JPH06199679A - チロシナ−ゼ活性阻害剤 - Google Patents
チロシナ−ゼ活性阻害剤Info
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- JPH06199679A JPH06199679A JP4294045A JP29404592A JPH06199679A JP H06199679 A JPH06199679 A JP H06199679A JP 4294045 A JP4294045 A JP 4294045A JP 29404592 A JP29404592 A JP 29404592A JP H06199679 A JPH06199679 A JP H06199679A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 チロシナ−ゼの活性を阻害すべき製剤の提案
に係る。 【構成】 米発酵物の有機溶媒可溶物を有効成分として
含有することを特徴とし、実際上この有効成分が少なく
とも０．０００１％（Ｗ／Ｖ）の濃度で含有されている
チロシナ−ゼ活性阻害剤。
に係る。 【構成】 米発酵物の有機溶媒可溶物を有効成分として
含有することを特徴とし、実際上この有効成分が少なく
とも０．０００１％（Ｗ／Ｖ）の濃度で含有されている
チロシナ−ゼ活性阻害剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、チロシナ−ゼの活性
を阻害すべき製剤の提案に関する。
を阻害すべき製剤の提案に関する。
【０００２】
【従来の技術】チロシナ−ゼはチロシンまたはド−パの
酸化を触媒する金属酵素で、メラニン合成能を有する微
生物、植物、動物などに広く分布している。ヒトの場
合、メラニン色素は表皮の基低層に存在するメラノサイ
トでチロシンを基質として、紫外線によつて誘発される
チロシナ−ゼの作用により合成される（G.Prota, J.Inv
est. Dermatol., 75, 122-127, 1980)。
酸化を触媒する金属酵素で、メラニン合成能を有する微
生物、植物、動物などに広く分布している。ヒトの場
合、メラニン色素は表皮の基低層に存在するメラノサイ
トでチロシンを基質として、紫外線によつて誘発される
チロシナ−ゼの作用により合成される（G.Prota, J.Inv
est. Dermatol., 75, 122-127, 1980)。
【０００３】メラニンは黄から赤褐色のpheomelaninと
黒色のeumelaninに分けられ、通常言われるメラニン
は、これらの混合物型である。これらはいずれもチロシ
ンを基質としたチロシナ−ゼの作用で生ずる（H.Rorsma
n, et al., Phenotypic Expression in Pigment Cells,
p.67, ed. by M. Seiji, Univ. of Tokyo Press)。
黒色のeumelaninに分けられ、通常言われるメラニン
は、これらの混合物型である。これらはいずれもチロシ
ンを基質としたチロシナ−ゼの作用で生ずる（H.Rorsma
n, et al., Phenotypic Expression in Pigment Cells,
p.67, ed. by M. Seiji, Univ. of Tokyo Press)。
【０００４】したがつて、チロシナ−ゼ活性を阻害すれ
ば、日焼けによる色素沈着、シミやソバカスを防止する
ことが可能に成ると考えられている。これらの作用機序
に適したものとして、現在医薬部外品としてコウジ酸、
アルブチン、アスコルビン酸誘導体等が用いられてい
る。しかしこれらチロシナ−ゼ活性阻害剤は安定性に欠
けていたり、原料の入手が困難であつたりするために、
非常に高価であつたりして、いずれも満足すべきもので
はなかつた。
ば、日焼けによる色素沈着、シミやソバカスを防止する
ことが可能に成ると考えられている。これらの作用機序
に適したものとして、現在医薬部外品としてコウジ酸、
アルブチン、アスコルビン酸誘導体等が用いられてい
る。しかしこれらチロシナ−ゼ活性阻害剤は安定性に欠
けていたり、原料の入手が困難であつたりするために、
非常に高価であつたりして、いずれも満足すべきもので
はなかつた。
【０００５】一方米発酵物の有機溶媒可溶物は、その原
料を清酒生産副産物である酒粕に求めている。酒粕は古
