JPH05507559A - Immunoassay for anti-HIV-1 antibodies - Google Patents
Immunoassay for anti-HIV-1 antibodiesInfo
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.
Description
【発明の詳細な説明】 抗ＨＩＶ−１抗体に関するイムノアッセイ発明の背景 本発明はヒト免疫不全ウィルスタイプ１（ＨＩＶ−１）に特異的な抗体が検出さ れるイムノアッセイに一般的に関する。[Detailed description of the invention] Background of the invention of immunoassay for anti-HIV-1 antibodies The present invention detects antibodies specific to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1). Generally related to immunoassays.
ＨＩＶ−１は後天性免疫不全症候群（エイズ）に関して提唱された原因体である 。ＨＩＶ−１に感染した個体は様々なウィルスタンパク質、特にコア、ポリメラ ーゼ及びエンベロープタンパク質と結合する血清抗体を産生する（Ａｌｌａｎ ｅｔ ａｌ、、１９８５，５ｃｆｅｎｃｅ、２２８：１０９１；Ｃｈａｎｇ ｅ ｔａｌ、、１９８５，５ｃｉｅｎｃｅ、２２８：９３及び１９８５．Ｎａｔｕｒ ｅ ３１５：１５１；Ｃｒｏｖｌ ｅｔ ａｌ、、１９８５．Ｃｅ１１．４１： ９７９；Ｖｅｒｏｎｅｓｅ ｅｔ ａｌ、、１９８５゜５ｃｉｅｎｃｅ、２２９ ＋１４０２ 及び１９８Ｂ、５ｃｉｅｎｃｅ、２３１：１２８９）。これらの抗 体を検出するイムノアッセイは、ＨＩＶ−１感染を診断するため及びＨＩＶ−１ 汚染に関して献血をスクリーニングするために用いられる。例えば、様々なタイ プの酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬ Ｉ ＳＡ）及びラジオイムノア ッセイ（ＲＩ Ａ）は迅速なスクリーニング及び初期診断に用いられる。ＨＩＶ 及び非ＨＩＶ双方のタンパク質と、組換えタンパク質及び合成ペプチドを含めた 精製ウィルス成分を含有した全ウィルス溶離物が抗体吸着剤として用いられてき た。ウェスタンプロットは、サイズにより分離されたＨＩＶタンパク質を認識す る抗体を検出するために用いられてきた。HIV-1 is the proposed causative agent for acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) . Individuals infected with HIV-1 contain various viral proteins, especially core and polymerase. produce serum antibodies that bind enzymes and envelope proteins (Allan et al, 1985, 5cfence, 228:1091; Chang e tal, 1985, 5science, 228:93 and 1985. Nature e 315:151; Crovl et al., 1985. Ce11.41: 979; Veronese et al, 1985°5science, 229 +1402 and 198B, 5science, 231:1289). These anti Immunoassays to detect HIV-1 infection and Used to screen blood donations for contamination. For example, various Thai Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and radioimmunoassay (RIA) is used for rapid screening and early diagnosis. HIV and non-HIV proteins, as well as recombinant proteins and synthetic peptides. Whole virus eluates containing purified viral components have been used as antibody adsorbents. Ta. Western blot recognizes HIV proteins separated by size. It has been used to detect antibodies related to
発明の要旨 本発明はＨＩＶ−１に感染したヒトと、主要中和決定基（ＰＮＤ）の全部又は一 部に相当するペプチドでＨＩＶ−１に対して予防接種されたヒトとを識別するた めに使用できる診断及び検出方法を提供し、しかも例えば血清変換を検出するた めに更に高感度でかつ高価でない診断方法を提供する。Summary of the invention The present invention relates to human infection with HIV-1 and all or part of the major neutralizing determinant (PND). to distinguish humans vaccinated against HIV-1 with peptides corresponding to provide diagnostic and detection methods that can be used for To provide a diagnostic method that is more sensitive and less expensive.
したがって、−面において、本発明は天然ＨＩＶ−１に特異的な抗体と免疫複合 体を形成できるが但しヒトでＨＩＶ中和抗体の産生を引き起こす第二抗原に特異 的な抗体と免疫複合体を実質上形成できない第一抗原とヒトからの生物学的サン プルを接触させることからなり、第一抗原との免疫複合体の形成が個体における ＨｒＶ感染の診断特徴である、ヒトにおけるＨＩＶ−１感染の診断方法を特徴と する。（ここで用いられる“中和“とは無細胞ピリオンによる細胞のＨＩＶ感染 又は感染及び未感染細胞の融合又は双方を阻害する抗体の能力に関する二″免疫 複合体°とは非共有結合抗体／抗原対に関する；“に特異的な“及び゛と反応す る゛とは抗原と特異的に結合できることを意味する； “免疫複合体を実質上形 成できない”抗体とは特異的抗原への抗体の結合と同抗原への正常ヒト血清の結 合との間に３倍以上の差異がないことを意味する。） 好ましい態様において、生物学的サンプルは体液、例えば血清である；第一抗原 は固体支持体に固定されるが、いかなる標準イムノアッセイフォーマットも使用 できる。Therefore, in one aspect, the present invention provides antibodies specific for native HIV-1 and immune complexes. However, it is specific for the second antigen that causes the production of HIV-neutralizing antibodies in humans. Primary antigens and biological samples from humans that are virtually incapable of forming immune complexes with biological antibodies. The formation of an immune complex with the first antigen occurs in the individual. A diagnostic method for HIV-1 infection in humans, which is a diagnostic feature of HrV infection. do. (“Neutralization” as used here refers to HIV infection of cells by cell-free pilions. or secondary immunization regarding the ability of antibodies to inhibit fusion of infected and uninfected cells or both. Complex ° refers to a non-covalently bound antibody/antigen pair; “Ru” means that it can specifically bind to an antigen; ``Antibodies that cannot be produced'' are due to the binding of antibodies to specific antigens and the binding of normal human serum to the same antigens. This means that there is no difference of more than 3 times between the ) In a preferred embodiment, the biological sample is a body fluid, e.g. serum; the first antigen is immobilized on a solid support, but any standard immunoassay format can be used. can.
