JPH0539265A

JPH0539265A - 新規物質ｗｋ−２９５５およびその製造法

Info

Publication number: JPH0539265A
Application number: JP21626691A
Authority: JP
Inventors: Satoshi Omura; 智大村; Hiroshi Koda; 洋供田; Yuzuru Iwai; 譲岩井; Yoko Takahashi; 洋子高橋; Toshiaki Sunatsuka; 敏明砂塚
Original assignee: Kitasato Institute
Current assignee: Kitasato Institute
Priority date: 1991-08-02
Filing date: 1991-08-02
Publication date: 1993-02-19
Anticipated expiration: 2014-11-02
Also published as: JP2971204B2

Abstract

(57)【要約】【目的】この物質ＷＫ−２９５５は、ポリエーテル系
抗生物質モネンシンに耐性のコクシジウム原虫に対し、
生育阻害活性を有することから、抗コクシジウム剤とし
て有用である。【構成】下記式【化１】で表される物質ＷＫ−２９５５またはその薬学的に許容
し得る塩、ストレプトミセス・エスピー．ＷＫ−２９５
５を用いる醗酵法による物質ＷＫ−２９５５の製造法ま
たは３−インドールアセトアルデヒドとｐ−ヒドロキシ
フェニルアセトアルデヒドをアルドール付加反応を用い
る有機合成法による物質ＷＫ−２９５５の製造法であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、養鶏産業上、重要な疾
病であるコクシジウム症に対する治療剤ならびに予防剤
として有用な新規物質ＷＫ−２９５５およびその薬学的
に許容し得る塩ならびに上記物質の製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】コクシジウムは各種の家畜や家禽類に広
く分布しているが、コクシジウムによる被害を最も多く
受ける動物は鶏である。鶏コクシジウム症に対する治療
剤ならびに予防剤として、例えば、モネンシン、サリノ
マイシンなどのポリエーテル系抗生物質、合成剤である
ナイカルバジン等が知られていた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかし、これらの薬剤
に耐性のコクシジウムが出現し、その効果が弱まつてお
り、これらに代わる新たな抗コクシジウム剤が要望され
ている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】一般に薬剤の交叉耐性
は、構造の類似あるいは作用機序の類似する場合に成立
し、従来のコクシジウム剤と構造的に、あるいは、作用
機序が相違する化合物はコクシジウム症の治療剤あるい
は予防剤として有用である。

【０００５】本発明者らは、従来の薬剤に耐性を獲得し
たコクシジウム原虫に対しても有効な新規薬剤を自然界
から見出すべく種々研究を続け、モネンシン耐性のコク
シジウム原虫を試験生物として、微生物の生産する代謝
産物の中から探索した結果、新たに東京都渋谷区の土壌
から分離したＷＫ−２９５５菌株の培養液中にコクシジ
ウムに有効な物質が産生されることを見出した。

【０００６】次いで、該培養物から抗コクシジウム活性
物質を分離、精製したところ、後記の理化学的性状を有
する物質は、従来全く知られていないことから、本物質
は新規物質であり、式〔Ｉ〕の化学構造〔１−（ｐ−ヒ
ドロキシフェニル）−４−（３−インドリル）ブタン−
２，３−ジオール〕をもつことがわかり、物質ＷＫ−２
９５５と称することにした。

【０００７】本発明は、かかる知見に基いて完成された
ものであって、式〔Ｉ〕で表される物質ＷＫ−２９５５
を提供するものである。

【化１】

【０００８】更に、本発明の新規物質ＷＫ−２９５５
は、ストレプトミセス属に属し、かつ、式〔Ｉ〕で示さ
れる物質ＷＫ−２９５５の生産能力を有する微生物を培
地に培養し、該培養物中に物質ＷＫ−２９５５を生産蓄
積させ、これを採取する方法によつて製造される。

【０００９】本物質ＷＫ−２９５５の物理化学的性状を
述べると次のとおりである。（１）白色固体物質（２）分子量および分子式物質ＷＫ−２９５５のマススペクトル上ｍ／ｚ２９７に
分子イオンピークが観察され、また高分解マススペクト
ルにより分子式Ｃ₁₈Ｈ₁₉ＮＯ₃（実測値：２９７．１３
６３、計算値：２９７．１３６４）と決定した。

