JPH0534354A - Measuring method for calcium - Google Patents
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- JPH0534354A JPH0534354A JP18867491A JP18867491A JPH0534354A JP H0534354 A JPH0534354 A JP H0534354A JP 18867491 A JP18867491 A JP 18867491A JP 18867491 A JP18867491 A JP 18867491A JP H0534354 A JPH0534354 A JP H0534354A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、カルシウムの測定方法
に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for measuring calcium.
【０００２】[0002]
【従来の技術】ヒト及び乳牛にみられるカルシウム代謝
疾患は、前者では原発性甲状腺機能亢進症や尿細管性ア
シドーシス、後者では乳熱や起立不能の発生が極めて多
い。特に乳牛においては、生体内のカルシウムとリンの
比率が不均等になり、二等乳、骨軟症、腰萎等の種々の
疾患を併発する。さらに、血管壁が脆くなるため、内出
血を起こし易くなる。このようなカルシウム代謝異常に
起因する疾病によって、農林水産省の報告によれば、平
成元年４月から平成２年３月までの一年間で、国内の家
畜共済加入している牛のうち約１％にあたる約１０，０
００頭の牛が、死亡または廃用として処分されている。
これによる被害を金額に見積もると、約４０億円にもな
っている。2. Description of the Prior Art Calcium metabolism diseases found in humans and dairy cows are extremely high in primary hyperthyroidism and tubular acidosis in the former and milk fever and inability to stand in the latter. Especially in dairy cows, the ratio of calcium and phosphorus in the body becomes unequal, and various diseases such as secondary milk, osteomalacia, and lumbar atrophy occur together. Further, since the blood vessel wall becomes brittle, internal bleeding is likely to occur. According to a report by the Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, due to such a disease caused by abnormal calcium metabolism, about one-third of the domestic cattle slaughtered cattle in the year from April 1989 to March 1990 were reported. Approximately 10,0 equivalent to 1%
00 cows are being killed or disposed of for disposal.
The damage caused by this is estimated to be about 4 billion yen.
【０００３】カルシウム代謝疾患は、飼料給与時でのカ
ルシウム投与量の不足に起因し、泌乳量が多く、出産回
数が多い優良牛に多く見られる。このため、カルシウム
代謝疾患を予防し、早期に発見して治療するために、適
当な診断方法を開発することが望まれている。[0003] Calcium metabolism diseases are often found in high-quality cows, which have a large amount of milk production and a large number of births, due to a lack of calcium dose at the time of feeding the feed. Therefore, it is desired to develop an appropriate diagnostic method for preventing, early detecting and treating a calcium metabolism disease.
【０００４】従来、血液中または乳汁中のカルシウムを
測定する方法としては、例えば、キレート発色法の一種
である、オルトクレゾールフタレインコンプレキソン
（ＯＣＰＣ）法等が行われている。ＯＣＰＣ法では、試
料中のカルシウムイオン（Ｃａ2+）が、アルカリ性条件
下でＯＣＰＣと結合して紫紅色を呈する。この紫紅色の
吸光度を分光光度計で測定している。Conventionally, as a method for measuring calcium in blood or milk, for example, the orthocresolphthalein complexone (OCPC) method, which is a kind of chelate coloring method, has been performed. In the OCPC method, calcium ions (Ca 2+ ) in the sample combine with OCPC under alkaline conditions to give a purple color. The absorbance of this purple color is measured with a spectrophotometer.
【０００５】ＯＣＰＣ法は、例えば次のようにして行わ
れる。まず、血清0.05mlに、0.88Ｍモノエタノールアミ
ン緩衝液（ｐＨ１１．０）５mlを添加して良く撹拌す
る。次いで、この溶液に、オルトクレゾールフタレイン
コンプレキソン（0.63mmol／ｌ）及び８−キノリール
（69mmol／ｌ）からなる発色試液0.5 mlを添加して撹拌
する。５分間放置した後、２時間以内に試薬盲検を対照
として、検体の吸光度（Ｅｓ）を、分光光度計（570nm)
または比色計の570nm フィルターを使用して測定する。
一方、濃度既知の標準試液の吸光度（Ｅｓｔｄ）を同様
に測定して検量線を作成し、この検量線から吸光度（Ｅ
ｓ）に相当するカルシウム濃度を決定する。The OCPC method is performed as follows, for example. First, 5 ml of 0.88 M monoethanolamine buffer solution (pH 11.0) is added to 0.05 ml of serum and stirred well. Next, 0.5 ml of a color-developing reagent solution consisting of orthocresolphthalein complexone (0.63 mmol / l) and 8-quinolyl (69 mmol / l) is added to this solution and stirred. After leaving for 5 minutes, the absorbance (Es) of the sample was measured with a spectrophotometer (570 nm) within 2 hours using the reagent blind test as a control.
