JPH05312806A - Detection device for hemoglobin in feces - Google Patents
Detection device for hemoglobin in fecesInfo
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- JPH05312806A JPH05312806A JP6568692A JP6568692A JPH05312806A JP H05312806 A JPH05312806 A JP H05312806A JP 6568692 A JP6568692 A JP 6568692A JP 6568692 A JP6568692 A JP 6568692A JP H05312806 A JPH05312806 A JP H05312806A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、糞便中のヒトヘモグロ
ビン（以下、ヒトＨｂとよぶ）を検出するための装置に
関する。さらに詳しくは、消化管の腫瘍性機転を引き起
こす疾患などの診断および治療上重要である、便潜血検
出のための装置に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an apparatus for detecting human hemoglobin (hereinafter referred to as human Hb) in feces. More specifically, the present invention relates to a device for detecting fecal occult blood, which is important for diagnosis and treatment of diseases causing a neoplastic mechanism of the digestive tract.
【０００２】[0002]
【従来の技術】以前は、糞便中の潜血の検出の方法とし
て、Ｈｂのペルオキシダーゼ様作用を利用した非特異的
な検出法が用いられていた。しかし、この方法は食肉中
のヘモグロビンやその他の物質によっても反応が陽性と
なるため、検査前の厳しい食事制限が必要なうえ、正確
度にも問題があった。2. Description of the Related Art Previously, as a method for detecting occult blood in feces, a non-specific detection method utilizing the peroxidase-like action of Hb was used. However, this method had a positive reaction due to hemoglobin and other substances in the meat, which required severe dietary restrictions before the test and had a problem with accuracy.
【０００３】近年、抗ヒトＨｂ抗体によるヒトＨｂの免
疫学的測定法（バロウズ(Barrows)、アメリカン ジャ
ーナル オブ クリニカル パソロジー(Am. J. Cli. P
athol.) 69 342-346,1978 参照）が開発されて以来、食
事制限を必要としない糞便中の潜血の検出法がつぎつぎ
と開発されている。In recent years, an immunological assay method for human Hb using anti-human Hb antibody (Barrows, American Journal of Clinical Pathology (Am. J. Cli. P
athol.) 69 342-346, 1978), a method for detecting occult blood in feces that does not require dietary restriction has been successively developed.
【０００４】特開昭５６−１０６１５４号公報では、サ
ンドイッチＥＩＡまたは競合的ＥＩＡなどによりＨｂを
検出する方法が述べられている。これらの方法は非常に
高感度かつ特異的であるという利点を有する。しかし、
その反面操作手順が多く煩雑で、測定には長時間を要す
るため、使用者の熟練が必要であり、使用する場面も限
られたものとなるという欠点を有する。Japanese Unexamined Patent Publication No. 56-106154 describes a method for detecting Hb by sandwich EIA or competitive EIA. These methods have the advantage of being very sensitive and specific. But,
On the other hand, it has many drawbacks in that the operation procedure is many and complicated, and that the measurement requires a long time, so that the skill of the user is required and the usage scene is limited.
【０００５】特開昭５９−１２５０６４号公報では、抗
Ｈｂ抗体感作ラテックスを用いた免疫学的ラテックス凝
集反応によるＨｂの検出方法が記載されている。この方
法は、操作が簡便であるという利点を有する。しかし、
反応時間を厳守しないばあいは正確さに問題があり、判
定が肉眼によるラテックスの凝集の有無の確認により行
なわれるため紛らわしく、集団検診などの多検体同時処
理には適さないという欠点を有する。また、便懸濁液を
スライド板上で反応させなくてはならないため、使用者
に臭気、不潔感などの不快感を与えるという欠点も有す
る。JP-A-59-125064 describes a method for detecting Hb by an immunological latex agglutination reaction using an anti-Hb antibody-sensitized latex. This method has the advantage that the operation is simple. But,
If the reaction time is not strictly adhered to, there is a problem in accuracy, and it is confusing because the determination is made by checking the presence or absence of latex agglutination with the naked eye, and there is the disadvantage that it is not suitable for simultaneous treatment of multiple specimens such as group examination. In addition, since the stool suspension must be reacted on the slide plate, there is a drawback in that the user feels unpleasant such as odor and uncleanness.