【００１０】（３）紫外線吸収スペクトル図１に示すとおりであり、中性で２２５ｎｍ、２８０ｎ
ｍに特徴的な吸収極大を示す。

【００１１】（４）核磁気共鳴スペクトルバリアンＸＬ−４００、４００ＭＨｚ、ＮＭＲスペクト
ロローメーターをそれぞれ用いて、重ＤＭＳＯ（ジメチ
ルスルホキシド）溶液中で測定した¹H−ＮＭＲスペクト
ルは図２に示すとおりである。また、重メタノール溶液
中で測定した¹³Ｃ−ＮＭＲは図３に示すとおりである。

【００１２】（５）呈色反応硫酸陽性バニリン硫酸陽性リンモリブデン酸陽性ニンヒドリン陰性

【００１３】（６）溶剤に対する溶解性は、メタノー
ル、エタノール、アセトニトリル、ジメチルスルホキシ
ド等に可溶であり、クロロホルム、ヘキサン等に不溶で
ある。

【００１４】前記式〔Ｉ〕に示された構造は、上記の物
理化学的性状を公知の類似化合物の物理化学的性状と比
較した結果、決定したものである。

【００１５】本物質ＷＫ−２９５５を生産するために使
用される菌株としては、一例として本発明者らによつて
東京都渋谷区の土壌から新たに分離された、ストレプト
ミセス・エスピー・ＷＫ−２９５５株が挙げられる。本
菌株の菌学的性状を示すと次の通りである。

【００１６】（Ｉ）形態的性質栄養菌糸は、各種寒天培地上でよく発達し、分断は観察
されない。気菌糸は、スターチ無機塩寒天培地や酵母エ
キス・麦芽エキス寒天などで豊富に着生し、ピンク系を
呈する。

【００１７】また、顕微鏡下の観察では、気菌糸は直線
状あるいは波状を呈し、２０ケ以上の胞子の連鎖が認め
られる。胞子の大きさは、１．０×０．６μｍで円柱状
である。胞子の表面は平滑である。菌核、胞子のうおよ
び遊走子は見出されない。

【００１８】（II）各種培地上での性状イー・ビー・シャーリング（Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎ
ｇ）とデー・ゴットリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の
方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システ
ィマティック・バクテリオロジー、１６巻、３１３頁、
１９６６年）によつて調べた、本生産菌の培養性状を下
記の表に示す。

【００１９】色調は、標準色として、カラー・ハーモニ
ー・マニュアル第４版（コンテナー・コーポレーション
・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を用いて決定
し、色票名とともに括弧内にそのコードを併せて記し
た。

【００２０】（III ）培養上の諸性状（１）表１、表２および表３に本菌株の培養所見をそれ
ぞれ示す。本所見は各種培地上で２７℃、２週間培養し
た場合の肉眼的に観察した結果である。

【００２１】

【表１】

【００２２】

【表２】

【００２３】

【表３】

【００２４】（IV）生理学的諸性質（１）メラニン色素の生成（イ）チロシン寒天
陰性（ロ）ペプトン・イースト鉄寒天
陰性（ハ）グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２１
〜２３℃）陰性（ニ）トリプトン・イースト液
陰性

【００２５】（２）チロシナーゼ反応
陰性（３）硫化水素の生産
陰性（４）硝酸塩の還元
陰性（５）ゼラチンの液化（２１〜２３℃）
陰性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）

【００２６】（６）スターチの加水分解
陽性（７）脱脂乳の凝固（３６〜３７℃）
陰性（８）脱脂乳のペプトン化（３６〜３７℃）
陰性（９）生育温度範囲
１５〜３７℃

【００２７】（10）炭素源の利用性（プリーダム・ゴトリーブ寒天培地）利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−マンニトール、Ｌ−アラビノース、ｉ−イノシトール、ラフィノース、Ｄ−キシロース、メリビオース利用しない：シュークロース（11）セルロースの分解陰性

【００２８】（Ｖ）細胞壁組成細胞壁のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。

【００２９】以上、本菌の菌学的性状を要約すると次の
とおりである。細胞壁のジアミノピメリン酸はＬＬ型で
ある。気菌糸の形態は直線状あるいは波状で、長い胞子
鎖を形成する。胞子の表面は平滑である。培養状の諸性
質としては、栄養菌糸はピンクあるいはワイン系の色調
を呈し、気菌糸はピンク系の色調を呈する。可溶性色素
は生産しない。

【００３０】これらの結果から、本菌株はストレプトミ
セス属に属する菌種であり、プリドハムとトレスナーの
分類（バージズ・マニュアルオブ・デターミネーティブ
・バクテリオロジー、第８版、７４８〜８２９頁、１９
７４年）によるホワイトあるいはレッドシリーズに属す
る菌種であると考えられる。

