JPH0580056A - 高比重リポ蛋白コレステロール分析用分画液及び分析方法 - Google Patents
高比重リポ蛋白コレステロール分析用分画液及び分析方法Info
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- JPH0580056A JPH0580056A JP23916291A JP23916291A JPH0580056A JP H0580056 A JPH0580056 A JP H0580056A JP 23916291 A JP23916291 A JP 23916291A JP 23916291 A JP23916291 A JP 23916291A JP H0580056 A JPH0580056 A JP H0580056A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 生体液中のＨＤＬＣの定量分析、特に多層分
析素子を用いての生体液中のＨＤＬＣの定量分析の正確
性の向上を図るものである。 【構成】 生体液中の高比重リポ蛋白コレステロールを
定量するに際して用いられる分画液であって、人血清ベ
ースの血清を分画して得られる上清血清と界面活性剤と
が含まれてなる高比重リポ蛋白コレステロール分析用分
画液。
析素子を用いての生体液中のＨＤＬＣの定量分析の正確
性の向上を図るものである。 【構成】 生体液中の高比重リポ蛋白コレステロールを
定量するに際して用いられる分画液であって、人血清ベ
ースの血清を分画して得られる上清血清と界面活性剤と
が含まれてなる高比重リポ蛋白コレステロール分析用分
画液。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血液等の生体液中の高
比重リポ蛋白コレステロール（以下、ＨＤＬコレステロ
ール）を定量分析する場合、特に乾式法の多層分析素子
で定量分析する際の検量線作成用の校正液並びに精度管
理用のコントロール液として使用可能な分画液に関する
ものである。
比重リポ蛋白コレステロール（以下、ＨＤＬコレステロ
ール）を定量分析する場合、特に乾式法の多層分析素子
で定量分析する際の検量線作成用の校正液並びに精度管
理用のコントロール液として使用可能な分画液に関する
ものである。
【０００２】
【発明の背景】血液等の生体液中の高比重リポ蛋白コレ
ステロール（以下、ＨＤＬＣ）の定量分析は、冠状動脈
性心疾患、虚血性心疾患、脳梗塞等の診断に有用である
ことから、総コレステロールの測定と併せて、近年、特
に重要視されている。その測定は、リポ蛋白よりＨＤＬ
Ｃを分画する操作とＨＤＬ中のコレステロールを測定す
る操作の二段階で構成されており、分画の方法としては
超遠心法、ゲルろ過法、ポリアニオン−二価金属沈澱
法、電気泳動法などが用いられている。現在、ＨＤＬＣ
の測定法としては、操作が簡便で、かつ、特別な機器を
必要としないところから、沈澱法による測定が多く用い
られている。又、コレステロールの測定法は酵素法が広
く用いられている。
ステロール（以下、ＨＤＬＣ）の定量分析は、冠状動脈
性心疾患、虚血性心疾患、脳梗塞等の診断に有用である
ことから、総コレステロールの測定と併せて、近年、特
に重要視されている。その測定は、リポ蛋白よりＨＤＬ
Ｃを分画する操作とＨＤＬ中のコレステロールを測定す
る操作の二段階で構成されており、分画の方法としては
超遠心法、ゲルろ過法、ポリアニオン−二価金属沈澱
法、電気泳動法などが用いられている。現在、ＨＤＬＣ
の測定法としては、操作が簡便で、かつ、特別な機器を
必要としないところから、沈澱法による測定が多く用い
られている。又、コレステロールの測定法は酵素法が広
く用いられている。
【０００３】ところで、分析装置の自動化が進み、自動
分析装置にもＨＤＬＣの測定が組み込まれるようにな
り、通常は分画済みの上清血清のコレステロール濃度の
測定が行われている。その測定にはコレステロール測定
用の試薬等が用いられ、使用する試薬の校正には「コレ
ステロール標準液」等が用いられている。この標準液
は、標準品のコレステロールをエタノール等のアルコー
ルに溶解したものである。又、精度管理用のコントロー
ル液には、前述の標準液や市販の管理血清を分画したも
のが用いられている。
分析装置にもＨＤＬＣの測定が組み込まれるようにな
り、通常は分画済みの上清血清のコレステロール濃度の
測定が行われている。その測定にはコレステロール測定
用の試薬等が用いられ、使用する試薬の校正には「コレ
ステロール標準液」等が用いられている。この標準液
は、標準品のコレステロールをエタノール等のアルコー
ルに溶解したものである。又、精度管理用のコントロー
ル液には、前述の標準液や市販の管理血清を分画したも
のが用いられている。
【０００４】上記のような湿式法に対して、近年、乾式
法による分析素子が開発され、実用化されている。この
分析素子は、光透過性で水不透過性の支持体の片面に少
なくとも一つの試薬層と最上層に多孔性の展開層からな
る多層分析材料であり、専用の分析装置を用いることで
生体液中の特定成分の定量分析が可能である。現在、Ｈ
ＤＬＣ用分析素子も実用化されており、分画済みの検体
のコレステロール濃度を定量分析することが出来る。
法による分析素子が開発され、実用化されている。この