【０００６】これに関して、特開平１−１６１１５２号
公報では、抗Ｈｂ抗体で感作したラテックスによる凝集
反応を光学的に検出する自動化した機械について述べら
れている。この方法では、Ｈｂを定量的に測定でき判定
の紛らわしさはなくなり、また自動化により操作性、作
業者の不快さの点でも改善された。しかし、機械自体非
常に高価なものとなり、集団検診用として多検体処理す
る際には適しているが、家庭および医院で少ない検体数
を測定するには不向きである。In this regard, Japanese Patent Laid-Open No. 1611152/1990 describes an automated machine for optically detecting an agglutination reaction by a latex sensitized with an anti-Hb antibody. According to this method, Hb can be quantitatively measured and the ambiguity of the determination is eliminated, and automation has improved the operability and the discomfort of the operator. However, the machine itself becomes very expensive and is suitable for processing a large number of samples for mass screening, but is not suitable for measuring a small number of samples at home and in a doctor's office.
【０００７】特開昭５９−１８２３６７号および特開昭
６１−２２８３５１号公報には、便に直接スティックま
たはサジを接触させてヒトＨｂを吸着させ洗浄したの
ち、これを特異的反応に付す方法が記載されている。ま
た、特開昭６０−１７３４７１号公報には、抗Ｈｂ抗体
を固定化した濾紙上に便を適用し、洗浄する方法が記載
されている。しかし、これらの方法はいずれも洗浄およ
び発色などの操作を必要とし、煩雑であるという欠点を
有する。JP-A-59-182367 and JP-A-61-228351 disclose a method in which a stick or a saji is directly contacted with stool to adsorb human Hb to wash it and then subject it to a specific reaction. Have been described. Further, JP-A-60-173471 describes a method of applying stool on a filter paper on which an anti-Hb antibody is immobilized and washing. However, all of these methods require operations such as washing and coloring, and have the drawback of being complicated.
【０００８】特開平２−１４１６６５号公報には、抗Ｈ
ｂモノクロナール抗体を感作した金コロイド粒子の凝集
による色調の変化により検出する方法について記載され
ている。この方法は、結果の安定性、判定の容易性、操
作の簡便性の点ですぐれているが、反応時間が数10分と
長くかかるという欠点がある。Japanese Patent Laid-Open No. 2-141665 discloses an anti-H
It describes a method for detecting a monoclonal antibody by a change in color tone due to aggregation of gold colloid particles sensitized. This method is excellent in stability of results, easiness of judgment, and easiness of operation, but has a drawback that the reaction time is as long as several tens of minutes.
【０００９】[0009]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、家庭におい
ても糞便中の潜血を測定できるよう、操作、判定の容易
性および判定結果の安定性を兼ね備え、さらに作業者の
不快感を除いた、操作が容易で短時間にヒトＨｂを検出
しうる安価な装置を提供することを目的とする。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention has a combination of operation, easiness of judgment and stability of judgment result so that the occult blood in feces can be measured even at home, and the discomfort of an operator is eliminated. It is an object of the present invention to provide an inexpensive device that is easy to operate and can detect human Hb in a short time.
【００１０】[0010]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
に鑑み鋭意検討を重ねた結果、ヒトＨｂ検出において、
試料中のヒトＨｂと特異的に結合する抗体をクロマトグ
ラフ媒体に組み込んだサンドイッチイムノアッセイと、
反応・未反応成分の分離のためのクロマトグラフをあわ
せて行なうイムノクロマトグラフ法を、ヒトＨｂと抗体
との凝集反応による妨害を受けない一定条件下で行なわ
せる装置により目的が達成されることを見出し本発明を
完成するに至った。Means for Solving the Problems As a result of intensive studies in view of the above-mentioned objects, the present inventors have found that in the detection of human Hb,
A sandwich immunoassay in which an antibody that specifically binds to human Hb in a sample is incorporated into a chromatographic medium,
It has been found that an object can be achieved by an apparatus that allows an immunochromatographic method, in which a chromatograph for separating reaction and unreacted components is combined, to be performed under constant conditions that are not hindered by an agglutination reaction between human Hb and an antibody. The present invention has been completed.
