JPH05317059A - Component of rat proteasome and its dna - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide the component of rat proteasome and the gene encoding the polypeptide of the component. CONSTITUTION:The amino acid sequences of the polypeptides of individual delta-, iota-, xsi-, and ring 12-components constituting rat proteasome, and the base sequences of the gene encoding these components. The individual components are produced by synthesizing cDNA from mRNA from rat hepatocytes, incorporating the double-stranded DNA synthesized from the cDNA into a vector, transforming a suitable host cells using the vector and proliferating the host cells. These components are useful for elucidation of the pathologic mechanism of malignant tumors and other diseases, diagnosis and treatment thereof.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、プロテアソームに関す
るものであり、さらに詳しくは細胞内ラットプロテアー
ゼのコンポーネントに関する。FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to proteasomes and more particularly to components of intracellular rat proteases.

【０００２】[0002]

【従来の技術】プロテアソームは、別名、多機能プロテ
アーゼと呼ばれ、不活性型で細胞内に局在し、エネルギ
ー依存性蛋白質分解系を構成する主要酵素である。本酵
素は、酵母からヒトに至る真核生物に広く存在してお
り、またすべての組織に存在し、なかでも肝臓では、全
可溶性蛋白質の１％も占める。2. Description of the Related Art The proteasome, which is also called a multifunctional protease, is a major enzyme that is localized in cells in an inactive form and constitutes an energy-dependent proteolytic system. This enzyme is widely present in eukaryotes from yeast to humans, and is present in all tissues, and in the liver, it accounts for 1% of the total soluble protein.

【０００３】該酵素は同一分子内に複数の触媒活性部位
を持ち、トリプシン型酵素の基質である塩基性アミノ
酸、キモトリプシン型酵素の基質である中性アミノ酸、
そしてプロテアーゼとしては稀な酸性アミノ酸を含む合
成ペプチドのカルボキシ末端のペプチド結合を切断する
活性がある。しかしながら、種々の阻害剤の中で特異的
で有効に作用するものはないことから、該酵素は、既知
のプロテアーゼとは異なる触媒活性部位を持つと推定さ
れている。The enzyme has a plurality of catalytically active sites in the same molecule, a basic amino acid which is a substrate of a trypsin type enzyme, a neutral amino acid which is a substrate of a chymotrypsin type enzyme,
And it has an activity of cleaving the peptide bond at the carboxy terminus of a synthetic peptide containing an acidic amino acid, which is rare as a protease. However, it is presumed that the enzyme has a catalytic active site different from that of known proteases, since none of the various inhibitors act specifically and effectively.

【０００４】構造的には、１５ー２０種類の異なるコン
ポーネントからなる総数３０ー４０個の多成分複合体で
あり、沈降係数２０Ｓ、分子量は約７５万と推定され、
プロテアーゼとしては例外的に大きい。また、該酵素を
電子顕微鏡で観察すると環状型、あるいは円筒型の特異
的な分子形状を有していることが認められた。Structurally, it is a multi-component composite having a total of 30-40 consisting of 15-20 different components, and it is estimated that the sedimentation coefficient is 20S and the molecular weight is about 750,000.
It is exceptionally large as a protease. In addition, when the enzyme was observed with an electron microscope, it was found to have a specific molecular shape of a circular type or a cylindrical type.

【０００５】さらに、ラットプロテアソームは、高速液
体クロマトグラムの分離パターンより、少なくとも１５
種類のコンポーネントより構成されていることがわか
り、このうち、コンポーネントＣ１(FEBES,Lett., 199
2, in press), C2 (Biochemist-ry, 28, 7332-7340, 19
89), C3 (Biochemistry, 29, 3777-3785, 1990), C5 (F
-EBES Lett., 264, 91-94, 1990), C8 (Biochem. Bioph
ys. Res. Commun., 171,676-683, 1990), および C9 (F
EBES Lett., 264, 279-282, 1990) の１次構造が明かに
なった。[0005] Furthermore, rat proteasome shows at least 15% of the rat proteasome from the separation pattern of the high performance liquid chromatogram.
It can be seen that it is composed of various types of components. Of these, the component C1 (FEBES, Lett., 199
2, in press), C2 (Biochemist-ry, 28 , 7332-7340, 19
89), C3 (Biochemistry, 29 , 3777-3785, 1990), C5 (F
-EBES Lett., 264, 91-94, 1990), C8 (Biochem. Bioph
ys. Res. Commun., 171 , 676-683, 1990), and C9 (F
EBES Lett., 264, 279-282, 1990) has revealed the primary structure.

【０００６】かかるプロテアソームは、非リソゾーム系
蛋白質分解経路における主要酵素であり、蛋白質の修飾
による機能制御や蛋白質の代謝回転の調節など多彩な生
理作用を有していると推定されている重要な物質であ
る。The proteasome is a major enzyme in the non-lysosomal proteolytic pathway, and is an important substance that is presumed to have various physiological actions such as function control by protein modification and regulation of protein turnover. Is.

【０００７】そして、本発明者らの研究によれば、後記
のように、プロテアソームの遺伝子は、肝癌細胞、腎癌
細胞、白血病細胞などの悪性腫瘍細胞において正常細胞
に比較して異常に高く発現し、さらに、これらの腫瘍細
胞の核に多機能プロテアーゼが、異常蓄積することが観
察されており、例えば、当該多機能プロテアーゼのコン
ポーネントを抗原として抗体を調製し、これを用いるこ
とにより、通常の免疫測定法により、前記各種癌の診断
を簡便に行うことが可能である。According to the research conducted by the present inventors, as described below, the proteasome gene is abnormally highly expressed in malignant tumor cells such as liver cancer cells, renal cancer cells and leukemia cells as compared with normal cells. Furthermore, it has been observed that the multifunctional protease abnormally accumulates in the nucleus of these tumor cells. For example, by preparing an antibody using the component of the multifunctional protease as an antigen and using this, a normal multifunctional protease can be prepared. By the immunoassay, it is possible to easily diagnose the various cancers.

【０００８】その他にも、プロテアソームは、後記のよ
うに、多彩な生理作用を有している重要な物質であり、
各種病態の診断および治療法を確立する上できわめて有
用なものである。しかしながら、ラットプロテアソーム
を構成する個々のコンポーネントの詳細については上記
コンポーネント以外、明かにされておらず、これらの個
々のコンポーネントの詳細を解明することが、強く要請
されていた。[0008] In addition, proteasome is an important substance having various physiological actions, as described below,
It is extremely useful in establishing diagnosis and treatment methods for various pathological conditions. However, details of individual components constituting the rat proteasome have not been clarified except for the above-mentioned components, and elucidation of details of these individual components has been strongly demanded.

【０００９】[0009]

【発明が解決しようとする課題】そこで、本願発明者ら
は、このような状況を踏まえ、前記プロテアソームにつ
いて、その構成成分である個々のコンポーネントの構
造、機能等について詳細に検討すると共に、各種癌をは
じめとする各種病態の診断、および治療法を確立するこ
とを目標として鋭意研究を積み重ねた結果、細胞内多機
能プロテアーゼ、すなわちラットプロテアソームのコン
ポーネントのうち、デルタ（δ）、イオタ（ι）、ゼー
タ（ζ）およびRING12について解明することに成功し
て、本発明を完成するに至った。Under the circumstances, the inventors of the present invention have studied in detail the structure, function, etc. of each component which is a constituent component of the proteasome, and have investigated various cancers. As a result of intensive research aimed at establishing a method for diagnosing and treating various pathological conditions such as, delta (δ), iota (ι), among the components of intracellular multifunctional protease, namely rat proteasome, The inventors have succeeded in clarifying zeta (ζ) and RING12 and completed the present invention.

【００１０】すなわち、本発明は、細胞内多機能プロテ
アーゼ、すなわち、ラットプロテアソームの構成成分の
うちデルタ、イオタ、ゼータ、および RING12 の各コン
ポーネントのポリペプチドを提供することを目的とする
ものである。That is, an object of the present invention is to provide an intracellular multifunctional protease, that is, a polypeptide of each component of delta, iota, zeta, and RING12 among the components of rat proteasome.

【００１１】また、本発明は、ラットプロテアソームの
構成成分のコンポーネントデルタ、コンポーネントイオ
タ、コンポーネントゼータ、およびコンポーネントRING
12の各ポリぺプチドをコードする遺伝子を提供すること
を目的とするものである。The present invention also provides a component delta, a component iota, a component zeta, and a component RING, which are components of rat proteasome.
The purpose is to provide genes encoding each of the 12 polypeptides.

【００１２】また、これらのコンポーネントを明かにす
ることにより、該酵素の機能の解明に役立つのみなら
ず、各種病態の診断、および治療法を解明する技術を提
供することを目的とするものである。Further, by clarifying these components, it is not only useful for elucidating the function of the enzyme, but also providing a technique for diagnosing various disease states and elucidating therapeutic methods. ..

【００１３】また、本発明は、ラットプロテアソームの
構成成分のデルタ、イオタ、ゼータ、およびRING12の各
コンポーネントを抗原として調製される抗体を利用する
ことにより、各種の腫瘍等の各種病態の免疫測定法によ
る診断技術を提供することを目的とするものである。The present invention also provides an immunoassay method for various pathological conditions such as various tumors by utilizing an antibody prepared by using the components of rat proteasome components delta, iota, zeta, and RING12 as antigens. The purpose is to provide a diagnostic technology by

【００１４】さらに、本発明は、前記プロテアソームの
個々のコンポーネントの構造、機能を解明することによ
り、各種腫瘍、アルツハイマー病等の各種病態のメカニ
ズムを解明すると共に、それらの治療法の開発に有用な
当該各コンポーネントのポリぺプチド、および当該各ポ
リぺプチドをコードする遺伝子を提供することを目的と
するものである。Furthermore, the present invention elucidates the structure and function of each component of the proteasome to elucidate the mechanism of various pathological conditions such as various tumors and Alzheimer's disease, and is useful for the development of therapeutic methods therefor. It is intended to provide a polypeptide of each component and a gene encoding each polypeptide.

【００１５】本発明によれば、次式（１）で表されるア
ミノ酸配列を有するラットプロテアソームのコンポーネ
ントデルタが提供される。 式（１） ＭｅｔＡｌａＶａｌＧｌｎＰｈｅＡｓｐＧｌｙＧｌｙＶａｌＶａｌ ＬｅｕＧｌｙＡｌａＡｓｐＳｅｒＡｒｇＴｈｒＴｈｒＴｈｒＧｌｙ ＳｅｒＴｙｒＩｌｅＡｌａＡｓｎＡｒｇＶａｌＴｈｒＡｓｐＬｙｓ ＬｅｕＴｈｒＰｒｏＩｌｅＨｉｓＡｓｐＨｉｓＩｌｅＰｈｅＣｙｓ ＣｙｓＡｒｇＳｅｒＧｌｙＳｅｒＡｌａＡｌａＡｓｐＴｈｒＧｌｎ ＡｌａＶａｌＡｌａＡｓｐＡｌａＶａｌＴｈｒＴｙｒＧｌｎＬｅｕ ＧｌｙＰｈｅＨｉｓＳｅｒＩｌｅＧｌｕＬｅｕＡｓｎＧｌｕＰｒｏ ＰｒｏＬｅｕＶａｌＨｉｓＴｈｒＡｌａＡｌａＳｅｒＬｅｕＰｈｅ ＬｙｓＧｌｕＭｅｔＣｙｓＴｙｒＡｒｇＴｙｒＡｒｇＧｌｕＡｓｐ ＬｅｕＭｅｔＡｌａＧｌｙＩｌｅＩｌｅＩｌｅＡｌａＧｌｙＴｒｐ ＡｓｐＰｒｏＧｌｎＧｌｕＧｌｙＧｌｙＧｌｎＶａｌＴｙｒＳｅｒ ＶａｌＰｒｏＭｅｔＧｌｙＧｌｙＭｅｔＭｅｔＶａｌＡｒｇＧｌｎ ＳｅｒＰｈｅＡｌａＩｌｅＧｌｙＧｌｙＳｅｒＧｌｙＳｅｒＳｅｒ ＴｙｒＩｌｅＴｙｒＧｌｙＴｙｒＶａｌＡｓｐＡｌａＴｈｒＴｙｒ ＡｒｇＧｌｕＧｌｙＭｅｔＴｈｒＬｙｓＡｓｐＧｌｕＣｙｓＬｅｕ ＧｌｎＰｈｅＴｈｒＡｌａＡｓｎＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕＡｌａ ＭｅｔＧｌｕＡｒｇＡｓｐＧｌｙＳｅｒＳｅｒＧｌｙＧｌｙＶａｌ ＩｌｅＡｒｇＬｅｕＡｌａＡｌａＩｌｅＧｌｎＧｌｎＳｅｒＧｌｙ ＶａｌＧｌｕＡｒｇＧｌｎＶａｌＬｅｕＬｅｕＧｌｙＡｓｐＧｌｎ ＩｌｅＰｒｏＬｙｓＶａｌＴｈｒＩｌｅＳｅｒＴｈｒＬｅｕＰｒｏ ＰｒｏＰｒｏAccording to the present invention, a component delta of rat proteasome having an amino acid sequence represented by the following formula (1) is provided. Equation (1) MetAlaValGlnPheAspGlyGlyValVal LeuGlyAlaAspSerArgThrThrThrGly SerTyrIleAlaAsnArgValThrAspLys LeuThrProIleHisAspHisIlePheCys CysArgSerGlySerAlaAlaAspThrGln AlaValAlaAspAlaValThrTyrGlnLeu GlyPheHisSerIleGluLeuAsnGluPro ProLeuValHisThrAlaAlaSerLeuPhe LysGluMetCysTyrArgTyrArgGluAsp LeuMetAlaGlyIleIleIleAlaGlyTrp AspProGlnGluGlyGlyGlnValT rSer ValProMetGlyGlyMetMetValArgGln SerPheAlaIleGlyGlySerGlySerSer TyrIleTyrGlyTyrValAspAlaThrTyr ArgGluGlyMetThrLysAspGluCysLeu GlnPheThrAlaAsnAlaLeuAlaLeuAla MetGluArgAspGlySerSerGlyGlyVal IleArgLeuAlaAlaIleGlnGlnSerGly ValGluArgGlnValLeuLeuGlyAspGln IleProLysValThrIleSerThrLeuPro ProPro

【００１６】さらに、次式（３）で表されるアミノ酸配
列を有するラットプロテアソームのコンポーネントイオ
タが提供される。 式（３） ＭｅｔＳｅｒＡｒｇＧｌｙＳｅｒＳｅｒＡｌａＧｌｙＰｈｅＡｓｐ ＡｒｇＨｉｓＩｌｅＴｈｒＩｌｅＰｈｅＳｅｒＰｒｏＧｌｕＧｌｙ ＡｒｇＬｅｕＴｙｒＧｌｎＶａｌＧｌｕＴｙｒＡｌａＰｈｅＬｙｓ ＡｌａＩｌｅＡｓｎＧｌｎＧｌｙＧｌｙＬｅｕＴｈｒＳｅｒＶａｌ ＡｌａＶａｌＡｒｇＧｌｙＬｙｓＡｓｐＣｙｓＡｌａＶａｌＩｌｅ ＶａｌＴｈｒＧｌｎＬｙｓＬｙｓＶａｌＰｒｏＡｓｐＬｙｓＬｅｕ ＬｅｕＡｓｐＳｅｒＳｅｒＴｈｒＶａｌＴｈｒＨｉｓＬｅｕＰｈｅ ＬｙｓＩｌｅＴｈｒＧｌｕＡｓｎＩｌｅＧｌｙＣｙｓＶａｌＭｅｔ ＴｈｒＧｌｙＭｅｔＴｈｒＡｌａＡｓｐＳｅｒＡｒｇＳｅｒＧｌｎ ＶａｌＧｌｎＡｒｇＡｌａＡｒｇＴｙｒＧｌｕＡｌａＡｌａＡｓｎ ＴｒｐＬｙｓＴｙｒＬｙｓＴｙｒＧｌｙＴｙｒＧｌｕＩｌｅＰｒｏ ＶａｌＡｓｐＭｅｔＬｅｕＣｙｓＬｙｓＡｒｇＩｌｅＡｌａＡｓｐ ＩｌｅＳｅｒＧｌｎＶａｌＴｙｒＴｈｒＧｌｎＡｓｎＡｌａＧｌｕ ＭｅｔＡｒｇＰｒｏＬｅｕＧｌｙＣｙｓＣｙｓＭｅｔＩｌｅＬｅｕ ＩｌｅＧｌｙＩｌｅＡｓｐＧｌｕＧｌｕＧｌｎＧｌｙＰｒｏＧｌｎ ＶａｌＴｙｒＬｙｓＣｙｓＡｓｐＰｒｏＡｌａＧｌｙＴｙｒＴｙｒ ＣｙｓＧｌｙＰｈｅＬｙｓＡｌａＴｈｒＡｌａＡｌａＧｌｙＶａｌ ＬｙｓＧｌｎＴｈｒＧｌｕＳｅｒＴｈｒＳｅｒＰｈｅＬｅｕＧｌｕ ＬｙｓＬｙｓＶａｌＬｙｓＬｙｓＬｙｓＰｈｅＡｓｐＴｒｐＴｈｒ ＰｈｅＧｌｕＧｌｎＴｈｒＶａｌＧｌｕＴｈｒＡｌａＩｌｅＴｈｒ ＣｙｓＬｅｕＳｅｒＴｈｒＶａｌＬｅｕＳｅｒＩｌｅＡｓｐＰｈｅ ＬｙｓＰｒｏＳｅｒＧｌｕＩｌｅＧｌｕＶａｌＧｌｙＶａｌＶａｌ ＴｈｒＶａｌＧｌｕＡｓｎＰｒｏＬｙｓＰｈｅＡｒｇＩｌｅＬｅｕ ＴｈｒＧｌｕＡｌａＧｌｕＩｌｅＡｓｐＡｌａＨｉｓＬｅｕＶａｌ ＡｌａＬｅｕＡｌａＧｌｕＡｒｇＡｓｐFurther, a rat proteasome component iota having an amino acid sequence represented by the following formula (3) is provided. Equation (3) MetSerArgGlySerSerAlaGlyPheAsp ArgHisIleThrIlePheSerProGluGly ArgLeuTyrGlnValGluTyrAlaPheLys AlaIleAsnGlnGlyGlyLeuThrSerVal AlaValArgGlyLysAspCysAlaValIle ValThrGlnLysLysValProAspLysLeu LeuAspSerSerThrValThrHisLeuPhe LysIleThrGluAsnIleGlyCysValMet ThrGlyMetThrAlaAspSerArgSerGln ValGlnArgAlaArgTyrGluAlaAlaAsn TrpLysTyrLysTyrGlyTyrGluI ePro ValAspMetLeuCysLysArgIleAlaAsp IleSerGlnValTyrThrGlnAsnAlaGlu MetArgProLeuGlyCysCysMetIleLeu IleGlyIleAspGluGluGlnGlyProGln ValTyrLysCysAspProAlaGlyTyrTyr CysGlyPheLysAlaThrAlaAlaGlyVal LysGlnThrGluSerThrSerPheLeuGlu LysLysValLysLysLysPheAspTrpThr PheGluGlnThrValGluThrAlaIleThr CysLeuSerThrValLeuSerIleAspPhe LysProSerGluIleGluValGlyV lVal ThrValGluAsnProLysPheArgIleLeu ThrGluAlaGluIleAspAlaHisLeuVal AlaLeuAlaGluArgAsp

【００１７】さらに、また、次式（５）で表されるアミ
ノ酸配列を有するラットプロテアソームのコンポーネン
トゼータが提供される。 式（５） ＭｅｔＰｈｅＬｅｕＴｈｒＡｒｇＳｅｒＧｌｕＴｙｒＡｓｐＡｒｇ ＧｌｙＶａｌＡｓｎＴｈｒＰｈｅＳｅｒＰｒｏＧｌｕＧｌｙＡｒｇ ＬｅｕＰｈｅＧｌｎＶａｌＧｌｕＴｙｒＡｌａＩｌｅＧｌｕＧｌｙ ＨｉｓＬｙｓＬｅｕＧｌｙＳｅｒＴｈｒＡｌａＩｌｅＧｌｙＩｌｅ ＧｌｎＴｈｒＳｅｒＧｌｕＧｌｙＶａｌＣｙｓＬｅｕＡｌａＶａｌ ＧｌｕＬｙｓＡｒｇＩｌｅＴｈｒＳｅｒＰｒｏＬｅｕＭｅｔＧｌｕ ＰｒｏＳｅｒＳｅｒＩｌｅＧｌｕＬｙｓＩｌｅＶａｌＧｌｕＩｌｅ ＡｓｐＡｌａＨｉｓＩｌｅＧｌｙＣｙｓＡｌａＭｅｔＳｅｒＧｌｙ ＬｅｕＩｌｅＡｌａＡｓｐＡｌａＬｙｓＴｈｒＬｅｕＩｌｅＡｓｐ ＬｙｓＡｌａＡｒｇＶａｌＧｌｕＴｈｒＧｌｎＡｓｎＨｉｓＴｒｐ ＰｈｅＴｈｒＴｙｒＡｓｎＧｌｕＴｈｒＭｅｔＴｈｒＶａｌＧｌｕ ＳｅｒｖａｌＴｈｒＧｌｎＡｌａＶａｌＳｅｒＡｓｎＬｅｕＡｌａ ＬｅｕＧｌｎＰｈｅＧｌｙＧｌｕＧｌｕＡｓｐＡｌａＡｓｐＰｒｏ ＧｌｙＡｌａＭｅｔＳｅｒＡｒｇＰｒｏＰｈｅＧｌｙＶａｌＡｌａ ＬｅｕＬｅｕＰｈｅＧｌｙＧｌｙＶａｌＡｓｐＧｌｕＬｙｓＧｌｙ ＰｒｏＧｌｎＬｅｕＰｈｅＨｉｓＭｅｔＡｓｐＰｒｏＳｅｒＧｌｙ ＴｈｒＰｈｅＶａｌＧｌｎＣｙｓＡｓｐＡｌａＡｒｇＡｌａＩｌｅ ＧｌｙＳｅｒＡｌａＳｅｒＧｌｕＧｌｙＡｌａＧｌｎＳｅｒＳｅｒ ＬｅｕＧｌｎＧｌｕＶａｌＴｙｒＨｉｓＬｙｓＳｅｒＴｈｒＴｈｒ ＬｅｕＬｙｓＧｌｕＡｌａＩｌｅＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｅｕＩｌｅ ＩｌｅＬｅｕＬｙｓＧｌｎＶａｌＭｅｔＧｌｕＧｌｕＬｙｓＬｅｕ ＡｓｎＡｌａＴｈｒＡｓｎＩｌｅＧｌｕＬｅｕＡｌａＴｈｒＶａｌ ＧｌｎＰｒｏＧｌｙＧｌｎＡｓｎＰｈｅＨｉｓＭｅｔＰｈｅＴｈｒ ＬｙｓＧｌｕＧｌｕＬｅｕＧｌｕＧｌｕＶａｌＩｌｅＬｙｓＡｓｐ ＩｌｅFurthermore, a component zeta of rat proteasome having an amino acid sequence represented by the following formula (5) is provided. Equation (5) MetPheLeuThrArgSerGluTyrAspArg GlyValAsnThrPheSerProGluGlyArg LeuPheGlnValGluTyrAlaIleGluGly HisLysLeuGlySerThrAlaIleGlyIle GlnThrSerGluGlyValCysLeuAlaVal GluLysArgIleThrSerProLeuMetGlu ProSerSerIleGluLysIleValGluIle AspAlaHisIleGlyCysAlaMetSerGly LeuIleAlaAspAlaLysThrLeuIleAsp LysAlaArgValGluThrGlnAsnHisTrp PheThrTyrAsnGluThrMetThrV lGlu ServalThrGlnAlaValSerAsnLeuAla LeuGlnPheGlyGluGluAspAlaAspPro GlyAlaMetSerArgProPheGlyValAla LeuLeuPheGlyGlyValAspGluLysGly ProGlnLeuPheHisMetAspProSerGly ThrPheValGlnCysAspAlaArgAlaIle GlySerAlaSerGluGlyAlaGlnSerSer LeuGlnGluValTyrHisLysSerThrThr LeuLysGluAlaIleLysSerSerLeuIle IleLeuLysGlnValMetGluGluLysLeu AsnAlaThrAsnIleGluLeuAlaT rVal GlnProGlyGlnAsnPheHisMetPheThr LysGluGluLeuGluGluValIleLysAsp Ile