分析素子は、光透過性で水不透過性の支持体の片面に少
なくとも一つの試薬層と最上層に多孔性の展開層からな
る多層分析材料であり、専用の分析装置を用いることで
生体液中の特定成分の定量分析が可能である。現在、Ｈ
ＤＬＣ用分析素子も実用化されており、分画済みの検体
のコレステロール濃度を定量分析することが出来る。
【０００５】ところで、定量分析に際して校正を行う場
合、分析素子の校正には湿式法と同じ標準液は使用する
ことが出来ない。その理由としては、分析素子で用いる
検量線が、人血清試料（分画剤を用いて分画された上清
検体）をベースに作成されたものであるからである。つ
まり、得られる光学濃度を物質濃度に変換する為に用い
られる検量線が人血清試料（分画剤を用いて分画された
上清検体）をベースに作成されたものである為に、人血
清とは異なる物性の液体試料、例えば前述のコレステロ
ール標準液である場合には、溶媒がアルコールであるた
め呈色反応性が異なってしまう。
合、分析素子の校正には湿式法と同じ標準液は使用する
ことが出来ない。その理由としては、分析素子で用いる
検量線が、人血清試料（分画剤を用いて分画された上清
検体）をベースに作成されたものであるからである。つ
まり、得られる光学濃度を物質濃度に変換する為に用い
られる検量線が人血清試料（分画剤を用いて分画された
上清検体）をベースに作成されたものである為に、人血
清とは異なる物性の液体試料、例えば前述のコレステロ
ール標準液である場合には、溶媒がアルコールであるた
め呈色反応性が異なってしまう。
【０００６】この為、この標準液を校正液として作成し
た検量線は人血清試料に対する真の検量線と一致しない
という欠点があった。そこで、多数の血清をプールして
作成したプール血清を用いた場合には、上記の欠点は解
消されが、ロットにより組成が一定せず、特に長期的な
保存性が不安定であるという欠点が有る。又、プール血
清の替わりに市販の管理血清を用いた場合には、一般的
にＨＤＬＣ濃度が低値の為、校正に必要な濃度域の検体
を得られ難いと言う欠点があった。
た検量線は人血清試料に対する真の検量線と一致しない
という欠点があった。そこで、多数の血清をプールして
作成したプール血清を用いた場合には、上記の欠点は解
消されが、ロットにより組成が一定せず、特に長期的な
保存性が不安定であるという欠点が有る。又、プール血
清の替わりに市販の管理血清を用いた場合には、一般的
にＨＤＬＣ濃度が低値の為、校正に必要な濃度域の検体
を得られ難いと言う欠点があった。
【０００７】さらに、これらの血清は、分画剤を用いて
分画を行う必要があり、校正操作が繁雑となり、毎回分
画を行うことによる分画操作誤差の影響を受け易く、校
正の安定性に欠けることになる。又、これらの血清を一
括して分画したものをプールする場合には、長期的な保
存安定性が不安定であるという欠点が有る。又、日常の
精度管理に用いるコントロール液に、前述の標準液や市
販の管理血清を用いる場合、同様な問題があり、精度良
く管理出来ないという欠点がある。
分画を行う必要があり、校正操作が繁雑となり、毎回分
画を行うことによる分画操作誤差の影響を受け易く、校
正の安定性に欠けることになる。又、これらの血清を一
括して分画したものをプールする場合には、長期的な保
存安定性が不安定であるという欠点が有る。又、日常の
精度管理に用いるコントロール液に、前述の標準液や市
販の管理血清を用いる場合、同様な問題があり、精度良
く管理出来ないという欠点がある。
【０００８】
【発明の開示】本発明の目的は、生体液中のＨＤＬＣの
定量分析、特に多層分析素子を用いての生体液中のＨＤ
ＬＣの定量分析の正確性の向上を図るものである。すな
わち、多層分析素子を用いたＨＤＬＣの定量分析におい
て、校正液を用いて検量線を作成する場合、人血清を試
料とする場合と同じ応答で、校正によって得られる検量
線が人血清試料に対する真の検量線と一致する分画液を
提供しようとすることである。又、長期的な使用が可能
となる校正液やコントロール液を提供することである。
定量分析、特に多層分析素子を用いての生体液中のＨＤ
ＬＣの定量分析の正確性の向上を図るものである。すな
わち、多層分析素子を用いたＨＤＬＣの定量分析におい
て、校正液を用いて検量線を作成する場合、人血清を試
料とする場合と同じ応答で、校正によって得られる検量
線が人血清試料に対する真の検量線と一致する分画液を
提供しようとすることである。又、長期的な使用が可能
となる校正液やコントロール液を提供することである。
【０００９】上記本発明の目的は、生体液中の高比重リ
ポ蛋白コレステロールを定量するに際して用いられる分
画液であって、人血清ベースの血清を分画して得られる
上清血清と界面活性剤とが含まれてなることを特徴とす
る高比重リポ蛋白コレステロール分析用分画液によって
達成される。又、生体液中の高比重リポ蛋白コレステロ
ール濃度を定量する分析方法であって、光透過性で水不
透過性支持体の片面に少なくとも一つの試薬層とその上
方に多孔性の展開層を有する分析素子を用い、人血清ベ
ースの血清を分画して得られる上清血清と界面活性剤と
が含まれてなる分画液を校正液として検量線を求め、該
検量線を用いて生体液中の高比重リポ蛋白コレステロー
ルを定量することを特徴とする高比重リポ蛋白コレステ