【００１１】本発明は、着色粒子により標識化された、
試料中のヒトヘモグロビンと特異的に結合する第１の抗
体が含浸された部位（１）、同じく試料中のヒトヘモグ
ロビンと特異的に結合する第２の抗体が固定化された反
応部位（２）を有する多孔性マトリックスよりなるクロ
マトグラフ媒体（３）からなる便懸濁液試料中のヒトヘ
モグロビンの有無を判定するための検出装置であって、
第１の抗体が含浸された部位（１）と第２の抗体が固定
化された反応部位（２）との距離が0.5cm 以上４cm以下
である装置に関する。The present invention is labeled with colored particles,
A site impregnated with a first antibody that specifically binds to human hemoglobin in a sample (1), and a reaction site (2) similarly immobilized with a second antibody that specifically binds to human hemoglobin. A detection device for determining the presence or absence of human hemoglobin in a stool suspension sample consisting of a chromatographic medium (3) consisting of a porous matrix having
The present invention relates to a device in which the distance between the site (1) impregnated with the first antibody and the reaction site (2) on which the second antibody is immobilized is 0.5 cm or more and 4 cm or less.
【００１２】つぎに本発明の装置について説明する。Next, the device of the present invention will be described.
【００１３】本発明の装置は、第１の抗体が含浸された
部位（１）および第２の抗体が固定化された反応部位
（２）を有するクロマトグラフ媒体（３）からなる装置
である。The device of the present invention is a device comprising a chromatographic medium (3) having a site (1) impregnated with a first antibody and a reaction site (2) on which a second antibody is immobilized.
【００１４】本発明の第１の抗体としては、ヒトＨｂに
対するモノクローナル抗体が用いられる。第２の抗体と
しては、ヒトＨｂと特異的に結合しうる抗体であれば、
とくに限定されない。A monoclonal antibody against human Hb is used as the first antibody of the present invention. As the second antibody, an antibody capable of specifically binding to human Hb,
There is no particular limitation.
【００１５】第１の抗体は、着色粒子により標識化され
る。この標識化に用いられる着色粒子は肉眼により検出
しうる粒子であればとくに限定されないが、好ましく
は、たとえば金コロイドなどの金属コロイドまたは着色
ラテックスが用いられる。該粒子の大きさは、通常直径
約20〜300nm の範囲であるが、それ以外の大きさの粒子
も用いうる。The first antibody is labeled with colored particles. The colored particles used for this labeling are not particularly limited as long as they are particles that can be detected by the naked eye, but metal colloid such as gold colloid or colored latex is preferably used. The size of the particles is usually in the range of about 20 to 300 nm in diameter, but particles of other sizes can be used.
【００１６】このような粒子による第１の抗体の標識化
は、着色粒子表面への抗体の吸着により行なうことがで
きる。たとえば着色粒子として金コロイドを用いるばあ
い、抗体と金コロイドとをすみやかに混合し、１〜２分
インキュベーションしたのち、そこへ非特異的な凝集を
防ぐためにポリエチレングリコールまたは牛血清アルブ
ミンなどを加える。ついで、高速で遠心分離して上清を
吸引除去する。えられた沈殿をポリエチレングリコール
または牛血清アルブミンなどを含有する緩衝液に再懸濁
して、遠心処理により残っている標識化されていない抗
体を除くことにより、着色粒子により標識化された抗体
がえられる（ジョージガン（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ）ら、
ジャーナル オブ イムノロジカル メソッズ（Ｊ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ）３４，１１−２１，１
９８０など参照）。Labeling of the first antibody with such particles can be carried out by adsorption of the antibody onto the surface of the colored particles. For example, when gold colloid is used as the colored particles, the antibody and the gold colloid are mixed rapidly and incubated for 1 to 2 minutes, and then polyethylene glycol or bovine serum albumin is added thereto to prevent non-specific aggregation. Then, it is centrifuged at high speed to remove the supernatant by suction. The obtained precipitate is resuspended in a buffer solution containing polyethylene glycol or bovine serum albumin, and the unlabeled antibody remaining after centrifugation is removed to obtain an antibody labeled with colored particles. (Georghegan et al.,
Journal of Immunological Methods (JI
mmunol Methods) 34, 11-21, 1
980, etc.).
