JPH06103307B2 - Immunoassay method - Google Patents
Immunoassay methodInfo
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- JPH06103307B2 JPH06103307B2 JP62214735A JP21473587A JPH06103307B2 JP H06103307 B2 JPH06103307 B2 JP H06103307B2 JP 62214735 A JP62214735 A JP 62214735A JP 21473587 A JP21473587 A JP 21473587A JP H06103307 B2 JPH06103307 B2 JP H06103307B2
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Description
【発明の詳細な説明】 ［発明の目的］ （産業上の利用分野） 本発明は、免疫分析方法に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Object of the Invention] (Field of Industrial Application) The present invention relates to an immunoassay method.
（従来の技術） 近年医療分野においては病気の診断等を行うに際し、高
度の信頼性をもって抗原を簡便迅速に定量することが極
めて重要な課題になってきた。(Prior Art) In recent years, it has become an extremely important subject in the medical field to simply and quickly quantify an antigen with a high degree of reliability when diagnosing a disease or the like.
免疫化学的測定法による抗原の定量法として、（Ａ）放
射化免疫測定法（ラジオイムノアッセイ）、（Ｂ）酵素
免疫測定法、（Ｃ）逆受身赤血球凝集反応法、及び
（Ｄ）一元放射状免疫拡散法等が挙げられるが、これら
の方法は次の如き欠点を有するものであった。即ち、 Ａ方法：洗浄操作を必要とし、またラジオアイソトープ
を使用するため特別の設備を必要とする等莫大な設備費
と繁雑な手数を要する。(A) Activation immunoassay (radioimmunoassay), (B) enzyme immunoassay, (C) reverse passive hemagglutination assay, and (D) single radial immunization as antigen quantification methods by immunochemical assay The diffusion method and the like can be mentioned, but these methods have the following drawbacks. That is, method A: a washing operation is required, and since a radioisotope is used, special equipment is required, which requires enormous equipment costs and complicated labor.
Ｂ方法：一般的に洗浄の操作を必要とし且つ判定まで長
時間を要する。Method B: Generally, a washing operation is required and it takes a long time to make a judgment.
Ｃ方法：ダイリユーターにて試料を２倍に随段希釈する
操作及びドロッパーにて希釈度等を低下する操作を必要
とするため繁雑な手数を要する。又判定までに長時間を
要すると共に、抗原量を２倍階段希釈の終末値で判定す
るため殺駁な判定になるおそれがある。Method C: A complicated procedure is required because it requires an operation of diluting the sample two-fold with a diluter and an operation of decreasing the degree of dilution with a dropper. In addition, it takes a long time to make a determination, and the amount of antigen is determined by the final value of 2-fold serial dilution, which may result in a refractory determination.
Ｄ方法：判定までに多大な時間を要すると共に感度的に
も不十分である。Method D: A large amount of time is required for the determination and the sensitivity is insufficient.
かかる欠点を除去した免疫分析方法として、測定対象抗
原に対する二種の抗体のうち、第１の抗体を、リポソー
ムなどのマイクロカプセル表面に結合し、これと試料と
を混合した後、第２の抗体と補体とを混合し、第２の抗
体により活性化された補体でマイクロカプセル膜を壊
し、マイクロカプセル内から溶出してきた物質（蛍光分
質など）を計測することにより、試料中の測定対象抗原
量を測定しようとしたものがある。As an immunoassay method that eliminates such drawbacks, a first antibody of two types of antibodies against an antigen to be measured is bound to the surface of a microcapsule such as a liposome, and this is mixed with a sample, and then a second antibody is mixed. And the complement are mixed, the microcapsule membrane is destroyed by the complement activated by the second antibody, and the substance (fluorescent substance, etc.) eluted from the inside of the microcapsule is measured to measure in the sample. Some have tried to measure the amount of target antigen.
（発明が解決しようとする問題点） ところで近年、細胞培養によりモノクローナル抗体を得
る技術が進歩し、従来、動物を免疫して得てきた抗体も
このモノクローナル抗体に移行しつつある。そこで上記
の免疫分析方法における第２の抗体としてこのモノクロ
ーナル抗体が適用された。(Problems to be Solved by the Invention) By the way, in recent years, a technique for obtaining a monoclonal antibody by cell culture has advanced, and an antibody that has been conventionally obtained by immunizing an animal is also shifting to this monoclonal antibody. Therefore, this monoclonal antibody was applied as the second antibody in the above-mentioned immunoassay method.
ところが、第２の抗体としてモノクローナル抗体を適用
した場合に測定感度が低いという問題点を生じた。However, when a monoclonal antibody is applied as the second antibody, there arises a problem that the measurement sensitivity is low.
そこで本発明はかかる事情に鑑みて成されたもので、第
１の抗体をマイクロカプセルに結合し、これと、測定対
象抗原を含有する試料とを混合した後、これに第２の抗
体と補体とを添加して測定対象抗原量の定量分析を可能
とする免疫分析方法において、測定感度の向上を図るこ
とを目的としている。Therefore, the present invention has been made in view of the above circumstances, in which a first antibody is bound to a microcapsule, and this is mixed with a sample containing an antigen to be measured, and then this is supplemented with a second antibody. It is intended to improve the measurement sensitivity in an immunoassay method that enables quantitative analysis of the amount of antigen to be measured by adding the body.
