JPH05507559A - Immunoassay for anti-HIV-1 antibodies - Google Patents
Immunoassay for anti-HIV-1 antibodiesInfo
- Publication number
- JPH05507559A JPH05507559A JP91511485A JP51148591A JPH05507559A JP H05507559 A JPH05507559 A JP H05507559A JP 91511485 A JP91511485 A JP 91511485A JP 51148591 A JP51148591 A JP 51148591A JP H05507559 A JPH05507559 A JP H05507559A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- hiv
- antibodies
- kit
- neutralizing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.
Description
【発明の詳細な説明】 抗HIV−1抗体に関するイムノアッセイ発明の背景 本発明はヒト免疫不全ウィルスタイプ1(HIV−1)に特異的な抗体が検出さ れるイムノアッセイに一般的に関する。[Detailed description of the invention] Background of the invention of immunoassay for anti-HIV-1 antibodies The present invention detects antibodies specific to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1). Generally related to immunoassays.
HIV−1は後天性免疫不全症候群(エイズ)に関して提唱された原因体である 。HIV−1に感染した個体は様々なウィルスタンパク質、特にコア、ポリメラ ーゼ及びエンベロープタンパク質と結合する血清抗体を産生する(Allan et al、、1985,5cfence、228:1091;Chang e tal、、1985,5cience、228:93及び1985.Natur e 315:151;Crovl et al、、1985.Ce11.41: 979;Veronese et al、、1985゜5cience、229 +1402 及び198B、5cience、231:1289)。これらの抗 体を検出するイムノアッセイは、HIV−1感染を診断するため及びHIV−1 汚染に関して献血をスクリーニングするために用いられる。例えば、様々なタイ プの酵素結合イムノソルベントアッセイ(EL I SA)及びラジオイムノア ッセイ(RI A)は迅速なスクリーニング及び初期診断に用いられる。HIV 及び非HIV双方のタンパク質と、組換えタンパク質及び合成ペプチドを含めた 精製ウィルス成分を含有した全ウィルス溶離物が抗体吸着剤として用いられてき た。ウェスタンプロットは、サイズにより分離されたHIVタンパク質を認識す る抗体を検出するために用いられてきた。HIV-1 is the proposed causative agent for acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) . Individuals infected with HIV-1 contain various viral proteins, especially core and polymerase. produce serum antibodies that bind enzymes and envelope proteins (Allan et al, 1985, 5cfence, 228:1091; Chang e tal, 1985, 5science, 228:93 and 1985. Nature e 315:151; Crovl et al., 1985. Ce11.41: 979; Veronese et al, 1985°5science, 229 +1402 and 198B, 5science, 231:1289). These anti Immunoassays to detect HIV-1 infection and Used to screen blood donations for contamination. For example, various Thai Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and radioimmunoassay (RIA) is used for rapid screening and early diagnosis. HIV and non-HIV proteins, as well as recombinant proteins and synthetic peptides. Whole virus eluates containing purified viral components have been used as antibody adsorbents. Ta. Western blot recognizes HIV proteins separated by size. It has been used to detect antibodies related to
発明の要旨 本発明はHIV−1に感染したヒトと、主要中和決定基(PND)の全部又は一 部に相当するペプチドでHIV−1に対して予防接種されたヒトとを識別するた めに使用できる診断及び検出方法を提供し、しかも例えば血清変換を検出するた めに更に高感度でかつ高価でない診断方法を提供する。Summary of the invention The present invention relates to human infection with HIV-1 and all or part of the major neutralizing determinant (PND). to distinguish humans vaccinated against HIV-1 with peptides corresponding to provide diagnostic and detection methods that can be used for To provide a diagnostic method that is more sensitive and less expensive.
したがって、−面において、本発明は天然HIV−1に特異的な抗体と免疫複合 体を形成できるが但しヒトでHIV中和抗体の産生を引き起こす第二抗原に特異 的な抗体と免疫複合体を実質上形成できない第一抗原とヒトからの生物学的サン プルを接触させることからなり、第一抗原との免疫複合体の形成が個体における HrV感染の診断特徴である、ヒトにおけるHIV−1感染の診断方法を特徴と する。(ここで用いられる“中和“とは無細胞ピリオンによる細胞のHIV感染 又は感染及び未感染細胞の融合又は双方を阻害する抗体の能力に関する二″免疫 複合体°とは非共有結合抗体/抗原対に関する;“に特異的な“及び゛と反応す る゛とは抗原と特異的に結合できることを意味する; “免疫複合体を実質上形 成できない”抗体とは特異的抗原への抗体の結合と同抗原への正常ヒト血清の結 合との間に3倍以上の差異がないことを意味する。) 好ましい態様において、生物学的サンプルは体液、例えば血清である;第一抗原 は固体支持体に固定されるが、いかなる標準イムノアッセイフォーマットも使用 できる。Therefore, in one aspect, the present invention provides antibodies specific for native HIV-1 and immune complexes. However, it is specific for the second antigen that causes the production of HIV-neutralizing antibodies in humans. Primary antigens and biological samples from humans that are virtually incapable of forming immune complexes with biological antibodies. The formation of an immune complex with the first antigen occurs in the individual. A diagnostic method for HIV-1 infection in humans, which is a diagnostic feature of HrV infection. do. (“Neutralization” as used here refers to HIV infection of cells by cell-free pilions. or secondary immunization regarding the ability of antibodies to inhibit fusion of infected and uninfected cells or both. Complex ° refers to a non-covalently bound antibody/antigen pair; “Ru” means that it can specifically bind to an antigen; ``Antibodies that cannot be produced'' are due to the binding of antibodies to specific antigens and the binding of normal human serum to the same antigens. This means that there is no difference of more than 3 times between the ) In a preferred embodiment, the biological sample is a body fluid, e.g. serum; the first antigen is immobilized on a solid support, but any standard immunoassay format can be used. can.