【００１８】さらに、また、次式（７）で表されるアミ
ノ酸配列を有するラットプロテアソームのコンポーネン
トRING12が提供される。 式（７） ＭｅｔＬｅｕＧｌｎＡｌａＧｌｙＡｌａＰｒｏＴｈｒＡｌａＧｌｙ ＳｅｒＰｈｅＡｒｇＴｈｒＧｌｙＧｌｕＶａｌＨｉｓＴｈｒＧｌｙ ＴｈｒＴｈｒＩｌｅＭｅｔＡｌａＶａｌＧｌｕＰｈｅＡｓｐＧｌｙ ＧｌｙＶａｌＶａｌＶａｌＧｌｙＳｅｒＡｓｐＳｅｒＡｒｇＶａｌ ＳｅｒＡｌａＧｌｙＡｌａＡｌａＶａｌＶａｌＡｓｎＡｒｇＶａｌ ＰｈｅＡＳｐＬｙｓＬｅｕＳｅｒＰｒｏＬｅｕＨｉｓＧｌｎＡｒｇ ＩｌｅＴｙｒＣｙｓＡｌａＬｅｕＳｅｒＧｌｙＳｅｒＡｌａＡｌａ ＡｓｐＡｌａＧｌｎＡｌａＩｌｅＡｌａＡｓｐＭｅｔＡｌａＡｌａ ＴｙｒＧｌｎＬｅｕＧｌｕＬｅｕＨｉｓＧｌｙＬｅｕＧｌｕＬｅｕ ＧｌｕＧｌｕＰｒｏＰｒｏＬｅｕＶａｌＬｅｕＡｌａＡｌａＡｌａ ＡｓｎＩｌｅＶａｌＬｙｓＡｓｎＩｌｅＳｅｒＴｙｒＬｙｓＴｙｒ ＡｒｇＧｌｕＡｓｐＬｅｕＬｅｕＡｌａＨｉｓＬｅｕＭｅｔＶａｌ ＡｌａＧｌｙＴｒｐＡｓｐＧｌｎＨｉｓＧｌｕＧｌｙＧｌｙＧｌｎ ＶａｌＴｙｒＧｌｙＴｈｒＭｅｔＧｌｙＧｌｙＭｅｔＬｅｕＩｌｅ ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＰｈｅＡｌａＩｌｅＧｌｙＧｌｙＳｅｒＧｌｙ ＳｅｒＴｈｒＴｙｒＩｌｅＴｙｒＧｌｙＴｙｒＶａｌＡｓｐＡｌａ ＡｌａＴｙｒＬｙｓＰｒｏＧｌｙＭｅｔＴｈｒＰｒｏＧｌｕＧｌｕ ＣｙｓＡｒｇＡｒｇＰｈｅＴｈｒＴｈｒＡｓｐＡｌａＩｌｅＴｈｒ ＬｅｕＡｌａＭｅｔＡｓｎＡｒｇＡｓｐＧｌｙＳｅｒＳｅｒＧｌｙ ＧｌｙＶａｌＩｌｅＴｙｒＬｅｕＶａｌＴｈｒＩｌｅＴｈｒＡｌａ ＡｓｐＧｌｙＶａｌＡｓｐＨｉｓＡｒｇＶａｌＩｌｅＬｅｕＧｌｙ ＡｓｐＧｌｕＬｅｕＰｒｏＬｙｓＰｈｅＴｙｒＡｓｐＧｌｕFurther, a rat proteasome component RING12 having an amino acid sequence represented by the following formula (7) is provided. Equation (7) MetLeuGlnAlaGlyAlaProThrAlaGly SerPheArgThrGlyGluValHisThrGly ThrThrIleMetAlaValGluPheAspGly GlyValValValGlySerAspSerArgVal SerAlaGlyAlaAlaValValAsnArgVal PheASpLysLeuSerProLeuHisGlnArg IleTyrCysAlaLeuSerGlySerAlaAla AspAlaGlnAlaIleAlaAspMetAlaAla TyrGlnLeuGluLeuHisGlyLeuGluLeu GluGluProProLeuValLeuAlaAlaAla AsnIleValLysAsnIleSerTyrL sTyr ArgGluAspLeuLeuAlaHisLeuMetVal AlaGlyTrpAspGlnHisGluGlyGlyGln ValTyrGlyThrMetGlyGlyMetLeuIle ArgGlnProPheAlaIleGlyGlySerGly SerThrTyrIleTyrGlyTyrValAspAla AlaTyrLysProGlyMetThrProGluGlu CysArgArgPheThrThrAspAlaIleThr LeuAlaMetAsnArgAspGlySerSerGly GlyValIleTyrLeuValThrIleThrAla AspGlyValAspHisArgValIleLeuGly AspGluLeuProLysPheTyrAspG u

【００１９】本発明のラットプロテアソームのコンポー
ネントのデルタ、イオタ、ゼータ、およびRING12は、ま
た上記のアミノ酸配列のＮ末端にメチオニンが結合して
いないポリペプチド、および上記アミノ酸配列のＮ末端
にラットプロテアソームのコンポーネントのデルタ、イ
オタ、ゼータ、およびRING12のためのシグナルペプチド
の部分もしくは全部が結合または、欠損した中間体も含
包する。The components of the rat proteasome of the present invention, delta, iota, zeta, and RING12, are also a polypeptide in which methionine is not bound to the N-terminus of the above amino acid sequence, and rat proteasome to the N-terminus of the above amino acid sequence. It also includes intermediates in which some or all of the signal peptides for the components delta, iota, zeta, and RING12 are bound or deleted.

【００２０】さらに、自然の変異により、または人工の
変異によりポリペプチドの主たる活性に変化を与えるこ
となく、ポリペプチドをコードするＤＮＡの構造の一部
を変化させることが可能である。本発明のラットプロテ
アソームのコンポーネントデルタ、イオタ、ゼータ、お
よびRING12のポリペプチドは、前記アミノ酸配列を有す
る相同変異体に相当する構造を有するポリペプチドも含
包する。Furthermore, it is possible to change a part of the structure of the DNA encoding the polypeptide without changing the main activity of the polypeptide by natural mutation or artificial mutation. The polypeptides of the rat proteasome components delta, iota, zeta, and RING12 of the present invention also include a polypeptide having a structure corresponding to a homologous variant having the above amino acid sequence.

【００２１】本発明のもう一つの態様によれば、前記式
（１）で表されるアミノ酸配列を有するラットプロテア
ソームのコンポーネントデルタをコードする次式（２）
で表される塩基配列を有するデオキシリボ核酸が提供さ
れる。 式（２） ＡＴＧＧＣＴＧＴＧＣＡＡＴＴＴＧＡＣＧＧＧＧＧＣＧＴＧＧＴＴ ＣＴＡＧＧＡＧＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＡＡＣＡＡＣＣＡＣＴＧＧＧ ＴＣＧＴＡＣＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＧＡＧＴＧＡＣＴＧＡＣＡＡＧ ＣＴＧＡＣＣＣＣＴＡＴＣＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＴＴＣＴＧＣ ＴＧＣＣＧＣＴＣＡＧＧＣＴＣＧＧＣＡＧＣＴＧＡＴＡＣＣＣＡＡ ＧＣＡＧＴＡＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＴＣＡＣＧＴＡＣＣＡＧＣＴＴ ＧＧＴＴＴＣＣＡＣＡＧＴＡＴＴＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＡＧＣＣＴ ＣＣＡＣＴＡＧＴＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＡＧＴＣＴＣＴＴＴ ＡＡＧＧＡＧＡＴＧＴＧＴＴＡＣＣＧＣＴＡＣＡＧＡＧＡＡＧＡＴ ＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＡＧＧＣＴＧＧ ＧＡＣＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＣＡＧＧＴＧＴＡＣＴＣＴ ＧＴＴＣＣＣＡＴＧＧＧＡＧＧＴＡＴＧＡＴＧＧＴＡＡＧＡＣＡＧ ＴＣＣＴＴＴＧＣＣＡＴＣＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＣＴＣＡ ＴＡＴＡＴＣＴＡＴＧＧＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＡＴ ＣＧＧＧＡＡＧＧＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＴＧＡＡＴＧＴＣＴＧ ＣＡＡＴＴＣＡＣＴＧＣＣＡＡＴＧＣＴＣＴＴＧＣＴＴＴＧＧＣＴ ＡＴＧＧＡＡＣＧＧＧＡＴＧＧＣＴＣＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＧ ＡＴＣＣＧＣＴＴＧＧＣＡＧＣＣＡＴＴＣＡＡＣＡＧＴＣＧＧＧＧ ＧＴＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＴＴＧＧＧＡＧＡＣＣＡＧ ＡＴＣＣＣＣＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＣＡ ＣＣＴＣＣＣAccording to another embodiment of the present invention, the following formula (2) encoding the component delta of rat proteasome having the amino acid sequence represented by the above formula (1)
There is provided a deoxyribonucleic acid having a base sequence represented by: Equation (2) ATGGCTGTGCAATTTGACGGGGGCGTGGTT CTAGGAGCAGACTCCAGAACAACCACTGGG TCGTACATCGCCAATCGAGTGACTGACAAG CTGACCCCTATCCACGATCACATCTTCTGC TGCCGCTCAGGCTCGGCAGCTGATACCCAA GCAGTAGCTGATGCTGTCACGTACCAGCTT GGTTTCCACAGTATTGAGCTGAACGAGCCT CCACTAGTGCACACAGCCGCCAGTCTCTTT AAGGAGATGTGTTACCGCTACAGAGAAGAT CTGATGGCAGGAATCATCATCGCAGGCTGG GACCCTCAAGAAGGAGGGCAGGTGT CTCT GTTCCCATGGGAGGTATGATGGTAAGACAG TCCTTTGCCATCGGAGGCTCCGGGAGCTCA TATATCTATGGCTATGTTGATGCTACCTAT CGGGAAGGCATGACCAAGGATGAATGTCTG CAATTCACTGCCAATGCTCTTGCTTTGGCT ATGGAACGGGATGGCTCCAGTGGAGGAGTG ATCCGCTTGGCAGCCATTCAACAGTCGGGG GTAGAGCGGCAGGTGCTTTTGGGAGACCAG ATCCCCAAGGTCACCATCTCCACTTTGCCA CCTCCC

【００２２】本発明のもう一つの態様によれば、前記式
（３）で表されるアミノ酸配列を有するラットプロテア
ソームのコンポーネントイオタをコードする次式（４）
で表される塩基配列を有するデオキシリボ核酸が提供さ
れる。 式（４） ＡＴＧＴＣＣＣＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＧＣＣＧＧＴＴＴＴＧＡＣ ＣＧＧＣＡＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＴＴＣＴＣＴＣＣＣＧＡＧＧＧＣ ＣＧＡＣＴＣＴＡＣＣＡＡＧＴＡＧＡＡＴＡＴＧＣＴＴＴＴＡＡＧ ＧＣＴＡＴＴＡＡＣＣＡＧＧＧＴＧＧＡＣＴＴＡＣＡＴＣＴＧＴＡ ＧＣＴＧＴＣＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＡＣＴＧＣＧＣＡＧＴＴＡＴＴ ＧＴＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧＡＣＡＡＡＣＴＡ ＣＴＧＧＡＴＴＣＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＡＣＴＣＡＣＴＴＡＴＴＣ ＡＡＧＡＴＡＡＣＧＧＡＡＡＡＣＡＴＴＧＧＣＴＧＴＧＴＧＡＴＧ ＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＣＡＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＧＡＴＣＣＣＡＧ ＧＴＡＣＡＧＡＧＧＧＣＡＣＧＣＴＡＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＡＡＣ ＴＧＧＡＡＡＴＡＣＡＡＡＴＡＴＧＧＣＴＡＴＧＡＧＡＴＴＣＣＴ ＧＴＧＧＡＣＡＴＧＣＴＧＴＧＴＡＡＡＡＧＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴ ＡＴＴＴＣＴＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＴＧＣＴＧＡＡ ＡＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＴＧＧＴＴＧＴＴＧＴＡＴＧＡＴＴＴＴＡ ＡＴＴＧＧＴＡＴＡＧＡＴＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡ ＧＴＧＴＡＣＡＡＧＴＧＴＧＡＴＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴＡＣＴＡＣ ＴＧＴＧＧＣＴＴＴＡＡＡＧＣＣＡＣＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＧＴＧ ＡＡＧＣＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＴＣＣＴＣＧＡＡ ＡＡＡＡＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＴＴＧＡＴＴＧＧＡＣＡ ＴＴＴＧＡＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＣＴＧＣＡＡＴＣＡＣＡ ＴＧＣＣＴＧＴＣＴＡＣＴＧＴＴＣＴＧＴＣＧＡＴＴＧＡＴＴＴＣ ＡＡＡＣＣＴＴＣＡＧＡＡＡＴＣＧＡＡＧＴＴＧＧＡＧＴＡＧＴＴ ＡＣＡＧＴＴＧＡＡＡＡＴＣＣＴＡＡＡＴＴＣＡＧＧＡＴＴＣＴＴ ＡＣＡＧＡＡＧＣＡＧＡＧＡＴＴＧＡＣＧＣＴＣＡＣＣＴＴＧＴＧ ＧＣＴＣＴＡＧＣＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣAccording to another aspect of the present invention, the following formula (4) encoding the component iota of rat proteasome having the amino acid sequence represented by the above formula (3)
There is provided a deoxyribonucleic acid having a base sequence represented by: Equation (4) ATGTCCCGTGGTTCCAGCGCCGGTTTTGAC CGGCACATTACTATTTTCTCTCCCGAGGGC CGACTCTACCAAGTAGAATATGCTTTTAAG GCTATTAACCAGGGTGGACTTACATCTGTA GCTGTCAGAGGAAAGGACTGCGCAGTTATT GTCACACAGAAGAAAGTACCTGACAAACTA CTGGATTCCAGCACCGTGACTCACTTATTC AAGATAACGGAAAACATTGGCTGTGTGATG ACAGGAATGACAGCTGACAGCAGATCCCAG GTACAGAGGGCACGCTATGAAGCAGCTAAC TGGAAATACAAATATGGCTATGAGA TCCT GTGGACATGCTGTGTAAAAGAATTGCTGAT ATTTCTCAAGTCTACACACAGAATGCTGAA ATGAGGCCACTTGGTTGTTGTATGATTTTA ATTGGTATAGATGAAGAGCAAGGCCCTCAA GTGTACAAGTGTGATCCTGCAGGCTACTAC TGTGGCTTTAAAGCCACCGCAGCAGGAGTG AAGCAGACAGAGTCAACCAGCTTCCTCGAA AAAAAAGTGAAGAAGAAATTTGATTGGACA TTTGAACAGACAGTGGAAACTGCAATCACA TGCCTGTCTACTGTTCTGTCGATTGATTTC AAACCTTCAGAAATCGAAGTTGGAG AGTT ACAGTTGAAAATCCTAAATTCAGGATTCTT ACAGAAGCAGAGATTGACGCTCACCTTGTG GCTCTAGCAGAGAGAGAC

【００２３】本発明のもう一つの態様によれば、前記式
（５）で表されるアミノ 酸配列を有するラットプロテ
アソームのコンポーネントゼータをコードする次式
（６）で表される塩基配列を有するデオキシリボ核酸が
提供される。 式（６） ＡＴＧＴＴＣＣＴＣＡＣＴＣＧＧＴＣＣＧＡＧＴＡＣＧＡＣＡＧＧ ＧＧＴＧＴＧＡＡＣＡＣＴＴＴＴＴＣＴＣＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＡ ＴＴＡＴＴＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＴＡＴＧＣＣＡＴＴＧＡＧＧＧＣ ＣＡＴＡＡＧＣＴＴＧＧＴＴＣＴＡＣＧＧＣＣＡＴＴＧＧＣＡＴＣ ＣＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＧＧＧＴＧＴＡＴＧＴＣＴＡＧＣＴＧＴＧ ＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＴＴＡＣＣＴＣＧＣＣＡＣＴＡＡＴＧＧＡＧ ＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＴＴＧＡＧＡＡＡＡＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＴ ＧＡＴＧＣＴＣＡＴＡＴＡＧＧＴＴＧＴＧＣＣＡＴＧＡＧＴＧＧＧ ＣＴＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴＧＣＴＡＡＡＡＣＴＴＴＡＡＴＴＧＡＴ ＡＡＡＧＣＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＡＡＣＣＡＣＴＧＧ ＴＴＣＡＣＣＴＡＴＡＡＴＧＡＧＡＣＡＡＴＧＡＣＡＧＴＴＧＡＧ ＡＧＴＧＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＧＴＧＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＴ ＴＴＧＣＡＧＴＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＡＴＣＣＡ ＧＧＴＧＣＴＡＴＧＴＣＴＣＧＴＣＣＣＴＴＴＧＧＡＧＴＡＧＣＡ ＴＴＧＴＴＧＴＴＴＧＧＡＧＧＡＧＴＴＧＡＴＧＡＧＡＡＡＧＧＧ ＣＣＣＣＡＡＣＴＧＴＴＴＣＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＡＴＣＴＧＧＧ ＡＣＣＴＴＣＧＴＡＣＡＧＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＧＡＧＣＡＡＴＴ ＧＧＴＴＣＴＧＣＧＴＣＡＧＡＧＧＧＴＧＣＣＣＡＧＡＧＣＴＣＣ ＴＴＧＣＡＧＧＡＡＧＴＴＴＡＣＣＡＣＡＡＧＴＣＴＡＣＧＡＣＴ ＣＴＧＡＡＧＧＡＧＧＣＣＡＴＣＡＡＧＴＣＴＴＣＡＣＴＣＡＴＣ ＡＴＣＣＴＣＡＡＧＣＡＡＧＴＣＡＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＣＴＧ ＡＡＣＧＣＡＡＣＴＡＡＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＧＣＣＡＣＡＧＴＧ ＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＡＧＡＡＴＴＴＣＣＡＣＡＴＧＴＴＣＡＣＡ ＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣ ＡＴＴAccording to another aspect of the present invention, deoxyribo having a base sequence represented by the following formula (6), which encodes a rat proteasome component zeta having the amino acid sequence represented by the above formula (5). A nucleic acid is provided. Equation (6) ATGTTCCTCACTCGGTCCGAGTACGACAGG GGTGTGAACACTTTTTCTCCTGAAGGAAGA TTATTTCAAGTGGAATATGCCATTGAGGGC CATAAGCTTGGTTCTACGGCCATTGGCATC CAGACATCAGAGGGTGTATGTCTAGCTGTG GAGAAGAGAATTACCTCGCCACTAATGGAG CCTAGCAGCATTGAGAAAATCGTAGAGATT GATGCTCATATAGGTTGTGCCATGAGTGGG CTAATTGCTGATGCTAAAACTTTAATTGAT AAAGCCAGAGTGGAGACACAGAACCACTGG TTCACCTATAATGAGACAATGACAG TGAG AGTGTTACCCAGGCTGTGTCCAATCTGGCT TTGCAGTTCGGAGAAGAAGATGCAGATCCA GGTGCTATGTCTCGTCCCTTTGGAGTAGCA TTGTTGTTTGGAGGAGTTGATGAGAAAGGG CCCCAACTGTTTCACATGGACCCATCTGGG ACCTTCGTACAGTGTGATGCTCGAGCAATT GGTTCTGCGTCAGAGGGTGCCCAGAGCTCC TTGCAGGAAGTTTACCACAAGTCTACGACT CTGAAGGAGGCCATCAAGTCTTCACTCATC ATCCTCAAGCAAGTCATGGAGGAGAAGCTG AACGCAACTAACATCGAGCTGGCCA AGTG CAGCCTGGTCAGAATTTCCACATGTTCACA AAGGAAGAACTGGAGGAGGTGATCAAGGAC ATT

