JPH0597789A - Alpha-hydroxyglycinamide derivative and its production - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain the subject compound useful for producing C-end amidated peptides by treating an-alpha-hydroxyglycine derivative with ammonia in a solvent and optionally eliminating the amino-protecting group. CONSTITUTION:A compound of formula I (R<1> is H, lower alkyl, benzyl, etc.; R<2> is H or amino-protecting group; R<3> is H or carboxyl protecting group) is dissolved in a solvent such as ethanol, treated with introduced ammonia preferably at 0-25 deg.C and then optionally the protecting group is eliminated to give the objective derivative of formula II and its salt. For example, alpha-t- butyldimethylsilyloxy-N-t-butoxycarbonylglycinamide may be cited as the derivative.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明はα−ヒドロキシグリシン
誘導体及びその塩に関し、この化合物はＣ−末端アミド
化ペプチドの製造のために有用である。FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to α-hydroxyglycine derivatives and salts thereof, which compounds are useful for the preparation of C-terminal amidated peptides.

【０００２】[0002]

【従来の技術】生理活性のためにＣ−末端がアミド化さ
れていることを必須とする種々のペプチド性生理活性物
質が知られている。これらの生理活性ペプチドの例とし
てメラニン細胞刺激ホルモン放出抑制ホルモン（Pro-Le
u-Gly-NH₂)〔R.M.G.Nairら、Biochem.Biophys.Res.Comm
un., 43 , 1376(1971)；M.E.Celis ら、Pro.Nat.Acad.S
ci., USA, 68, 1428(1971)、甲状腺刺激ホルモン放出ホ
ルモン（Pyro・Glu-His-Pro-NH₂)〔K.Folkers ら、Bioc
hem.Biophys.Res.Commum., 37 , 123, 705(1969)；Endo
crinol., 86 , 1143(1970)；R.Burgusら、Compt.Rend.A
cad.Sci., 269 ,1870(1969)；Nature, 226 , 321(197
0）、等が挙げられる。2. Description of the Related Art Various peptide-based physiologically active substances which are essential to have an amidated C-terminal for physiological activity are known. Examples of these bioactive peptides include melanocyte-stimulating hormone release inhibitory hormone (Pro-Le
u-Gly-NH ₂ ) (RMGNair et al., Biochem.Biophys.Res.Comm
un., 43 , 1376 (1971); MECelis et al., Pro.Nat.Acad.S.
ci., USA, 68 , 1428 (1971), thyrotropin-releasing hormone (PyroGlu-His-Pro-NH ₂ ) [K. Folkers et al., Bioc.
hem.Biophys.Res.Commum., 37 , 123, 705 (1969); Endo
crinol., 86 , 1143 (1970); R. Burgus et al., Compt. Rend.A.
cad.Sci., 269 , 1870 (1969); Nature, 226 , 321 (197)
0), etc.

【０００３】これらの生理活性Ｃ−末端アミド化ペプチ
ドの製造方法としては、ペプチドのＣ−末端のカルボキ
シル基をアンモニアによりアミド化する方法〔Zhang Ho
ngliang ら、Yiyao Gongye 3 , 3(1983)；Chem.Abst.9
9, 639(1983) ；Vlassa M., Rev.Roum.Chim., 21 , 455
(1976) ；Rivaille Pierreら、Helv.Chim.Acta 54 ,355
(1971) ；Folkers Karlら、J.Med.Chem. 14, 475-6(197
1) ；Beyerman, H.Cら、Rect.Trav.Chim.Pays-Bus, 90
, 791(1971) ；Folkers Karlら、Chem.Abst., 79, 459
(1973) 〕、グリシンアミド又はプロリンアミドとの化
学的又は酵素的縮合反応による方法〔Muro Tetsuo ら、
Agric.Biol.Chem., 51, 1207(1987)；Flouret George,
J.Med.Chem., 13 , 843(1970) ；Flouret George, Che
m.Abst., 75, 246(1971) ；Wissmann Hans ら、Chem.Ab
st., 76, 449(1972) ；H.Chitoshiら、Biochem.Biophy
s.Res.Commun., 60 , 1345(1974)；Kurath P. ら、Hel
v. Chim.Acta., 56, 1656(1973)；Bienert Michael
ら、Chem.Abst.86, 455(1976) ；Bienert M., Pharmazi
e 32, 397(1977) 〕が知られている。As a method for producing these physiologically active C-terminal amidated peptides, a method of amidating the C-terminal carboxyl group of the peptide with ammonia [Zhang Ho
ngliang et al., Yiyao Gongye 3 , 3 (1983); Chem. Abst. 9
9 , 639 (1983) ； Vlassa M., Rev. Roum. Chim., 21 , 455
(1976) ； Rivaille Pierre et al., Helv. Chim. Acta 54 , 355.
(1971); Folkers Karl et al., J. Med. Chem. 14 , 475-6 (197.
1) ； Beyerman, HC et al., Rect.Trav.Chim.Pays-Bus, 90.
, 791 (1971); Folkers Karl et al., Chem. Abst., 79 , 459.
(1973)], a method by a chemical or enzymatic condensation reaction with glycinamide or prolinamide [Muro Tetsuo et al.
Agric.Biol.Chem., 51 , 1207 (1987); Flouret George,
J.Med.Chem., 13 , 843 (1970) ； Flouret George, Che
m.Abst., 75 , 246 (1971); Wissmann Hans et al., Chem. Ab.
st., 76 , 449 (1972); H. Chitoshi et al., Biochem. Biophy.
s.Res.Commun., 60 , 1345 (1974); Kurath P. et al., Hel
v. Chim. Acta., 56 , 1656 (1973) ； Bienert Michael
Chem. Abst. 86 , 455 (1976); Bienert M., Pharmazi.
e 32 , 397 (1977)] is known.

【０００４】しかしながら、前記の化学的方法において
は、保護されたＣ−末端カルボキシル基とアンモニアガ
スとを反応せしめる方法であり、この場合光学活性ペプ
チドのラセミ化を促進するため、ラセミ化を伴わずにＣ
−末端をアミド化することはできない。However, the above-mentioned chemical method is a method of reacting a protected C-terminal carboxyl group with ammonia gas. In this case, since racemization of the optically active peptide is promoted, racemization is not involved. To C
-The end cannot be amidated.

【０００５】[0005]

【発明が解決しようとする課題】従って本発明はラセミ
化を伴わないでペプチドのＣ−末端アミド化を行うため
の新規な手段を提供しようとするものである。The present invention therefore seeks to provide a novel means for carrying out the C-terminal amidation of peptides without racemization.

【０００６】[0006]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく種々検討した結果、次の式（Ｉ）：As a result of various studies to solve the above problems, the inventors of the present invention obtained the following formula (I):

【化３】 で示される化合物をアミノ基供与体として使用すること
により、Ｃ−末端カルボキシル基が保護されていないペ
プチドの該カルボキシル基を、ラセミ化を伴わないでア
ミド化できることを見出し、本発明を完成した。[Chemical 3] The present invention was completed by finding that the carboxyl group of a peptide whose C-terminal carboxyl group is not protected can be amidated without racemization by using the compound represented by the formula (3) as an amino group donor.

【０００７】従って本発明は、次の式（Ｉ）：Accordingly, the present invention provides the following formula (I):

【化４】 （式中、Ｒ¹ は水素原子、低級アルキル基、低級アルケ
ニル基、低級アルキニル基、ベンジル基又はアルキル基
によりもしくはアルキル基と芳香族基とにより置換され
たシリル基を表わし；Ｒ² は水素原子又はアミノ保護基
を表わす）により表わされるα−ヒドロキシグリシンア
ミド誘導体、及びその塩を提供する。[Chemical 4] (In the formula, R ¹ represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, a lower alkenyl group, a lower alkynyl group, a benzyl group or a silyl group substituted by an alkyl group or an alkyl group and an aromatic group; R ² represents a hydrogen atom. Or an amino-protecting group), and an α-hydroxyglycinamide derivative thereof, and a salt thereof.

【０００８】本発明はさらに、前記のα−ヒドロキシグ
リシンアミド誘導体又はその塩の製造方法であって、次
の式（II）：The present invention further provides a method for producing the aforementioned α-hydroxyglycinamide derivative or a salt thereof, which comprises the following formula (II):

【化５】 〔式中、Ｒ¹ 及びＲ² は式（Ｉ）において定義したのと
同じ意味を有し、そしてＲ³ は水素原子又はカルボキシ
ル保護基である〕で表わされるα−ヒドロキシグリシン
誘導体を溶媒中アンモニアで処理し、所望によりアミノ
保護基を除去し、そして所望により得られた化合物をそ
の塩に転換することを特徴とする方法を提供する。[Chemical 5] [Wherein R ¹ and R ² have the same meaning as defined in formula (I), and R ³ is a hydrogen atom or a carboxyl-protecting group]. And optionally removing the amino protecting group and optionally converting the resulting compound into its salt.

【０００９】本発明はさらに、アミノ酸もしくはペプチ
ドを又はこれらの誘導体を前記のα−ヒドロキシグリシ
ン誘導体と反応せしめることを特徴とするＣ−末端アミ
ド化ペプチドの製造方法を提供する。The present invention further provides a method for producing a C-terminal amidated peptide, which comprises reacting an amino acid or peptide or a derivative thereof with the aforementioned α-hydroxyglycine derivative.