【００３１】上記のＷＫ−２９５５菌株の形態的特徴、
培養上の諸性状、生理学的性状に基づき、既知菌種との
比較を試みた結果、本菌株をストレプトミセス属に属す
る菌株と同定し、ストレプトミセス・エスピー．ＷＫ−
２９５５と命名した。本菌株は、ストレプトミセス・エ
スピー．ＷＫ−２９５５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓ
ｐ．ＷＫ−２９５５）として工業技術院微生物工業技術
研究所に寄託されている。（ＦＥＲＭＰ−１２３１８
号）。

【００３２】本発明においては先ずストレプトミセス属
に属し、物質ＷＫ−２９５５〔Ｉ〕を生産する能力を有
する微生物を適当な培地に培養する。培養に使用される
微生物の例としては、上記の菌株が挙げられるが、その
変異株も物質ＷＫ−２９５５を生産する能力を有する限
り、本発明に使用できる。なお、その他の物質ＷＫ−２
９５５生産能力を有するストレプトミセス属に属する菌
株も使用することができる。

【００３３】本発明において使用される培地としては、
通常の放線菌の培養に適する炭素源、窒素源および無機
物、さらに必要に応じてその他の栄養物を程よく含有す
る合成培地または天然培地を使用することができる。培
地に使用される炭素源および窒素源は、使用菌株の利用
可能なものならばいずれの種類でもよい。

【００３４】すなわち、炭素源としては、たとえばグル
コース、グリセロール、フラクトース、マルトース、マ
ンニトール、キシロース、ガラクトース、リボース、澱
粉またはその加水分解物等の種々の炭水化物が使用でき
る。

【００３５】その濃度は、通常培地に対して０．１％〜
５％が望ましい。また、グルコン酸、ピルビン酸、乳
酸、酢酸等の各種有機酸、グリシン、グルタミン酸、ア
ラニン等の各種アミノ酸、さらにはメタノール、エタノ
ール等のアルコール類やノルマルパラフィン等の非芳香
属系炭化水素、あるいは植物もしくは動物性の各種油脂
等も使用可能である。

【００３６】また、窒素源としては、例えばアンモニ
ア、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム等の各種の無機酸あるいは
有機酸のアンモニウム塩類、尿素、ペプトン、ＮＺ−ア
ミン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーンスチー
プリカー、カゼイン加水分解物、フイッシュミールある
いはその消化物、大豆粉あるいはその消化物、脱脂大豆
あるいはその消化物、加水分解物などの含窒素有機物
質、さらには、グリシン、グルタミン酸、アラニン等の
各種アミノ酸が使用可能である。

【００３７】無機物としては、例えば各種リン酸塩、硫
酸マグネシウム、食塩、さらには微量の重金属塩が使用
される。また、栄養要求性を示す変異株を用いる場合に
は、当然その栄養要求を満足させる物質を培地に加えな
ければならないが、この種の栄養素は、天然物を含む培
地を使用する場合には、とくに添加を必要としない場合
がある。

【００３８】培養は、通常振とうまたは通気攪拌培養な
どの好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気
攪拌培養が好ましい。培地のｐＨは、たとえば５．０〜
８．０であるが、中性付近で培養を行うのが好ましい。

【００３９】培養温度は、例えば２０〜４０℃で行い得
るが、通常は２６〜３２℃（好ましくは２７℃付近）に
保つのがよい。培養時間は液体培養の場合、通常３〜６
日間培養を行い、培養物中にＷＫ−２９５５蓄積量が最
大に達したときに、培養を終了すればよい。

【００４０】これらの培地組成、培地の液性、培養温
度、攪拌速度、通気量などの培養条件は、使用する菌株
の種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られ
るように適宜調節、選択される。液体培養において、発
泡があるときは、例えばシリコン脂、植物油、界面活性
剤などの消泡剤が適宜使用できる。

【００４１】このようにして得られた培養物中に蓄積さ
れた本物質ＷＫ−２９５５物質は、通常は培養濾液中に
生成される。培養濾液から物質ＷＫ−２９５５を採取す
るには、通常微生物の培養物から代謝物を採取するのに
用いられる手段が単独あるいは任意の順序に組み合わせ
て、または反復して用いられる。