［発明の構成］ （問題点を解決するための手段） 本発明は、第１の抗体をモノクローナル抗体とし、第２
の抗体をポリクローナル抗体としたものである。[Structure of the Invention] (Means for Solving Problems) In the present invention, the first antibody is a monoclonal antibody, and the second antibody is
The above antibody is a polyclonal antibody.
（作 用） 本願発明者が鋭意研究を重ねた結果、第２の抗体として
１種類のモノクローナル抗体だけでは反応しないことが
判明した。なぜなら補体は２個以上の抗体が近接してい
るところで初めて活性化し、第２の抗体が１種類のモノ
クローナル抗体である場合、２個以上の抗体が近接して
いる可能性が極めて低いからである。(Operation) As a result of earnest studies by the inventor of the present application, it was revealed that only one kind of monoclonal antibody as the second antibody does not react. Because complement is activated only when two or more antibodies are in close proximity, and when the second antibody is one kind of monoclonal antibody, it is extremely unlikely that two or more antibodies are in close proximity. is there.
これを模式図により説明すると次のようになる。This will be described below with reference to a schematic diagram.
第１図（ａ）は第２の抗体がモノクローナル抗体の場合
を示している。マイクロカプセル内物質２を含有するマ
イクロカプセル１の表面に第１の抗体３が結合し、それ
に、被測定抗原４が結合し、第２の抗体５が結合する。
第２の抗体５により補体が活性化されるわけであるが、
補体が活性化されるためには２個以上の第２の抗体５が
近接していなくてはならない。すなわち、第１の抗体３
がマイクロカプセル上のごく近接した位置に結合してい
なければならない。このことは技術的に不可能ではない
が大変困難なことである。FIG. 1 (a) shows the case where the second antibody is a monoclonal antibody. The first antibody 3 binds to the surface of the microcapsule 1 containing the substance 2 in the microcapsule, the antigen 4 to be measured binds to it, and the second antibody 5 binds to it.
The second antibody 5 activates complement,
Two or more second antibodies 5 must be in close proximity in order for complement to be activated. That is, the first antibody 3
Must be bound in close proximity on the microcapsules. This is technically impossible, but very difficult.
第１図（ｂ）は第２の抗体がポリクローナル抗体の場合
を示している。第１の抗体３に結合した被測定抗原４に
２個以上の第２の抗体５が結合し、必然的に、ごく近傍
に２個以上の第２の抗体５が存在することとなる。これ
により補体が容易に活性化され、マイクロカプセル１膜
を破壊することとなる。従って、第１の抗体にモノクロ
ーナル抗体を適用し、第２の抗体にポリクローナル抗体
を適用することで、測定感度が向上する。FIG. 1 (b) shows the case where the second antibody is a polyclonal antibody. Two or more second antibodies 5 are bound to the measured antigen 4 bound to the first antibody 3, and inevitably, two or more second antibodies 5 are present in the immediate vicinity. As a result, complement is easily activated and the microcapsule 1 membrane is destroyed. Therefore, the measurement sensitivity is improved by applying the monoclonal antibody to the first antibody and the polyclonal antibody to the second antibody.
（実施例） 以下、本発明を実施例により具体的に説明する。(Examples) Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to Examples.
本実施例では、血清中のフェリチンを測定する場合につ
いて説明する。In this example, the case of measuring ferritin in serum will be described.
第１の抗体として、抗ヒトフェリチン抗体モノクローナ
ル抗体（マウス由来）を用い、これを、蛍光物質である
カルボキシフルオレッセインを封入したマイクロカプセ
ルに結合する。マイクロカプセルは例えばリポソームで
あり、このリポソームに抗体を結合させる方法としては
レイザーマン（Leserman）等の方法（ネイチャー,Natur
e,288,602-604,1980）、マルチン（Martin）等の方法
（バイオケミストリー,Biochemistry 20,4229-4238,198
1）などがある。そしてこれに血清を反応させた後、第
２の抗体（抗ヒトフェリチン抗体ポリクローナル抗体
（ウサギ由来））と補体（モルモット血清）とを添加し
て反応させる。ここで、第２の抗体としてポリクローナ
ル抗体を用いているため補体が容易に活性化され、リポ
ソームが破壊される。これにより、遊離された蛍光物質
を光学的に検出し、得られた蛍光強度から、リポソーム
の溶解率を求める。第２図に示すように血清中のフェリ
チン濃度が増加するにつれリポソーム溶解率が増加する
ので、フェリチン濃度未知の血清についてリポソームの
溶解率を求めることによってフェリチン濃度を知ること
ができる。An anti-human ferritin antibody monoclonal antibody (derived from mouse) is used as the first antibody, and this is bound to a microcapsule encapsulating carboxyfluorescein which is a fluorescent substance. Microcapsules are, for example, liposomes, and methods for binding antibodies to the liposomes include methods such as Leserman (Nature, Natur).