【００１０】[0010]

【具体的な説明】本発明において、Ｒ₁ の低級アルキル
基は６個以下、好ましくは４個以下の炭素原子を有する
アルキル基であり、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プ
ロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル
基、ｔｅｒｔ−ブチル基、分岐していてもよいペンチル
基又は分岐していてもよいヘキシル基である。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION In the present invention, the lower alkyl group for R _{1 is} an alkyl group having 6 or less, preferably 4 or less carbon atoms, such as methyl group, ethyl group, n-propyl group and isopropyl group. , N-butyl group, isobutyl group, tert-butyl group, optionally branched pentyl group, or optionally branched hexyl group.

【００１１】Ｒ₁ の低級アルケニル基は、炭素原子数６
個以下、そして好ましくは４個以下のアルケニル基であ
り、例えばエテニル基、アリル基、任意の位置に二重結
合を有するブテニル基等である。Ｒ₁ の低級アルキニル
基は、炭素原子数６個以下、そして好ましくは４個以下
のアルキニル基、例えばエチニル基、等である。The lower alkenyl group for R ₁ has 6 carbon atoms.
The number of alkenyl groups is not more than 4, and preferably not more than 4, and examples thereof include an ethenyl group, an allyl group, and a butenyl group having a double bond at any position. The lower alkynyl group for R _{1 is} an alkynyl group having 6 or less, and preferably 4 or less carbon atoms, such as an ethynyl group.

【００１２】Ｒ₁ の低級アルキル基により置換されたシ
リル基は、１〜３個の低級アルキル基により置換された
シリル基であり、この場合の低級アルキル置換基は、Ｒ
₁ について前に記載した低級アルキル基のいずれか、又
はそれらの組合せである。低級アルキル基により置換さ
れたシリル基は、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルジメチル
シリル基である。アルキル及び芳香族基により置換され
たシリル基は、前記のアルキル基及びフェニル基により
置換されたシリル基であり、例えばｔｅｒｔ−ブチルジ
フェニルシリル基である。The silyl group substituted by the lower alkyl group of R ₁ is a silyl group substituted by 1 to 3 lower alkyl groups, and the lower alkyl substituent in this case is R 1.
_It is any of the lower alkyl groups previously described for ₁ or a combination thereof. The silyl group substituted by a lower alkyl group is preferably a tert-butyldimethylsilyl group. The silyl group substituted with an alkyl or aromatic group is a silyl group substituted with the above alkyl group and a phenyl group, and is, for example, a tert-butyldiphenylsilyl group.

【００１３】Ｒ₂ のアミノ保護基としては、アミノ酸又
はペプチド化学の分野において常用されている保護基を
使用することができ、例えばオキシカルボニル型保護
基、例えばベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ−）、ｐ
−メトキシベンジルオキシカルボニル〔Ｚ（ＯＭｅ）
−〕、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ−）、又
は２−ビフェニルイソプロポキシカルボニル（Ｂｐｏｃ
−）等；アシル型保護基、例えばＨＣＯ−、フタレート
基（Ｐｈｔ−）、又はｏ−ニトロフェニルチオ基（Ｎｐ
ｓ−）等；あるいはアルキル基保護基、例えばトリフェ
ニルメチル基（Ｔｒｔ−）等を用いることができる。As the amino protecting group for R _2, a protecting group commonly used in the field of amino acid or peptide chemistry can be used, for example, an oxycarbonyl type protecting group such as benzyloxycarbonyl (Cbz-), p.
-Methoxybenzyloxycarbonyl [Z (OMe)
-], Tert-butoxycarbonyl (Boc-), or 2-biphenylisopropoxycarbonyl (Bpoc)
-) Etc .; acyl-type protecting groups such as HCO-, phthalate groups (Pht-), or o-nitrophenylthio groups (Np).
s-) and the like; or an alkyl group-protecting group such as a triphenylmethyl group (Trt-) and the like can be used.

【００１４】本発明のα−ヒドロキシグリシンアミド誘
導体の塩は酸付加塩であり、例えば無機塩、例えばハロ
ゲン化水素酸塩、例えば弗化水素酸塩、塩酸塩もくしは
臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、又はリン酸塩、あるい
は有機酸塩、例えば蟻酸塩、酢酸塩、等が挙げられる。The salt of the α-hydroxyglycinamide derivative of the present invention is an acid addition salt, for example, an inorganic salt such as a hydrohalide salt such as hydrofluoride salt, hydrochloride or hydrobromide salt, Examples thereof include nitrates, sulfates or phosphates, or organic acid salts such as formates and acetates.

【００１５】本発明の式（Ｉ）により示される化合物
は、例えば、次の式（II）The compound represented by the formula (I) of the present invention can be obtained, for example, by the following formula (II)

【化６】 〔式中、Ｒ¹ 及びＲ² は式（Ｉ）において定義したのと
同じ意味を有し、そしてＲ³ は水素又はカルボニル保護
基である〕で表わされるα−ヒドロキシグリシン誘導体
を溶媒中でアンモニアで処理し、所望によりアミノ保護
基Ｒ² を除去することにより製造することができる。[Chemical 6] [Wherein R ¹ and R ² have the same meaning as defined in formula (I), and R ³ is hydrogen or a carbonyl protecting group], and the α-hydroxyglycine derivative is ammonia in a solvent. Can be prepared by treating with and removing the amino protecting group R ² if desired.

【００１６】カルボニル保護基Ｒ³ はアンモニアによる
処理によりアミノ基により置換され得る常用のカルボキ
シ保護基であり、例えば、低級アルキルオキシ基、例え
ばメトキシ基（−ＯＭｅ）、エトキシ基（−ＯＥｔ）、
ベンジルオキシ基（−ＯＢｚｌ）又はｔｅｒｔ−ブトキ
シ基（−ＯｔＢｕ）、あるいはアリールオキシ基、例え
ばｐ−ニトロフェノキシ基（−ＯＮｐ）、等である。The carbonyl protecting group R ³ is a customary carboxy protecting group which can be replaced by an amino group by treatment with ammonia, for example a lower alkyloxy group such as a methoxy group (-OMe), an ethoxy group (-OEt),
A benzyloxy group (-OBzl) or a tert-butoxy group (-OtBu), or an aryloxy group such as a p-nitrophenoxy group (-ONp).

【００１７】反応のための溶媒としては、低級アルコー
ル、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、エ
ーテル、例えばメチルエチルエーテル、ジエチルエーテ
ル、イソプロピルエーテル、等、常用の有機溶媒を使用
することができる。反応は式（II）で示される化合物を
前記の溶媒に溶解した溶液にアンモニアを、例えば−７
８℃〜４０℃、好ましくは０℃〜２５℃、例えば室温に
おいて、減圧下、常圧下又は加圧下で、吹き込むことに
より行うことができる。As a solvent for the reaction, a conventional organic solvent such as a lower alcohol such as methanol, ethanol, propanol, an ether such as methyl ethyl ether, diethyl ether, isopropyl ether and the like can be used. The reaction is carried out by adding ammonia to a solution prepared by dissolving the compound represented by the formula (II) in the above solvent, for example, -7
It can be carried out by blowing at 8 ° C. to 40 ° C., preferably 0 ° C. to 25 ° C., for example, room temperature under reduced pressure, normal pressure or increased pressure.

【００１８】この反応により、Ｒ² がアミノ保護基であ
る本発明の化合物（Ｉ）が得られる。この化合物からＲ
² のアミノ保護基を除去してＲ² が水素である本発明の
化合物（Ｉ）を得るには、アミノ保護基Ｒ² の種類に応
じて通常の脱保護処理を行えばよい。例えば保護基Ｒ²
がベンジルオキシカルボニル、Ｐ−メトキシベンジルオ
キシカルボニル等である場合、水素化触媒、例えばパラ
ジウム／炭素等の存在下で水素ガスで処理することによ
り脱保護を行うことができる。また保護基Ｒ² がｔｅｒ
ｔ−ブトキシカルボニルである場合、塩酸／ジオキサン
により脱保護を行うことができる。本発明の化合物
（Ｉ）の塩は、例えば前記脱保護処理を、酸、例えば塩
酸の存在下で行なうことにより製造することができる。This reaction gives the compound (I) of the present invention in which R ² is an amino-protecting group. R from this compound
^In order to obtain the compound (I) of the present invention in which R ² is hydrogen by removing the amino protecting group of ² , usual deprotection treatment may be carried out depending on the kind of the amino protecting group R ² . For example, the protecting group R ²
Is benzyloxycarbonyl, P-methoxybenzyloxycarbonyl or the like, deprotection can be carried out by treating with hydrogen gas in the presence of a hydrogenation catalyst such as palladium / carbon. In addition, the protecting group R ² is ter
In the case of t-butoxycarbonyl, deprotection can be performed with hydrochloric acid / dioxane. The salt of the compound (I) of the present invention can be produced, for example, by carrying out the deprotection treatment in the presence of an acid such as hydrochloric acid.

【００１９】中間体化合物（II）の内Ｒ¹ が水素原子で
ない化合物は、例えば次の２つの方法により製造するこ
とができる。１つは式（II）で示される化合物の内Ｒ¹
が水素である化合物に水素以外のＲ¹ を導入することに
より製造することができる。水素以外の基Ｒ¹ の導入
は、対応する基の官能性誘導体、例えばハロゲン誘導体
により行うことができる。例えば低級アルキル置換シリ
ル基の導入のためにはシリル基のハロゲン化物により、
例えばｔｅｒｔ−ブトキシジメチルシリル基の導入には
塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルを用いることがで
きる。この反応はジメチルホルムアミド等の溶媒中０℃
〜３０℃の温度において行うことができる。A compound of the intermediate compound (II) in which R ¹ is not a hydrogen atom can be produced, for example, by the following two methods. One is R ^{1 of the} compounds represented by the formula (II)
It can be produced by introducing R ¹ other than hydrogen into a compound in which is hydrogen. The introduction of groups R ¹ other than hydrogen can be carried out by functional derivatives of the corresponding groups, for example halogen derivatives. For example, in order to introduce a lower alkyl-substituted silyl group, a halide of the silyl group,
For example, tert-butyldimethylsilyl chloride can be used to introduce a tert-butoxydimethylsilyl group. This reaction is performed in a solvent such as dimethylformamide at 0 ° C.
It can be carried out at a temperature of -30 ° C.