【００２４】本発明のもう一つの態様によれば、前記式
（７）で表されるアミノ酸配列を有するラットプロテア
ソームのコンポーネントRING12をコードする次式（８）
で表される塩基配列を有するデオキシリボ核酸が提供さ
れる。 式（８） ＡＴＧＣＴＧＣＡＡＧＣＣＧＧＡＧＣＡＣＣＴＡＣＣＧＣＣＧＧＣ ＴＣＴＴＴＣＣＧＧＡＣＧＧＧＡＧＡＡＧＴＣＣＡＣＡＣＣＧＧＧ ＡＣＡＡＣＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＧＴＧＧＡＡＴＴＴＧＡＣＧＧＧ ＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＧＡＴＴＣＣＣＧＡＧＴＧ ＴＣＡＧＣＧＧＧＡＧＣＡＧＣＣＧＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＣＧＴＧ ＴＴＴＧＡＣＡＡＧＣＴＣＴＣＣＣＣＴＣＴＧＣＡＣＣＡＧＣＧＣ ＡＴＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＣＴＣＴＣＧＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＣＴ ＧＡＴＧＣＣＣＡＡＧＣＣＡＴＡＧＣＣＧＡＣＡＴＧＧＣＣＧＣＣ ＴＡＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＣＧＧＧＴＴＧＧＡＡＣＴＧ ＧＡＧＧＡＧＣＣＧＣＣＣＣＴＴＧＴＴＣＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡ ＡＡＣＡＴＡＧＴＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣ ＣＧＣＧＡＧＧＡＣＴＴＧＴＴＡＧＣＧＣＡＴＣＴＣＡＴＧＧＴＡ ＧＣＴＧＧＴＴＧＧＧＡＣＣＡＡＣＡＴＧＡＧＧＧＧＧＧＣＣＡＧ ＧＴＧＴＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＧＧＡＴＧＣＴＡＡＴＴ ＣＧＡＣＡＧＣＣＣＴＴＴＧＣＧＡＴＣＧＧＣＧＧＴＴＣＣＧＧＡ ＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＣＡ ＧＣＴＴＡＴＡＡＡＣＣＡＧＧＣＡＴＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＧＡＧ ＴＧＣＣＧＧＣＧＴＴＴＣＡＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＡＣＴ ＣＴＧＧＣＣＡＴＧＡＡＣＣＧＡＧＡＴＧＧＣＴＣＣＡＧＴＧＧＧ ＧＧＴＧＴＣＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＣＡＧＣＴ ＧＡＴＧＧＴＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＡ ＧＡＣＧＡＧＣＴＧＣＣＡＡＡＡＴＴＣＴＡＣＧＡＴＧＡＧAccording to another aspect of the present invention, the following formula (8) encoding the rat proteasome component RING12 having the amino acid sequence represented by the above formula (7)
There is provided a deoxyribonucleic acid having a base sequence represented by: Equation (8) ATGCTGCAAGCCGGAGCACCTACCGCCGGC TCTTTCCGGACGGGAGAAGTCCACACCGGG ACAACCATCATGGCTGTGGAATTTGACGGG GGTGTCGTGGTGGGCTCTGATTCCCGAGTG TCAGCGGGAGCAGCCGTAGTGAACCGCGTG TTTGACAAGCTCTCCCCTCTGCACCAGCGC ATCTACTGTGCCCTCTCGGGTTCCGCTGCT GATGCCCAAGCCATAGCCGACATGGCCGCC TACCAGCTGGAGCTGCACGGGTTGGAACTG GAGGAGCCGCCCCTTGTTCTGGCTGCTGCA AACATAGTGAAGAACATCTCCTACA GTAC CGCGAGGACTTGTTAGCGCATCTCATGGTA GCTGGTTGGGACCAACATGAGGGGGGCCAG GTGTATGGAACCATGGGAGGGATGCTAATT CGACAGCCCTTTGCGATCGGCGGTTCCGGA AGCACCTATATTTACGGTTATGTGGACGCA GCTTATAAACCAGGCATGACCCCCGAGGAG TGCCGGCGTTTCACCACAGACGCCATCACT CTGGCCATGAACCGAGATGGCTCCAGTGGG GGTGTCATCTACCTGGTCACCATTACAGCT GATGGTGTGGACCATCGCGTCATCCTGGGA GACGAGCTGCCAAAATTCTACGATG G

【００２５】続いて、本発明の構成について詳細に説明
する。本発明のラットプロテアソームのコンポーネント
は、これを用いることにより、該酵素の機能の解明に役
立つのみならず、各種病態の診断および治療法を解明す
る技術が提供される。Next, the structure of the present invention will be described in detail. By using the rat proteasome component of the present invention, it is useful not only for elucidating the function of the enzyme but also for providing a technique for elucidating the diagnosis and treatment methods of various pathological conditions.

【００２６】本発明者らの研究によれば、プロテアソー
ムの遺伝子は、肝癌細胞、腎癌細胞(Cancer Res., 51,
6677-6685, 1991)、白血病細胞などの悪性腫瘍細胞 (Pr
oc.Natl. Acad. Sci. U.S.A., 88, 139-143, 1990) に
おいて正常細胞に比較して異常に高く発現し、さらに、
これらの腫瘍細胞の核に多機能プロテアーゼが、異常蓄
積することが観察されている。従って本発明の多機能プ
ロテアーゼのコンポーネントを用いることにより、癌化
のメカニズムの解明や癌の診断および治療に有用であ
る。According to the research conducted by the present inventors, the gene of proteasome was found to be associated with liver cancer cells and renal cancer cells (Cancer Res., 51 ,
6677-6685, 1991), malignant tumor cells such as leukemia cells (Pr
oc.Natl.Acad.Sci.USA, 88, 139-143, 1990), which is abnormally high in comparison with normal cells.
Abnormal accumulation of multifunctional proteases in the nuclei of these tumor cells has been observed. Therefore, by using the component of the multifunctional protease of the present invention, it is useful for elucidating the mechanism of carcinogenesis and diagnosing and treating cancer.

【００２７】また、アルツハイマー病患者の脳内にはユ
ビキチンが異常蓄積し、少なくともこの疾患の原因の一
つに細胞内における蛋白質分解系の異常のあることが示
唆された。また、この疾患の発現にかかわる遺伝子の機
能ドメインにはプロテアーゼ阻害剤がコードされている
ことも判明し(Nature, 331, 530-532, 1988)、非リソソ
ーム系の蛋白分解に関与すると考えられる多機能プロテ
アーゼがアルツハイマー病に本質的に関係していること
が考えられる。It was also suggested that ubiquitin is abnormally accumulated in the brain of Alzheimer's disease patients, and that at least one of the causes of this disease is an abnormality of intracellular proteolytic system. In addition, it was revealed that a protease inhibitor was encoded in the functional domain of the gene involved in the expression of this disease (Nature, 331 , 530-532, 1988), and it is thought that it is involved in non-lysosomal proteolysis. It is believed that functional proteases are essentially associated with Alzheimer's disease.

【００２８】従って、本発明のラット多機能プロテアー
ゼのコンポーネントは、その機能および阻害メカニズム
の解明により、アルツハイマー病と本酵素との関係や異
常の生じるメカニズムのラットにおける研究に有用であ
る。Therefore, the component of the rat multifunctional protease of the present invention is useful in the study of the mechanism of the relationship between Alzheimer's disease and this enzyme and the mechanism of abnormality by elucidating the function and inhibitory mechanism.

【００２９】さらに、本発明者等は、プロテアソームの
発現が、各種細胞においてインターフェロンーγ等のサ
イトカインによって誘導されることより、細胞内での抗
原提示に深くかかわる可能性を示唆する知見を得てい
る。従って、本発明のラットプロテアソームのコンポー
ネントは免疫系の抗原提示のメカニズムの解明や免疫抑
制剤の開発にも有効である。Further, the present inventors have obtained the finding that the expression of proteasome is induced by cytokines such as interferon-γ in various cells, which suggests that it may be deeply involved in intracellular antigen presentation. There is. Therefore, the rat proteasome component of the present invention is also effective for elucidating the mechanism of antigen presentation of the immune system and for developing immunosuppressive agents.

【００３０】このように、本発明のラット多機能プロテ
アソームのコンポーネントの使用あるいはその測定法の
開発は、これらの病態と本酵素とのかかわりのラットに
於ける診断および／または治療法の開発に有用である。
かかる測定には、例えば通常の免疫測定法が使用でき本
発明のコンポーネントは該測定に使用する抗体の抗原と
して用いることができる。すなわち、本発明のラットプ
ロテアソームの各コンポーネントを抗原として常法によ
りモノクローナル抗体を作製し、当該モノクローナル抗
体を有効成分として各種病態を測定し、診断するための
免疫測定用診断剤を製造することができる。当該診断剤
としては、肝癌、腎癌、白血病などの悪性腫瘍の診断剤
などが好適なものとして例示される。As described above, the use of the component of the rat multifunctional proteasome of the present invention or the development of a measuring method thereof is useful for the development of a diagnostic and / or therapeutic method in the rat relating to these pathological conditions and the present enzyme. Is.
For such measurement, for example, a usual immunoassay method can be used, and the component of the present invention can be used as an antigen of the antibody used for the measurement. That is, it is possible to produce a monoclonal antibody by a conventional method using each component of the rat proteasome of the present invention as an antigen, measure various pathological conditions using the monoclonal antibody as an active ingredient, and manufacture a diagnostic agent for immunoassay for diagnosis. .. Preferred examples of the diagnostic agent include diagnostic agents for malignant tumors such as liver cancer, renal cancer and leukemia.

【００３１】なお、本発明のラット多機能プロテアーゼ
のコンポーネントデルタ、イオタ、ゼータ、およびRING
12は、既に本発明者等が報告したコンポーネントＣ２、
Ｃ３、Ｃ５、Ｃ８、Ｃ９とはホモロジーは低い。The components of the rat multifunctional protease of the present invention are delta, iota, zeta, and RING.
12 is the component C2 which the present inventors have already reported,
The homology with C3, C5, C8 and C9 is low.

【００３２】本発明のＤＮＡは、ラット肝臓細胞や株化
培養細胞によって成熟ラットプロテアソームのコンポー
ネントデルタ、イオタ、ゼータ、およびRING12を生産す
るために、前記式（２）、式（４）、式（６）、および
式（８）の５’末端にＡＴＧが結合していない塩基配列
からなるＤＮＡを含包する。本発明のＤＮＡは、また、
ラットプロテアソームのコンポーネントのデルタ、イオ
タ、ゼータ、およびRING12のシグナルペプチドの部分ま
たは全部をコードする５’フランキングＤＮＡを含むＤ
ＮＡも含包する。The DNA of the present invention is used to produce mature rat proteasome components delta, iota, zeta, and RING12 by rat liver cells or cell lines in culture, and the above formulas (2), (4) and () 6), and DNA containing a base sequence to which ATG is not bound at the 5'end of formula (8). The DNA of the present invention also
D containing 5'flanking DNA encoding part or all of the signal peptide of the rat proteasome component delta, iota, zeta, and RING12
NA is also included.

【００３３】自然の変異により、または人工的変異によ
り、主たる活性に変化を与えることなく、ＤＮＡの構造
およびそれから演繹されるポリペプチドの構造の一部を
変異せしめることが可能である。従って、本発明のＤＮ
Ａは、前述のすべてのポリペプチドの相同異性体に相当
する構造を有するポリペプチドをコードする塩基配列を
含有することも可能である。It is possible to mutate a part of the structure of DNA and the structure of the polypeptide deduced therefrom by natural mutation or artificial mutation without changing the main activity. Therefore, the DN of the present invention
A can also contain a nucleotide sequence encoding a polypeptide having a structure corresponding to homologues of all the aforementioned polypeptides.

【００３４】遺伝暗号の縮重に従い、遺伝子から生産さ
れるポリペプチドのアミノ酸配列を変えることなく、そ
の遺伝子の塩基配列の少なくとも一つの塩基を他の種類
の塩基に置換することができる。従って、本発明のＤＮ
Ａは、また、遺伝暗号の縮重に基づく置換によって、変
換された塩基配列を含有することも可能である。この場
合、上記置換により得られた塩基配列より、演繹される
アミノ酸配列は、前記に定義した式（１）、式（３）、
式（５）、または、式（７）のアミノ酸配列と一致す
る。According to the degeneracy of the genetic code, at least one base of the base sequence of the gene can be replaced with another type of base without changing the amino acid sequence of the polypeptide produced from the gene. Therefore, the DN of the present invention
A can also contain a converted nucleotide sequence by substitution based on the degeneracy of the genetic code. In this case, from the base sequence obtained by the above substitution, the deduced amino acid sequence has the following formula (1), formula (3),
It matches the amino acid sequence of formula (5) or formula (7).

【００３５】本発明のラット多機能プロテアーゼのコン
ポーネントのデルタ、イオタ、ゼータ、およびRING12の
特性を有するポリペプチドを得る方法、および該ポリペ
プチドをコードする遺伝子を得る方法の概要について説
明すると以下の通りである。The outline of the method for obtaining a polypeptide having the characteristics of delta, iota, zeta, and RING12, which are components of the rat multifunctional protease of the present invention, and the method for obtaining a gene encoding the polypeptide will be described below. Is.

【００３６】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
は、（ｉ）ラットプロテアソーム産生細胞からメッセン
ジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を分離し、（ｉｉ）該ｍＲＮ
Ａから、単鎖の相補鎖ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を、次いで
２重鎖ＤＮＡを合成し、（ｉｉｉ）２重鎖ＤＮＡをプラ
スミドまたはファージに組み込み、（ｉＶ）得られた組
み換えプラスミドまたはファージで宿主を形質転換し、
（ｖ）得られた形質転換体を培養後、形質転換体から、
適当な方法、例えば、コロニーハイブリダイゼーション
またはプラークハイブリダイゼーションにより、目的と
するＤＮＡを含有するプラスミドまたはファージを単離
し、（Ｖｉ）そのプラスミドまたはファージから目的と
するＤＮＡを切り出し、（ｖｉｉ）該クローン化ＤＮＡ
を適当なプラスミドにサブクローニングすることにより
取得できる。ただし、（ｉｉｉ）で組み込んだプラスミ
ドが、（ｖｉｉ）でサブクローニングするプラスミドと
同じ場合は、（ｖｉ）、（ｖｉｉ）の操作は省略でき
る。DNA encoding the polypeptide of the present invention
(I) isolates messenger RNA (mRNA) from rat proteasome-producing cells, and (ii) the mRN
From A, a single-stranded complementary strand DNA (cDNA), then
Synthesizing double-stranded DNA, (iii) incorporating the double-stranded DNA into a plasmid or phage, (iv) transforming the host with the resulting recombinant plasmid or phage,
(V) After culturing the obtained transformant, from the transformant,
By a suitable method, for example, colony hybridization or plaque hybridization, a plasmid or phage containing the DNA of interest is isolated, (Vi) the DNA of interest is excised from the plasmid or phage, and (vii) the cloning DNA
Can be obtained by subcloning into a suitable plasmid. However, when the plasmid incorporated in (iii) is the same as the plasmid to be subcloned in (vii), the operations of (vi) and (vii) can be omitted.

【００３７】ラットプロテアソームのコンポーネントの
デルタ、イオタ、ゼータ、およびRING12のポリペプチド
をコードするｍＲＮＡは、種々の動物の組織、器官、産
生細胞から、より具体的には、ラット肝臓、腎臓、心
臓、脳、肺、胸腺、ラット肝癌細胞株、ラット腎臓癌細
胞株などから得ることができる。MRNAs encoding the polypeptides of the rat proteasome components delta, iota, zeta, and RING12 are derived from various animal tissues, organs, and producing cells, more specifically, rat liver, kidney, heart, It can be obtained from brain, lung, thymus, rat liver cancer cell line, rat kidney cancer cell line and the like.

【００３８】該酵素産生細胞から全ＲＮＡを調製する方
法としては、グアニジウム／セシウムクロライド法(Gua
nidium/Cesium Chroroide method, Maniatis, T., Fr
its-ch E. F., and Sambrook, J., Molecular Cloning,
Cold Spring Harbor Labor-atory Press, 194-196, 19
82) やグアニジウムチオシアネート法 (Chomczynski,P.
et al., Analytical Biochemistry, 162, 156-159, 19
87)等が一般に用いられる。As a method for preparing total RNA from the enzyme-producing cells, the guanidinium / cesium chloride method (Gua
nidium / Cesium Chroroide method, Maniatis, T., Fr
its-ch EF, and Sambrook, J., Molecular Cloning,
Cold Spring Harbor Labor-atory Press, 194-196, 19
82) and the guanidinium thiocyanate method (Chomczynski, P.
et al., Analytical Biochemistry, 162 , 156-159, 19
87) etc. are generally used.

【００３９】上記操作により得られる全ＲＮＡからのｍ
ＲＮＡの分離、精製は、例えば、オリゴｄＴーセルロー
ス（コラボレイティブ リサーチ社（Ｃｏｌｌａｂｏｒ
ａ−ｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社））やオリゴテック
スーｄＴ３０（日本合成ゴム社、日本ロッシュ社）等を
用いて吸着カラム法またはバッチ法により実施できる。M from total RNA obtained by the above operation
RNA separation and purification can be performed, for example, by oligo dT-cellulose (Collaborative Research Co.
a-Tive Research)) and Oligotex dT30 (Nippon Synthetic Rubber Co., Ltd., Nippon Roche Co., Ltd.) and the like by an adsorption column method or a batch method.

【００４０】このようにして得られたｍＲＮＡを鋳型と
して逆転写酵素を用いて、例えばオカヤマーバーグ法
(Okayama, H. and Berg, P., Molecular and Cellular
Bolo-gy, 3, 280, 1983) やグブラー- ホフマン法 (Gub
ler, V. and Hoffman, B.J.,Gene, 25, 263-269, 1983)
等に従いｃＤＮＡを合成し、得られたｃＤＮＡをプラス
ミドやファージに組み込み、ｃＤＮＡのライブラリーを
調製する。Using the thus obtained mRNA as a template and a reverse transcriptase, for example, the Okayamerberg method
(Okayama, H. and Berg, P., Molecular and Cellular
Bolo-gy, 3, 280, 1983) and Gubler-Hoffman method (Gub
ler, V. and Hoffman, BJ, Gene, 25 , 263-269, 1983)
CDNA is synthesized according to the above procedure, and the obtained cDNA is incorporated into a plasmid or phage to prepare a cDNA library.

【００４１】ｃＤＮＡを組み込むプラスミドとしては、
例えば、PBR322 (Gene, 2, 95,1977),PBR325 (Gene, 4,
121, 1978), PUC12 (Gene, 19, 259, 1982), PUC13 (G
ene,19, 259,1982), PUC18 (Gene, 33, 103, 1985), PU
C19 (Gene, 33,103,1985),PUC118 (Methods in Enzymol
ogy, 153, 3, 1987), PUC119 (Methods in Enzym-olog
y, 153, 3, 1987), Bluescript II(ストラタタジーン
(Stratagene )社) などが挙げられるが、その他のもの
であっても、宿主内で複製保持されるものであれば、い
ずれも用いることができる。As a plasmid into which cDNA is incorporated,
For example, PBR322 (Gene, 2, 95 , 1977), PBR325 (Gene, 4,
121, 1978), PUC12 (Gene, 19 , 259, 1982), PUC13 (G
ene, 19 , 259,1982), PUC18 (Gene, 33 , 103, 1985), PU
C19 (Gene, 33, 103 , 1985), PUC118 (Methods in Enzymol
ogy, 153 , 3, 1987), PUC119 (Methods in Enzym-olog
y, 153 , 3, 1987), Bluescript II (Stratagene
(Stratagene) Inc., etc., but any other one can be used as long as it is replication-retained in the host.

【００４２】また、ｃＤＮＡを組み込むファージベクタ
ーとしては、例えば、λｇｔ１０(Huynh,T.V., Young,
R.A. and Davis, R.W., DNA cloning, A Practical Ap
p-roach, IRL Press, Oxford, 1, 49, 1985).やλｇｔ
１１(Proc. Natl. Acad.Sci., U.S.A., 80, 1194, 198
3)などが、挙げられるが、その他のものであっても、宿
主内で増殖できるものであれば良い。As a phage vector into which cDNA is incorporated, for example, λgt10 (Huynh, TV, Young,
RA and Davis, RW, DNA cloning, A Practical Ap
p-roach, IRL Press, Oxford, 1 , 49, 1985). and λgt
11 (Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 80, 1194, 198)
3) and the like, but other ones may be used as long as they can grow in the host.

【００４３】プラスミドにｃＤＮＡを組み込む方法とし
ては、例えば、サンブルーク(Samb-rook, J.) らの方法
(Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spri
ngHarbor Laboratory Press, 1.53-1.73, 1989) などが
挙げられる。また、ファージベクターにｃＤＮＡを組み
込む方法としては、例えば、Hyunh, T.V. 等の方法(DNA
cloning, A Practical Approach, IRL Press, Oxford,
1, 49, 1985) などが挙げられる。The method for incorporating cDNA into a plasmid is, for example, the method of Samb-rook, J. et al.
(Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spri
ngHarbor Laboratory Press, 1.53-1.73, 1989). Moreover, as a method for incorporating cDNA into a phage vector, for example, the method of Hyunh, TV, etc. (DNA
cloning, A Practical Approach, IRL Press, Oxford,
1 , 49, 1985) and so on.

【００４４】上記のごとくして得られたプラスミドやフ
ァージベクターは、これを適当な宿主たとえば、エシェ
リヒアコリ(Escherichia coli)、バチルススブチリス(B
aci-llus subtilis)、サッカロミセスセレビシアエ(Sac
charomyces cerevisiae)等に導入して、これを形質転換
できる。The plasmid or phage vector obtained as described above can be used in a suitable host such as Escherichia coli or Bacillus subtilis (B
aci-llus subtilis), Saccharomyces cerevisiae (Sac
charomyces cerevisiae) and the like to transform it.

【００４５】プラスミドベクターで宿主を形質転換する
方法としては、例えば、モレキュラークローニング (Mo
lecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss,1.74-1.84, 1989)記載のエレクトロポーレーション
法あるいはカルシウムクロライド法などが挙げられる。
また、ファージベクターにはたとえば、増殖させた大腸
菌にインビトロパッケージング法を用いて導入すること
ができる。As a method for transforming a host with a plasmid vector, for example, molecular cloning (Mo
lecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss, 1.74-1.84, 1989) and the electroporation method or the calcium chloride method.
Further, the phage vector can be introduced into, for example, Escherichia coli grown by using the in vitro packaging method.

【００４６】上記により、得られるｃＤＮＡから目的の
ラットプロテアソームのコンポーネントのｃＤＮＡを選
出するには、例えば、ラベル化したプローブを用いたコ
ロニーハイブリダイゼーション法、または、プラークハ
イブリダイゼーション法 (M-olecular Cloning, Cold S
pring Harbor Laboratory Press, 1.85-1.104 or 2.112
-2.120, 1989) などが挙げられる。In order to select the cDNA of the rat proteasome component of interest from the above-obtained cDNAs, for example, a colony hybridization method using a labeled probe or a plaque hybridization method (M-olecular Cloning, Cold S
pring Harbor Laboratory Press, 1.85-1.104 or 2.112
-2.120, 1989).