ヒトが予防接種されたかどうかを決定するため、その方法ではサンプルを第二固 体支持体に固定された第二抗原と接触させるステップを更に含んでいてもよいが 、その場合に第二抗原は免疫原である。(ここで用いられる″第一″及び“第二 ”とはスクリーニングステップが実施される順序を意味するわけではない。)好 ましくは、第一抗原は、主要中和決定基(PND)の一部又は中和抗体がつくら れうるPNDの一部、即ちその中和部分を欠<HIV−1gp160エンベロー プタンパク質である。(ここで用いられる“主要中和決定基”とは参考のためこ こに組み込まれるRatner etal、、L985.Nature、313 :277のナンバーコンベンジsンに従いアミノ酸297−331に位置するg l)160の領域を含む。)最も好ましくは、このタンパク質はgp160Δ1 35である。(ここで用いられるgp160Δ135とはPNDを欠くいずれか のgl)160タンパク質を意味する;gp160Δ135は、PND又は中和 抗体がつくられるPNDの一部についてコードするDNAを欠失するように工学 処理された組換え遺伝子から発現されつるか、あるいはPNDを欠くように化学 的に変えられたタンパク質であってもよい。)好ましくは、第二抗原は、gp1 60のPNDを含む;更に好ましくは、それは完全HIV−1gp160エンベ ロープタンパク質(即ち、それは主要中和決定基を含有する)、例えばgp16 0MNもしくはその断片又はg p 1.60の場合に相当するアミノ酸配列を 有した合成ペプチドを含むが、それらはいずれも免疫原であってよい。好ましく は、第二抗原は、gp160のPND。To determine whether a person has been vaccinated, the method involves The method may further include the step of contacting the second antigen immobilized on the body support. , in which case the second antigen is an immunogen. (“first” and “second” used here) ” does not imply the order in which the screening steps are performed.) Preferably, the first antigen is a part of the major neutralizing determinant (PND) or a part of the primary neutralizing determinant (PND) or The HIV-1gp160 envelope lacks a portion of the PND that can be absorbed, i.e., its neutralizing portion. protein. (“Major neutralizing determinant” as used here is for reference only. Ratner et al., L985. Nature, 313 :g located at amino acids 297-331 according to the number convection sequence of 277 l) Contains 160 regions. ) Most preferably the protein is gp160Δ1 It is 35. (gp160Δ135 used here is either one lacking PND gl)160 protein; gp160Δ135 is PND or neutralizing Engineering to delete the DNA encoding the part of the PND from which antibodies are made Expressed from recombinant genes that have been processed or chemically modified to lack PND. It may also be a protein that has been altered. ) Preferably, the second antigen is gp1 60; more preferably, it contains the entire HIV-1gp160 envelope. rope proteins (i.e. it contains the major neutralizing determinants), e.g. gp16 0MN or its fragment or the amino acid sequence corresponding to gp 1.60 including synthetic peptides with a peptide, any of which may be an immunogen. preferably The second antigen is gp160 PND.
例えばgp160MN(即ち、MN単離物からのgp160)のPND又はその 中和部分の場合に相当するアミノ酸配列を有したタンパク質断片又は合成ペプチ ドである;最も好ましくは、第二抗原はgp160MNとその免疫原のPNDと の組合せである。(ここで用いられる“免疫原°とは哺乳動物、例えばウサギ又 はヒトの免疫系により中和抗体の産生を引き起こす抗原である。)このため、抗 原がgp160Δ135である場合の検出方法ではPND以外に存在するgp1 60の領域を認識するHIV−1特異性抗体を検出するが、一方抗原がgp16 0である(PNDペプチドを含んでいてもよい)場合の検出方法ではgp160 分子のいずれかの部分に特異的な抗体を検出し、それにはPND特異性抗体の検 出を含む。HIV−1に感染したヒトからの生物学的サンプルは双方の方法で検 出しうる抗体を含有し、一方PNDペプチドでHIV−1に対して免疫されたが 但しウィルスに感染していないヒトからのサンプルは、完全gp160分子、即 ちPNDを含んだ分子、或いはPNDペプチド、又はこの2種の組合せを用いる 後者の方法のみで検出しうる抗体を含有している。ここで用いられる“に相当す る′又は“に由来する”アミノ酸配列とはそのアミノ酸配列が他のアミノ酸配列 の全部又は一部と同一であることを意味する。ここで用いられる“MN”とはH IVのMN始原型又はMN始原型のウィルス変異体に関する。MN始原型ウィル スはgp 160エンベロープタンパク質のPND領域内におけるアミノ酸サブ 配列R−1−H−1−G−P−G−R−A−F−Yにより規定される;MNウィ ルス変異体は残基1−G−P−G−1?で完全なアミノ酸配列相同性及び上記M N配列の残り6アミノ酸と少くとも36%の相同性を示す変異体としてここでは 規定される。For example, the PND of gp160MN (i.e., gp160 from MN isolate) or its Protein fragments or synthetic peptides with amino acid sequences corresponding to the case of the neutralizing moiety Most preferably, the second antigen is a combination of gp160MN and its immunogenic PND. It is a combination of (“Immunogen” as used herein refers to mammals, such as rabbits or is an antigen that causes the production of neutralizing antibodies by the human immune system. ) For this reason, anti In the detection method when the origin is gp160Δ135, gp1 present other than PND HIV-1 specific antibodies that recognize the 60 region are detected, whereas the antigen is gp16 0 (may contain PND peptide), the detection method uses gp160 Detection of antibodies specific to any part of the molecule includes detection of PND-specific antibodies. Including exit. Biological samples from humans infected with HIV-1 can be tested using both methods. While immunized against HIV-1 with the PND peptide, However, samples from humans who have not been infected with the virus will contain the complete gp160 molecule, immediately. Using a PND-containing molecule, a PND peptide, or a combination of the two It contains antibodies that can only be detected by the latter method. Corresponding to “ used here An amino acid sequence “derived from” or “derived from” is an amino acid sequence whose amino acid sequence is derived from another amino acid sequence. means the same as all or part of “MN” used here is H IV MN prototype or a virus variant of the MN prototype. MN Prototype Will This is an amino acid subunit within the PND region of the gp160 envelope protein. defined by the sequence R-1-H-1-G-P-G-R-A-F-Y; Rus mutant is residue 1-G-P-G-1? complete amino acid sequence homology and above M Here, it is considered a variant that shows at least 36% homology with the remaining 6 amino acids of the N sequence. stipulated.