【００４２】すなわち、例えば濾過、遠心分離、透析、
濃縮、乾燥、凍結、吸着、脱着、各種溶媒に対する溶解
度の差を利用する例えば沈澱、結晶化、再結晶、転溶、
向流分配方法、クロマトグラフイー等の手段が用いられ
る。

【００４３】培養液から物質ＷＫ−２９５５を採取する
には、培養液を酢酸エチル等の非親水性有機溶媒で抽出
するか、あるいは培養濾液あるいは菌体抽出液を活性
炭、アルミナ、多孔性合成高分子樹脂、イオン交換樹脂
等に吸着させ、酢酸エチル等の溶出溶媒で溶出し、得ら
れた抽出液または溶出液を減圧濃縮後、ヘキサン等の有
機溶媒を加えて抽出すればよい。

【００４４】得られた粗物質は、さらに脂溶性物質の精
製において通常用いられている公知の方法、例えばシリ
カゲル、アルミナ等の担体を用いるカラムクロマトグラ
フィーにより精製することができる。

【００４５】本物質の薬学的に許容し得る塩としては、
例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、酢
酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、グルタミン
酸塩、アスパラギン酸塩等の塩を常法によって製造する
ことができる。この種の製法は周知であるため、その説
明は省略する。

【００４６】また、本物質ＷＫ−２９５５は、有機合成
的に製造することができる。例えば、その一例として
は、実施例に例示するように、３−インドールエタノー
ルを原料とし、それを酸化して得た３−インドールアセ
トアルデヒドとｐ−ヒドロキシフェニルアセトアルデヒ
ドをピナコール反応させた後、反応物を精製して目的物
を得ることができる。

【００４７】反応条件としては、テトラヒドロフラン
（ＴＨＦ）溶液中、塩化水銀とマグネシウムを混合した
後、塩化チタンを加え、その後、３−インドールアセト
アルデヒドとｐ−ヒドロキシフェニルアセトアルデヒド
を加え、０℃で１５分間攪拌することにより、ＷＫ−２
９５５が合成される。

【００４８】以上に述べた、本物質ＷＫ−２９５５の鶏
に対する抗コクシジウム活性については以下の通りであ
る。

【００４９】鶏コクシジウム生育阻害活性モネンシンに耐性の鶏コクシジウム、エイメリアテネラ
のオーシストを用い、宿主であるハムスター腎由来細胞
（ＢＨＫ−２１細胞）上での生育阻害作用を、大永らの
方法（大永、石井：日本獣医師会雑誌、３１，５９２−
５９６（１９７８年））に準じて測定した結果、本物質
ＷＫ−２９５５の生育阻害作用濃度は、０．２〜０．０
２μｇ／mlであった。

【００５０】なお、本物質ＷＫ−２９５５は、宿主細胞
であるハムスター腎由来細胞（ＢＨＫ−２１細胞）に対
してはエイメリア・テネラの生育阻害活性を示す濃度、
０．２〜０．０２μｇ／mlにおいて細胞毒性は認められ
なかった。

【００５１】一方、既知鶏コクシジウム生育阻害剤モネ
ンシンについても同様の投与実験を行った。その結果、
モネンシンではコクシジウム生育阻害活性は認められ
ず、０．０２μｇ／ml投与で宿主細胞に毒性が認められ
た。従って、本物質ＷＫ−２９５５は、既知鶏コクシジ
ウム生育阻害剤モネンシンに比して低毒性であるという
ことができる。

【００５２】

【発明の効果】以上のように、本発明物質ＷＫ−２９５
５は、ポリエーテル系抗生物質モネンシンに耐性のコク
シジウム原虫の生育阻害活性を有することから、コクシ
ジウム病の寛解に導くことが可能となる。また、公知の
抗コクシジウム剤の薬物の効果を著しく持続せしめる併
用剤として用いることもできる。

【００５３】実施例１５００ml容三角フラスコに、グルコース０．１％、ペプ
トン０．３％、酵母エキス０．５％、肉エキス０．３
％、スターチ２．４％、炭酸カルシウム０．４％を含む
液体培地（ｐＨ７．０）１００mlを分注し、１２１℃で
１５分間、蒸気滅菌した。これらに寒天プレート上に成
育させたＷＫ−２９５５の菌体を白金耳にて接種し、２
７℃で３日間、振とう培養して種母を得た。

【００５４】次いで、３０l 容ジャーファーメンター１
基に、きな粉２．０％、グリセロール２．０％、塩化ナ
トリウム０．３％を含む液体培地（ｐＨ７．０）２０l
を仕込み、１２１℃で１５分間蒸気滅菌した。これに上
記の種母２本分をそれぞれ移植し、攪拌速度２００ｒｐ
ｍ、通気量１５l ／分の条件下で、２７℃、９６時間、
通気攪拌培養した。