【００２０】また、低級アルケニル又は低級アルキニル
基の導入のためには対応するアルケン又はアルキンのハ
ロゲン誘導体を用いることができ、例えばアリル基の導
入のためには、酸化銀のごとき触媒の存在下ヨウ化アリ
ルのごときハロゲン化アリルを用いて行うことができ
る。この反応は、例えばジメチルホルムアミド等の溶媒
中、−１０℃〜５０℃、好ましくは０℃〜２５℃におい
て行うことができる。Further, a halogen derivative of a corresponding alkene or alkyne can be used for introducing the lower alkenyl or lower alkynyl group. For example, for introducing the allyl group, iodide in the presence of a catalyst such as silver oxide can be used. It can be carried out using an allyl halide such as allyl halide. This reaction can be carried out in a solvent such as dimethylformamide at -10 ° C to 50 ° C, preferably 0 ° C to 25 ° C.

【００２１】Ｒ¹ が水素でない中間体化合物（II）を製
造するための他の方法は、Ｒ¹ 及びＲ³ が共に水素原子
である式（II）の化合物を、低級アルコール、例えばメ
タノール又はエタノールを溶媒として用いて塩化チオニ
ルにより処理する方法であり、この場合にはＲ¹ 及びＲ
³ が同一であり且つ前記低級アルコール溶媒に対応する
低級アルキル基である式（II）の化合物が得られる。こ
の反応は−１０℃〜４０℃、好ましくは０℃〜２５℃に
おいて行うことができる。Another method for preparing an intermediate compound (II) in which R ¹ is not hydrogen is a compound of formula (II) in which R ¹ and R ³ are both hydrogen atoms, and a lower alcohol such as methanol or ethanol. Is used as a solvent and treated with thionyl chloride. In this case, R ¹ and R
A compound of formula (II) in which ³ is the same and is a lower alkyl group corresponding to the lower alcohol solvent is obtained. This reaction can be carried out at -10 ° C to 40 ° C, preferably 0 ° C to 25 ° C.

【００２２】Ｒ¹ が水素である式（II）の中間体は、例
えば次の２つの方法により製造することができる。一方
の方法によれば、グリセルアルデヒドＣＨＯ−ＣＯＯＨ
をアミノ保護基Ｒ² により保護されたアミンＲ² ＮＨ₂
と反応せしめることにより得られる。この反応は、例え
ばアセトン、エーテル等の溶媒中で２０℃〜７５℃に
て、例えばPhilip X.Masciantonio ら、米国特許Ｎｏ．
３，６６８，１２１；Stanlen D.Young ら、J.Am.Chem.
Soc.111 , 1933(1989)により記載されている方法により
行うことができる。この場合、Ｒ¹ 及びＲ³ が共に水素
原子である式（II）の化合物が得られる。The intermediate of the formula (II) in which R ¹ is hydrogen can be produced, for example, by the following two methods. According to one method, glyceraldehyde CHO-COOH
Amine protected with an amino protecting group R _² R ² NH ²
It is obtained by reacting with. This reaction is carried out, for example, in a solvent such as acetone or ether at 20 ° C to 75 ° C, for example, by Philip X. Masciantonio et al.
3,668,121; Stanlen D. Young et al., J. Am. Chem.
It can be performed by the method described by Soc. 111 , 1933 (1989). In this case, a compound of formula (II) in which both R ¹ and R ³ are hydrogen atoms is obtained.

【００２３】Ｒ¹ が水素である式（II）の中間体を製造
するための他の方法は、次の式（III ）：Another method for preparing intermediates of formula (II) in which R ¹ is hydrogen is the following formula (III):

【化７】 〔式中、Ｒ³ は式（II）において定義したのと同じ意味
を有し、そしてＲ⁴ は低級アルキル基を表わす〕により
示される化合物を、アミノ保護基Ｒ² により保護された
アミンＲ² ＮＨ₂ と反応せしめる方法である。この反応
は、例えばテトラヒドロフラン等の溶媒中で２０℃〜８
０℃の温度、例えば使用した溶媒の還流温度において行
うことができる。なお、前記Ｒ⁴ の低級アルキル基はＲ
¹ の低級アルキル基と同じ意味を有する。[Chemical 7] [Wherein R ³ has the same meaning as defined in formula (II), and R ⁴ represents a lower alkyl group], a compound R ² protected by an amino protecting group R ² This is a method of reacting with NH ₂ . This reaction is carried out in a solvent such as tetrahydrofuran at 20 ° C to 8 ° C.
It can be carried out at a temperature of 0 ° C., for example at the reflux temperature of the solvent used. The lower alkyl group of R ⁴ is R
^It has the same meaning as the lower alkyl group of ¹ .

【００２４】こうした得られた、式（Ｉ）で示される本
発明のヒドロキシグリシン誘導体を用いてペプチド又は
アミノ酸誘導体のＣ−末端のアミド化を行うことができ
る。このためには、式（Ｉ）の化合物と、Ｃ−末端が保
護されていないペプチドとを、非プロトン性溶媒、例え
ばジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ヘキサンメチルリ
ン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）、ジメチルスルホキシド
（ＤＭＳＯ）等の中で、脱水縮合剤、例えばジシクロヘ
キシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、水溶性カルボジイミ
ド（ＷＳＣＤ）の存在下で反応させる。反応は、好まし
くは−５０℃〜室温の範囲内で行う。The C-terminal amidation of a peptide or amino acid derivative can be carried out by using the thus obtained hydroxyglycine derivative of the present invention represented by the formula (I). To this end, a compound of formula (I) and a peptide whose C-terminal is not protected are treated with an aprotic solvent such as dimethylformamide (DMF), hexanemethylphosphoric triamide (HMPA), dimethylsulfoxide (DMSO). ) And the like in the presence of a dehydration condensing agent such as dicyclohexylcarbodiimide (DCC) and water-soluble carbodiimide (WSCD). The reaction is preferably carried out within the range of -50 ° C to room temperature.

【００２５】この方法は、例えば、Ｃ−末端がアミド化
された生理活性ペプチド、例えばメラニン細胞刺激ホル
モン放出抑制ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモ
ン、カルシトニン類、例えばヒトカルシトニン、サケカ
ルシトニン等の製造のために使用することができる。This method is for producing, for example, a C-terminal amidated bioactive peptide such as a melanocyte-stimulating hormone release inhibitory hormone, thyroid stimulating hormone releasing hormone, calcitonins such as human calcitonin, salmon calcitonin and the like. Can be used for

【００２６】次に、実施例により本発明をさらに具体的
に説明する。実施例１． １−１ α−ヒドロキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルグ
リシンメチルエステル（４．１１ｇ，２０mmol) とイミ
ダゾールを室温でＤＭＦにとかし０℃に冷却した。更に
その溶液にその温度で塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシ
リルを加え、１０分間攪拌した。溶液を室温に戻して１
時間攪拌した後、飽和食塩水を加え酢酸エチルにより抽
出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒
を留去した。Next, the present invention will be described more specifically with reference to examples. Example 1. 1-1 α-hydroxy-N-tert-butoxycarbonylglycine methyl ester (4.11 g, 20 mmol) and imidazole were dissolved in DMF at room temperature and cooled to 0 ° C. Further, tert-butyldimethylsilyl chloride was added to the solution at that temperature, and the mixture was stirred for 10 minutes. Bring the solution to room temperature 1
After stirring for an hour, saturated brine was added and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and the solvent was distilled off.

【００２７】得られた油状物質をエタノール（５０ml）
に溶かしその溶液に０℃で過剰のアンモニアを吹き込ん
だ後、余剰のアンモニアを減圧下で取り除き、さらにエ
タノールを留去して得た粗生成物をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーにより精製して、目的とするα−ｔｅ
ｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブ
トキシカルボニルグリシンアミド（６．１０ｇ，ｑｕａ
ｎｔ．）を得た。¹HNHR δ(CDCl₃) 0.16(s,3H), 0.21
(s,3H), 0.92(s,9H), 5.46(d,1H,J=9Hz), 5.63(d,1H,J=
9Hz), 6.22-6.82(br,2H)The oily substance obtained was treated with ethanol (50 ml).
And blowing excess ammonia at 0 ° C. into the solution, the excess ammonia was removed under reduced pressure, and ethanol was distilled off to obtain a crude product, which was purified by silica gel column chromatography to obtain the desired product. α-te
rt-Butyldimethylsilyloxy-N-tert-butoxycarbonylglycinamide (6.10 g, qua
nt. ) Got. ¹ HNHR δ (CDCl ₃ ) 0.16 (s, 3H), 0.21
(s, 3H), 0.92 (s, 9H), 5.46 (d, 1H, J = 9Hz), 5.63 (d, 1H, J =
9Hz), 6.22-6.82 (br, 2H)

【００２８】１−２ 前記１−１の出発物質であるα−ヒドロキシ−Ｎ−ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニルグリシンメチルエステルは次
の様にして製造した。カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
（２．８３ｇ，２３．６mmol）とグリオキシル酸一水和
物（２．０２ｇ，２１．５mmol）をアセトン（５０ml）
に溶かし、一昼夜還流した。次にその溶液を０℃に冷却
し、その温度で過剰のジアゾメタン−エーテル溶液と処
理し、溶媒を留去した。 1-2 α-hydroxy-N-te which is the starting material of 1-1 above
rt-Butoxycarbonylglycine methyl ester was produced as follows. Tert-Butyl carbamate (2.83 g, 23.6 mmol) and glyoxylic acid monohydrate (2.02 g, 21.5 mmol) in acetone (50 ml)
And was refluxed for a whole day and night. The solution was then cooled to 0 ° C., treated with excess diazomethane-ether solution at that temperature and the solvent was distilled off.