他の好ましい態様において、その方法では更に、サンプルを第−及び第二吸着抗 体に結合できる剤(例えば、酵素又は放射性同位元素標識成分)と接触させ、第 −及び第二抗体のサンプル中における存在の指標として該結合された剤を検出す ることを含む;例えば、その剤は抗体に結合できるタンパク質Aでも又は標識抗 体であってもよい。In other preferred embodiments, the method further comprises applying the sample to the first and second adsorption resistors. contact with an agent capable of binding to the body (e.g., an enzyme or a radioisotope-labeled component); - and detecting the bound agent as an indicator of the presence in the sample of a second antibody. For example, the agent may be protein A capable of binding to an antibody or a labeled antibody. It may be the body.
本発明は、主要中和決定基、即ちアミノ酸残基297−331に存在する領域、 又はPNDの全部もしくは一部を含む領域又はPNDの中和部分が欠失されたH IV−1エンベロープも特徴とする。The present invention focuses on the major neutralizing determinants, i.e., the region present at amino acid residues 297-331; or H in which the region containing all or part of PND or the neutralizing portion of PND is deleted Also features an IV-1 envelope.
好ましい態様において、このタンパク質はgp160Δ135であり、固体支持 体に固定してもよい。In a preferred embodiment, the protein is gp160Δ135 and is attached to a solid support. It may be fixed to the body.
本発明は、天然HIV−1に特異的な抗体と免疫複合体を形成できるが但しヒト でHIV中和抗体の産生を引き起こす第二抗原に特異的な抗体と免疫複合体を実 質上形成できない第一抗原、並びに第−及び第二抗体と反応できる剤を含有した 、ヒト生物学的サンプルでHIV−1抗体の存在を検出するためのキットも特徴 とする。The present invention can form immune complexes with natural HIV-1 specific antibodies, but human produces an immune complex with a second antigen-specific antibody that triggers the production of HIV-neutralizing antibodies. Contains an agent capable of reacting with the first antigen and the second and second antibodies, which cannot be formed in quality. , also features a kit for detecting the presence of HIV-1 antibodies in human biological samples. shall be.
好ましい態様において、第一抗原は固体支持体に固定される;好ましくは、それ は残基297−331に存在するPND領域又は中和抗体がつくられるPNDの 一部の欠失を含んだHIV−1gp160である;最も好ましくは、第一抗原は gp160Δ135である。検出剤は標識してもよく、例えばタンパク質Aでも 又は標識抗ヒト免疫グロブリン、例えば標識Fc領域特異性抗体であってもよい 。そのキットは支持体に固定された第二抗原を更に含有してもよい;好ましくは 、第二抗原はHIV中和抗体の産生を引き起こす免疫原のアミノ酸配列、即ちM N変異体からのHIV−I PND配列に相当するアミノ酸配列を有するペプチ ドである;更に好ましくは、gp160は第二支持体に固定され、ペプチドはM N PNDのPNDの存在に相当する配列を有する。In a preferred embodiment, the first antigen is immobilized on a solid support; is the PND region present at residues 297-331 or the PND region from which neutralizing antibodies are produced. HIV-1gp160 with some deletions; most preferably the first antigen is gp160Δ135. The detection agent may be labeled, e.g. with protein A. or a labeled anti-human immunoglobulin, such as a labeled Fc region-specific antibody. . The kit may further contain a second antigen immobilized on a support; preferably , the second antigen is the amino acid sequence of the immunogen that causes the production of HIV-neutralizing antibodies, namely M Peptide with amino acid sequence corresponding to HIV-I PND sequence from N variant more preferably, gp160 is immobilized on the second support and the peptide is M It has a sequence corresponding to the presence of PND of N PND.
もう1つの面において、本発明は、ヒトからの抗体含有生物学的サンプルをHI V−1gp160MNと接触させることからなる、サンプル抗体とgp160M Nとの免疫複合体の形成がHIV感染の診断特徴である、ヒトにおけるHIV− 1感染の検出方法を特徴とする。In another aspect, the invention provides methods for subjecting antibody-containing biological samples from humans to HI sample antibody and gp160M. The formation of immune complexes with N is a diagnostic feature of HIV infection. 1. It is characterized by a method for detecting infection.
MN単離物が常在HIV単離物であるため、MN単離物のPND配列を含むgp 160の使用によれば更に高感度のアッセイをもたらし、他のgp160 PN D配列、例えばmBで得られるよりも速く血清変換を検出できる。Since the MN isolate is a resident HIV isolate, gp containing the PND sequence of the MN isolate The use of gp160 results in even more sensitive assays, and the use of other gp160 PN Seroconversion can be detected faster than can be obtained with D sequences, such as mB.
好ましい態様において、第一抗原は固体支持体に固定される。その抗原はHIV −1gp160 PND又はPNDの中和部分に相当するアミノ酸配列を有する ペプチドを更に含有してもよい。PNDの全部又は一部に相当する合成ペプチド がgp160吸着剤に基づくアッセイに加えられる場合、そのアッセイで用いら れるgp160の量はアッセイ感度の低下なしに減少させることができる。In a preferred embodiment, the first antigen is immobilized on a solid support. The antigen is HIV -1gp160 has an amino acid sequence corresponding to PND or a neutralizing portion of PND It may further contain a peptide. Synthetic peptide corresponding to all or part of PND is added to a gp160 adsorbent-based assay, the The amount of gp160 present can be decreased without decreasing assay sensitivity.
本発明ハ、固定されたHIV−1gp160MN及び抗体と反応できる剤を含有 したヒト生物学的サンプル中におけるHIV−1抗体の検出用キットも特徴とす る。The present invention contains an agent capable of reacting with immobilized HIV-1gp160MN and antibodies. Also features a kit for the detection of HIV-1 antibodies in human biological samples Ru.
好ましい態様において、サンプルは血清であり、剤は標識された分子である。In a preferred embodiment, the sample is serum and the agent is a labeled molecule.