【００４７】上記のハイブリダイゼーションにおけるプ
ローブとして用いるＤＮＡとしては、コンポーネントデ
ルタ、イオタ、ゼータ、およびRING12とハイブリダイズ
するＤＮＡであれば、何でもよく、例えばコンポーネン
トデルタ、イオタ、ゼータ、およびRING12のアミノ酸配
列に基づいて化学合成したオリゴヌクレオチドあるいは
プロテアソームの他のコンポーネントをコードするｃＤ
ＮＡ、ゲノムＤＮＡ、化学合成ＤＮＡ、およびこれらの
部分ＤＮＡ等が挙げられる。The DNA used as a probe in the above hybridization may be any DNA as long as it hybridizes with the component delta, iota, zeta, and RING12. For example, the amino acid sequences of component delta, iota, zeta, and RING12 Based on chemically synthesized oligonucleotides or cDs encoding other components of the proteasome
NA, genomic DNA, chemically synthesized DNA, partial DNAs thereof and the like can be mentioned.

【００４８】上記プローブとして用いるためのプロテア
ソームのアミノ酸配列の決定法は、以下のごとく行なう
ことができる。プロテアソームは田中等の方法(Tanaka,
T.,et al., J. Biol. Chem., 261, 15197-15230, 198
6; Tanaka K., et al., J. B-iol. Chem., 263, 16209-
16217) に従って、各種産生細胞から、バイオゲルー
Ａ、Ｑーセファロース、ハイドロキシアパタイト、ヘパ
リンセファロースを吸着体としたクロマトグラフィー等
の操作で単一に精製することができる。次いで、上記方
法によって精製したプロテアソームの構成コンポーネン
トは、逆相高速液体クロマトグラフィーを用いた方法や
２次元電気泳動により分離できる。The method for determining the amino acid sequence of the proteasome for use as the above probe can be performed as follows. The proteasome is derived from the method of Tanaka et al. (Tanaka,
T., et al., J. Biol. Chem., 261, 15197-15230, 198
6; Tanaka K., et al., J. B-iol. Chem., 263, 16209-
16217), it is possible to singly purify from various producing cells by an operation such as chromatography using biogel-A, Q-sepharose, hydroxyapatite, heparin sepharose as an adsorbent. Then, the constituent components of the proteasome purified by the above method can be separated by a method using reverse phase high performance liquid chromatography or two-dimensional electrophoresis.

【００４９】逆相高速クロマトグラフィーより得られた
コンポーネントは、ＡＫＥＴＡＧ−ＡＷＡ等の方法 (Ak
etagawa, J., et al., J. Biol. Chem., 261, 7357-73
65,1986) に従って、Ｓーピリジルエチル化を行ない、
リジルエンドペプトダーゼ処理後フェニルチオカルバミ
ル法によって、アミノ酸組成の解析を行ない、ペプチド
のアミノ酸配列の決定法はガスシークエンス法で測定す
ることができる。２次元電気泳動より分離されたコンポ
ーネントはポリビニリデン ジフルオロダイド（ＰＶＤ
Ｆ）等にトランスファー後、自動エドマン分解装置等を
用いてアミノ酸配列を決定することができる。The component obtained by the reversed phase high performance chromatography was prepared by the method of AKETAG-AWA and the like (Ak
etagawa, J., et al., J. Biol. Chem., 261, 7357-73
65, 1986), S-pyridylethylation is carried out,
After treatment with lysyl endopeptidase, the amino acid composition can be analyzed by the phenylthiocarbamyl method, and the amino acid sequence of the peptide can be determined by the gas sequence method. The components separated by two-dimensional electrophoresis are polyvinylidene difluorodide (PVD
After transfer to F) or the like, the amino acid sequence can be determined using an automatic Edman degradation device or the like.

【００５０】上記の解析によって得られたアミノ酸配列
の情報をもとに遺伝子の検索に必要なプローブは、得ら
れたペプチドのうち縮重頻度の低いものから２ー５個を
選択し、これに対応する相補的ポリヌクレオチドとして
合成することができる。また、これらの方法以外にもラ
ット以外のヒト、マウス、酵母等で決定されたプロテア
ソームコンポーネントの遺伝子配列を基に、適当な配列
を選択し、ＰＣＲ等でプローブを合成できる。Based on the information on the amino acid sequence obtained by the above analysis, 2-5 probes selected from the obtained peptides having a low degeneracy frequency are selected and used for the gene search. It can be synthesized as the corresponding complementary polynucleotide. In addition to these methods, a probe can be synthesized by PCR or the like by selecting an appropriate sequence based on the gene sequence of the proteasome component determined in humans other than rat, mouse, yeast and the like.

【００５１】また上記に従い得られるラットプロテアソ
ームのコンポーネントのＤＮＡの塩基配列の決定は、例
えば、マキサムーギルバート(Maxiam-Gilbert)法 (Meth
odsin Enzymology, 65, 499-560, 1980) あるいはジデ
オキシ法 (Messing, J. etal., Nucleic Acids Researc
h, 9, 309, 1981)等により、行なうことができる。以上
のようにして、ラットプロテアソームのコンポーネント
のデルタ、イオタ、ゼータ、およびRING12をコードする
ＤＮＡが得られる。The determination of the nucleotide sequence of the DNA of the rat proteasome component obtained as described above can be carried out, for example, by the Maxiam-Gilbert method (Meth
odsin Enzymology, 65, 499-560, 1980) or dideoxy method (Messing, J. et al., Nucleic Acids Researc
h, 9 , 309, 1981) and the like. As described above, DNAs encoding the rat proteasome components delta, iota, zeta, and RING12 are obtained.

【００５２】本発明のコンポーネントのデルタ、イオ
タ、ゼータ、およびRING12コンポーネントのポリペプチ
ドをコードするcＤＮＡを含むＤＮＡは、上記の方法の
他に、ヒト、ラット、マウス、酵母などのゲノムＤＮＡ
のライブラリーからのクローニングによっても得ること
ができる。また、当該コンポーネントのデルタ、イオ
タ、ゼータ、およびRING12をコードするＤＮＡは、目的
により、そのままあるいは制限酵素で切断して使用する
ことができる。In addition to the above method, DNA containing cDNA encoding the polypeptides of the components of the present invention, delta, iota, zeta, and RING12 components, can be used as genomic DNA of human, rat, mouse, yeast, etc.
It can also be obtained by cloning from a library. In addition, the DNA encoding the components delta, iota, zeta, and RING12 can be used as it is or after being cleaved with a restriction enzyme depending on the purpose.

【００５３】本発明のポリペプチドを取得する方法とし
ては、（ｉ）ラットを含む各種動物の臓器および細胞株
から単離する方法、（ｉｉ）ペプチド合成によって調製
する方法、（ｉｉｉ）遺伝子組換え技術を用いて生産す
る方法などが挙げられるが、工業的には（ｉｉｉ）が望
ましい。この遺伝子組換え技術を用いた該ポリペプチド
の製造方法としては、上記本発明遺伝子の利用を必須と
して、基本的には、公知の各種遺伝子組換え技術を使う
ことができる（Sambrook, J., et al., Molecular Cloa
ning,Cold Spring Harb-or Laboratoy Press, 1989
等）。より詳細には、本発明遺伝子が宿主細胞中で発現
できるような組換えＤＮＡを作製し、これを宿主細胞に
導入して形質転換し、該形質転換体を培養すればよい。As the method for obtaining the polypeptide of the present invention, (i) a method of isolating from organs and cell lines of various animals including rat, (ii) a method of preparing by peptide synthesis, (iii) gene recombination Examples of the method include a method of producing using a technique, but industrially, (iii) is preferable. As a method for producing the polypeptide using this gene recombination technique, the use of the gene of the present invention is essential, and various known gene recombination techniques can be basically used (Sambrook, J., et al., Molecular Cloa
ning, Cold Spring Harb-or Laboratoy Press, 1989
etc). More specifically, a recombinant DNA capable of expressing the gene of the present invention in a host cell may be prepared, introduced into a host cell for transformation, and the transformant may be cultured.

【００５４】ポリペプチドの発現に用いるベクターとし
ては、各種の宿主で機能するものであれば、いかなるも
のでもよく例えば、大腸菌では、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ
３２５、ｐＵＣ１２、ｐＵＣ１９、ｐＵＣ１１８、およ
びこれらの誘導体が、酵母では、ｐＳＨ１９、ｐＳＨ１
５、およびこれらの誘導体が、動物細胞では、レトロウ
ィルスベクター、ワクシニアウィルスベクター、ウシパ
ピローマウィルスベクター、ＳＶ４０系ベクター（例え
ば、pSV2-dhfr, pKSV-10, pTB-399)などが挙げられる。Any vector may be used as a vector for expressing the polypeptide so long as it functions in various hosts. For example, in Escherichia coli, pBR322 and pBR are used.
325, pUC12, pUC19, pUC118, and their derivatives, in yeast, pSH19, pSH1
In animal cells, 5 and these derivatives include retrovirus vectors, vaccinia virus vectors, bovine papilloma virus vectors, SV40 system vectors (for example, pSV2-dhfr, pKSV-10, pTB-399) and the like.

【００５５】プロモーターとしては、各種の宿主で機能
するものであればいかなるものでもよく、例えば、大腸
菌ではトリプトファンプロモーター、ｌａｃプロモータ
ー、ｔａｃプロモーター、λＰＬプロモーター、ｒｅｃ
Ａプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、酵母では、
ＧＬＤプロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ＧＡＬ１
プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＰＧＫプロモ
ーター、α−ファクタープロモーターなどが、動物細胞
では、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、メ
タロチオネインプロモーターなどが、それぞれ挙げられ
る。Any promoter may be used as long as it functions in various hosts. For example, in E. coli, tryptophan promoter, lac promoter, tac promoter, λPL promoter, rec are used.
A promoter, T7 promoter, etc.
GLD promoter, PHO5 promoter, GAL1
Examples include promoters, GAL10 promoters, PGK promoters, α-factor promoters, and the like, and for animal cells, SV40 promoters, LTR promoters, metallothionein promoters, and the like.

【００５６】発現の効率を高めるために、酵母では、目
的のポリペプチドをコードするＤＮＡの下流にターミネ
ーターを用いたり、動物細胞では、エンハンサー、ＲＮ
Ａスプライシングのシグナル、ポリＡ付加のシグナル、
選択マーカーなどを用いることが望ましい。発現方法と
しては、遺伝子産物を細胞内に生成、蓄積する方法や遺
伝子産物を細胞外に分泌させ、培地中に分泌させる方法
等がある。In order to increase the efficiency of expression, a terminator is used downstream of the DNA encoding the polypeptide of interest in yeast, or an enhancer or RN is used in animal cells.
A splicing signal, poly A addition signal,
It is desirable to use a selection marker or the like. Examples of the expression method include a method of producing and accumulating a gene product in a cell, a method of secreting a gene product extracellularly, and a method of secreting it into a medium.

【００５７】なお、形質転換体から、本発明のポリペプ
チドを分泌させるためには、ポリペプチドをコードする
ＤＮＡの５’末端にシグナルペプチドをコードするＤＮ
Ａを結合することができる。ここでシグナルペプチドと
しては、目的のポリペプチドを発現できるものならいか
なるものでもよく、例えば、大腸菌のエンテロトキシン
のシグナルペプチドおよびその変異体、酵母のインベル
ターゼ、フォスファターゼ、α−ファクターおよびキラ
ー因子のシグナルペプチド、多機能プロテアーゼのシグ
ナルペプチド、卵白リゾチームやインターロイキン２の
シグナルペプチドなどが使用できる。In order to secrete the polypeptide of the present invention from the transformant, DN encoding a signal peptide at the 5'end of DNA encoding the polypeptide is used.
A can be attached. Here, the signal peptide may be any as long as it can express the polypeptide of interest, for example, E. coli enterotoxin signal peptide and its variants, yeast invertase, phosphatase, α-factor and killer factor signal peptide, A signal peptide of a multifunctional protease, a signal peptide of egg white lysozyme, interleukin 2 or the like can be used.

【００５８】本発明遺伝子の発現は、上記のごとく直接
発現させる系に限らず、他の蛋白質、例えば、βーガラ
クトシダーゼ、βーラクタマーゼ、およびマルトース結
合蛋白質等と結合させた融合蛋白質として生産させた後
に、適当なプロテアーゼで切断することによって得るこ
ともできる。The expression of the gene of the present invention is not limited to the direct expression system as described above, but it may be produced as a fusion protein bound with other proteins such as β-galactosidase, β-lactamase, and maltose binding protein. Alternatively, it can be obtained by cleaving with an appropriate protease.

【００５９】発現ベクター自体を構築する方法は公知で
あり、例えば、モレキュラークローニング（Molecular
Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989
）等に記載されている。このようにして、作製したポ
リペプチド発現ベクターを用いて宿主を形質転換する。Methods for constructing the expression vector itself are known and include, for example, molecular cloning (Molecular
Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989
) Etc. A host is transformed with the polypeptide expression vector thus prepared.

【００６０】ここで該ポリペプチドを生産するための宿
主細胞としては、真核生物および原核生物のいずれをも
用いることができる。該真核生物の細胞には、動物細
胞、昆虫細胞、酵母等が含まれ、該原核生物の細胞に
は、大腸菌やバチルス属菌等の細菌が含まれる。より詳
しくは、大腸菌では、E. coli HB101, E. coli JM109,
E.coli CJ236,E.coli DH1, E. coli JA221, E. coli M
V1184, およびこれらの変異株等が、バチルス属菌で
は、B. subtilis 114, B. subtilis 1A274, B. brevis
47, B. br-evis 47-5, B. brevis HDP31, およびこれら
の変異株が、酵母では、S. cerevi-siae AH22R^- , S. c
erevisiae NA74-A ρ^- , S. cerevisiae TB39ρ^- , S.
po-mbe ATCC38399, S. pombe TH168, およびこれらの
変異株等が、動物細胞では、サル腎細胞COS-7,チャイニ
ーズハムスター細胞CHO 、マウスL 細胞などが、挙げら
れる。As a host cell for producing the polypeptide, either a eukaryote or a prokaryote can be used. The eukaryotic cells include animal cells, insect cells, yeasts and the like, and the prokaryotic cells include bacteria such as Escherichia coli and Bacillus. More specifically, in E. coli, E. coli HB101, E. coli JM109,
E.coli CJ236, E.coli DH1, E. coli JA221, E. coli M
V1184, and these mutants are Bacillus genus B. subtilis 114, B. subtilis 1A274, B. brevis.
47, B. brevis 47-5, B. brevis HDP31, and these mutants, the ^{yeast, S cerevi-siae AH22R -.} , S. c
^{erevisiae NA74-A ρ -, S.} cerevisiae TB39ρ -, S.
Examples of po-mbe ATCC38399, S. pombe TH168, and mutants thereof, and animal cells include monkey kidney cell COS-7, Chinese hamster cell CHO and mouse L cell.

【００６１】上記、宿主および、発現プラスミドを用い
て形質転換する方法は公知であり、大腸菌では、例え
ば、コンピテント法（Hanahan,D., J. Mol. Biol., 16
6, 577,1983）、酵母では例えば、Hinnen等の方法 (Pro
c. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 75, 1927, 1978) やリチ
ウム法(J. Bacteriol.,153,163,1983)、動物細胞では、
例えば、Grahamらの方法(Virology, 52, 456,1973)によ
って、それぞれ形質転換できる。Methods for transforming the above-mentioned host and expression plasmid are known, and for E. coli, for example, the competent method (Hanahan, D., J. Mol. Biol., 16
6, 577, 1983), for yeast, for example, the method of Hinnen et al.
c. Natl. Acad. Sci. USA, 75 , 1927, 1978) and the lithium method (J. Bacteriol. , 153 , 163, 1983), in animal cells,
For example, each can be transformed by the method of Graham et al. (Virology, 52, 456 , 1973).

【００６２】かくして得られる形質転換体は、常法に従
い培養でき、培養に使用される培地は液体培地が適当で
あり、その中には該形質転換体の成育に必要な炭素源、
窒素源、無機物、ビタミン類、その他が含有せしめられ
る。炭素源としては、例えば、グルコース、デキストリ
ン、ショ糖、可溶性澱粉など、窒素源としては、例え
ば、アンモニウム、塩類、硝酸塩類、アミノ酸、カゼイ
ン、ペプトン、肉エキスなど、無機物質としては、例え
ば、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、リン酸二水素
ナトリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。培地
のｐＨとしては、約５〜８が望ましい。The transformant thus obtained can be cultivated according to a conventional method, and a liquid medium is suitable as a medium used for the culturing. Among them, a carbon source necessary for the growth of the transformant,
Contains nitrogen sources, minerals, vitamins, etc. As the carbon source, for example, glucose, dextrin, sucrose, soluble starch and the like, as the nitrogen source, for example, ammonium, salts, nitrates, amino acids, casein, peptone, meat extract, etc., as the inorganic substance, for example, chloride Examples thereof include magnesium, calcium chloride, sodium dihydrogen phosphate, magnesium chloride and the like. The pH of the medium is preferably about 5-8.

【００６３】より、詳細には、該培養に用いられる培地
としては、採用した宿主細胞に応じて慣用される各種の
ものを選択できる。例えば、宿主が、大腸菌等の場合、
培地として、ＬＢ培地、Ｍ９培地、Ｅ培地、Ｍ６３培地
等を使用でき、これら培地にはさらに必要に応じて上記
添加物を加えることができる。また、宿主が、動物細胞
である場合、培地としては、イーグル最小必須培地 (Ea
gle's MEM)、ダルベッコの修正イーグル最小必須培地
（Dulbecco's modified Eagle's MEM, DME)、RPMI-164
0 培地等の培地に必要に応じて、例えば、約５〜２０％
の牛胎児血清等を添加したものを使用して培養できる。More specifically, as the medium used for the culture, various media commonly used can be selected depending on the host cell used. For example, when the host is E. coli,
As the medium, LB medium, M9 medium, E medium, M63 medium and the like can be used, and the above additives can be further added to these mediums, if necessary. When the host is an animal cell, the medium is Eagle's minimum essential medium (Ea
gle's MEM), Dulbecco's modified Eagle's MEM, DME, RPMI-164
0 As needed for the medium such as medium, for example, about 5 to 20%
It can be cultivated using the one to which fetal bovine serum or the like is added.

【００６４】上記形質転換体の培養条件としては、宿主
細胞の培養に適した条件を採用でき、温度は、例えば大
腸菌の場合は１４〜４３℃、動物細胞の場合は、３０〜
４０℃であるのが好ましい。また、培地のｐＨとして
は、それぞれ約５〜８が望ましい。また、必要に応じて
通気や攪拌操作を加えることができる。上記形質転換体
より、細胞内あるいは細胞外に本発明のポリペプチドが
蓄積あるいは生成、分泌される。培養物から該ポリペプ
チドの分離、精製は公知の分離操作を組み合わせて行な
うことができる。As the culture conditions for the above transformants, conditions suitable for culturing host cells can be adopted, and the temperature is, for example, 14 to 43 ° C. in the case of E. coli, 30 to 30 in the case of animal cells.
It is preferably 40 ° C. The pH of the medium is preferably about 5-8. Further, ventilation or stirring operation can be added as necessary. From the transformant, the polypeptide of the present invention is accumulated or produced and secreted intracellularly or extracellularly. Separation and purification of the polypeptide from the culture can be performed by combining known separation operations.

【００６５】該方法としては、具体的には、蛋白質変性
剤や界面活性剤による処理、超音波処理、リゾチームな
どによる酵素処理、凍結融解処理、塩析や溶媒沈殿法な
どの溶解度の差を利用する法、透析法、遠心分離、限外
濾過法、ゲル濾過法、ＳＤＳーポリアクリルアミドゲル
電気泳動法、イオン交換クロマトグラフィー法、アフィ
ニティクロマトグラフィー法、逆相高速液体クロマトグ
ラフィー法、等電点電気泳動法などが挙げられる。As the method, specifically, a difference in solubility such as treatment with a protein denaturant or surfactant, ultrasonic treatment, enzyme treatment with lysozyme, freeze-thaw treatment, salting out or solvent precipitation method is used. Method, dialysis method, centrifugation, ultrafiltration method, gel filtration method, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis method, ion exchange chromatography method, affinity chromatography method, reverse phase high performance liquid chromatography method, isoelectric focusing Examples include electrophoresis method.

【００６６】かくして得られる遺伝子組換えによるポリ
ペプチドは、エンザイムイムノアッセイ、ラジオイムノ
アッセイで定量することができ、前述した本発明のラッ
トプロテアソームのコンポーネントのデルタ、イオタ、
ゼータ、およびRING12と同様の各種用途に使用される。The thus obtained polypeptide by gene recombination can be quantified by an enzyme immunoassay or a radioimmunoassay, and the aforementioned components of the rat proteasome of the present invention such as delta, iota,
Used for various purposes similar to Zeta and RING12.

【００６７】なお、本明細書および図面において、塩基
やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−Ｉ
ＵＢ、による略号あるいは当該分野における慣用略号に
基づくものであり、その例を次に挙げる。また、アミノ
酸に関し光学異性体がありうる場合は、特に明示しなけ
れば、Ｌ−体を示すものとする。In this specification and the drawings, when abbreviations for bases and amino acids are used, IUPAC-I
It is based on the abbreviations by UB or abbreviations commonly used in this field, examples of which are given below. When amino acids may have optical isomers, the L-form is shown unless otherwise specified.

【００６８】 ＤＮＡ デオキシリボ核酸 Ａ アデニン Ｃ シトシン Ｇ グアニン Ｔ チミン Ａｌａ（Ａ） アラニン Ａｒｇ（Ｒ） アルギニン Ａｓｎ（Ｎ） アスパラギン Ａｓｐ（Ｄ） アスパラギン酸 Ｃｙｓ（Ｃ） システイン Ｇｌｎ（Ｑ） グルタミン Ｇｌｕ（Ｅ） グルタミン酸 Ｇｌｙ（Ｇ） グリシン Ｈｉｓ（Ｈ） ヒスチジン Ｉｌｅ（Ｉ） イソロイシン Ｌｅｕ（Ｌ） ロイシン Ｌｙｓ（Ｋ） リジン Ｍｅｔ（Ｍ） メチオニン Ｐｈｅ（Ｆ） フェニルアラニン Ｐｒｏ（Ｐ） プロリン Ｓｅｒ（Ｓ） セリン Ｔｈｒ（Ｔ） スレオニン Ｔｒｐ（Ｗ） トリプトファン Ｔｙｒ（Ｙ） チロシン Ｖａｌ（Ｖ） バリンDNA deoxyribonucleic acid A adenine C cytosine G guanine T thymine Ala (A) alanine Arg (R) arginine Asn (N) asparagine Asp (D) aspartic acid Cys (C) cysteine Gln (Q) glutamine Glu (E) glutamine Gly (G) Glycine His (H) Histidine Ile (I) Isoleucine Leu (L) Leucine Lys (K) Lysine Met (M) Methionine Phe (F) Phenylalanine Pro (P) Proline Ser (S) Serine Thr (T) Threonine Trp (W) Tryptophan Tyr (Y) Tyrosine Val (V) Valine

【００６９】[0069]

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereto.