来よりそれ自体食用に供されており、またドブロク等の
非清酒中に含まれており、長い年月に亘りその安全性は
経験的に実証されている。また原料の酒粕自体非常に安
価で豊富に存在する。この酒粕の有機溶媒可溶物に、非
常に強いチロシナ−ゼ活性阻害効果があることは従来知
られていなかつた。
料を清酒生産副産物である酒粕に求めている。酒粕は古
来よりそれ自体食用に供されており、またドブロク等の
非清酒中に含まれており、長い年月に亘りその安全性は
経験的に実証されている。また原料の酒粕自体非常に安
価で豊富に存在する。この酒粕の有機溶媒可溶物に、非
常に強いチロシナ−ゼ活性阻害効果があることは従来知
られていなかつた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】この発明は上記従来の
知見にもとづき、入手容易でかつ比較的低廉な原料を用
いてチロシナ−ゼの活性の阻害剤を提供しようとするも
のである。
知見にもとづき、入手容易でかつ比較的低廉な原料を用
いてチロシナ−ゼの活性の阻害剤を提供しようとするも
のである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】すなわち、この発明は米
発酵物の有機溶媒可溶物を有効成分として含有すること
を特徴とし、かつその有効成分が少なくとも０．０００
１％（Ｗ／Ｖ）の濃度で含有されているようにしたチロ
シナ−ゼ活性阻害剤を提案するものである。
発酵物の有機溶媒可溶物を有効成分として含有すること
を特徴とし、かつその有効成分が少なくとも０．０００
１％（Ｗ／Ｖ）の濃度で含有されているようにしたチロ
シナ−ゼ活性阻害剤を提案するものである。
【０００８】
【作用】この発明において、出発原料として使用する米
発酵物は、主に清酒製造時に副産物として生じる酒粕を
用いる。この酒粕はどのような発酵課程をとる日本酒の
ものでも使用でき、いずれも市販あるいは日本酒製造工
場で入手できるものである。
発酵物は、主に清酒製造時に副産物として生じる酒粕を
用いる。この酒粕はどのような発酵課程をとる日本酒の
ものでも使用でき、いずれも市販あるいは日本酒製造工
場で入手できるものである。
【０００９】
【実施例】先ず米発酵物の有機溶媒可溶物のチロシナ−
ゼ活性阻害効果を調べるために実験を行なつた。 （１）チロシナ−ゼ活性阻害剤の調製 市販の酒粕１Ｋｇ（湿重量）を３倍量の９９．５％エタ
ノ−ルに懸濁し、ホモミキサ−を用いて室温下で１０分
間均質化した。これを遠心分離（３，０００ｒｐｍ、１
０分間）し、上清（エタノ−ル可溶画分）を得た。減圧
下にてエタノ−ルを蒸散させた。次に３００ｍｌの９
９．５％エタノ−ルをさらに加え、溶解物（約４０ｇ、
乾燥重量）を得、これをチロシナ−ゼ活性阻害剤として
以降の実験に用いた。
ゼ活性阻害効果を調べるために実験を行なつた。 （１）チロシナ−ゼ活性阻害剤の調製 市販の酒粕１Ｋｇ（湿重量）を３倍量の９９．５％エタ
ノ−ルに懸濁し、ホモミキサ−を用いて室温下で１０分
間均質化した。これを遠心分離（３，０００ｒｐｍ、１
０分間）し、上清（エタノ−ル可溶画分）を得た。減圧
下にてエタノ−ルを蒸散させた。次に３００ｍｌの９
９．５％エタノ−ルをさらに加え、溶解物（約４０ｇ、
乾燥重量）を得、これをチロシナ−ゼ活性阻害剤として
以降の実験に用いた。
【００１０】（２）実験方法と結果 １）チロシナ−ゼ活性阻害効果の測定 Ｌ−チロシン（特級、和光純薬社製）を０．１Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ６．８）に１．６６μｍｏｌ／ｍｌになる
ように溶解し、基質液を調製した。チロシナ−ゼはマツ
シユル−ム由来のもの（シグマ社製、３，０００単位／
ｍｇ．ｓｏｌｉｄ）を上記緩衝液に８００単位／ｍｌに
なるように溶解した。反応は次のごとく行なつた。マツ
クイルバン（ＭａｃＩｌｖａｉｎｅ）緩衝液（ｐＨ６．
８）１ｍｌに試料０．１ｍｌとチロシナ−ゼ０．１ｍｌ
を加え、混合した後、３７゜Ｃで１０分間プレインキユ
ベ−トした。その後基質溶液１ｍｌを添加し、３７゜Ｃ
で９０分間反応させた。分光光度計にて４７５ｎｍの吸
光値を測定した（この吸光値をＢとする）。
緩衝液（ｐＨ６．８）に１．６６μｍｏｌ／ｍｌになる
ように溶解し、基質液を調製した。チロシナ−ゼはマツ
シユル−ム由来のもの（シグマ社製、３，０００単位／
ｍｇ．ｓｏｌｉｄ）を上記緩衝液に８００単位／ｍｌに
