JPH0619321B2 - Absorbance measuring device for microplate - Google Patents
Absorbance measuring device for microplateInfo
- Publication number
- JPH0619321B2 JPH0619321B2 JP61151195A JP15119586A JPH0619321B2 JP H0619321 B2 JPH0619321 B2 JP H0619321B2 JP 61151195 A JP61151195 A JP 61151195A JP 15119586 A JP15119586 A JP 15119586A JP H0619321 B2 JPH0619321 B2 JP H0619321B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- microplate
- absorbance
- plate carrier
- housing
- light
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/251—Colorimeters; Construction thereof
- G01N21/253—Colorimeters; Construction thereof for batch operation, i.e. multisample apparatus
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Optical Measuring Cells (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （発明の利用分野） 本発明は、主に免疫学的な手法等により生体物質の微量
を検出する生化学反応測定装置、詳しくは前記反応に依
存した変化を吸光度で検出する吸光度測定装置に関する
ものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Field of the Invention The present invention mainly relates to a biochemical reaction measuring device for detecting a trace amount of a biological substance by an immunological method or the like, and more specifically, a change depending on the reaction in absorbance. The present invention relates to an absorbance measuring device for detecting.
（発明の背景） 従来、免疫学的な手法等により生体物質の微量を検出す
る生化学反応の測定においては、多数のサンプルを一括
処理する目的から、所謂マイクロプレートと呼ばれる検
査用器具が使用される場合が多い。このマイクロプレー
トは、マス目状に整列された多数のウェル（これらウェ
ルは各々生化学反応のための反応セルをなし、通常８列
×１２列の合計９６穴タイプのものが多く使用される）
を有するものであって、各ウェル内で生じた光学的に測
定可能な生化学反応測定するために用いられる。(Background of the Invention) Conventionally, in the measurement of a biochemical reaction for detecting a trace amount of a biological substance by an immunological method or the like, a testing instrument called a so-called microplate is used for the purpose of processing a large number of samples at once. Often. This microplate has a large number of wells arranged in a grid pattern (each of these wells forms a reaction cell for biochemical reaction, and a 96-well type with 8 rows × 12 rows is often used).
And is used to measure an optically measurable biochemical reaction occurring in each well.
光学的な測定の方法としては種々あるが、一般的には吸
光度測定の方法が多く用いられる。Although there are various optical measurement methods, generally, the absorbance measurement method is often used.
この吸光度測定の方法は、光源からの光をレンズ等の光
学手段で集光または平行光とし、これを上方ないし下方
から前記ウェルへ照射し、透過光である出射光を再びレ
ンズ等の光学手段で集光した後光検出器に導き電気的に
信号処理して、吸光度情報を得るようにして使用される
ものである。This method of measuring absorbance is such that light from a light source is condensed or collimated by an optical means such as a lens and is irradiated onto the well from above or below, and outgoing light which is transmitted light is again transmitted through an optical means such as a lens. It is used after collecting light by the method, guiding it to a photodetector, electrically processing the signal, and obtaining absorbance information.
前記多数のウェルを有するマイクロプレートを用いる場
合には、該マイクロプレートとこれに対向される吸光度
測定用の光学手段のいずれかを固定し、マイクロプレー
ト又は光学手段を相対的にｘｙ走査させる、あるいはマ
イクロプレートのｘ列の数だけ吸光度測定用の光学手段
を配置し、マイクロプレート又は光学手段をｙ方向に走
査させる、方式とするものが知られている。When a microplate having a large number of wells is used, either the microplate or the optical means for absorbance measurement facing the microplate is fixed and the microplate or the optical means is relatively xy-scanned, or A method is known in which optical means for measuring absorbance is arranged in the number of x rows of the microplate, and the microplate or the optical means is scanned in the y direction.
しかしながら前記前者の方式のものではｘｙ走査機構が
複雑となり易い他、平面的にかなりの広さが必要となっ
て装置が大型になりやすい等の難があり、また前記後者
のものでは、走査機構は比較的簡易なものとなるが、外
部からの光の十分な遮光を行なう構造の採用が繁雑であ
るという難がある。一般に測定誤差に関係するノイズの
影響は、蛍光度測定の場合に比べ吸光測定ではその度合
が小さいものであるが、外部光の影響は出来るだけ少な
い方が望ましいことは言うまでもない。However, in the former method, the xy scanning mechanism is likely to be complicated, and in addition, there is a problem that the apparatus is required to have a considerable area in plan and the apparatus tends to be large. Is relatively simple, but there is a problem in that it is complicated to employ a structure for sufficiently shielding external light. Generally, the influence of noise related to the measurement error is smaller in the absorbance measurement than in the fluorescence measurement, but it is needless to say that the influence of external light is preferably as small as possible.
そしてマイクロプレートへの試料や試薬の注入、反応の
進行、吸光度測定という一連の操作を自動的に大量に処
理するための大掛かりな全自動化装置とは別に、試料，
試薬の注入や反応の進行を手作業で行なった後に、吸光
度測定のみを自動的に行なう操作容易でかつ小型な装置
が、例えば実験室規模での測定用装置として求められて
いる。In addition to a large-scale fully automated device for automatically processing a large amount of a series of operations such as injection of samples and reagents into microplates, reaction progress, and absorbance measurement,
An easy-to-operate and compact device that automatically performs only the absorbance measurement after manually injecting a reagent and proceeding with the reaction is required, for example, as a measuring device on a laboratory scale.
（発明の目的） 本発明は、以上の観点からなされたものであり、その目
的は、前記した整列された多数のウェルを有するマイク
ロプレートの吸光度測定の操作のみを、精度よくかつ迅
速に行なうことができるマイクロプレート用吸光度測定
装置を提供するところにある。(Object of the Invention) The present invention has been made from the above viewpoint, and an object thereof is to perform only the operation of measuring the absorbance of a microplate having a large number of aligned wells described above accurately and quickly. The present invention is to provide an absorbance measuring device for a microplate capable of performing the above.