Or use a colorimeter 570nm filter.
On the other hand, the absorbance (Estd) of a standard reagent solution of known concentration is similarly measured to prepare a calibration curve, and the absorbance (E
Determine the calcium concentration corresponding to s).
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述の
ＯＣＰＣ法に代表される、キレート発色法によるカルシ
ウムの測定方法では、キレート生成による試料検体の色
調の変化を利用している。このため、例えば、乳汁等の
ように濁りがある検体では、キレート生成による色調の
変化が不明瞭である。この結果、検体の吸光度の測定は
非常に困難である。However, the method for measuring calcium by the chelate coloring method, which is represented by the OCPC method described above, utilizes the change in the color tone of the sample specimen due to the formation of the chelate. Therefore, for example, in a sample such as milk that is cloudy, the change in color tone due to chelate formation is unclear. As a result, it is very difficult to measure the absorbance of the sample.
【０００７】また、ＯＣＰＣとカルシウムとを完全に結
合させるために、発色試液を添加した後、所定時間放置
する必要がある（上記従来例では５分間）。また、吸光
光度を測定するには、試料溶液を石英製の吸収セルに収
容し、この吸収セルに所定波長の光を透過させて、透過
光の強度を測定している。このため、吸収セルに収容す
る試料の量が比較的多量であり、試料および試薬を多量
に必要とする。また、各試料ごとに吸収セルに収容する
ため、多数の測定検体ついて測定を行う場合に長時間を
要する等の問題がある。本発明は、かかる点に鑑みてな
されたものであり、操作が簡単でかつ短時間である共
に、より高感度なカルシウムの測定方法を提供するもの
である。Further, in order to completely bind OCPC and calcium, it is necessary to add a color reagent and then leave it for a predetermined time (5 minutes in the above-mentioned conventional example). Further, in order to measure the absorptance, the sample solution is housed in an absorption cell made of quartz, light of a predetermined wavelength is transmitted through this absorption cell, and the intensity of the transmitted light is measured. Therefore, the amount of the sample stored in the absorption cell is relatively large, and a large amount of the sample and the reagent are required. Further, since each sample is stored in the absorption cell, there is a problem that it takes a long time to perform measurement for a large number of measurement samples. The present invention has been made in view of the above points, and provides a method for measuring calcium, which is easy to operate and takes a short time, and which has higher sensitivity.
【０００８】[0008]
【課題を解決するための手段】本発明の発明者らは、上
記課題を解決するために鋭意検討した結果、本発明の目
的は、螢光発色試薬としてカルセインを用いた螢光光度
測定法により達成されることを見出だした。すなわち、Means for Solving the Problems The inventors of the present invention have made extensive studies in order to solve the above problems, and as a result, the object of the present invention is to provide a fluorometric method using calcein as a fluorescent coloring reagent. I have found something to be achieved. That is,
【０００９】本発明は、プレート上に所定の配置で形成
された複数個のウエルに、血清溶液を夫々収容し、該血
清溶液にカルセインを主成分とする螢光試液を夫々添加
した後、前記ウエルごとに前記血清溶液に対して波長４
５０ｎｍの励起光を照射して該血清溶液が呈した波長５
３０ｎｍの螢光強度を順次連続して測定することを特徴
とするカルシウムの測定方法を提供する。According to the present invention, a serum solution is contained in a plurality of wells formed in a predetermined arrangement on a plate, and a fluorescent reagent containing calcein as a main component is added to the serum solution. 4 wavelengths per well for the serum solution
Wavelength 5 exhibited by the serum solution upon irradiation with excitation light of 50 nm
Provided is a method for measuring calcium, which comprises continuously measuring the fluorescence intensity at 30 nm.