【００２９】その後飽和食塩水を加えクロロホルムによ
り抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、溶媒
を留去して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーにより精製し、目的とするα−ヒドロキシ
−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルグリシンメチルエ
ステル（２．５６ｇ，５８％）を得た。¹ HNMR δ(CDCl₃) 1.46(s,9H),1.65(br s,1H), 3.84(s,3
H), 5.27-5.52(br,1H),5.59-5.90(br,1H) IR(NaCl) 1755(s), 1690(s), 1528(s)cm^-1 Then, a saturated saline solution was added, the mixture was extracted with chloroform, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off, and the resulting crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain the desired α-hydroxy group. -N-tert-Butoxycarbonylglycine methyl ester (2.56 g, 58%) was obtained. ¹ HNMR δ (CDCl ₃ ) 1.46 (s, 9H), 1.65 (br s, 1H), 3.84 (s, 3
H), 5.27-5.52 (br, 1H), 5.59-5.90 (br, 1H) IR (NaCl) 1755 (s), 1690 (s), 1528 (s) cm ^-1

【００３０】１−３ 前記１−１の出発物質であるα−ヒドロキシ−Ｎ−ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニルグリシンメチルエステルを、
１−２とは別の方法によって製造した。カルバミン酸ｔ
ｅｒｔ−ブチル（１１．３５ｇ，９５．０mmol）と１−
ヒドロキシ−１−メトキシ酢酸メチルエステル（１４．
３５ｇ，１１９．５mmol）を無水ＴＨＦ（５０ml）に溶
かして一昼夜還流した。その後いったん室温に戻して１
−ヒドロキシ−１−メトキシ酢酸メチルエステル（１．
１５ｇ，９．６mmol）を加え、更に８時間還流した。反
応溶液が室温に戻るまで放置した後、溶媒を留去し得ら
れた粗生成物をクロロホルム−ヘキサン溶液から再結晶
して、純粋なα−ヒドロキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシ
カルボニルグリシンメチルエステル（１６．４２ｇ，８
４％）を得た。 1-3 α-hydroxy-N-te which is the starting material of 1-1 above
rt-butoxycarbonylglycine methyl ester,
It was produced by a method different from 1-2 . Carbamic acid t
ert-butyl (11.35 g, 95.0 mmol) and 1-
Hydroxy-1-methoxyacetic acid methyl ester (14.
35 g, 119.5 mmol) was dissolved in anhydrous THF (50 ml) and refluxed for 24 hours. Then return to room temperature and
-Hydroxy-1-methoxyacetic acid methyl ester (1.
15 g, 9.6 mmol) was added and the mixture was refluxed for 8 hours. After leaving the reaction solution to return to room temperature, the solvent was distilled off and the obtained crude product was recrystallized from a chloroform-hexane solution to obtain pure α-hydroxy-N-tert-butoxycarbonylglycine methyl ester (16 .42g, 8
4%) was obtained.

【００３１】実施例２．前記１−２又は１−３に従って
製造したα−ヒドロキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカル
ボニルグリシンメチルエステル（１．２１ｇ，５．９mm
ol）をＤＭＦ（１０ml）に溶かし、室温で酸化銀（１．
０４ｇ，４．５mmol）及びヨウ化ベンジル（１．９９
ｇ，９．１mmol）を加えた。そのまま室温で一昼夜攪拌
した後、沈澱をろ別し母液に水を加えて酢酸エチルで抽
出した。抽出溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥した
後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより粗精製した。 Example 2. Α-Hydroxy-N-tert-butoxycarbonylglycine methyl ester prepared according to 1-2 or 1-3 (1.21 g, 5.9 mm)
ol) was dissolved in DMF (10 ml) and silver oxide (1.
04 g, 4.5 mmol) and benzyl iodide (1.99)
g, 9.1 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 24 hours, the precipitate was filtered off, water was added to the mother liquor, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The extract solution was dried over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was evaporated, and the residue was roughly purified by silica gel column chromatography.

【００３２】得られた油状物質をエタノール（５０ml）
に溶かしその溶液に０℃で過剰のアンモニアを吹き込ん
だ後、余剰のアンモニアを減圧下で取り除き、溶媒を留
去して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーにより精製し、α−ベンジルオキシ−Ｎ−ｔｅ
ｒｔ−ブトキシカルボニルグリシンアミド（０．３９７
ｇ，２２％）を得た。 m.p. 115−120 ℃¹ HNMR δ(CDCl₃) 1.44(s,9H), 4.61(d,1H,J=11.3Hz),
4.79(d,1H,J=11.3Hz), 5.4(d,1H,J=9.0Hz), 5.75(brd,1
H,J=9.0Hz), 6.00(br,1H), 6.52(br,1H), 7.35(s,5H) IR(NaCl) 1698(s), 1664(s), 1502(s), 732(m), 695
(m) cm^-1 元素分析値 (C₁₄H₂₀O₄N₂):Cacld.C:59.99, H:7.19, N:
9.99 Obsd. C:59.94, H:7.33, N:10.28The oily substance obtained was treated with ethanol (50 ml).
The resulting product was dissolved in water and excess ammonia was blown into the solution at 0 ° C., excess ammonia was removed under reduced pressure, the solvent was distilled off, and the resulting crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain α-benzyloxy. -N-te
rt-Butoxycarbonylglycinamide (0.397
g, 22%). mp 115-120 ℃ ¹ HNMR δ (CDCl ₃ ) 1.44 (s, 9H), 4.61 (d, 1H, J = 11.3Hz),
4.79 (d, 1H, J = 11.3Hz), 5.4 (d, 1H, J = 9.0Hz), 5.75 (brd, 1
H, J = 9.0Hz), 6.00 (br, 1H), 6.52 (br, 1H), 7.35 (s, 5H) IR (NaCl) 1698 (s), 1664 (s), 1502 (s), 732 (m ), 695
(m) cm ^-1 Elemental analysis value (C ₁₄ H ₂₀ O ₄ N ₂ ): Cacld. C: 59.99, H: 7.19, N:
9.99 Obsd. C: 59.94, H: 7.33, N: 10.28

【００３３】実施例３．前記１−２又は１−３に従って
製造したα−ヒドロキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカル
ボニルグリシンメチルエステル（２．０７ｇ，１０．１
mmol）をＤＭＦ（２０ml）に溶かし、室温で酸化銀
（１．３９ｇ，６．０mmol）及びヨウ化アリル（１．２
ml，１２．９mmol）を加えた。そのまま室温で一昼夜攪
拌した後、沈澱をろ別し母液に水を加えて酢酸エチルで
抽出した。抽出溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥した
後、溶媒を留去して更にチオ硫酸ナトリウム水溶液を加
え、酢酸エチルにより抽出し反応副生成物であるヨウ素
を取り除いた。 Example 3. Α-Hydroxy-N-tert-butoxycarbonylglycine methyl ester prepared according to 1-2 or 1-3 above (2.07 g, 10.1
mmol) in DMF (20 ml), and at room temperature silver oxide (1.39 g, 6.0 mmol) and allyl iodide (1.2).
ml, 12.9 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 24 hours, the precipitate was filtered off, water was added to the mother liquor, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The extracted solution was dried over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off, an aqueous sodium thiosulfate solution was added, and the mixture was extracted with ethyl acetate to remove iodine as a by-product of the reaction.

【００３４】得られた油状物質をエタノール（５０ml）
に溶かしその溶液に０℃で過剰のアンモニアを吹き込ん
だ後、余剰のアンモニアを減圧下で取り除き、溶媒を留
去し得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにより精製し、α−アリルオキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ
−ブトキシカルボニルグリシンアミド（０．６２５ｇ，
２７％）を得た。¹ HNMR δ(CDCl₃) 1.45(s,9H), 4.14(dd,2H,J=7.2,1.8H
z), 5.11-5.56(m,3H), 5.70-6.20(m,2H), 6.33-7.01(m,
2H) IR(CDCl₃) 2975(w), 1705(s, br), 1498(m), 990(sh.
w) cm ^-1 The oily substance obtained was treated with ethanol (50 ml).
And blowing excess ammonia at 0 ° C. into the solution, the excess ammonia was removed under reduced pressure, the solvent was distilled off and the resulting crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain α-allyloxy-N. -Tert
-Butoxycarbonylglycinamide (0.625 g,
27%). ¹ HNMR δ (CDCl ₃ ) 1.45 (s, 9H), 4.14 (dd, 2H, J = 7.2,1.8H
z), 5.11-5.56 (m, 3H), 5.70-6.20 (m, 2H), 6.33-7.01 (m,
2H) IR (CDCl ₃ ) 2975 (w), 1705 (s, br), 1498 (m), 990 (sh.
w) cm ^-1

【００３５】実施例４． ４−１ α−ヒドロキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシ
ン（４．４４ｇ，１９．７mmol）をメタノール（２０m
l）に溶かした溶液に、０℃で塩化チオニル（２．９m
l，４０．０mmol）を滴下してその温度で３０分攪拌
し、さらに室温で２時間攪拌した。その後溶媒を留去し
得られた粗生成物をメタノール（５０ml）に溶かした溶
液を０℃に冷却し、過剰のアンモニアを吹き込んだ。 Example 4. 4-1 α-hydroxy-N-benzyloxycarbonylglycine (4.44 g, 19.7 mmol) was added to methanol (20 m
l) in a solution of thionyl chloride (2.9 m
(1, 40.0 mmol) was added dropwise, and the mixture was stirred at that temperature for 30 minutes and further at room temperature for 2 hours. Then, the solvent was distilled off, and the resulting crude product was dissolved in methanol (50 ml). The solution was cooled to 0 ° C., and excess ammonia was blown thereinto.

