are shown in Fig. 7, and the clear absorption is shown below. As shown. (ppm, multiplicity, coupling constant) 7.23 (5H, m), 6.95 (2H, m), 6.70 (1H, s), 6.44 (1H, d, J = 7.3H
z), 5.79 (1H, m), 5.36 (1H, s), 5.21 (1H, d, J = 2.2Hz), 5.01 (1
H, d, J = 4.4Hz), 3.83 (3H, s), 3.60 (3H, s), 3.12 (3H, s), 2.34
(3H, s), 0.33 (3H, d, J = 6.6Hz), 0.13 (3H, d, J = 6.6Hz)
【００３２】(9)13C-NMRスペクトル(100MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図８に示す通りであ
り、明確な吸収は下記に示す通りである。(ppm、多重
度) 174.9s,174.2s,174.0s,172.1s,171.7s,171.3s,171.0s,1
55.4s,142.7s, 140.1s,129.5d,128.5d,127.2d,124.0d,1
23.5d,118.5s,112.6s,106.1d,100.0d,73.1d,71.5d,71.2
d,70.4d,66.9d,63.1d,59.7d,59.6d,59.3d,56.8d,55.8q,
53.6d,41.0q,40.5q,39.5t,27.1t,25.8d,20.1q,19.9q,1
9.6q,16.8q (10)溶解性 クロロホルム、アセトン、メタノール、酢酸エチルに可
溶、ヘキサン、水に不溶。(9) 13 C-NMR spectrum (100 MHz) The result of measurement in deuterated methanol is as shown in FIG. 8, and the clear absorption is as shown below. (ppm, multiplicity) 174.9s, 174.2s, 174.0s, 172.1s, 171.7s, 171.3s, 171.0s, 1
55.4s, 142.7s, 140.1s, 129.5d, 128.5d, 127.2d, 124.0d, 1
23.5d, 118.5s, 112.6s, 106.1d, 100.0d, 73.1d, 71.5d, 71.2
d, 70.4d, 66.9d, 63.1d, 59.7d, 59.6d, 59.3d, 56.8d, 55.8q,
53.6d, 41.0q, 40.5q, 39.5t, 27.1t, 25.8d, 20.1q, 19.9q, 1
9.6q, 16.8q (10) Solubility Soluble in chloroform, acetone, methanol and ethyl acetate, insoluble in hexane and water.
【００３３】(11)呈色反応 ライドン−スミス試薬、リンモリブデン酸試薬、エーリ
ッヒ試薬で呈色する。ドラーゲンドルフ試薬、ニンヒド
リン試薬で呈色しない。 (12)薄層クロマトグラフィーのRf値 シリカゲルプレートF-254(メルク社製) にて 0.26 (展開溶媒は、クロロホルム：メタノール：水＝80:10:
1)(11) Color reaction The color is developed with the Reidon-Smith reagent, the phosphomolybdic acid reagent and the Erich reagent. Does not develop color with Dragendorff reagent or ninhydrin reagent. (12) Rf value of thin layer chromatography 0.26 on silica gel plate F-254 (Merck) (developing solvent: chloroform: methanol: water = 80: 10:
1)
【００３４】本発明の生理活性物質Mer-W8020AおよびMe
r-W8020Bは以下に示す通り、慢性関節リウマチの病態モ
デルであるラットのアジュバント関節炎の抑制作用を示
し、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス(SLE)
等の自己免疫疾患に適用できることが期待される。また
毒性もほとんど見られず、有効かつ安全に使用に供する
ことができる。Physiologically active substances of the present invention Mer-W8020A and Me
As shown below, r-W8020B shows an inhibitory effect on adjuvant arthritis in rats, which is a pathological model of rheumatoid arthritis, and rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus (SLE)
It is expected to be applicable to autoimmune diseases such as. In addition, it shows almost no toxicity and can be used effectively and safely.