【００１７】着色粒子により標識化された第１の抗体
は、クロマトグラフ媒体の一部分に含浸・乾燥されてい
てもよいし、またはクロマトグラフ媒体とは別の繊維の
多孔性マトリックスに含浸・乾燥され、該マトリックス
がクロマトグラフ媒体と接触させられていてもよい。こ
のようなマトリックスとしては、好ましくは不織布また
はフェルトなどが用いられる。The first antibody labeled with the colored particles may be impregnated and dried in a part of the chromatographic medium, or may be impregnated and dried in a porous matrix of fibers separate from the chromatographic medium. , The matrix may be contacted with a chromatographic medium. A non-woven fabric or felt is preferably used as such a matrix.
【００１８】第２の抗体は、クロマトグラフ媒体の一定
の部位に固定化される。The second antibody is immobilized at a fixed site on the chromatographic medium.
【００１９】固定化の方法は、クロマトグラフ媒体の種
類によって異なるが、通常の濾紙、ガラスフィルター、
ナイロンメンブレンなどのばあい、抗体はまずラテック
ス粒子と結合される。使用するラテックス粒子はフィル
ターの目の大きさ（保留粒子径）よりも大きな粒子径の
ものを用いるか、小さな粒子径のものを凝集させて用い
る。The method of immobilization depends on the type of chromatographic medium, but it is usually a filter paper, glass filter,
In the case of nylon membranes, the antibody is first bound to latex particles. As the latex particles to be used, those having a particle diameter larger than the mesh size (retention particle diameter) of the filter are used, or those having a small particle diameter are aggregated and used.
【００２０】第２の抗体とラテックス粒子とを結合させ
た固相ラテックスは通常の方法により行なわれ調製され
る。たとえば、抗体とラテックスエマルジョンを室温で
約２時間インキュベーションし、ついで牛血清アルブミ
ンなどを含有する緩衝液を加え、遠心分離する。えられ
た沈殿を同じ緩衝液により１〜３回、懸濁・遠心分離操
作を行なうことにより洗浄し、ラテックス粒子と結合さ
れた抗体、すなわち固相ラテックスがえられる。The solid phase latex in which the second antibody and the latex particles are bound is prepared by an ordinary method. For example, the antibody and the latex emulsion are incubated at room temperature for about 2 hours, then a buffer solution containing bovine serum albumin or the like is added, and the mixture is centrifuged. The obtained precipitate is washed with the same buffer solution one to three times by performing suspension / centrifugation operations to obtain an antibody bound to the latex particles, that is, a solid phase latex.
【００２１】ラテックス粒子と結合された抗体は、前記
緩衝液に懸濁された状態で、スポッティングまたは直接
噴射印刷されることにより固定化される。The antibody bound to the latex particles is fixed in the state of being suspended in the buffer solution by spotting or direct jet printing.
【００２２】一方、ニトロセルロースメンブレンやある
種の活性化されたメンブレンでは、抗体溶液をそのまま
スポッティングまたは直接噴射印刷されることにより固
定化される。On the other hand, in a nitrocellulose membrane or some kind of activated membrane, the antibody solution is fixed as it is by spotting or direct jet printing.
【００２３】第２の抗体が固定化される部位は以下に述
べる理由から、クロマトグラフ媒体上に、第１の抗体が
含浸された部位から下流方向に0.5cm 以上４cm以下、好
ましくは0.5cm 以上２cm以下の距離にあることが必要で
ある。すなわち、ヒトＨｂはαおよびβ各２つのサブユ
ニットからなる４量体であるという特殊な構造を有する
ため、１つのヘモグロビンあたり同一の抗原決定基を２
つずつ有することになる。このため第１の抗体としてモ
ノクローナル抗体を用いてもクロマトグラフ媒体中で、
ヒトＨｂ・標識化抗体結合物が凝集塊を形成し、展開不
能となってしまう。しかし、標識化抗体と反応部位との
距離が４cm以下、とくに２cm以下であるばあいは、ヒト
Ｈｂ・標識化抗体結合物は凝集塊の成長により展開が不
能となる以前にすみやかに展開されて固定化抗体に捕捉
されることが見出されたのである。一方、0.5cm より短
い距離のばあいは、第１の抗体が、抗原（ヒトＨｂ）と
接触し、第２の抗体に達するまでの時間が短く、つまり
は抗原抗体反応に要する充分な時間がえられないため
に、充分な感度がえられない。したがって0.5cm 以上の
距離が必要である。The site on which the second antibody is immobilized is 0.5 cm or more and 4 cm or less, preferably 0.5 cm or more, in the downstream direction from the site impregnated with the first antibody on the chromatographic medium for the reason described below. Must be less than 2 cm. That is, since human Hb has a special structure of being a tetramer composed of two subunits each of α and β, two identical antigenic determinants per hemoglobin are present.