更に本発明は、マイクロプレートをキャリヤ上に載置
し，取出す操作と、測定動作の開始，終了とを連係させ
て、この極めて簡単な操作の他は自動的にに測定を行な
うことができる半自動化した装置を提供するところにあ
る。Further, according to the present invention, the operation of placing the microplate on the carrier and taking it out and the start and end of the measuring operation are linked, and besides this extremely simple operation, the measurement can be automatically performed. It is in the area of providing automated equipment.
また本発明は、コンパクトな構成で取扱い性に優れ、か
つ低価格なマイクロプレート用吸光度測定装置を提供す
るところにある。Another object of the present invention is to provide an absorbance measuring device for a microplate, which has a compact structure, is easy to handle, and is inexpensive.
（発明の概要） 而して、かかる目的の実現のためになされた本発明より
なるマイクロプレート用吸光度測定装置の特徴は、縦
列，横列に各複数のウェルがマス目状に配列されている
マイクロプレートを対象として、各ウェル内のサンプル
の吸光度を測定する吸光度測定装置であって、前記マイ
クロプレートの横列するウェルに各１個宛に対向する複
数の吸光度測定用光学手段が内部にに配置された箱構造
をなし、かつ前記マイクロプレートが水平方向に出入り
するための出入口が側面に設けられた遮光型のハウジン
グと、マイクロプレートが載置可能な上面を有すると共
に、前記ハウジングの出入口から外部に突出したプレー
ト載置，取出しのための第１の位置とハウジング内に搬
送限界位置として設定した第２の位置との間で前記マイ
クロプートをそのウェルの縦列方向に水平に往復動させ
るプレートキャリヤと、前記ハウジング内からプレート
キャリヤが第１の位置に突出すること連係してハウジン
グの前記出入口を開閉する遮光用開閉扉と、このプレー
トキャリヤの前記往復動のいずれか一方向の移動におい
ては該キャリヤ上のマイクロプレートの複数列のウェル
を吸光度測定位置に間欠移動により順次に対向停止さ
せ、 かついずれか他方向の移動においては連続送りさせるプ
レートキャリヤ往復動駆動装置と、前記マイクロプレー
トのプレートキャリヤへの載置により測定開始を検知す
るスイッチ手段、及びプレートキャリヤが前記第２の位
置に至ったことにより測定終了を検知するスイッチ手段
と、入力が前記各スイッチ手段に接続され、かつ出力が
前記往復動駆動装置および吸光度測定用光学手段に接続
されて、マイクロプレートの搬送と、この搬送時のプレ
ートキャリヤの間欠停止にに応じて順次の吸光度測定を
行わせる制御装置とを備えた構成をなすところにある。(Summary of the Invention) Thus, the feature of the absorbance measuring device for a microplate according to the present invention, which has been made to realize such an object, is that a plurality of wells are arranged in columns and rows in a grid pattern. An absorbance measuring device for measuring the absorbance of a sample in each well of a plate, wherein a plurality of optical means for absorbance measurement facing each one of the wells in rows of the microplate are arranged inside. Has a box structure, and has a light-shielding housing having a side surface provided with an entrance / exit for allowing the microplate to enter and exit in a horizontal direction, and having an upper surface on which the microplate can be placed, and from the entrance / exit of the housing to the outside. The micro is provided between a first position for placing and removing the protruding plate and a second position set as a conveyance limit position in the housing. A plate carrier for horizontally reciprocating the putt in the column direction of the well; a light-blocking opening / closing door for opening / closing the entrance / exit of the housing in association with the plate carrier protruding from the housing to the first position; When one of the reciprocating movements of the carrier is moved, the wells in a plurality of rows of the microplate on the carrier are sequentially opposed to the absorbance measurement position by intermittent movement, and continuously moved in the other movement. A plate carrier reciprocating drive device, a switch means for detecting the start of measurement by placing the microplate on the plate carrier, and a switch means for detecting the end of measurement when the plate carrier reaches the second position. An input is connected to each of the switch means, and an output is the reciprocating drive device. And a control device that is connected to the optical means for measuring the absorbance and that transports the microplate and that sequentially performs the absorbance measurement according to the intermittent stop of the plate carrier during the transportation.
本発明において使用される吸光度測定用の光学手段は、
マイクロプレートの搬送（走査）方向である前記ｘ方向
に対し直角な方向（ｙ方向）に関し該マイクロプレート
上のウェルの数だけ発光部，受光部が配置されているこ
とを条件とする他は、この種測定装置において従来より
使用されている種々の吸光度計をそのまま利用，応用し
て構成すればよいが、特に好ましい構成としては、１個
の光源からの光線を均等に配分して上記発光部を形成す
ることを可能とするように、一端が束ねられて他端が該
ウェルの数だけ分岐したもの、例えば光ファイバーライ
トガイドが採用される。Optical means for measuring absorbance used in the present invention,
Except for the condition that as many light emitting portions and light receiving portions as the number of wells on the microplate are arranged in the direction (y direction) perpendicular to the x direction which is the transport (scanning) direction of the microplate, Although various absorption meters conventionally used in this kind of measuring apparatus may be used and applied as they are, a particularly preferable structure is that the light rays from one light source are evenly distributed. In order to enable the formation of a well, one end is bundled and the other end is branched by the number of the wells, for example, an optical fiber light guide is adopted.
プレートキャリヤとしては、一般的には偏平な上方開放
型の箱型のものが好ましく採用されるが、特にこれに限
定されることなくプレート状，枠状等マイクロプレート
の載置搬送に適したものであれば適宜採用されて使用す
ることができる。As the plate carrier, generally, a flat upper open box type is preferably adopted, but the plate carrier is not particularly limited to this and is suitable for plate-shaped or frame-shaped microplate placement and transfer. If so, it can be appropriately adopted and used.