【００７０】実施例 １ ラットプロテアソームのコンポーネントのｃＤＮＡの塩
基配列の決定 （１）ｃＤＮＡライブラリーの調製 ラットプロテアソームのｍＲＮＡの発現量が、正常ラッ
ト肝臓より１０倍以上高いＲｅｕｂｅｒＨ４ＴＧヘパト
ーマ細胞を１０％血清を添加したダルベッコ改変イーグ
ル（ＤＭＥ）培養液中で培養した。この細胞をリン酸緩
衝液で洗浄後、Chirgwinらの方法(Biochemistry, 18, 5
294-5299, 1979) によって、全ＲＮＡを調製した。即
ち、グアニジンチオシアネート緩衝液を加えてホモジナ
イズし、塩化セシウム密度勾配遠心法によって、全ＲＮ
Ａを得た。Example 1 Determination of nucleotide sequence of cDNA of rat proteasome component (1) Preparation of cDNA library Reuber H4TG hepatoma cells in which expression level of rat proteasome mRNA is 10 times higher than that of normal rat liver It culture | cultivated in the added Dulbecco's modified Eagle (DME) culture solution. After washing the cells with phosphate buffer, the method of Chirgwin et al. (Biochemistry, 18, 5
294-5299, 1979) to prepare total RNA. That is, guanidine thiocyanate buffer was added and homogenized, and the total RN was subjected to cesium chloride density gradient centrifugation.
I got A.

【００７１】この全ＲＮＡをオリゴｄＴセルロースカラ
ム（バイオ.ラッド社製）に付加し結合させた後、オリ
ゴｄＴ結合緩衝液（０.５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔ
ｒ−ｉｓーＨＣｌ ｐＨ７.５、０.１％）で洗浄した。
オリゴｄＴセルロースに結合したポリ（Ａ）+ ＲＮＡは
オリゴｄＴ溶出液（１０ｍＭ ＴｒｉｓーＨｃｌｐＨ
７.５、０.０５％ ＳＤＳ）により溶出した。溶出液に
１／１０量の３ＭＮａＣｌおよび２.５倍量のエタノー
ルを加えて、エタノール沈殿させた後、７０％エタノー
ルで洗浄し、ポリ（Ａ）+ ＲＮＡを得た。After adding this total RNA to an oligo dT cellulose column (manufactured by Bio-Rad) and binding, an oligo dT binding buffer (0.5 M NaCl, 10 mM T)
It was washed with r-is-HCl pH 7.5, 0.1%).
Poly (A) + RNA bound to oligo dT cellulose was eluted with oligo dT (10 mM Tris-HclpH).
7.5, 0.05% SDS). To the eluate, 1/10 amount of 3M NaCl and 2.5 times amount of ethanol were added to cause ethanol precipitation, followed by washing with 70% ethanol to obtain poly (A) + RNA.

【００７２】上記の方法によって得られたポリ（Ａ）+
ＲＮＡからグブラーとホフマンの方法(Gubler, U. and
Hoffman, B., Gene, 25, 263-268, 1983) に従って、ｃ
ＤＮＡを合成した。即ち、５’末端に制限酵素ＮｏｔＩ
切断部位を持つオリゴｄＴプライマー(5'-TAGGTCGACGCG
GCCGCTTTTTTTTTTTTTTT) を上記ｍＲＮＡのポリＡにアニ
ールさせ、ニワトリ骨髄芽球症ウイルス由来の逆転写酵
素（ライフサイエンス社製）により、１本鎖ＤＮＡを合
成し、ＤＮＡポリメラーゼＩにより、２本鎖ｃＤＮＡを
合成した。Poly (A) + obtained by the above method
Gubler and Hoffman's method from RNA (Gubler, U. and
Hoffman, B., Gene, 25, 263-268, 1983), c
DNA was synthesized. That is, the restriction enzyme NotI is added to the 5'end.
Oligo dT primer with cleavage site (5'-TAGGTCGACGCG
GCCGCTTTTTTTTTTTTTTT) is annealed to poly A of the above mRNA, single-stranded DNA is synthesized by reverse transcriptase (Life Science) derived from chicken myeloblastosis virus, and double-stranded cDNA is synthesized by DNA polymerase I. did.

【００７3 】このｃＤＮＡの両端を平滑化するため、ク
レノー酵素（ＤＮＡポリメラーゼのラージフラグメン
ト、ベーリンガー社製）処理を行なった後さらに、制限
酵素Ｎｏｔ１で切断した。これにより、５’末端が平滑
末端で３’末端にＮｏｔＩ制限酵素切断部位をもつｃＤ
ＮＡを得ることができた。得られたｃＤＮＡは発現ベク
ターブルースクリプト II KS+（ストラタジーン社）の
マルチクローニング部位のＮｏｔＩとＥｃｏＲＶ間にＴ
４ＤＮＡリガーゼ（ベーリンガー社製）を用いて挿入し
た。In order to make both ends of this cDNA blunt, it was treated with Klenow enzyme (large fragment of DNA polymerase, manufactured by Boehringer) and further cut with restriction enzyme Not1. As a result, a cD having a blunt end at the 5'end and a NotI restriction enzyme cleavage site at the 3'end
I was able to get NA. The obtained cDNA was T between NotI and EcoRV at the multiple cloning site of the expression vector Bluescript II KS + (Stratagene).
4DNA ligase (Boehringer) was used for insertion.

【００７３】（２）クローンの単離および塩基配列の決
定 上記のｃＤＮＡが組み込まれたブルースクリプトベクタ
ーをコンピテントセルHB101（宝酒造）と混合し、Messi
ng 等の方法 (Gene, 33, 103, 1985)に従い形質転換し
た。次いで、アンピシリン５０μｇ／ｍｌを含むＬＢプ
レート上にナイロンフィルター（第一化学薬品製、Colo
ny/plaque Screenハイブリダイゼーショントランスファ
ーメンブラン）をのせ、その上に形質転換したコンピテ
ントセルを１プレート当たり、約３，０００コロニー、
計約４０プレート（約１２０，０００コロニー）まい
た。３７℃でインキュベートし、コロニーが大きくなり
次第、フィルターをはがし、もう１枚の新しいフィルタ
ーと重ねることにより、コロニー配置の同一なレプリカ
フィルターを作製した。オリジナルフィルターおよびレ
プリカフィルターはそれぞれアンピシリン５０μｇ／ｍ
ｌを含むＬＢプレート上でコロニーが再び現れるまでイ
ンキュベートした。(2) Isolation of Clone and Determination of Nucleotide Sequence The Bluescript vector in which the above-mentioned cDNA was incorporated was mixed with competent cell HB101 (Takara Shuzo) and Messi
ng and other methods (Gene, 33, 103, 1985) were used for the transformation. Then, a nylon filter (Daiichi Pure Chemicals, Colo) was placed on an LB plate containing 50 μg / ml of ampicillin.
ny / plaque Screen Hybridization Transfer Membrane), and transformed competent cells onto it for about 3,000 colonies per plate.
A total of about 40 plates (about 120,000 colonies) were plated. A replica filter with the same colony arrangement was prepared by incubating at 37 ° C., removing the filter as soon as the colony became large, and overlaying it with another fresh filter. The original filter and replica filter are each 50 μg / m ampicillin
Incubated on LB plates containing 1 until colonies reappear.

【００７４】こうして得られたオリジナルプレートは、
クローンを選択し、調製するためのマスタープレートと
して保存し、レプリカフィルターは、水酸化ナトリウム
で固定後、ハイブリダイゼーションを行なった。プロー
ブはヒトプロテアソームのコンポーネントのデルタ、イ
オタ、ゼータ (Biochim. Biophys. Acta 1079, 29-38,1
991)、および RING12 (Nature, 353, 357-360, 1991)よ
り、約３００ｂｐのｃＤＮＡをＰＣＲ法で合成し、得ら
れた相補的オリゴヌクレオチドをランダムプライマー法
を用い、³²ＰーｄＣＴＰで標識化して使用した。但し、
ヒトプロテアソームのコンポーネントのデルタ、イオタ
については、Ｎ末端部分約２５アミノ酸残基が未知シー
クエンスであった。The original plate thus obtained is
Clones were selected and stored as a master plate for preparation, and the replica filter was fixed with sodium hydroxide and then hybridized. The probes are human proteasome components Delta, Iota, and Zeta (Biochim. Biophys. Acta 1079, 29-38, 1
991) and RING12 (Nature, 353, 357-360, 1991), a cDNA of about 300 bp was synthesized by the PCR method, and the obtained complementary oligonucleotide was labeled with ³² P-dCTP using the random primer method. Used. However,
Regarding the human proteasome component delta and iota, about 25 amino acid residues at the N-terminal portion had an unknown sequence.

【００７５】最終的に、コンポーネントのデルタ、イオ
タ、ゼータ、およびRING12にハイブリするｃＤＮＡとし
てそれぞれ約120,000のトランスフォーマントから、各
コンポーネントについて、それぞれ、１ー３個のクロー
ンを得た。Finally, 1 to 3 clones were obtained for each component from about 120,000 transformants each of which hybridized to the components delta, iota, zeta, and RING12.

【００７６】これらのクローンを常法により培養し、増
殖させて、前記各コンポーネントの各ポリぺプチドを生
産させ、これを常法により精製して、目的の各ポリぺプ
チドの精製物を、それぞれ、得た。ｃＤＮＡの塩基配列
の決定は、７ーＤＥＡＺＡシークエンシングキット（宝
酒造社製）を用い、サンガー (Sanger) 等のジデオキシ
ターミネイション法 (Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.
A., 74, 5463-5467, 1977)に基づいて行なった。These clones were cultivated and propagated by a conventional method to produce each polypeptide of each of the above components, which was purified by a conventional method to obtain the desired purified product of each polypeptide, respectively. ,Obtained. The nucleotide sequence of the cDNA was determined by using the dideoxy termination method (Proc. Natl. Acad. Sci., US, such as Sanger) using a 7-DEAZA sequencing kit (Takara Shuzo).
A., 74 , 5463-5467, 1977).

【００７７】（３）ラットプロテアソームコンポーネン
トデルタ 上記（１）、（２）のごとくして得られたラットプロテ
アソームコンポーネントデルタのｃＤＮＡの塩基配列お
よびアミノ酸配列の結果を第１図に示す。ｃＤＮＡの全
長は、６５５ヌクレオチドで、そのうちコード領域は、
６０６ヌクレオチドであり、アミノ酸残基数２０２個に
相当した。当該コンポーネントデルタの分子量は、21,6
49ダルトン、等電点は、４.８４であった。(3) Rat Proteasome Component Delta The results of the nucleotide sequence and amino acid sequence of the rat proteasome component delta cDNA obtained as described in (1) and (2) above are shown in FIG. The total length of the cDNA is 655 nucleotides, of which the coding region is
It was 606 nucleotides and corresponded to 202 amino acid residues. The molecular weight of the component delta is 21,6
49 Dalton, isoelectric point was 4.84.

【００７８】（４）ラットプロテアソームコンポーネン
トイオタ 上記（１）、（２）のごとくして得られたラットプロテ
アソームコンポーネントイオタのｃＤＮＡの塩基配列お
よびアミノ酸配列の結果を第２図に示す。ｃＤＮＡの全
長は、８８２ヌクレオチドで、そのうちコード領域は、
７３８ヌクレオチドであり、アミノ酸残基数２４６個に
相当した。当該コンポーネントイオタの分子量は、 27,
399ダルトン、等電点は、６.３７であった。(4) Rat Proteasome Component Iota The results of the cDNA nucleotide sequence and amino acid sequence of rat proteasome component iota obtained as described in (1) and (2) above are shown in FIG. The total length of the cDNA is 882 nucleotides, of which the coding region is
It was 738 nucleotides and corresponded to 246 amino acid residues. The molecular weight of the component iota is 27,
The 399 Dalton, isoelectric point was 6.37.

【００７９】（５）ラットプロテアソームコンポーネン
トゼータ 上記（１）、（２）のごとくして得られたラットプロテ
アソームコンポーネントゼータのｃＤＮＡの塩基配列お
よびアミノ酸配列の結果を第３図に示す。ｃＤＮＡの全
長は、８８６ヌクレオチドで、そのうちコード領域は、
７２３ヌクレオチドであり、アミノ酸残基数２４１個に
相当した。当該コンポーネントゼータの分子量は、26,3
91ダルトン、等電点は、４.６５であった。(5) Rat Proteasome Component Zeta The results of the cDNA nucleotide sequence and amino acid sequence of rat proteasome component zeta obtained as described in (1) and (2) above are shown in FIG. The total length of the cDNA is 886 nucleotides, of which the coding region is
It was 723 nucleotides and corresponded to 241 amino acid residues. The molecular weight of the component zeta is 26,3.
91 Dalton, isoelectric point was 4.65.

【００８０】（６）ラットプロテアソームコンポーネン
トRING12 上記（１）、（２）のごとくして得られたラットプロテ
アソームコンポーネントRING12のｃＤＮＡの塩基配列お
よびアミノ酸配列の結果を第４図に示す。ｃＤＮＡの全
長は、８６２ヌクレオチドで、そのうちコード領域は、
６５７ヌクレオチドであり、アミノ酸残基数２１９個に
相当した。当該コンポーネントRING12の分子量は、23,3
24ダルトン、等電点は、４.７０であった。(6) Rat Proteasome Component RING12 The results of the nucleotide sequence and amino acid sequence of the rat proteasome component RING12 cDNA obtained as described in (1) and (2) above are shown in FIG. The total length of the cDNA is 862 nucleotides, of which the coding region is
It was 657 nucleotides and corresponded to 219 amino acid residues. The molecular weight of the component RING12 is 23,3.
The 24 Dalton, isoelectric point was 4.70.

【００８１】実施例２ 動物細胞用の発現ベクターの構築 実施例１で得られたＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩベクター
に挿入されているコンポーネントデルタのｃＤＮＡには
Ｎ末端をコードする領域にＨａｅＩＩ部位が、終止コド
ン付近には、ＡｖｒＩＩ部位が存在する。そこで、この
ベクターより、ＨａｅＩＩーＡｖｒＩＩ断片（約０.７
５ｋｂ）を単離し、得られたＤＮＡの両末端をＴ４ＤＮ
Ａポリメラーゼを用いて、平滑化した。これに、Ｔ４リ
ガーゼを用いて、ＰｓｔＩリンカーを連結し、次いで、
制限酵素ＰｓｔＩで切断することにより、両末端にＰｓ
ｔＩ切断部位を有するコンポーネントデルタ断片を得
た。Example 2 Construction of Expression Vector for Animal Cells In the cDNA of the component delta inserted into the Bluescript II vector obtained in Example 1, a HaeII site was present in the N-terminal coding region, and near the stop codon. , AvrII site is present. Therefore, from this vector, the HaeII-AvrII fragment (about 0.7
5 kb) was isolated, and both ends of the obtained DNA were T4DN
Smoothed using A polymerase. This was ligated with a PstI linker using T4 ligase, then
By cutting with the restriction enzyme PstI, Ps
A component delta fragment with a tI cleavage site was obtained.

【００８２】一方、プラスミド pcDL-SRα296(Takebe,
Y. et al., Mol. Cell. Biol., 8,466-472, 1988 ）を
ＰｓｔＩで切断し、得られた断片に、上記で得た両末端
にＰｓｔＩ切断部位を有するコンポーネントデルタ断片
をＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結して、目的とする動
物細胞用発現ベクターを構築した（第５図）。On the other hand, the plasmid pcDL-SRα296 (Takebe,
Y. et al., Mol. Cell. Biol., 8 , 466-472, 1988) was digested with PstI, and the resulting fragment was replaced with a component delta fragment having PstI cleavage sites at both ends as described above in T4 DNA. The desired expression vector for animal cells was constructed by ligation using ligase (Fig. 5).

【００８３】上記、発現ベクターをＣＯＳ細胞へ、高効
率リン酸カルシウム法（Chen, C.and Okayama, H., Bio
tech., 6, 632-638,1988) により導入し、１０％牛胎児
血清を含むＤＭＥＭ培地で３日間培養した。培養後の培
養液を遠心分離して、培養上清を得、抗ラットコンポー
ネントデルタ抗体による、ＥＬＩＳＡ法やウェスタンブ
ロッティング法により、ラットコンポーネントデルタの
発現を確認した。The above expression vector was introduced into COS cells by the highly efficient calcium phosphate method (Chen, C. and Okayama, H., Bio
tech., 6 , 632-638, 1988) and cultured in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum for 3 days. The culture solution after the culture was centrifuged to obtain a culture supernatant, and the expression of rat component delta was confirmed by an ELISA method or a Western blotting method using an anti-rat component delta antibody.

【００８４】同様にして、ラットコンポーネントイオ
タ、ラットコンポーネントゼータ、およびラットコンポ
ーネントRING12の発現を、それぞれ、確認した。Similarly, the expressions of rat component iota, rat component zeta, and rat component RING12 were confirmed.

【００８５】[0085]

【発明の効果】本発明者らの研究によれば、プロテアソ
ームの遺伝子は、肝癌細胞、、腎癌細胞、白血病細胞な
どの悪性腫瘍細胞において正常細胞に比較して異常に高
く発現し、さらに、これらの腫瘍細胞の核に多機能プロ
テアーゼが、異常蓄積することが観察されており、本発
明の多機能プロテアーゼのコンポーネントを抗原とする
抗体を用いることにより、これらの各種腫瘍を、通常の
免疫測定法により測定し、前記各種病態を診断すること
が可能である。EFFECTS OF THE INVENTION According to the studies by the present inventors, the gene of proteasome is expressed in an abnormally high level in malignant tumor cells such as liver cancer cells, kidney cancer cells and leukemia cells as compared with normal cells. Abnormal accumulation of multifunctional proteases in the nuclei of these tumor cells has been observed, and by using an antibody whose antigen is a component of the multifunctional protease of the present invention, these various tumors can be subjected to normal immunoassay. It is possible to measure by the method and diagnose the various pathological conditions.

【００８６】また、多機能プロテアーゼが、前記悪性腫
瘍をはじめ、アルツハイマー病等の各種病態と深く関与
している重要な因子であるとされていることから、本発
明のラットプロテアソームのコンポーネントは、そのよ
うな各種病態の発現メカニズムの解明と、その有効な治
療法を確立する上できわめて有用なものであり、さら
に、免疫系の抗原提示のメカニズムの解明、および免疫
制御剤を開発する上できわめて有用なものである。Further, since the multifunctional protease is said to be an important factor deeply involved in various pathological conditions such as Alzheimer's disease including the above-mentioned malignant tumor, the component of rat proteasome of the present invention is It is extremely useful in elucidating the mechanism of expression of various pathological conditions such as these and establishing effective therapeutic methods. Furthermore, it is extremely useful in elucidating the mechanism of antigen presentation of the immune system and developing immunoregulators. It is useful.

【００８７】さらに、本発明の各プロテアソームをコー
ドする遺伝子を使用することにより、前記プロテアソー
ムを遺伝子組換え技術により、簡便に、かつ、大量に生
産することが可能である。Furthermore, by using the gene encoding each proteasome of the present invention, the proteasome can be easily produced in a large amount by a gene recombination technique.

【００８８】[0088]

【配列表】[Sequence list]

配列番号：１ 配列の長さ：２０２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Ala Val Gln Phe Asp Gly Gly Val Val Leu Gly Ala Asp Ser Arg 5 10 15 Thr Thr Thr Gly Ser Tyr Ile Ala Asn Arg Val Thr Asp Lys Leu Thr 20 25 30 Pro Ile His Asp His Ile Phe Cys Cys Arg Ser Gly Ser Ala Ala Asp 35 40 45 Thr Gln Ala Val Ala Asp Ala Val Thr Tyr Gln Leu Gly Phe His Ser 50 55 60 Ile Glu Leu Asn Glu Pro Pro Leu Val His Thr Ala Ala Ser Leu Phe 65 70 75 80 Lys Glu Met Cys Tyr Arg Tyr Arg Glu Asp Leu Met Ala Gly Ile Ile 85 90 95 Ile Ala Gly Trp Asp Pro Gln Glu Gly Gly Gln Val Tyr Ser Val Pro 100 105 110 Met Gly Gly Met Met Val Arg Gln Ser Phe Ala Ile Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Ile Tyr Gly Tyr Val Asp Ala Thr Tyr Arg Glu Gly Met 130 135 140 Thr Lys Asp Glu Cys Leu Gln Phe Thr Ala Asn Ala Leu Ala Leu Ala 145 150 155 160 Met Glu Arg Asp Gly Ser Ser Gly Gly Val Ile Arg Leu Ala Ala Ile 165 170 175 Gln Gln Ser Gly Val Glu Arg Gln Val Leu Leu Gly Asp Gln Ile Pro 180 185 190 Lys Val Thr Ile Ser Thr Leu Pro Pro Pro 195 200  SEQ ID NO: 1 Sequence length: 202 Sequence type: Amino acid Topology: Linear Sequence type: Peptide Sequence Met Ala Val Gln Phe Asp Gly Gly Val Val Leu Gly Ala Asp Ser Arg 5 10 15 Thr Thr Thr Gly Ser Tyr Ile Ala Asn Arg Val Thr Asp Lys Leu Thr 20 25 30 Pro Ile His Asp His Ile Phe Cys Cys Arg Ser Gly Ser Ala Ala Asp 35 40 45 Thr Gln Ala Val Ala Asp Ala Val Thr Tyr Gln Leu Gly Phe His Ser 50 55 60 Ile Glu Leu Asn Glu Pro Pro Leu Val His Thr Ala Ala Ser Leu Phe 65 70 75 80 Lys Glu Met Cys Tyr Arg Tyr Arg Glu Asp Leu Met Ala Gly Ile Ile 85 90 95 Ile Ala Gly Trp Asp Pro Gln Glu Gly Gly Gln Val Tyr Ser Val Pro 100 105 110 Met Gly Gly Met Met Val Arg Gln Ser Phe Ala Ile Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Ile Tyr Gly Tyr Val Asp Ala Thr Tyr Arg Glu Gly Met 130 135 140 Thr Lys Asp Glu Cys Leu Gln Phe Thr Ala Asn Ala Leu Ala Leu Ala 145 150 155 160 Met Glu Arg Asp Gly Ser Ser Gly Gly Val Ile Arg Leu Ala Ala Ile 165 170 175 Gln Gln Ser Gly Val Glu Arg Gln Val Leu Leu Gly Asp Gln Ile Pro 180 185 190 Lys Val Thr Ile Ser Thr Leu Pro Pro Pro 195 200