You will have one by one. Therefore, even if a monoclonal antibody is used as the first antibody in the chromatographic medium,
The human Hb-labeled antibody conjugate forms an aggregate and becomes undeployable. However, when the distance between the labeled antibody and the reaction site is 4 cm or less, particularly 2 cm or less, the human Hb-labeled antibody conjugate is rapidly expanded before the expansion becomes impossible due to the growth of aggregates. It was found to be captured by the immobilized antibody. On the other hand, when the distance is shorter than 0.5 cm, the time required for the first antibody to contact the antigen (human Hb) and reach the second antibody is short, that is, the sufficient time required for the antigen-antibody reaction. I can't get enough sensitivity. Therefore, a distance of 0.5 cm or more is necessary.
【００２４】本発明の装置において用いられるクロマト
グラフ媒体は、便懸濁液試料を展開できるものであれば
とくに限定されないが、試料の吸着がなく、均一で速い
展開速度がえられるため、ガラスフィルターがとくに好
ましい。このクロマトグラフ媒体の多孔性マトリックス
は短冊状に成型して用いる。The chromatographic medium used in the apparatus of the present invention is not particularly limited as long as it can develop a fecal suspension sample, but since it does not adsorb the sample and a uniform and fast developing speed can be obtained, it is a glass filter. Is particularly preferable. The porous matrix of this chromatographic medium is molded into a strip and used.
【００２５】本発明の装置は、便懸濁液試料を装置に適
用する際に、試料を一時的に吸収、濾過するためのサン
プルパッド（４）を有していてもよい。このようなサン
プルパッドとしては、繊維の多孔性マトリックス、好ま
しくは不織布またはフェルトなどをクロマト展開に必要
なサンプル量を保持できる程度の大きさにしたものが用
いられる。該サンプルパッドは、第１の抗体含浸部位と
該部位の下流側で一部重復してクロマトグラフ媒体上に
位置する。このサンプルパッドにより便懸濁液が濾過さ
れるため、事前に便中に含まれる繊維などの不溶物を除
く操作が不要となる。The device of the present invention may have a sample pad (4) for temporarily absorbing and filtering the stool suspension sample when it is applied to the device. As such a sample pad, a porous matrix of fibers, preferably a non-woven fabric, felt, or the like sized to hold a sample amount necessary for chromatographic development is used. The sample pad is located on the chromatographic medium by partially overlapping the first antibody-impregnated site and the downstream side of the site. Since the stool suspension is filtered by this sample pad, it is not necessary to previously remove the insoluble matter such as fibers contained in the stool.
【００２６】本発明の装置は、展開し終えた試料を保持
するための吸水パッド（６）を有していてもよい。この
吸水パッドは、吸水性の高い多孔性マトリックスからな
る。該吸水パッドは展開し終えた試料をすべて保持する
のに充分な大きさを有し、クロマトグラフ媒体の下流末
端と重複して位置する。The device of the present invention may have a water absorbing pad (6) for holding the sample which has been developed. This water absorbent pad is made of a highly water-absorbing porous matrix. The water absorbent pad is large enough to hold all the developed sample and is located overlapping the downstream end of the chromatographic medium.
【００２７】本発明の装置は、ハウジング（５）を有し
ていてもよい。ハウジングは、非浸水性の成形可能な材
質、たとえばポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリエチ
レン、カルプまたはポリプロピレンなどからなり、サン
プルパッド、クロマトグラフ媒体および吸水パッドから
なる装置全体を被い、かつ試料適用部位および第２抗体
固定化部位に窓が設けられている形状を有する。このハ
ウジングを設けることにより、臭気や便懸濁液が漏出す
るのを防ぐことができる。The device of the invention may have a housing (5). The housing is made of a non-water-immersible and moldable material, such as polyvinyl chloride, polystyrene, polyethylene, calp or polypropylene, and covers the entire device including the sample pad, the chromatographic medium and the water absorption pad, and the sample application site and The second antibody immobilization site has a window. By providing this housing, it is possible to prevent leakage of odor and fecal suspension.