【００５５】この培養液約２０l に酢酸エチル（２０l
）を加えて攪拌した後、その懸濁液をシャープレス型
遠心機で遠心分離（１０，０００ｒｐｍ）して、酢酸エ
チル抽出層と水層と菌体残渣とに分別した。得られた酢
酸エチル抽出層約２０l を、減圧下、濃縮した後、ヘキ
サン（４００ml）、メタノール（１９０ml）、水（１０
ml）を加え、攪拌した後、その懸濁液を分液ロートで分
離してヘキサン層とメタノール、水層とに分別した。

【００５６】得られたメタノール・水層約２００mlを減
圧下、濃縮乾固して乾固物６．４４ｇを得た。これをシ
リカゲルクロマトグラフイー（メルク社製、Ａｒｔ．９
３８５）を行い、クロロホルム：メタノール（２０：
１）で溶出し、粗活性物質２７０mgを得た。

【００５７】次に、セファデックスＬＨ−２０（ファル
マシア社製）を担体としたゲル濾過を行い、メタノール
で溶出し、粗活性物質１８．０mgを得た。さらに、得ら
れた粗活性物質を高速液体カラムクロマトグラフイーに
より分画した。

【００５８】用いた装置は、トリローターＶ（日本分光
社製）であり、カラムはＹＭＣ−ＰａｃｋＡ−３４３
（ＯＤＳ系樹脂、山村化学研究所製）、溶出溶媒は４０
％メタノール、６０％水、検出はＵＶ２８０ｎｍ、流速
は６ml／分で行った。活性部分を濃縮乾固し、１５．０
９mgの無色油状の物質ＷＫ−２９５５を得た。

【００５９】実施例２インドールを出発原料とする物質ＷＫ−２９５５の合成３−インドールアセトアルデヒド〔２〕の合成３−インドールエタノール〔１〕（１．０ｇ）を、ベン
ゼン（２０ml）とジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
（２０ml）に溶解し、ピリジン（０．５ml）、トリフル
ロオロ酢酸（０．２５ml）、そして、ジシクロカルボジ
イミド（ＤＣＣ）（３．８３ｇ）をそれぞれ加え、アル
ゴン雰囲気下、室温で１８時間攪拌した。

【００６０】なお、３−インドールエタノール〔１〕
は、インドールから常法により合成される。反応溶液に
ベンゼン（６０ml）を加え、生じた沈澱物を濾過した。
濾液を水（６０ml×２回）で洗浄後、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、濃縮乾固した。残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフイー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝
１０：１）にて精製し、下記反応式に示される３−イン
ドールアセトアルデヒド〔２〕６３０mgを得た。収率６
４％。

【００６１】

【化２】

【００６２】ｐ−ヒドロキシフエニルアセトアルデヒド
〔４〕の合成ｐ−ヒドロキシフェネチルアルコール〔３〕（１．０
ｇ）をジシクロカルボジイミド（ＤＭＳＯ）（１５ml）
に溶解し、トリエチルアミン（６．６ml）を加えた後、
ＤＭＳＯ（１５ml）に溶解した三酸化イオウ・ピリジン
錯体（３．４５ｇ）をゆつくり滴下した。

【００６３】２０分後、反応液を水（５０ml）にそそ
ぎ、酢酸エチル（５０ml×３回）で抽出した。酢酸エチ
ル層は、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウム
で乾燥し、濃縮乾固した。残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフイー（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝
８：１）にて精製し、下記反応式に示されるｐ−ヒドロ
キシフェニルアセトアルデヒド〔４〕（２６０mg）を得
た。収率２６％。

【００６４】

【化３】

【００６５】１−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−４−
（３−インドリル）ブタン−２，３−ジオール（物質Ｗ
Ｋ−２９５５）の合成塩化水銀（６０mg）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶
液（２ml）に、７０〜８０メッシュのマグネシウム（１
９２mg）を加え、得られた混合物を室温でアルゴン中１
５分間かきまぜた。混濁した混合物の上澄み液を注射器
でとり、残りのアマルガムをＴＨＦ溶液で３回洗浄した
後、ＴＨＦ溶液（５ml）を加え、混合物を−１０℃に冷
却し、塩化チタン（ＩＶ）４３８μlを滴下した。

