JPH06157588A - Cell adhesion active new peptide derivative - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain the subject new peptide derivative, having a structure in which an aspartic acid part is cyclized and imidated and a cell adhesive activity, and useful as a cancer metastatic suppressor, a blood platelet agglutination suppressor, a wound curing agent or a bone resorption inhibitor, etc. CONSTITUTION:A cyclic peptide expressed by formula I is dissolved in methanesulfonic acid and the resultant solution is stirred at ambient temperature for 3hr. The reactional solution is then dropped into ether and stirred for 30min while being cooled with ice. The formed precipitate is further collected by filtration to provide a solid, which is then dissolved in water to remove insoluble substances by filtration. The obtained filtrate is freeze-dried to afford a crude product, which is subjected to the reversed phase high-performance liquid chromatography and eluted with a gradient of water-0.1% trifluoroacetic acid and acetonitrile-0.1% trifluoroacetic acid to afford the objective new cell adhesive active peptide derivative (salt), containing a structure expressed by formula II (A<1> is Arg or amino acid having N in the side chain; the alpha-amino group in the amino acid residue of A<1> may be substituted with a lower alkyl) which may be modified with a modifying group.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、細胞接着活性を有し、
癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒剤または骨
吸収阻害剤として有用な新規なペプチド誘導体に関す
る。The present invention has cell adhesion activity,
The present invention relates to a novel peptide derivative useful as a cancer metastasis inhibitor, a platelet aggregation inhibitor, a wound healing agent or a bone resorption inhibitor.

【０００２】[0002]

【従来の技術】従来、細胞と間質結合組織との接着に関
与し、動物細胞の細胞機能に関連した多彩な生理活性を
持つ蛋白質は、細胞接着活性蛋白質と呼ばれており、こ
のような蛋白質としては、例えばフィブロネクチン、ラ
ミニン及びビトロネクチン等が知られている。これら
の、細胞接着活性蛋白質について、細胞接着活性に関与
する結合部位の研究が行われており、例えばフィブロネ
クチンを蛋白質分解酵素で限定分解して得られる断片と
ヘパリン、コラーゲン、細胞および細菌への結合の研究
から、それぞれＡ鎖、Ｂ鎖の両鎖とも結合部位が決定さ
れている（Yamada, K. M. : Ann.Rev. Biochem.，52, 7
61(1983))。さらに、その細胞結合部位のコア配列はア
ルギニン−グリシン−アスパラギン酸〔Ａｒｇ−Ｇｌｙ
−Ａｓｐ（以下、ＲＧＤ配列と略すことがある）〕であ
ることが1984年に解明された（Pierschbachr, M. D.
ら：Nature, 309, 30(1984))。このＲＧＤ配列は、ビト
ロネクチンやフィブリノーゲンなど他の細胞接着活性蛋
白質の配列中にも存在していることが明らかになってい
る（Suzuki, S.ら：J. Biol. Chem., 259, 15307(198
4)、Plow, E.ら：Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ，8
2, 8057(1985)) 。2. Description of the Related Art Conventionally, proteins which are involved in the adhesion between cells and interstitial connective tissue and have various physiological activities related to the cell function of animal cells are called cell adhesion activating proteins. Known proteins include, for example, fibronectin, laminin, vitronectin and the like. Regarding these cell adhesion activity proteins, studies have been conducted on the binding sites involved in cell adhesion activity. For example, fragments obtained by limited degradation of fibronectin with proteolytic enzymes and binding to heparin, collagen, cells and bacteria. The binding site was determined for both the A chain and the B chain, respectively (Yamada, KM: Ann. Rev. Biochem., 52 , 7).
61 (1983)). Furthermore, the core sequence of the cell binding site is arginine-glycine-aspartic acid [Arg-Gly.
-Asp (hereinafter sometimes abbreviated as RGD sequence)] was elucidated in 1984 (Pierschbachr, MD
Et al., Nature, 309, 30 (1984)). It has been revealed that this RGD sequence is also present in sequences of other cell adhesion-activating proteins such as vitronectin and fibrinogen (Suzuki, S. et al .: J. Biol. Chem., 259, 15307 (198).
4), Plow, E. et al .: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 8
2 , 8057 (1985)).

【０００３】フィブロネクチンは上記ＲＧＤ配列を介し
て、被接着細胞のレセプターと接合し、その情報を接着
細胞に伝達しており、細胞と間質結合組織との接着、細
胞の分化、増殖に関与していると考えられている（Yama
da, K. M. : Ann. Rev. Biochem.，52, 761(1983))。ま
た、血漿中に存在するフィブリノーゲンは、ＲＧＤ配列
を介して血小板膜糖タンパク複合体IIｂ／III ａと相互
作用して、血小板の凝集を引き起こすことが知られてお
り、ＲＧＤ配列を有する合成ペプチドが、フィブリノー
ゲンと血小板膜糖タンパク複合体IIｂ／III ａの相互作
用を阻害することから、血小板凝集抑制剤として有効で
あると考えられている（Phillips, D. R. ： Cell, 65,
359(1991)) 。更に、ヘビ毒由来のＲＧＤ配列を有する
ペプチドが破骨細胞による骨吸収を有意に阻害すること
も知られている（Sato, M.ら: J. Cell Biol., 111, 17
13(1990)) 。このように、細胞接着活性蛋白質は、種々
の生物活性を有するため、医薬等への応用が研究されて
いる。例えば、血漿中のフィブロネクチン量が低下する
と網内皮系の機能が低下し、外科手術や外傷による敗血
症、播種性血管内血液凝固、火傷、重症感染症や外科的
ショック等が起こる。それらの症状の改善のために、フ
ィブロネクチンの投与が有効であると考えられている。
また、フィブロネクチンは繊維芽細胞やマクロファージ
の遊走能を刺激することから、創傷の治癒や免疫能の機
能の調整への応用が考えられている。とくに創傷の治癒
促進効果を利用した角膜障害への局所治療は、既に試み
られている（Fujikawa, L. S. ら: Lab. Invest., 45,
120(1981))。更に、細胞接着活性蛋白質は、癌転移に関
係する物質としても注目されている。癌転移の一連の段
階では、癌細胞は種々の宿主細胞や生体高分子と接触す
るが、この時、フィブロネクチンやラミニンのような細
胞接着活性蛋白質が存在すると、癌細胞は多細胞塊を形
成し、癌細胞の増殖や生存をより容易にすることが知ら
れている。[0003] Fibronectin binds to the receptor of adherent cells through the above RGD sequence and transmits the information to the adherent cells, and is involved in adhesion between cells and interstitial connective tissue, differentiation and proliferation of cells. (Yama
da, KM: Ann. Rev. Biochem., 52 , 761 (1983)). Further, fibrinogen present in plasma is known to interact with the platelet membrane glycoprotein complex IIb / IIIa via the RGD sequence to cause platelet aggregation, and a synthetic peptide having the RGD sequence is , Inhibits the interaction between fibrinogen and platelet membrane glycoprotein complex IIb / IIIa, and is therefore considered to be effective as a platelet aggregation inhibitor (Phillips, DR: Cell, 65,
359 (1991)). Furthermore, it is also known that a peptide having an RGD sequence derived from snake venom significantly inhibits bone resorption by osteoclasts (Sato, M. et al .: J. Cell Biol., 111 , 17).
13 (1990)). As described above, the cell adhesion-activating protein has various biological activities, and its application to medicines and the like has been studied. For example, when the amount of fibronectin in plasma decreases, the function of the reticuloendothelial system decreases, resulting in sepsis due to surgery or trauma, disseminated intravascular blood coagulation, burns, severe infections, surgical shock, and the like. Administration of fibronectin is considered to be effective for the improvement of those symptoms.
Moreover, since fibronectin stimulates the migration ability of fibroblasts and macrophages, its application to the healing of wounds and the regulation of immune function is considered. In particular, local treatment for corneal disorders using the wound healing promoting effect has already been attempted (Fujikawa, LS et al .: Lab. Invest., 45 ,
120 (1981)). Furthermore, cell adhesion activating proteins have been attracting attention as substances related to cancer metastasis. During a series of stages of cancer metastasis, cancer cells come into contact with various host cells and biopolymers. At this time, in the presence of cell adhesion activating proteins such as fibronectin and laminin, cancer cells form a multicellular mass. , Is known to facilitate the growth and survival of cancer cells.

【０００４】一方、ラミニン由来のプロテアーゼ分解フ
ラグメントは、逆に癌転移阻害活性を有することが報告
されている（Barsky, S. H. ら：J. Clin. Invest., 7
4, 843(1984))。同様に、フィブロネクチンの接着コア
であるトリペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（Humphrie
s, M. J.ら：Science, 233, 467(1986))やラミニンの接
着コアであるペンタペプチドＴｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−
Ｓｅｒ−Ａｒｇ（Iwamoto, Y. ら：Science, 238, 1132
(1987)) も癌の転移を抑制することが確認されている。
さらに、これら接着コアの繰り返し構造からなるポリマ
ーペプチドは、そのモノマーペプチドに比べ強い血小板
凝集抑制活性および癌転移抑制活性を示すことが知られ
ている。（東 ら，特開平2-174798号公報）On the other hand, it has been reported that a protease-degrading fragment derived from laminin has a cancer metastasis inhibiting activity (Barsky, SH et al .: J. Clin. Invest., 7
4 , 843 (1984)). Similarly, the tripeptide Arg-Gly-Asp (Humphrie), which is the adhesion core of fibronectin.
s, MJ et al .: Science, 233, 467 (1986)) and pentapeptide Tyr-Ile-Gly- which is an adhesive core of laminin.
Ser-Arg (Iwamoto, Y. et al .: Science, 238 , 1132).
(1987)) has also been confirmed to suppress cancer metastasis.
Furthermore, it is known that a polymer peptide having a repeating structure of these adhesive cores exhibits a stronger platelet aggregation inhibitory activity and cancer metastasis inhibitory activity than its monomer peptide. (Higashi et al., Japanese Patent Laid-Open No. 2-174798)

【０００５】しかしながら、上記の様なペプチドを生体
内に投与する際の問題点の一つとして、生体内クリアラ
ンスが非常に速いという点が挙げられる。このような問
題点を解決するための有用な手段のひとつとして、細胞
接着活性を有するペプチド（以下、細胞接着活性ペプチ
ドと略する）のペプチド鎖中にシステイン残基を有する
ペプチドを合成し、ジスルフィド結合で環化した化合物
が知られている（M. D. Piershbachr ら、J. Biol. Che
m., 262, 17294-17298(1987)、特開平3-206097号公報、
特開平3-161498号公報）。また、環状の細胞接着活性ペ
プチドについても既に知られている（WO91/1331)。ま
た、修飾基で修飾されたＲＧＤペプチド誘導体について
の報告がある（特開平4-217693号公報）。なお、アスパ
ラギン酸がイミドを形成したペプチド誘導体で細胞接着
活性を持つものは、従来知られていない。However, one of the problems in administering the above peptides into a living body is that the in vivo clearance is very fast. As one of useful means for solving such a problem, a peptide having a cysteine residue in the peptide chain of a peptide having cell adhesion activity (hereinafter, abbreviated as cell adhesion activity peptide) is synthesized to produce disulfide. Compounds cyclized by a bond are known (MD Piershbachr et al., J. Biol. Che.
m., 262, 17294-17298 (1987), JP-A-3-206097,
Japanese Patent Laid-Open No. 3-161498). In addition, a cyclic cell adhesion active peptide has already been known (WO91 / 1331). There is also a report on an RGD peptide derivative modified with a modifying group (Japanese Patent Laid-Open No. 4-217693). It should be noted that a peptide derivative in which aspartic acid forms an imide and which has cell adhesion activity has not been heretofore known.

【０００６】[0006]

【発明が解決しようとする課題】上述のように、フィブ
ロネクチンやラミニン等の細胞接着活性蛋白質は、様々
な生物活性を有しており、その関連物質を医薬として応
用する技術の開発が望まれていた。特に、フィブロネク
チンやラミニン等の接着コア配列の癌転移抑制作用は、
医薬としての応用価値の高いものと考えられるが、それ
らのうち癌転移抑制剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒剤
または骨吸収阻害剤として応用するために充分満足でき
るものはいまだ報告されていない。従って、本発明の目
的は、細胞接着活性を有する新規なペプチド誘導体また
はその薬学的に許容される塩を提供すること、および細
胞接着活性を有する新規なペプチド誘導体またはその薬
学的に許容される塩を含有する癌転移抑制剤、血小板凝
集抑制剤、創傷治癒剤または骨吸収阻害剤を提供するこ
とにある。As described above, cell adhesion activity proteins such as fibronectin and laminin have various biological activities, and it is desired to develop a technique for applying related substances thereof as a medicine. It was In particular, the cancer metastasis suppressive action of adhesive core sequences such as fibronectin and laminin is
It is considered to have high application value as a medicine, but none of them has been reported to be sufficiently satisfactory for application as a cancer metastasis inhibitor, a platelet aggregation inhibitor, a wound healing agent or a bone resorption inhibitor. Therefore, an object of the present invention is to provide a novel peptide derivative having cell adhesion activity or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a novel peptide derivative having cell adhesion activity or a pharmaceutically acceptable salt thereof. It is intended to provide a cancer metastasis inhibitor, a platelet aggregation inhibitor, a wound healing agent or a bone resorption inhibitor, which comprises:

【０００７】[0007]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために、鋭意検討を行った結果、従来細胞接
着活性を持つことが知られているＲＧＤ配列または誘導
されたＲＧＤ配列を持つペプチド誘導体のアスパラギン
酸部分が環化し、イミド化したペプチド誘導体もしくは
修飾基を導入したそのペプチド誘導体またはその薬学的
に許容される塩が細胞接着活性を有することを見い出
し、本発明を完成するに至った。The inventors of the present invention have conducted extensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, have found that the RGD sequence or the induced RGD sequence conventionally known to have cell adhesion activity. The present invention has been completed by finding that the aspartic acid moiety of the peptide derivative having cyclized and the imidized peptide derivative or the peptide derivative having a modified group introduced or a pharmaceutically acceptable salt thereof has cell adhesion activity. Came to.

【０００８】すなわち、本発明は、 式（１）That is, the present invention is based on the formula (1)

【０００９】[0009]

【化９】 [Chemical 9]

【００１０】〔式中、Ａ¹ はＡｒｇまたは側鎖に窒素原
子を有するアミノ酸残基を表す。ただし、Ａ¹ で表され
るアミノ酸残基のα−アミノ基は、低級アルキル基で置
換されてもよい。〕を含有し、修飾基で修飾されてもよ
いペプチド誘導体またはその薬学的に許容される塩、[In the formula, A ¹ represents Arg or an amino acid residue having a nitrogen atom in the side chain. However, the α-amino group of the amino acid residue represented by A ¹ may be substituted with a lower alkyl group. ], A peptide derivative which may be modified with a modifying group or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

【００１１】式（２）Formula (2)

【化１０】 [Chemical 10]

【００１２】〔式中、Ａ¹ は前記と同義であり、ｎは１
〜５の整数を表し、Ｒ¹ は単結合または−ＮＨ−Ｒ² −
ＣＯ−（Ｒ² はアルキレンを表す。）を表し、Ａ² は−
ＮＨ−Ａ² −と表現した場合に、アミノ酸残基または２
〜１０個のアミノ酸からなるペプチド残基を表す基を表
す。〕、[Wherein A ¹ has the same meaning as above and n is 1
Represents an integer of 5 and R ¹ is a single bond or —NH—R ² —
CO- (R ² represents alkylene) and A ² represents-.
When expressed as NH-A ^2- , an amino acid residue or 2
It represents a group representing a peptide residue consisting of 10 amino acids. ],

【００１３】式（３）Formula (3)

【化１１】 [Chemical 11]

【００１４】〔式中、Ａ¹ は前記と同義であり、Ａ³ お
よびＡ⁵ はそれぞれ[Wherein A ¹ has the same meaning as defined above, A ³ and A ⁵ are respectively

【化１２】 および[Chemical 12] and

【化１３】 [Chemical 13]

【００１５】と表現した場合に、同一あるいは異なって
ＣｙｓまたはＰｅｎを表す基を表し、Ａ⁴ は単結合、ア
ミノ酸残基、２個のアミノ酸からなるペプチド残基、ま
たはアミノ酸残基とアミノ酸誘導体の残基の結合体を表
す。Ｒ³ は水素原子またはアシル基を表し、Ｒ⁴ は水酸
基またはＮＲ⁵ Ｒ⁶ （Ｒ⁵ およびＲ⁶ は同一あるいは異
なって低級アルキル基または水素原子を表す。）を表
す。〕、When expressed as, the same or different, it represents a group representing Cys or Pen, A ⁴ is a single bond, an amino acid residue, a peptide residue consisting of 2 amino acids, or an amino acid residue and an amino acid derivative. Represents a conjugate of residues. R ³ represents a hydrogen atom or an acyl group, R ⁴ represents a hydroxyl group or NR ⁵ R ⁶ (R ⁵ and R ⁶ are the same or different and represent a lower alkyl group or a hydrogen atom). ],

【００１６】式（４）Equation (4)

【化１４】 [Chemical 14]

【００１７】〔式中、Ａ¹ は前記と同義であり、Ａ⁶ は
単結合、アミノ酸残基または２個のアミノ酸からなるペ
プチド残基を表し、Ｒ⁷ およびＲ⁸ は同一あるいは異な
ってアルキレンまたはフェニレンを表す。〕、[Wherein A ¹ is as defined above, A ⁶ is a single bond, an amino acid residue or a peptide residue consisting of two amino acids, R ⁷ and R ⁸ are the same or different and are alkylene or Represents phenylene. ],

【００１８】式（５）Equation (5)

【化１５】 [Chemical 15]

【００１９】〔式中、Ａ¹ およびＲ⁴ は前記と同義であ
り、Ａ⁷ はアミノ酸残基を表し、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は同一
あるいは異なってアルキレンを表し、Ｙはメチレン、酸
素原子、ＳＯ_m （ｍは０、１または２を表す。）または
ＮＨを表す。〕または[Wherein A ¹ and R ⁴ are as defined above, A ⁷ is an amino acid residue, R ⁹ and R ¹⁰ are the same or different and represent alkylene, Y is methylene, oxygen atom, SO _m (m represents 0, 1 or 2) or NH. ] Or

【００２０】式（６）Formula (6)

【化１６】 [Chemical 16]

【００２１】〔式中、Ａ¹ 、Ｒ³ およびＲ⁴ は前記と同
義であり、Ａ⁸ は−ＮＨ−Ａ⁸ −と表現した場合にアミ
ノ酸残基または２〜１０個のアミノ酸からなるペプチド
残基を表す基を表す。ｒは１〜２０の整数を表す。〕で
表され、修飾基で修飾されてもよいペプチド誘導体また
はその薬学的に許容される塩、[0021] wherein, A ^1, R ³ and R ⁴ are as defined above, A ⁸ is -NH-A ⁸ - peptide residue consisting of amino acid residues when expressed as or 2-10 amino acids Represents a group. r represents an integer of 1 to 20. ], A peptide derivative which may be modified with a modifying group or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

【００２２】 または記載のペプチド誘導体また
はその薬学的に許容される塩を含有する癌転移抑制剤、
血小板凝集抑制剤、創傷治癒剤または骨吸収阻害剤に関
する。Or a cancer metastasis inhibitor containing the peptide derivative or the pharmaceutically acceptable salt thereof,
It relates to a platelet aggregation inhibitor, a wound healing agent or a bone resorption inhibitor.

【００２３】式（１）で表される部分構造を持つことを
特徴とする新規なペプチド誘導体としては、従来細胞接
着活性を持つことが知られているＲＧＤ配列または誘導
化されたＲＧＤ配列を持つペプチド誘導体のアスパラギ
ン酸部分が環化し、イミド化したペプチド誘導体が挙げ
られる。ここで、従来細胞接着活性を持つことが知られ
ているＲＧＤ配列または誘導化されたＲＧＤ配列を持つ
ペプチド誘導体としては、具体的には、特開平3-206097
号公報、特開平3-161498号公報、特開平2-62892 号公
報、特開平3-118330号公報、特開平3-118331号公報、特
開平3-118332号公報、特開平3-118333号公報、特開平3-
118397号公報、特開平3-118398号公報、特開平3-173897
号公報、特開平2-174797号公報、特開平4-217693号公
報、特開平4-221394号公報、特開平4-221395号公報、特
開平4-164095号公報、特開平4-208295号公報、特開平4-
208296号公報、特開平4-99795 号公報、WO91/1331 、WO
91/11458等に記載されたペプチド誘導体が挙げられる。A novel peptide derivative characterized by having a partial structure represented by the formula (1) has an RGD sequence or a derivatized RGD sequence which is conventionally known to have cell adhesion activity. Examples include peptide derivatives in which the aspartic acid moiety of the peptide derivative is cyclized and imidized. Here, as the peptide derivative having an RGD sequence or a derivatized RGD sequence, which is conventionally known to have a cell adhesion activity, specifically, Japanese Patent Laid-Open No. 3-206097 can be used.
JP, JP3-161498, JP2-62892, JP3-118330, JP3-118331, JP3-118332, JP3-118333 , JP-A-3-
118397, JP-A-3-118398, JP-A3-173897
JP, JP2-174797, JP4-217693, JP4-2221394, JP4-2221394, JP4-2221395, JP4-164095, JP4-208295 , JP 4-A
208296, JP 4-99795 A, WO 91/1331, WO
Examples include peptide derivatives described in 91/11458 and the like.

【００２４】本明細書において、アミノ酸、アミノ酸誘
導体、ペプチド、その他に関して略号で表示する場合
は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定または当該分野における
慣用記号に従うものとする。またアミノ酸等に関して光
学異性体があり得る場合は、Ｄ−型、Ｌ−型のいずれの
場合も含むが、特に明記せずに略号、慣用記号を用いた
場合は、Ｌ−型を示すものとする。In the present specification, when abbreviations are used for amino acids, amino acid derivatives, peptides, etc., they shall comply with the provisions of IUPAC-IUB or the symbols commonly used in the art. When amino acids and the like may have optical isomers, both the D-form and the L-form are included, but when abbreviations and common symbols are used unless otherwise specified, they indicate the L-form. To do.

【００２５】アミノ酸の具体例を略号とともに以下に示
す。 Specific examples of amino acids are shown below with abbreviations.

【００２６】アミノ酸誘導体の具体例を、略号とともに
以下に示す。 略号（３文字） 名 称（構造） Ａｍｆ ｐ−アミノメチルフェニルアラニン Ｄｔｃ ５，５−ジメチルチアゾリジン−４−カルボン酸 （Ｎ−Ｍｅ）Ａｒｇ Ｎ−メチルアルギニンSpecific examples of amino acid derivatives are shown below together with their abbreviations. Abbreviation (3 letters) Name (Structure) Amf p-aminomethylphenylalanine Dtc 5,5-dimethylthiazolidine-4-carboxylic acid (N-Me) Arg N-methylarginine

【００２７】式（１）中の側鎖に窒素原子を有するアミ
ノ酸残基としては、例えば塩基性アミノ酸残基等が挙げ
られ、具体的には、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ａｍｆ等のアミノ
基を持つアミノ酸またはＨｉｓ等が挙げられる。Examples of the amino acid residue having a nitrogen atom in the side chain in the formula (1) include basic amino acid residues and the like. Specifically, amino acids having an amino group such as Lys, Orn and Amf. Or His or the like can be mentioned.

【００２８】低級アルキル基としては、直鎖または分枝
鎖の炭素数１〜６のアルキル基等が挙げられ、例えば、
メチル、エチル、プロピル、１−メチルエチル、ブチ
ル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルエチル、ペ
ンチル、２，２−ジメチルプロピル、ヘキシル等が挙げ
られる。Examples of the lower alkyl group include linear or branched alkyl groups having 1 to 6 carbon atoms and the like.
Methyl, ethyl, propyl, 1-methylethyl, butyl, 2-methylpropyl, 1,1-dimethylethyl, pentyl, 2,2-dimethylpropyl, hexyl and the like can be mentioned.

【００２９】修飾基としては、例えば生体内での代謝を
抑えるもの、または臓器移行性を上げるためのものが挙
げられ、アミノ基に結合する修飾基、カルボキシル基に
結合する修飾基等が挙げられる。アミノ基に結合する修
飾基としては、具体的には、特願平3-355319号公報、特
開平4-217693号公報に記載のExamples of the modifying group include those that suppress metabolism in the living body and those that enhance the systemic transfer into organs, and examples include a modifying group that binds to an amino group and a modifying group that binds to a carboxyl group. . The modifying group bonded to the amino group is specifically described in Japanese Patent Application No. 3-355319 and Japanese Patent Application Laid-Open No. 4-217693.

【００３０】[0030]

【化１７】 [Chemical 17]

【００３１】〔式中、ｐおよびｑは、同一あるいは異な
って１〜２５０の整数を表す。〕で表されるポリエチレ
ングリコール含有修飾基、特開平4-208295号公報、特開
平4-221394号公報、特開平4-221395号公報に記載の直鎖
または分岐鎖の炭素数８〜２４のアルカノイル基、特開
平4-208296号公報記載の[In the formula, p and q are the same or different and each represents an integer of 1 to 250. ] A polyethylene glycol-containing modifying group represented by the formula: straight chain or branched chain alkanoyl having 8 to 24 carbon atoms described in JP-A-4-208295, JP-A-4-221394, and JP-A-4-221395. Group, described in JP-A-4-208296

【００３２】[0032]

【化１８】 [Chemical 18]

【００３３】〔式中、Ｒ¹¹およびＲ¹²は同一あるいは異
なって水素原子または直鎖もしくは分岐鎖の炭素数８〜
２４のアルカノイル基もしくはアルキル基を表し、ｔは
１〜５の整数を表す。〕で表されるアシル基等が挙げら
れる。カルボキシル基に結合する修飾基としては、具体
的にはBiochem. Biophys. Res. Commun., 174, 1159(19
91) 記載の[In the formula, R ¹¹ and R ¹² are the same or different and each is a hydrogen atom or a linear or branched carbon number of 8 to
24 represents an alkanoyl group or an alkyl group, and t represents an integer of 1 to 5. ] The acyl group etc. which are represented by these are mentioned. Specific examples of the modifying group bonded to the carboxyl group include Biochem. Biophys. Res. Commun., 174, 1159 (19
91) described

【００３４】[0034]

【化１９】 [Chemical 19]

【００３５】〔式中、ｕは１〜１５０の整数を表す。〕
で表されるモノアミノポリエチレングリコール修飾基、
ジアミノポリエチレングリコール修飾基、特開平4-2213
94号公報、特開平4-221395号公報に記載の直鎖もしくは
分岐鎖の炭素数８〜２４のアルキルアミノ基またはアル
コキシ基、特開平4-99795 号公報記載の[In the formula, u represents an integer of 1 to 150. ]
A monoamino polyethylene glycol modifying group represented by
Diamino polyethylene glycol modifying group, JP-A-4-2213
No. 94, JP-A-4-221395, and a straight-chain or branched-chain alkylamino group having 8 to 24 carbon atoms or an alkoxy group, JP-A-4-99795.

【００３６】[0036]

【化２０】 [Chemical 20]

【００３７】〔式中、Ｒ¹¹およびＲ¹²は前記と同義であ
る。〕で表されるリン酸エステルを含むアミノ基等が挙
げられる。１分子のペプチド誘導体は１つまたは複数の
修飾基で修飾されてもよいし、また１つの修飾基が複数
のペプチド誘導体を修飾してもよい。[In the formula, R ¹¹ and R ¹² are as defined above. ] An amino group including a phosphate ester represented by One molecule of peptide derivative may be modified with one or more modifying groups, or one modifying group may modify more than one peptide derivative.

【００３８】アルキレンとしては、直鎖または分枝鎖の
炭素数１〜１０のアルキレンが挙げられ、例えばメチレ
ン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ヘキサ
メチレン、２−メチルペンタメチレン、オクタメチレ
ン、デカメチレン等が挙げられる。アシル基としては、
例えば、アルカノイル基、アロイル基等が挙げられる。
アルカノイル基としては、直鎖または分枝鎖の炭素数１
〜６のアルカノイル基が挙げられ、例えば、ホルミル、
アセチル、プロパノイル、ブタノイル、２−メチルプロ
パノイル、ペンタノイル、ピバロイル、ヘキサノイル等
が挙げられる。アロイル基としては、炭素数７〜１１の
アロイル基が挙げられ、例えばベンゾイル、ナフトイル
等が挙げられる。Examples of the alkylene include linear or branched alkylene having 1 to 10 carbon atoms, such as methylene, ethylene, trimethylene, tetramethylene, hexamethylene, 2-methylpentamethylene, octamethylene, decamethylene and the like. Can be mentioned. As an acyl group,
For example, an alkanoyl group, an aroyl group, etc. are mentioned.
The alkanoyl group has a straight or branched chain carbon number of 1
~ 6 alkanoyl groups, such as formyl,
Acetyl, propanoyl, butanoyl, 2-methylpropanoyl, pentanoyl, pivaloyl, hexanoyl and the like can be mentioned. Examples of the aroyl group include aroyl groups having 7 to 11 carbon atoms, such as benzoyl and naphthoyl.

【００３９】式（２）中のＡ² の具体例としては、−Ｎ
Ｈ−Ａ² −と表現した場合に、Ｐｈｇ、Ｔｈｒ、Ｓｅ
ｒ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｐｒｏ
−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−
Ｔｈｒ、Ｔｒｐ−Ｐｒｏ等となる基が挙げられる。式
（２）中のｎの具体例としては、１、２等が挙げられ
る。式（３）中のＡ⁴ の具体例としては、単結合、Ａｓ
ｎ−Ｄｔｃ、Ａｓｎ−Ｐｒｏ等が挙げられる。式（４）
中のＡ⁶ の具体例としては、単結合等が挙げられる。式
（４）中のＲ⁷ およびＲ⁸ の具体例としては、共にフェ
ニレンの場合等が挙げられる。式（５）中のＡ⁷ の具体
例としては、Ｄ−Ｐｒｏ、Ｄ−Ｔｈｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ
−Ａｌａ、Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｄｔ
ｃ等が挙げられる。式（５）中のＹの具体例としては、
メチレン、ＳＯ等が挙げられる。式（６）中のＡ⁸ の具
体例としては、Ｔｈｒ等が挙げられる。式（６）中のｒ
の具体例としては、１〜１１等が挙げられる。Specific examples of A ² in the formula (2) include --N
H-A ² - in the case of the representation, Phg, Thr, Se
r, Trp, Phe, Val, Gly, Ser-Pro
-Ala-Gly, Thr-Arg-Gly-Asp-
Examples thereof include groups such as Thr and Trp-Pro. Specific examples of n in the formula (2) include 1, 2 and the like. Specific examples of A ⁴ in the formula (3) include a single bond and As.
Examples include n-Dtc and Asn-Pro. Formula (4)
Specific examples of A ⁶ include a single bond and the like. Specific examples of R ⁷ and R ⁸ in the formula (4) include the case of phenylene. Specific examples of A ⁷ in formula (5) include D-Pro, D-Thr, D-Tyr, and D.
-Ala, D-Lys, D-Val, D-His, Dt
c etc. are mentioned. As a specific example of Y in the formula (5),
Examples thereof include methylene and SO. Specific examples of A ⁸ in the formula (6) include Thr and the like. R in formula (6)
Specific examples include 1 to 11 and the like.

【００４０】式（１）を含有するペプチド誘導体は、側
鎖が遊離あるいはベンジルエステル等で保護されたアス
パラギン酸を含有するペプチド誘導体から１段階で直接
誘導することができる。側鎖が遊離あるいはベンジルエ
ステル等で保護されたアスパラギン酸を含有するペプチ
ド誘導体は、化学的合成法および遺伝子工学的手法を用
いた合成法のいずれの方法にても合成することができ
る。The peptide derivative containing formula (1) can be directly derived in one step from a peptide derivative containing aspartic acid whose side chain is free or protected with benzyl ester or the like. The peptide derivative containing aspartic acid whose side chain is free or protected with benzyl ester or the like can be synthesized by either a chemical synthesis method or a synthetic method using a genetic engineering method.

【００４１】化学的合成法においては、液相法、固相法
が知られているが、いずれの方法にても合成可能であ
る。また、目的とする１次配列をＮ末端またはＣ末端よ
り順次構築するステップワイズ延長法、目的とする１次
配列を適当なフラグメントに分け、それらフラグメント
を縮合させて目的物を構築するフラグメント縮合法が知
られているが、いずれの方法またはそれらを組み合わせ
ることにより、合成することができる。また、必要に応
じては、官能基（アミノ基、カルボキシル基、グアニジ
ノ基、水酸基等）を保護してもよい。縮合法、活性化
法、保護基及び反応条件等については、「ペプチド合成
の基礎と実験」（丸善株式会社、1985年）、「生化学実
験講座・第一巻 蛋白質の化学IV」（東京化学同人、19
76年）などに記載の通常のペプチド合成に用いられる方
法、保護基、反応条件を用いて合成することができる。
たとえば、液相法で遊離あるいはベンジルエステル等で
保護されたアスパラギン酸を含有するペプチド誘導体を
合成する場合には、保護されているか、あるいは保護さ
れていない２個のアミノ酸またはアミノ酸とペプチドま
たはペプチドとペプチドの縮合を、不活性溶媒中（アセ
トニトリル、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン
等）、アジド法、混合酸無水物法、ジシクロヘキシルカ
ルボジイミド法、１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）カルボジイミド法、ベンゾトリアゾリル−
Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキ
サフルオロリン化物塩法、活性エステル法（Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステル法、ｐ−ニトロフェニルエ
ステル法等）、ウッドワード試薬Ｋ法、カルボニルイミ
ダゾール法のような通常の縮合法で、−２０℃ないし室
温にて、１ないし２４時間行うことを繰り返すことによ
り実施できる。As the chemical synthesis method, a liquid phase method and a solid phase method are known, but the synthesis can be carried out by any method. In addition, a stepwise extension method in which the desired primary sequence is sequentially constructed from the N-terminus or the C-terminus, and a fragment condensation method in which the desired primary sequence is divided into appropriate fragments and the fragments are condensed to construct the desired product. Are known, but they can be synthesized by any method or a combination thereof. Moreover, you may protect a functional group (an amino group, a carboxyl group, a guanidino group, a hydroxyl group, etc.) as needed. Condensation method, activation method, protecting groups, reaction conditions, etc. are described in “Basics and Experiments of Peptide Synthesis” (Maruzen Co., Ltd., 1985), “Biochemistry Experiment Course, Volume 1, Protein Chemistry IV” (Tokyo Kagaku). Doujin, 19
1976) and the like, which are used for ordinary peptide synthesis, protecting groups, and reaction conditions.
For example, in the case of synthesizing a peptide derivative containing aspartic acid free or protected with benzyl ester or the like by a liquid phase method, two amino acids or two amino acids protected or unprotected and a peptide or peptide Peptide condensation is carried out in an inert solvent (acetonitrile, dimethylformamide, dichloromethane, etc.), azide method, mixed acid anhydride method, dicyclohexylcarbodiimide method, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide method, benzotria. Zolyl-
Ordinary condensation methods such as N-hydroxytrisdimethylaminophosphonium hexafluorophosphide salt method, active ester method (N-hydroxysuccinimide ester method, p-nitrophenyl ester method, etc.), Woodward reagent K method, carbonyl imidazole method Then, it can be carried out by repeating the operation at −20 ° C. to room temperature for 1 to 24 hours.

【００４２】また、固相法で遊離あるいはベンジルエス
テル等で保護されたアスパラギン酸を含有するペプチド
誘導体を構築する場合には、目的とするペプチドのＣ末
端アミノ酸に於いて不活性担体に結合する。不活性担体
としては、Ｃ末端アミノ酸のカルボキシル基と反応させ
て後に容易に切断される結合を形成するものであり、例
えば、クロロメチル樹脂及びブロモメチル樹脂のような
ハロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、アミノメチル
樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、ｔ−アルキルオキシ
カルボニルヒドラジン樹脂及びｐ−ヒドロキシメチルフ
ェニルアセチルアミドメチル樹脂である。これらの不活
性担体に結合させたアミノ酸またはペプチドは、例えば
室温でジクロロメタン中、トリフルオロ酢酸を用いるこ
とによってα−アミノ保護基を除去した後、配列の次の
アミノ酸の適宜側鎖が保護されたアミノ保護誘導体をジ
シクロヘキシルカルボジイミド等の縮合剤とともに加
え、１ないし２４時間反応させる。次いで残りのα−ア
ミノ酸を所望の順序に段階的縮合によって結合して、樹
脂に結合した遊離あるいはベンジルエステル等で保護さ
れたアスパラギン酸を含有するペプチド誘導体を構築で
きる。When a peptide derivative containing aspartic acid free or protected with benzyl ester or the like is constructed by the solid phase method, the C-terminal amino acid of the desired peptide is bound to an inert carrier. The inert carrier is one that reacts with the carboxyl group of the C-terminal amino acid to form a bond that is easily cleaved later, and examples thereof include halomethyl resins such as chloromethyl resin and bromomethyl resin, hydroxymethyl resin, aminomethyl resin. Resins, benzhydrylamine resins, t-alkyloxycarbonylhydrazine resins and p-hydroxymethylphenylacetylamidomethyl resins. Amino acids or peptides bound to these inert carriers were protected at the appropriate side chain of the next amino acid in the sequence after removal of the α-amino protecting group, for example by using trifluoroacetic acid in dichloromethane at room temperature. The amino protected derivative is added along with a condensing agent such as dicyclohexylcarbodiimide and allowed to react for 1 to 24 hours. The remaining α-amino acids can then be combined in a desired sequence by stepwise condensation to construct a peptide derivative containing resin-bound free or aspartic acid protected with a benzyl ester or the like.

【００４３】また、上記の液相法、固相法によるペプチ
ド鎖の構築と同様の手法で、アミノ酸のかわりにＮ−ア
ルキルアミノ酸などのアミノ酸誘導体を導入することも
できる。更に、ペプチド鎖を構築する際のＣ末端とし
て、アミノ酸のかわりに２−メルカプトアニリンなどの
ようなカルボキシル基を持たない化合物を導入すること
や、Ｎ末端として２−メルカプト安息香酸のようなアミ
ノ基を持たない化合物を導入することは、通常のペプチ
ド鎖構築法と同様の手法で行うことができる。In addition, an amino acid derivative such as an N-alkylamino acid can be introduced instead of the amino acid by the same method as the construction of the peptide chain by the liquid phase method or the solid phase method described above. Furthermore, as a C-terminal when constructing a peptide chain, a compound having no carboxyl group such as 2-mercaptoaniline instead of an amino acid is introduced, and an amino group such as 2-mercaptobenzoic acid is used as an N-terminal. The introduction of a compound having no can be performed by a method similar to the usual peptide chain construction method.

【００４４】上記の化学合成法において、アミノ基を保
護するのに使用し得る保護基は、例えば、ベンジルオキ
シカルボニル、イソニコチルオキシカルボニル、ｐ−メ
トキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジル
オキシカルボニル、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニ
ル、ｔ−ブトキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボ
ニル、イソボルニルオキシカルボニル、アダマンチルオ
キシカルボニル、２−（４−ビフェニル）−２−プロピ
ルオキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボ
ニル、メチルスルホニルエトキシカルボニル、トリフル
オロアセチル、フタリル、ホルミル、２−ニトロフェニ
ルスルフェニル、ジメチルホスフィノチオニル、ジメチ
ルホスフィノチオイル等が挙げられる。カルボキシル基
の保護基は、例えば、ベンジルエステル、シクロヘキシ
ルエステル、４−ニトロベンジルエステル、ｔ−ブチル
エステル、フェナシルエステル、４−ピリジルメチルエ
ステル等が挙げられる。In the above-mentioned chemical synthesis method, the protecting group which can be used for protecting the amino group is, for example, benzyloxycarbonyl, isonicotyloxycarbonyl, p-methoxybenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl, o-chlorobenzyloxycarbonyl, t-butoxycarbonyl, t-amyloxycarbonyl, isobornyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, 2- (4-biphenyl) -2-propyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethoxycarbonyl, Examples thereof include methylsulfonylethoxycarbonyl, trifluoroacetyl, phthalyl, formyl, 2-nitrophenylsulfenyl, dimethylphosphinothionyl and dimethylphosphinothioil. Examples of the protective group for the carboxyl group include benzyl ester, cyclohexyl ester, 4-nitrobenzyl ester, t-butyl ester, phenacyl ester, 4-pyridylmethyl ester and the like.

【００４５】アミノ基及びカルボキシル基以外の官能基
を有する特定のアミノ酸、例えば、アルギニン、スレオ
ニン、セリン、チロシン、システイン、トリプトファ
ン、ヒスチジン、ペニシラミンなどは必要な場合に応じ
て適当な保護基で保護することが望ましい。例えばアル
ギニンのグアニジノ基はニトロ、ｐ−トルエンスルホニ
ル、ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカ
ルボニル、ｐ−メトキシベンゼンスルホニル、４−メト
キシ−２，６−ジメチルベンゼンスルホニル、１，３，
５−トリメチルフェニルスルホニル等で保護することが
できる。スレオニン、セリン、チロシンのヒドロキシル
基はベンジル、ｔ−ブチル、アセチル、テトラヒドロピ
ラニル等で保護することができる。システイン、ペニシ
ラミンなどのメルカプト基は、ベンジル、ｐ−メトキシ
ベンジル、トリチル、ベンズヒドリル、アセタミドメチ
ル、カルボメトキシスルフェニル、ｔ−ブチル、３−ニ
トロ−２−ピリジンスルフェニル、９−フルオレニルメ
チル等で保護することができる。トリプトファンのイン
ドリル基はホルミル、ベンジルオキシカルボニル、トリ
クロロエトキシカルボニル、４−メトキシ−２，３，６
−トリメチルベンゼンスルホニル等で保護することがで
きる。ヒスチジンのイミダゾリル基はｐ−トルエンスル
ホニル、ベンジルオキシカルボニルベンジル、フェナシ
ル、ベンジルオキシメチル、トリチル等で保護すること
ができる。A specific amino acid having a functional group other than an amino group and a carboxyl group, for example, arginine, threonine, serine, tyrosine, cysteine, tryptophan, histidine, penicillamine and the like is protected with a suitable protecting group as necessary. Is desirable. For example, the guanidino group of arginine is nitro, p-toluenesulfonyl, benzyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, p-methoxybenzenesulfonyl, 4-methoxy-2,6-dimethylbenzenesulfonyl, 1,3,3.
It can be protected with 5-trimethylphenylsulfonyl or the like. The hydroxyl groups of threonine, serine and tyrosine can be protected with benzyl, t-butyl, acetyl, tetrahydropyranyl and the like. Mercapto groups such as cysteine and penicillamine are protected with benzyl, p-methoxybenzyl, trityl, benzhydryl, acetamide methyl, carbomethoxysulfenyl, t-butyl, 3-nitro-2-pyridinesulfenyl, 9-fluorenylmethyl, etc. can do. The indolyl group of tryptophan includes formyl, benzyloxycarbonyl, trichloroethoxycarbonyl, 4-methoxy-2,3,6.
-It can be protected with trimethylbenzenesulfonyl or the like. The imidazolyl group of histidine can be protected with p-toluenesulfonyl, benzyloxycarbonylbenzyl, phenacyl, benzyloxymethyl, trityl and the like.

【００４６】所望のアミノ酸配列を有するペプチドを液
相法あるいは固相法で構築した後、樹脂からペプチドを
切断するばかりでなく側鎖から残りの保護基全てを切断
する液体フッ化水素のような試薬で処理することによっ
て、遊離のアスパラギン酸を含有するペプチド誘導体を
合成することができる。例えば液体フッ化水素を用いる
場合、保護ペプチドあるいは樹脂に共有結合した保護ペ
プチド、１ｇに対して５〜１５０mlの液体フッ化水素を
用いて溶解し、−３０℃ないし室温で１〜５時間反応さ
せる。このようにして得られるペプチドは必要に応じて
は、逆相ＨＰＬＣ、イオン交換クロマトグラフィー、ゲ
ル濾過クロマトグラフィーなどの通常のペプチドの精製
法に従って、精製しても良い。After constructing a peptide having a desired amino acid sequence by a liquid phase method or a solid phase method, it is possible to not only cleave the peptide from the resin but also to cleave all the remaining protecting groups from the side chain, such as liquid hydrogen fluoride. By treatment with a reagent, a peptide derivative containing free aspartic acid can be synthesized. For example, when liquid hydrogen fluoride is used, the protected peptide or the protected peptide covalently bonded to the resin is dissolved using 5 to 150 ml of liquid hydrogen fluoride per 1 g, and the mixture is reacted at -30 ° C to room temperature for 1 to 5 hours. . The peptide thus obtained may be purified, if necessary, according to a conventional peptide purification method such as reverse phase HPLC, ion exchange chromatography, or gel filtration chromatography.

【００４７】更に、ジスルフィド結合の形成は、いくつ
かの既知の方法（「ペプチド合成の基礎と実験」（丸善
株式会社、1985年）、“The Peptides：Methods of Pep
tideSynthesis，第１巻，アカデミックプレス．ニュー
ヨーク（1965年）271 〜286頁）、例えば酢酸中、ヨウ
素を用いてペプチド鎖中に組み込まれたＣｙｓ、Ｐｅ
ｎ、２−メルカプトアニリン又は２−メルカプト安息香
酸などの２つのメルカプト基間のジスルフィド架橋を形
成するか、あるいは希酢酸アンモニウム緩衝液中pH８で
空気酸化して形成することができる。また、式（５）で
示されるような環状ペプチド構造の構築はP. L. Baker
らの方法（WO91/1331 、J. Med. Chem., 35, 2040(199
2).) で実施できる。式（５）のＹがＳまたはＯ原子の
ときは、環化させる前のペプチド鎖のＮ末端に、通常の
ペプチド縮合の条件でα−ブロモ酢酸又はα−ヨード酢
酸を導入したのち、ペプチド鎖のＣ末端側にあるメルカ
プト基又はヒドロキシル基を選択的に遊離させ、ジメチ
ルホルムアミド溶媒中、Ｎ−メチルモルホリンなどの塩
基を存在させることによって目的とする環状ペプチド構
造の構築を行うことができる。また、式（５）のＹがＣ
Ｈ₂ またはＮＨのときは、通常のペプチド形成反応を適
用することでアミド結合を有する環状構造を構築するこ
とができる。Furthermore, the formation of disulfide bonds can be achieved by several known methods (“Basics and Experiments of Peptide Synthesis” (Maruzen Co., Ltd., 1985)), “The Peptides: Methods of Pep”.
tideSynthesis, Volume 1, Academic Press. New York (1965) 271-286), eg Cys, Pe incorporated in peptide chains using iodine in acetic acid.
It can be formed by forming a disulfide bridge between two mercapto groups such as n, 2-mercaptoaniline or 2-mercaptobenzoic acid or by air oxidation at pH 8 in dilute ammonium acetate buffer. Moreover, the construction of the cyclic peptide structure represented by the formula (5) is performed by PL Baker.
Et al. (WO91 / 1331, J. Med. Chem., 35, 2040 (199
2).) Can be implemented. When Y in formula (5) is an S or O atom, α-bromoacetic acid or α-iodoacetic acid is introduced into the N-terminal of the peptide chain before cyclization under ordinary peptide condensation conditions, and then the peptide chain The target cyclic peptide structure can be constructed by selectively releasing the mercapto group or the hydroxyl group on the C-terminal side of and the presence of a base such as N-methylmorpholine in a dimethylformamide solvent. Also, in the equation (5), Y is C
In the case of H ₂ or NH, a cyclic structure having an amide bond can be constructed by applying an ordinary peptide formation reaction.

【００４８】また、本発明で用いるアミノ酸誘導体のう
ちＡｍｆは特開平3-206097号公報記載の方法に従って調
製でき、Ｎ−アルキルアルギニンおよびＮ−アルキルリ
ジン等は、J. Samanenらの方法（J. Med. Chem., 34, 3
114(1991).) に従って調製でき、５，５−ジメチルチア
ゾリジン−４−カルボン酸はE. Busker らの方法（J.Ch
romatogr., 350, 179(1985).)やJ. Martensらの方法（A
rch. Pharm., 319, 461(1986)) に従って調製すること
ができる。Among the amino acid derivatives used in the present invention, Amf can be prepared according to the method described in JP-A-3-206097, and N-alkylarginine and N-alkyllysine can be prepared by the method of J. Samanen et al. Med. Chem., 34, 3
114 (1991).), 5,5-dimethylthiazolidine-4-carboxylic acid can be prepared according to the method of E. Busker et al. (J. Ch.
romatogr., 350, 179 (1985).) and J. Martens et al.
rch. Pharm. , 319, 461 (1986)).

【００４９】以上の様にして合成された遊離あるいはベ
ンジルエステル等で保護されたアスパラギン酸を含有す
るペプチド誘導体は、イミド形成を促進することが知ら
れている条件下、即ち、フッ化水素やメタンスルホン
酸、トリフルオロ酢酸等の酸性条件下、あるいは、アル
カリけん化等の塩基性条件下で式（１）を含有するペプ
チド誘導体に誘導することができる（「ペプチド合成の
基礎と実験」７１〜７２頁（丸善株式会社、1985年）、
Fujino, M.ら、Chem. Pham. Bull., 29, 2825(1981))。
更に必要に応じては、逆相ＨＰＬＣ、イオン交換クロマ
トグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーなどの通常
のペプチドの精製法に従って、精製しても良い。The peptide derivative containing aspartic acid, which is synthesized as described above and contains free or benzyl ester-protected aspartic acid, has a condition known to promote imide formation, that is, hydrogen fluoride or methane. It can be induced into a peptide derivative containing the formula (1) under acidic conditions such as sulfonic acid and trifluoroacetic acid, or under basic conditions such as alkali saponification (“Basics and Experiments of Peptide Synthesis” 71-72). Page (Maruzen Co., Ltd., 1985),
Fujino, M. et al., Chem. Pham. Bull., 29, 2825 (1981)).
Further, if necessary, it may be purified by a conventional peptide purification method such as reverse phase HPLC, ion exchange chromatography, gel filtration chromatography and the like.

【００５０】また、式（１）を含有するペプチド誘導体
は、アミノ基に結合する修飾基、カルボキシル基に結合
する修飾基等で修飾することができる。式（１）を含有
するペプチド誘導体をアミノ基に結合する修飾基で修飾
する場合、修飾剤が対応する塩化物であればそのまま
で、修飾剤が対応するカルボン酸であれば例えばペプチ
ド合成の基礎と実験（泉屋ら、丸善株式会社、1985年）
に記載されているカルボキシル基の活性化方法によって
活性化した後に、式（１）を含有するペプチド誘導体を
縮合することが実施できる。本縮合反応においては、当
該式（１）を含有するペプチド誘導体が失活しない温
度、pHであればいずれでもよく、例えば、温度について
は０〜２５℃の範囲が好ましく、pHについては６〜９の
範囲が好ましい。反応に用いる溶媒は、反応を妨害しな
いものであればいずれでもよく、例えばリン酸緩衝液、
ホウ酸緩衝液、炭酸ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリ
ウム水溶液、Ｎ−エチルモルホリン−酢酸緩衝液、マレ
イン酸ナトリウム緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液等の緩
衝液が挙げられる。また、当該式（１）を含有するペプ
チド誘導体を失活させず、かつ反応に不活性な有機溶
媒、例えばメタノール、エタノール、プロパノール等の
低級アルコールやアセトニトリル、ジオキサン、テトラ
ヒドロフラン等を添加してもよい。反応時間は１〜７２
時間で充分である。反応終了後に、反応液を塩析やゲル
濾過、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグ
ラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、限外濾
過、逆相ＨＰＬＣなどの通常の蛋白質の精製法で精製し
て式（１）を含有し、修飾基で修飾されたペプチド誘導
体を得ることができる。式（１）を含有するペプチド誘
導体を、カルボキシル基に結合する修飾基で修飾する場
合は、アミノ基に結合する修飾基で修飾する場合と同様
にして実施できる。なお、イミド形成の後に修飾基で修
飾するのではなく、修飾基で修飾した後にイミド形成す
ることもできる。The peptide derivative containing the formula (1) can be modified with a modifying group that bonds to an amino group, a modifying group that bonds to a carboxyl group, and the like. When the peptide derivative containing the formula (1) is modified with a modifying group that binds to an amino group, if the modifying agent is the corresponding chloride, it is unchanged, and if the modifying agent is the corresponding carboxylic acid, for example, the basis of peptide synthesis. And experiment (Izumiya et al., Maruzen Co., Ltd., 1985)
Condensation of the peptide derivative containing formula (1) can be carried out after activation by the method of activation of the carboxyl groups described in. In this condensation reaction, any temperature and pH may be used as long as the peptide derivative containing the formula (1) is not deactivated, and for example, the temperature is preferably in the range of 0 to 25 ° C., and the pH is in the range of 6 to 9 Is preferred. The solvent used in the reaction may be any as long as it does not interfere with the reaction, for example, phosphate buffer,
Examples thereof include borate buffer solutions, sodium carbonate aqueous solutions, sodium hydrogen carbonate aqueous solutions, N-ethylmorpholine-acetic acid buffer solutions, sodium maleate buffer solutions, and sodium acetate buffer solutions. Further, an organic solvent which does not inactivate the peptide derivative containing the formula (1) and is inert to the reaction, for example, a lower alcohol such as methanol, ethanol or propanol, acetonitrile, dioxane or tetrahydrofuran may be added. . Reaction time is 1 to 72
Time is enough. After completion of the reaction, the reaction solution is purified by a conventional protein purification method such as salting out, gel filtration, ion exchange chromatography, adsorption chromatography, affinity chromatography, ultrafiltration, and reverse phase HPLC to give formula (1). A peptide derivative containing and modified with a modifying group can be obtained. When the peptide derivative containing the formula (1) is modified with a modifying group that binds to a carboxyl group, it can be performed in the same manner as when it is modified with a modifying group that binds to an amino group. It should be noted that instead of modifying with a modifying group after imide formation, it is also possible to modify with a modifying group and then form imide.

【００５１】また、本発明の化合物は医薬品として用い
るために、薬学的に許容さる塩、例えば塩酸塩、硫酸塩
等の無機酸との塩や、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳
酸塩、酒石酸塩等の有機酸との塩にしてもよく、そのよ
うな塩への変換は、慣用手段で行うことができる。以上
のようにして合成された式（１）を含有し、修飾基で修
飾されてもよいペプチド誘導体は、細胞接着活性蛋白質
が有する細胞結合部位のコア配列部分であるＲＧＤ配列
を持たない新規な細胞接着活性ペプチド誘導体である。
本発明のペプチド誘導体は、ＲＧＤ配列を有する細胞接
着活性ペプチドと同様の機序で細胞に接着すると考えら
れる。そのために細胞接着活性蛋白質のアゴニストまた
はアンタゴニストとして、種々の生物活性例えば癌転移
抑制作用などの生物活性および強力な血小板凝集抑制作
用を有する。In order to use the compound of the present invention as a medicine, a pharmaceutically acceptable salt, for example, a salt with an inorganic acid such as hydrochloride or sulfate, or an acetate, trifluoroacetate, lactate or tartaric acid. A salt with an organic acid such as a salt may be used, and the conversion into such a salt can be carried out by a conventional means. The peptide derivative containing the formula (1) synthesized as described above, which may be modified with a modifying group, is a novel peptide derivative having no RGD sequence which is the core sequence part of the cell-binding site of the cell adhesion activity protein. Cell adhesion active peptide derivative.
It is considered that the peptide derivative of the present invention adheres to cells by a mechanism similar to that of the cell adhesion active peptide having an RGD sequence. Therefore, as an agonist or antagonist of a cell adhesion activity protein, it has various biological activities such as a cancer metastasis suppressing activity and a strong platelet aggregation suppressing effect.

【００５２】従って本発明の新規な細胞接着活性ペプチ
ド誘導体は、医薬品、動物薬として極めて有効である。
本発明のペプチド誘導体は、通常それ自体公知の担体、
希釈剤などを用い、適宜の医薬品組成物よりなる製剤
（例えば、カプセル剤、注射剤など）として経口的また
は非経口的に哺乳動物（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒ
ツジ、ヒトなど）に投与される。癌転移抑制剤または、
血小板凝集抑制剤として投与する場合には、本発明のペ
プチドは、 0.2μｇ／kg〜10mg/kg の範囲で、症状、年
齢、体重等に基づいて決定され、１日１回から数回に分
けて投与することができる。Therefore, the novel cell-adhesive active peptide derivative of the present invention is extremely effective as a pharmaceutical or veterinary drug.
The peptide derivative of the present invention is usually a carrier known per se,
Orally or parenterally administered to mammals (eg, bovine, equine, porcine, ovine, human, etc.) in the form of an appropriate pharmaceutical composition (eg, capsule, injection, etc.) using a diluent or the like. To be done. Cancer metastasis inhibitor, or
When administered as a platelet aggregation inhibitor, the peptide of the present invention is determined in the range of 0.2 μg / kg to 10 mg / kg based on symptoms, age, body weight, etc. and is divided into 1 to several times a day. Can be administered.

【００５３】以下に、本発明の新規な細胞接着活性ペプ
チド誘導体の代表例を例示する。Representative examples of the novel cell adhesion active peptide derivative of the present invention will be illustrated below.

【化２１】 [Chemical 21]

【００５４】[0054]

【化２２】 [Chemical formula 22]

【００５５】[0055]

【化２３】 [Chemical formula 23]

【００５６】[0056]

【化２４】 [Chemical formula 24]

【００５７】[0057]

【化２５】 [Chemical 25]

【００５８】[0058]

【実施例】以下の実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明はこれらによって制限されるものでは
ない。なお、以下の実施例において、ペプチドのアミノ
酸分析値とは、これらペプチドの酸分解物（６Ｎ塩酸−
フェノール、１１０℃、２４時間処理後の分解物）中の
アミノ酸分析値を表し、略号Ａｓｘはアスパラギン酸ま
たはアスパラギンを表す。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereto. In addition, in the following examples, the amino acid analysis value of peptides means an acid decomposition product of these peptides (6N hydrochloric acid-
Amino acid analysis value in phenol, decomposition product after treatment at 110 ° C. for 24 hours), and the abbreviation Asx represents aspartic acid or asparagine.

【００５９】実施例１ 化合物７Example 1 Compound 7

【化２６】 および化合物８[Chemical formula 26] And compound 8

【化２７】 の調製[Chemical 27] Preparation of

【００６０】[0060]

【化２８】 [Chemical 28]

【００６１】化合物１１ ３００mg（0.31mmol）をメタ
ンスルホン酸１０mlに溶解し、室温で３時間攪拌した。
反応液をエーテル４００ml中に滴下し、氷冷下で３０分
攪拌した。沈澱物を濾取し、得られた固体を、水１００
mlに溶解して不溶物を濾去後、濾液を凍結乾燥し、表題
化合物の粗生成品２５３mgを得た。この粗生成品２５３
mgを逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ３０mmφ
×２５０mm，５μ；流速：７ml／min ；検出波長：２２
０ｎｍ；溶出液：（Ａ）水− 0.1％トリフルオロ酢酸
（Ｂ）アセトニトリル− 0.1％トリフルオロ酢酸；グラ
ジェント：（Ｂ）０％→（２４０分）６％）によって精
製して、表題の化合物７ 14.9mg、および表題の化合物
８ 3.8mg を得た。300 mg (0.31 mmol) of compound 11 was dissolved in 10 ml of methanesulfonic acid and stirred at room temperature for 3 hours.
The reaction mixture was added dropwise to 400 ml of ether and stirred under ice cooling for 30 minutes. The precipitate was filtered off and the solid obtained was washed with 100 ml of water.
After dissolving in ml and filtering off the insoluble material, the filtrate was freeze-dried to obtain 253 mg of the crude product of the title compound. This crude product 253
reverse phase HPLC (column: YMC-ODS 30 mmφ
× 250 mm, 5μ; Flow rate: 7 ml / min; Detection wavelength: 22
0 nm; eluent: (A) water-0.1% trifluoroacetic acid
(B) acetonitrile-0.1% trifluoroacetic acid; gradient: (B) 0% → (240 minutes) 6%) to give 14.9 mg of the title compound 7 and 3.8 mg of the title compound 8.

【００６２】化合物７ ＭＳ（ＳＩＭＳ）ｍ／ｅ ８４１（Ｍ＋Ｈ⁺ ） アミノ酸分析値：Ａｓｘ（1.98），Ｇｌｙ＊（2.00），
Ａｒｇ（1.95），Ｔｈｒ（1.79）〔Ｇｌｙ＊を基準とし
て算出〕 逆相ＨＰＬＣ カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ，５μ 4.6mmφ×２５０mm 溶出液：グラジェント Ａ液：水− 0.1％トリフルオロ酢酸 Ｂ液：アセトニトリル− 0.1％トリフルオロ酢酸 初期Ｂ液濃度：３％ 濃度勾配 ： 0.5％／分 流速 ：１ml／分 検出波長 ：２２０ｎｍ 保持時間 ： 12.60分Compound 7 MS (SIMS) m / e 841 (M + H ⁺ ) Amino acid analysis value: Asx (1.98), Gly * (2.00),
Arg (1.95), Thr (1.79) [calculated based on Gly *] Reversed phase HPLC column: YMC-ODS, 5μ 4.6 mmφ × 250 mm Eluent: gradient A solution: water-0.1% trifluoroacetic acid B solution: acetonitrile -0.1% trifluoroacetic acid Initial B solution concentration: 3% Concentration gradient: 0.5% / min Flow rate: 1 ml / min Detection wavelength: 220 nm Retention time: 12.60 min

【００６３】化合物８ ＭＳ（ＳＩＭＳ）ｍ／ｅ ８２３（Ｍ＋Ｈ⁺ ） アミノ酸分析値：Ａｓｘ（1.92），Ｇｌｙ＊（2.00），
Ａｒｇ（1.93），Ｔｈｒ（1.81）〔Ｇｌｙ＊を基準とし
て算出〕 逆相ＨＰＬＣ カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ，５μ 4.6mmφ×２５０mm 溶出液：グラジェント Ａ液：水− 0.1％トリフルオロ酢酸 Ｂ液：アセトニトリル− 0.1％トリフルオロ酢酸 初期Ｂ液濃度：３％ 濃度勾配 ： 0.5％／分 流速 ：１ml／分 検出波長 ：２２０ｎｍ 保持時間 ： 11.75分Compound 8 MS (SIMS) m / e 823 (M + H ⁺ ) Amino acid analysis value: Asx (1.92), Gly * (2.00),
Arg (1.93), Thr (1.81) [calculated on the basis of Gly *] Reversed phase HPLC column: YMC-ODS, 5 μ 4.6 mm φ × 250 mm Eluent: gradient A solution: water-0.1% trifluoroacetic acid B solution: acetonitrile -0.1% trifluoroacetic acid Initial solution B concentration: 3% Concentration gradient: 0.5% / min Flow rate: 1 ml / min Detection wavelength: 220 nm Retention time: 11.75 min

【００６４】実施例２ 化合物９Example 2 Compound 9

【化２９】 の調製[Chemical 29] Preparation of

【００６５】[0065]

【化３０】 [Chemical 30]

【００６６】化合物１２ ５００mg（0.71mmol）をメタ
ンスルホン酸２０mlに溶解し、室温で１８時間攪拌し
た。反応液をエーテル６００ml中に滴下し、氷冷下で３
０分攪拌した。沈澱物を濾取し、得られた固体を、水１
５０mlに溶解して不溶物を濾去後、濾液を凍結乾燥し、
表題化合物の粗生成品４１６mgを得た。この粗生成品４
１６mgを逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ３０
mmφ×２５０mm，５μ：流速：７ml／min ；検出波長：
２２０ｎｍ；溶出液：（Ａ）水− 0.1％トリフルオロ酢
酸 （Ｂ）アセトニトリル− 0.1％トリフルオロ酢酸；
グラジェント：（Ｂ）０％→（２４０分）３％）によっ
て精製して、表題の化合物９ 48.3mgを得た。 ＭＳ（ＳＩＭＳ）ｍ／ｅ ６２３（Ｍ＋Ｈ⁺ ） アミノ酸分析値：Ａｓｘ（0.95），Ｇｌｙ＊（2.00），
Ａｒｇ（0.96），Ｓｅｒ（0.91），Ｐｒｏ（0.99），Ａ
ｌａ（1.04）〔Ｇｌｙ＊を基準として算出〕 逆相ＨＰＬＣ カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ，５μ 4.6mmφ×２５０mm 溶出液：グラジェント Ａ液：水− 0.1％トリフルオロ酢酸 Ｂ液：アセトニトリル− 0.1％トリフルオロ酢酸 初期Ｂ液濃度：３％ 濃度勾配 ： 0.5％／分 流速 ：１ml／分 検出波長 ：２２０ｎｍ 保持時間 ：7.99分Compound 12 (500 mg, 0.71 mmol) was dissolved in methanesulfonic acid (20 ml), and the mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was added dropwise to 600 ml of ether, and the mixture was cooled with ice to 3 times.
Stir for 0 minutes. The precipitate was collected by filtration and the resulting solid was mixed with water 1
After dissolving in 50 ml and filtering off the insoluble matter, the filtrate is freeze-dried,
416 mg of crude product of the title compound was obtained. This crude product 4
Reversed-phase HPLC (column: YMC-ODS 30)
mmφ × 250 mm, 5μ: Flow rate: 7 ml / min; Detection wavelength:
220 nm; eluent: (A) water-0.1% trifluoroacetic acid (B) acetonitrile-0.1% trifluoroacetic acid;
Purification by gradient: (B) 0% → (240 min) 3%) gave 48.3 mg of the title compound 9. MS (SIMS) m / e 623 (M + H ⁺ ) Amino acid analysis value: Asx (0.95), Gly * (2.00),
Arg (0.96), Ser (0.91), Pro (0.99), A
la (1.04) [calculated based on Gly *] Reversed phase HPLC column: YMC-ODS, 5 μ 4.6 mm φ × 250 mm Eluent: gradient A solution: water-0.1% trifluoroacetic acid B solution: acetonitrile-0.1% trifluoro Acetic acid initial solution B concentration: 3% Concentration gradient: 0.5% / min Flow rate: 1 ml / min Detection wavelength: 220 nm Retention time: 7.99 min

【００６７】実施例３ 化合物１０Example 3 Compound 10

【化３１】 の調製[Chemical 31] Preparation of

【００６８】Ｈ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｏ
Ｈ２００mg（0.39mmol）をメタンスルホン酸５mlに溶解
し、室温で３時間攪拌した。反応液をエーテル３００ml
中に滴下し、氷冷下で３０分間攪拌した。沈澱物を濾取
し、得られた固定を水１００mlに溶解して不溶物を濾去
後、濾液を凍結乾燥し、表題化合物の粗生成品１６９mg
を得た。この粗生成品１６９mgを逆相ＨＰＬＣ（カラ
ム：ＹＭＣ−ＯＤＳ ３０mmφ×２５０mm，５μ；流
速：７ml／min ；検出波長：２２０ｎｍ；溶出液：
（Ａ）水− 0.1％トリフルオロ酢酸 （Ｂ）アセトニト
リル− 0.1％トリフルオロ酢酸；グラジェント：（Ｂ）
０％→（１２０分）０％→（６０分）３％）によって精
製して、表題の化合物１０ 21.9mgを得た。 ＭＳ（ＳＩＭＳ）ｍ／ｅ ４３０（Ｍ＋Ｈ⁺ ） アミノ酸分析値：Ａｓｘ（0.95），Ｇｌｙ＊（1.00），
Ａｒｇ（0.88），Ｔｈｒ（0.85）〔Ｇｌｙ＊を基準とし
て算出〕 逆相ＨＰＬＣ カラム：ＹＭＣ−ＯＤＳ，５μ 4.6mmφ×２５０mm 溶出液：グラジェント Ａ液：水− 0.1％トリフルオロ酢酸 Ｂ液：アセトニトリル− 0.1％トリフルオロ酢酸 初期Ｂ液濃度：３％ 濃度勾配 ： 0.5％／分 流速 ：１ml／分 検出波長 ：２２０ｎｍ 保持時間 ：5.62分H-Arg-Gly-Asp-Thr-O
200 mg (0.39 mmol) of H was dissolved in 5 ml of methanesulfonic acid and stirred at room temperature for 3 hours. The reaction mixture is 300 ml of ether
It was dripped in and stirred for 30 minutes under ice cooling. The precipitate was collected by filtration, the obtained immobilization was dissolved in 100 ml of water, the insoluble material was filtered off, and the filtrate was freeze-dried to give 169 mg of the crude product of the title compound.
Got 169 mg of this crude product was subjected to reverse phase HPLC (column: YMC-ODS 30 mmφ × 250 mm, 5 μ; flow rate: 7 ml / min; detection wavelength: 220 nm; eluent:
(A) water-0.1% trifluoroacetic acid (B) acetonitrile-0.1% trifluoroacetic acid; gradient: (B)
0% → (120 min) 0% → (60 min) 3%) to give the title compound 10 21.9 mg. MS (SIMS) m / e 430 (M + H ⁺ ) Amino acid analysis value: Asx (0.95), Gly * (1.00),
Arg (0.88), Thr (0.85) [calculated on the basis of Gly *] Reversed phase HPLC column: YMC-ODS, 5 μ 4.6 mm φ × 250 mm Eluent: Gradient A solution: water-0.1% trifluoroacetic acid B solution: acetonitrile -0.1% trifluoroacetic acid Initial solution B concentration: 3% Concentration gradient: 0.5% / min Flow rate: 1 ml / min Detection wavelength: 220 nm Retention time: 5.62 min

【００６９】実施例４Example 4

【化３２】 [Chemical 32]

【００７０】化合物１１（以下ｃｙｃｌｏ（Ａｒｇ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ）₂ と略すことがある）および、
そのスクシンイミド誘導体２種（化合物７、化合物８）
のヒト血小板凝集抑制作用。実施例１で新規に合成した
化合物７、化合物８および、すでに東らによって報告さ
れている方法で調製したｃｙｃｌｏ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−
Ａｓｐ−Ｔｈｒ）₂のヒト血小板凝集抑制活性について
以下の試験法で検討した。 １）多血小板血漿（ＰＲＰ）および乏血小板血漿（ＰＰ
Ｐ）の調製 健常人男性の肘静脈より、１／１０容の 3.8％クエン酸
ナトリウムを添加して採血、室温で遠心（1000rpm ，１
０分間）し、上清を採取して多血小板血漿（ＰＲＰ）を
得た。残った血液をさらに遠心（11,000rpm ，１５分
間）し、乏血小板血漿（ＰＰＰ）を得た。Compound 11 (hereinafter cyclo (Arg-G
ly-Asp-Thr) ₂ ) and,
Two succinimide derivatives (compound 7, compound 8)
Suppresses human platelet aggregation. Compound 7, compound 8 newly synthesized in Example 1 and cyclo (Arg-Gly-prepared by the method already reported by Azuma et al.
The human platelet aggregation inhibitory activity of Asp-Thr) ₂ was examined by the following test method. 1) Platelet rich plasma (PRP) and platelet poor plasma (PP
Preparation of P) Blood was collected from the cubital vein of a healthy male by adding 1/10 volume of 3.8% sodium citrate, and centrifuged at room temperature (1000 rpm, 1
After 0 minutes), the supernatant was collected to obtain platelet-rich plasma (PRP). The remaining blood was further centrifuged (11,000 rpm, 15 minutes) to obtain platelet poor plasma (PPP).