本発明は、混合された固定gp160とMN PND又はその一部の場合に相当 するアミノ酸配列を有するペプチド、及び抗体と反応できる剤を含有したヒト生 物学的サンプル中におけるHIV−1抗体の存在の診断用キットも特徴とする。The present invention corresponds to the case of mixed fixed gp160 and MN PND or a part thereof. A human biomolecule containing a peptide having an amino acid sequence and an agent capable of reacting with antibodies. Also featured is a kit for diagnosing the presence of HIV-1 antibodies in a physical sample.
本発明の方法はHIV−1感染と免疫感作とを識別する上で有用であり、安妊か つ安全である;例えば、産生上高価な全鎖長gp160のような組換えタンパク 質成分は同抗原部位を有する合成ペプチドで補ってもよい。The methods of the present invention are useful in distinguishing between HIV-1 infection and immunization, and are useful in distinguishing between HIV-1 infection and immunization. safe; for example, recombinant proteins such as full-length gp160, which are expensive to produce; The quality component may be supplemented with a synthetic peptide having the same antigenic site.
このため本発明の方法は感度を犠牲にすることなく費用を減らし、血清変換の早 期検出を可能にする。Therefore, the method of the present invention reduces costs without sacrificing sensitivity and allows faster seroconversion. Enable period detection.
本発明の他の特徴及び利点はその好ましい態様の以下の記載と請求の範囲から明 らかであろう。Other features and advantages of the invention will be apparent from the following description of its preferred embodiments and from the claims. It will be clear.
好ましい態様の説明 本発明の好ましい態様を記載する前に、図面が記載さ図1はgp160Δ135 及びgp160I[[B (即ち、NB単離物からのgp160)が−団のHI V陽性ヒト血清に関して抗原として比較されるEL I SAである。Description of preferred embodiments Before describing preferred embodiments of the invention, the drawings are described. and gp160I [[B (i.e., gp160 from NB isolates) EL ISA compared as an antigen with respect to V-positive human serum.
図2はgp160Δ135ベースアッセイの応答が様々な希釈倍率の単一血清に 対してgp160IIIBベースアッセイの応答と比較されたELISAである 。Figure 2 shows the response of the gp160Δ135-based assay to various dilutions of a single serum. is an ELISA compared with the response of gp160IIIB-based assay against .
図3はPNDベースペプチドが用いられたELISAである。Figure 3 is an ELISA using PND-based peptides.
図4は抗原がgp160mBと共に合成ペプチドから構成されたELISAであ る。Figure 4 shows an ELISA in which the antigen was composed of gp160mB and a synthetic peptide. Ru.
図5はgp160Δ135及びgp160mBが正常ヒト血清(NHS) 、ヒ トHIV陽性(+)血清又は抗RP174C血清でプローブ探査されたウェスタ ンプロットである。Figure 5 shows that gp160Δ135 and gp160mB were detected in normal human serum (NHS), human VESTA probed with HIV-positive (+) serum or anti-RP174C serum. This is a simple plot.
本発明は抗体に関する感度の有意低下なしにHIV−1工ンベロープタンパク質 gp160の異なる領域、例えば主要中和決定基vs、非PND領域を認識する 抗体を検出してそれらの間を識別する方法を提供する。これは1つの決定基のみ に相当するアミノ酸が欠失された組換えエンベロープタンパク質を吸着剤として 用いることにより行われる;結果として、非欠失決定基に対する抗体は検出され るが、一方欠失決定基に対する抗体は検出されない。The present invention provides a method for detecting HIV-1 envelope proteins without significantly reducing sensitivity for antibodies. Recognize different regions of gp160, e.g. major neutralizing determinants vs. non-PND regions Methods of detecting and distinguishing between antibodies are provided. This is only one determinant As an adsorbent, a recombinant envelope protein with an amino acid deletion corresponding to as a result, antibodies against non-deleted determinants will not be detected. However, antibodies against the deleted determinant were not detected.
組換えgp160mBSgp160Δ135及びg p 160MN/IIIB の製造 gp160Δ135はPND領域の欠失を含むgpユ60ポリペプチドである。Recombinant gp160mBSgp160Δ135 and gp160MN/IIIB Manufacturing of gp160Δ135 is a gp160 polypeptide containing a deletion of the PND region.
gp160Δ135はタンパク質をPNDに対する抗体と反応できないようにす る欠失を存したgp160ポリペプチドの例としてここでは用いられる;その欠 失は残基297−331間において1以上のアミノ酸であってもよい。gp16 0Δ135の製造はノavaherian et al、、1989.Proc 、Nat。gp160Δ135 renders the protein incapable of reacting with antibodies against PND. used herein as an example of a gp160 polypeptide that had a deletion; The deletion may be one or more amino acids between residues 297-331. gp16 0Δ135 was manufactured by Novaherian et al., 1989. Proc , Nat.
Aca、Sci、8B+6788で記載されていた。gp160Δ135はバキ ュロウィルストランスファーベクターpAc、610に組込んでクローニングさ れたgp160mBLンベローブ遺伝子から誘導した(Rusche et a l。It was described in Aca, Sci, 8B+6788. gp160Δ135 is Baki Cloned by integrating into the cellulovirus transfer vector pAc, 610. gp160mBL envelope gene (Rusche et al. l.
1987、前掲)。PNDを含有したこのエンベロープ遺伝子のBgll+断片 は部位特定変異誘発のためM13ベクターに組込んでサブクローニングした。合 成オリゴヌクレオチド (5°CTACTAATGTTACAATGTGCGGGTCTTGTACAA TTAATTT 3’)はPNDを含むヌクレオチドの欠失を指示するために用 い、エンベロープ遺伝子のアミノ酸300−328の欠失を生じさせた。次いで この変異誘発断片はRu5che et al。1987, supra). Bgll+ fragment of this envelope gene containing PND was subcloned into M13 vector for site-directed mutagenesis. If oligonucleotide (5°CTACTAATGTTACAATGTGCGGGTCTTGTACAA TTAATTT 3') is used to indicate the deletion of a nucleotide containing PND. This resulted in a deletion of amino acids 300-328 of the envelope gene. then This mutagenic fragment was produced by Ru5che et al.
1987、前掲で記載されたように得られたバキュロウィルストランスファーベ クター及び組換えバキュロウィルスに組込んで逆にクローニングした。1987, baculovirus transfer vector obtained as described in supra. vector and recombinant baculovirus and reverse cloned.