ヒトが予防接種されたかどうかを決定するため、その方法ではサンプルを第二固 体支持体に固定された第二抗原と接触させるステップを更に含んでいてもよいが 、その場合に第二抗原は免疫原である。（ここで用いられる″第一″及び“第二 ”とはスクリーニングステップが実施される順序を意味するわけではない。）好 ましくは、第一抗原は、主要中和決定基（ＰＮＤ）の一部又は中和抗体がつくら れうるＰＮＤの一部、即ちその中和部分を欠＜ＨＩＶ−１ｇｐ１６０エンベロー プタンパク質である。（ここで用いられる“主要中和決定基”とは参考のためこ こに組み込まれるＲａｔｎｅｒ ｅｔａｌ、、Ｌ９８５．Ｎａｔｕｒｅ、３１３ ：２７７のナンバーコンベンジｓンに従いアミノ酸２９７−３３１に位置するｇ ｌ）１６０の領域を含む。）最も好ましくは、このタンパク質はｇｐ１６０Δ１ ３５である。（ここで用いられるｇｐ１６０Δ１３５とはＰＮＤを欠くいずれか のｇｌ）１６０タンパク質を意味する；ｇｐ１６０Δ１３５は、ＰＮＤ又は中和 抗体がつくられるＰＮＤの一部についてコードするＤＮＡを欠失するように工学 処理された組換え遺伝子から発現されつるか、あるいはＰＮＤを欠くように化学 的に変えられたタンパク質であってもよい。）好ましくは、第二抗原は、ｇｐ１ ６０のＰＮＤを含む；更に好ましくは、それは完全ＨＩＶ−１ｇｐ１６０エンベ ロープタンパク質（即ち、それは主要中和決定基を含有する）、例えばｇｐ１６ ０ＭＮもしくはその断片又はｇ ｐ １．６０の場合に相当するアミノ酸配列を 有した合成ペプチドを含むが、それらはいずれも免疫原であってよい。好ましく は、第二抗原は、ｇｐ１６０のＰＮＤ。To determine whether a person has been vaccinated, the method involves The method may further include the step of contacting the second antigen immobilized on the body support. , in which case the second antigen is an immunogen. (“first” and “second” used here) ” does not imply the order in which the screening steps are performed.) Preferably, the first antigen is a part of the major neutralizing determinant (PND) or a part of the primary neutralizing determinant (PND) or The HIV-1gp160 envelope lacks a portion of the PND that can be absorbed, i.e., its neutralizing portion. protein. (“Major neutralizing determinant” as used here is for reference only. Ratner et al., L985. Nature, 313 :g located at amino acids 297-331 according to the number convection sequence of 277 l) Contains 160 regions. ) Most preferably the protein is gp160Δ1 It is 35. (gp160Δ135 used here is either one lacking PND gl)160 protein; gp160Δ135 is PND or neutralizing Engineering to delete the DNA encoding the part of the PND from which antibodies are made Expressed from recombinant genes that have been processed or chemically modified to lack PND. It may also be a protein that has been altered. ) Preferably, the second antigen is gp1 60; more preferably, it contains the entire HIV-1gp160 envelope. rope proteins (i.e. it contains the major neutralizing determinants), e.g. gp16 0MN or its fragment or the amino acid sequence corresponding to gp 1.60 including synthetic peptides with a peptide, any of which may be an immunogen. preferably The second antigen is gp160 PND.
例えばｇｐ１６０ＭＮ（即ち、ＭＮ単離物からのｇｐ１６０）のＰＮＤ又はその 中和部分の場合に相当するアミノ酸配列を有したタンパク質断片又は合成ペプチ ドである；最も好ましくは、第二抗原はｇｐ１６０ＭＮとその免疫原のＰＮＤと の組合せである。（ここで用いられる“免疫原°とは哺乳動物、例えばウサギ又 はヒトの免疫系により中和抗体の産生を引き起こす抗原である。）このため、抗 原がｇｐ１６０Δ１３５である場合の検出方法ではＰＮＤ以外に存在するｇｐ１ ６０の領域を認識するＨＩＶ−１特異性抗体を検出するが、一方抗原がｇｐ１６ ０である（ＰＮＤペプチドを含んでいてもよい）場合の検出方法ではｇｐ１６０ 分子のいずれかの部分に特異的な抗体を検出し、それにはＰＮＤ特異性抗体の検 出を含む。ＨＩＶ−１に感染したヒトからの生物学的サンプルは双方の方法で検 出しうる抗体を含有し、一方ＰＮＤペプチドでＨＩＶ−１に対して免疫されたが 但しウィルスに感染していないヒトからのサンプルは、完全ｇｐ１６０分子、即 ちＰＮＤを含んだ分子、或いはＰＮＤペプチド、又はこの２種の組合せを用いる 後者の方法のみで検出しうる抗体を含有している。ここで用いられる“に相当す る′又は“に由来する”アミノ酸配列とはそのアミノ酸配列が他のアミノ酸配列 の全部又は一部と同一であることを意味する。ここで用いられる“ＭＮ”とはＨ ＩＶのＭＮ始原型又はＭＮ始原型のウィルス変異体に関する。ＭＮ始原型ウィル スはｇｐ １６０エンベロープタンパク質のＰＮＤ領域内におけるアミノ酸サブ 配列Ｒ−１−Ｈ−１−Ｇ−Ｐ−Ｇ−Ｒ−Ａ−Ｆ−Ｙにより規定される；ＭＮウィ ルス変異体は残基１−Ｇ−Ｐ−Ｇ−１？で完全なアミノ酸配列相同性及び上記Ｍ Ｎ配列の残り６アミノ酸と少くとも３６％の相同性を示す変異体としてここでは 規定される。For example, the PND of gp160MN (i.e., gp160 from MN isolate) or its Protein fragments or synthetic peptides with amino acid sequences corresponding to the case of the neutralizing moiety Most preferably, the second antigen is a combination of gp160MN and its immunogenic PND. It is a combination of (“Immunogen” as used herein refers to mammals, such as rabbits or is an antigen that causes the production of neutralizing antibodies by the human immune system. ) For this reason, anti In the detection method when the origin is gp160Δ135, gp1 present other than PND HIV-1 specific antibodies that recognize the 60 region are detected, whereas the antigen is gp16 0 (may contain PND peptide), the detection method uses gp160 Detection of antibodies specific to any part of the molecule includes detection of PND-specific antibodies. Including exit. Biological samples from humans infected with HIV-1 can be tested using both methods. While immunized against HIV-1 with the PND peptide, However, samples from humans who have not been infected with the virus will contain the complete gp160 molecule, immediately. Using a PND-containing molecule, a PND peptide, or a combination of the two It contains antibodies that can only be detected by the latter method. Corresponding to “ used here An amino acid sequence “derived from” or “derived from” is an amino acid sequence whose amino acid sequence is derived from another amino acid sequence. means the same as all or part of “MN” used here is H IV MN prototype or a virus variant of the MN prototype. MN Prototype Will This is an amino acid subunit within the PND region of the gp160 envelope protein. defined by the sequence R-1-H-1-G-P-G-R-A-F-Y; Rus mutant is residue 1-G-P-G-1? complete amino acid sequence homology and above M Here, it is considered a variant that shows at least 36% homology with the remaining 6 amino acids of the N sequence. stipulated.