【００１０】本発明は、プレート上に所定の配置で形成
された複数個のウエルに、乳汁溶液を夫々収容し、該乳
汁溶液にカルセインを主成分とする螢光試液を夫々添加
した後、前記ウエルごとに前記乳汁溶液に対して波長４
５０ｎｍの励起光を照射して該乳汁溶液が呈した波長５
３０ｎｍの螢光強度を順次連続して測定することを特徴
とするカルシウムの測定方法を提供する。According to the present invention, a milk solution is contained in each of a plurality of wells formed in a predetermined arrangement on a plate, and a fluorescent reagent solution containing calcein as a main component is added to the milk solution. 4 wavelengths per well for the milk solution
Wavelength 5 exhibited by the milk solution upon irradiation with excitation light of 50 nm
Provided is a method for measuring calcium, which comprises continuously measuring the fluorescence intensity at 30 nm.
【００１１】本発明のカルシウムの測定方法に用いられ
るカルセインとは、化学名が３，３´−ビス［Ｎ，Ｎ−
ジ（カルボキシメチル）−アミノメチル］−フルオレセ
インであり、試料溶液中のカルシウムと反応して螢光物
質を生成する。この螢光物質は、４５０ｎｍの励起光を
照射すると、波長５３０ｎｍの螢光を呈するものであ
る。Calcein used in the method for measuring calcium according to the present invention has a chemical name of 3,3'-bis [N, N-
Di (carboxymethyl) -aminomethyl] -fluorescein, which reacts with calcium in the sample solution to produce a fluorescent substance. This fluorescent substance exhibits a fluorescence of a wavelength of 530 nm when irradiated with excitation light of 450 nm.
【００１２】[0012]
【作用】本発明のカルシウムの測定方法によれば、カル
セインと試料溶液中のカルシウムが結合した螢光物質が
呈する螢光を測定しているので、試料溶液の色調による
影響がない。このため、乳汁のような懸濁した試料につ
いても高感度でカルシウムを測定することができる。ま
た、複数個のウエルに収容された試料溶液について順次
連続して螢光光度を測定することにより、測定操作を簡
略化することができるので、化学的に不安定なカルセイ
ンが失活する前に測定を行うことができる。According to the method for measuring calcium of the present invention, the fluorescence exhibited by the fluorescent substance in which calcein and calcium in the sample solution are bound is measured, and therefore there is no influence by the color tone of the sample solution. Therefore, calcium can be measured with high sensitivity even in a suspended sample such as milk. In addition, since the measurement operation can be simplified by sequentially measuring the fluorescence intensity of the sample solution contained in a plurality of wells, before the chemically unstable calcein is deactivated. A measurement can be made.
【００１３】[0013]
【実施例】以下、本発明の実施例について詳細に説明す
る。
［試液の調製］EXAMPLES Examples of the present invention will be described in detail below. [Preparation of test solution]
【００１４】本発明のカルシウムの測定方法に用いれる
螢光試液は、次のようにして調製する。カルセイン（株
式会社同仁化学研究所）１００ に、１ＮＫＯＨ溶液２
ml、および水１０mlを加えて溶解する。次いで、０．０
３Ｍ ＥＤＴＡ溶液１ml を加えた後、精製水を加えて
全量１００mlとする。この溶液２２．５mlに、５％デキ
ストリン溶液７７．５mlを加えて混合したものを、０．
８mlづつ分注して、凍結乾燥した後密閉した。The fluorescent reagent solution used in the calcium measuring method of the present invention is prepared as follows. Calcein (Dojindo Laboratories Inc.) 100, 1 NKOH solution 2
Add 10 ml of water and 10 ml of water to dissolve. Then 0.0
After adding 1 ml of 3M EDTA solution, purified water is added to bring the total volume to 100 ml. To 22.5 ml of this solution, 77.5 ml of 5% dextrin solution was added and mixed, and
Each 8 ml was dispensed, freeze-dried and then sealed.