【００３６】反応終了後、余剰のアンニモアを減圧下で
除去し溶媒を留去して得た白色結晶を、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーにより精製して、α−メトキシ−
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシンアミド（３．４
２ｇ，７３％）を得た。 m.p. 110−112 ℃¹ HNMR δ(CDCl₃) 3.44(s,3H), 5.16(s,2H), 5.31(d,1H,
J=8.8Hz), 5.45-5.98(br,2H), 6.28-6.68(br,1H), 7.36
(s,5H) IR(NaCl) 1680(s. br), 1540(s), 1520(s), 860(m), 7
00(m) cm^-1 元素分析値 (C₁₁H₁₄O₄N₂):Calcd.C:55.46, H:5.92, N:1
1.76 Obsd. C:55.70, H:5.94, N:11.58After the completion of the reaction, excess annimore was removed under reduced pressure and the solvent was distilled off to obtain white crystals, which were purified by silica gel column chromatography to obtain α-methoxy-
N-benzyloxycarbonylglycinamide (3.4
2 g, 73%) was obtained. mp 110-112 ℃ ¹ HNMR δ (CDCl ₃ ) 3.44 (s, 3H), 5.16 (s, 2H), 5.31 (d, 1H,
J = 8.8Hz), 5.45-5.98 (br, 2H), 6.28-6.68 (br, 1H), 7.36
(s, 5H) IR (NaCl) 1680 (s.br), 1540 (s), 1520 (s), 860 (m), 7
00 (m) cm ^-1 Elemental analysis value (C ₁₁ H ₁₄ O ₄ N ₂ ): Calcd.C: 55.46, H: 5.92, N: 1
1.76 Obsd. C: 55.70, H: 5.94, N: 11.58

【００３７】４−２ 前記１−４における出発物質α−ヒドロキシ−Ｎ−ベン
ジルオキシカルボニルグリシンは次のようにして製造し
た。カルバミン酸ベンジル（３０．２４ｇ，０．２mol)
とグリオキシル酸一水和物（２０．２６ｇ，０．２２mo
l)をジエチルエーテル（２００ml）に溶かし、室温で一
昼夜攪拌した後、生成した結晶をろ過、続くエーテル洗
浄によって純粋なα−ヒドロキシ−Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニルグリシン（３３．７８ｇ，７５％）を得た。 m.p. 200−205 ℃（分解）¹ HNMR δ(CD₃OD) 5.12(s,2H), 5.40(s,1H), 7.34(s,5H) 4-2 The starting material α-hydroxy-N-benzyloxycarbonylglycine in 1-4 above was prepared as follows. Benzyl carbamate (30.24g, 0.2mol)
And glyoxylic acid monohydrate (20.26g, 0.22mo
l) was dissolved in diethyl ether (200 ml) and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours, and the resulting crystals were filtered and washed with ether to give pure α-hydroxy-N-benzyloxycarbonylglycine (33.78 g, 75%). It was mp 200-205 ℃ (decomposition) ¹ HNMR δ (CD ₃ OD) 5.12 (s, 2H), 5.40 (s, 1H), 7.34 (s, 5H)

【００３８】実施例５．前記４−２に従って製造したα
−ヒドロキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリンシ
（２．２６ｇ，１０．０mmol）をエタノール（２０ml）
に溶かした溶液に、−１０℃で塩化チオニル（２ml，２
７．４mmol) を滴下し、室温で一昼夜攪拌した。その後
溶媒を留去して得られた粗生成物をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーにより精製して、α−エトキシ−Ｎ−
ベンジルオキシカルボニルグリシンエチルエステル
（２．８１ｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。 m.p. 66 −68℃¹ HNMR δ(CDCl₃) 1.22(t,3H,J=7.2Hz), 1.30(t,3H,J=7.
2Hz), 3.70(q,2H,J=7.2Hz), 4.24(q,2H,J=7.2Hz), 5.15
(s,2H), 5.33(d,1H,J=9.7Hz), 5.93(brd,1H,J=9.7Hz),
7.35(s,5H) IR(NaCl) 1740(s), 1700(s), 1540(s), 760(m), 700
(m) cm^-1 元素分析値 (C₁₄H₁₉O₅N): Calcd. C:59.78, H:6.81, N:
4.98 Obsd. C:60.03, H:6.88, N:4.89 Example 5. Α produced according to 4-2 above
-Hydroxy-N-benzyloxycarbonyl grind (2.26 g, 10.0 mmol) in ethanol (20 ml)
Thionyl chloride (2 ml, 2 ml) at -10 ° C.
(7.4 mmol) was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. After that, the solvent was distilled off and the obtained crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain α-ethoxy-N-
Benzyloxycarbonylglycine ethyl ester (2.81 g, quant.) Was obtained. mp 66 −68 ℃ ¹ HNMR δ (CDCl ₃ ) 1.22 (t, 3H, J = 7.2Hz), 1.30 (t, 3H, J = 7.
2Hz), 3.70 (q, 2H, J = 7.2Hz), 4.24 (q, 2H, J = 7.2Hz), 5.15
(s, 2H), 5.33 (d, 1H, J = 9.7Hz), 5.93 (brd, 1H, J = 9.7Hz),
7.35 (s, 5H) IR (NaCl) 1740 (s), 1700 (s), 1540 (s), 760 (m), 700
(m) cm ^-1 Elemental analysis value (C ₁₄ H ₁₉ O ₅ N): Calcd. C: 59.78, H: 6.81, N:
4.98 Obsd. C: 60.03, H: 6.88, N: 4.89

【００３９】実施例６．前記４−２に従って製造したα
−ヒドロキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシン
（２．２６ｇ，１０．０mmol）をイソプロピルアルコー
ル（２０ml）に溶かした溶液に、−１０℃で塩化チオニ
ル（２ml，２７．４mmol）を滴下し、室温で一昼夜攪拌
した。その後溶媒を留去して得られた粗生成物をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、α−イ
ソプロポキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシン
イソプロピルエステル（３．１０ｇ，ｑｕａｎｔ．）を
得た。¹ HNMR δ(CDCl₃) 1.16-1.37(m,12H), 3.87-4.22(m,1H),
4.57-5.20(m,1H), 5.14(s,2H), 5.33(d,1H,J=9.7Hz),
5.93(brd,1H,J=9.7Hz), 7.35(s,5H) IR(Neat) 1728(s,br), 1508(m), 740(m) cm^-1 Example 6. Α produced according to 4-2 above
To a solution of -hydroxy-N-benzyloxycarbonylglycine (2.26 g, 10.0 mmol) in isopropyl alcohol (20 ml) was added thionyl chloride (2 ml, 27.4 mmol) dropwise at -10 ° C, and the mixture was allowed to stand at room temperature overnight. It was stirred. Then, the solvent was distilled off and the obtained crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain α-isopropoxy-N-benzyloxycarbonylglycine isopropyl ester (3.10 g, quant.). ¹ HNMR δ (CDCl ₃ ) 1.16-1.37 (m, 12H), 3.87-4.22 (m, 1H),
4.57-5.20 (m, 1H), 5.14 (s, 2H), 5.33 (d, 1H, J = 9.7Hz),
5.93 (brd, 1H, J = 9.7Hz), 7.35 (s, 5H) IR (Neat) 1728 (s, br), 1508 (m), 740 (m) cm ^-1

【００４０】実施例７．実施例５に従って製造したα−
エトキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシンエチ
ルエステル（２．２９ｇ，８．１mmol）をエタノール
（８０ml）に溶かし、０℃に冷却してその温度で過剰の
アンモニアを吹き込んだ。反応終了後、余剰のアンモニ
アを減圧下で除去し溶媒を留去して得た白色結晶をヘキ
サン−酢酸エチル混合溶液で洗浄し、純粋なα−エトキ
シ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシンアミド
（１．５１ｇ，７７％）を得た。 m.p. 119−121 ℃¹ HNMR δ(CDCl₃) 1.23(t,3H,J=7.1Hz), 3.50-3.90(m,2
H), 5.14(s,2H), 5.37(d,1H,J=9.0Hz), 5.65-5.96(br,2
H), 6.41-6.71(br,1H), 7.35(s,5H) IR(NaCl) 1680(s), 1664(s), 1542(m), 1524(m), 760
(w), 740(w), 700(m) cm ^-1 元素分析値 (C₁₂H₁₆O₄N₂): Calcd. C:57.13, H:6.39,
N:11.10 Obsd. C:57.09, H:6.34, N:11.37[0040]Example 7.Α-prepared according to Example 5
Ethoxy-N-benzyloxycarbonylglycine ethyl
Ruester (2.29 g, 8.1 mmol) in ethanol
Dissolve in (80 ml), cool to 0 ° C. and add excess
Bubbling ammonia. After the reaction is completed, the excess ammoni
Was removed under reduced pressure and the solvent was distilled off to give white crystals.
Wash with a mixed solution of sun-ethyl acetate to obtain pure α-ethoxide.
Ci-N-benzyloxycarbonylglycinamide
(1.51 g, 77%) was obtained. m.p. 119-121 ° C¹ HNMR δ (CDCl₃) 1.23 (t, 3H, J = 7.1Hz), 3.50-3.90 (m, 2
H), 5.14 (s, 2H), 5.37 (d, 1H, J = 9.0Hz), 5.65-5.96 (br, 2
H), 6.41-6.71 (br, 1H), 7.35 (s, 5H) IR (NaCl) 1680 (s), 1664 (s), 1542 (m), 1524 (m), 760
(w), 740 (w), 700 (m) cm ^-1 Elemental analysis value (C₁₂H₁₆O_FourN₂): Calcd. C: 57.13, H: 6.39,
N: 11.10 Obsd. C: 57.09, H: 6.34, N: 11.37