他の好ましい態様において、その方法では更に、サンプルを第−及び第二吸着抗 体に結合できる剤（例えば、酵素又は放射性同位元素標識成分）と接触させ、第 −及び第二抗体のサンプル中における存在の指標として該結合された剤を検出す ることを含む；例えば、その剤は抗体に結合できるタンパク質Ａでも又は標識抗 体であってもよい。In other preferred embodiments, the method further comprises applying the sample to the first and second adsorption resistors. contact with an agent capable of binding to the body (e.g., an enzyme or a radioisotope-labeled component); - and detecting the bound agent as an indicator of the presence in the sample of a second antibody. For example, the agent may be protein A capable of binding to an antibody or a labeled antibody. It may be the body.
本発明は、主要中和決定基、即ちアミノ酸残基２９７−３３１に存在する領域、 又はＰＮＤの全部もしくは一部を含む領域又はＰＮＤの中和部分が欠失されたＨ ＩＶ−１エンベロープも特徴とする。The present invention focuses on the major neutralizing determinants, i.e., the region present at amino acid residues 297-331; or H in which the region containing all or part of PND or the neutralizing portion of PND is deleted Also features an IV-1 envelope.
好ましい態様において、このタンパク質はｇｐ１６０Δ１３５であり、固体支持 体に固定してもよい。In a preferred embodiment, the protein is gp160Δ135 and is attached to a solid support. It may be fixed to the body.
本発明は、天然ＨＩＶ−１に特異的な抗体と免疫複合体を形成できるが但しヒト でＨＩＶ中和抗体の産生を引き起こす第二抗原に特異的な抗体と免疫複合体を実 質上形成できない第一抗原、並びに第−及び第二抗体と反応できる剤を含有した 、ヒト生物学的サンプルでＨＩＶ−１抗体の存在を検出するためのキットも特徴 とする。The present invention can form immune complexes with natural HIV-1 specific antibodies, but human produces an immune complex with a second antigen-specific antibody that triggers the production of HIV-neutralizing antibodies. Contains an agent capable of reacting with the first antigen and the second and second antibodies, which cannot be formed in quality. , also features a kit for detecting the presence of HIV-1 antibodies in human biological samples. shall be.
好ましい態様において、第一抗原は固体支持体に固定される；好ましくは、それ は残基２９７−３３１に存在するＰＮＤ領域又は中和抗体がつくられるＰＮＤの 一部の欠失を含んだＨＩＶ−１ｇｐ１６０である；最も好ましくは、第一抗原は ｇｐ１６０Δ１３５である。検出剤は標識してもよく、例えばタンパク質Ａでも 又は標識抗ヒト免疫グロブリン、例えば標識Ｆｃ領域特異性抗体であってもよい 。そのキットは支持体に固定された第二抗原を更に含有してもよい；好ましくは 、第二抗原はＨＩＶ中和抗体の産生を引き起こす免疫原のアミノ酸配列、即ちＭ Ｎ変異体からのＨＩＶ−Ｉ ＰＮＤ配列に相当するアミノ酸配列を有するペプチ ドである；更に好ましくは、ｇｐ１６０は第二支持体に固定され、ペプチドはＭ Ｎ ＰＮＤのＰＮＤの存在に相当する配列を有する。In a preferred embodiment, the first antigen is immobilized on a solid support; is the PND region present at residues 297-331 or the PND region from which neutralizing antibodies are produced. HIV-1gp160 with some deletions; most preferably the first antigen is gp160Δ135. The detection agent may be labeled, e.g. with protein A. or a labeled anti-human immunoglobulin, such as a labeled Fc region-specific antibody. . The kit may further contain a second antigen immobilized on a support; preferably , the second antigen is the amino acid sequence of the immunogen that causes the production of HIV-neutralizing antibodies, namely M Peptide with amino acid sequence corresponding to HIV-I PND sequence from N variant more preferably, gp160 is immobilized on the second support and the peptide is M It has a sequence corresponding to the presence of PND of N PND.
もう１つの面において、本発明は、ヒトからの抗体含有生物学的サンプルをＨＩ Ｖ−１ｇｐ１６０ＭＮと接触させることからなる、サンプル抗体とｇｐ１６０Ｍ Ｎとの免疫複合体の形成がＨＩＶ感染の診断特徴である、ヒトにおけるＨＩＶ− １感染の検出方法を特徴とする。In another aspect, the invention provides methods for subjecting antibody-containing biological samples from humans to HI sample antibody and gp160M. The formation of immune complexes with N is a diagnostic feature of HIV infection. 1. It is characterized by a method for detecting infection.
ＭＮ単離物が常在ＨＩＶ単離物であるため、ＭＮ単離物のＰＮＤ配列を含むｇｐ １６０の使用によれば更に高感度のアッセイをもたらし、他のｇｐ１６０ ＰＮ Ｄ配列、例えばｍＢで得られるよりも速く血清変換を検出できる。Since the MN isolate is a resident HIV isolate, gp containing the PND sequence of the MN isolate The use of gp160 results in even more sensitive assays, and the use of other gp160 PN Seroconversion can be detected faster than can be obtained with D sequences, such as mB.
好ましい態様において、第一抗原は固体支持体に固定される。その抗原はＨＩＶ −１ｇｐ１６０ ＰＮＤ又はＰＮＤの中和部分に相当するアミノ酸配列を有する ペプチドを更に含有してもよい。ＰＮＤの全部又は一部に相当する合成ペプチド がｇｐ１６０吸着剤に基づくアッセイに加えられる場合、そのアッセイで用いら れるｇｐ１６０の量はアッセイ感度の低下なしに減少させることができる。In a preferred embodiment, the first antigen is immobilized on a solid support. The antigen is HIV -1gp160 has an amino acid sequence corresponding to PND or a neutralizing portion of PND It may further contain a peptide. Synthetic peptide corresponding to all or part of PND is added to a gp160 adsorbent-based assay, the The amount of gp160 present can be decreased without decreasing assay sensitivity.