【００８９】配列番号：２ 配列の長さ：６０６ 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ATG GCT GTG CAA TTT GAC GGG GGC GTG GTT CTA GGA GCA GAC TCC AGA 48 ACA ACC ACT GGG TCG TAC ATC GCC AAT CGA GTG ACT GAC AAG CTG ACC 96 CCT ATC CAC GAT CAC ATC TTC TGC TGC CGC TCA GGC TCG GCA GCT GAT 144 ACC CAA GCA GTA GCT GAT GCT GTC ACG TAC CAG CTT GGT TTC CAC AGT 192 ATT GAG CTG AAC GAG CCT CCA CTA GTG CAC ACA GCC GCC AGT CTC TTT 240 AAG GAG ATG TGT TAC CGC TAC AGA GAA GAT CTG ATG GCA GGA ATC ATC 288 ATC GCA GGC TGG GAC CCT CAA GAA GGA GGG CAG GTG TAC TCT GTT CCC 336 ATG GGA GGT ATG ATG GTA AGA CAG TCC TTT GCC ATC GGA GGC TCC GGG 384 AGC TCA TAT ATC TAT GGC TAT GTT GAT GCT ACC TAT CGG GAA GGC ATG 432 ACC AAG GAT GAA TGT CTG CAA TTC ACT GCC AAT GCT CTT GCT TTG GCT 480 ATG GAA CGG GAT GGC TCC AGT GGA GGA GTG ATC CGC TTG GCA GCC ATT 528 CAA CAG TCG GGG GTA GAG CGG CAG GTG CTT TTG GGA GAC CAG ATC CCC 576 AAG GTC ACC ATC TCC ACT TTG CCA CCT CCC 606 SEQ ID NO: 2 Sequence length: 606 Sequence type: Nucleic acid Topology: Linear Sequence type: cDNA to mRNA Sequence ATG GCT GTG CAA TTT GAC GGG GGC GTG GTT CTA GGA GCA GAC TCC AGA 48 ACA ACC ACT GGG TCG TAC ATC GCC AAT CGA GTG ACT GAC AAG CTG ACC 96 CCT ATC CAC GAT CAC ATC TTC TGC TGC CGC TCA GGC TCG GCA GCT GAT 144 ACC CAA GCA GTA GCT GAT GCT GTC ACG TAC CAG CTT GGT TTC CAC AGT 192 ATT GAG CTG AAC GAG CCT CCA CTA GTG CAC ACA GCC GCC AGT CTC TTT 240 AAG GAG ATG TGT TAC CGC TAC AGA GAA GAT CTG ATG GCA GGA ATC ATC 288 ATC GCA GGC TGG GAC CCT CAA GAA GGA GGG CAG GTG TAC TCT GTT CCC ATG GGA GGT ATG ATG GTA AGA CAG TCC TTT GCC ATC GGA GGC TCC GGG 384 AGC TCA TAT ATC TAT GGC TAT GTT GAT GCT ACC TAT CGG GAA GGC ATG 432 ACC AAG GAT GAA TGT CTG CAA TTC ACT GCC AAT GCT CCT GCT TCT 480 ATG GAA CGG GAT GGC TCC AGT GGA GGA GTG ATC CGC TTG GCA GCC ATT 528 CAA CAG TCG GGG GTA GAG CGG CAG GTG CTT TTG GGA GAC CAG ATC CCC 576 AAG GTC ACC ATC TCC ACT TTG CCA CCT CCC 606

【００９０】配列番号：３ 配列の長さ：２４６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Ser Arg Gly Ser Ser Ala Gly Phe Asp Arg His Ile Thr Ile Phe 5 10 15 Ser Pro Glu Gly Arg Leu Tyr Gln Val Glu Tyr Ala Phe Lys Ala Ile 20 25 30 Asn Gln Gly Gly Leu Thr Ser Val Ala Val Arg Gly Lys Asp Cys Ala 35 40 45 Val Ile Val Thr Gln Lys Lys Val Pro Asp Lys Leu Leu Asp Ser Ser 50 55 60 Thr Val Thr His Leu Phe Lys Ile Thr Glu Asn Ile Gly Cys Val Met 65 70 75 80 Thr Gly Met Thr Ala Asp Ser Arg Ser Gln Val Gln Arg Ala Arg Tyr 85 90 95 Glu Ala Ala Asn Trp Lys Tyr Lys Tyr Gly Tyr Glu Ile Pro Val Asp 100 105 110 Met Leu Cys Lys Arg Ile Ala Asp Ile Ser Gln Val Tyr Thr Gln Asn 115 120 125 Ala Glu Met Arg Pro Leu Gly Cys Cys Met Ile Leu Ile Gly Ile Asp 130 135 140 Glu Glu Gln Gly Pro Gln Val Tyr Lys Cys Asp Pro Ala Gly Tyr Tyr 145 150 155 160 Cys Gly Phe Lys Ala Thr Ala Ala Gly Val Lys Gln Thr Glu Ser Thr 165 170 175 Ser Phe Leu Glu Lys Lys Val Lys Lys Lys Phe Asp Trp Thr Phe Glu 180 185 190 Gln Thr Val Glu Thr Ala Ile Thr Cys Leu Ser Thr Val Leu Ser Ile 195 200 205 Asp Phe Lys Pro Ser Glu Ile Glu Val Gly Val Val Thr Val Glu Asn 210 215 220 Pro Lys Phe Arg Ile Leu Thr Glu Ala Glu Ile Asp Ala His Leu Val 225 230 235 240 Ala Leu Ala Glu Arg Asp 245 SEQ ID NO: 3 Sequence length: 246 Sequence type: Amino acid Topology: Linear Sequence type: Peptide Sequence Met Ser Arg Gly Ser Ser Ala Gly Phe Asp Arg His Ile Thr Ile Phe 5 10 15 Ser Pro Glu Gly Arg Leu Tyr Gln Val Glu Tyr Ala Phe Lys Ala Ile 20 25 30 Asn Gln Gly Gly Leu Thr Ser Val Ala Val Arg Gly Lys Asp Cys Ala 35 40 45 Val Ile Val Thr Gln Lys Lys Val Pro Asp Lys Leu Leu Asp Ser Ser 50 55 60 Thr Val Thr His Leu Phe Lys Ile Thr Glu Asn Ile Gly Cys Val Met 65 70 75 80 Thr Gly Met Thr Ala Asp Ser Arg Ser Gln Val Gln Arg Ala Arg Tyr 85 90 95 Glu Ala Ala Asn Trp Lys Tyr Lys Tyr Gly Tyr Glu Ile Pro Val Asp 100 105 110 Met Leu Cys Lys Arg Ile Ala Asp Ile Ser Gln Val Tyr Thr Gln Asn 115 120 125 Ala Glu Met Arg Pro Leu Gly Cys Cys Met Ile Leu Ile Gly Ile Asp 130 135 140 Glu Glu Gln Gly Pro Gln Val Tyr Lys Cys Asp Pro Ala Gly Tyr Tyr 145 150 155 160 Cys Gly Phe Lys Ala Thr Ala Ala Gly Val Lys Gln Thr Glu Ser Thr 165 170 175 Ser Phe Leu Glu L ys Lys Val Lys Lys Lys Phe Asp Trp Thr Phe Glu 180 185 190 Gln Thr Val Glu Thr Ala Ile Thr Cys Leu Ser Thr Val Leu Ser Ile 195 200 205 Asp Phe Lys Pro Ser Glu Ile Glu Val Gly Val Val Thr Val Glu Asn 210 215 220 Pro Lys Phe Arg Ile Leu Thr Glu Ala Glu Ile Asp Ala His Leu Val 225 230 235 240 Ala Leu Ala Glu Arg Asp 245

【００９１】配列番号：４ 配列の長さ：７３８ 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ATG TCC CGT GGT TCC AGC GCC GGT TTT GAC CGG CAC ATT ACT ATT TTC 48 TCT CCC GAG GGC CGA CTC TAC CAA GTA GAA TAT GCT TTT AAG GCT ATT 96 AAC CAG GGT GGA CTT ACA TCT GTA GCT GTC AGA GGA AAG GAC TGC GCA 144 GTT ATT GTC ACA CAG AAG AAA GTA CCT GAC AAA CTA CTG GAT TCC AGC 192 ACC GTG ACT CAC TTA TTC AAG ATA ACG GAA AAC ATT GGC TGT GTG ATG 240 ACA GGA ATG ACA GCT GAC AGC AGA TCC CAG GTA CAG AGG GCA CGC TAT 288 GAA GCA GCT AAC TGG AAA TAC AAA TAT GGC TAT GAG ATT CCT GTG GAC 336 ATG CTG TGT AAA AGA ATT GCT GAT ATT TCT CAA GTC TAC ACA CAG AAT 384 GCT GAA ATG AGG CCA CTT GGT TGT TGT ATG ATT TTA ATT GGT ATA GAT 432 GAA GAG CAA GGC CCT CAA GTG TAC AAG TGT GAT CCT GCA GGC TAC TAC 480 TGT GGC TTT AAA GCC ACC GCA GCA GGA GTG AAG CAG ACA GAG TCA ACC 528 AGC TTC CTC GAA AAA AAA GTG AAG AAG AAA TTT GAT TGG ACA TTT GAA 576 CAG ACA GTG GAA ACT GCA ATC ACA TGC CTG TCT ACT GTT CTG TCG ATT 624 GAT TTC AAA CCT TCA GAA ATC GAA GTT GGA GTA GTT ACA GTT GAA AAT 672 CCT AAA TTC AGG ATT CTT ACA GAA GCA GAG ATT GAC GCT CAC CTT GTG 720 GCT CTA GCA GAG AGA GAC 738 SEQ ID NO: 4 Sequence length: 738 Sequence type: Nucleic acid Topology: Linear Sequence type: cDNA to mRNA Sequence ATG TCC CGT GGT TCC AGC GCC GGT TTT GAC CGG CAC ATT ACT ATT TTC 48 TCT CCC GAG GGC CGA CTC TAC CAA GTA GAA TAT GCT TTT AAG GCT ATT 96 AAC CAG GGT GGA CTT ACA TCT GTA GCT GTC AGA GGA AAG GAC TGC GCA 144 GTT ATT GTC ACA CAG AAG AAA GTA CCT GAC AAA CTA CTG GAT TCC AGC 192 ACC GTG ACT CAC TTA TTC AAG ATA ACG GAA AAC ATT GGC TGT GTG ATG 240 ACA GGA ATG ACA GCT GAC AGC AGA TCC CAG GTA CAG AGG GCA CGC TAT 288 GAA GCA GCT AAC TGG AAA TAC AAA TAT GGC TAT GAG ATT CCT GTG GAC 336 ATG CTG TGT AAA AGA ATT GCT GAT ATT TCT CAA GTC TAC ACA CAG AAT 384 GCT GAA ATG AGG CCA CTT GGT TGT TGT ATG ATT TTA ATT GGT ATA GAT 432 GAA GAG CAA GGC CCT CAA GTG TAC AAG TGT GAT CCT GCA GGC TAC 480 TGT GGC TTT AAA GCC ACC GCA GCA GGA GTG AAG CAG ACA GAG TCA ACC 528 AGC TTC CTC GAA AAA AAA GTG AAG AAG AAA TTT GAT TGG ACA TTT GAA 576 CAG ACA GTG G AA ACT GCA ATC ACA TGC CTG TCT ACT GTT CTG TCG ATT 624 GAT TTC AAA CCT TCA GAA ATC GAA GTT GGA GTA GTT ACA GTT GAA AAT 672 CCT AAA TTC AGG ATT CTT ACA GAA GCA GAG ATT GAC GCT CAC CTT GTG 720 GCT CTA GCA GAG AGA GAC 738

【００９２】配列番号：５ 配列の長さ：２４１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Phe Leu Thr Arg Ser Glu Tyr Asp Arg Gly Val Asn Thr Phe Ser 5 10 15 Pro Glu Gly Arg Leu Phe Gln Val Glu Tyr Ala Ile Glu Gly His Lys 20 25 30 Leu Gly Ser Thr Ala Ile Gly Ile Gln Thr Ser Glu Gly Val Cys Leu 35 40 45 Ala Val Glu Lys Arg Ile Thr Ser Pro Leu Met Glu Pro Ser Ser Ile 50 55 60 Glu Lys Ile Val Glu Ile Asp Ala His Ile Gly Cys Ala Met Ser Gly 65 70 75 80 Leu Ile Ala Asp Ala Lys Thr Leu Ile Asp Lys Ala Arg Val Glu Thr 85 90 95 Gln Asn His Trp Phe Thr Tyr Asn Glu Thr Met Thr Val Glu Ser val 100 105 110 Thr Gln Ala Val Ser Asn Leu Ala Leu Gln Phe Gly Glu Glu Asp Ala 115 120 125 Asp Pro Gly Ala Met Ser Arg Pro Phe Gly Val Ala Leu Leu Phe Gly 130 135 140 Gly Val Asp Glu Lys Gly Pro Gln Leu Phe His Met Asp Pro Ser Gly 145 150 155 160 Thr Phe Val Gln Cys Asp Ala Arg Ala Ile Gly Ser Ala Ser Glu Gly 165 170 175 Ala Gln Ser Ser Leu Gln Glu Val Tyr His Lys Ser Thr Thr Leu Lys 180 185 190 Glu Ala Ile Lys Ser Ser Leu Ile Ile Leu Lys Gln Val Met Glu Glu 195 200 205 Lys Leu Asn Ala Thr Asn Ile Glu Leu Ala Thr Val Gln Pro Gly Gln 210 215 220 Asn Phe His Met Phe Thr Lys Glu Glu Leu Glu Glu Val Ile Lys Asp 225 230 235 240 Ile SEQ ID NO: 5 Sequence length: 241 Sequence type: Amino acid Topology: Linear Sequence type: Peptide sequence Met Phe Leu Thr Arg Ser Glu Tyr Asp Arg Gly Val Asn Thr Phe Ser 5 10 15 Pro Glu Gly Arg Leu Phe Gln Val Glu Tyr Ala Ile Glu Gly His Lys 20 25 30 Leu Gly Ser Thr Ala Ile Gly Ile Gln Thr Ser Glu Gly Val Cys Leu 35 40 45 Ala Val Glu Lys Arg Ile Thr Ser Pro Leu Met Glu Pro Ser Ser Ile 50 55 60 Glu Lys Ile Val Glu Ile Asp Ala His Ile Gly Cys Ala Met Ser Gly 65 70 75 80 Leu Ile Ala Asp Ala Lys Thr Leu Ile Asp Lys Ala Arg Val Glu Thr 85 90 95 Gln Asn His Trp Phe Thr Tyr Asn Glu Thr Met Thr Val Glu Ser val 100 105 110 Thr Gln Ala Val Ser Asn Leu Ala Leu Gln Phe Gly Glu Glu Asp Ala 115 120 125 Asp Pro Gly Ala Met Ser Arg Pro Phe Gly Val Ala Leu Leu Phe Gly 130 135 140 Gly Val Asp Glu Lys Gly Pro Gln Leu Phe His Met Asp Pro Ser Gly 145 150 155 160 Thr Phe Val Gln Cys Asp Ala Arg Ala Ile Gly Ser Ala Ser Glu Gly 165 170 175 Ala Gln Ser Ser L eu Gln Glu Val Tyr His Lys Ser Thr Thr Leu Lys 180 185 190 Glu Ala Ile Lys Ser Ser Leu Ile Ile Leu Lys Gln Val Met Glu Glu 195 200 205 Lys Leu Asn Ala Thr Asn Ile Glu Leu Ala Thr Val Gln Pro Gly Gln 210 215 220 Asn Phe His Met Phe Thr Lys Glu Glu Leu Glu Glu Val Ile Lys Asp 225 230 235 240 Ile

【００９３】配列番号：６ 配列の長さ：７２３ 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ATG TTC CTC ACT CGG TCC GAG TAC GAC AGG GGT GTG AAC ACT TTT TCT 48 CCT GAA GGA AGA TTA TTT CAA GTG GAA TAT GCC ATT GAG GGC CAT AAG 96 CTT GGT TCT ACG GCC ATT GGC ATC CAG ACA TCA GAG GGT GTA TGT CTA 144 GCT GTG GAG AAG AGA ATT ACC TCG CCA CTA ATG GAG CCT AGC AGC ATT 192 GAG AAA ATC GTA GAG ATT GAT GCT CAT ATA GGT TGT GCC ATG AGT GGG 240 CTA ATT GCT GAT GCT AAA ACT TTA ATT GAT AAA GCC AGA GTG GAG ACA 288 CAG AAC CAC TGG TTC ACC TAT AAT GAG ACA ATG ACA GTT GAG AGT GTT 336 ACC CAG GCT GTG TCC AAT CTG GCT TTG CAG TTC GGA GAA GAA GAT GCA 384 GAT CCA GGT GCT ATG TCT CGT CCC TTT GGA GTA GCA TTG TTG TTT GGA 432 GGA GTT GAT GAG AAA GGG CCC CAA CTG TTT CAC ATG GAC CCA TCT GGG 480 ACC TTC GTA CAG TGT GAT GCT CGA GCA ATT GGT TCT GCG TCA GAG GGT 528 GCC CAG AGC TCC TTG CAG GAA GTT TAC CAC AAG TCT ACG ACT CTG AAG 576 GAG GCC ATC AAG TCT TCA CTC ATC ATC CTC AAG CAA GTC ATG GAG GAG 624 AAG CTG AAC GCA ACT AAC ATC GAG CTG GCC ACA GTG CAG CCT GGT CAG 672 AAT TTC CAC ATG TTC ACA AAG GAA GAA CTG GAG GAG GTG ATC AAG GAC 720 ATT 723 SEQ ID NO: 6 Sequence length: 723 Array Type: Nucleic acid topology: Linear array types: cDNA to mRNA sequence ATG TTC CTC ACT CGG TCC GAG TAC GAC AGG GGT GTG AAC ACT TTT TCT 48 CCT GAA GGA AGA TTA TTT CAA GTG GAA TAT GCC ATT GAG GGC CAT AAG 96 CTT GGT TCT ACG GCC ATT GGC ATC CAG ACA TCA GAG GGT GTA TGT CTA 144 GCT GTG GAG AAG AGA ATT ACC TCG CCA CTA ATG GAG CCT AGC AGC ATT 192 GAG AAA ATC GTA GAG ATT GAT GCT CAT ATA GGT TGT GCC ATG AGT GGG 240 CTA ATT GCT GAT GCT AAA ACT TTA ATT GAT AAA GCC AGA GTG GAG ACA 288 CAG AAC CAC TGG TTC ACC TAT AAT GAG ACA ATG ACA GTT GAG AGT GTT 336 ACC CAG GCT GTG TCC AAT CTG GCT TTG CAG TTC GGA GAA GAA GAT GCA 384 GAT CCA GGT GCT ATG TCT CGT CCC TTT GTA GCA TTG TTG TTT GGA 432 GGA GTT GAT GAG AAA GGG CCC CAA CTG TTT CAC ATG GAC CCA TCT GGG 480 ACC TTC GTA CAG TGT GAT GCT CGA GCA ATT GGT TCT GCG TCA GAG GGT 528 GCC CAG AGC TCC TTG CAG GAA GTT CAC AAG TCT ACG ACT CTG AAG 576 GAG GCC ATC AAG TCT TCA CTC ATC ATC CTC AAG CAA GTC ATG GAG GAG 624 AAG CTG AAC GCA ACT AAC ATC GAG CTG GCC ACA GTG CAG CCT GGT CAG 672 AAT TTC CA C ATG TTC ACA AAG GAA GAA CTG GAG GAG GTG ATC AAG GAC 720 ATT 723

【００９４】配列番号：７ 配列の長さ：２１９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Met Leu Gln Ala Gly Ala Pro Thr Ala Gly Ser Phe Arg Thr Gly Glu 5 10 15 Val His Thr Gly Thr Thr Ile Met Ala Val Glu Phe Asp Gly Gly Val 20 25 30 Val Val Gly Ser Asp Ser Arg Val Ser Ala Gly Ala Ala Val Val Asn 35 40 45 Arg Val Phe ASp Lys Leu Ser Pro Leu His Gln Arg Ile Tyr Cys Ala 50 55 60 Leu Ser Gly Ser Ala Ala Asp Ala Gln Ala Ile Ala Asp Met Ala Ala 65 70 75 80 Tyr Gln Leu Glu Leu His Gly Leu Glu Leu Glu Glu Pro Pro Leu Val 85 90 95 Leu Ala Ala Ala Asn Ile Val Lys Asn Ile Ser Tyr Lys Tyr Arg Glu 100 105 110 Asp Leu Leu Ala His Leu Met Val Ala Gly Trp Asp Gln His Glu Gly 115 120 125 Gly Gln Val Tyr Gly Thr Met Gly Gly Met Leu Ile Arg Gln Pro Phe 130 135 140 Ala Ile Gly Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Ile Tyr Gly Tyr Val Asp Ala 145 150 155 160 Ala Tyr Lys Pro Gly Met Thr Pro Glu Glu Cys Arg Arg Phe Thr Thr 165 170 175 Asp Ala Ile Thr Leu Ala Met Asn Arg Asp Gly Ser Ser Gly Gly Val 180 185 190 Ile Tyr Leu Val Thr Ile Thr Ala Asp Gly Val Asp His Arg Val Ile 195 200 205 Leu Gly Asp Glu Leu Pro Lys Phe Tyr Asp Glu 210 215 SEQ ID NO: 7 Sequence length: 219 Sequence type: Amino acid Topology: Linear Sequence type: Peptide sequence Met Leu Gln Ala Gly Ala Pro Thr Ala Gly Ser Phe Arg Thr Gly Glu 5 10 15 Val His Thr Gly Thr Thr Ile Met Ala Val Glu Phe Asp Gly Gly Val 20 25 30 Val Val Gly Ser Asp Ser Arg Val Ser Ala Gly Ala Ala Val Val Asn 35 40 45 Arg Val Phe ASp Lys Leu Ser Pro Leu His Gln Arg Ile Tyr Cys Ala 50 55 60 Leu Ser Gly Ser Ala Ala Asp Ala Gln Ala Ile Ala Asp Met Ala Ala 65 70 75 80 Tyr Gln Leu Glu Leu His Gly Leu Glu Leu Glu Glu Pro Pro Leu Val 85 90 95 Leu Ala Ala Ala Asn Ile Val Lys Asn Ile Ser Tyr Lys Tyr Arg Glu 100 105 110 Asp Leu Leu Ala His Leu Met Val Ala Gly Trp Asp Gln His Glu Gly 115 120 125 Gly Gln Val Tyr Gly Thr Met Gly Gly Met Leu Ile Arg Gln Pro Phe 130 135 140 Ala Ile Gly Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Ile Tyr Gly Tyr Val Asp Ala 145 150 155 160 Ala Tyr Lys Pro Gly Met Thr Pro Glu Glu Cys Arg Arg Phe Thr Thr 165 170 175 Asp Ala Ile Thr L eu Ala Met Asn Arg Asp Gly Ser Ser Gly Gly Val 180 185 190 Ile Tyr Leu Val Thr Ile Thr Ala Asp Gly Val Asp His Arg Val Ile 195 200 205 Leu Gly Asp Glu Leu Pro Lys Phe Tyr Asp Glu 210 215