またプレートキャリヤを往復動させる往復動駆動装置
は、プレートキャリヤの搬送をガイドするレール，滑動
ロッド，ベルト等の案内機構と、往復動モータ，エアシ
リンダ装置，ソレノイド等々のものを用いて構成するこ
とができるが、モータを用いて構成する場合には往動時
の間欠停止位置を精度よく与えるためにステッピングモ
ータ等のものを選択することが好ましい。Further, the reciprocating drive device for reciprocating the plate carrier should be constructed by using a guide mechanism such as a rail, a sliding rod, a belt for guiding the conveyance of the plate carrier, and a reciprocating motor, an air cylinder device, a solenoid and the like. However, when a motor is used, it is preferable to select a stepping motor or the like in order to accurately provide the intermittent stop position during the forward movement.
前記プレートキャリヤへのマイクロプレートの載置，又
プレートキャリヤのハウジング内部の搬送限界位置への
到達を検知するスイッチ手段は、接触型，非接触型のい
ずれのものでもよく、プレートキャリヤへのマイクロプ
レートの載置を検出する第１スイッチと、プレートキャ
リヤのハウジング内部の搬送限界位置への到達を検知す
る第２スイッチとをそれぞれ独立に設けるのが普通であ
る。The switch means for detecting the placement of the microplate on the plate carrier and the arrival of the plate carrier at the conveyance limit position inside the housing may be of a contact type or a non-contact type. It is usual to independently provide a first switch for detecting the placement of the plate carrier and a second switch for detecting the arrival of the plate carrier at the conveyance limit position inside the housing.
プレートキャリヤの搬送（例えば往動時の間欠送りと復
動時の連続送り）を制御する制御装置は、通常はマイク
ロコンピュータ等の電子制御装置を用いて構成されるの
が普通であるが、特にこれに限定されるものではない。
この制御装置は、例えば、前記第１スイッチからの信号
入力によって吸光度測定の一連の動作を開始し、外部の
マイクロプレート載置位置からプレートキャリヤを搬送
開始させて、ｘ方向第１列目のウェルが吸光度測定位置
に至った時に一時的な停止，吸光度測定を行なわせ、再
び搬送，一時的な停止，吸光度測定をｘ方向の次列のウ
ェルから最終列のウェルまで順次行なわせ、更にプレー
トキャリヤのハウジング内部の搬送限界位置に至ったこ
とを第２スイッチで検出することでプレートキャリヤを
復動させる、というシーケンス動作を行なわせるもので
あればよい。また復動時に吸光度測定を行なわせるシー
ケンス動作の場合には、前記第２スイッチによってプレ
ートキャリヤがハウジング内部の搬送限界位置に到達し
たことが検出された時から、吸光度測定のための前記間
欠搬送を開始させるようにすればよい。またプレートキ
ャリヤは、非使用時にはハウジング内に収容させてお
き、適宜の装置使用開始スイッチ等を利用して必要時に
のみハウジング外部のマイクロプレート載置位置まで搬
出させるようにしてもよい。The control device for controlling the transport of the plate carrier (for example, intermittent feed during forward movement and continuous feed during backward movement) is usually constituted by using an electronic control device such as a microcomputer. It is not limited to.
This control device starts a series of operations for measuring absorbance by, for example, inputting a signal from the first switch, starts transporting the plate carrier from an external microplate mounting position, and starts wells in the first row in the x direction. When it reaches the absorbance measurement position, it temporarily stops and performs the absorbance measurement, and again conveys, temporarily stops, and performs the absorbance measurement sequentially from the well in the next row to the well in the last row in the x direction. It is sufficient that the sequence operation is performed in which the plate carrier is moved back by detecting that the conveyance limit position inside the housing has been reached by the second switch. Further, in the case of a sequence operation in which the absorbance measurement is performed during the backward movement, the intermittent conveyance for the absorbance measurement is started from the time when the second switch detects that the plate carrier has reached the conveyance limit position inside the housing. Just start it. The plate carrier may be housed in the housing when not in use, and may be carried out to the microplate mounting position outside the housing only when necessary by using an appropriate device use start switch or the like.
かかる制御装置は、所定のプログラムが予め組込まれた
前記マイクロコンピュータを用いる場合の他、比較回
路，タイマー，各種論理回路等を組合せた電気回路を用
いて構成することもできる。Such a control device can be configured using an electric circuit in which a comparison circuit, a timer, various logic circuits and the like are combined, in addition to the case where the microcomputer in which a predetermined program is incorporated is used in advance.
本発明におけるハウジングの構成は、内部に配置した吸
光度測定のための光学手段の測定精度を良好に得るため
に、プレートキャリヤの出入口は出来るだけ必要十分な
範囲で小さく制限されていることが好ましく、またプレ
ートキャリヤのハウジング内への搬入後に閉じる遮光用
の開閉扉が設けられる。ハウジングは金属製，プラスチ
ック製等の不透明体を用いて構成されることは言うまで
もない。The housing of the present invention is preferably configured such that the entrance and exit of the plate carrier is limited to a necessary and sufficient range as small as possible in order to obtain good measurement accuracy of the optical means for measuring the absorbance arranged inside. Further, an opening / closing door for light shielding is provided which is closed after the plate carrier is loaded into the housing. It goes without saying that the housing is made of an opaque material such as metal or plastic.
（発明の実施例） 以下本発明を図面に示す実施例に基づいて説明する。Embodiments of the Invention The present invention will be described below based on embodiments shown in the drawings.
第１図〜第３図は、本発明よりなるマイクロプレート用
吸光度測定装置の一例の構成概要を示す図である。なお
第１図は装置の縦断側面図、第２図は同第１図のＡ−Ａ
の縦断面図、第３図は同第１図のＢ−Ｂの平断面図であ
る。FIG. 1 to FIG. 3 are diagrams showing the outline of the constitution of an example of the absorbance measuring device for a microplate according to the present invention. Note that FIG. 1 is a vertical side view of the apparatus, and FIG. 2 is AA of FIG.
3 is a vertical sectional view of FIG. 3, and FIG. 3 is a plan sectional view taken along line BB of FIG.