下記アッセイでは、mB単離物からの配列がMN決定基からなるPND領域を囲 むgp 160MN/mBハイブリッドエンベロープ遺伝子を抗原として用いた 。gp160MN/IIIBハイブリッドを用いたが、MN単離物のPNDを保 留したあらゆるMNポリペブトもしくは断片又はあらゆるMNハイブリッド、例 えばgp160MNを用いてもよい。g p 160MN/IffBz−イブリ ・ソドはMNエンベロープのB g I I!断片の直接置換えにより組立てた 。これによりMN PNDを有してIIIB gp160枠組み内に含有された ハイブリツドDIB/MNエンベロープ遺伝子を得た。得られた。ノ〜イブリ・ ソド分子のPND領域に対して生成された抗体はMNに特異的である。次いでバ キュロウィルストランスファーベクターpAc610内に含有されたこのノ\イ ブリ・ンドエンベローブ遺伝子はRu5cha et al、1987.前掲で 記載されたように組換えバキュロウィルスを生成するために用いた。In the assay described below, sequences from mB isolates surround the PND region consisting of MN determinants. Mugp 160MN/mB hybrid envelope gene was used as an antigen. . gp160MN/IIIB hybrid was used, but the PND of the MN isolate was preserved. Any MN polypebut or fragment or any MN hybrid, e.g. For example, gp160MN may be used. gp 160MN/IffBz-Iburi ・Sodo is B g I I of MN envelope! Assembled by direct replacement of fragments . As a result, it was included within the IIIB gp160 framework with MN PND. A hybrid DIB/MN envelope gene was obtained. Obtained. No~Iburi・ Antibodies raised against the PND region of the sodo molecule are specific for MN. Then the bar This protein contained within the culovirus transfer vector pAc610 The Brind envelope gene was described by Rucha et al., 1987. In the above It was used to generate recombinant baculoviruses as described.
組換えバキュロウィルスで昆虫細胞〔S、フルギベルダ(S、frugiper da))の感染による組換えエンベロープタンパク質の産生はRu5che a t at、1987.前掲で記載されたように実施した。Insect cells [S, frugiperda] with recombinant baculovirus The production of recombinant envelope protein by infection with Ru5che a) t at, 1987. It was performed as described supra.
合成ペプチドの製造 主要中和決定基に相当する合成ペプチドはメリフィールド固相合成操作□Ier rif’jeld、1983.J、Amer、Chea+、Soc。Production of synthetic peptides Synthetic peptides corresponding to major neutralizing determinants were prepared using the Merrifield solid-phase synthesis procedure □Ier. rif'jeld, 1983. J, Amer, Chea+, Soc.
85:2149)により製造した。ペプチドを逆相HPLCで精製し、当業界で 周知の操作に従いアミノ酸組成分析により特徴付けた。ペプチドの名称、それら が相当する単離物及びそれらの配列は下記のとおりである:U工35 (XIよ り) NNTRKS工R工QRGPGR)JVTXGKIGCRJ?174c (エエより) CM’NTRX5工R工QRGPGRAFVT工GXIGCRP 142 (MIN) YNXRKR工H工GPGRAF!I工GCRP70c (MIN) INCTRPNYNXRKR工H工GPGRAFY9工IGTIR QAI−ICNI!;ペプチドRP174c及びRP70cは各々2つのシステ ィン残基間に分子内ジスルフィド結合を含んで0る。85:2149). The peptides were purified by reverse phase HPLC and It was characterized by amino acid composition analysis according to well-known procedures. Names of peptides, their The corresponding isolates and their sequences are as follows: ri) NNTRKS Engineering R Engineering QRGPGR) JVTXGKIGCRJ? 174c (From Ae) CM’NTRX5 Engineering R Engineering QRGPGRAFVT Engineering GXIGCRP 142 (MIN) YNXRKR Engineering H Engineering GPGRAF! I engineering GCRP70c (MIN) INCTRPNYNXRKR Work H Work GPGRAFY9 Work IGTIR QAI-ICNI! ; peptides RP174c and RP70c each have two systems Contains an intramolecular disulfide bond between the amino acid residues.
このような結合をつくるための方法はZhang et al、。A method for creating such a bond is described by Zhang et al.
L9BB、BLochetxlstry、27:3785で記載されている。こ れら結合の存在は質量スペクトル測定分析により確認した。L9BB, BLochetxlstry, 27:3785. child The existence of these bonds was confirmed by mass spectrometry analysis.
抗体の検出 吸着された抗体はいくつかの周知法のうちいずれでも検出されるが、その−例は 酵素結合イムノソルベントアッセイ(ELISA)である。抗原(gp160Δ 135、gp160IIIB、 gp160MN/IIIB、合成ペプチド又は これら試薬の組合せ)を炭酸ナトリウム緩衝液(pH9,6)のような適切な緩 衝液で>0.125μg/l(好ましくは1μg/l)の濃度に希釈し、50μ gをポリスチレン96ウエル微量滴定プレート〔イムノダイナミクス(Iimu nodynamics)、シャンティイ、VA)の各ウェルに加える。室温(R T)で16〜20時間インキュベート後にウェルを空にし、0.02%アジ化ナ トリウム含有リン酸緩衝液(P B S)中10 ig/ml牛血清アルブミン (BSA)のような阻止溶液で再充填し、RTで60分間以上インキュベートす る。次いでウェルを空にし、0.1%ツイーン20含有PBS (PBS−T) で3回洗浄する。抗gl)160抗体の存在に関して試験される血清サンプルを PBS−Tで希釈し、プレートに加える(50μm/ウェル)。数回の血清希釈 を選択してもよい。室温(RT)で90分間インキュベート後にウェルを空にし 、再びPBS−Tで3回洗浄する。Antibody detection Adsorbed antibodies can be detected by any of several well-known methods, including: Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Antigen (gp160Δ 135, gp160IIIB, gp160MN/IIIB, synthetic peptide or (a combination of these reagents) in a suitable buffer solution such as sodium carbonate buffer (pH 9.6). Dilute with buffer solution to a concentration of >0.125 μg/l (preferably 1 μg/l) and add 50 μg/l. g in a polystyrene 96-well microtitration plate [Immunodynamics (Iimu Nodynamics), Chantilly, VA). Room temperature (R After 16-20 hours of incubation with T), the wells were emptied and treated with 0.02% NaAzide. 10 ig/ml bovine serum albumin in thorium-containing phosphate buffer (PBS) Refill with blocking solution such as (BSA) and incubate for at least 60 minutes at RT. Ru. The wells were then emptied and filled with PBS containing 0.1% Tween 20 (PBS-T). Wash 3 times with Serum samples to be tested for the presence of anti-gl)160 antibodies Dilute in PBS-T and add to plate (50 μm/well). Several serum dilutions may be selected. Empty the wells after 90 min incubation at room temperature (RT). , wash again three times with PBS-T.