ロールの分析方法によって達成される。
ポ蛋白コレステロールを定量するに際して用いられる分
画液であって、人血清ベースの血清を分画して得られる
上清血清と界面活性剤とが含まれてなることを特徴とす
る高比重リポ蛋白コレステロール分析用分画液によって
達成される。又、生体液中の高比重リポ蛋白コレステロ
ール濃度を定量する分析方法であって、光透過性で水不
透過性支持体の片面に少なくとも一つの試薬層とその上
方に多孔性の展開層を有する分析素子を用い、人血清ベ
ースの血清を分画して得られる上清血清と界面活性剤と
が含まれてなる分画液を校正液として検量線を求め、該
検量線を用いて生体液中の高比重リポ蛋白コレステロー
ルを定量することを特徴とする高比重リポ蛋白コレステ
ロールの分析方法によって達成される。
【００１０】又、生体液中の高比重リポ蛋白コレステロ
ール濃度を定量する分析方法であって、光透過性で水不
透過性支持体の片面に少なくとも一つの試薬層とその上
方に多孔性の展開層を有する分析素子を用い、人血清ベ
ースの血清を分画して得られる上清血清と界面活性剤と
が含まれてなる分画液をコントロール液として精度管理
に用い、生体液中の高比重リポ蛋白コレステロールの定
量分析を行うことを特徴とする高比重リポ蛋白コレステ
ロールの分析方法によって達成される。
ール濃度を定量する分析方法であって、光透過性で水不
透過性支持体の片面に少なくとも一つの試薬層とその上
方に多孔性の展開層を有する分析素子を用い、人血清ベ
ースの血清を分画して得られる上清血清と界面活性剤と
が含まれてなる分画液をコントロール液として精度管理
に用い、生体液中の高比重リポ蛋白コレステロールの定
量分析を行うことを特徴とする高比重リポ蛋白コレステ
ロールの分析方法によって達成される。
【００１１】尚、上記の発明において、血清は、人由来
の血清をベースにした脱脂血清と脂質血清により調製さ
れた血清であるものが好ましく、また、分画は、ポリア
ニオンと二価の陽イオンで構成される分画剤を用いた沈
澱法で行われたものであることが好ましい。以下、本発
明について更に詳しく説明する。
の血清をベースにした脱脂血清と脂質血清により調製さ
れた血清であるものが好ましく、また、分画は、ポリア
ニオンと二価の陽イオンで構成される分画剤を用いた沈
澱法で行われたものであることが好ましい。以下、本発
明について更に詳しく説明する。
【００１２】本発明に使用する人血清ベースの脱脂血清
は、適当な血清を脱脂することによって得られ、脂質血
清については、血中コレステロール及びトリグリセライ
ドを測定するとにより、高濃度の脂質血清を入手でき
る。又、市販の管理血清の原材料から選ぶことも可能で
ある。これらの原材料は、例えば下記の組成並びに濃度
のものが用いられる。以下に、その管理血清の一例を示
すが、本発明に用いられる管理血清はこれらに限定され
るものではない。
は、適当な血清を脱脂することによって得られ、脂質血
清については、血中コレステロール及びトリグリセライ
ドを測定するとにより、高濃度の脂質血清を入手でき
る。又、市販の管理血清の原材料から選ぶことも可能で
ある。これらの原材料は、例えば下記の組成並びに濃度
のものが用いられる。以下に、その管理血清の一例を示
すが、本発明に用いられる管理血清はこれらに限定され
るものではない。
【００１３】〔使用する管理血清の一例〕 １）脱脂血清 ・由来：人血清 ・コレステロール：１０ｍｇ／ｄｌ ・トリグリセライド：１５ｍｇ／ｄｌ ・蛋白濃度：７．５ｇ／ｄｌ ・ｐＨ：７．２ ２）脂質血清 ・由来：人血清 ・コレステロール：１０２０ｍｇ／ｄｌ ・トリグリセライド：５６９ｍｇ／ｄｌ ・蛋白濃度：１．７ｇ／ｄｌ ・ｐＨ：７．１ 分画剤を構成するポリアニオンとしてはヘパリン、デキ
ストラン硫酸、リンタングステン酸などが、２価の陽イ
オンとしてはＭｎ2+，Ｍｇ2+，Ｃａ2+などが挙げられ、
これらの組み合わせた方法を用いることができる。例え
ば、リンタングステン酸−Ｍｇ2+、デキストラン硫酸−
Ｍｇ2+、ヘパリン−Ｍｎ2+、ヘパリン−Ｃａ2+などの分
画剤を用いることができる。好ましい分画剤は、リンタ
ングステン酸−Ｍｇ2+である。
ストラン硫酸、リンタングステン酸などが、２価の陽イ
オンとしてはＭｎ2+，Ｍｇ2+，Ｃａ2+などが挙げられ、
これらの組み合わせた方法を用いることができる。例え
ば、リンタングステン酸−Ｍｇ2+、デキストラン硫酸−
Ｍｇ2+、ヘパリン−Ｍｎ2+、ヘパリン−Ｃａ2+などの分
画剤を用いることができる。好ましい分画剤は、リンタ
ングステン酸−Ｍｇ2+である。
【００１４】そして、上記したような血清を用いて目的
とする任意の濃度の血清を調製後、この血清をポリアニ
オンと二価の陽イオンで構成される分画剤を用いて分画
し、その上清を採取し、下記に記したような界面活性剤
を含有させることで本発明の分画液が得られる。使用す
る分画方法は一般的な方法であり、血清と分画剤を１：
１で混合し、充分に反応させた後、遠心分離により析出
した沈澱物と上清を分離する。
とする任意の濃度の血清を調製後、この血清をポリアニ
オンと二価の陽イオンで構成される分画剤を用いて分画
し、その上清を採取し、下記に記したような界面活性剤
を含有させることで本発明の分画液が得られる。使用す
る分画方法は一般的な方法であり、血清と分画剤を１：