なるように溶解した。反応は次のごとく行なつた。マツ
クイルバン（ＭａｃＩｌｖａｉｎｅ）緩衝液（ｐＨ６．
８）１ｍｌに試料０．１ｍｌとチロシナ−ゼ０．１ｍｌ
を加え、混合した後、３７゜Ｃで１０分間プレインキユ
ベ−トした。その後基質溶液１ｍｌを添加し、３７゜Ｃ
で９０分間反応させた。分光光度計にて４７５ｎｍの吸
光値を測定した（この吸光値をＢとする）。
【００１１】対照として試料の代わりに９９．５％エタ
ノ−ル０．１ｍｌを加え、同様の操作を行なつた（この
吸光値をＡとする）。なおブランクとして酵素液の代わ
りに０．１Ｍリン酸緩衝液０．１ｍｌを加え、同様の操
作を行なつた（この吸光値をＣとする）。これらの値か
らチロシナ−ゼ活性阻害率（％）を次式により算出し
た。 阻害率（％）＝１００［１−（（Ｂ−Ｃ）／Ａ）］
ノ−ル０．１ｍｌを加え、同様の操作を行なつた（この
吸光値をＡとする）。なおブランクとして酵素液の代わ
りに０．１Ｍリン酸緩衝液０．１ｍｌを加え、同様の操
作を行なつた（この吸光値をＣとする）。これらの値か
らチロシナ−ゼ活性阻害率（％）を次式により算出し
た。 阻害率（％）＝１００［１−（（Ｂ−Ｃ）／Ａ）］
【００１２】２）黒色金魚に対する退色効果 ハイドロキノン等脱色剤の研究は、黒色金魚がメラニン
生成抑制作用に対する感受性が高いこと、外観的観察が
容易なこと、ウロコの抜去により色素細胞の検索が容易
なこと等によりよく用いられている（Y. Mislima, et a
l., AnatomicalRecord, 137, 382, 1960., W.Chavin,
J. Pharmacol. Exp. Therap., 142, 275-290,1963)。前
記（１）に記載した方法で調製した試料０．０２％（Ｗ
／Ｖ）を含む飼育水中で黒色金魚を３０日間飼育し、そ
の退色効果を調べた。実験期間中の退色効果は肉眼的
に、また３０日目に鱗を採取し、光学顕微鏡下において
メラノフオア（melanophore）を測定した。飼育期間中
経時的に鱗を採取し、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
２）でチロシナ−ゼを抽出した後、（２）の１）に記載
の方法に準じてチロシナ−ゼ活性を測定した。
生成抑制作用に対する感受性が高いこと、外観的観察が
容易なこと、ウロコの抜去により色素細胞の検索が容易
なこと等によりよく用いられている（Y. Mislima, et a
l., AnatomicalRecord, 137, 382, 1960., W.Chavin,
J. Pharmacol. Exp. Therap., 142, 275-290,1963)。前
記（１）に記載した方法で調製した試料０．０２％（Ｗ
／Ｖ）を含む飼育水中で黒色金魚を３０日間飼育し、そ
の退色効果を調べた。実験期間中の退色効果は肉眼的
に、また３０日目に鱗を採取し、光学顕微鏡下において
メラノフオア（melanophore）を測定した。飼育期間中
経時的に鱗を採取し、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
２）でチロシナ−ゼを抽出した後、（２）の１）に記載
の方法に準じてチロシナ−ゼ活性を測定した。
【００１３】３）Ｂ−１６マウスメラノ−マ細胞のメラ
ニン合成阻害効果 Ｂ−１６マウスメラノ−マ細胞（１＊１０6個）を５％
牛胎児血清添加ＲＰＭＩ１６４０培地（ギブコ社製）を
用いて、３７゜Ｃ、５％ＣＯ2の条件下で４８時間予備
培養した。それに前記（２）の１）に記載の方法で調製
した試料を０−１００μｇ／ｍｌ、培地になるように添
加し、１６０μＷ／ｃｍ2の紫外線（Ａ，Ｂ，Ｃ波）を
１０分間照射後、同一条件下でさらに４８時間培養し
た。細胞を取り出し、セイリン化リン酸緩衝液で充分に
洗浄した後、１Ｎ ＮａＯＨ １ｍｌと１％ジメチルス
ルホキシド１ｍｌを加え細胞を溶解した。さらにポアサ
イズ０．４５ｎｍのフイルタ−で濾過した後、分光光度
計を用いて４７５ｎｍの吸光値を測定した。
ニン合成阻害効果 Ｂ−１６マウスメラノ−マ細胞（１＊１０6個）を５％
牛胎児血清添加ＲＰＭＩ１６４０培地（ギブコ社製）を
用いて、３７゜Ｃ、５％ＣＯ2の条件下で４８時間予備
培養した。それに前記（２）の１）に記載の方法で調製
した試料を０−１００μｇ／ｍｌ、培地になるように添
加し、１６０μＷ／ｃｍ2の紫外線（Ａ，Ｂ，Ｃ波）を