【００２８】本発明の装置を用いた便懸濁液中のヒトＨ
ｂの検出は以下のようにして行なわれる。すなわち、第
一の抗体（１）が含浸された部位の側に試験試料を接触
させ、ヒトＨｂを標識化された第一の抗体と反応させ、
形成されたヒトＨｂ・第一抗体・着色粒子複合体をさら
に該クロマトグラフ媒体（３）上で移動させ、固定化さ
れた第二の抗体（２）と反応させ、補足させることによ
り、試料中のヒトＨｂの有無を着色シグナルとして表現
する。反応部位に着色シグナルが現われるか否かによっ
て、試料中のヒトＨｂの有無を判定することができる。
ここで、便を懸濁するための溶媒は、とくに限定されな
いが、たとえば0.1 重量％牛血清アルブミン含有リン酸
緩衝生理食塩水などが用いられる。Human H in stool suspension using the device of the invention
The detection of b is performed as follows. That is, a test sample is brought into contact with the side impregnated with the first antibody (1), and human Hb is reacted with the labeled first antibody,
In the sample, the formed human Hb / first antibody / colored particle complex is further moved on the chromatographic medium (3) to react with the immobilized second antibody (2) to capture the complex. The presence or absence of human Hb is expressed as a coloring signal. The presence or absence of human Hb in the sample can be determined by whether or not a colored signal appears at the reaction site.
Here, the solvent for suspending the feces is not particularly limited, but, for example, 0.1 wt% bovine serum albumin-containing phosphate buffered saline or the like is used.
【００２９】[0029]
【実施例】つぎに実施例に基づいて本発明をさらにくわ
しく説明するが、本発明はもとよりこれらに限られるも
のではない。The present invention will be described in more detail based on the following examples, but the invention is by no means limited to these.
【００３０】実施例 （ヒトＨｂのイムノクロマトグラフィーによるアッセ
イ） （ａ）固相ラテックスの調製 市販ラテックスエマルジョン（積水化学工業株式会社
製、Ｎ−４５０）を固形分濃度が0.6 重量％となるよう
リン酸緩衝生理食塩水（以下「ＰＢＳ」という）により
希釈した。その１mlと、ヒトＨｂに対するウサギ抗体を
濃度100 μｇ／mlとしたもの１mlとをエッペンドルフ遠
沈管に採り、室温で２時間インキュベーションしてラテ
ックス粒子にウサギ抗体を感作させた。ついで濃度0.1
重量％のウシ血清アルブミン（以下「ＢＳＡ」という）
を含有するＰＢＳを用いて３回、8000Ｇにて10分間遠心
沈降処理によって洗浄し、最終的に２mlとなるよう再懸
濁することにより、固相ラテックスを調製した。Example (Human Hb Immunochromatographic Assay) (a) Preparation of Solid Phase Latex Commercially available latex emulsion (N-450, manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd.) was added with phosphoric acid to a solid concentration of 0.6% by weight. It was diluted with buffered saline (hereinafter referred to as "PBS"). 1 ml thereof and 1 ml of a rabbit antibody against human Hb at a concentration of 100 μg / ml were placed in an Eppendorf centrifuge tube and incubated at room temperature for 2 hours to sensitize the latex particles with the rabbit antibody. Then the concentration 0.1
Weight% bovine serum albumin (hereinafter referred to as "BSA")
A solid phase latex was prepared by washing 3 times with PBS containing EDTA at 8000 G for 10 minutes by centrifugation and resuspending it to a final volume of 2 ml.
【００３１】（ｂ）金コロイド粒子の調製 金コロイド粒子の調製は、ジー フレンス(G. Frens)の
方法（ネイチャー フィジカルサイエンス(NATURE PHYS
ICALSCIENCE) 241 Jan.1 1973 年参照）にしたがった。
すなわち、濃度0.01重量％の塩化金水溶液200ml を沸騰
させ、これに濃度１重量％のクエン酸ナトリウム水溶液
２mlを加えた。溶液の色が薄い黄色から紫色あるいは赤
色に変わるまで加熱沸騰を行なうことにより、平均粒子
径が0.04μｍの金コロイド分散液を調製した。(B) Preparation of Gold Colloidal Particles Gold colloidal particles are prepared by the method of G. Frens (Nature Physical Science).
ICALSCIENCE) 241 Jan.1 1973).