１で混合し、充分に反応させた後、遠心分離により析出
した沈澱物と上清を分離する。
【００１５】上清に添加する界面活性剤としては、イオ
ン性（アニオン性：例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、
ラウリル硫酸トリエタノールアミン、ＰＯＥ（２）ラウ
リルエーテル硫酸ナトリウム、ＰＯＥ（２）ラウリルエ
ーテル硫酸トリエタノールアミン等、カチオン性：塩化
ヤシアルキルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコ
ニウム等）あるいは非イオン性に限らず使用できるが、
非イオン性の界面活性剤が好ましい。本発明に好ましい
非イオン性の界面活性剤の具体例を以下に挙げる。尚、
これらに限られるものではない。
ン性（アニオン性：例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、
ラウリル硫酸トリエタノールアミン、ＰＯＥ（２）ラウ
リルエーテル硫酸ナトリウム、ＰＯＥ（２）ラウリルエ
ーテル硫酸トリエタノールアミン等、カチオン性：塩化
ヤシアルキルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコ
ニウム等）あるいは非イオン性に限らず使用できるが、
非イオン性の界面活性剤が好ましい。本発明に好ましい
非イオン性の界面活性剤の具体例を以下に挙げる。尚、
これらに限られるものではない。
【００１６】 ・ＰＯＥ（１０）オクチルフェニルエーテル ・ＰＯＥ（１５）オクチルフェニルエーテル ・ＰＯＥ（３０）オクチルフェニルエーテル ・ＰＯＥ（１２）ノニルフェニルエーテル ・ＰＯＥ（２０）ノニルフェニルエーテル ・ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノラウレート ・ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノオレエート ・ＰＯＥ（２０）ソルビタントリステアレート ・ＰＯＥ（４）トリオレエート ・ＰＯＥ（３０）ステアレート ・ＰＯＥ（４０）ステアレート ・ＰＯＥ（１００）ステアレート ・ＰＥＧ（４００）モノステアレート ・ＰＥＧ（４００）モノラウレート ・ＰＥＧ（１０００）ジラウレート ・ＰＥＧ（１５４０）ジステアレート ・ラウリルアルコールＥＯ６モル縮合物 ・ラウリルアルコールＥＯ１０モル縮合物 ・ラウリルアルコールＥＯ３０モル縮合物 ・オレイルアルコールＥＯ２０モル縮合物 ・セチルアルコールＥＯ２０モル縮合物 ・トリエタノールアミンオレエート （註）ＰＯＥ：ポリエチレンオキシド ＰＥＧ：ポリエチレングリコール ＥＯ：エチレンオキシド （ ）内の数字はエチレンオキシド単位の縮合数 界面活性剤の添加濃度は、校正液に対して０．０３〜
１．０重量％の範囲内で用いることが好ましい。
１．０重量％の範囲内で用いることが好ましい。
【００１７】本発明の分画液は、湿式法や乾式法のいず
れかの定量分析方法においても使用可能であるが、特開
昭６４−３５３６９号公報、特開平２−６７５１号公
報、特開平２−５５９５４号公報、特開平２−２１０２
６５号公報、特開平２−２２２６９９号公報などに記載
された多層分析素子に特に有用である。
れかの定量分析方法においても使用可能であるが、特開
昭６４−３５３６９号公報、特開平２−６７５１号公
報、特開平２−５５９５４号公報、特開平２−２１０２
６５号公報、特開平２−２２２６９９号公報などに記載
された多層分析素子に特に有用である。
【００１８】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明する。 〔実施例１〕血清・血漿中のＨＤＬＣ濃度を測定する目
的で、乾式多層分析素子及び分画液を作製した。
説明する。 〔実施例１〕血清・血漿中のＨＤＬＣ濃度を測定する目
的で、乾式多層分析素子及び分画液を作製した。
【００１９】１）ＨＤＬＣ分析素子の作製 膜厚１８０μｍの透明な下引き済みポリエチレンテレフ
タレート支持体上に下記の組成の試薬層、接着層、展開
層を順次塗布、乾燥し、ＨＤＬＣ分析素子を作製した。 〔試薬層〕 ゼラチン １２．１０（ｇ／ｍ2 ） ７−クロロ−３−（２−ヘキシルデシルスルホニルエチル）−６−メチル− ピラゾロ［３，２−ｃ］−ｓ−トリアゾール １．７６（ｇ／ｍ2 ） ジブチルフタレート ０．９５（ｇ／ｍ2 ） ペルオキシダーゼ １２１００（Ｕ／ｍ2 ） アスコルビン酸オキシダーゼ ４５００（Ｕ／ｍ2 ） Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸 ３．７１（ｇ／ｍ2 ） 水酸化カリウム ０．８１（ｇ／ｍ2 ） トリイソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム ０．５２（ｇ／ｍ2 ） １，２−ビス（ビニルスルホニル）エタン ０．０５（ｇ／ｍ2 ） アジ化ナトリウム ０．１５（ｇ／ｍ2 ） 〔接着層〕 Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体（重合比２：８） ４．５７（ｇ／ｍ2 ） 〔展開層〕 ロ紙原材料用繊維 ９９．２０（ｇ／ｍ2 ） スチレン−グリシジルメタクリレート共重合体（重合比９：１） ２４．７３（ｇ／ｍ2 ） ポリオキシエチレンラウリルエーテル １１．４１（ｇ／ｍ2 ） 塩酸−４−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ−２（２’−メタンスルホンアミドエチ ル）アニリン ０．１７（ｇ／ｍ2 ） ５，５−ジメチル−１，３−シクロヘキサンジオン １．４７（ｇ／ｍ2 ） アスコルビン酸オキシダーゼ ４５００（Ｕ／ｍ2 ） コレステロールエステラーゼ １６２０（Ｕ／ｍ2 ） コレステロールオキシダーゼ １６２０（Ｕ／ｍ2 ） 牛血清アルブミン ２．８５（ｇ／ｍ2 ） 注；アスコルビン酸オキシダーゼ、コレステロールエス