【００１５】上記調製した螢光試液を使用時に溶解する
ために、ＫＯＨ５６．１１ｇに精製水を加えて全量１リ
ットルとした溶解液を用いる。螢光試液は、前記バイア
ル１本あたり該溶解液４．０mlを加えて、用時溶解す
る。In order to dissolve the above-prepared fluorescent reagent solution at the time of use, a solution having a total volume of 1 liter by adding purified water to 56.11 g of KOH is used. Fluorescent reagent solution is dissolved at the time of use by adding 4.0 ml of the solution for each vial.
【００１６】また、標準カルシウム溶液は、１８０℃で
４時間、乾熱滅菌した炭酸カルシウム０．４９９ｇに５
Ｎ塩酸１０mlを加えて溶解した後、水を加えて全量を１
０００mlとしたものを標準カルシウム原液とする。この
標準カルシウム原液を次の表１に示すように希釈して、
盲検溶液及び標準溶液Ｉ〜IVを調製する。
表 １
カルシウム 調 製
濃 度
盲検溶液 ０mg/dl
標準溶液Ｉ 5.0mg/dl 標準カルシウム原液50μｌ、水 150μｌ
標準溶液II 7.5mg/dl 標準カルシウム原液 150μｌ、水 250μｌ
標準溶液III 10.0mg/dl 標準カルシウム原液 100μｌ、水 100μｌ
標準溶液IV 12.5mg/dl 標準カルシウム原液 250μｌ、水 150μｌ
実施例１A standard calcium solution was added to 0.499 g of calcium carbonate sterilized by dry heat at 180 ° C. for 4 hours to give 5 parts.
After adding 10 ml of N hydrochloric acid to dissolve it, add water to bring the total amount to 1
The standard calcium stock solution is made up to 000 ml. Dilute this standard calcium stock solution as shown in Table 1 below,
Prepare blind and standard solutions I-IV. Table 1 Calcium preparation Concentration blinded solution 0 mg / dl Standard solution I 5.0 mg / dl Standard calcium stock solution 50 μl, Water 150 μl Standard solution II 7.5 mg / dl Standard calcium stock solution 150 μl, Water 250 μl Standard solution III 10.0 mg / dl Standard calcium Stock solution 100 μl, water 100 μl Standard solution IV 12.5 mg / dl Standard calcium stock solution 250 μl, water 150 μl Example 1
【００１７】本発明のカルシウムの測定方法に従って血
清中のカルシウムの測定を行った試験結果について説明
する。ここで、使用した螢光光度計は、日産合成工業
（株）製のニッサン螢光−９０マイクロプレートリーダ
ーを使用した。また、マイクロタイタープレートとして
は、１×８平底型ストリップウエル（ウエル寸法；直径
７mm、深さ１１mm）を１０個並列したものを使用した。
ニッサン螢光−９０マイクロプレートリーダーは、スト
リップウエルの各ウエルに収容された試料溶液につい
て、螢光度を、順次連続して自動的に測定することがで
き、濃度既知の標準溶液の螢光度に基づいて検量線を自
動的に作成できるものである。The test results of measuring calcium in serum according to the calcium measuring method of the present invention will be described. The fluorescence photometer used here was a Nissan Fluorescence-90 microplate reader manufactured by Nissan Gosei Co., Ltd. As the microtiter plate, 10 1 × 8 flat-bottom strip wells (well size; diameter 7 mm, depth 11 mm) arranged in parallel were used.
The Nissan Fluorescence-90 Microplate Reader can automatically and continuously measure the fluorescence of the sample solution contained in each well of the strip well, based on the fluorescence of a standard solution of known concentration. The calibration curve can be created automatically.
【００１８】また、検体は、野外で乳牛の頚静脈から常
法に従って採血し、室温で放置した後、凝血した血液
を、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して得た血清を
用いた。As the sample, blood serum was collected from the jugular vein of dairy cows in the field according to a conventional method, allowed to stand at room temperature, and then the coagulated blood was centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes.
【００１９】まず、マイクロプレートの第１列目のウエ
ルに、盲検溶液及び標準溶液Ｉ〜ＩＶを各１０μｌずつ
収容する。一方、表２に示す検体番号１〜４５の血清溶
液を、２列目以降のウエルに各１０μｌずつ収容する。First, 10 μl each of the blind solution and the standard solutions I to IV are contained in the wells in the first row of the microplate. On the other hand, 10 μl of each of the serum solutions of sample numbers 1 to 45 shown in Table 2 is contained in the wells of the second and subsequent columns.