e, 288,602-604,1980), Martin, etc. (Biochemistry, Biochemistry 20,4229-4238,198)
1) etc. After reacting this with serum, a second antibody (anti-human ferritin antibody polyclonal antibody (derived from rabbit)) and complement (guinea pig serum) are added and reacted. Here, since a polyclonal antibody is used as the second antibody, complement is easily activated and the liposome is destroyed. Thus, the released fluorescent substance is optically detected, and the dissolution rate of the liposome is determined from the obtained fluorescence intensity. As shown in FIG. 2, the liposome dissolution rate increases as the serum ferritin concentration increases. Therefore, the ferritin concentration can be known by determining the liposome dissolution rate for serum with an unknown ferritin concentration.
このように本実施例においては、第１の抗体として抗ヒ
トフェリチン抗体モノクローナル抗体を適用し、第２の
抗体として抗ヒトフェリチン抗体ポリクローナル抗体を
適用しているので、フェリチンに２個以上の抗体が存在
することになり、補体が容易に活性化されリポソームが
破壊されることから測定感度が高く、フェリチン濃度を
適確に測定することができる。As described above, in this example, since the anti-human ferritin antibody monoclonal antibody is applied as the first antibody and the anti-human ferritin antibody polyclonal antibody is applied as the second antibody, two or more antibodies are present in ferritin. Since it is present and complement is easily activated and the liposome is destroyed, the measurement sensitivity is high and the ferritin concentration can be accurately measured.
以上本発明の一実施例について説明したが、本発明は上
記実施例に限定されるものではなく、種々の変形実施が
可能となる。Although one embodiment of the present invention has been described above, the present invention is not limited to the above embodiment, and various modifications can be made.
［発明の効果］ 以上詳述したように本発明によれば、第１の抗体をマイ
クロカプセルに結合し、これと、測定対象抗原を含有す
る試料とを混合した後、これに第２の抗体と補体とを添
加して測定対象抗原量の定量分析を可能とする免疫分析
方法において、測定感度の向上を図ることができる。[Effects of the Invention] As described in detail above, according to the present invention, the first antibody is bound to the microcapsules, and this is mixed with the sample containing the antigen to be measured, and then the second antibody is added thereto. It is possible to improve the measurement sensitivity in the immunoassay method in which the amount of the antigen to be measured is quantitatively analyzed by adding the enzyme and complement.
第１図（ａ），（ｂ）は本発明の原理を説明するための
模式図、第２図はフェリチン測定検量線図である。 １……マイクロカプセル、３……第１の抗体、 ４……被測定抗原、５……第２の抗体。1 (a) and 1 (b) are schematic diagrams for explaining the principle of the present invention, and FIG. 2 is a ferritin measurement calibration curve. 1 ... microcapsule, 3 ... first antibody, 4 ... antigen to be measured, 5 ... second antibody.
Claims (1)
これと、測定対象抗原を含有する試料とを混合した後、
これに第２の抗体と補体とを添加し、前記マイクロカプ
セルを破壊せしめて前記測定対象抗原量の定量分析を可
能とする免疫分析方法において、前記第１の抗体をモノ
クローナル抗体とし、前記第２の抗体をポリクローナル
抗体としたことを特徴とする免疫分析方法。1. A first antibody bound to a microcapsule,
After mixing this with a sample containing the antigen to be measured,
In the immunoassay method in which a second antibody and complement are added to this to destroy the microcapsules to enable quantitative analysis of the amount of the antigen to be measured, the first antibody is a monoclonal antibody, and the first antibody is a monoclonal antibody. 2. An immunoassay method characterized in that the antibody of 2 is a polyclonal antibody.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62214735A JPH06103307B2 (en) | 1987-08-28 | 1987-08-28 | Immunoassay method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62214735A JPH06103307B2 (en) | 1987-08-28 | 1987-08-28 | Immunoassay method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6459070A JPS6459070A (en) | 1989-03-06 |
| JPH06103307B2 true JPH06103307B2 (en) | 1994-12-14 |
Family
ID=16660740
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62214735A Expired - Lifetime JPH06103307B2 (en) | 1987-08-28 | 1987-08-28 | Immunoassay method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06103307B2 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04303770A (en) * | 1991-03-30 | 1992-10-27 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | Analyzing method for immunity of antigen |
| JP2017203665A (en) * | 2016-05-10 | 2017-11-16 | 国立大学法人信州大学 | Photocleavable microcapsules, sensor using the same and a measuring method of substance to be measured using the same |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0799373B2 (en) * | 1984-12-13 | 1995-10-25 | 日水製薬株式会社 | Antigen quantification method |
| JPH079428B2 (en) * | 1985-04-30 | 1995-02-01 | 株式会社東芝 | Immunoassay method |
-
1987
- 1987-08-28 JP JP62214735A patent/JPH06103307B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6459070A (en) | 1989-03-06 |
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