【００６６】これらの入った反応フラスコの器壁をＴＨ
Ｆ溶液（２ml）で洗浄し、３−インドールアセトアルデ
ヒド（１５９mg）とｐ−ヒドロキシフエニルアセトアル
デヒド（４０８mg）のＴＨＦ溶液（４ml）を加えた。こ
のようにして得られた紫色の混合物を０℃で１．５時間
かきまぜた後、飽和炭酸カリウム水溶液０．３mlで処理
し、０℃でさらに１５分間かきまぜた。

【００６７】この混合物にジエチルエーテルを加え、混
合物をセライトを用いて濾過した。濾液を飽和塩化ナト
リウム水溶液で洗い、減圧濃縮した。残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフイー（展開溶媒；クロロホルム：
メタノール＝２０：１）にて精製し、下記反応式に示さ
れる本発明の目的物質ＷＫ−２９５５を３０mg得た。収
率１０％。

【００６８】

【化４】

【００６９】実施例３鶏コクシジウム生育阻害に対する影響は、大永らの方法
に準じて動物細胞を宿主とし、コクシジウム原虫を、そ
の細胞内で生育させる系を用いて測定した。鶏コクシジ
ウムは、モネンシンに耐性を有するエイメリア属テネラ
のオーシストを使用した。

【００７０】このオーシストは２０分間脱穀装置（ＳＨ
ＩＮＡＧＡＷＡ）にかけた後、鶏胆汁とトリプシンを加
え、４１℃で２時間反応させた。反応物を遠心分離によ
り分別し、スポロゾイドを得た。

【００７１】また、９６穴マイクロプレート（コーニン
グ社製）に、ハムスター腎由来細胞（ＢＨＫ−２１細
胞）をフルシートとなるように生育させ、すでに調整し
たスポロゾイドを物質ＷＫ−２９５５のメタノール溶液
と共に加え、二酸化炭素通気下の培養器（ヒラサワ製作
所製）中で４１℃、３日間培養させた。

【００７２】３日後、細胞をメタノールで固定させ、ヘ
マトキシリン等により染色を行い、光学顕微鏡によつて
コクシジウムの生育過程の一つの段階であるシゾンドの
有無を観察した。すなわち、スポロゾイドがシゾンドに
まで生育していたものはコクシジウム原虫生育阻害活性
すなわち抗コクシジウム活性が陰性と判定し、シゾンド
を見出せなかつたものは陽性と評価し、ＢＨＫ−２１細
胞が死んだものは毒性とした。

【００７３】本物質ＷＫ−２９５５は、０．２〜０．０
２μｇ／mlの濃度で、コクシジウム原虫生育阻害活性は
陽性であつた。この濃度で宿主細胞（ＢＨＫ−２１）に
対して細胞毒性は認められなかつた。対照としてモネン
シンを用いて同様の投与試験を行つたところ、モネンシ
ン０．０２μｇ／mlの濃度で宿主細胞の毒性が認めら
れ、またコクシジウム原虫生育阻害活性は陰性であつ
た。

【図面の簡単な説明】

【図１】本物質ＷＫ−２９５５のメタノール溶液で測定
した紫外線吸収スペクトルである。

【図２】本物質ＷＫ−２９５５の重ジメチルスルホキシ
ド溶液中で測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルであ
る。

【図３】本物質ＷＫ−２９５５の重メタノール溶液中で
測定した¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者高橋洋子東京都港区白金５丁目９番１号北里研究所（社団法人）内 (72)発明者砂塚敏明東京都港区白金５丁目９番１号北里研究所（社団法人）内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記式【化１】で示される新規物質ＷＫ−２９５５またはその薬学的に
許容し得る塩。
【請求項２】ストレプトミセス属に属し、かつ式【化１】で示される物質ＷＫ−２９５５を生産する能力
を有する微生物を培地に培養し、該培養物中に上記物質
ＷＫ−２９５５〔Ｉ〕を生産蓄積させ、これを採取する
ことを特徴とする新規物質ＷＫ−２９５５の製造法。
【請求項３】微生物がストレプトミセス・エスピー・
ＷＫ−２９５５（ＦＥＲＭＰ−１２３１８）である請
求項２記載の新規物質ＷＫ−２９５５の製造法。
【請求項４】３−インドールアセトアルデヒドとｐ−
ヒドロキシフエニルアセトアルデヒドをピナコール反応
させることを特徴とする下記式【化１】で示される物質ＷＫ−２９５５またはその薬学
的に許容し得る塩の製造法。