１は凹面鏡（反射笠）を具備した光源であって、光源１
からの光線はスリット２を通過した後、測定サンプルの
吸収波長の光線のみを透過することが可能な分光用フィ
ルター３によって単色光とされて、集束された光ファイ
バー端部４ａの端面に効率良く集光されるようになって
いる。４は光ファイバーであって、マイクロプレートの
１列のウェルの個数に等しい本数から構成され、それら
の端部４ｂは一列のウェルの頭上に各ウェルに対応する
ように等間隔で配列され、保持部材６に固定されて光線
出射口を構成する。すなわち光ファイバー４の一端は束
ねられて一本の光ファイバー端部４ａを形成し、端部４
ａへ導入された光線を均等に分岐して、第２図に示すよ
うにマイクロプレート２２の一列の各ウェル２３へ上方
から光線を同時に照射できるようになっている。Reference numeral 1 denotes a light source equipped with a concave mirror (reflecting shade).
After passing through the slit 2, the light from is converted into monochromatic light by the spectroscopic filter 3 capable of transmitting only the light having the absorption wavelength of the measurement sample, and is efficiently collected on the end face of the focused optical fiber end 4a. It is supposed to be illuminated. Reference numeral 4 denotes an optical fiber, which is composed of a number equal to the number of wells in one row of the microplate, and their end portions 4b are arranged at equal intervals above the head of one row so as to correspond to each well, and a holding member. It is fixed to 6 and constitutes a light exit. That is, one end of the optical fiber 4 is bundled to form a single optical fiber end 4a.
The light rays introduced into a can be evenly branched so that the light rays can be simultaneously applied to the wells 23 in one row of the microplate 22 from above as shown in FIG.
７ａは光ファイバー端部４ｂから出射された光線をウェ
ル内に結像するレンズ、７ｂは７ａに対向して配設され
てウェル内のサンプルの透過光を集光して光検出器１０
へ導くレンズであって、光ファイバー端部４ｂ、レンズ
７ａ、７ｂ、光検出器１０の一組は、それぞれ光軸２４
上に正確に一列に配設されていて、それらの光軸２４が
マイクロプレートの１列の各ウェルの中央をそれぞれ通
過するようになっている。Reference numeral 7a denotes a lens for focusing the light beam emitted from the end portion 4b of the optical fiber in the well, and 7b is arranged so as to face 7a and collects the transmitted light of the sample in the well to detect the light.
The optical fiber end 4b, the lenses 7a and 7b, and the pair of photodetectors 10 are the lenses that guide the optical axis 24
The optical axes 24 are arranged in exactly one row above, and the optical axes 24 pass through the center of each well of one row of the microplate.
１１は光強度に比例した光検出器１０からの信号を増幅
する増幅回路、１３はＡ／Ｄ変換器、１２は増幅回路の
一つとＡ／Ｄ変換器１３とを図示しない電気的評価装置
の指示にしたがって電気的に結合することが可能なチャ
ンネル切り換え回路、１４は演算回路である。増幅器１
１、チャンネル切り換え回路１２、Ａ／Ｄ変換器１３、
演算回路１４は、電気的評価装置の一部を構成してい
る。ここで電気的評価装置とはＣＰＵ、ＲＡＭ、ＲＯＭ
を中心として構成され、動作制御、計測及び演算を行な
うことを目的とする回路をいう。Reference numeral 11 is an amplifier circuit for amplifying a signal from the photodetector 10 proportional to the light intensity, 13 is an A / D converter, and 12 is one of the amplifier circuits and the A / D converter 13 of an electrical evaluation device (not shown). A channel switching circuit that can be electrically coupled according to an instruction, and 14 is an arithmetic circuit. Amplifier 1
1, channel switching circuit 12, A / D converter 13,
The arithmetic circuit 14 constitutes a part of the electrical evaluation device. Here, the electrical evaluation device is a CPU, RAM, ROM
Is a circuit that is mainly configured to perform operation control, measurement, and calculation.
８はプレートキャリヤであって、外周部に縁を有する構
造で、その内部の広さはマイクロプレートのそれにちょ
うど等しい大きさになっていて、マイクロプレートをそ
の内部に保持できるようになっているとともに、その一
側は第３図に示すごとくベルト１７に固定されていて、
図示しないモーターの回転によってプーリー１６が矢印
の方向へ回転し、それにともなって平行に配設された２
本のスライドシャフト１５に沿って前後に往復動するこ
とが可能とされている。さらに、プレートキャリヤ８の
底面には、マイクロプレーンの各ウェルに対応する位置
に円形のスリット９を設け、マイクロプレートの透過光
が下方に通過できるようにするとともに、光検出器１０
への迷光の混入を防ぐようになっている。Reference numeral 8 denotes a plate carrier, which has a structure having an edge on the outer peripheral portion, the inner width of which is exactly the same as that of the microplate, and the microplate can be held therein. , One side of which is fixed to the belt 17 as shown in FIG.
The pulley 16 is rotated in the direction of the arrow by the rotation of a motor (not shown), and the pulleys 16 are arranged in parallel with each other.
It is possible to reciprocate back and forth along the slide shaft 15 of the book. Further, a circular slit 9 is provided on the bottom surface of the plate carrier 8 at a position corresponding to each well of the microplane to allow the transmitted light of the microplate to pass downward, and the photodetector 10
It is designed to prevent stray light from mixing in.
１９は本体ハウジングであり、光を透過しない例えば金
属性の筐体として構成され、その一側には、前記プレー
トキャリヤ８の出入口 19aが形成されている。なお本例
のハウジング１９においては、該出入口１９ａを必要時
（マイクロプレートがハウジング内に搬入された後）
に、これを閉じる前面開閉扉２０が設けられており、不
図示のバネ等によって前記必要時に自動的に出入口を閉
じるようになっている。Reference numeral 19 denotes a main body housing, which is configured as, for example, a metal housing that does not transmit light, and an entrance / exit 19a of the plate carrier 8 is formed on one side thereof. In the housing 19 of this example, when the inlet / outlet port 19a is required (after the microplate is carried into the housing)
Further, a front opening / closing door 20 for closing the door is provided, and the door is automatically closed when necessary by a spring or the like (not shown).