テラーゼ、コレステロールオキシダーゼは、牛血清アル
ブミンと一緒に水に溶解後、凍結乾燥後粉末化したもの
を用いる。
タレート支持体上に下記の組成の試薬層、接着層、展開
層を順次塗布、乾燥し、ＨＤＬＣ分析素子を作製した。 〔試薬層〕 ゼラチン １２．１０（ｇ／ｍ2 ） ７−クロロ−３−（２−ヘキシルデシルスルホニルエチル）−６−メチル− ピラゾロ［３，２−ｃ］−ｓ−トリアゾール １．７６（ｇ／ｍ2 ） ジブチルフタレート ０．９５（ｇ／ｍ2 ） ペルオキシダーゼ １２１００（Ｕ／ｍ2 ） アスコルビン酸オキシダーゼ ４５００（Ｕ／ｍ2 ） Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸 ３．７１（ｇ／ｍ2 ） 水酸化カリウム ０．８１（ｇ／ｍ2 ） トリイソプロピルナフタレンスルホン酸ナトリウム ０．５２（ｇ／ｍ2 ） １，２−ビス（ビニルスルホニル）エタン ０．０５（ｇ／ｍ2 ） アジ化ナトリウム ０．１５（ｇ／ｍ2 ） 〔接着層〕 Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体（重合比２：８） ４．５７（ｇ／ｍ2 ） 〔展開層〕 ロ紙原材料用繊維 ９９．２０（ｇ／ｍ2 ） スチレン−グリシジルメタクリレート共重合体（重合比９：１） ２４．７３（ｇ／ｍ2 ） ポリオキシエチレンラウリルエーテル １１．４１（ｇ／ｍ2 ） 塩酸−４−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ−２（２’−メタンスルホンアミドエチ ル）アニリン ０．１７（ｇ／ｍ2 ） ５，５−ジメチル−１，３−シクロヘキサンジオン １．４７（ｇ／ｍ2 ） アスコルビン酸オキシダーゼ ４５００（Ｕ／ｍ2 ） コレステロールエステラーゼ １６２０（Ｕ／ｍ2 ） コレステロールオキシダーゼ １６２０（Ｕ／ｍ2 ） 牛血清アルブミン ２．８５（ｇ／ｍ2 ） 注；アスコルビン酸オキシダーゼ、コレステロールエス
テラーゼ、コレステロールオキシダーゼは、牛血清アル
ブミンと一緒に水に溶解後、凍結乾燥後粉末化したもの
を用いる。
【００２０】２）分画液の調製 以下の材料並びに調製法に基づいて、任意の濃度の分画
液を調製した。 〔材料〕 血清Ａ：PENTEX HUMAN SERUM DELIPIDIZED（注２） 血清Ｂ：PENTEX HUMAN CHOLESTEROL CONCENTRATE（注
３） 分画剤：SERA-PAK（注４） （注２）マイルス社製 脱脂血清 （注３）マイルス社製 脂質（コレステロール濃縮）血
清 （注４）マイルス・イタリア社製 ＨＤＬＣ分画剤（リ
ンタングステン酸、塩化マグネシウム） 〔調製〕 １．血清Ａ，Ｂの濃度を決定する為に、分画剤を用いて
分画する。それぞれの血清と分画剤を等量（例えば、２
００μｌ）混合し、最低１５００ｇで１５分間遠心分離
を行う。遠心後、上清を採取し、日立７０５０でＨＤＬ
Ｃの測定を行った。その結果、血清Ａ：３．５ｍｇ／ｄ
ｌ、血清Ｂ：２１７ｍｇ／ｄｌであった。
液を調製した。 〔材料〕 血清Ａ：PENTEX HUMAN SERUM DELIPIDIZED（注２） 血清Ｂ：PENTEX HUMAN CHOLESTEROL CONCENTRATE（注
３） 分画剤：SERA-PAK（注４） （注２）マイルス社製 脱脂血清 （注３）マイルス社製 脂質（コレステロール濃縮）血
清 （注４）マイルス・イタリア社製 ＨＤＬＣ分画剤（リ
ンタングステン酸、塩化マグネシウム） 〔調製〕 １．血清Ａ，Ｂの濃度を決定する為に、分画剤を用いて
分画する。それぞれの血清と分画剤を等量（例えば、２
００μｌ）混合し、最低１５００ｇで１５分間遠心分離
を行う。遠心後、上清を採取し、日立７０５０でＨＤＬ
Ｃの測定を行った。その結果、血清Ａ：３．５ｍｇ／ｄ
ｌ、血清Ｂ：２１７ｍｇ／ｄｌであった。
【００２１】２．任意の濃度の混合比は、次の式を用い
て行った。 任意の濃度の血清Ｂの割合（％）＝（Ｃ−Ｄ）／（Ｅ−
Ｄ） Ｃ：任意の濃度 （ｍｇ／ｄｌ） Ｄ：血清Ａの濃度（ｍｇ／ｄｌ） Ｅ：血清Ｂの濃度（ｍｇ／ｄｌ） 任意の濃度としては１０ｍｇ／ｄｌ、２５ｍｇ／ｄｌ、
４５ｍｇ／ｄｌ、６５ｍｇ／ｄｌ、９０ｍｇ／ｄｌの５
レベルの調製を下記の表１の割合で混合し、上記の分画
剤を用いて分画を行い、上清を採取する。これに、界面
活性剤（ＰＯＥ（１０）オクチルフェニルエーテル：商
品名トリトンＸ−１００）を０．１重量％濃度になるよ
うに添加したものを分画液とした。
て行った。 任意の濃度の血清Ｂの割合（％）＝（Ｃ−Ｄ）／（Ｅ−