本発明ハ、固定されたＨＩＶ−１ｇｐ１６０ＭＮ及び抗体と反応できる剤を含有 したヒト生物学的サンプル中におけるＨＩＶ−１抗体の検出用キットも特徴とす る。The present invention contains an agent capable of reacting with immobilized HIV-1gp160MN and antibodies. Also features a kit for the detection of HIV-1 antibodies in human biological samples Ru.
好ましい態様において、サンプルは血清であり、剤は標識された分子である。In a preferred embodiment, the sample is serum and the agent is a labeled molecule.
本発明は、混合された固定ｇｐ１６０とＭＮ ＰＮＤ又はその一部の場合に相当 するアミノ酸配列を有するペプチド、及び抗体と反応できる剤を含有したヒト生 物学的サンプル中におけるＨＩＶ−１抗体の存在の診断用キットも特徴とする。The present invention corresponds to the case of mixed fixed gp160 and MN PND or a part thereof. A human biomolecule containing a peptide having an amino acid sequence and an agent capable of reacting with antibodies. Also featured is a kit for diagnosing the presence of HIV-1 antibodies in a physical sample.
本発明の方法はＨＩＶ−１感染と免疫感作とを識別する上で有用であり、安妊か つ安全である；例えば、産生上高価な全鎖長ｇｐ１６０のような組換えタンパク 質成分は同抗原部位を有する合成ペプチドで補ってもよい。The methods of the present invention are useful in distinguishing between HIV-1 infection and immunization, and are useful in distinguishing between HIV-1 infection and immunization. safe; for example, recombinant proteins such as full-length gp160, which are expensive to produce; The quality component may be supplemented with a synthetic peptide having the same antigenic site.
このため本発明の方法は感度を犠牲にすることなく費用を減らし、血清変換の早 期検出を可能にする。Therefore, the method of the present invention reduces costs without sacrificing sensitivity and allows faster seroconversion. Enable period detection.
本発明の他の特徴及び利点はその好ましい態様の以下の記載と請求の範囲から明 らかであろう。Other features and advantages of the invention will be apparent from the following description of its preferred embodiments and from the claims. It will be clear.
好ましい態様の説明 本発明の好ましい態様を記載する前に、図面が記載さ図１はｇｐ１６０Δ１３５ 及びｇｐ１６０Ｉ［［Ｂ （即ち、ＮＢ単離物からのｇｐ１６０）が−団のＨＩ Ｖ陽性ヒト血清に関して抗原として比較されるＥＬ Ｉ ＳＡである。Description of preferred embodiments Before describing preferred embodiments of the invention, the drawings are described. and gp160I [[B (i.e., gp160 from NB isolates) EL ISA compared as an antigen with respect to V-positive human serum.
図２はｇｐ１６０Δ１３５ベースアッセイの応答が様々な希釈倍率の単一血清に 対してｇｐ１６０ＩＩＩＢベースアッセイの応答と比較されたＥＬＩＳＡである 。Figure 2 shows the response of the gp160Δ135-based assay to various dilutions of a single serum. is an ELISA compared with the response of gp160IIIB-based assay against .
図３はＰＮＤベースペプチドが用いられたＥＬＩＳＡである。Figure 3 is an ELISA using PND-based peptides.
図４は抗原がｇｐ１６０ｍＢと共に合成ペプチドから構成されたＥＬＩＳＡであ る。Figure 4 shows an ELISA in which the antigen was composed of gp160mB and a synthetic peptide. Ru.
図５はｇｐ１６０Δ１３５及びｇｐ１６０ｍＢが正常ヒト血清（ＮＨＳ） 、ヒ トＨＩＶ陽性（＋）血清又は抗ＲＰ１７４Ｃ血清でプローブ探査されたウェスタ ンプロットである。Figure 5 shows that gp160Δ135 and gp160mB were detected in normal human serum (NHS), human VESTA probed with HIV-positive (+) serum or anti-RP174C serum. This is a simple plot.
本発明は抗体に関する感度の有意低下なしにＨＩＶ−１工ンベロープタンパク質 ｇｐ１６０の異なる領域、例えば主要中和決定基ｖｓ、非ＰＮＤ領域を認識する 抗体を検出してそれらの間を識別する方法を提供する。これは１つの決定基のみ に相当するアミノ酸が欠失された組換えエンベロープタンパク質を吸着剤として 用いることにより行われる；結果として、非欠失決定基に対する抗体は検出され るが、一方欠失決定基に対する抗体は検出されない。The present invention provides a method for detecting HIV-1 envelope proteins without significantly reducing sensitivity for antibodies. Recognize different regions of gp160, e.g. major neutralizing determinants vs. non-PND regions Methods of detecting and distinguishing between antibodies are provided. This is only one determinant As an adsorbent, a recombinant envelope protein with an amino acid deletion corresponding to as a result, antibodies against non-deleted determinants will not be detected. However, antibodies against the deleted determinant were not detected.
組換えｇｐ１６０ｍＢＳｇｐ１６０Δ１３５及びｇ ｐ １６０ＭＮ／ＩＩＩＢ の製造 ｇｐ１６０Δ１３５はＰＮＤ領域の欠失を含むｇｐユ６０ポリペプチドである。Recombinant gp160mBSgp160Δ135 and gp160MN/IIIB Manufacturing of gp160Δ135 is a gp160 polypeptide containing a deletion of the PND region.
ｇｐ１６０Δ１３５はタンパク質をＰＮＤに対する抗体と反応できないようにす る欠失を存したｇｐ１６０ポリペプチドの例としてここでは用いられる；その欠 失は残基２９７−３３１間において１以上のアミノ酸であってもよい。ｇｐ１６ ０Δ１３５の製造はノａｖａｈｅｒｉａｎ ｅｔ ａｌ、、１９８９．Ｐｒｏｃ 、Ｎａｔ。gp160Δ135 renders the protein incapable of reacting with antibodies against PND. used herein as an example of a gp160 polypeptide that had a deletion; The deletion may be one or more amino acids between residues 297-331. gp16 0Δ135 was manufactured by Novaherian et al., 1989. Proc , Nat.