【００２０】次いで、各ウエルに前記螢光試液１８０μ
ｌを添加した後、タイターミキサーを用いて混合し、３
分後に前述のマイクロプレートリーダーを用いて、各ウ
エルごとに、波長４５０ｎｍの励起光を照射し、波長５
３０ｎｍでの各試料の螢光光度を連続的に測定した。測
定した盲検溶液及び標準溶液Ｉ〜ＩＶの螢光光度から、
マイクロプレートリーダーに内臓された演算装置により
検量線を自動的に作成し、この検量線に基づいて、血清
溶液１〜４５中のカルシウムの濃度を演算装置により決
定した。この結果を表２に示す。比較例１以下に説明す
る、キレート試薬としてＯＣＰＣを使用したキレート発
色法に従って、血清中のカルシウムの測定を行った比較
試験の結果について説明する。Then, 180 μl of the fluorescent test solution is added to each well.
After adding 1 liter, mix using a titer mixer and mix 3
After 5 minutes, using the above-mentioned microplate reader, irradiating each well with excitation light of wavelength 450 nm,
The fluorescence intensity of each sample at 30 nm was measured continuously. From the fluorescence intensity of the measured blind solution and standard solutions I to IV,
A calibration curve was automatically created by a computing device incorporated in the microplate reader, and the concentration of calcium in the serum solutions 1 to 45 was determined by the computing device based on this calibration curve. The results are shown in Table 2. Comparative Example 1 The results of a comparative test in which calcium in serum was measured according to the chelate coloring method using OCPC as a chelating reagent described below will be described.
【００２１】まず、オルトクレゾールフタレインコンプ
レキソン（0.63mmol／ｌ）及び８−キノリール（69mmol
／ｌ）からなる発色試液を調製する。一方、カルシウム
濃度が夫々０，５．０，１０．０，１５．０ ／ｄｌの
盲検溶液及び標準溶液Ａ〜Ｄを調製する。First, ortho-cresolphthalein complexone (0.63 mmol / l) and 8-quinolyl (69 mmol)
/ L) is prepared. On the other hand, blind solutions and standard solutions A to D having calcium concentrations of 0, 5.0, 10.0 and 15.0 / dl are prepared.
【００２２】表２に示す検体番号１〜４５の血清溶液各
０．０５mlに、0.88Ｍモノエタノールアミン緩衝液（ｐ
Ｈ１１．０）５．０mlを添加して良く撹拌する。これ
に、発色試液０．５mlを夫々添加する。次いで、タイタ
ーミキサーで撹拌した後、５分間放置する。この後、盲
検溶液０．０５mlについて同様の処理を施したものを対
照として、波長５７０ｎｍの光における血液溶液１〜４
５の吸光度（Ｅｓ）を、分光光度計（島津製作所製ＵＶ
２４０、波長５７０ｎｍ、層長１０ｍｍ）を使用して測
定する。0.88M monoethanolamine buffer (p) was added to 0.05 ml of each of the serum solutions of sample Nos. 1 to 45 shown in Table 2.
Add 5.0 ml of H11.0) and stir well. To this, 0.5 ml of color developing solution is added. Then, after stirring with a titer mixer, the mixture is left for 5 minutes. After that, 0.05 ml of the blind solution was subjected to the same treatment as a control, and blood solutions 1 to 4 in the light of wavelength 570 nm were used as a control.
The absorbance (Es) of 5 was measured by a spectrophotometer (UV manufactured by Shimadzu Corporation).
240, wavelength 570 nm, layer length 10 mm).
【００２３】一方、標準溶液Ａ〜Ｄ０．０５mlについ
て、吸光度（Ｅｓｔｄ）を同様に測定して検量線を作成
する。この検量線から、吸光度（Ｅｓ）に相当するカル
シウム濃度を決定した。この結果を、表２に併記する。On the other hand, with respect to 0.05 ml of the standard solutions A to D, the absorbance (Estd) is similarly measured to prepare a calibration curve. From this calibration curve, the calcium concentration corresponding to the absorbance (Es) was determined. The results are also shown in Table 2.