Ｄ） Ｃ：任意の濃度 （ｍｇ／ｄｌ） Ｄ：血清Ａの濃度（ｍｇ／ｄｌ） Ｅ：血清Ｂの濃度（ｍｇ／ｄｌ） 任意の濃度としては１０ｍｇ／ｄｌ、２５ｍｇ／ｄｌ、
４５ｍｇ／ｄｌ、６５ｍｇ／ｄｌ、９０ｍｇ／ｄｌの５
レベルの調製を下記の表１の割合で混合し、上記の分画
剤を用いて分画を行い、上清を採取する。これに、界面
活性剤（ＰＯＥ（１０）オクチルフェニルエーテル：商
品名トリトンＸ−１００）を０．１重量％濃度になるよ
うに添加したものを分画液とした。
【００２２】 表 １ レベル 目標濃度 血清Ａ 血清Ｂ １ １０ｍｇ／ｄｌ ０．９７０ ０．０３０ ２ ２５ｍｇ／ｄｌ ０．８９９ ０．１０１ ３ ４５ｍｇ／ｄｌ ０．８０６ ０．１９４ ４ ６５ｍｇ／ｄｌ ０．６９８ ０．３０２ ５ ９０ｍｇ／ｄｌ ０．５７１ ０．４２９ ３．比較の為、上記と同じ濃度の５レベルを、コレステ
ロール標準品を用い、エタノールを溶媒としてコレステ
ロール標準液を作成して調製した。
ロール標準品を用い、エタノールを溶媒としてコレステ
ロール標準液を作成して調製した。
【００２３】本発明の分画液と人血清２０検体並びに比
較例のコレステロール標準液を、前記のＨＤＬＣ分析素
子各２枚に滴下し、コニカドライラボ８０Ｍ（コニカ株
式会社製）を用いて反射濃度（Ｄｒ）の測定を行った。
各２枚の平均Ｄｒと対照法（日立７０５０）のデータを
プロットした検量線を図１に示す。
較例のコレステロール標準液を、前記のＨＤＬＣ分析素
子各２枚に滴下し、コニカドライラボ８０Ｍ（コニカ株
式会社製）を用いて反射濃度（Ｄｒ）の測定を行った。
各２枚の平均Ｄｒと対照法（日立７０５０）のデータを
プロットした検量線を図１に示す。
【００２４】図１から明らかな通り、本発明の分画液を
校正液として得られる検量線は、比較用のコレステロー
ル標準液を用いた検量線の場合に比べ、人血清とよく一
致しており、人血清を試料とする場合と同じ応答をし、
校正によって得られる検量線が人血清試料に対する真の
検量線と一致していることが判る。 〔実施例２〕本発明の分画液の保存性を調べる為、本発
明の分画液（トリトンＸ−１００を０．０３％含有）と
界面活性剤を含まない分画液（比較例）を調製し、冷凍
条件下（−１０℃以下）で保存し、直後、１カ月後、２
カ月後、４カ月後、６カ月後に前記のＨＤＬＣ分析素子
とコニカドライラボ８０Ｍを用いて測定した結果を表２
に示す。又、分画液の状態を観察する為、日立分光光度
計（Ｕ−２０００）を用いて６００ｎｍの吸光度を測定
した結果を表３に示す。
校正液として得られる検量線は、比較用のコレステロー
ル標準液を用いた検量線の場合に比べ、人血清とよく一
致しており、人血清を試料とする場合と同じ応答をし、
校正によって得られる検量線が人血清試料に対する真の
検量線と一致していることが判る。 〔実施例２〕本発明の分画液の保存性を調べる為、本発
明の分画液（トリトンＸ−１００を０．０３％含有）と
界面活性剤を含まない分画液（比較例）を調製し、冷凍
条件下（−１０℃以下）で保存し、直後、１カ月後、２
カ月後、４カ月後、６カ月後に前記のＨＤＬＣ分析素子
とコニカドライラボ８０Ｍを用いて測定した結果を表２
に示す。又、分画液の状態を観察する為、日立分光光度
計（Ｕ−２０００）を用いて６００ｎｍの吸光度を測定
した結果を表３に示す。
【００２５】 表 ２（コニカドライラボ８０Ｍによる測定、単位ｍｇ／ｄｌ） 濃度 直後 １カ月後 ２カ月後 ４カ月後 ６カ月後 ２５mg/dl 本発明 ２５．３ ２４．８ ２５．１ ２４．８ ２４．７ 比較例 ２５．１ ２３．９ ２２．４ ２１．２ ２０．４ ９０mg/dl 本発明 ８９．８ ９０．１ ９０．７ ８９．２ ８９．５ 比較例 ９０．２ ８６．３ ８１．１ ７４．４ ７２．７ 表 ３（Ｕ−２０００による測定、吸光度） 濃度 直後 １カ月後 ２カ月後 ４カ月後 ６カ月後 ２５mg/dl 本発明 0.039 0.039 0.040 0.042 0.045 比較例 0.041 0.063 0.078 0.089 0.104 ９０mg/dl 本発明 0.036 0.037 0.040 0.044 0.049 比較例 0.039 0.077 0.101 0.142 0.199 表２に示される通り、界面活性剤を含まない分画液（比
較例）は、冷凍保存においても測定値に変化が認められ
る。さらに、表３に示す通り、界面活性剤を含まない分
画液（比較例）には経時により析出物が観察された。こ
れに対して、界面活性剤を含む本発明の分画液は、測定
値も安定しており、析出（白濁）も認められなかった。
較例）は、冷凍保存においても測定値に変化が認められ
る。さらに、表３に示す通り、界面活性剤を含まない分
画液（比較例）には経時により析出物が観察された。こ
れに対して、界面活性剤を含む本発明の分画液は、測定
値も安定しており、析出（白濁）も認められなかった。
【００２６】又、本発明の分画液をコントロール液とし
て日常の精度管理に用いた場合には、ＨＤＬＣを正確に
定量分析できることが判る。 〔実施例３〕実施例２と同じ方法で、界面活性剤として
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（商品
名：Ｔｗｅｅｎ２０）を用いて本発明の分画液を調整し