Ａｃａ、Ｓｃｉ、８Ｂ＋６７８８で記載されていた。ｇｐ１６０Δ１３５はバキ ュロウィルストランスファーベクターｐＡｃ、６１０に組込んでクローニングさ れたｇｐ１６０ｍＢＬンベローブ遺伝子から誘導した（Ｒｕｓｃｈｅ ｅｔ ａ ｌ。It was described in Aca, Sci, 8B+6788. gp160Δ135 is Baki Cloned by integrating into the cellulovirus transfer vector pAc, 610. gp160mBL envelope gene (Rusche et al. l.
１９８７、前掲）。ＰＮＤを含有したこのエンベロープ遺伝子のＢｇｌｌ＋断片 は部位特定変異誘発のためＭ１３ベクターに組込んでサブクローニングした。合 成オリゴヌクレオチド （５°ＣＴＡＣＴＡＡＴＧＴＴＡＣＡＡＴＧＴＧＣＧＧＧＴＣＴＴＧＴＡＣＡＡ ＴＴＡＡＴＴＴ ３’）はＰＮＤを含むヌクレオチドの欠失を指示するために用 い、エンベロープ遺伝子のアミノ酸３００−３２８の欠失を生じさせた。次いで この変異誘発断片はＲｕ５ｃｈｅ ｅｔ ａｌ。1987, supra). Bgll+ fragment of this envelope gene containing PND was subcloned into M13 vector for site-directed mutagenesis. If oligonucleotide (5°CTACTAATGTTACAATGTGCGGGTCTTGTACAA TTAATTT 3') is used to indicate the deletion of a nucleotide containing PND. This resulted in a deletion of amino acids 300-328 of the envelope gene. then This mutagenic fragment was produced by Ru5che et al.
１９８７、前掲で記載されたように得られたバキュロウィルストランスファーベ クター及び組換えバキュロウィルスに組込んで逆にクローニングした。1987, baculovirus transfer vector obtained as described in supra. vector and recombinant baculovirus and reverse cloned.
下記アッセイでは、ｍＢ単離物からの配列がＭＮ決定基からなるＰＮＤ領域を囲 むｇｐ １６０ＭＮ／ｍＢハイブリッドエンベロープ遺伝子を抗原として用いた 。ｇｐ１６０ＭＮ／ＩＩＩＢハイブリッドを用いたが、ＭＮ単離物のＰＮＤを保 留したあらゆるＭＮポリペブトもしくは断片又はあらゆるＭＮハイブリッド、例 えばｇｐ１６０ＭＮを用いてもよい。ｇ ｐ １６０ＭＮ／ＩｆｆＢｚ−イブリ ・ソドはＭＮエンベロープのＢ ｇ Ｉ Ｉ！断片の直接置換えにより組立てた 。これによりＭＮ ＰＮＤを有してＩＩＩＢ ｇｐ１６０枠組み内に含有された ハイブリツドＤＩＢ／ＭＮエンベロープ遺伝子を得た。得られた。ノ〜イブリ・ ソド分子のＰＮＤ領域に対して生成された抗体はＭＮに特異的である。次いでバ キュロウィルストランスファーベクターｐＡｃ６１０内に含有されたこのノ＼イ ブリ・ンドエンベローブ遺伝子はＲｕ５ｃｈａ ｅｔ ａｌ、１９８７．前掲で 記載されたように組換えバキュロウィルスを生成するために用いた。In the assay described below, sequences from mB isolates surround the PND region consisting of MN determinants. Mugp 160MN/mB hybrid envelope gene was used as an antigen. . gp160MN/IIIB hybrid was used, but the PND of the MN isolate was preserved. Any MN polypebut or fragment or any MN hybrid, e.g. For example, gp160MN may be used. gp 160MN/IffBz-Iburi ・Sodo is B g I I of MN envelope! Assembled by direct replacement of fragments . As a result, it was included within the IIIB gp160 framework with MN PND. A hybrid DIB/MN envelope gene was obtained. Obtained. No~Iburi・ Antibodies raised against the PND region of the sodo molecule are specific for MN. Then the bar This protein contained within the culovirus transfer vector pAc610 The Brind envelope gene was described by Rucha et al., 1987. In the above It was used to generate recombinant baculoviruses as described.
組換えバキュロウィルスで昆虫細胞〔Ｓ、フルギベルダ（Ｓ、ｆｒｕｇｉｐｅｒ ｄａ））の感染による組換えエンベロープタンパク質の産生はＲｕ５ｃｈｅ ａ ｔ ａｔ、１９８７．前掲で記載されたように実施した。Insect cells [S, frugiperda] with recombinant baculovirus The production of recombinant envelope protein by infection with Ru5che a) t at, 1987. It was performed as described supra.
合成ペプチドの製造 主要中和決定基に相当する合成ペプチドはメリフィールド固相合成操作□Ｉｅｒ ｒｉｆ’ｊｅｌｄ、１９８３．Ｊ、Ａｍｅｒ、Ｃｈｅａ＋、Ｓｏｃ。Production of synthetic peptides Synthetic peptides corresponding to major neutralizing determinants were prepared using the Merrifield solid-phase synthesis procedure □Ier. rif'jeld, 1983. J, Amer, Chea+, Soc.
８５：２１４９）により製造した。ペプチドを逆相ＨＰＬＣで精製し、当業界で 周知の操作に従いアミノ酸組成分析により特徴付けた。ペプチドの名称、それら が相当する単離物及びそれらの配列は下記のとおりである：Ｕ工３５ （ＸＩよ り） ＮＮＴＲＫＳ工Ｒ工ＱＲＧＰＧＲ）ＪＶＴＸＧＫＩＧＣＲＪ？１７４ｃ （エエより） ＣＭ’ＮＴＲＸ５工Ｒ工ＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴ工ＧＸＩＧＣＲＰ １４２ （ＭＩＮ） ＹＮＸＲＫＲ工Ｈ工ＧＰＧＲＡＦ！Ｉ工ＧＣＲＰ７０ｃ （ＭＩＮ） ＩＮＣＴＲＰＮＹＮＸＲＫＲ工Ｈ工ＧＰＧＲＡＦＹ９工ＩＧＴＩＲ ＱＡＩ−ＩＣＮＩ！；ペプチドＲＰ１７４ｃ及びＲＰ７０ｃは各々２つのシステ ィン残基間に分子内ジスルフィド結合を含んで０る。85:2149). The peptides were purified by reverse phase HPLC and It was characterized by amino acid composition analysis according to well-known procedures. Names of peptides, their The corresponding isolates and their sequences are as follows: ri) NNTRKS Engineering R Engineering QRGPGR) JVTXGKIGCRJ? 174c (From Ae) CM’NTRX5 Engineering R Engineering QRGPGRAFVT Engineering GXIGCRP 142 (MIN) YNXRKR Engineering H Engineering GPGRAF! I engineering GCRP70c (MIN) INCTRPNYNXRKR Work H Work GPGRAFY9 Work IGTIR QAI-ICNI! ; peptides RP174c and RP70c each have two systems Contains an intramolecular disulfide bond between the amino acid residues.