なお本例では光ファイバー端部４ｂ、レンズ７ａ、７
ｂ、光検出器１０から構成される光学系を、その光軸２
４と前面開閉扉２０との距離がプレートキャリヤ８の長
さより大きくなるように配設していて、プレートキャリ
ヤ８が収納される場合その進行方向最前列のスリットの
中心が光軸２４上に達すると自動的に閉じるようにして
いる。In this example, the optical fiber end 4b, the lenses 7a, 7
b, the optical system composed of the photodetector 10 has an optical axis 2
4 is arranged such that the distance between the front opening / closing door 20 and the front opening / closing door 20 is larger than the length of the plate carrier 8, and when the plate carrier 8 is housed, the center of the slit in the frontmost row in the traveling direction reaches the optical axis 24. Then it is automatically closed.
１８ａ及び１８ｂはマイクロスイッチであって、１８ａ
（第１スイッチ）は接触子をプレートキャリヤ８内部へ
向けその外縁部に取付けられていて、マイクロプレート
がプレートキャリヤにおかれると電気的に閉じるように
なっているとともに、そのバネ圧によってマイクロプレ
ートを固定及び保持するようになっている。18a and 18b are microswitches,
The (first switch) is attached to the outer edge of the plate carrier 8 so that the contact is directed to the inside of the plate carrier 8 and is electrically closed when the micro plate is placed on the plate carrier. Is designed to be fixed and held.
一方、１８ｂは（第２スイッチ）は本体ハウジング１９
内に取り付けられていて、プレートキャリヤがハウジン
グ内部に収納される場合、その進行方向最後列のスリッ
トの中心が光軸２４上にあるとき、接触子がプレートキ
ャリヤの進行方向最前部の外縁部に接触することによっ
て、電気的に閉じるようなっている。On the other hand, 18b (second switch) is the main housing 19
When the plate carrier is mounted inside the housing and the plate carrier is housed inside the housing, when the center of the slit of the last row in the traveling direction is on the optical axis 24, the contactor is located at the outermost edge of the plate carrier in the traveling direction. By making contact, it is electrically closed.
２１は前面操作パネル面であって、不図示の電源スイッ
チとプレートキャリヤを外部に突出させる電気的評価装
置に連結した一つの押ボタン式スイッチ（図示せず）が
具備されている。Reference numeral 21 denotes a front operation panel surface, which is provided with a power switch (not shown) and one push button switch (not shown) connected to an electrical evaluation device for projecting the plate carrier to the outside.
次に、上記構成のマイクロプレート用自動吸光度測定装
置の動作と作用を説明する。Next, the operation and action of the automatic absorbance measuring device for a microplate having the above structure will be described.
前面操作パネル面２１上の電源スイッチをオンすると光
源１が点灯し、光線はスリット２を通過した後、分光用
フィルター３によって単色とされて、光ファイバー４の
端部４ａの端面光源に具備された凹面鏡の作用によって
集光される。第１スイッチ１８ｂが閉じた状態では、本
例ではプレートキャリヤ８は本体内にて停止していて、
本体前部に近い第一列目のスリットの中心が光軸２４上
にあるようにしている。そこで、光ファイバー４の端部
４ａに導入された光線は、マイクロプレートの一列のウ
ェルの個数に等しい数だけ分岐されて端部４ｂへ導か
れ、レンズ７ａ及びスリット８を通過後、レンズ７ｂに
よって検出器１０上に集光される。そして、電気的評価
装置がチャンネル切り換え回路１２を作動することによ
って、増幅器１１によって増幅された各光検出器１０の
出力信号を、Ａ／Ｄ変換器１３を通しての演算装置１４
へ取り入れ、演算結果を電気評価装置に記憶格納する、
このチャンネル切り換えに要する時間はは、一般的に数
μ秒程度まで短くすることが可能である。これの値は、
空の試料すなわち空気をサンプルとして置いたときの透
過率１００％に於ける各光検出器の出力信号であって、
試料の吸光度を計算する場合に利用される。前面操作パ
ネル面２１上の押しボタン式スイッチを押すと、電気的
評価装置がプーリー１６に直結した図示しないモーター
を回転させて、プレートキャリヤ８の一部が前面開閉扉
を押し開けて本体前面に突出する。そこで、ウェルにサ
ンプルの入ったマイクロプレートをプレートキャリヤ８
におくと、第１スイッチ 18aが閉じられ、電気的評価装
置がプーリー１６に直結したモーターを回転させ、プレ
ートキャリヤ８がマイクロプレートを本体内部へ搬入
し、第２スイッチ１８ｂの接触子がプレート置き台８の
外縁部に接触した位置で停止する。このとき、プレート
置き台の本体前方側の第一列目は光軸２４上にある。そ
こで、電気的評価装置がチャンネル切り換え回路１２を
作動することによって、増幅器１１によって増幅された
各光検出器１０の出力信号を、Ａ／Ｄ変換器１３を通し
て演算装置１４へ順序よく取り入れ、演算結果を電気的
評価装置に記憶格納する。When the power switch on the front operation panel surface 21 is turned on, the light source 1 is turned on, the light beam passes through the slit 2 and is then made into a monochromatic color by the spectral filter 3 and is provided to the end surface light source of the end portion 4a of the optical fiber 4. It is condensed by the action of the concave mirror. In the state where the first switch 18b is closed, the plate carrier 8 is stopped in the main body in this example,
The center of the slit in the first row near the front part of the main body is on the optical axis 24. Therefore, the light beam introduced into the end portion 4a of the optical fiber 4 is branched by the number equal to the number of wells in a row of the microplate, is guided to the end portion 4b, passes through the lens 7a and the slit 8, and is detected by the lens 7b. It is focused on the container 10. Then, the electrical evaluation device operates the channel switching circuit 12 so that the output signal of each photodetector 10 amplified by the amplifier 11 passes through the A / D converter 13 and the arithmetic unit 14
Incorporate in, and store the calculation result in the electrical evaluation device,
The time required for this channel switching can be generally shortened to about several microseconds. The value of this is
It is an output signal of each photodetector at a transmittance of 100% when an empty sample, that is, air is set as a sample,
It is used when calculating the absorbance of a sample. When the push button type switch on the front operation panel surface 21 is pressed, the electric evaluation device rotates a motor (not shown) directly connected to the pulley 16 and part of the plate carrier 8 pushes the front opening / closing door to open the front surface of the main body. Project. Therefore, the microplate with the sample in the well is placed on the plate carrier 8
Then, the first switch 18a is closed, the electrical evaluation device rotates the motor directly connected to the pulley 16, the plate carrier 8 carries the microplate into the main body, and the contact of the second switch 18b places the plate on the plate. It stops at the position where it contacts the outer edge of the table 8. At this time, the first row on the front side of the main body of the plate holder is on the optical axis 24. Therefore, the electrical evaluation apparatus operates the channel switching circuit 12 to sequentially take in the output signals of the photodetectors 10 amplified by the amplifier 11 to the arithmetic unit 14 through the A / D converter 13 and obtain the arithmetic results. Store and store in the electrical evaluation device.