【００４１】実施例８．実施例６に従って製造したα−
イソプロポキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシ
ンイソプロピルエステル（２．４８ｇ，８．０mmol）を
エタノール（４０ml）に溶かし、０℃に冷却してその温
度で過剰のアンモニアを５時間吹き込みさらにアンモニ
ア飽和状態で二日間攪拌した。反応終了後、余剰のアン
モニアを減圧下で除去し溶媒を留去して得た白色結晶を
ヘキサン−酢酸エチル混合溶液で洗浄し、純粋なα−イ
ソプロポキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルグリシン
アミド（１．６４ｇ，７７％）を得た。 m.p. 111−113 ℃¹ HNMR δ(CDCl₃) 1.18(d,3H,J=4.4Hz), 1.25(d,3H,J=4.
4Hz), 3.81-4.20(m,1H),5.15(s,2H), 5.44(d,1H,J=9.0H
z), 5.53-5.86(br,2H), 6.37-6.73(br,1H), 7.35(s,5H) IR(NaCl) 1668(s), 1660(s), 1538(m), 1530(m), 760
(w), 740(w), 700(m) cm ^-1 元素分析値 (C₁₃H₁₈O₄N₂): Calcd. C:58.63, H:6.81,
N:10.52 Obsd. C:58.60, H:6.82, N:10.54[0041]Example 8.Α-prepared according to Example 6
Isopropoxy-N-benzyloxycarbonylglycy
Isopropyl ester (2.48 g, 8.0 mmol)
Dissolve in ethanol (40 ml), cool to 0 ° C and warm
Blow excess ammonia for 5 hours depending on the temperature
The mixture was stirred for 2 days in a saturated state. After the reaction is complete,
The white crystals obtained by removing the monia under reduced pressure and distilling off the solvent
It was washed with a mixed solution of hexane-ethyl acetate to obtain pure α-ethyl acetate.
Sopropoxy-N-benzyloxycarbonylglycine
The amide (1.64 g, 77%) was obtained. m.p. 111-113 ℃¹ HNMR δ (CDCl₃) 1.18 (d, 3H, J = 4.4Hz), 1.25 (d, 3H, J = 4.
4Hz), 3.81-4.20 (m, 1H), 5.15 (s, 2H), 5.44 (d, 1H, J = 9.0H
z), 5.53-5.86 (br, 2H), 6.37-6.73 (br, 1H), 7.35 (s, 5H) IR (NaCl) 1668 (s), 1660 (s), 1538 (m), 1530 (m) , 760
(w), 740 (w), 700 (m) cm ^-1 Elemental analysis value (C₁₃H₁₈O_FourN₂): Calcd. C: 58.63, H: 6.81,
N: 10.52 Obsd. C: 58.60, H: 6.82, N: 10.54

【００４２】実施例９．実施例１（１−１）に従って製
造したα−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−Ｎ
−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルグリシンアミド（５．
０８ｇ，１６．７mmol）をジオキサン（１０ml）に溶か
し、０℃に冷却して４Ｎ塩酸／ジオキサン溶液（１７m
l）を加え、その温度で１時間攪拌した。反応を完結さ
せるために更にその温度で４Ｎ−塩酸／ジオキサン溶液
を加え、室温まで温度を上げて１時間攪拌した。その後
溶液にジエチルエーテルを加え、生成物をできるだけ沈
澱させてろ過し、更にエーテルで洗浄した後、沈澱を減
圧下で乾燥し純粋なα−ヒドロキシグリシンアミド塩酸
塩（１．８６ｇ，８８％）を得た。¹ HNMR δ(DMSO-d₆) 4.99(br s,1H), 7.62-8.03(br,2H),
8.32-8.85(br,3H) IR(KBr) 1686(s), 1581(m), 1546(m),1477(s), 843(m)
cm^-1 Example 9. Α-tert-butyldimethylsilyloxy-N produced according to Example 1 (1-1)
-Tert-butoxycarbonylglycinamide (5.
08g, 16.7mmol) was dissolved in dioxane (10ml), cooled to 0 ° C and 4N hydrochloric acid / dioxane solution (17m).
l) was added and stirred at that temperature for 1 hour. In order to complete the reaction, 4N-hydrochloric acid / dioxane solution was further added at that temperature, the temperature was raised to room temperature, and the mixture was stirred for 1 hour. After that, diethyl ether was added to the solution, and the product was precipitated as much as possible, filtered, washed with ether, and dried under reduced pressure to obtain pure α-hydroxyglycinamide hydrochloride (1.86 g, 88%). Obtained. ¹ HNMR δ (DMSO-d ₆ ) 4.99 (br s, 1H), 7.62-8.03 (br, 2H),
8.32-8.85 (br, 3H) IR (KBr) 1686 (s), 1581 (m), 1546 (m), 1477 (s), 843 (m)
cm ^-1

【００４３】実施例１０．実施例４（４−１）に従って
製造したα−メトキシ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
グリシンアミド（０．２４ｇ，１．０mmol）をメタノー
ルに溶かし、室温で１２Ｎの塩酸（０．１ml）及びパラ
ジウム−炭素（５０mg）を加え水素雰囲気下で、３０分
攪拌した。その後パラジウム−炭素をろ別し、母液の溶
媒を留去することにより目的とするα−メトキシグリシ
ンアミド塩酸塩（０．１４ｇ，ｑｕａｎｔ）を得た。¹ HNMR δ(CD₃OD) 3.35(s,3H), 5.01(s,1H)¹³ CNMRδ(CD₃OD) 42.1, 84.3(d,J=159.8Hz), 170.3 Example 10. Α-Methoxy-N-benzyloxycarbonylglycinamide (0.24 g, 1.0 mmol) prepared according to Example 4 (4-1) was dissolved in methanol, and 12N hydrochloric acid (0.1 ml) and palladium-carbon were added at room temperature. (50 mg) was added, and the mixture was stirred under a hydrogen atmosphere for 30 minutes. Then, palladium-carbon was filtered off, and the solvent of the mother liquor was distilled off to obtain the desired α-methoxyglycinamide hydrochloride (0.14 g, quant). ¹ HNMR δ (CD ₃ OD) 3.35 (s, 3H), 5.01 (s, 1H) ¹³ CNMR δ (CD ₃ OD) 42.1, 84.3 (d, J = 159.8Hz), 170.3

【００４４】実施例１１． アミノ酸のアミド化 実施例９に従って製造したα−ヒドロキシグリシンアミ
ド塩酸塩（７２．６mg，０．５７mmol）、Ｎ−ｔｅｒｔ
−ブトキシカルボニル−フェニルアラニン（１２５．８
mg，０．４８mmol）、及びＮ−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（７８mg，０．５８mmol）をジメチルホルムアミ
ド（４ml）に溶かし、−１０℃に冷却して水溶性カルボ
ジイミド（０．１ml，０．５５mmol）を滴下し０℃まで
温度を上げて２時間攪拌した。 Example 11. Amino acid amidation α-Hydroxyglycinamide hydrochloride prepared according to Example 9 (72.6 mg, 0.57 mmol), N-tert.
-Butoxycarbonyl-phenylalanine (125.8
mg, 0.48 mmol) and N-hydroxybenzotriazole (78 mg, 0.58 mmol) were dissolved in dimethylformamide (4 ml), cooled to -10 ° C and water-soluble carbodiimide (0.1 ml, 0.55 mmol) was added dropwise. Then, the temperature was raised to 0 ° C. and the mixture was stirred for 2 hours.

【００４５】その後水を加えてクロロホルムで抽出し有
機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し溶媒を留去、得ら
れた粗生成物を分取用ＴＬＣを用いて精製し、目的とす
るＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−フェニルアラニ
ンアミド（３８mg，３０％）を得た。 m.p. 142−149 ℃ 〔α〕_D ＝＋16.5°(EtOH , c=1.17)¹ HNMR δ(CDC1₃) 1.40(s,2H), 3.07(d,2H,J=6.8Hz), 4.
36(dt,1H,J=7.9,6.9), 4.92-5.20(brd,1H), 5.32-5.59
(br,1H), 5.59-5.93(br,1H), 7.25(s,5H)Thereafter, water was added and the mixture was extracted with chloroform, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off, and the obtained crude product was purified by preparative TLC to obtain the desired N-tert- Butoxycarbonyl-phenylalanine amide (38 mg, 30%) was obtained. mp 142-149 ° C (α) _D = + 16.5 ° (EtOH, c = 1.17) ¹ HNMR δ (CDC1 ₃ ) 1.40 (s, 2H), 3.07 (d, 2H, J = 6.8Hz), 4.
36 (dt, 1H, J = 7.9,6.9), 4.92-5.20 (brd, 1H), 5.32-5.59
(br, 1H), 5.59-5.93 (br, 1H), 7.25 (s, 5H)

【００４６】実施例１２． アミノ酸のアミド化 実施例９に従って製造したα−ヒドロキシグリシンアミ
ド塩酸塩（０．１２２ｇ，９．６mmol）、Ｎ−ｔｅｒｔ
−ブトキシカルボニル−プロリン（０．１６９ｇ，０．
７９mmol）、及びＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
（０．１２９ｇ，０．９５mmol）をジメチルホルムアミ
ド（５ml）に溶かし、−１０℃に冷却して水溶性カルボ
ジイミド（０．１ml，０．５５mmol）を滴下した。その
温度で５分間攪拌した後、０℃まで温度を上げてさらに
４時間攪拌した。 Example 12 Amino acid amidation α-hydroxyglycinamide hydrochloride prepared according to Example 9 (0.122 g, 9.6 mmol), N-tert.
-Butoxycarbonyl-proline (0.169 g, 0.
79 mmol) and N-hydroxybenzotriazole (0.129 g, 0.95 mmol) were dissolved in dimethylformamide (5 ml), cooled to -10 ° C and water-soluble carbodiimide (0.1 ml, 0.55 mmol) was added dropwise. After stirring at that temperature for 5 minutes, the temperature was raised to 0 ° C. and stirring was continued for 4 hours.