That is, 200 ml of an aqueous solution of gold chloride having a concentration of 0.01% by weight was boiled and 2 ml of an aqueous solution of sodium citrate having a concentration of 1% by weight was added thereto. A gold colloidal dispersion having an average particle diameter of 0.04 μm was prepared by heating and boiling the solution until the color of the solution changed from pale yellow to purple or red.
【００３２】（ｃ）金コロイド粒子標識抗体の調製 金濃度が0.01重量％である前記の金コロイド分散液を１
Ｍ炭酸カリウム溶液を用いてｐＨを6.7 に調製した。こ
れにヒトＨｂに対するモノクロナール抗体を、金コロイ
ド分散液１mlあたり５μｇとなる割合で加えた。１〜２
分後、その10mlに濃度10重量％のＢＳＡを0.1ml 加え、
10,200Ｇで１時間遠心沈降処理して上清を除去し、ＢＳ
Ａを濃度0.1 重量％で含有するＰＢＳを用いて３回、10
200 Ｇにて１時間遠心沈降処理により洗浄し、金コロイ
ド粒子標識された第１の抗体を調製した。これを前記Ｐ
ＢＳ10mlに再分散させ、0.1ml を５×10mmのベンリーゼ
不織布（商品名、旭化成工業株式会社製）に含浸させ凍
結乾燥した。(C) Preparation of colloidal gold particle-labeled antibody 1 part of the above gold colloidal dispersion having a gold concentration of 0.01% by weight was prepared.
The pH was adjusted to 6.7 with M potassium carbonate solution. Monoclonal antibody against human Hb was added thereto at a rate of 5 μg per 1 ml of gold colloidal dispersion. 1-2
After 10 minutes, 0.1 ml of 10 wt% BSA was added to the 10 ml,
Remove the supernatant by centrifugation at 10,200G for 1 hour
10 times with PBS containing A at a concentration of 0.1% by weight, 10 times
It was washed by centrifugation at 200 G for 1 hour to prepare a gold colloid particle-labeled first antibody. This is the above P
It was redispersed in 10 ml of BS, 0.1 ml was impregnated with a 5 × 10 mm Benlyse nonwoven fabric (trade name, manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd.) and freeze-dried.
【００３３】（ｄ）クロマトグラフ媒体の調製 市販ガラスフィルター（アドバンテック東洋製、ＧＣ−
５０）より10×100mmの膜ストリップを裁断し、これを
ガラス板上に置き、取り扱いやすくするために粘着テー
プにより固定した。ストリップの端から0.2 、0.5 、1.
0 、2.0 、3.0、4.0 または5.0cm の位置に、アキュラ
ジェッター液体噴射装置（商品名、ノードソン社製）お
よびＸＹテーブルエアロステージ（商品名、ＴＨＫ社
製）を用いて、展開方向に垂直に、すなわちストリップ
の短辺と平行に固相ラテックス１μｌを10mmの長さに噴
射印刷した。(D) Preparation of chromatographic medium Commercially available glass filter (Advantech Toyo, GC-
From 50), a 10 × 100 mm membrane strip was cut, placed on a glass plate and fixed with adhesive tape for easy handling. 0.2, 0.5, 1. from the end of the strip.
At a position of 0, 2.0, 3.0, 4.0 or 5.0 cm, an acurajetter liquid jetting device (trade name, manufactured by Nordson Co.) and an XY table aero stage (trade name, manufactured by THK Co., Ltd.) are used in a direction perpendicular to the deployment direction. That is, 1 μl of solid phase latex was jet-printed to a length of 10 mm in parallel with the short side of the strip.
【００３４】（ｅ）装置の組立 10×120mm の粘着シート上に前記クロマトグラフストリ
ップを、横幅10mmを揃えて、ラテックスを噴射印刷した
部位より遠い方の端をそろえて置き、さらにその上に３
方の端をそろえて10×40mmの濾紙（ワットマン製、17Ｃ
ｈｒ）を重ね、テープでとめた。もう一方の前記のクロ
マトグラフストリップの端には、前記の金コロイド標識
抗体含有不織布が2.5mm 重なるように置いた。さらに前
記の金コロイド標識抗体含有不織布に2.5mm 重なるよう
に、サンプルパッドとして10×20mmのベンリーゼ不織布
を置いた。(E) Assembly of the device The chromatographic strip was placed on a 10 × 120 mm pressure-sensitive adhesive sheet with a width of 10 mm aligned, and the end farthest from the area where latex was jet-printed was aligned, and further placed on it.