次に、電気的評価装置が、プーリー１６に直結したモー
ターを所定時間あるいは角度だけ回転させて、プレート
キャリヤ８をマイクロプレートの第２列目のウェルの中
心に光軸２４がくるように本体前方へ平行移動し、ふた
たび上記のように光検出器からの出力信号を電気的評価
装置に格納する。マイクロプレートのウェルの中心が光
軸２４上にくるように、プレート置き台８を一列ずつ間
欠的に平行移動しながら、チャンネル切り換え回路１１
によって各光検出器１０からの信号を順序よくし電気的
評価装置へ記憶格納し、この操作を最後列のウェルにつ
いて完了するまで続ける。この間、前面開閉蓋２０は閉
じていて、光が本体外から内部へ入り込むことはない。Next, the electrical evaluation device rotates the motor directly connected to the pulley 16 for a predetermined time or at an angle to move the plate carrier 8 forward of the main body so that the optical axis 24 comes to the center of the well of the second row of the microplate. And the output signal from the photodetector is again stored in the electrical evaluation device as described above. The channel switch circuit 11 is intermittently moved row by row in parallel so that the center of the well of the microplate is on the optical axis 24.
The signal from each photodetector 10 is sequenced and stored in the electrical evaluation device and this operation is continued until the last row of wells is completed. During this time, the front opening / closing lid 20 is closed, and light does not enter the inside from the outside of the main body.
以上のようにして電気的評価装置へ記憶格納された値か
ら、各ウェル内のサンプルの透過率及び吸光度が計算さ
れる。そして、電気的評価装置が、プーリー１６に直結
したモーターを回転させてマイクロプレートを保持した
プレートキャリヤ８を本体前面に搬出する。マイクロプ
レートをプレートキャリヤから取り出した後、次のマイ
クロプレートをプレートキャリヤ８におけば、上述の測
定が再び行われる。また操作パネル面の押しボタン式ス
イッチを押すことで、プレートキャリヤ８を本体ハウジ
ング内部へ搬入させて規定されている位置で停止して待
機させるようにしてもよい。From the values stored and stored in the electrical evaluation device as described above, the transmittance and the absorbance of the sample in each well are calculated. Then, the electrical evaluation device rotates the motor directly connected to the pulley 16 to carry out the plate carrier 8 holding the microplate to the front surface of the main body. After taking out the microplate from the plate carrier, the next microplate is placed on the plate carrier 8 and the above-mentioned measurement is carried out again. Alternatively, the plate carrier 8 may be loaded into the main body housing by pressing a push-button switch on the operation panel surface, and stopped at a prescribed position to stand by.
なお、上記実施例はこの発明の一例であって、これ以外
の変形実施も可能であることは言うまでもない。例え
ば、上記実施例では光線出射口をマイクロプレートの上
方にし、その下方に光検出器を配置してあるが、この逆
の配置も可能である。It is needless to say that the above embodiment is an example of the present invention, and modifications other than this are possible. For example, in the above embodiment, the light exit port is located above the microplate and the photodetector is located below it, but the reverse arrangement is also possible.
第４図は電気的評価装置によって行なわれる上記一連の
動作シーケンスを示したフローチャートである。FIG. 4 is a flow chart showing the series of operation sequences performed by the electrical evaluation apparatus.
（発明の効果） 以上の説明から明らかなように、本発明よりなるマイク
ロプレート用吸光度測定装置によれば、一列状に配置し
た吸光度測定用の複数の光学手段に対し、マイクロプレ
ートを間欠的に搬送することで測定時の走査制御を行う
ことができ、しかも、測定開始と測定終了を検出する一
対のスイッチ手段と、往復駆動手段および測定光学手段
の駆動シーケンスを予めプログラムした制御回路とによ
り、ハウジングから突出したプレレートキャリヤの上に
マイクロプレートを載置するだけで自動的に所定の測定
動動作を開始させることができ、他方、測定終了後は元
の載置位置（取出し位置）に自動的に戻ったプレートキ
ャリヤからマイクロプレートを容易に取出すことができ
るという簡易な操作を実現できるという効果が得られ
る。(Effects of the Invention) As is clear from the above description, according to the absorbance measuring device for microplates of the present invention, the microplate is intermittently provided for the plurality of optical means for absorbance measurement arranged in a line. By carrying it, it is possible to perform scanning control during measurement, and moreover, by a pair of switch means for detecting measurement start and measurement end, and a control circuit that pre-programs the drive sequence of the reciprocating drive means and the measurement optical means, Simply place the microplate on the pre-coated carrier that protrudes from the housing to automatically start the specified measurement operation. On the other hand, after the measurement is completed, it will automatically return to the original mounting position (takeout position). It is possible to realize the simple operation that the microplate can be easily taken out from the plate carrier that has returned to the desired state.