【００４７】その後食塩水を加えてクロロホルムで抽出
し有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し溶媒を留去、
得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、目的とするＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカ
ルボニル−プロリンアミド（０．０８１ｇ，４８％）を
得た。 m.p. 104−106 ℃ 〔α〕_D ＝−40.5°(EtOH , C=1.1)¹ HNMR δ(CDC1₃) 1.40(s,9H), 1.65-2.48(m,4H), 3.27-
3.63(brt,2H), 4.18-4.41(br,1H), 5.88-7.02(br,2H)After that, saline was added and the mixture was extracted with chloroform. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and the solvent was distilled off.
The obtained crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain the desired N-tert-butoxycarbonyl-prolinamide (0.081 g, 48%). mp 104-106 ℃ (α) _D = -40.5 ° (EtOH, C = 1.1) ¹ HNMR δ (CDC1 ₃ ) 1.40 (s, 9H), 1.65-2.48 (m, 4H), 3.27-
3.63 (brt, 2H), 4.18-4.41 (br, 1H), 5.88-7.02 (br, 2H)

【００４８】実施例１３． トリペプチドのアミド化 実施例９に従って製造したα−ヒドロキシグリシンアミ
ド塩酸塩（０．５８ｇ，４．６mmol）、Ｎ−ｔｅｒｔ−
ブトキシカルボニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ロイシル−グ
リシン（１．３７ｇ，４．２mmol）、及びＮ−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール（０．６３ｇ，４．７mmol）をジ
メチルホルムアミド（１５ml）に溶かし、−１０℃に冷
却して水溶性カルボジイミド（０．８５ml，４．６mmo
l）を滴下した。その温度で２０分間攪拌した後、０℃
まで温度を上げてさらに一昼夜攪拌した。 Example 13. Amidation of tripeptides α-Hydroxyglycinamide hydrochloride prepared according to Example 9 (0.58 g, 4.6 mmol), N-tert-
Butoxycarbonyl-L-prolyl-L-leucyl-glycine (1.37 g, 4.2 mmol) and N-hydroxybenzotriazole (0.63 g, 4.7 mmol) were dissolved in dimethylformamide (15 ml), and the mixture was heated to -10 ° C. Cool to water-soluble carbodiimide (0.85 ml, 4.6 mmo)
l) was added dropwise. After stirring for 20 minutes at that temperature, 0 ° C
The temperature was raised to and the mixture was further stirred overnight.

【００４９】その後食塩水を加えてクロロホルムで抽出
し有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し溶媒を留去、
得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、目的とするＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカ
ルボニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ロイシル−グリシンアミ
ド（０．７２６ｇ，５３％）を得た。 m.p. 119−121 ℃ 〔α〕_D ＝−51.0°(DMF, C=0.73)¹ HNMR δ(CDC1₃) 0.91(d,3H,J=5.4Hz), 0.95(d,3H,J=5.
4Hz),1.46(s,9H), 1.20-2.45(m.7H), 3.45(t,2H,J=6.6H
z), 3.91(brd,2H,J=5.93Hz), 4.08-4.53(m.2H),5.78(b
s,1H), 6.76(bs,1H), 7.03(bs,1H)Thereafter, saline was added thereto, extraction was performed with chloroform, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off.
The obtained crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain the desired N-tert-butoxycarbonyl-L-prolyl-L-leucyl-glycinamide (0.726 g, 53%). mp 119-121 ° C (α) _D = -51.0 ° (DMF, C = 0.73) ¹ HNMR δ (CDC1 ₃ ) 0.91 (d, 3H, J = 5.4Hz), 0.95 (d, 3H, J = 5.
4Hz), 1.46 (s, 9H), 1.20-2.45 (m.7H), 3.45 (t, 2H, J = 6.6H
z), 3.91 (brd, 2H, J = 5.93Hz), 4.08-4.53 (m.2H), 5.78 (b
s, 1H), 6.76 (bs, 1H), 7.03 (bs, 1H)

【００５０】実施例１４． アミノ酸のアミド化 実施例１０に従ってα−メトキシグリシンアミド塩酸塩
（７０mg，０．５mmol) 、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカル
ボニル−フェニルアラニン（１０６mg，０．４mmol）、
及びＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（６９mg，０．
５mmol）をジメチルホルムアミド（２ml）に溶かし、−
１０℃に冷却して水溶性カルボジイミド（０．１ml，
０．５５mmol）を滴下し、０℃まで温度を上げて２．５
時間攪拌した。その後食塩水を加えてクロロホルムで抽
出し有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し溶媒を留
去、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにより精製し、目的とするＮ−ｔｅｒｔ−ブトキ
シカルボニル−フェニルアラニンアミド（３７mg，３５
％）を得た。 Example 14 Amino acid amidation α-methoxyglycinamide hydrochloride (70 mg, 0.5 mmol), N-tert-butoxycarbonyl-phenylalanine (106 mg, 0.4 mmol), according to Example 10.
And N-hydroxybenzotriazole (69 mg, 0.
5 mmol) in dimethylformamide (2 ml),
Water-soluble carbodiimide (0.1 ml,
0.55 mmol) was added dropwise and the temperature was raised to 0 ° C. to reach 2.5
Stir for hours. After that, brine was added thereto, the mixture was extracted with chloroform, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off, and the obtained crude product was purified by silica gel column chromatography to obtain the desired N-tert-butoxycarbonyl-phenylalanine. Amide (37 mg, 35
%) Was obtained.

【００５１】実施例１５．α−ヒドロキシ−Ｎ−ｔｅｒ
ｔ−ブトキシカルボニルグリシンメチルエステル（１．
０３ｇ，５．０mmol) 及びイミダゾール（０．４１ｇ，
６．１mmol) をジメチルホルムアミド（３ml) に溶解
し、そしてこの溶液を−１０℃に冷却した。この溶液に
ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド（ＴＢＤＰ
ＳＣｌ）を添加し、そして混合物を室温にて２時間攪拌
した。この混合物を水で希釈し、そして酢酸エチルで溶
出した。有機相を塩水で洗浄し、そして無水硫酸マグネ
シウムで乾燥し、そして溶剤を減圧下で蒸発させた。 Example 15 α-hydroxy-N-ter
t-Butoxycarbonylglycine methyl ester (1.
03 g, 5.0 mmol) and imidazole (0.41 g,
6.1 mmol) was dissolved in dimethylformamide (3 ml) and the solution was cooled to -10 ° C. Tert-Butyldiphenylsilyl chloride (TBDP
SCl) was added and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was diluted with water and eluted with ethyl acetate. The organic phase was washed with brine and dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure.

【００５２】生成する結晶性残渣をエタノール（１００
ml）に溶解し、そしてこの溶液に０℃にて３時間アンモ
ニアを吹き込んだ。５℃にてさらに１時間攪拌した後、
過剰のアンモニアを真空蒸発せしめた。溶剤の蒸発の
後、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（ヘキサン／酢酸エチル）により精製してα−ｔｅｒｔ
−ブチルジフェニルシリルオキシ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブト
キシカルボニルグリシンアミド（２．１４ｇ、定量的）
を得た。¹ HNMR δ(CDC1₃) 1.07(s,9H), 1.31(s,9H), 5.25(d,1H,
J=8.7Hz), 5.44(d,1H,J=8.7Hz), 6.14(br,1H), 6.49(b
s,1H), 7.26-7.55(m.6H), 7.58-7.82(m,4H) IR(NaCl) 1708(s), 1690(s), 1678(s), 1520(m), 1080
(br,m), 740(m), 700(m)cm ^-1 The resulting crystalline residue was treated with ethanol (100
ml), and the solution was bubbled with ammonia at 0 ° C. for 3 hours. After stirring at 5 ° C for another hour,
Excess ammonia was evaporated in vacuo. After evaporation of the solvent, the crude product was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate) to obtain α-tert.
-Butyldiphenylsilyloxy-N-tert-butoxycarbonylglycinamide (2.14 g, quantitative)
Got ¹ HNMR δ (CDC1 ₃ ) 1.07 (s, 9H), 1.31 (s, 9H), 5.25 (d, 1H,
J = 8.7Hz), 5.44 (d, 1H, J = 8.7Hz), 6.14 (br, 1H), 6.49 (b
s, 1H), 7.26-7.55 (m.6H), 7.58-7.82 (m, 4H) IR (NaCl) 1708 (s), 1690 (s), 1678 (s), 1520 (m), 1080
(br, m), 740 (m), 700 (m) cm ^-1

【００５３】実施例１６．α−ヒドロキシ−Ｎ−ベンジ
ルオキシカルボニルグリシン（１．１２ｇ，５．０mmo
l) を２−プロピン−１−オール（５ml）に溶解し、そ
して０℃にて塩化チオニル（１．１ml，１５mmol）を滴
加した。混合物を０℃から室温になるまで１４時間攪拌
した。溶剤を真空除去し、そして生ずる粗生成物をエタ
ノール（３０ml）に溶解した。この溶液に０℃にてアン
モニアを吹き込み、そしてこの混合物をアンモニア雰囲
気下、室温にて一夜攪拌した。 Example 16. α-Hydroxy-N-benzyloxycarbonylglycine (1.12g, 5.0mmo
l) was dissolved in 2-propyn-1-ol (5 ml) and thionyl chloride (1.1 ml, 15 mmol) was added dropwise at 0 ° C. The mixture was stirred from 0 ° C. to room temperature for 14 hours. The solvent was removed in vacuo and the resulting crude product was dissolved in ethanol (30 ml). Ammonia was bubbled through the solution at 0 ° C., and the mixture was stirred at room temperature under ammonia atmosphere overnight.