gp160抗原に吸着されたヒト抗体を検出するため、標識抗体−検出剤溶液を ウェルに加え、RTで30〜90分間インキュベートする。用いてよい剤の例は ヤギ抗ヒトIgG:西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体、ヤギ抗ヒトIgG+ア ルカリホスファターゼ複合体、ブドウ状球菌タンパク質A:西洋ワサビペルオキ シダーゼ複合体又はいずれかの慣用的複合体である。プローブと共にインキュベ ート後、ウェルをPBS−Tで3回洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ基質3 ,3′−アジドビス(3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸)(ABT S)及び過酸化水素のような適切な基質溶液で処理する。溶液を15〜20分間 インキュベートし、各ウェル中における溶液の吸光度を(A B T Sに関し て410nmで)調べる。各溶液の吸光度は抗原により吸着された抗体の量に比 例している。To detect human antibodies adsorbed to gp160 antigen, a labeled antibody-detection agent solution was prepared. Add to wells and incubate for 30-90 minutes at RT. Examples of agents that may be used are Goat anti-human IgG: horseradish peroxidase conjugate, goat anti-human IgG + a Lucari phosphatase complex, staphylococcal protein A: horseradish peroxy sidase complex or any conventional complex. Incubate with probe After washing, the wells were washed three times with PBS-T and treated with horseradish peroxidase substrate 3. ,3'-azidobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABT S) and a suitable substrate solution such as hydrogen peroxide. Leave the solution for 15-20 minutes Incubate and measure the absorbance of the solution in each well (with respect to ABTS). (at 410 nm). The absorbance of each solution is relative to the amount of antibody adsorbed by the antigen. I'm giving an example.
gp160抗原を用いた血清サンプルの試験上記操作を用いて、gp160Δ1 35又はgp160IIIBとの結合に関して一団のHIV−1陽性ヒト血清1 4例を試験した(各々は炭酸緩衝液中1μg/鱈でコートした)。インターステ ート・ブラッドバンク(tnterstate Bloodbank)、メンフ ィス、TNから得られてかつ1(TLVIII E IA [アボット・ラボラ トリーズ(Abbott Laboratories)、シカゴ、LL)で陽性 と試験上示された血清サンプルを1 : 200希釈で試験した。ヤギ抗ヒトI gG:西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体を検出剤として用いた。各血清のアッ セイに関するシグナル対バックグラウンド比は図1で示されている。そのデータ はgp160Δ135及びgp160mBを用いたイムノアッセイが試験された すべてのヒト血清サンプルにおいて抗HIV抗体を検出する上で同等に有効であ ることを証明している。Testing serum samples with gp160 antigen Using the procedure described above, gp160Δ1 A panel of HIV-1 positive human sera 1 for binding to 35 or gp160IIIB. Four cases were tested (each coated with 1 μg/cod in carbonate buffer). Interste tnterstate Bloodbank, Memph obtained from TN and 1 (TLVIIIEIA [Abbott Laboratories Positive at Abbott Laboratories, Chicago, LL) The serum samples indicated above were tested at a 1:200 dilution. Goat anti-human I gG:horseradish peroxidase complex was used as a detection agent. Each serum assay The signal-to-background ratio for the cell line is shown in Figure 1. that data An immunoassay using gp160Δ135 and gp160mB was tested. Equally effective in detecting anti-HIV antibodies in all human serum samples It proves that.
単一のHIV陽性血清は上記操作を用いて様々な希釈倍率で試験した。希釈は1 :1〜1 : 8192の範囲内であった。図2で示されたように、gp160 Δ135ベースアッセイの応答は各希釈時にgl)160mBベースアッセイの 応答と実験誤差の範囲内で同一であった。Single HIV positive sera were tested at various dilutions using the procedure described above. dilution is 1 :1 to 1:8192. As shown in Figure 2, gp160 The response of the Δ135-based assay is at each dilution gl) of the 160 mB-based assay. The responses were identical within experimental error.
PNDベース合成ペプチドで誘導された抗血清がgp160Δ135に基づくイ ムノアッセイで応答を起こさないことを示すため、下記実験を実施した。動物を 前記のように製造された下記試薬で免疫した:PR174c (モルモット59 B1モルモット598)gp160Δ135(ヤギ111B) gp160mB (ウサギ#1) 抗血清は常法に従い、指定された動物を相当ペプチド又はタンパク質で免疫する ことにより得た。各血清は4種の異なる抗原:RP135、RP142、gp1 60Δ135及びgp160mBの各々を用いてイムノアッセイで試験した。抗 原を炭酸緩衝液中1μg/a+ lでコートし、結合抗体をヤギ抗ヒトIgG: 西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体を用いて検出した。得られた吸光度値は図3 で示されている。RP174c (mB PNDに相当する)で免疫されたモル モットからの抗血清はRP135及びgp1601nBが抗原として用いられた 場合に有意の吸光度を生じたが、但しgp160Δ135又はRP142 (M N PNDからのペプチド)が用いられた場合に応答を生じなかった。gp16 0Δ135又はgp160IfIBで誘導された抗血清はgp160Δ135又 はgp160mBが抗原として用いられた場合に類似した応答を生じた。Antisera induced with PND-based synthetic peptides were tested against gp160Δ135-based antibodies. The following experiment was performed to demonstrate that no response was caused in the immunoassay. animals Immunization was carried out with the following reagent prepared as described above: PR174c (guinea pig 59 B1 guinea pig 598) gp160Δ135 (goat 111B) gp160mB (Rabbit #1) Antiserum is prepared by immunizing the designated animal with the corresponding peptide or protein according to standard methods. I got it by doing that. Each serum has 4 different antigens: RP135, RP142, gp1 60Δ135 and gp160mB were tested in an immunoassay. anti The target antibody was coated with 1 μg/a+l in carbonate buffer and the bound antibody was coated with goat anti-human IgG: Detection was performed using a horseradish peroxidase complex. The obtained absorbance values are shown in Figure 3. It is shown in Mol immunized with RP174c (corresponding to mB PND) Antisera from Mott were used with RP135 and gp1601nB as antigens. significant absorbance occurred in some cases, except for gp160Δ135 or RP142 (M Peptide from N PND) did not produce a response when used. gp16 Antisera induced with 0Δ135 or gp160IfIB produced a similar response when gp160mB was used as antigen.