そしてこのようなマイクロプレートの載置と取出しとい
う簡易な操作以外は自動的にに動作する半自動化装置
を、プレートキャリヤに対するマイクロプレートの載置
と取出しの位置をハウジング側面の同じ場所とすること
で、小型で、設置場所の制約も少ない装置を提供でき、
特に比較的少数の測定を行なう用途に好適な測定装置と
して安価に提供できるという効果が得られる。A semi-automatic device that operates automatically except for such a simple operation of placing and taking out the microplate can be used by placing the placing and taking out of the microplate on the plate carrier at the same position on the side surface of the housing. It is possible to provide a device that is compact and has few restrictions on the installation location.
In particular, it is possible to obtain the effect that the measuring device can be provided at low cost, which is suitable for the purpose of performing a relatively small number of measurements.
更に、本発明の吸光度測定装置は、前記のように簡単な
操作で使用できる半自動化した装置を実現しながら、ハ
ウジング内に外部光が侵入することによる測定誤差への
影響を可及的に低減できるという効果も得られる。すな
わち測定対象のマイクロプレートの出入りをハウジング
の側面に設けた１ケ所の出入口に限定し、しかもこの出
入口は開閉扉で閉じる構成を採用したからであり、これ
により精度が高く信頼性の高い測定が実現できるという
効果が得られる。Further, the absorbance measuring device of the present invention realizes a semi-automatic device that can be used by the simple operation as described above, while reducing the influence on the measurement error due to the external light entering the housing as much as possible. The effect that it can be obtained is also obtained. That is, the entrance and exit of the microplate to be measured is limited to one entrance and exit provided on the side surface of the housing, and this entrance and exit is closed by the opening and closing door, which enables highly accurate and reliable measurement. The effect that it can be realized is obtained.
図面第１図は本発明よりなるマイクロプレート用吸光度
測定装置の構成概要一例を示す縦断側面図、第２図は第
１図Ａ−Ａ線の縦断面図、第３図は第２図Ｂ−Ｂ線の平
断面図、第４図は本例装置の動作シーケンスを説明する
フローチャートである。 １：光源、２：スリット ３：分光用フィルター ４：光ファイバー ４ａ：光ファイバー端部 ４ｂ：光ファイバー端部 ６：保持部材 ７ａ：レンズ、７ｂ：レンズ ８：プレートキャリヤ ９：スリット、１０：光検出器 １１：増幅器、１２：チャンネル切換回路 １３：A/D 変換器、１４：演算回路 １５：スライドシャフト １６：プーリー、１７：ベルト １８ａ：第１スイッチ、１８ｂ：第２スイッチ １９：ハウジング、２０：前面開閉扉 ２１：前面操作パネルDrawing FIG. 1 is a vertical sectional side view showing an example of the configuration outline of the absorbance measuring device for a microplate according to the present invention, FIG. 2 is a vertical sectional view taken along the line AA in FIG. 1, and FIG. FIG. 4 is a plan sectional view taken along line B, and FIG. 4 is a flow chart for explaining the operation sequence of the apparatus of this example. DESCRIPTION OF SYMBOLS 1: Light source, 2: Slit 3: Spectral filter 4: Optical fiber 4a: Optical fiber end 4b: Optical fiber end 6: Holding member 7a: Lens, 7b: Lens 8: Plate carrier 9: Slit, 10: Photodetector 11 : Amplifier, 12: Channel switching circuit 13: A / D converter, 14: Arithmetic circuit 15: Slide shaft 16: Pulley, 17: Belt 18a: First switch, 18b: Second switch 19: Housing, 20: Front opening / closing Door 21: Front operation panel
Claims (1)
配列されているマイクロプレートを対象として、各ウェ
ル内のサンプルの吸光度を測定する吸光度測定装置であ
って、 前記マイクロプレートの横列するウェルに各１個宛に対
向する複数の吸光度測定用光学手段が内部に配置された
箱構造をなし、かつ前記マイクロプレートが水平方向に
出入りするための出入口が側面に設けられた遮光型のハ
ウジングと、 マイクロプレートが載置可能な上面を有すると共に、前
記ハウジングの出入口から外部に突出したプレート載
置，取出しのための第１の位置と、ハウジング内に搬送
限界位置として設定した第２の位置との間で前記マイク
ロプレートをそのウェルの縦列方向に水平に往復動させ
るプレートキャリヤと、 前記ハウジング内からプレートキャリヤが第１の位置に
突出することに連係してハウジングの前記出入口を開閉
する遮光用開閉扉と、 このプレートキャリアの前記往復動のいずれか一方向の
移動においては該キャリヤ上のマイクロプレートの複数
列のウェルを吸光度測定位置に間欠移動により順次に対
向停止させ、かついずれか他方向の移動においては連続
送りさせるプレートキャリヤ往復動駆動装置と、 前記マイクロプレートのプレートキャリヤへの載置によ
り測定開始を検知するスイッチ手段、及びプレートキャ
リヤが前記第２の位置に至ったことを検知するスイッチ
手段と、 入力が前記各スイッチ手段に接続され、かつ出力が前記
往復動駆動装置および吸光度測定用光学手段に接続され
て、マイクロプレートの搬送と、この搬送時のプレート
キャリヤの間欠停止に応じて順次の吸光度測定を行わせ
る制御装置と、 を備えたことを特徴とするマイクロプレート用吸光度測
定装置。1. An absorbance measuring device for measuring the absorbance of a sample in each well of a microplate in which a plurality of wells are arranged in rows and columns in a grid pattern. Of a light-shielding type having a box structure in which a plurality of optical means for measuring absorbance, which are opposed to each other, are arranged inside each well, and an inlet / outlet for horizontally moving the microplate in and out is provided on a side surface. The housing has an upper surface on which a microplate can be placed, and has a first position for placing and taking out a plate that protrudes from the entrance of the housing to the outside, and a second position set as a conveyance limit position in the housing. A plate carrier for horizontally reciprocating the microplate in a column direction of the well between the plate and a position; A light-blocking door that opens and closes the doorway of the housing in association with the carrier protruding to the first position; and a microplate on the carrier when the plate carrier moves in one of the reciprocating motions. A plate carrier reciprocating drive device that sequentially stops the plurality of rows of wells at the absorbance measurement position by intermittent movement, and continuously feeds in any other direction, and measures by mounting the microplate on the plate carrier. A switch means for detecting the start, a switch means for detecting that the plate carrier has reached the second position, an input connected to each of the switch means, and an output for the reciprocating drive device and the optical absorbance measuring device. Connected to the means, transfer of microplate and intermittent stop of plate carrier during this transfer Depending sequentially absorbance and a controller to perform the measurement, for microplates absorbance measuring apparatus characterized by comprising a.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61151195A JPH0619321B2 (en) | 1986-06-27 | 1986-06-27 | Absorbance measuring device for microplate |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61151195A JPH0619321B2 (en) | 1986-06-27 | 1986-06-27 | Absorbance measuring device for microplate |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS638537A JPS638537A (en) | 1988-01-14 |