【００５４】過剰のアンモニアを真空除去し、そして溶
剤を減圧蒸発せしめた。生成する油状残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）により精製し
てａ−（２−プロピン−１−オキシ）−Ｎ−ベンジルオ
キシカルボニルグリシンアミド（１．２２ｇ，９３％）
を得た。 m.p. 80 −83℃¹ HNMR δ(CDC1₃) 2.46(t,1H,J=2.4Hz), 4.28(d,2H,J=2.
4Hz), 5.10(s,2H)，5.48(d,1H,J=8.8Hz), 6.48(d,1H,J=
8.8Hz), 6.65(bs,2H), 7.31(S,5H). IR(NaCl) 2125(w), 1704(s), 1680(s), 1522(s), 758
(w), 740(m), 700(m) cm ^-1 元素分析値 (C₁₃H₁₄N₂O₄):計算値 C:59.54, H:5.38, N:
10.68 測定値 C:59.73, H:5.51, N:10.33Excess ammonia was removed by vacuum and dissolved.
The agent was evaporated under reduced pressure. The resulting oily residue is silica gel
Purified by column chromatography (ethyl acetate)
A- (2-propyne-1-oxy) -N-benzylo
Xycarbonyl glycinamide (1.22g, 93%)
Got m.p. 80 −83 ℃¹ HNMR δ (CDC1₃) 2.46 (t, 1H, J = 2.4Hz), 4.28 (d, 2H, J = 2.
4Hz), 5.10 (s, 2H), 5.48 (d, 1H, J = 8.8Hz), 6.48 (d, 1H, J =
8.8Hz), 6.65 (bs, 2H), 7.31 (S, 5H) .IR (NaCl) 2125 (w), 1704 (s), 1680 (s), 1522 (s), 758
(w), 740 (m), 700 (m) cm ^-1 Elemental analysis value (C₁₃H₁₄N₂O_Four): Calculated value C: 59.54, H: 5.38, N:
10.68 Measured value C: 59.73, H: 5.51, N: 10.33

【００５５】実施例１７．Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカル
ボニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ロイシル−グリシンアミド
（０．３２５ｇ，１．０mmol) をジオキサン（２ml）に
溶解し、そして０℃に冷却した。この溶液にジオキサン
（３ml）中４Ｎ塩酸をこの温度において添加し、そして
混合物を室温にて２．５時間攪拌した。 Example 17 N-tert-butoxycarbonyl-L-prolyl-L-leucyl-glycinamide (0.325 g, 1.0 mmol) was dissolved in dioxane (2 ml) and cooled to 0 ° C. To this solution was added 4N hydrochloric acid in dioxane (3 ml) at this temperature and the mixture was stirred at room temperature for 2.5 hours.

【００５６】次に、この溶液にエーテルを加え、そして
生成する沈澱を澱過によりできるだけ多く集め、エーテ
ルで洗浄し、そして真空乾燥して純粋なＬ−プロリル−
Ｌ−ロイシル−Ｌ−グリシンアミドＨＣｌ塩（０．２６
５ｇ，９６％）を得た。 〔α〕_D ＝−40.9°(H₂O, C=1.1)¹ HNMR δ(D₂O) 0.91(d,3H,J=5.8Hz), 0.95(d,3H,J=5.8
Hz), 1.66(m,3H), 2.08(m,3H), 2.46(m,1H), 3.43(m,tr
iplefoid,2H), 3.91(s.2H), 4.41(m.2H)Ether is then added to this solution and the resulting precipitate is collected by filtration as much as possible, washed with ether and vacuum dried to give pure L-prolyl-.
L-leucyl-L-glycinamide HCl salt (0.26
5 g, 96%) was obtained. (Α) _D = −4 0.9 ° (H ₂ O, C = 1.1) ¹ HNMR δ (D ₂ O) 0.91 (d, 3H, J = 5.8Hz), 0.95 (d, 3H, J = 5.8)
Hz), 1.66 (m, 3H), 2.08 (m, 3H), 2.46 (m, 1H), 3.43 (m, tr
iplefoid, 2H), 3.91 (s.2H), 4.41 (m.2H)

【００５７】実施例１８．α−ヒドロキシグリシンアミ
ド塩酸塩（３８mg, ０．３mmol) 、ピログルタミル−Ｎ
^im−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ヒスチジルプロリ
ン・トリエチルアミン塩（５５mg、０．１mmol）及びＮ
−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２７mg，０．２mmo
l）をジメチルホルムアミド（０．５ml）に溶解し、そ
して−１０℃に冷却した。この溶液に１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（３６
μｌ，０．２mmol）を添加し、そしてこの混合物を同じ
温度にて２時間攪拌した。 Example 18 α-hydroxyglycinamide hydrochloride (38 mg, 0.3 mmol), pyroglutamyl-N
^im -tert-butoxycarbonyl-histidylproline triethylamine salt (55 mg, 0.1 mmol) and N
-Hydroxybenzotriazole (27mg, 0.2mmo
l) was dissolved in dimethylformamide (0.5 ml) and cooled to -10 ° C. 1-Ethyl-3-
(3-Dimethylaminopropyl) carbodiimide (36
μl, 0.2 mmol) was added and the mixture was stirred at the same temperature for 2 hours.

【００５８】室温にてさらに１時間攪拌した後、ＭＰＬ
Ｃ装置を用いて混合物を直接カラムクロマトグラフィー
にかけた。粗生成物を分取用薄層クロマトグラフィー
（クロロホルム−メタノール）によりさらに精製してピ
ログルタミル−Ｎ^im−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−
ヒスチジルプロリンアミド（１５mg，３５％）を得た。 m.p. 155−160 ℃ 〔α〕_D ＝−17.7°(MeOH, C=0.53)After stirring at room temperature for another hour, MPL
The mixture was directly subjected to column chromatography using a C instrument. The crude product was purified by preparative thin layer chromatography - pyroglutamyl and further purification by crystallization (chloroform-methanol) -N ^{im-tert-butoxycarbonyl} -
Histidyl prolinamide (15 mg, 35%) was obtained. mp 155-160 ° C [α] _D = -17.7 ° (MeOH, C = 0.53)

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 7/36 8318−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 99:46 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁵ Identification code Office reference number FI Technical display area C07K 7/36 8318-4H C07K 99:46

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 次の式（Ｉ）： 【化１】 （式中、Ｒ¹ は水素原子、低級アルキル基、低級アルケ
ニル基、低級アルキニル基、ベンジル基、又はアルキル
基によりもしくはアルキル基と芳香族基とにより置換さ
れたシリル基を表わし；Ｒ² は水素原子又はアミノ保護
基を表わす）により表わされるα−ヒドロキシグリシン
アミド誘導体、及びその塩。1. The following formula (I): (Wherein, R ¹ represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, lower alkenyl group, lower alkynyl group, a benzyl group, or an alkyl group with or an alkyl group and an aromatic group and a substituted silyl group; R ² is hydrogen Α-hydroxyglycinamide derivative represented by the formula (1) representing an atom or an amino protecting group, and a salt thereof. 【請求項２】 請求項１に記載のα−ヒドロキシグリシ
ンアミド誘導体又はその塩の製造方法であって、次の式
（II）： 【化２】 〔式中、Ｒ¹ 及びＲ² は式（Ｉ）において定義したのと
同じ意味を有し、そしてＲ³ は水素原子又はカルボキシ
ル保護基である〕で表わされるα−ヒドロキシグリシン
誘導体を溶媒中アンモニアで処理し、所望によりアミノ
保護基を除去し、そして所望により得られた化合物をそ
の塩に転換することを特徴とする方法。2. A method for producing an α-hydroxyglycinamide derivative or a salt thereof according to claim 1, which comprises the following formula (II): [Wherein R ¹ and R ² have the same meaning as defined in formula (I), and R ³ is a hydrogen atom or a carboxyl-protecting group]. And optionally removing the amino protecting group and optionally converting the resulting compound into its salt. 【請求項３】 アミノ酸もしくはペプチド又はこれらの
誘導体を請求項１に記載のα−ヒドロキシグリシン誘導
体と反応せしめることを特徴とするＣ−末端アミド化ペ
プチドの製造方法。3. A method for producing a C-terminal amidated peptide, which comprises reacting an amino acid or a peptide or a derivative thereof with the α-hydroxyglycine derivative according to claim 1.