このような結合をつくるための方法はＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ、。A method for creating such a bond is described by Zhang et al.
Ｌ９ＢＢ、ＢＬｏｃｈｅｔｘｌｓｔｒｙ、２７：３７８５で記載されている。こ れら結合の存在は質量スペクトル測定分析により確認した。L9BB, BLochetxlstry, 27:3785. child The existence of these bonds was confirmed by mass spectrometry analysis.
抗体の検出 吸着された抗体はいくつかの周知法のうちいずれでも検出されるが、その−例は 酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。抗原（ｇｐ１６０Δ １３５、ｇｐ１６０ＩＩＩＢ、 ｇｐ１６０ＭＮ／ＩＩＩＢ、合成ペプチド又は これら試薬の組合せ）を炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９，６）のような適切な緩 衝液で＞０．１２５μｇ／ｌ（好ましくは１μｇ／ｌ）の濃度に希釈し、５０μ ｇをポリスチレン９６ウエル微量滴定プレート〔イムノダイナミクス（Ｉｉｍｕ ｎｏｄｙｎａｍｉｃｓ）、シャンティイ、ＶＡ）の各ウェルに加える。室温（Ｒ Ｔ）で１６〜２０時間インキュベート後にウェルを空にし、０．０２％アジ化ナ トリウム含有リン酸緩衝液（Ｐ Ｂ Ｓ）中１０ ｉｇ／ｍｌ牛血清アルブミン （ＢＳＡ）のような阻止溶液で再充填し、ＲＴで６０分間以上インキュベートす る。次いでウェルを空にし、０．１％ツイーン２０含有ＰＢＳ （ＰＢＳ−Ｔ） で３回洗浄する。抗ｇｌ）１６０抗体の存在に関して試験される血清サンプルを ＰＢＳ−Ｔで希釈し、プレートに加える（５０μｍ／ウェル）。数回の血清希釈 を選択してもよい。室温（ＲＴ）で９０分間インキュベート後にウェルを空にし 、再びＰＢＳ−Ｔで３回洗浄する。Antibody detection Adsorbed antibodies can be detected by any of several well-known methods, including: Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Antigen (gp160Δ 135, gp160IIIB, gp160MN/IIIB, synthetic peptide or (a combination of these reagents) in a suitable buffer solution such as sodium carbonate buffer (pH 9.6). Dilute with buffer solution to a concentration of >0.125 μg/l (preferably 1 μg/l) and add 50 μg/l. g in a polystyrene 96-well microtitration plate [Immunodynamics (Iimu Nodynamics), Chantilly, VA). Room temperature (R After 16-20 hours of incubation with T), the wells were emptied and treated with 0.02% NaAzide. 10 ig/ml bovine serum albumin in thorium-containing phosphate buffer (PBS) Refill with blocking solution such as (BSA) and incubate for at least 60 minutes at RT. Ru. The wells were then emptied and filled with PBS containing 0.1% Tween 20 (PBS-T). Wash 3 times with Serum samples to be tested for the presence of anti-gl)160 antibodies Dilute in PBS-T and add to plate (50 μm/well). Several serum dilutions may be selected. Empty the wells after 90 min incubation at room temperature (RT). , wash again three times with PBS-T.
ｇｐ１６０抗原に吸着されたヒト抗体を検出するため、標識抗体−検出剤溶液を ウェルに加え、ＲＴで３０〜９０分間インキュベートする。用いてよい剤の例は ヤギ抗ヒトＩｇＧ：西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体、ヤギ抗ヒトＩｇＧ＋ア ルカリホスファターゼ複合体、ブドウ状球菌タンパク質Ａ：西洋ワサビペルオキ シダーゼ複合体又はいずれかの慣用的複合体である。プローブと共にインキュベ ート後、ウェルをＰＢＳ−Ｔで３回洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ基質３ ，３′−アジドビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴ Ｓ）及び過酸化水素のような適切な基質溶液で処理する。溶液を１５〜２０分間 インキュベートし、各ウェル中における溶液の吸光度を（Ａ Ｂ Ｔ Ｓに関し て４１０ｎｍで）調べる。各溶液の吸光度は抗原により吸着された抗体の量に比 例している。To detect human antibodies adsorbed to gp160 antigen, a labeled antibody-detection agent solution was prepared. Add to wells and incubate for 30-90 minutes at RT. Examples of agents that may be used are Goat anti-human IgG: horseradish peroxidase conjugate, goat anti-human IgG + a Lucari phosphatase complex, staphylococcal protein A: horseradish peroxy sidase complex or any conventional complex. Incubate with probe After washing, the wells were washed three times with PBS-T and treated with horseradish peroxidase substrate 3. ,3'-azidobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABT S) and a suitable substrate solution such as hydrogen peroxide. Leave the solution for 15-20 minutes Incubate and measure the absorbance of the solution in each well (with respect to ABTS). (at 410 nm). The absorbance of each solution is relative to the amount of antibody adsorbed by the antigen. I'm giving an example.