【００２４】[0024]
【表１】
実施例２
本発明のカルシウムの測定方法に従って、乳汁中のカル
シウムの測定を行った試験結果について説明する。ここ
で、検体としては、酪農家から回収した乳汁を用いた。[Table 1] Example 2 The test results of measuring calcium in milk according to the method for measuring calcium of the present invention will be described. Here, milk collected from a dairy farmer was used as the sample.
【００２５】表３に示す検体番号１〜２５の乳汁溶液
を、精製水で１０〜１５倍に稀釈した後、マイクロタイ
タイープレートのウエルに各１０μｌずつ収容した。以
下、実施例１と同様にして、乳汁溶液１〜２５中のカル
シウムの濃度を測定した。この結果を表３に併記する。
比較例２The milk solutions of sample numbers 1 to 25 shown in Table 3 were diluted 10 to 15 times with purified water, and then 10 μl of each was placed in the wells of a microtiter plate. Hereinafter, in the same manner as in Example 1, the concentration of calcium in the milk solutions 1 to 25 was measured. The results are also shown in Table 3. Comparative example 2
【００２６】表３に示す検体番号１〜２５の乳汁溶液
を、るつぼにとり電気炉で灰化した後、灰分０．５ｇを
２５０mlのビーカーにはかり取り、水約４０mlと塩酸５
mlを加えて加熱して溶解し濾過する。８％シュウ酸溶液
４０mlを加えて約８０℃に加熱する。６Ｍアンモニア水
を滴下してｐＨ４にした。水浴上で３〜４時間加温した
後、重量既知のガラスフィルター（Ｇ4 ）で濾過する。
得られた残渣を水で３回、メタノールで２回洗浄し、１
１０℃〜１１５℃で３０分間乾燥する。デシケーター中
で巌冷し、ＣａＣ2 Ｏ4 ・Ｈ2 Ｏとして秤量し、カルシ
ウム含量を下記式１に示す計算式を用いて求めた。この
結果を表３に併記する。The milk solutions of sample Nos. 1 to 25 shown in Table 3 were placed in a crucible and ashed in an electric furnace. 0.5 g of the ash was weighed in a 250 ml beaker, and about 40 ml of water and 5 hydrochloric acid were added.
Add ml to heat, dissolve and filter. Add 40 ml of 8% oxalic acid solution and heat to about 80 ° C. The pH was adjusted to 4 by adding 6 M aqueous ammonia. After heating for 3 to 4 hours on a water bath, it is filtered through a glass filter (G 4 ) of known weight.
The residue obtained is washed 3 times with water and 2 times with methanol, 1
Dry for 30 minutes at 10 ° C to 115 ° C. Cooled Iwao in a desiccator, and weighed as CaC 2 O 4 · H 2 O , was determined using a formula that shows the calcium content by the following formula 1. The results are also shown in Table 3.
【００２７】[0027]
【表２】 [Table 2]
【００２８】[0028]
【数１】 [Equation 1]
【００２９】以上説明したように、本発明のカルシウム
の測定方法によれば、比較例１及び比較例２のキレート
発色法によるカルシウムの測定方法と比較して、微量の
試料にもかかわらず、比較例と同等の精度でカルシウム
を測定することが可能であることが確認された。また、
必要な螢光試液も微量で済むので、測定にかかる費用を
低減することができることがわかった。また、測定操作
も簡単であり、測定に要する時間も短時間であるため、
多数検体を短時間で正確に処理できた。また、化学的に
不安定なカルセインの失活による測定不良も認められな
かった。さらに、乳汁のような懸濁した試料溶液につい
ても、比較例２のように繁雑な処理を行うことなく、比
較例とほぼ同等の測定結果を得ることができた。As described above, according to the method for measuring calcium of the present invention, compared with the method for measuring calcium by the chelate coloring method of Comparative Example 1 and Comparative Example 2, despite the small amount of sample, a comparison is made. It was confirmed that it is possible to measure calcium with the same accuracy as the example. Also,
It was found that the cost of measurement can be reduced because a small amount of fluorescent reagent is required. Moreover, since the measurement operation is simple and the time required for measurement is short,
Multiple samples could be processed accurately in a short time. In addition, no measurement failure was observed due to the deactivation of chemically unstable calcein. Furthermore, with respect to a suspended sample solution such as milk, almost the same measurement result as that of the comparative example could be obtained without performing the complicated treatment as in the comparative example 2.