【００３５】(1)アジュバント関節炎抑制作用 1群6〜8匹のLewis系雌性ラット(10週齢)をエーテル麻酔
し、流動パラフィンで懸濁した結核死菌(6mg/ml)の0.1m
lを右後肢足蹠皮内に接種してアジュバント関節炎を誘
起した。Mer-W8020Aを1および10mg/Kg、それぞれ1日1回
アジュバントの感作日より20日間腹腔内投与した。アジ
ュバント関節炎の抑制作用はデジタルノギスを用いて、
感作部位後肢および非感作部位後肢の足蹠の厚さを定期
的に測定することにより評価した。結果を表１に示す。(1) Adjuvant Arthritis Inhibitory Action 1 group of 6 to 8 female Lewis rats (10 weeks old) was anesthetized with ether, and 0.1 m of tuberculosis killed bacteria (6 mg / ml) suspended in liquid paraffin was used.
l was inoculated into the footpad of the right hind leg to induce adjuvant arthritis. Mer-W8020A was intraperitoneally administered at 1 and 10 mg / Kg once a day for 20 days from the day of adjuvant sensitization. The inhibitory effect of adjuvant arthritis is using digital calipers,
Evaluation was made by periodically measuring the thickness of the footpads of the hind limb of the sensitized site and the non-sensitized site. The results are shown in Table 1.
【００３６】[0036]
【表１】 [Table 1]
【００３７】本発明のMer-W8020Aは、1および10mg/Kgの
腹腔内投与で、アジュバント関節炎の感作部位後肢およ
び非感作部位後肢の腫脹を有意に抑制し、抗リウマチ作
用を有することが認められた。Mer-W8020A of the present invention, by intraperitoneal administration of 1 and 10 mg / Kg, significantly suppresses the swelling of adjuvant arthritis in the hind limbs of the sensitized site and non-sensitized site, and may have an antirheumatic effect. Admitted.
【００３８】(2)急性毒性 ICR系マウスを1群3匹として本発明のMer-W8020Aをそれ
ぞれ50および100mg/kg腹腔内に投与した。20日間の観察
で死亡した個体はなく、毒性症状もまったく認められな
かった。(2) Acute toxicity The ICR mice were grouped into three mice, and the Mer-W8020A of the present invention was intraperitoneally administered at 50 and 100 mg / kg, respectively. No individual died after 20 days of observation, and no toxic symptoms were observed.
【００３９】[0039]
【発明の効果】以上述べたように本発明の生理活性物質
Mer-W8020AおよびMer-W8020Bは、慢性関節リウマチ、全
身性エリテマトーデス(SLE)等の自己免疫疾患に適用す
ることが期待される。さらに非常に低毒性であることか
ら、有効かつ長期間安全に使用に供することができる。As described above, the physiologically active substance of the present invention
Mer-W8020A and Mer-W8020B are expected to be applied to autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus (SLE). Furthermore, since it has extremely low toxicity, it can be used effectively and safely for a long period of time.
【００４０】以下に実施例をあげて本発明を更に具体的
に説明するが、本発明はこれらによって何等限定される
ものではない。実施例において、パーセント(％)は特に
記しない限り、重量／容量パーセントを示す。Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but the present invention is not limited thereto. In the examples, percentages (%) refer to weight / volume percentages, unless stated otherwise.
【００４１】Mer-W8020株の斜面培地(ISP-2)から１白金
耳を50mlの種母培地(グリセリン2％、グルコース2％、
エスサンミート2％、酵母エキス0.5％、塩化ナトリウム
0.25％、炭酸カルシウム0.32％、硫酸銅0.0005％、塩化
マンガン0.0005％、硫酸亜鉛0.0005％、消泡剤0.05％、
pH7.4)を入れた500mlの三角フラスコに接種し、28℃で3
日間回転振盪機上で培養して種培養液を得た。From the slant medium (ISP-2) of the Mer-W8020 strain, 1 platinum loop was added to 50 ml of seed mother medium (glycerin 2%, glucose 2%,
Essan meat 2%, yeast extract 0.5%, sodium chloride
0.25%, calcium carbonate 0.32%, copper sulfate 0.0005%, manganese chloride 0.0005%, zinc sulfate 0.0005%, antifoaming agent 0.05%,
Inoculate a 500 ml Erlenmeyer flask containing pH 7.4) and
The seed culture was obtained by culturing on a rotary shaker for one day.
【００４２】この種培養液100mlをそれぞれ本培養培地
(グリセリン2.5％、肉エキス0.5％、ポリペプトン0.5
％、酵母エキス1％、塩化ナトリウム0.2％、硫酸マグネ
シウム0.05％、燐酸１カリウム0.05％、炭酸カルシウム
0.32％、消泡剤0.05％、pH7.4)5リットルを含む10リッ
トル容ジャーファーメンター4基に接種して、28℃で72
時間通気攪拌培養 (通気量 5リットル/min、攪拌 300r.
p.m)を行った。100 ml of this seed culture solution is used as a main culture medium
(Glycerin 2.5%, meat extract 0.5%, polypeptone 0.5
%, Yeast extract 1%, sodium chloride 0.2%, magnesium sulfate 0.05%, potassium phosphate 1% 0.05%, calcium carbonate
0.32%, antifoaming agent 0.05%, pH 7.4) Inoculate 4 liters of 10 liter jar fermenter containing 5 liters at 72 ℃ 72
Time aeration culture with aeration (aeration rate 5 liters / min, agitation 300 r.
pm).