ｇｐ１６０抗原を用いた血清サンプルの試験上記操作を用いて、ｇｐ１６０Δ１ ３５又はｇｐ１６０ＩＩＩＢとの結合に関して一団のＨＩＶ−１陽性ヒト血清１ ４例を試験した（各々は炭酸緩衝液中１μｇ／鱈でコートした）。インターステ ート・ブラッドバンク（ｔｎｔｅｒｓｔａｔｅ Ｂｌｏｏｄｂａｎｋ）、メンフ ィス、ＴＮから得られてかつ１（ＴＬＶＩＩＩ Ｅ ＩＡ ［アボット・ラボラ トリーズ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、シカゴ、ＬＬ）で陽性 と試験上示された血清サンプルを１ ： ２００希釈で試験した。ヤギ抗ヒトＩ ｇＧ：西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体を検出剤として用いた。各血清のアッ セイに関するシグナル対バックグラウンド比は図１で示されている。そのデータ はｇｐ１６０Δ１３５及びｇｐ１６０ｍＢを用いたイムノアッセイが試験された すべてのヒト血清サンプルにおいて抗ＨＩＶ抗体を検出する上で同等に有効であ ることを証明している。Testing serum samples with gp160 antigen Using the procedure described above, gp160Δ1 A panel of HIV-1 positive human sera 1 for binding to 35 or gp160IIIB. Four cases were tested (each coated with 1 μg/cod in carbonate buffer). Interste tnterstate Bloodbank, Memph obtained from TN and 1 (TLVIIIEIA [Abbott Laboratories Positive at Abbott Laboratories, Chicago, LL) The serum samples indicated above were tested at a 1:200 dilution. Goat anti-human I gG:horseradish peroxidase complex was used as a detection agent. Each serum assay The signal-to-background ratio for the cell line is shown in Figure 1. that data An immunoassay using gp160Δ135 and gp160mB was tested. Equally effective in detecting anti-HIV antibodies in all human serum samples It proves that.
単一のＨＩＶ陽性血清は上記操作を用いて様々な希釈倍率で試験した。希釈は１ ：１〜１ ： ８１９２の範囲内であった。図２で示されたように、ｇｐ１６０ Δ１３５ベースアッセイの応答は各希釈時にｇｌ）１６０ｍＢベースアッセイの 応答と実験誤差の範囲内で同一であった。Single HIV positive sera were tested at various dilutions using the procedure described above. dilution is 1 :1 to 1:8192. As shown in Figure 2, gp160 The response of the Δ135-based assay is at each dilution gl) of the 160 mB-based assay. The responses were identical within experimental error.
ＰＮＤベース合成ペプチドで誘導された抗血清がｇｐ１６０Δ１３５に基づくイ ムノアッセイで応答を起こさないことを示すため、下記実験を実施した。動物を 前記のように製造された下記試薬で免疫した：ＰＲ１７４ｃ （モルモット５９ Ｂ１モルモット５９８）ｇｐ１６０Δ１３５（ヤギ１１１Ｂ） ｇｐ１６０ｍＢ （ウサギ＃１） 抗血清は常法に従い、指定された動物を相当ペプチド又はタンパク質で免疫する ことにより得た。各血清は４種の異なる抗原：ＲＰ１３５、ＲＰ１４２、ｇｐ１ ６０Δ１３５及びｇｐ１６０ｍＢの各々を用いてイムノアッセイで試験した。抗 原を炭酸緩衝液中１μｇ／ａ＋ ｌでコートし、結合抗体をヤギ抗ヒトＩｇＧ： 西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体を用いて検出した。得られた吸光度値は図３ で示されている。ＲＰ１７４ｃ （ｍＢ ＰＮＤに相当する）で免疫されたモル モットからの抗血清はＲＰ１３５及びｇｐ１６０１ｎＢが抗原として用いられた 場合に有意の吸光度を生じたが、但しｇｐ１６０Δ１３５又はＲＰ１４２ （Ｍ Ｎ ＰＮＤからのペプチド）が用いられた場合に応答を生じなかった。ｇｐ１６ ０Δ１３５又はｇｐ１６０ＩｆＩＢで誘導された抗血清はｇｐ１６０Δ１３５又 はｇｐ１６０ｍＢが抗原として用いられた場合に類似した応答を生じた。Antisera induced with PND-based synthetic peptides were tested against gp160Δ135-based antibodies. The following experiment was performed to demonstrate that no response was caused in the immunoassay. animals Immunization was carried out with the following reagent prepared as described above: PR174c (guinea pig 59 B1 guinea pig 598) gp160Δ135 (goat 111B) gp160mB (Rabbit #1) Antiserum is prepared by immunizing the designated animal with the corresponding peptide or protein according to standard methods. I got it by doing that. Each serum has 4 different antigens: RP135, RP142, gp1 60Δ135 and gp160mB were tested in an immunoassay. anti The target antibody was coated with 1 μg/a+l in carbonate buffer and the bound antibody was coated with goat anti-human IgG: Detection was performed using a horseradish peroxidase complex. The obtained absorbance values are shown in Figure 3. It is shown in Mol immunized with RP174c (corresponding to mB PND) Antisera from Mott were used with RP135 and gp1601nB as antigens. significant absorbance occurred in some cases, except for gp160Δ135 or RP142 (M Peptide from N PND) did not produce a response when used. gp16 Antisera induced with 0Δ135 or gp160IfIB produced a similar response when gp160mB was used as antigen.
これらＥＬＩＳＡの結果はｇｐ１６０Δ１３５に基づく酵素イムノアッセイがＥ ＩＶ陽性ヒト血清に対する応答に関してｇｐ１６０ＩＩＩＢに基づくアッセイと 同じくらい有効であるが、但し前者のアッセイは後者と逆にＰＮＤに相当するペ プチドに対してつくられた抗血清に応答しないことを示している。These ELISA results indicate that the gp160Δ135-based enzyme immunoassay is gp160IIIB-based assay for response to IV-positive human serum and The former assay is as effective as the PND equivalent, although the former assay is the opposite of the latter. It has been shown that there is no response to antiserum raised against Ptide.
抗原として組換えｇ ｐ １６０ＭＮ／ｍＢ組換えｇｐ １６０ＭＮ／１ＩｔＢ を前記酵素イムノアッセイにおいて抗原として使用上ｇｐ１６０■Ｂと比較した 。Recombinant gp 160MN/mB recombinant gp 160MN/1ItB as antigen was compared with gp160B for use as an antigen in the enzyme immunoassay. .