た。Ｔｗｅｅｎ２０の含有濃度は、分画液に対して１．
０重量％である。
て日常の精度管理に用いた場合には、ＨＤＬＣを正確に
定量分析できることが判る。 〔実施例３〕実施例２と同じ方法で、界面活性剤として
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（商品
名：Ｔｗｅｅｎ２０）を用いて本発明の分画液を調整し
た。Ｔｗｅｅｎ２０の含有濃度は、分画液に対して１．
０重量％である。
【００２７】比較例として界面活性剤を含まない校正液
を調製し、冷凍条件下（−１０℃以下）で保存し、直
後、１カ月、２カ月、４カ月、６カ月後に前記のＨＤＬ
Ｃ分析素子とコニカドライラボ８０Ｍを用いて測定した
結果を表４に示す。又、分画液の状態を観察する為、日
立分光光度計（Ｕ−２０００）を用いて６００ｎｍの吸
光度を測定した結果を表５に示す。
を調製し、冷凍条件下（−１０℃以下）で保存し、直
後、１カ月、２カ月、４カ月、６カ月後に前記のＨＤＬ
Ｃ分析素子とコニカドライラボ８０Ｍを用いて測定した
結果を表４に示す。又、分画液の状態を観察する為、日
立分光光度計（Ｕ−２０００）を用いて６００ｎｍの吸
光度を測定した結果を表５に示す。
【００２８】 表 ４（コニカドライラボ８０Ｍによる測定、単位ｍｇ／ｄｌ） 濃度 直後 １カ月 ２カ月 ４カ月 ６カ月 ２５mg/dl 本発明 ２４．７ ２４．４ ２４．８ ２４．２ ２３．９ 比較例 ２５．１ ２３．７ ２２．４ ２１．２ ２０．４ ９０mg/dl 本発明 ９０．４ ８９．６ ９０．１ ９１．６ ８９．６ 比較例 ９０．２ ８６．３ ８１．１ ７４．４ ７２．７ 表 ５（Ｕ−２０００による測定、吸光度） 濃度 直後 １カ月後 ２カ月後 ４カ月後 ６カ月後 ２５mg/dl 本発明 0.038 0.038 0.040 0.041 0.044 比較例 0.041 0.063 0.078 0.089 0.104 ９０mg/dl 本発明 0.037 0.038 0.041 0.044 0.048 比較例 0.039 0.077 0.101 0.142 0.199 表４及び表５に示される通り、Ｔｗｅｅｎ２０を含む本
発明の分画液は、測定値も安定しており、析出（白濁）
も認められないことが判る。
発明の分画液は、測定値も安定しており、析出（白濁）
も認められないことが判る。
【００２９】又、本発明の分画液をコントロール液とし
て日常の精度管理に用いた場合には、ＨＤＬＣを正確に
定量分析できることが判る。
て日常の精度管理に用いた場合には、ＨＤＬＣを正確に
定量分析できることが判る。
【図１】検量線を示すグラフである。
Claims (5)
- 【請求項１】 生体液中の高比重リポ蛋白コレステロー
ルを定量するに際して用いられる分画液であって、人血
清ベースの血清を分画して得られる上清血清と界面活性
剤とが含まれてなることを特徴とする高比重リポ蛋白コ
レステロール分析用分画液。 - 【請求項２】 血清は、人の血清をベースにした脱脂血
清と脂質血清により調製された血清であることを特徴と
する請求項１の高比重リポ蛋白コレステロール分析用分
画液。 - 【請求項３】 分画は、ポリアニオンと二価の陽イオン
で構成される分画剤を用いた沈澱法で行われたことを特
徴とする請求項１の高比重リポ蛋白コレステロール分析
用分画液。 - 【請求項４】 生体液中の高比重リポ蛋白コレステロー
ル濃度を定量する分析方法であって、光透過性で水不透
過性支持体の片面に少なくとも一つの試薬層とその上方
に多孔性の展開層を有する分析素子を用い、人血清ベー
スの血清を分画して得られる上清血清と界面活性剤とが
含まれてなる分画液を校正液として検量線を求め、該検
量線を用いて生体液中の高比重リポ蛋白コレステロール
を定量することを特徴とする高比重リポ蛋白コレステロ
ールの分析方法。 - 【請求項５】 生体液中の高比重リポ蛋白コレステロー
ル濃度を定量する分析方法であって、光透過性で水不透
過性支持体の片面に少なくとも一つの試薬層とその上方
に多孔性の展開層を有する分析素子を用い、人血清ベー
スの血清を分画して得られる上清血清と界面活性剤とが
含まれてなる分画液をコントロール液として精度管理に
用い、生体液中の高比重リポ蛋白コレステロールの定量
分析を行うことを特徴とする高比重リポ蛋白コレステロ
ールの分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23916291A JPH0580056A (ja) | 1991-09-19 | 1991-09-19 | 高比重リポ蛋白コレステロール分析用分画液及び分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23916291A JPH0580056A (ja) | 1991-09-19 | 1991-09-19 | 高比重リポ蛋白コレステロール分析用分画液及び分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0580056A true JPH0580056A (ja) | 1993-03-30 |
Family
ID=17040659