【００９５】配列番号：８ 配列の長さ：６５７ 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 ATG CTG CAA GCC GGA GCA CCT ACC GCC GGC TCT TTC CGG ACG GGA GAA 48 GTC CAC ACC GGG ACA ACC ATC ATG GCT GTG GAA TTT GAC GGG GGT GTC 96 GTG GTG GGC TCT GAT TCC CGA GTG TCA GCG GGA GCA GCC GTA GTG AAC 144 CGC GTG TTT GAC AAG CTC TCC CCT CTG CAC CAG CGC ATC TAC TGT GCC 192 CTC TCG GGT TCC GCT GCT GAT GCC CAA GCC ATA GCC GAC ATG GCC GCC 240 TAC CAG CTG GAG CTG CAC GGG TTG GAA CTG GAG GAG CCG CCC CTT GTT 288 CTG GCT GCT GCA AAC ATA GTG AAG AAC ATC TCC TAC AAG TAC CGC GAG 336 GAC TTG TTA GCG CAT CTC ATG GTA GCT GGT TGG GAC CAA CAT GAG GGG 384 GGC CAG GTG TAT GGA ACC ATG GGA GGG ATG CTA ATT CGA CAG CCC TTT 432 GCG ATC GGC GGT TCC GGA AGC ACC TAT ATT TAC GGT TAT GTG GAC GCA 480 GCT TAT AAA CCA GGC ATG ACC CCC GAG GAG TGC CGG CGT TTC ACC ACA 528 GAC GCC ATC ACT CTG GCC ATG AAC CGA GAT GGC TCC AGT GGG GGT GTC 576 ATC TAC CTG GTC ACC ATT ACA GCT GAT GGT GTG GAC CAT CGC GTC ATC 624 CTG GGA GAC GAG CTG CCA AAA TTC TAC GAT GAG 657SEQ ID NO: 8 Sequence length: 657 Sequence type: Nucleic acid Topology: Linear Sequence type: cDNA to mRNA Sequence ATG CTG CAA GCC GGA GCA CCT ACC GCC GGC TCT TTC CGG ACG GGA GAA 48 GTC CAC ACC GGG ACA ACC ATC ATG GCT GTG GAA TTT GAC GGG GGT GTC 96 GTG GTG GGC TCT GAT TCC CGA GTG TCA GCG GGA GCA GCC GTA GTG AAC 144 CGC GTG TTT GAC AAG CTC TCC CCT CTG CAC CAG CGC ATC TAC TGT GCC 192TC TCG GGT TCC GCT GCT GAT GCC CAA GCC ATA GCC GAC ATG GCC GCC 240 TAC CAG CTG GAG CTG CAC GGG TTG GAA CTG GAG GAG CCG CCC CTT GTT 288 CTG GCT GCT GCA AAC ATA GTG AAG AAC ATC TCC TAC AAG TAC CGC GAG GAC TTG TTA GCG CAT CTC ATG GTA GCT GGT TGG GAC CAA CAT GAG GGG 384 GGC CAG GTG TAT GGA ACC ATG GGA GGG ATG CTA ATT CGA CAG CCC TTT 432 GCG ATC GGC GGT TCC GGA AGC ACC TAT ATT TAC GGT TCA GTG 480 GCT TAT AAA CCA GGC ATG ACC CCC GAG GAG TGC CGG CGT TTC ACC ACA 528 GAC GCC ATC ACT CTG GCC ATG AAC CGA GAT GGC TCC AGT GGG GGT GTC 576 ATC TAC CTG G TC ACC ATT ACA GCT GAT GGT GTG GAC CAT CGC GTC ATC 624 CTG GGA GAC GAG CTG CCA AAA TTC TAC GAT GAG 657

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】実施例１（３）で得られたラットプロテアソム
のコンポーネントデルタの決定されたｃＤＮＡの塩基配
列と塩基配列に対応したアミノ酸配列を示す。FIG. 1 shows the nucleotide sequence of the determined cDNA of the rat proteasome component delta obtained in Example 1 (3) and the amino acid sequence corresponding to the nucleotide sequence.

【図２】実施例１（４）で得られたラットプロテアソム
のコンポーネントイオタの決定されたｃＤＮＡの塩基配
列と塩基配列に対応したアミノ酸配列を示す。FIG. 2 shows the nucleotide sequence of the determined cDNA of the component iota of rat proteasome obtained in Example 1 (4) and the amino acid sequence corresponding to the nucleotide sequence.

【図３】実施例１（５）で得られたラットプロテアソム
のコンポーネントゼータの決定されたｃＤＮＡの塩基配
列と塩基配列に対応したアミノ酸配列を示す。FIG. 3 shows the nucleotide sequence of the determined cDNA of the rat proteasome component zeta obtained in Example 1 (5) and the amino acid sequence corresponding to the nucleotide sequence.

【図４】実施例１（６）で得られたラットプロテアソム
のコンポーネントRING12の決定されたｃＤＮＡの塩基配
列と塩基配列に対応したアミノ酸配列を示す。FIG. 4 shows the determined nucleotide sequence of the cDNA of the rat proteasome component RING12 obtained in Example 1 (6) and the amino acid sequence corresponding to the nucleotide sequence.

【図５】実施例２で得られたラットプロテアソームのコ
ンポーネントデルタの蛋白質発現用ベクターの構造を示
す。FIG. 5 shows the structure of a vector for protein expression of the rat proteasome component delta obtained in Example 2.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 8214−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/574 Ｅ 9015−2Ｊ // Ａ６１Ｂ 10/00 Ｔ Ａ６１Ｋ 37/54 ＡＢＢ 8314−4Ｃ 39/395 ＡＤＵ Ｅ 9284−4Ｃ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁵ Identification code Internal reference number FI Technical display location C12P 21/02 C 8214-4B G01N 33/574 E 9015-2J // A61B 10/00 T A61K 37 / 54 ABB 8314-4C 39/395 ADU E 9284-4C (C12P 21/02 C12R 1:91)