これらELISAの結果はgp160Δ135に基づく酵素イムノアッセイがE IV陽性ヒト血清に対する応答に関してgp160IIIBに基づくアッセイと 同じくらい有効であるが、但し前者のアッセイは後者と逆にPNDに相当するペ プチドに対してつくられた抗血清に応答しないことを示している。These ELISA results indicate that the gp160Δ135-based enzyme immunoassay is gp160IIIB-based assay for response to IV-positive human serum and The former assay is as effective as the PND equivalent, although the former assay is the opposite of the latter. It has been shown that there is no response to antiserum raised against Ptide.
抗原として組換えg p 160MN/mB組換えgp 160MN/1ItB を前記酵素イムノアッセイにおいて抗原として使用上gp160■Bと比較した 。Recombinant gp 160MN/mB recombinant gp 160MN/1ItB as antigen was compared with gp160B for use as an antigen in the enzyme immunoassay. .
微量滴定プレートのウェルを0.125.0.25.0゜50.1.0及び2. 0μg/lの濃度でgp160の溶液(炭酸緩衝液中)でコートした。4種のH IV陽性ヒト血清のプールを1 : 100.1 : 1000及び1:10. 000の希釈で各抗原に関して調べた。加えて、正常ヒト血清のプールを1 : iooの希釈で調べた。ヤギ抗ヒトIgG:西洋ワサビペルオキシダーゼ複合 体をプローブとして用い、ABTSを基質として用いた。測定された吸光度値( 410nm)は表1で示されている。The wells of the microtiter plate were 0.125.0.25.0°50.1.0 and 2. It was coated with a solution of gp160 (in carbonate buffer) at a concentration of 0 μg/l. 4 types of H Pools of IV positive human sera were divided into 1:100.1:1000 and 1:10. Each antigen was tested at a dilution of 0.000. In addition, 1 pool of normal human serum: It was investigated by diluting ioo. Goat anti-human IgG: horseradish peroxidase conjugate The body was used as a probe and ABTS was used as a substrate. The measured absorbance value ( 410 nm) are shown in Table 1.
表1で示された結果はgp160MN/II[Bが抗原として用いられた場合に アッセイの応答が大きいことを示している。表1は正常ヒト血清プールに対する gp160MN/mBベースアッセイの応答もgp160II[Bベースアッセ イの応答より大きいが、但しこれらのバックグラウンド値が差し引かれたならば 、特に低濃度のgp160でgp160MN/IIIBが抗原として用いられた 場合にHIV陽性血清プールに対する応答が大きいことMN単離物の主要中和決 定基に相当する合成ペプチドRP142を抗原としてgp160mBと組合せて 用いた。微量滴定プレートのウェルをペプチドRP142と共に又はそれなしに 様々な濃度のgp160mB (炭酸緩衝液中)でコートした。HIV陽性ヒト 血清(1: 200希釈)に対する各アッセイの応答は図4で示されている。図 4におけるデータは合成ペプチド及びgp160の組合せがELISAで更に高 感度を示し、gp160が抗原として単独で用いられる場合よりも低濃度でgp 160を使用できることを示している。The results shown in Table 1 show that when gp160MN/II[B was used as the antigen This shows that the assay response is large. Table 1 shows the normal human serum pool. The response of the gp160MN/mB-based assay also is larger than the response of B, but if these background values are subtracted. , gp160MN/IIIB was used as an antigen, especially at low concentrations of gp160. The major neutralizing determination of MN isolates is that the response to HIV-positive serum pools is large in cases where Synthetic peptide RP142 corresponding to the constant group was combined with gp160mB as an antigen. Using. Microtiter plate wells with or without peptide RP142 Coated with various concentrations of gp160mB (in carbonate buffer). HIV positive human The response of each assay to serum (1:200 dilution) is shown in Figure 4. figure The data in 4 show that the combination of synthetic peptide and gp160 was even higher in ELISA. showed sensitivity and reduced gp160 at lower concentrations than when gp160 was used alone as antigen. 160 can be used.
gl)160Δ135を用いたウェスタンプロット分析gp160Δ135及び gp160mBを個別的にSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動に付し、ニト ロセルロースフィルター上にプロットした(Tovbin et al、。gl) Western blot analysis using 160Δ135 gp160Δ135 and gp160mB was individually subjected to SDS polyacrylamide gel electrophoresis, and plotted on cellulose filters (Tovbin et al.
1979、Proc、Nat、Aca、Sc1.7B:4350) 、プロット をHIV陽性ヒト血清サンプル、モルモットでRP174cに対してつくられた 抗血清及び正常ヒト血清で処理した。吸着された抗体をヤギ抗ヒトIgG:西洋 ワサビペルオキシダーゼ複合体又はヤギ抗マウスIgG:西洋ワサビペルオキシ ダーゼ複合体しかる後ジアミノベンジジン溶液及び過酸化水素でプロットの処理 により視覚化させた。1979, Proc, Nat, Aca, Sc1.7B:4350), Plot An HIV-positive human serum sample, produced against RP174c in guinea pigs. Treated with antiserum and normal human serum. Goat anti-human IgG: Western Horseradish peroxidase conjugate or goat anti-mouse IgG: Horseradish peroxidase Treatment of the plots with diaminobenzidine solution and hydrogen peroxide followed by the Dase complex. It was visualized by
図5はHIV陽性ヒト血清がプロットされたgp160の双方を認識したが、一 方抗RP 174 c血清がgp160Δ135ではなくgp160mBを認識 したことを示している。正常ヒト血清はいずれのタンパク質も認識しなかった。Figure 5 shows that HIV-positive human serum recognized both plotted gp160, but only one Anti-RP 174c serum recognizes gp160mB rather than gp160Δ135 It shows what you did. Normal human serum did not recognize either protein.