【００４３】培養終了後吸引濾過にて回収した約4Kgの
菌体に、15リットルのメタノールを加え抽出を行い、メ
タノール層を減圧下に2リットルまで濃縮した。このも
のに3リットルの水を加え2.5リットルのブタノールで2
回抽出した。抽出液を減圧下に濃縮し、乾固物を50mlの
メタノールに溶解し、50mlのn-ヘキサンで洗浄後減圧下
に濃縮し12gの乾固物を得た。After the culture was completed, about 4 kg of cells collected by suction filtration was added with 15 liters of methanol for extraction, and the methanol layer was concentrated under reduced pressure to 2 liters. Add 3 liters of water to this and add 2 liters with 2.5 liters of butanol.
Extracted twice. The extract was concentrated under reduced pressure, the dry solid was dissolved in 50 ml of methanol, washed with 50 ml of n-hexane and then concentrated under reduced pressure to obtain 12 g of dry solid.
【００４４】このものを温メタノール40mlに溶解し、予
めメタノールで充填したセファデックスLH-20カラム(フ
ァルマシア社製、4.5φ×45cm)に付し、メタノールで展
開した。各フラクションをクロロホルム／メタノール／
水混合液(80:10:1)を展開溶媒とするシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィー(メルク社製、Art.5715)に付し、エー
リッヒ試薬の発色によりそれぞれ同じRfの物質を含むフ
ラクションを集めて濃縮乾固し、それぞれアジュバント
関節炎を誘起させたラットに2週間腹腔内投与し予防効
果を検討した。This was dissolved in 40 ml of warm methanol, applied to a Sephadex LH-20 column (Pharmacia, 4.5φ × 45 cm) pre-filled with methanol, and developed with methanol. Chloroform / methanol /
Subjected to silica gel thin layer chromatography (Merck, Art.5715) using a water mixture (80: 10: 1) as a developing solvent, and collecting and concentrating fractions containing the same Rf substance due to the color development of Erich reagent. To the rats, which had been dried to induce adjuvant arthritis, were intraperitoneally administered for 2 weeks, and the preventive effect was examined.
【００４５】その結果前記のシリカゲル薄層クロマトグ
ラフィーにおいて、Rf 0.26〜0.30を示す物質を含むフ
ラクションが、ラットのアジュバント関節炎に対して抑
制効果を示すことが明らかとなったので、これ以降の精
製工程における該物質の検出は、クロロホルム／メタノ
ール／水混合液(80:10:1)を展開溶媒とするシリカゲル
薄層クロマトグラフィー(メルク社製、Art.5715、エー
リッヒ試薬による発色)を指標として行った。As a result, in the above-mentioned silica gel thin layer chromatography, it was revealed that the fraction containing the substance having Rf 0.26 to 0.30 has an inhibitory effect on the adjuvant arthritis in rats. The detection of the substance in Example 1 was performed using silica gel thin layer chromatography (Merck & Co., Inc., Art.5715, color development by Erich reagent) using chloroform / methanol / water mixture (80: 10: 1) as a developing solvent. .
【００４６】Rf 0.30(Mer-W8020A)およびRf 0.26(Mer-W
8020B)を示すフラクションから、乾固物970mgを得た。
このものをトルエン／メタノール混合液(20:1)10mlに溶
解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを行った。
すなわち予めトルエン／メタノール混合液(20:1)で充填
したシリカゲルカラム(メルク社製、3φ×50cm)に付
し、トルエン／メタノールの濃度勾配(20:1〜2:1)で展
開した。フラクションをシリカゲル薄層クロマトグラフ
ィーにかけ、エーリッヒ試薬にて検出し、Mer-W8020A 4
30mg、およびMer-W8020B 344mgを得た。それぞれを0.5m
lのメタノールに溶解し、約40℃に加温しながらトルエ
ンを50ml加え、室温まで放冷することにより、それぞれ
白色結晶のMer-W8020Aを308mg、Mer-W8020Bを265mg得
た。Rf 0.30 (Mer-W8020A) and Rf 0.26 (Mer-W
970 mg of a dry solid was obtained from the fraction showing 8020B).