微量滴定プレートのウェルを０．１２５．０．２５．０゜５０．１．０及び２． ０μｇ／ｌの濃度でｇｐ１６０の溶液（炭酸緩衝液中）でコートした。４種のＨ ＩＶ陽性ヒト血清のプールを１ ： １００．１ ： １０００及び１：１０． ０００の希釈で各抗原に関して調べた。加えて、正常ヒト血清のプールを１ ： ｉｏｏの希釈で調べた。ヤギ抗ヒトＩｇＧ：西洋ワサビペルオキシダーゼ複合 体をプローブとして用い、ＡＢＴＳを基質として用いた。測定された吸光度値（ ４１０ｎｍ）は表１で示されている。The wells of the microtiter plate were 0.125.0.25.0°50.1.0 and 2. It was coated with a solution of gp160 (in carbonate buffer) at a concentration of 0 μg/l. 4 types of H Pools of IV positive human sera were divided into 1:100.1:1000 and 1:10. Each antigen was tested at a dilution of 0.000. In addition, 1 pool of normal human serum: It was investigated by diluting ioo. Goat anti-human IgG: horseradish peroxidase conjugate The body was used as a probe and ABTS was used as a substrate. The measured absorbance value ( 410 nm) are shown in Table 1.
表１で示された結果はｇｐ１６０ＭＮ／ＩＩ［Ｂが抗原として用いられた場合に アッセイの応答が大きいことを示している。表１は正常ヒト血清プールに対する ｇｐ１６０ＭＮ／ｍＢベースアッセイの応答もｇｐ１６０ＩＩ［Ｂベースアッセ イの応答より大きいが、但しこれらのバックグラウンド値が差し引かれたならば 、特に低濃度のｇｐ１６０でｇｐ１６０ＭＮ／ＩＩＩＢが抗原として用いられた 場合にＨＩＶ陽性血清プールに対する応答が大きいことＭＮ単離物の主要中和決 定基に相当する合成ペプチドＲＰ１４２を抗原としてｇｐ１６０ｍＢと組合せて 用いた。微量滴定プレートのウェルをペプチドＲＰ１４２と共に又はそれなしに 様々な濃度のｇｐ１６０ｍＢ （炭酸緩衝液中）でコートした。ＨＩＶ陽性ヒト 血清（１： ２００希釈）に対する各アッセイの応答は図４で示されている。図 ４におけるデータは合成ペプチド及びｇｐ１６０の組合せがＥＬＩＳＡで更に高 感度を示し、ｇｐ１６０が抗原として単独で用いられる場合よりも低濃度でｇｐ １６０を使用できることを示している。The results shown in Table 1 show that when gp160MN/II[B was used as the antigen This shows that the assay response is large. Table 1 shows the normal human serum pool. The response of the gp160MN/mB-based assay also is larger than the response of B, but if these background values are subtracted. , gp160MN/IIIB was used as an antigen, especially at low concentrations of gp160. The major neutralizing determination of MN isolates is that the response to HIV-positive serum pools is large in cases where Synthetic peptide RP142 corresponding to the constant group was combined with gp160mB as an antigen. Using. Microtiter plate wells with or without peptide RP142 Coated with various concentrations of gp160mB (in carbonate buffer). HIV positive human The response of each assay to serum (1:200 dilution) is shown in Figure 4. figure The data in 4 show that the combination of synthetic peptide and gp160 was even higher in ELISA. showed sensitivity and reduced gp160 at lower concentrations than when gp160 was used alone as antigen. 160 can be used.
ｇｌ）１６０Δ１３５を用いたウェスタンプロット分析ｇｐ１６０Δ１３５及び ｇｐ１６０ｍＢを個別的にＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動に付し、ニト ロセルロースフィルター上にプロットした（Ｔｏｖｂｉｎ ｅｔ ａｌ、。gl) Western blot analysis using 160Δ135 gp160Δ135 and gp160mB was individually subjected to SDS polyacrylamide gel electrophoresis, and plotted on cellulose filters (Tovbin et al.
１９７９、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａ、Ｓｃ１．７Ｂ：４３５０） 、プロット をＨＩＶ陽性ヒト血清サンプル、モルモットでＲＰ１７４ｃに対してつくられた 抗血清及び正常ヒト血清で処理した。吸着された抗体をヤギ抗ヒトＩｇＧ：西洋 ワサビペルオキシダーゼ複合体又はヤギ抗マウスＩｇＧ：西洋ワサビペルオキシ ダーゼ複合体しかる後ジアミノベンジジン溶液及び過酸化水素でプロットの処理 により視覚化させた。1979, Proc, Nat, Aca, Sc1.7B:4350), Plot An HIV-positive human serum sample, produced against RP174c in guinea pigs. Treated with antiserum and normal human serum. Goat anti-human IgG: Western Horseradish peroxidase conjugate or goat anti-mouse IgG: Horseradish peroxidase Treatment of the plots with diaminobenzidine solution and hydrogen peroxide followed by the Dase complex. It was visualized by
図５はＨＩＶ陽性ヒト血清がプロットされたｇｐ１６０の双方を認識したが、一 方抗ＲＰ １７４ ｃ血清がｇｐ１６０Δ１３５ではなくｇｐ１６０ｍＢを認識 したことを示している。正常ヒト血清はいずれのタンパク質も認識しなかった。Figure 5 shows that HIV-positive human serum recognized both plotted gp160, but only one Anti-RP 174c serum recognizes gp160mB rather than gp160Δ135 It shows what you did. Normal human serum did not recognize either protein.
他の態様も下記請求の範囲内に属する。Other embodiments are within the scope of the following claims.
ＦＩＧ、 ２ ０ＲＰ１３８σｌＩ！３） 要 約 書 天然ＨＩＶ−１に特異的な抗体と免疫複合体を形成できるが但し個体でＨＩＶ中 和抗体の産生を引き起こす第二抗原に特異的な抗体と免疫複合体を実質上形成で きない第一抗原と、個体からの生物学的サンプルを接触させることからなり、第 一抗原との免疫複合体の形成が個体におけるＨＩＶ感染の診断特徴である、個体 におけるＨＩＶ−１感染の診断方法。FIG. 2 0RP138σlI! 3) Summary book Can form immune complexes with natural HIV-1 specific antibodies, but individuals with HIV substantially form immune complexes with antibodies specific to the second antigen that trigger the production of antibodies against the antigen. The first antigen consists of contacting a biological sample from an individual with a first antigen that cannot be detected. An individual in whom the formation of an immune complex with an antigen is a diagnostic feature of HIV infection in the individual A method for diagnosing HIV-1 infection in.
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