他の態様も下記請求の範囲内に属する。Other embodiments are within the scope of the following claims.
FIG、 2 0RP138σlI!3) 要 約 書 天然HIV−1に特異的な抗体と免疫複合体を形成できるが但し個体でHIV中 和抗体の産生を引き起こす第二抗原に特異的な抗体と免疫複合体を実質上形成で きない第一抗原と、個体からの生物学的サンプルを接触させることからなり、第 一抗原との免疫複合体の形成が個体におけるHIV感染の診断特徴である、個体 におけるHIV−1感染の診断方法。FIG. 2 0RP138σlI! 3) Summary book Can form immune complexes with natural HIV-1 specific antibodies, but individuals with HIV substantially form immune complexes with antibodies specific to the second antigen that trigger the production of antibodies against the antigen. The first antigen consists of contacting a biological sample from an individual with a first antigen that cannot be detected. An individual in whom the formation of an immune complex with an antigen is a diagnostic feature of HIV infection in the individual A method for diagnosing HIV-1 infection in.
国際調査報告international search report
Claims (39)
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US53576790A | 1990-06-08 | 1990-06-08 | |
US535,767 | 1990-06-08 | ||
PCT/US1991/004021 WO1991019011A1 (en) | 1990-06-08 | 1991-06-07 | Immunoassays for anti-hiv-1 antibodies |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH05507559A true JPH05507559A (en) | 1993-10-28 |
Family
ID=24135683
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP91511485A Pending JPH05507559A (en) | 1990-06-08 | 1991-06-07 | Immunoassay for anti-HIV-1 antibodies |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0532673A1 (en) |
JP (1) | JPH05507559A (en) |
CA (1) | CA2082806A1 (en) |
WO (1) | WO1991019011A1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015518156A (en) * | 2012-05-30 | 2015-06-25 | ビオ−ラド・イノベーションズ | Methods for diagnosing and distinguishing HIV-2 infection |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0554389B2 (en) * | 1990-10-17 | 2002-08-14 | The United States Of America | Molecular clones of hiv-1 and uses thereof |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4659678A (en) * | 1982-09-29 | 1987-04-21 | Serono Diagnostics Limited | Immunoassay of antigens |
US4725669A (en) * | 1984-11-09 | 1988-02-16 | President And Fellows Of Harvard College | Assay for detecting infection by human T-cell lymphotropic virus-III |
EP0436634A1 (en) * | 1988-10-03 | 1991-07-17 | Repligen Corporation | Hiv proteins and peptides useful in the diagnosis, prophylaxis or therapy of aids |
-
1991
- 1991-06-07 WO PCT/US1991/004021 patent/WO1991019011A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-06-07 CA CA 2082806 patent/CA2082806A1/en not_active Abandoned
- 1991-06-07 JP JP91511485A patent/JPH05507559A/en active Pending
- 1991-06-07 EP EP91912258A patent/EP0532673A1/en not_active Withdrawn
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015518156A (en) * | 2012-05-30 | 2015-06-25 | ビオ−ラド・イノベーションズ | Methods for diagnosing and distinguishing HIV-2 infection |
US9689873B2 (en) | 2012-05-30 | 2017-06-27 | Bio-Rad Innovations | Method for diagnosing and differentiating HIV-2 infections |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2082806A1 (en) | 1991-12-09 |
EP0532673A4 (en) | 1994-03-30 |
EP0532673A1 (en) | 1993-03-24 |
WO1991019011A1 (en) | 1991-12-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2733059B2 (en) | Diagnostic peptides for HTLV-III antibodies, their production and use | |
US4753873A (en) | Peptides for the diagnosis of HTLV-III antibodies, their preparation and use | |
AU641375B2 (en) | Synthetic HIV-like peptides, their compositions and uses | |
PT1881064E (en) | Hcv-anti-core monoclonal antibody | |
EP0258404A1 (en) | Method of detecting antibody against htlv-iii. | |
JP3534417B2 (en) | Method for simultaneous determination of HIV antigen and HIV antibody | |
CA2126247A1 (en) | Monoclonal antibody to hiv-2 and uses thereof | |
US5861241A (en) | Monoclonal antibodies for detecting Norwalk virus | |
AU754309B2 (en) | Diagnosis of feline immunodeficiency virus infection using env/gag polypeptide markers | |
WO1995023973A2 (en) | Hiv immunoassay utilizing recombinant protein and synthetic peptide reagents | |
JPH10502165A (en) | Detection of different HIV genotypes using synthetic peptides-improved immunoassay | |
WO1991013360A1 (en) | NEW HIV p24 PEPTIDES, DIAGNOSTIC ANTIGENS AND DISCRIMINATIVE IMMUNOASSAY METHOD | |
JPH05504400A (en) | Antibody or antigen combination assays | |
WO2008034297A1 (en) | Method of detecting antibodies against a series of human immunodeficiency virus proteins | |
JPH05507559A (en) | Immunoassay for anti-HIV-1 antibodies | |
JP2553159B2 (en) | Hemagglutination assay | |
JPH08304397A (en) | Detecting method for pathogen infection | |
KR0168447B1 (en) | T-lymphotropic retrovirus monoclonal antibodies | |
KR960013600B1 (en) | Cysteine thiol-protected peptides for use in immunoassays | |
JPH06502723A (en) | Method for determining the sensitivity and/or specificity of an analytical system for detecting antibodies | |
WO2023242155A1 (en) | Compositions and methods for the diagnosis of hiv infection | |
AU656221B2 (en) | Method for immunological testing and composition and kit for use therein | |
WO1997006823A1 (en) | Monoclonal antibodies for detecting norwalk virus |