【００３０】[0030]
【発明の効果】以上説明した如くに、本発明のカルシウ
ムの測定方法によれば、極微量の試料について微量の試
液を用いて、短時間でかつ簡便な操作で血清および乳汁
中のカルシウムを測定することができる。この結果、低
い費用でかつ簡単に乳牛等のカルシウム代謝疾患の検査
を行うことができ、カルシウム代謝疾患の予防および早
期治療に大きく貢献するものである。As described above, according to the method for measuring calcium of the present invention, a very small amount of a sample solution is used to measure calcium in serum and milk in a short time and with a simple operation. can do. As a result, it is possible to easily test for calcium metabolism diseases in dairy cows and the like at low cost, which greatly contributes to prevention and early treatment of calcium metabolism diseases.
Claims (2)
数個のウエルに、血清溶液を夫々収容し、該血清溶液に
カルセインを主成分とする螢光試液を夫々添加した後、
前記ウエルごとに前記血清溶液に対して波長４５０ｎｍ
の励起光を照射して該血清溶液が呈した波長５３０ｎｍ
の螢光強度を順次連続して測定することを特徴とするカ
ルシウムの測定方法。1. A serum solution is contained in each of a plurality of wells formed in a predetermined arrangement on a plate, and a fluorescent reagent containing calcein as a main component is added to the serum solution,
450 nm wavelength for the serum solution for each well
Wavelength of 530 nm exhibited by the serum solution upon irradiation with excitation light of
A method for measuring calcium, which comprises continuously measuring the fluorescence intensity of the.
数個のウエルに、乳汁溶液を夫々収容し、該乳汁溶液に
カルセインを主成分とする螢光試液を夫々添加した後、
前記ウエルごとに前記乳汁溶液に対して波長４５０ｎｍ
の励起光を照射して該乳汁溶液が呈した波長５３０ｎｍ
の螢光強度を順次連続して測定することを特徴とするカ
ルシウムの測定方法。2. A milk solution is contained in each of a plurality of wells formed in a predetermined arrangement on a plate, and a fluorescent reagent solution containing calcein as a main component is added to the milk solution,
450 nm wavelength for the milk solution for each well
530 nm that the milk solution exhibited by irradiating the excitation light of
A method for measuring calcium, which comprises continuously measuring the fluorescence intensity of the.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18867491A JPH0534354A (en) | 1991-07-29 | 1991-07-29 | Measuring method for calcium |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18867491A JPH0534354A (en) | 1991-07-29 | 1991-07-29 | Measuring method for calcium |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0534354A true JPH0534354A (en) | 1993-02-09 |
Family
ID=16227866
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18867491A Pending JPH0534354A (en) | 1991-07-29 | 1991-07-29 | Measuring method for calcium |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0534354A (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6684473B1 (en) | 1999-10-21 | 2004-02-03 | Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha | Method of and apparatus for manufacturing belt for continuously variable transmission |
| JP2008175722A (en) * | 2007-01-19 | 2008-07-31 | Anritsu Sanki System Co Ltd | Analyzing device |
| CN115791717A (en) * | 2022-09-22 | 2023-03-14 | 四川大学华西医院 | Detection reagent for detecting reducing salt based on competitive selective recognition and binary visualization and application thereof |
-
1991
- 1991-07-29 JP JP18867491A patent/JPH0534354A/en active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6684473B1 (en) | 1999-10-21 | 2004-02-03 | Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha | Method of and apparatus for manufacturing belt for continuously variable transmission |
| EP1398523A2 (en) | 1999-10-21 | 2004-03-17 | Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha | Method of and apparatus for manufacturing a belt for continuously variable transmission |
| JP2008175722A (en) * | 2007-01-19 | 2008-07-31 | Anritsu Sanki System Co Ltd | Analyzing device |
| CN115791717A (en) * | 2022-09-22 | 2023-03-14 | 四川大学华西医院 | Detection reagent for detecting reducing salt based on competitive selective recognition and binary visualization and application thereof |
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