This product was dissolved in 10 ml of a toluene / methanol mixture (20: 1) and subjected to silica gel column chromatography.
That is, the mixture was applied to a silica gel column (3φ × 50 cm, manufactured by Merck & Co., Inc.) that was previously packed with a toluene / methanol mixed solution (20: 1), and developed with a toluene / methanol concentration gradient (20: 1 to 2: 1). The fractions were subjected to silica gel thin layer chromatography, detected with Erich reagent, and Mer-W8020A 4
30 mg and Mer-W8020B 344 mg were obtained. 0.5m each
50 ml of toluene was added while dissolving in 1 ml of methanol and heating to about 40 ° C., and allowed to cool to room temperature to obtain 308 mg of white crystals of Mer-W8020A and 265 mg of Mer-W8020B, respectively.
【００４７】[0047]
【図１】生理活性物質Mer-W8020Aのメタノール中での紫
外線吸収スペクトルを示す。FIG. 1 shows an ultraviolet absorption spectrum of a physiologically active substance Mer-W8020A in methanol.
【図２】生理活性物質Mer-W8020AのKBr法での赤外線吸
収スペクトルを示す。FIG. 2 shows an infrared absorption spectrum of the physiologically active substance Mer-W8020A by the KBr method.
【図３】生理活性物質Mer-W8020Aの重メタノール中での
400MHz1H-NMRスペクトルを示す。FIG. 3 shows the physiologically active substance Mer-W8020A in deuterated methanol.
A 400 MHz 1 H-NMR spectrum is shown.
【図４】生理活性物質Mer-W8020Aの重メタノール中での
100MHz13C-NMRスペクトルを示す。FIG. 4 shows the physiologically active substance Mer-W8020A in deuterated methanol.
A 100 MHz 13 C-NMR spectrum is shown.
【図５】生理活性物質Mer-W8020Bのメタノール中での紫
外線吸収スペクトルを示す。FIG. 5 shows an ultraviolet absorption spectrum of the physiologically active substance Mer-W8020B in methanol.
【図６】生理活性物質Mer-W8020BのKBr法での赤外線吸
収スペクトルを示す。FIG. 6 shows an infrared absorption spectrum of the physiologically active substance Mer-W8020B by the KBr method.
【図７】生理活性物質Mer-W8020Bの重メタノール中での
400MHz1H-NMRスペクトルを示す。FIG. 7 shows the physiologically active substance Mer-W8020B in deuterated methanol.
A 400 MHz 1 H-NMR spectrum is shown.
【図８】生理活性物質Mer-W8020Bの重メタノール中での
100MHz13C-NMRスペクトルを示す。FIG. 8 shows the physiologically active substance Mer-W8020B in deuterated methanol.
A 100 MHz 13 C-NMR spectrum is shown.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 寺沢 正 神奈川県藤沢市羽鳥３−13−１−201 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued Front Page (72) Inventor Masaru Terasawa 3-13-1-201 Hatori, Fujisawa City, Kanagawa Prefecture
Claims (4)
質Mer-W8020A。 (1)色および形状：白色結晶 (2)高分解能FABマススペクトル m/z:1472.8760(M+H)+ (3)FABマススペクトル (マトリックス；m-ニトロベンジ
ルアルコール) m/z:1472(M+H)+ (4)融点 178-181℃ (5)旋光度 ［α］24 D -150.5゜(c 0.4、メタノール) (6)紫外部吸収スペクトル メタノール中で測定した結果は、図１に示す通りであ
る。 (7)赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤中で測定した結果は、図２に示す通り
である。 (8)1H-NMRスペクトル(400MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図３に示す通りであ
る。 (9)13C-NMR スペクトル(100MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図４に示す通りであ
る。 (10)溶解性 クロロホルム、アセトン、メタノール、酢酸エチルに可
溶、ヘキサン、水に不溶。 (11)呈色反応 ライドン−スミス試薬、リンモリブデン酸試薬、エーリ
ッヒ試薬で呈色する。ドラーゲンドルフ試薬、ニンヒド
リン試薬で呈色しない。 (12)薄層クロマトグラフィーのRf値 シリカゲルプレートF-254(メルク社製)にて 0.30 (展開溶媒は、クロロホルム：メタノール：水＝80:10:
1)1. A physiologically active substance Mer-W8020A having the following physicochemical properties. (1) Color and shape: white crystal (2) High resolution FAB mass spectrum m / z: 1472.8760 (M + H) + (3) FAB mass spectrum (matrix; m-nitrobenzyl alcohol) m / z: 1472 (M + H) + (4) Melting point 178-181 ° C (5) Optical rotation [α] 24 D -150.5 ° (c 0.4, methanol) (6) Ultraviolet absorption spectrum The result measured in methanol is shown in Fig. 1. On the street. (7) Infrared absorption spectrum The results measured in potassium bromide tablets are as shown in FIG. (8) 1 H-NMR spectrum (400 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. (9) 13 C-NMR spectrum (100 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. (10) Solubility Soluble in chloroform, acetone, methanol and ethyl acetate, insoluble in hexane and water. (11) Color reaction Reidon-Smith reagent, phosphomolybdic acid reagent, and Erich reagent develop color. Does not develop color with Dragendorff reagent or ninhydrin reagent. (12) Rf value of thin layer chromatography 0.30 on silica gel plate F-254 (manufactured by Merck) (developing solvent: chloroform: methanol: water = 80: 10:
1)
質Mer-W8020B。 (1)色および形状：白色結晶 (2)高分解能FABマススペクトル m/z:1458.8956(M+H)+ (3)FABマススペクトル (マトリックス；m-ニトロベンジ
ルアルコール) m/z:1458(M+H)+ (4)融点 174-177℃ (5)旋光度 ［α］24 D -145゜(c 0.4、メタノール) (6)紫外部吸収スペクトル メタノール中で測定した結果は、図５に示す通りであ
る。 (7)赤外部吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤中で測定した結果は、図６に示す通り
である。 (8)1H-NMRスペクトル(400MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図７に示す通りであ
る。 (9)13C-NMRスペクトル(100MHz) 重メタノール中で測定した結果は、図８に示す通りであ
る。 (10)溶解性 クロロホルム、アセトン、メタノール、酢酸エチルに可
溶、ヘキサン、水に不溶。 (11)呈色反応 ライドン−スミス試薬、リンモリブデン酸試薬、エーリ
ッヒ試薬で呈色する。ドラーゲンドルフ試薬、ニンヒド
リン試薬で呈色しない。 (12)薄層クロマトグラフィーのRf値 シリカゲルプレートF-254(メルク社製) にて 0.26 (展開溶媒は、クロロホルム：メタノール：水＝80:10:
1)2. A physiologically active substance Mer-W8020B having the following physicochemical properties. (1) Color and shape: white crystal (2) High-resolution FAB mass spectrum m / z: 1458.8956 (M + H) + (3) FAB mass spectrum (matrix; m-nitrobenzyl alcohol) m / z: 1458 (M + H) + (4) Melting point 174-177 ° C (5) Optical rotation [α] 24 D -145 ° (c 0.4, methanol) (6) Ultraviolet absorption spectrum The results measured in methanol are shown in Fig. 5. On the street. (7) Infrared absorption spectrum The results measured in a potassium bromide tablet are as shown in FIG. (8) 1 H-NMR spectrum (400 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. 7. (9) 13 C-NMR spectrum (100 MHz) The result measured in deuterated methanol is as shown in FIG. (10) Solubility Soluble in chloroform, acetone, methanol and ethyl acetate, insoluble in hexane and water. (11) Color reaction Reidon-Smith reagent, phosphomolybdic acid reagent, and Erich reagent develop color. Does not develop color with Dragendorff reagent or ninhydrin reagent. (12) Rf value of thin layer chromatography 0.26 on silica gel plate F-254 (Merck) (developing solvent: chloroform: methanol: water = 80: 10:
1)
する生理活性物質Mer-W8020A生産菌を培養し、培養物か
ら生理活性物質Mer-W8020Aを採取することを特徴とする
新規生理活性物質Mer-W8020Aの製造方法。3. A novel physiologically active substance, Mer-W8020A, which comprises culturing a physiologically active substance Mer-W8020A-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces and collecting the physiologically active substance Mer-W8020A from the culture. Production method.
する生理活性物質Mer-W8020B生産菌を培養し、培養物か
ら生理活性物質Mer-W8020Bを採取することを特徴とする
新規生理活性物質Mer-W8020Bの製造方法。4. A novel bioactive substance, Mer-W8020B, which comprises culturing a bioactive substance Mer-W8020B-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces and collecting the bioactive substance Mer-W8020B from the culture. Production method.
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