| JPH0619321B2 true JPH0619321B2 (en) | 1994-03-16 |
Family
ID=15513335
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61151195A Expired - Fee Related JPH0619321B2 (en) | 1986-06-27 | 1986-06-27 | Absorbance measuring device for microplate |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0619321B2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09127135A (en) * | 1995-10-30 | 1997-05-16 | Kdk Corp | Detecting method for liquid sampling tip |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2779824B2 (en) * | 1989-02-09 | 1998-07-23 | スズキ株式会社 | Immunological agglutination detector |
| JPH0436640A (en) * | 1990-05-31 | 1992-02-06 | Aloka Co Ltd | Absorbancy coeficient measuring instrument |
| JPH05194309A (en) * | 1992-01-22 | 1993-08-03 | Mitsubishi Kasei Corp | Production of 4-hydroxyphenylglyoxylic acids |
| JPH0610856U (en) * | 1992-01-31 | 1994-02-10 | 株式会社インターテック | Microplate reader |
| DE50001774D1 (en) | 1999-09-29 | 2003-05-22 | Tecan Trading Ag Maennedorf | Thermal cycler and lifting element for microtiter plate |
| US7169355B1 (en) | 2000-02-02 | 2007-01-30 | Applera Corporation | Apparatus and method for ejecting sample well trays |
| JP2002182123A (en) * | 2000-12-11 | 2002-06-26 | Nikon Corp | Microscope device |
| JP4631218B2 (en) * | 2001-06-21 | 2011-02-16 | 株式会社ニコン | Microscope equipment |
| JP5279481B2 (en) | 2008-12-25 | 2013-09-04 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | Nucleic acid analyzer |
| CN102341694B (en) | 2009-01-08 | 2018-03-23 | It-Is国际有限公司 | Optical system for chemical reaction and/or biochemical reaction |
| FI20095061A0 (en) * | 2009-01-26 | 2009-01-26 | Wallac Oy | Master module for an optical measuring instrument |
| DE102011075037A1 (en) * | 2011-04-29 | 2012-10-31 | Hamilton Bonaduz Ag | Punching device with mounting plate |
| JP5728042B2 (en) * | 2012-08-20 | 2015-06-03 | 株式会社Ｓｃｒｅｅｎホールディングス | Imaging device |
| CN106168573A (en) * | 2015-09-06 | 2016-11-30 | 深圳雷杜生命科学股份有限公司 | A kind of Systems for optical inspection and include the Blood coagulation instrument of this system |
| CN105223137B (en) * | 2015-10-20 | 2017-10-24 | 希肯医疗技术（苏州）有限公司 | A kind of optical measuring device for detection of biological samples |
| CN116042380B (en) * | 2023-04-03 | 2023-07-25 | 至美时代生物智能科技(北京)有限公司 | Image acquisition device for preventing nucleic acid aerosol from being polluted |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6040955A (en) * | 1983-08-17 | 1985-03-04 | Japan Spectroscopic Co | Automatic micro-plate spectroscopic analysis apparatus and its method |
| JPS60181634A (en) * | 1984-02-28 | 1985-09-17 | Osamu Matsuo | Sample chamber for spectrophotometer |
| JPS60222753A (en) * | 1984-04-20 | 1985-11-07 | Hitachi Ltd | Turbidity measuring apparatus |
-
1986
- 1986-06-27 JP JP61151195A patent/JPH0619321B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09127135A (en) * | 1995-10-30 | 1997-05-16 | Kdk Corp | Detecting method for liquid sampling tip |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS638537A (en) | 1988-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0619321B2 (en) | Absorbance measuring device for microplate | |
| US7236237B2 (en) | Spectroscopic fluid analyzer | |
| US5891396A (en) | Cutting and sealing station for test sample cards in an automated analytical system | |
| US4867946A (en) | Device for evaluating test strips | |
| US5319200A (en) | Rapid near-infrared measurement of nonhomogeneous samples | |
| US6388751B1 (en) | Apparatus for determining optical properties of liquid samples | |
| RU2304276C2 (en) | Device for automatic inspection of liquid sample | |
| CA2250400A1 (en) | Method and device for measuring reflected optical radiation | |
| JPS6344762Y2 (en) | ||
| US20230324307A1 (en) | Circuit board with onboard light sources | |
| US4201478A (en) | Photometer with automatic test sample selection, scanning and analysis system | |
| JPS61194336A (en) | Automatic chemical analyser | |
| US4550417A (en) | Apparatus for counting numbers of fine particles | |
| JPH04372861A (en) | Detecting apparatus of liquid level | |
| US20140186212A1 (en) | Methods and apparatus for measuring luminescence and absorbance | |
| JPS5944584B2 (en) | Automatic analysis method | |
| KR102321031B1 (en) | Liquid Immunoassay Device using Magnetic Beads | |
| DE68928972D1 (en) | Analyzer for determining the phenotype and the ABO blood group | |
| JPH11304699A (en) | Near infrared component analyzer | |
| JPH0980055A (en) | Automatic multiple item analyzer | |
| JP2001194371A (en) | Chemical analyzer | |
| JPH07270427A (en) | Blood coagulation measuring apparatus | |
| JPH0140947B2 (en) | ||
| JPH0515082Y2 (en) | ||
| JPS63205546A (en) | Automatic analysis instrument |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |