JPH06138110A - イオンクロマトグラフィー用分離カラム - Google Patents
イオンクロマトグラフィー用分離カラムInfo
- Publication number
- JPH06138110A JPH06138110A JP4289110A JP28911092A JPH06138110A JP H06138110 A JPH06138110 A JP H06138110A JP 4289110 A JP4289110 A JP 4289110A JP 28911092 A JP28911092 A JP 28911092A JP H06138110 A JPH06138110 A JP H06138110A
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- Japan
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- water
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- zwitterion
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 水または水系溶媒のみで、陽イオン、陰イオ
ン、及び陰陽両イオンが同時に分離できるイオンクロマ
トグラフィー用分離カラムを提供すること。 【構成】 イオンクロマトグラフィーに使用する分離カ
ラム。、固定相が、保持体表面にツビッタ（プラス電荷
（＋δ）とマイナス電荷（−δ）をそれ自体有する化合
物）を結合被覆させた充填剤で形成され、溶離液として
水または水系溶媒を使用する。
ン、及び陰陽両イオンが同時に分離できるイオンクロマ
トグラフィー用分離カラムを提供すること。 【構成】 イオンクロマトグラフィーに使用する分離カ
ラム。、固定相が、保持体表面にツビッタ（プラス電荷
（＋δ）とマイナス電荷（−δ）をそれ自体有する化合
物）を結合被覆させた充填剤で形成され、溶離液として
水または水系溶媒を使用する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、イオンクロマトグラフ
ィーに使用する分離カラムに関する。特に、生体関連物
質の分離・分析に好適なものである。
ィーに使用する分離カラムに関する。特に、生体関連物
質の分離・分析に好適なものである。
【０００２】以下、本明細書で使用する主たる略語・用
語の一覧を下記する。
語の一覧を下記する。
【０００３】ＯＤＳ…オクタデシルシリル化ゲル ツビッタ（Zwitter ）…プラス電荷（＋δ）とマイナス
電荷（−δ）をそれぞれ自らに有する化合物。
電荷（−δ）をそれぞれ自らに有する化合物。
【０００４】水系溶媒…水と極性有機溶媒との混合溶
媒、及び水系緩衝液を含む。
媒、及び水系緩衝液を含む。
【０００５】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来の
液体クロマトグラフィーは、分配系の高速液体クロマト
グラフィーが主流で、、さらに、測定できる試料の種類
を増やすためにイオン交換型のクロマトグラフィーも開
発され、普及してきている。
液体クロマトグラフィーは、分配系の高速液体クロマト
グラフィーが主流で、、さらに、測定できる試料の種類
を増やすためにイオン交換型のクロマトグラフィーも開
発され、普及してきている。
【０００６】しかし、溶離液が水系溶媒のみで、陽イオ
ン、陰イオン、及び陰陽両イオンが同時に、分離できる
方法は、本発明者が知る限りにおいては存在しない。
ン、陰イオン、及び陰陽両イオンが同時に、分離できる
方法は、本発明者が知る限りにおいては存在しない。
【０００７】本発明は、上記にかんがみて、水または水
系溶媒のみで、陽イオン、陰イオン、及び陰陽両イオン
が同時に分離できるイオンクロマトグラフィー用分離カ
ラムを提供することにある。
系溶媒のみで、陽イオン、陰イオン、及び陰陽両イオン
が同時に分離できるイオンクロマトグラフィー用分離カ
ラムを提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明のは、上記課題を
下記構成により解決するものである。
下記構成により解決するものである。
【０００９】イオンクロマトグラフィーに使用する分離
カラムであって、固定相が、保持体表面にツビッタを結
合被覆させた充填剤で形成され、溶離液として、水また
は水系溶媒を使用することを特徴とする。
カラムであって、固定相が、保持体表面にツビッタを結
合被覆させた充填剤で形成され、溶離液として、水また
は水系溶媒を使用することを特徴とする。
【００１０】
【実施例】以下、本発明を、詳細に説明をする。
【００１１】Ａ．本発明のイオンクロマトグラフィー用
分離カラムは、下記のようにして製造する。
分離カラムは、下記のようにして製造する。
【００１２】(1) 保持体（被修飾用充填剤）を充填した
逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）用分離カラム
の中に、ツビッタ飽和水系溶液を流し、上記保持体表面
に、ツビッタを結合被覆（疎水結合、できれば化学結
合）させる。
逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）用分離カラム
の中に、ツビッタ飽和水系溶液を流し、上記保持体表面
に、ツビッタを結合被覆（疎水結合、できれば化学結
合）させる。
【００１３】上記被修飾充填剤としては、代表的にＯ
ＤＳシリカゲル等を挙げることができる。ＯＤＳ（炭素
数１８）以外に類似の構造を有するものも使用可能であ
るが、炭素数が１０以下のように小さくなると、疎水性
が小さくなり、被覆力（疎水結合性）が小さくなり、溶
離液として水系溶媒を使用した場合、脱離し易く、耐久
性に問題が発生し易くなる。
ＤＳシリカゲル等を挙げることができる。ＯＤＳ（炭素
数１８）以外に類似の構造を有するものも使用可能であ
るが、炭素数が１０以下のように小さくなると、疎水性
が小さくなり、被覆力（疎水結合性）が小さくなり、溶
離液として水系溶媒を使用した場合、脱離し易く、耐久
性に問題が発生し易くなる。
【００１４】上記ツビッタとしては、被修飾用充填剤
（保持体）の表面を結合被覆可能なものなら、特に限定
されないが、コール酸、デキシコール酸、グリココール
酸、デキシグリココール酸、タウロコール酸、デオキシ
タウロコール酸、等の胆汁酸の金属塩類を例示でき、好
適には、下記化学構造式で示されるものを使用できる。
（保持体）の表面を結合被覆可能なものなら、特に限定
されないが、コール酸、デキシコール酸、グリココール
酸、デキシグリココール酸、タウロコール酸、デオキシ
タウロコール酸、等の胆汁酸の金属塩類を例示でき、好
適には、下記化学構造式で示されるものを使用できる。
【００１５】
【化１】
【００１６】
【化２】
【００１７】
【化３】
【００１８】ツビッタ飽和水系溶液としては、ツビッ
タが、ＣＨＡＰＳの場合、例えば水／アセトニトリル
（容量比）＝１／１の水系溶媒を使用する。
タが、ＣＨＡＰＳの場合、例えば水／アセトニトリル
（容量比）＝１／１の水系溶媒を使用する。
【００１９】(2) 次に、蒸留水を、上記分離カラム内を
通して水洗した後、緩衝液を、同様にして上記カラム内
を通して、ツビッタの膜厚を調製する。
通して水洗した後、緩衝液を、同様にして上記カラム内
を通して、ツビッタの膜厚を調製する。
【００２０】上記、緩衝液としては、例えば、リン酸塩
水溶液を好適に使用可能である。 Ｂ．上記のようにして調製した本発明の分離カラムは、
例えば、図１に示すようなクロマトグラフィー装置に、
組み込んで使用する。
水溶液を好適に使用可能である。 Ｂ．上記のようにして調製した本発明の分離カラムは、
例えば、図１に示すようなクロマトグラフィー装置に、
組み込んで使用する。
【００２１】装置の概略は、溶離液タンク１１と、送液
ポンプ１３、試料導入部１５、分離カラム１７、検出器
１９とを備え、溶離液タンク１１と検出器１９との間
は、被検出成分の拡散を可及的に小さく維持できるよう
に、接続されている。なお、検出器１９は、増幅器２１
を介して表示装置（記録計）２３に接続される。
ポンプ１３、試料導入部１５、分離カラム１７、検出器
１９とを備え、溶離液タンク１１と検出器１９との間
は、被検出成分の拡散を可及的に小さく維持できるよう
に、接続されている。なお、検出器１９は、増幅器２１
を介して表示装置（記録計）２３に接続される。
【００２２】なお、上記検出器としては、イオン成分を
検出できるものなら、特に限定されない。例えば、伝導
度計、分光光度計（紫外・可視）、蛍光光度計、示差屈
折計、質量分析計等を挙げることができる。
検出できるものなら、特に限定されない。例えば、伝導
度計、分光光度計（紫外・可視）、蛍光光度計、示差屈
折計、質量分析計等を挙げることができる。
【００２３】そして、生体関連物質等の試料の測定操作
は、一般的なイオンクロマトグラフィーと同様の方法に
より行なう。
は、一般的なイオンクロマトグラフィーと同様の方法に
より行なう。
【００２４】(1) まず、バイパス状態の試料導入部１５
のループインジェクタに、試料（被検体）を所定量保持
する。
のループインジェクタに、試料（被検体）を所定量保持
する。
【００２５】(2) 次に、試料導入部１５を導通状態と
し、試料導入部１５内の試料を、溶離液により分離カラ
ム１７内に展開させ、試料の分離・分析を行なう。
し、試料導入部１５内の試料を、溶離液により分離カラ
ム１７内に展開させ、試料の分離・分析を行なう。
【００２６】ここで、溶離液としては、水（通常、蒸留
水）のみでも良いが、水に極性溶剤やリン酸塩緩衝液を
加えて、分離性能を向上させることも可能である。
水）のみでも良いが、水に極性溶剤やリン酸塩緩衝液を
加えて、分離性能を向上させることも可能である。
【００２７】(3) そして、分離された成分は、検出器１
９に入り検出され、検出結果が、記録計２３に表示され
る。
９に入り検出され、検出結果が、記録計２３に表示され
る。
【００２８】なお、高い塩濃度が必要とされる場合、ま
たは、高いｐＨを必要とされる場合においても、本発明
の固定相は十分な安定性を示す。後述の試験例は、ｐＨ
約１〜１０で十分な安定性示す。
たは、高いｐＨを必要とされる場合においても、本発明
の固定相は十分な安定性を示す。後述の試験例は、ｐＨ
約１〜１０で十分な安定性示す。
【００２９】
【発明の作用・効果】本発明のイオンクロマトグラフィ
ー用分離カラムは、固定相が保持体表面にツビッタを被
覆させた充填剤であり、溶離液として、水または水系溶
媒を使用することにより、下記のような作用・効果を奏
する。
ー用分離カラムは、固定相が保持体表面にツビッタを被
覆させた充填剤であり、溶離液として、水または水系溶
媒を使用することにより、下記のような作用・効果を奏
する。
【００３０】生体関連物質（例えば、唾液・尿・血清
等）等の試料を分離カラム内に導入した場合、試料中に
イオン化していないタンパク質等の有機体が含まれてい
ても、それらはほとんど、固定相と相互作用することな
く、システムピークとして表れ、試料中の目的イオン分
離の妨害とはならない。固定相（ツビッタ）と、試料イ
オンとの相互作用が、静電的な吸引・反発力に基づくた
めである。このため、生体関連物質を試料とする場合に
おいて、タンパク質除去等の前処理が不要となる。
等）等の試料を分離カラム内に導入した場合、試料中に
イオン化していないタンパク質等の有機体が含まれてい
ても、それらはほとんど、固定相と相互作用することな
く、システムピークとして表れ、試料中の目的イオン分
離の妨害とはならない。固定相（ツビッタ）と、試料イ
オンとの相互作用が、静電的な吸引・反発力に基づくた
めである。このため、生体関連物質を試料とする場合に
おいて、タンパク質除去等の前処理が不要となる。
【００３１】そして、溶離液として水のみでイオンクロ
マトグラフィーを行なうことができる、即ち、従来のイ
オンクロマトグラフィーの如く、溶離液中に緩衝剤等を
加えずに行なえる。
マトグラフィーを行なうことができる、即ち、従来のイ
オンクロマトグラフィーの如く、溶離液中に緩衝剤等を
加えずに行なえる。
【００３２】従って、上記前処理を不要で、かつ、水の
みを溶離液としてイオンクロマトグラフィーを行なうこ
とができるので、試料中の微量な分析目的物でも、その
逸散・破壊・汚染がほとんどなく、環境中の存在状態に
近い状態で、分析可能となる。
みを溶離液としてイオンクロマトグラフィーを行なうこ
とができるので、試料中の微量な分析目的物でも、その
逸散・破壊・汚染がほとんどなく、環境中の存在状態に
近い状態で、分析可能となる。
【００３３】この分離カラムを使用してイオンクロマト
グラフィーを、臨床分析、環境分析さらには、天然物化
学分野の分析に応用すれば、従来では困難であった正確
な試料の持つ情報を引き出すことが期待できるものであ
る。
グラフィーを、臨床分析、環境分析さらには、天然物化
学分野の分析に応用すれば、従来では困難であった正確
な試料の持つ情報を引き出すことが期待できるものであ
る。
【００３４】なお、液体クロマトグラフィーとマススペ
クトロメトリーとの連結において、溶離液が水のみとい
うことは脱溶媒部が無用となる、という効果も奏する。
クトロメトリーとの連結において、溶離液が水のみとい
うことは脱溶媒部が無用となる、という効果も奏する。
【００３５】
【試験例】以下、本発明の効果を確認するために行なっ
た試験例について説明をする。
た試験例について説明をする。
【００３６】(i) クロマトグラフィー用カラムの調製 市販のＯＤＳ充填カラム内に、下記ツビッタを、水／ア
セトニトリル系溶媒に１００ｍモルの濃度で溶解し、
０．５ｍｌ／min の速度で約２０分間流下させて、ＯＤ
Ｓ充填剤（保持体）の表面にツビッタ膜（ミセル膜）を
疎水結合により被覆させる。
セトニトリル系溶媒に１００ｍモルの濃度で溶解し、
０．５ｍｌ／min の速度で約２０分間流下させて、ＯＤ
Ｓ充填剤（保持体）の表面にツビッタ膜（ミセル膜）を
疎水結合により被覆させる。
【００３７】その後、被覆時と同様の条件で蒸留水によ
り水洗を行ない、さらには、１ｍmol リン酸緩衝液を、
同様の条件で流し、膜厚調製を行なう。
り水洗を行ない、さらには、１ｍmol リン酸緩衝液を、
同様の条件で流し、膜厚調製を行なう。
【００３８】ツビッタ…試験例１：ＣＨＡＰＳ、試験例
２：ＮａＴＤＣ、いずれもシグマ社製 (ii)試料の分離方法 上記カラムの流出口を、検出器（紫外線分光光度計：
「ＰＣＤ−６Ａ」、電導度検出器：「ＣＤＤ６Ａ」、島
津製作所社製）に接続する。
２：ＮａＴＤＣ、いずれもシグマ社製 (ii)試料の分離方法 上記カラムの流出口を、検出器（紫外線分光光度計：
「ＰＣＤ−６Ａ」、電導度検出器：「ＣＤＤ６Ａ」、島
津製作所社製）に接続する。
【００３９】試料はそれぞれ、下記処方のものを使用
した。
した。
【００４０】試験例１（陰イオン含有水溶液）：Ｉ
Ｏ3 -、ＮＯ2 -、Ｎ０3 -、ＳＣＮ- の標準各０．５ｍモル
溶液 試験例２（陰陽両イオン含有水溶液）：Ｉ- 、ＳＣＮ
- 、Ｎａ+ 、Ｋ+ の標準各１０ｍモル溶液 次に、上記試料１０μｌを移動相流（バルブインジェ
クタ）によりカラム内へ流入させる。そして、溶離液と
して下記のものを使用して、下記流速で流下させて、上
記試料の分離を行った。そして、それぞれ下記検出波長
で検出した。
Ｏ3 -、ＮＯ2 -、Ｎ０3 -、ＳＣＮ- の標準各０．５ｍモル
溶液 試験例２（陰陽両イオン含有水溶液）：Ｉ- 、ＳＣＮ
- 、Ｎａ+ 、Ｋ+ の標準各１０ｍモル溶液 次に、上記試料１０μｌを移動相流（バルブインジェ
クタ）によりカラム内へ流入させる。そして、溶離液と
して下記のものを使用して、下記流速で流下させて、上
記試料の分離を行った。そして、それぞれ下記検出波長
で検出した。
【００４１】 試験例１…水、１ｍｌ／min ；ＵＶ２３０ｎｍ 試験例２…２．５×１０-3モル硫酸銅水溶液、１ｍｌ／
min ； ＵＶ２１５ｎｍ (iii) 結果及び考察 上記試験結果を、図２（試験例１）及び図３（試験例
２）に示す。奇麗なピークが表れ、分離効率が良好であ
ることが分る。
min ； ＵＶ２１５ｎｍ (iii) 結果及び考察 上記試験結果を、図２（試験例１）及び図３（試験例
２）に示す。奇麗なピークが表れ、分離効率が良好であ
ることが分る。
【図１】本発明の分離カラムの適用するイオクロマトグ
ラフィー装置の擬略図である。
ラフィー装置の擬略図である。
【図２】試験例１（陰イオン試料）の分析結果を示すク
ロマトグラムである。
ロマトグラムである。
【図３】試験例２（陰陽両イオン試料）の分析結果を示
すクロマトグラムである。
すクロマトグラムである。
１１ 溶離液タンク １５ 試料導入部 １７ 分離カラム １９ 検出器
Claims (1)
- 【請求項１】 イオンクロマトグラフィーに使用する分
離カラムであって、 固定相が、保持体表面にツビッタを結合被覆させた充填
剤で形成され、 溶離液として、水または水系溶媒を使用することを特徴
とする、イオンクロマトグラフィー用分離カラム。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4289110A JPH06138110A (ja) | 1992-10-27 | 1992-10-27 | イオンクロマトグラフィー用分離カラム |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4289110A JPH06138110A (ja) | 1992-10-27 | 1992-10-27 | イオンクロマトグラフィー用分離カラム |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06138110A true JPH06138110A (ja) | 1994-05-20 |
Family
ID=17738921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4289110A Withdrawn JPH06138110A (ja) | 1992-10-27 | 1992-10-27 | イオンクロマトグラフィー用分離カラム |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06138110A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010514674A (ja) * | 2006-10-12 | 2010-05-06 | ベラス ヘルス （インターナショナル） リミテッド | ３−アミノ−１−プロパンスルホン酸を送達するための方法、化合物、組成物および媒体 |
-
1992
- 1992-10-27 JP JP4289110A patent/JPH06138110A/ja not_active Withdrawn
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010514674A (ja) * | 2006-10-12 | 2010-05-06 | ベラス ヘルス （インターナショナル） リミテッド | ３−アミノ−１−プロパンスルホン酸を送達するための方法、化合物、組成物および媒体 |
| US8748656B2 (en) | 2006-10-12 | 2014-06-10 | Bhi Limited Partnership | Methods, compounds, compositions and vehicles for delivering 3-amino-1-propanesulfonic acid |
| JP2015007047A (ja) * | 2006-10-12 | 2015-01-15 | ビーエイチアイ リミテッド パートナーシップ | ３−アミノ−１−プロパンスルホン酸を送達するための方法、化合物、組成物および媒体 |
| US9499480B2 (en) | 2006-10-12 | 2016-11-22 | Bhi Limited Partnership | Methods, compounds, compositions and vehicles for delivering 3-amino-1-propanesulfonic acid |
| US10238611B2 (en) | 2006-10-12 | 2019-03-26 | Bellus Health Inc. | Methods, compounds, compositions and vehicles for delivering 3-amino-1-propanesulfonic acid |
| US10857109B2 (en) | 2006-10-12 | 2020-12-08 | Bellus Health, Inc. | Methods, compounds, compositions and vehicles for delivering 3-amino-1-propanesulfonic acid |
| US11020360B2 (en) | 2006-10-12 | 2021-06-01 | Bellus Health Inc. | Methods, compounds, compositions and vehicles for delivering 3-amino-1-propanesulfonic acid |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20000104 |