Claims (12)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 分子中に以下の式（１）で示されるアミ
ノ酸配列を含有することを特徴とするラットプロテアソ
ームのコンポーネントデルタ（δ）。 式（１） ＭｅｔＡｌａＶａｌＧｌｎＰｈｅＡｓｐＧｌｙＧｌｙＶａｌＶａｌ ＬｅｕＧｌｙＡｌａＡｓｐＳｅｒＡｒｇＴｈｒＴｈｒＴｈｒＧｌｙ ＳｅｒＴｙｒＩｌｅＡｌａＡｓｎＡｒｇＶａｌＴｈｒＡｓｐＬｙｓ ＬｅｕＴｈｒＰｒｏＩｌｅＨｉｓＡｓｐＨｉｓＩｌｅＰｈｅＣｙｓ ＣｙｓＡｒｇＳｅｒＧｌｙＳｅｒＡｌａＡｌａＡｓｐＴｈｒＧｌｎ ＡｌａＶａｌＡｌａＡｓｐＡｌａＶａｌＴｈｒＴｙｒＧｌｎＬｅｕ ＧｌｙＰｈｅＨｉｓＳｅｒＩｌｅＧｌｕＬｅｕＡｓｎＧｌｕＰｒｏ ＰｒｏＬｅｕＶａｌＨｉｓＴｈｒＡｌａＡｌａＳｅｒＬｅｕＰｈｅ ＬｙｓＧｌｕＭｅｔＣｙｓＴｙｒＡｒｇＴｙｒＡｒｇＧｌｕＡｓｐ ＬｅｕＭｅｔＡｌａＧｌｙＩｌｅＩｌｅＩｌｅＡｌａＧｌｙＴｒｐ ＡｓｐＰｒｏＧｌｎＧｌｕＧｌｙＧｌｙＧｌｎＶａｌＴｙｒＳｅｒ ＶａｌＰｒｏＭｅｔＧｌｙＧｌｙＭｅｔＭｅｔＶａｌＡｒｇＧｌｎ ＳｅｒＰｈｅＡｌａＩｌｅＧｌｙＧｌｙＳｅｒＧｌｙＳｅｒＳｅｒ ＴｙｒＩｌｅＴｙｒＧｌｙＴｙｒＶａｌＡｓｐＡｌａＴｈｒＴｙｒ ＡｒｇＧｌｕＧｌｙＭｅｔＴｈｒＬｙｓＡｓｐＧｌｕＣｙｓＬｅｕ ＧｌｎＰｈｅＴｈｒＡｌａＡｓｎＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕＡｌａ ＭｅｔＧｌｕＡｒｇＡｓｐＧｌｙＳｅｒＳｅｒＧｌｙＧｌｙＶａｌ ＩｌｅＡｒｇＬｅｕＡｌａＡｌａＩｌｅＧｌｎＧｌｎＳｅｒＧｌｙ ＶａｌＧｌｕＡｒｇＧｌｎＶａｌＬｅｕＬｅｕＧｌｙＡｓｐＧｌｎ ＩｌｅＰｒｏＬｙｓＶａｌＴｈｒＩｌｅＳｅｒＴｈｒＬｅｕＰｒｏ ＰｒｏＰｒｏ1. A component delta (δ) of rat proteasome, which comprises an amino acid sequence represented by the following formula (1) in the molecule. Equation (1) MetAlaValGlnPheAspGlyGlyValVal LeuGlyAlaAspSerArgThrThrThrGly SerTyrIleAlaAsnArgValThrAspLys LeuThrProIleHisAspHisIlePheCys CysArgSerGlySerAlaAlaAspThrGln AlaValAlaAspAlaValThrTyrGlnLeu GlyPheHisSerIleGluLeuAsnGluPro ProLeuValHisThrAlaAlaSerLeuPhe LysGluMetCysTyrArgTyrArgGluAsp LeuMetAlaGlyIleIleIleAlaGlyTrp AspProGlnGluGlyGlyGlnValT rSer ValProMetGlyGlyMetMetValArgGln SerPheAlaIleGlyGlySerGlySerSer TyrIleTyrGlyTyrValAspAlaThrTyr ArgGluGlyMetThrLysAspGluCysLeu GlnPheThrAlaAsnAlaLeuAlaLeuAla MetGluArgAspGlySerSerGlyGlyVal IleArgLeuAlaAlaIleGlnGlnSerGly ValGluArgGlnValLeuLeuGlyAspGln IleProLysValThrIleSerThrLeuPro ProPro 【請求項２】 分子中に以下の式（２）で示される塩基
配列を含有する請求項１記載のラットプロテアソームの
コンポーネントデルタの遺伝子。 式（２） ＡＴＧＧＣＴＧＴＧＣＡＡＴＴＴＧＡＣＧＧＧＧＧＣＧＴＧＧＴＴ ＣＴＡＧＧＡＧＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＡＡＣＡＡＣＣＡＣＴＧＧＧ ＴＣＧＴＡＣＡＴＣＧＣＣＡＡＴＣＧＡＧＴＧＡＣＴＧＡＣＡＡＧ ＣＴＧＡＣＣＣＣＴＡＴＣＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＴＣＴＴＣＴＧＣ ＴＧＣＣＧＣＴＣＡＧＧＣＴＣＧＧＣＡＧＣＴＧＡＴＡＣＣＣＡＡ ＧＣＡＧＴＡＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＴＣＡＣＧＴＡＣＣＡＧＣＴＴ ＧＧＴＴＴＣＣＡＣＡＧＴＡＴＴＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＡＧＣＣＴ ＣＣＡＣＴＡＧＴＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＡＧＴＣＴＣＴＴＴ ＡＡＧＧＡＧＡＴＧＴＧＴＴＡＣＣＧＣＴＡＣＡＧＡＧＡＡＧＡＴ ＣＴＧＡＴＧＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＣＡＧＧＣＴＧＧ ＧＡＣＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＧＣＡＧＧＴＧＴＡＣＴＣＴ ＧＴＴＣＣＣＡＴＧＧＧＡＧＧＴＡＴＧＡＴＧＧＴＡＡＧＡＣＡＧ ＴＣＣＴＴＴＧＣＣＡＴＣＧＧＡＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＣＴＣＡ ＴＡＴＡＴＣＴＡＴＧＧＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＣＴＡＴ ＣＧＧＧＡＡＧＧＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＴＧＡＡＴＧＴＣＴＧ ＣＡＡＴＴＣＡＣＴＧＣＣＡＡＴＧＣＴＣＴＴＧＣＴＴＴＧＧＣＴ ＡＴＧＧＡＡＣＧＧＧＡＴＧＧＣＴＣＣＡＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＧ ＡＴＣＣＧＣＴＴＧＧＣＡＧＣＣＡＴＴＣＡＡＣＡＧＴＣＧＧＧＧ ＧＴＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＴＴＧＧＧＡＧＡＣＣＡＧ ＡＴＣＣＣＣＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＣＡ ＣＣＴＣＣＣ2. The gene for the rat proteasome component delta according to claim 1, which contains the base sequence represented by the following formula (2) in the molecule. Equation (2) ATGGCTGTGCAATTTGACGGGGGCGTGGTT CTAGGAGCAGACTCCAGAACAACCACTGGG TCGTACATCGCCAATCGAGTGACTGACAAG CTGACCCCTATCCACGATCACATCTTCTGC TGCCGCTCAGGCTCGGCAGCTGATACCCAA GCAGTAGCTGATGCTGTCACGTACCAGCTT GGTTTCCACAGTATTGAGCTGAACGAGCCT CCACTAGTGCACACAGCCGCCAGTCTCTTT AAGGAGATGTGTTACCGCTACAGAGAAGAT CTGATGGCAGGAATCATCATCGCAGGCTGG GACCCTCAAGAAGGAGGGCAGGTGT CTCT GTTCCCATGGGAGGTATGATGGTAAGACAG TCCTTTGCCATCGGAGGCTCCGGGAGCTCA TATATCTATGGCTATGTTGATGCTACCTAT CGGGAAGGCATGACCAAGGATGAATGTCTG CAATTCACTGCCAATGCTCTTGCTTTGGCT ATGGAACGGGATGGCTCCAGTGGAGGAGTG ATCCGCTTGGCAGCCATTCAACAGTCGGGG GTAGAGCGGCAGGTGCTTTTGGGAGACCAG ATCCCCAAGGTCACCATCTCCACTTTGCCA CCTCCC 【請求項３】 分子中に以下の式（３）で示されるアミ
ノ酸配列を含有することを特徴とするラットプロテアソ
ームのコンポーネントイオタ（ι）。 式（３） ＭｅｔＳｅｒＡｒｇＧｌｙＳｅｒＳｅｒＡｌａＧｌｙＰｈｅＡｓｐ ＡｒｇＨｉｓＩｌｅＴｈｒＩｌｅＰｈｅＳｅｒＰｒｏＧｌｕＧｌｙ ＡｒｇＬｅｕＴｙｒＧｌｎＶａｌＧｌｕＴｙｒＡｌａＰｈｅＬｙｓ ＡｌａＩｌｅＡｓｎＧｌｎＧｌｙＧｌｙＬｅｕＴｈｒＳｅｒＶａｌ ＡｌａＶａｌＡｒｇＧｌｙＬｙｓＡｓｐＣｙｓＡｌａＶａｌＩｌｅ ＶａｌＴｈｒＧｌｎＬｙｓＬｙｓＶａｌＰｒｏＡｓｐＬｙｓＬｅｕ ＬｅｕＡｓｐＳｅｒＳｅｒＴｈｒＶａｌＴｈｒＨｉｓＬｅｕＰｈｅ ＬｙｓＩｌｅＴｈｒＧｌｕＡｓｎＩｌｅＧｌｙＣｙｓＶａｌＭｅｔ ＴｈｒＧｌｙＭｅｔＴｈｒＡｌａＡｓｐＳｅｒＡｒｇＳｅｒＧｌｎ ＶａｌＧｌｎＡｒｇＡｌａＡｒｇＴｙｒＧｌｕＡｌａＡｌａＡｓｎ ＴｒｐＬｙｓＴｙｒＬｙｓＴｙｒＧｌｙＴｙｒＧｌｕＩｌｅＰｒｏ ＶａｌＡｓｐＭｅｔＬｅｕＣｙｓＬｙｓＡｒｇＩｌｅＡｌａＡｓｐ ＩｌｅＳｅｒＧｌｎＶａｌＴｙｒＴｈｒＧｌｎＡｓｎＡｌａＧｌｕ ＭｅｔＡｒｇＰｒｏＬｅｕＧｌｙＣｙｓＣｙｓＭｅｔＩｌｅＬｅｕ ＩｌｅＧｌｙＩｌｅＡｓｐＧｌｕＧｌｕＧｌｎＧｌｙＰｒｏＧｌｎ ＶａｌＴｙｒＬｙｓＣｙｓＡｓｐＰｒｏＡｌａＧｌｙＴｙｒＴｙｒ ＣｙｓＧｌｙＰｈｅＬｙｓＡｌａＴｈｒＡｌａＡｌａＧｌｙＶａｌ ＬｙｓＧｌｎＴｈｒＧｌｕＳｅｒＴｈｒＳｅｒＰｈｅＬｅｕＧｌｕ ＬｙｓＬｙｓＶａｌＬｙｓＬｙｓＬｙｓＰｈｅＡｓｐＴｒｐＴｈｒ ＰｈｅＧｌｕＧｌｎＴｈｒＶａｌＧｌｕＴｈｒＡｌａＩｌｅＴｈｒ ＣｙｓＬｅｕＳｅｒＴｈｒＶａｌＬｅｕＳｅｒＩｌｅＡｓｐＰｈｅ ＬｙｓＰｒｏＳｅｒＧｌｕＩｌｅＧｌｕＶａｌＧｌｙＶａｌＶａｌ ＴｈｒＶａｌＧｌｕＡｓｎＰｒｏＬｙｓＰｈｅＡｒｇＩｌｅＬｅｕ ＴｈｒＧｌｕＡｌａＧｌｕＩｌｅＡｓｐＡｌａＨｉｓＬｅｕＶａｌ ＡｌａＬｅｕＡｌａＧｌｕＡｒｇＡｓｐ3. A rat proteasome component iota (ι) containing an amino acid sequence represented by the following formula (3) in the molecule. Equation (3) MetSerArgGlySerSerAlaGlyPheAsp ArgHisIleThrIlePheSerProGluGly ArgLeuTyrGlnValGluTyrAlaPheLys AlaIleAsnGlnGlyGlyLeuThrSerVal AlaValArgGlyLysAspCysAlaValIle ValThrGlnLysLysValProAspLysLeu LeuAspSerSerThrValThrHisLeuPhe LysIleThrGluAsnIleGlyCysValMet ThrGlyMetThrAlaAspSerArgSerGln ValGlnArgAlaArgTyrGluAlaAlaAsn TrpLysTyrLysTyrGlyTyrGluI ePro ValAspMetLeuCysLysArgIleAlaAsp IleSerGlnValTyrThrGlnAsnAlaGlu MetArgProLeuGlyCysCysMetIleLeu IleGlyIleAspGluGluGlnGlyProGln ValTyrLysCysAspProAlaGlyTyrTyr CysGlyPheLysAlaThrAlaAlaGlyVal LysGlnThrGluSerThrSerPheLeuGlu LysLysValLysLysLysPheAspTrpThr PheGluGlnThrValGluThrAlaIleThr CysLeuSerThrValLeuSerIleAspPhe LysProSerGluIleGluValGlyV lVal ThrValGluAsnProLysPheArgIleLeu ThrGluAlaGluIleAspAlaHisLeuVal AlaLeuAlaGluArgAsp 【請求項４】 分子中に以下の式（４）で示される塩基
配列を含有する請求項３記載のラットプロテアソームの
コンポーネントイオタの遺伝子。 式（４） ＡＴＧＴＣＣＣＧＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＧＣＣＧＧＴＴＴＴＧＡＣ ＣＧＧＣＡＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＴＴＣＴＣＴＣＣＣＧＡＧＧＧＣ ＣＧＡＣＴＣＴＡＣＣＡＡＧＴＡＧＡＡＴＡＴＧＣＴＴＴＴＡＡＧ ＧＣＴＡＴＴＡＡＣＣＡＧＧＧＴＧＧＡＣＴＴＡＣＡＴＣＴＧＴＡ ＧＣＴＧＴＣＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＡＣＴＧＣＧＣＡＧＴＴＡＴＴ ＧＴＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧＡＣＡＡＡＣＴＡ ＣＴＧＧＡＴＴＣＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＡＣＴＣＡＣＴＴＡＴＴＣ ＡＡＧＡＴＡＡＣＧＧＡＡＡＡＣＡＴＴＧＧＣＴＧＴＧＴＧＡＴＧ ＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＣＡＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＧＡＴＣＣＣＡＧ ＧＴＡＣＡＧＡＧＧＧＣＡＣＧＣＴＡＴＧＡＡＧＣＡＧＣＴＡＡＣ ＴＧＧＡＡＡＴＡＣＡＡＡＴＡＴＧＧＣＴＡＴＧＡＧＡＴＴＣＣＴ ＧＴＧＧＡＣＡＴＧＣＴＧＴＧＴＡＡＡＡＧＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴ ＡＴＴＴＣＴＣＡＡＧＴＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＴＧＣＴＧＡＡ ＡＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＴＧＧＴＴＧＴＴＧＴＡＴＧＡＴＴＴＴＡ ＡＴＴＧＧＴＡＴＡＧＡＴＧＡＡＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＣＴＣＡＡ ＧＴＧＴＡＣＡＡＧＴＧＴＧＡＴＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴＡＣＴＡＣ ＴＧＴＧＧＣＴＴＴＡＡＡＧＣＣＡＣＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＧＴＧ ＡＡＧＣＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＡＣＣＡＧＣＴＴＣＣＴＣＧＡＡ ＡＡＡＡＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＧＡＡＡＴＴＴＧＡＴＴＧＧＡＣＡ ＴＴＴＧＡＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＧＡＡＡＣＴＧＣＡＡＴＣＡＣＡ ＴＧＣＣＴＧＴＣＴＡＣＴＧＴＴＣＴＧＴＣＧＡＴＴＧＡＴＴＴＣ ＡＡＡＣＣＴＴＣＡＧＡＡＡＴＣＧＡＡＧＴＴＧＧＡＧＴＡＧＴＴ ＡＣＡＧＴＴＧＡＡＡＡＴＣＣＴＡＡＡＴＴＣＡＧＧＡＴＴＣＴＴ ＡＣＡＧＡＡＧＣＡＧＡＧＡＴＴＧＡＣＧＣＴＣＡＣＣＴＴＧＴＧ ＧＣＴＣＴＡＧＣＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣ4. The gene for rat proteasome component iota according to claim 3, which contains a base sequence represented by the following formula (4) in the molecule. Equation (4) ATGTCCCGTGGTTCCAGCGCCGGTTTTGAC CGGCACATTACTATTTTCTCTCCCGAGGGC CGACTCTACCAAGTAGAATATGCTTTTAAG GCTATTAACCAGGGTGGACTTACATCTGTA GCTGTCAGAGGAAAGGACTGCGCAGTTATT GTCACACAGAAGAAAGTACCTGACAAACTA CTGGATTCCAGCACCGTGACTCACTTATTC AAGATAACGGAAAACATTGGCTGTGTGATG ACAGGAATGACAGCTGACAGCAGATCCCAG GTACAGAGGGCACGCTATGAAGCAGCTAAC TGGAAATACAAATATGGCTATGAGA TCCT GTGGACATGCTGTGTAAAAGAATTGCTGAT ATTTCTCAAGTCTACACACAGAATGCTGAA ATGAGGCCACTTGGTTGTTGTATGATTTTA ATTGGTATAGATGAAGAGCAAGGCCCTCAA GTGTACAAGTGTGATCCTGCAGGCTACTAC TGTGGCTTTAAAGCCACCGCAGCAGGAGTG AAGCAGACAGAGTCAACCAGCTTCCTCGAA AAAAAAGTGAAGAAGAAATTTGATTGGACA TTTGAACAGACAGTGGAAACTGCAATCACA TGCCTGTCTACTGTTCTGTCGATTGATTTC AAACCTTCAGAAATCGAAGTTGGAG AGTT ACAGTTGAAAATCCTAAATTCAGGATTCTT ACAGAAGCAGAGATTGACGCTCACCTTGTG GCTCTAGCAGAGAGAGAC 【請求項５】 分子中に以下の式（５）で示されるアミ
ノ酸配列を含有することを特徴とするラットプロテアソ
ームのコンポーネントゼータ（ζ）。 式（５） ＭｅｔＰｈｅＬｅｕＴｈｒＡｒｇＳｅｒＧｌｕＴｙｒＡｓｐＡｒｇ ＧｌｙＶａｌＡｓｎＴｈｒＰｈｅＳｅｒＰｒｏＧｌｕＧｌｙＡｒｇ ＬｅｕＰｈｅＧｌｎＶａｌＧｌｕＴｙｒＡｌａＩｌｅＧｌｕＧｌｙ ＨｉｓＬｙｓＬｅｕＧｌｙＳｅｒＴｈｒＡｌａＩｌｅＧｌｙＩｌｅ ＧｌｎＴｈｒＳｅｒＧｌｕＧｌｙＶａｌＣｙｓＬｅｕＡｌａＶａｌ ＧｌｕＬｙｓＡｒｇＩｌｅＴｈｒＳｅｒＰｒｏＬｅｕＭｅｔＧｌｕ ＰｒｏＳｅｒＳｅｒＩｌｅＧｌｕＬｙｓＩｌｅＶａｌＧｌｕＩｌｅ ＡｓｐＡｌａＨｉｓＩｌｅＧｌｙＣｙｓＡｌａＭｅｔＳｅｒＧｌｙ ＬｅｕＩｌｅＡｌａＡｓｐＡｌａＬｙｓＴｈｒＬｅｕＩｌｅＡｓｐ ＬｙｓＡｌａＡｒｇＶａｌＧｌｕＴｈｒＧｌｎＡｓｎＨｉｓＴｒｐ ＰｈｅＴｈｒＴｙｒＡｓｎＧｌｕＴｈｒＭｅｔＴｈｒＶａｌＧｌｕ ＳｅｒｖａｌＴｈｒＧｌｎＡｌａＶａｌＳｅｒＡｓｎＬｅｕＡｌａ ＬｅｕＧｌｎＰｈｅＧｌｙＧｌｕＧｌｕＡｓｐＡｌａＡｓｐＰｒｏ ＧｌｙＡｌａＭｅｔＳｅｒＡｒｇＰｒｏＰｈｅＧｌｙＶａｌＡｌａ ＬｅｕＬｅｕＰｈｅＧｌｙＧｌｙＶａｌＡｓｐＧｌｕＬｙｓＧｌｙ ＰｒｏＧｌｎＬｅｕＰｈｅＨｉｓＭｅｔＡｓｐＰｒｏＳｅｒＧｌｙ ＴｈｒＰｈｅＶａｌＧｌｎＣｙｓＡｓｐＡｌａＡｒｇＡｌａＩｌｅ ＧｌｙＳｅｒＡｌａＳｅｒＧｌｕＧｌｙＡｌａＧｌｎＳｅｒＳｅｒ ＬｅｕＧｌｎＧｌｕＶａｌＴｙｒＨｉｓＬｙｓＳｅｒＴｈｒＴｈｒ ＬｅｕＬｙｓＧｌｕＡｌａＩｌｅＬｙｓＳｅｒＳｅｒＬｅｕＩｌｅ ＩｌｅＬｅｕＬｙｓＧｌｎＶａｌＭｅｔＧｌｕＧｌｕＬｙｓＬｅｕ ＡｓｎＡｌａＴｈｒＡｓｎＩｌｅＧｌｕＬｅｕＡｌａＴｈｒＶａｌ ＧｌｎＰｒｏＧｌｙＧｌｎＡｓｎＰｈｅＨｉｓＭｅｔＰｈｅＴｈｒ ＬｙｓＧｌｕＧｌｕＬｅｕＧｌｕＧｌｕＶａｌＩｌｅＬｙｓＡｓｐ Ｉｌｅ5. A component zeta (ζ) of rat proteasome, which contains an amino acid sequence represented by the following formula (5) in the molecule. Equation (5) MetPheLeuThrArgSerGluTyrAspArg GlyValAsnThrPheSerProGluGlyArg LeuPheGlnValGluTyrAlaIleGluGly HisLysLeuGlySerThrAlaIleGlyIle GlnThrSerGluGlyValCysLeuAlaVal GluLysArgIleThrSerProLeuMetGlu ProSerSerIleGluLysIleValGluIle AspAlaHisIleGlyCysAlaMetSerGly LeuIleAlaAspAlaLysThrLeuIleAsp LysAlaArgValGluThrGlnAsnHisTrp PheThrTyrAsnGluThrMetThrV lGlu ServalThrGlnAlaValSerAsnLeuAla LeuGlnPheGlyGluGluAspAlaAspPro GlyAlaMetSerArgProPheGlyValAla LeuLeuPheGlyGlyValAspGluLysGly ProGlnLeuPheHisMetAspProSerGly ThrPheValGlnCysAspAlaArgAlaIle GlySerAlaSerGluGlyAlaGlnSerSer LeuGlnGluValTyrHisLysSerThrThr LeuLysGluAlaIleLysSerSerLeuIle IleLeuLysGlnValMetGluGluLysLeu AsnAlaThrAsnIleGluLeuAlaT rVal GlnProGlyGlnAsnPheHisMetPheThr LysGluGluLeuGluGluValIleLysAsp Ile 【請求項６】 分子中に以下の式（６）で示される塩基
配列を含有する請求項５記載のラットプロテアソームの
コンポーネントゼータの遺伝子。 式（６） ＡＴＧＴＴＣＣＴＣＡＣＴＣＧＧＴＣＣＧＡＧＴＡＣＧＡＣＡＧＧ ＧＧＴＧＴＧＡＡＣＡＣＴＴＴＴＴＣＴＣＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＡ ＴＴＡＴＴＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＴＡＴＧＣＣＡＴＴＧＡＧＧＧＣ ＣＡＴＡＡＧＣＴＴＧＧＴＴＣＴＡＣＧＧＣＣＡＴＴＧＧＣＡＴＣ ＣＡＧＡＣＡＴＣＡＧＡＧＧＧＴＧＴＡＴＧＴＣＴＡＧＣＴＧＴＧ ＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＴＴＡＣＣＴＣＧＣＣＡＣＴＡＡＴＧＧＡＧ ＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＴＴＧＡＧＡＡＡＡＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＴ ＧＡＴＧＣＴＣＡＴＡＴＡＧＧＴＴＧＴＧＣＣＡＴＧＡＧＴＧＧＧ ＣＴＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴＧＣＴＡＡＡＡＣＴＴＴＡＡＴＴＧＡＴ ＡＡＡＧＣＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＡＡＣＣＡＣＴＧＧ ＴＴＣＡＣＣＴＡＴＡＡＴＧＡＧＡＣＡＡＴＧＡＣＡＧＴＴＧＡＧ ＡＧＴＧＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＧＴＧＴＣＣＡＡＴＣＴＧＧＣＴ ＴＴＧＣＡＧＴＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＡＴＣＣＡ ＧＧＴＧＣＴＡＴＧＴＣＴＣＧＴＣＣＣＴＴＴＧＧＡＧＴＡＧＣＡ ＴＴＧＴＴＧＴＴＴＧＧＡＧＧＡＧＴＴＧＡＴＧＡＧＡＡＡＧＧＧ ＣＣＣＣＡＡＣＴＧＴＴＴＣＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＡＴＣＴＧＧＧ ＡＣＣＴＴＣＧＴＡＣＡＧＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＧＡＧＣＡＡＴＴ ＧＧＴＴＣＴＧＣＧＴＣＡＧＡＧＧＧＴＧＣＣＣＡＧＡＧＣＴＣＣ ＴＴＧＣＡＧＧＡＡＧＴＴＴＡＣＣＡＣＡＡＧＴＣＴＡＣＧＡＣＴ ＣＴＧＡＡＧＧＡＧＧＣＣＡＴＣＡＡＧＴＣＴＴＣＡＣＴＣＡＴＣ ＡＴＣＣＴＣＡＡＧＣＡＡＧＴＣＡＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＣＴＧ ＡＡＣＧＣＡＡＣＴＡＡＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＧＣＣＡＣＡＧＴＧ ＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＡＧＡＡＴＴＴＣＣＡＣＡＴＧＴＴＣＡＣＡ ＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣ ＡＴＴ6. The gene for the rat proteasome component zeta according to claim 5, which contains the nucleotide sequence represented by the following formula (6) in the molecule. Equation (6) ATGTTCCTCACTCGGTCCGAGTACGACAGG GGTGTGAACACTTTTTCTCCTGAAGGAAGA TTATTTCAAGTGGAATATGCCATTGAGGGC CATAAGCTTGGTTCTACGGCCATTGGCATC CAGACATCAGAGGGTGTATGTCTAGCTGTG GAGAAGAGAATTACCTCGCCACTAATGGAG CCTAGCAGCATTGAGAAAATCGTAGAGATT GATGCTCATATAGGTTGTGCCATGAGTGGG CTAATTGCTGATGCTAAAACTTTAATTGAT AAAGCCAGAGTGGAGACACAGAACCACTGG TTCACCTATAATGAGACAATGACAG TGAG AGTGTTACCCAGGCTGTGTCCAATCTGGCT TTGCAGTTCGGAGAAGAAGATGCAGATCCA GGTGCTATGTCTCGTCCCTTTGGAGTAGCA TTGTTGTTTGGAGGAGTTGATGAGAAAGGG CCCCAACTGTTTCACATGGACCCATCTGGG ACCTTCGTACAGTGTGATGCTCGAGCAATT GGTTCTGCGTCAGAGGGTGCCCAGAGCTCC TTGCAGGAAGTTTACCACAAGTCTACGACT CTGAAGGAGGCCATCAAGTCTTCACTCATC ATCCTCAAGCAAGTCATGGAGGAGAAGCTG AACGCAACTAACATCGAGCTGGCCA AGTG CAGCCTGGTCAGAATTTCCACATGTTCACA AAGGAAGAACTGGAGGAGGTGATCAAGGAC ATT 【請求項７】 分子中に以下の式（７）で示されるアミ
ノ酸配列を含有することを特徴とするラットプロテアソ
ームのコンポーネントRING12。 式（７） ＭｅｔＬｅｕＧｌｎＡｌａＧｌｙＡｌａＰｒｏＴｈｒＡｌａＧｌｙ ＳｅｒＰｈｅＡｒｇＴｈｒＧｌｙＧｌｕＶａｌＨｉｓＴｈｒＧｌｙ ＴｈｒＴｈｒＩｌｅＭｅｔＡｌａＶａｌＧｌｕＰｈｅＡｓｐＧｌｙ ＧｌｙＶａｌＶａｌＶａｌＧｌｙＳｅｒＡｓｐＳｅｒＡｒｇＶａｌ ＳｅｒＡｌａＧｌｙＡｌａＡｌａＶａｌＶａｌＡｓｎＡｒｇＶａｌ ＰｈｅＡＳｐＬｙｓＬｅｕＳｅｒＰｒｏＬｅｕＨｉｓＧｌｎＡｒｇ ＩｌｅＴｙｒＣｙｓＡｌａＬｅｕＳｅｒＧｌｙＳｅｒＡｌａＡｌａ ＡｓｐＡｌａＧｌｎＡｌａＩｌｅＡｌａＡｓｐＭｅｔＡｌａＡｌａ ＴｙｒＧｌｎＬｅｕＧｌｕＬｅｕＨｉｓＧｌｙＬｅｕＧｌｕＬｅｕ ＧｌｕＧｌｕＰｒｏＰｒｏＬｅｕＶａｌＬｅｕＡｌａＡｌａＡｌａ ＡｓｎＩｌｅＶａｌＬｙｓＡｓｎＩｌｅＳｅｒＴｙｒＬｙｓＴｙｒ ＡｒｇＧｌｕＡｓｐＬｅｕＬｅｕＡｌａＨｉｓＬｅｕＭｅｔＶａｌ ＡｌａＧｌｙＴｒｐＡｓｐＧｌｎＨｉｓＧｌｕＧｌｙＧｌｙＧｌｎ ＶａｌＴｙｒＧｌｙＴｈｒＭｅｔＧｌｙＧｌｙＭｅｔＬｅｕＩｌｅ ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＰｈｅＡｌａＩｌｅＧｌｙＧｌｙＳｅｒＧｌｙ ＳｅｒＴｈｒＴｙｒＩｌｅＴｙｒＧｌｙＴｙｒＶａｌＡｓｐＡｌａ ＡｌａＴｙｒＬｙｓＰｒｏＧｌｙＭｅｔＴｈｒＰｒｏＧｌｕＧｌｕ ＣｙｓＡｒｇＡｒｇＰｈｅＴｈｒＴｈｒＡｓｐＡｌａＩｌｅＴｈｒ ＬｅｕＡｌａＭｅｔＡｓｎＡｒｇＡｓｐＧｌｙＳｅｒＳｅｒＧｌｙ ＧｌｙＶａｌＩｌｅＴｙｒＬｅｕＶａｌＴｈｒＩｌｅＴｈｒＡｌａ ＡｓｐＧｌｙＶａｌＡｓｐＨｉｓＡｒｇＶａｌＩｌｅＬｅｕＧｌｙ ＡｓｐＧｌｕＬｅｕＰｒｏＬｙｓＰｈｅＴｙｒＡｓｐＧｌｕ7. A rat proteasome component RING12 containing an amino acid sequence represented by the following formula (7) in the molecule. Equation (7) MetLeuGlnAlaGlyAlaProThrAlaGly SerPheArgThrGlyGluValHisThrGly ThrThrIleMetAlaValGluPheAspGly GlyValValValGlySerAspSerArgVal SerAlaGlyAlaAlaValValAsnArgVal PheASpLysLeuSerProLeuHisGlnArg IleTyrCysAlaLeuSerGlySerAlaAla AspAlaGlnAlaIleAlaAspMetAlaAla TyrGlnLeuGluLeuHisGlyLeuGluLeu GluGluProProLeuValLeuAlaAlaAla AsnIleValLysAsnIleSerTyrL sTyr ArgGluAspLeuLeuAlaHisLeuMetVal AlaGlyTrpAspGlnHisGluGlyGlyGln ValTyrGlyThrMetGlyGlyMetLeuIle ArgGlnProPheAlaIleGlyGlySerGly SerThrTyrIleTyrGlyTyrValAspAla AlaTyrLysProGlyMetThrProGluGlu CysArgArgPheThrThrAspAlaIleThr LeuAlaMetAsnArgAspGlySerSerGly GlyValIleTyrLeuValThrIleThrAla AspGlyValAspHisArgValIleLeuGly AspGluLeuProLysPheTyrAspG u 【請求項８】 分子中に以下の式（８）で示される塩基
配列を含有する請求項７記載のラットプロテアソームの
コンポーネントRING12の遺伝子。 式（８） ＡＴＧＣＴＧＣＡＡＧＣＣＧＧＡＧＣＡＣＣＴＡＣＣＧＣＣＧＧＣ ＴＣＴＴＴＣＣＧＧＡＣＧＧＧＡＧＡＡＧＴＣＣＡＣＡＣＣＧＧＧ ＡＣＡＡＣＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＧＴＧＧＡＡＴＴＴＧＡＣＧＧＧ ＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＧＡＴＴＣＣＣＧＡＧＴＧ ＴＣＡＧＣＧＧＧＡＧＣＡＧＣＣＧＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＣＧＴＧ ＴＴＴＧＡＣＡＡＧＣＴＣＴＣＣＣＣＴＣＴＧＣＡＣＣＡＧＣＧＣ ＡＴＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＣＴＣＴＣＧＧＧＴＴＣＣＧＣＴＧＣＴ ＧＡＴＧＣＣＣＡＡＧＣＣＡＴＡＧＣＣＧＡＣＡＴＧＧＣＣＧＣＣ ＴＡＣＣＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＣＧＧＧＴＴＧＧＡＡＣＴＧ ＧＡＧＧＡＧＣＣＧＣＣＣＣＴＴＧＴＴＣＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡ ＡＡＣＡＴＡＧＴＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣ ＣＧＣＧＡＧＧＡＣＴＴＧＴＴＡＧＣＧＣＡＴＣＴＣＡＴＧＧＴＡ ＧＣＴＧＧＴＴＧＧＧＡＣＣＡＡＣＡＴＧＡＧＧＧＧＧＧＣＣＡＧ ＧＴＧＴＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＧＧＡＴＧＣＴＡＡＴＴ ＣＧＡＣＡＧＣＣＣＴＴＴＧＣＧＡＴＣＧＧＣＧＧＴＴＣＣＧＧＡ ＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＣＡ ＧＣＴＴＡＴＡＡＡＣＣＡＧＧＣＡＴＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＧＡＧ ＴＧＣＣＧＧＣＧＴＴＴＣＡＣＣＡＣＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＡＣＴ ＣＴＧＧＣＣＡＴＧＡＡＣＣＧＡＧＡＴＧＧＣＴＣＣＡＧＴＧＧＧ ＧＧＴＧＴＣＡＴＣＴＡＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＣＡＧＣＴ ＧＡＴＧＧＴＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＡ ＧＡＣＧＡＧＣＴＧＣＣＡＡＡＡＴＴＣＴＡＣＧＡＴＧＡＧ8. The gene of the rat proteasome component RING12 according to claim 7, which contains a base sequence represented by the following formula (8) in the molecule. Equation (8) ATGCTGCAAGCCGGAGCACCTACCGCCGGC TCTTTCCGGACGGGAGAAGTCCACACCGGG ACAACCATCATGGCTGTGGAATTTGACGGG GGTGTCGTGGTGGGCTCTGATTCCCGAGTG TCAGCGGGAGCAGCCGTAGTGAACCGCGTG TTTGACAAGCTCTCCCCTCTGCACCAGCGC ATCTACTGTGCCCTCTCGGGTTCCGCTGCT GATGCCCAAGCCATAGCCGACATGGCCGCC TACCAGCTGGAGCTGCACGGGTTGGAACTG GAGGAGCCGCCCCTTGTTCTGGCTGCTGCA AACATAGTGAAGAACATCTCCTACA GTAC CGCGAGGACTTGTTAGCGCATCTCATGGTA GCTGGTTGGGACCAACATGAGGGGGGCCAG GTGTATGGAACCATGGGAGGGATGCTAATT CGACAGCCCTTTGCGATCGGCGGTTCCGGA AGCACCTATATTTACGGTTATGTGGACGCA GCTTATAAACCAGGCATGACCCCCGAGGAG TGCCGGCGTTTCACCACAGACGCCATCACT CTGGCCATGAACCGAGATGGCTCCAGTGGG GGTGTCATCTACCTGGTCACCATTACAGCT GATGGTGTGGACCATCGCGTCATCCTGGGA GACGAGCTGCCAAAATTCTACGATG G 【請求項９】 請求項２記載の遺伝子を含有する適宜の
ベクターを構築し、当該ベクターで常法により形質転換
された適宜の形質転換体を培養して、請求項１記載のポ
リペプチドを生成させることを特徴とする当該ポリペプ
チドの製造方法。9. An appropriate vector containing the gene according to claim 2 is constructed, and an appropriate transformant transformed with the vector by a conventional method is cultured to produce the polypeptide according to claim 1. And a method for producing the polypeptide. 【請求項１０】 請求項４記載の遺伝子を含有する適宜
のベクターを構築し、当該ベクターで常法により形質転
換された適宜の形質転換体を培養して、請求項３記載の
ポリペプチドを生成させることを特徴とする当該ポリペ
プチドの製造方法。10. An appropriate vector containing the gene of claim 4 is constructed, and an appropriate transformant transformed with the vector by a conventional method is cultured to produce the polypeptide of claim 3. And a method for producing the polypeptide. 【請求項１１】 請求項６記載の遺伝子を含有する適宜
のベクターを構築し、当該ベクターで常法により形質転
換された適宜の形質転換体を培養して、請求項５記載の
ポリペプチドを生成させることを特徴とする当該ポリペ
プチドの製造方法。11. An appropriate vector containing the gene according to claim 6 is constructed, and an appropriate transformant transformed with the vector by a conventional method is cultured to produce the polypeptide according to claim 5. And a method for producing the polypeptide. 【請求項１２】 請求項８記載の遺伝子を含有する適宜
のベクターを構築し、当該ベクターで常法により形質転
換された適宜の形質転換体を培養して、請求項７記載の
ポリペプチドを生成させることを特徴とする当該ポリペ
プチドの製造方法。12. A polypeptide according to claim 7 is produced by constructing an appropriate vector containing the gene according to claim 8 and culturing an appropriate transformant transformed with the vector by a conventional method. And a method for producing the polypeptide.