【００７１】２）血小板凝集能の測定 ＰＲＰ２００μｌを２分間３７℃でインキュベートした
後、被験薬２μｌを添加しさらに２分間３７℃でインキ
ュベートした。ついで１０−１００μｇ／mlのＡＤＰあ
るいはコラーゲン溶液を２２μｌ加えて、凝集の様子を
アグリゴメーターで光透過度を測定した。測定に際して
は、ＰＲＰの光透過度を０％、ＰＰＰの光透過度を１０
０％としてあらかじめ校正し、最大凝集率を光透過度の
％で表した。また、コントロールには生理食塩水を用
い、次式に従い抑制率（％）を求めた。 抑制率（％）＝（１−Ｔ／Ｔ₀ ）×１００ Ｔ₀ ：薬物処置時の最大凝集 Ｔ ：コントロールの最大凝集 その結果を、第１表に示す。これらの表から明らかなよ
うに、新規に合成した化合物７および化合物８は、ＡＤ
Ｐによるヒトの血小板凝集を強力に抑制することが示さ
れた。2) Measurement of platelet aggregation ability After incubating 200 μl of PRP for 2 minutes at 37 ° C., 2 μl of the test drug was added and further incubated for 2 minutes at 37 ° C. Then, 22 μl of 10-100 μg / ml ADP or collagen solution was added, and the state of aggregation was measured for light transmittance with an aggregometer. At the time of measurement, the light transmittance of PRP was 0% and the light transmittance of PPP was 10%.
It was calibrated in advance as 0%, and the maximum aggregation rate was expressed by% of light transmittance. In addition, physiological saline was used as a control, and the inhibition rate (%) was calculated according to the following formula. Inhibition rate (%) = (1−T / T ₀ ) × 100 T ₀ : maximum aggregation during drug treatment T: maximum aggregation of control The results are shown in Table 1. As is clear from these tables, the newly synthesized compounds 7 and 8 are
It was shown that P strongly inhibits human platelet aggregation.

【００７２】[0072]

【表１】 [Table 1]

【００７３】実施例５Example 5

【化３３】 [Chemical 33]

【００７４】化合物１２（以下ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ａ
ｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）と略
すことがある）、そのスクシンイミド誘導体（化合物
９）およびｃｙｃｌｏ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｔｈ
ｒ）₂ のスクシンイミド誘導体である化合物７、化合物
８の癌転移抑制作用。実施例１、２で新規に合成した化
合物７、化合物８、化合物９および特開平2-174797号公
報に記載されている方法で調製したｃｙｃｌｏ（Ｇｌｙ
−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）
の癌転移抑制活性について、済木らの方法（特開平2-17
4798号公報）に従い検討を行った。即ち、上記化合物の
癌転移抑制作用をマウスのＢ１６−ＢＬ６メラノーマ細
胞で検討した。まず、これらの化合物を各々５００μｇ
と非常に転移性の強い癌細胞としてＢ１６−ＢＬ６メラ
ノーマ細胞（２４時間対数増殖期にあるもの，３×１０
⁴ 個）を各々ＰＢＳ中で混合後、その 0.2mlを一群５匹
のＣ５７ＢＬ／６の雄マウスに静脈注射した。投与１４
日後にマウスの肺の癌コロニー数を数えて、対照のＰＢ
Ｓ投与群と比較した。その結果を第２表に示す。この結
果によれば、新規に合成した化合物７、化合物８および
化合物９の投与により肺への癌転移は顕著に抑制される
ことが示された。Compound 12 (hereinafter cyclo (Gly-A
rg-Gly-Asp-Ser-Pro-Ala)), its succinimide derivative (Compound 9) and cyclo (Arg-Gly-Asp-Th).
r) Cancer metastasis inhibitory action of compounds 7 and 8 which are succinimide derivatives of ₂ . Compound 7, compound 8, compound 9 newly synthesized in Examples 1 and 2 and cyclo (Gly prepared by the method described in JP-A No. 2-174797).
-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Ala)
Regarding the cancer metastasis-suppressing activity of the above, the method of Sumiki et al.
4798 gazette). That is, the cancer metastasis inhibitory effect of the above compounds was examined in mouse B16-BL6 melanoma cells. First, 500 μg of each of these compounds
And B16-BL6 melanoma cells (24 hours logarithmic growth phase, 3 × 10
⁴ ) were mixed in PBS, and 0.2 ml thereof was intravenously injected to 5 C57BL / 6 male mice per group. Administration 14
After a number of days, the number of cancer colonies in the lungs of the mice was counted, and the control PB
The comparison was made with the S administration group. The results are shown in Table 2. These results showed that administration of the newly synthesized compounds 7, 8 and 9 markedly suppressed lung cancer metastasis.

【００７５】[0075]

【表２】 [Table 2]

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 5/10 ＺＮＡ 8318−4Ｈ 5/12 8318−4Ｈ 7/06 Ｚ 8318−4Ｈ 7/64 8318−4Ｈ // Ｃ０７Ｋ 99:00 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁵ Identification number Office reference number FI Technical display location C07K 5/10 ZNA 8318-4H 5/12 8318-4H 7/06 Z 8318-4H 7/64 8318 -4H // C07K 99:00

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 式（１） 【化１】 〔式中、Ａ¹ はＡｒｇまたは側鎖に窒素原子を有するア
ミノ酸残基を表す。ただし、Ａ¹ で表されるアミノ酸残
基のα−アミノ基は、低級アルキル基で置換されてもよ
い。〕を含有し、修飾基で修飾されてもよいペプチド誘
導体またはその薬学的に許容される塩。1. Formula (1): [In the formula, A ¹ represents Arg or an amino acid residue having a nitrogen atom in the side chain. However, the α-amino group of the amino acid residue represented by A ¹ may be substituted with a lower alkyl group. ], Which may be modified with a modifying group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 【請求項２】 式（２） 【化２】 〔式中、Ａ¹ は前記と同義であり、ｎは１〜５の整数を
表し、Ｒ¹ は単結合または−ＮＨ−Ｒ² −ＣＯ−（Ｒ²
はアルキレンを表す。）を表し、Ａ² は−ＮＨ−Ａ² −
と表現した場合に、アミノ酸残基または２〜１０個のア
ミノ酸からなるペプチド残基を表す基を表す。〕、 式（３） 【化３】 〔式中、Ａ¹ は前記と同義であり、Ａ³ およびＡ⁵ はそ
れぞれ 【化４】 および 【化５】 と表現した場合に、同一あるいは異なってＣｙｓまたは
Ｐｅｎを表す基を表し、Ａ⁴ は単結合、アミノ酸残基、
２個のアミノ酸からなるペプチド残基、またはアミノ酸
残基とアミノ酸誘導体の残基の結合体を表す。Ｒ³ は水
素原子またはアシル基を表し、Ｒ⁴ は水酸基またはＮＲ
⁵ Ｒ⁶ （Ｒ⁵ およびＲ⁶ は同一あるいは異なって低級ア
ルキル基または水素原子を表す。）を表す。〕、 式（４） 【化６】 〔式中、Ａ¹ は前記と同義であり、Ａ⁶ は単結合、アミ
ノ酸残基または２個のアミノ酸からなるペプチド残基を
表し、Ｒ⁷ およびＲ⁸ は同一あるいは異なってアルキレ
ンまたはフェニレンを表す。〕、 式（５） 【化７】 〔式中、Ａ¹ およびＲ⁴ は前記と同義であり、Ａ⁷ はア
ミノ酸残基を表し、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は同一あるいは異な
ってアルキレンを表し、Ｙはメチレン、酸素原子、ＳＯ
_m （ｍは０、１または２を表す。）またはＮＨを表
す。〕または式（６） 【化８】 〔式中、Ａ¹ 、Ｒ³ およびＲ⁴ は前記と同義であり、Ａ
⁸ は−ＮＨ−Ａ⁸ −と表現した場合にアミノ酸残基また
は２〜１０個のアミノ酸からなるペプチド残基を表す基
を表す。ｒは１〜２０の整数を表す。〕で表され、修飾
基で修飾されてもよい請求項１記載のペプチド誘導体ま
たはその薬学的に許容される塩。2. Formula (2): Wherein, A ¹ are as defined above, n represents an integer of 1 to 5, R ¹ is a single bond or -NH-R ² -CO- (R ²
Represents alkylene. ), A ² is —NH—A ² —
Represents a group representing an amino acid residue or a peptide residue consisting of 2 to 10 amino acids. ], Formula (3) [In the formula, A ¹ has the same meaning as described above, and A ³ and A ⁵ are respectively the following: And Represents a group representing Cys or Pen which is the same or different and A ⁴ is a single bond, an amino acid residue,
It represents a peptide residue consisting of two amino acids, or a conjugate of an amino acid residue and an amino acid derivative residue. R ³ represents a hydrogen atom or an acyl group, R ⁴ represents a hydroxyl group or NR
⁵ R ⁶ (R ⁵ and R ⁶ are the same or different and represent a lower alkyl group or a hydrogen atom). ], Formula (4) [Wherein A ¹ has the same meaning as above, A ⁶ represents a single bond, an amino acid residue or a peptide residue consisting of 2 amino acids, and R ⁷ and R ⁸ are the same or different and each represents alkylene or phenylene. . ], Formula (5) [In the formula, A ¹ and R ⁴ are as defined above, A ⁷ represents an amino acid residue, R ⁹ and R ¹⁰ are the same or different and represent alkylene, Y is methylene, oxygen atom, SO
_m (m represents 0, 1 or 2) or NH. ] Or formula (6) [Wherein A ¹ , R ³ and R ⁴ are as defined above,
⁸ -NH-A ⁸ - represents a group represented by peptide residue consisting of amino acid residues or 2-10 amino acids when expressed as. r represents an integer of 1 to 20. ] The peptide derivative according to claim 1, which may be modified with a modifying group, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 【請求項３】請求項１または２記載のペプチド誘導体ま
たはその薬学的に許容される塩を含有する癌転移抑制
剤、血小板凝集抑制剤、創傷治癒剤または骨吸収阻害
剤。3. A cancer metastasis inhibitor, a platelet aggregation inhibitor, a wound healing agent or a bone resorption inhibitor, which comprises the peptide derivative according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.