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23916291A Pending JPH0580056A (ja) | 1991-09-19 | 1991-09-19 | 高比重リポ蛋白コレステロール分析用分画液及び分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0580056A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002038800A1 (fr) * | 2000-11-08 | 2002-05-16 | Arkray, Inc. | Dispositif de test permettant de doser le cholesterol hdl (lipoproteine a haute densite) |
| EP1498732A3 (en) * | 2003-07-17 | 2005-02-02 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | A one-step assay for high-density lipoprotein cholesterol |
| EP1505393A1 (en) * | 2003-07-17 | 2005-02-09 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Dry analytical element for high-density lipoprotein cholesterol quantification |
| WO2007004687A1 (en) * | 2005-06-30 | 2007-01-11 | Fuji Film Corporation | A method for separating target component using magnetic nanoparticles |
| WO2015076284A1 (ja) * | 2013-11-21 | 2015-05-28 | 協和メデックス株式会社 | 血清又は血漿中の高密度リポ蛋白の安定化剤及び安定化方法 |
-
1991
- 1991-09-19 JP JP23916291A patent/JPH0580056A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002038800A1 (fr) * | 2000-11-08 | 2002-05-16 | Arkray, Inc. | Dispositif de test permettant de doser le cholesterol hdl (lipoproteine a haute densite) |
| US6939682B2 (en) | 2000-11-08 | 2005-09-06 | Arkray, Inc. | Test piece for assaying high density lipoprotein (HDL) cholesterol |
| US7575884B2 (en) | 2000-11-08 | 2009-08-18 | Arkray, Inc. | Test piece for measuring high-density lipoprotein (HDL) cholesterol |
| EP1498732A3 (en) * | 2003-07-17 | 2005-02-02 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | A one-step assay for high-density lipoprotein cholesterol |
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| JP2005046145A (ja) * | 2003-07-17 | 2005-02-24 | Ortho Clinical Diagnostics Inc | 高比重リポタンパク質コレステロール定量化のための乾式分析要素 |
| WO2007004687A1 (en) * | 2005-06-30 | 2007-01-11 | Fuji Film Corporation | A method for separating target component using magnetic nanoparticles |
| WO2015076284A1 (ja) * | 2013-11-21 | 2015-05-28 | 協和メデックス株式会社 | 血清又は血漿中の高密度リポ蛋白の安定化剤及び安定化方法 |
| JPWO2015076284A1 (ja) * | 2013-11-21 | 2017-03-16 | 協和メデックス株式会社 | 血清又は血漿中の高密度リポ蛋白の安定化剤及び安定化方法 |
| TWI646981B (zh) * | 2013-11-21 | 2019-01-11 | 協和梅德庫斯股份有限公司 | Stabilizer and stabilization method for high density lipoprotein in serum or plasma |
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