１０分間照射後、同一条件下でさらに４８時間培養し
た。細胞を取り出し、セイリン化リン酸緩衝液で充分に
洗浄した後、１Ｎ ＮａＯＨ １ｍｌと１％ジメチルス
ルホキシド１ｍｌを加え細胞を溶解した。さらにポアサ
イズ０．４５ｎｍのフイルタ−で濾過した後、分光光度
計を用いて４７５ｎｍの吸光値を測定した。
【００１４】（３）実験結果 １）米発酵物の有機溶媒可溶物のチロシナ−ゼ活性阻害
効果 米発酵物の有機溶媒可溶物のチロシナ−ゼ活性阻害率は
濃度との相関性を示した。試料濃度３．９μｇで約６０
％の阻害を示し、１９．５μｇではチロシナ−ゼ活性を
完全に阻害した（表１参照）。
効果 米発酵物の有機溶媒可溶物のチロシナ−ゼ活性阻害率は
濃度との相関性を示した。試料濃度３．９μｇで約６０
％の阻害を示し、１９．５μｇではチロシナ−ゼ活性を
完全に阻害した（表１参照）。
【表１】
【００１５】２）黒色金魚に対する退色効果 写真１は米発酵物の有機溶媒可溶物で処置していない黒
色金魚（Ａ）と処置した黒色金魚（Ｂ）初日の状態を示
す写真で、Ｂの場合、２日目から肉眼的に退色が認めら
れ、その退色は処置期間と共に進行した。その退色は局
所的ではなく、全身的であつた。写真２は３０日経過後
のＡと比較したＢの退色状況を示すものである。
色金魚（Ａ）と処置した黒色金魚（Ｂ）初日の状態を示
す写真で、Ｂの場合、２日目から肉眼的に退色が認めら
れ、その退色は処置期間と共に進行した。その退色は局
所的ではなく、全身的であつた。写真２は３０日経過後
のＡと比較したＢの退色状況を示すものである。
【写真１】
【写真２】 また３０日後の生検における黒色金魚鱗の光学顕微鏡像
（×３０）を示す写真３（無処置）と写真４（処置）に
明らかなように、処置されたものではメラノフオア（me
lanophore)の小型化、不規則な分布及び樹枝状突起の顕
著な減少が認められた。
（×３０）を示す写真３（無処置）と写真４（処置）に
明らかなように、処置されたものではメラノフオア（me
lanophore)の小型化、不規則な分布及び樹枝状突起の顕
著な減少が認められた。
【写真３】
【写真４】
【００１６】この時のチロシナ−ゼ活性は無処置群の約
６０％であり、有意に低下していた（表２参照）。
６０％であり、有意に低下していた（表２参照）。
【表２】
【００１７】３）Ｂ１６マウスメラノ−マ細胞のメラニ
ン合成阻害効果 メラノ−マ細胞を米発酵物の有機溶媒可溶物添加培地で
培養すると、その濃度に依存してメラニンの合成阻害が
生じた。その阻害率は０．５μｇ／ｍｌ．培地の総度で
約２８％、２μｇ／ｍｌ．培地で約３８％、１０μｇ／
ｍｌ．培地で約４０％であり、２μｇ／ｍｌ．培地付近
の濃度でプラト−に達した。また細胞のチロシナ−ゼ活
性もメラニン合成阻害と同様な傾向で阻害されていた
（表３）。
ン合成阻害効果 メラノ−マ細胞を米発酵物の有機溶媒可溶物添加培地で
培養すると、その濃度に依存してメラニンの合成阻害が
生じた。その阻害率は０．５μｇ／ｍｌ．培地の総度で
約２８％、２μｇ／ｍｌ．培地で約３８％、１０μｇ／
ｍｌ．培地で約４０％であり、２μｇ／ｍｌ．培地付近
の濃度でプラト−に達した。また細胞のチロシナ−ゼ活
性もメラニン合成阻害と同様な傾向で阻害されていた
（表３）。
【表３】
【００１８】（４）この発明のチロシナ−ゼ活性阻害剤
の効果は有機溶媒に溶解した場合のみではなく、水に顕
濁した状態でもその作用を強く示す（表１）ことから、
例えば化粧品用基材、浴用剤等に液状または粉末状のい
ずれの形態でも使用できる。またその安全性、安定性か
らチロシナ−ゼの作用による黒色化する農産物（キノコ
等）や、海産物（エビ、カニ等）に適用し、鮮度保持や
品質の確保等に使用できる。この場合においても使用す
る目的に応じて種々の形態及び濃度で用いることができ
る。
の効果は有機溶媒に溶解した場合のみではなく、水に顕
濁した状態でもその作用を強く示す（表１）ことから、
例えば化粧品用基材、浴用剤等に液状または粉末状のい
ずれの形態でも使用できる。またその安全性、安定性か
らチロシナ−ゼの作用による黒色化する農産物（キノコ
等）や、海産物（エビ、カニ等）に適用し、鮮度保持や
品質の確保等に使用できる。この場合においても使用す
る目的に応じて種々の形態及び濃度で用いることができ
る。
【００１９】
【発明の効果】この発明のチロシナ−ゼ活性阻害剤によ
れば、日焼けによる色素沈着、シミやソバカスを防止す
るのに著効を奏するものと考えられる。
れば、日焼けによる色素沈着、シミやソバカスを防止す
るのに著効を奏するものと考えられる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年１２月８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１５】２）黒色金魚に対する退色効果 米発酵物の有機溶媒可溶物で処置していない黒色金魚と
処置した黒色金魚のうち、処置した黒色金魚では、２日
目から肉眼的に退色が認められ、その退色は処置期間と
共に進行した。その退色は局所的ではなく、全身的であ
った。また３０日後の生検における無処置の黒色金魚鱗
と処置した黒色金魚鱗とを比較すると、処置されたもの
ではメラノフオア（ｍｅｌａｎｏｐｈｏｒｅ）の小型
化、不規則な分布及び樹枝状突起の顕著な減少が認めら
れた。
処置した黒色金魚のうち、処置した黒色金魚では、２日
目から肉眼的に退色が認められ、その退色は処置期間と
共に進行した。その退色は局所的ではなく、全身的であ
った。また３０日後の生検における無処置の黒色金魚鱗
と処置した黒色金魚鱗とを比較すると、処置されたもの
ではメラノフオア（ｍｅｌａｎｏｐｈｏｒｅ）の小型
化、不規則な分布及び樹枝状突起の顕著な減少が認めら
れた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ２３Ｋ 1/165 Ｚ 9123−2Ｂ
Claims (2)
- 【請求項１】 米発酵物の有機溶媒可溶物を有効成分と
して含有することを特徴とするチロシナ−ゼ活性阻害
剤。 - 【請求項２】 有効成分が少なくとも０．０００１％
（Ｗ／Ｖ）の濃度で含有されていることを特徴とする請
求項１記載のチロシナ−ゼ活性阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4294045A JPH06199679A (ja) | 1992-10-08 | 1992-10-08 | チロシナ−ゼ活性阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4294045A JPH06199679A (ja) | 1992-10-08 | 1992-10-08 | チロシナ−ゼ活性阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06199679A true JPH06199679A (ja) | 1994-07-19 |
Family
ID=17802567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4294045A Pending JPH06199679A (ja) | 1992-10-08 | 1992-10-08 | チロシナ−ゼ活性阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06199679A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998024405A1 (fr) * | 1996-12-05 | 1998-06-11 | Ming Zhu | Cosmetiques de blanchissement de la peau |
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| JP2005132850A (ja) * | 2001-01-31 | 2005-05-26 | Tekunooburu:Kk | 化粧料配合剤及びこれを配合した化粧料 |
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| JP2011148737A (ja) * | 2010-01-22 | 2011-08-04 | Kyoei Kagaku Kogyo Kk | 美白化粧料 |
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-
1992
- 1992-10-08 JP JP4294045A patent/JPH06199679A/ja active Pending
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