10 × 40mm filter paper (made by Whatman, 17C
hr) were stacked and taped. On the other end of the above-mentioned chromatographic strip, the gold colloid-labeled antibody-containing nonwoven fabric was placed so as to overlap by 2.5 mm. Further, a 10 × 20 mm Benlyse nonwoven fabric was placed as a sample pad so as to overlap with the gold colloid-labeled antibody-containing nonwoven fabric by 2.5 mm.
【００３５】（ｆ）ヒトＨｂ含有試料の調製 ヒトＨｂ（シグマ製）を、濃度0.1 重量％のＢＳＡを含
有するＰＢＳにより希釈して、ヒトＨｂ濃度がそれぞれ
0.1 、1.0 、10および100 μｇ／mlのヒトＨｂ含有試料
を調製した。(F) Preparation of Human Hb-Containing Sample Human Hb (manufactured by Sigma) was diluted with PBS containing 0.1% by weight of BSA to obtain human Hb concentrations of
Samples containing human Hb at 0.1, 1.0, 10 and 100 μg / ml were prepared.
【００３６】（ｇ）アッセイ 前記のヒトＨｂ含有試料200 μｌまたはブランクとして
濃度0.1 重量％のＢＳＡを含有するＰＢＳ200 μｌを前
記（ｅ）においてえられた装置のサンプルパッドに滴下
し、当該試料を展開させた。５分間の経過後、反応部位
におけるラインの有無を観察した。(G) Assay 200 μl of the above-mentioned human Hb-containing sample or 200 μl of PBS containing 0.1% by weight of BSA as a blank was dropped on the sample pad of the device obtained in (e) above to develop the sample. Let After 5 minutes, the presence or absence of a line at the reaction site was observed.
【００３７】反応部位に何も現われなかったばあいを
−、わずかにラインが認められるばあいを±、ラインが
認められるばあいを＋およびはっきりとしたラインが認
められるばあいを＋＋と評価した。結果を表１に示す。When nothing appeared at the reaction site, it was evaluated as-, when a slight line was recognized as ±, when a line was recognized as + and when a clear line was recognized as ++. .. The results are shown in Table 1.
【００３８】[0038]
【表１】 [Table 1]
【００３９】表１より以下のことがわかる。すなわち、
標識化抗体含浸部位と反応部位との距離が5.0cm のばあ
い、試料中のＨｂ濃度が10μｇ／ml以上になると反応部
位におけるラインがあいまいになり、Ｈｂ濃度が100 μ
ｇ／ml以上では陰性の結果が出てしまう。一方、標識化
抗体含浸部位と反応部位との距離が0.2cm のばあい、試
料中のＨｂ濃度が１μｇ／mlでは反応部位におけるライ
ンが少しあいまいになる。これに対して、標識化抗体含
浸部位と反応部位との距離が0.5cm 以上4.0cm以下であ
るときは、試料中の幅広い濃度範囲において安定な判定
結果がえられる。The following can be seen from Table 1. That is,
When the distance between the labeled antibody-impregnated site and the reaction site is 5.0 cm, the line at the reaction site becomes ambiguous when the Hb concentration in the sample is 10 μg / ml or more, and the Hb concentration is 100 μm.
Negative results are obtained at g / ml and above. On the other hand, when the distance between the labeled antibody-impregnated site and the reaction site is 0.2 cm, the line at the reaction site becomes a little vague when the Hb concentration in the sample is 1 μg / ml. On the other hand, when the distance between the labeled antibody-impregnated portion and the reaction portion is 0.5 cm or more and 4.0 cm or less, stable determination results can be obtained in a wide concentration range in the sample.
【００４０】[0040]
【発明の効果】本発明により、家庭でも短時間で容易に
安定な判定結果がえられ、しかも作業者の不快感をなく
した簡便なＨｂ検出装置が提供される。As described above, the present invention provides a simple Hb detecting device which can easily obtain a stable determination result in a short period of time even at home and which eliminates the discomfort of an operator.
【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]
【図１】本発明の装置の平面図である。FIG. 1 is a plan view of the device of the present invention.
【図２】サンプルパッドと吸水パッドを備えた本発明の
装置の平面図である。FIG. 2 is a plan view of an apparatus of the present invention including a sample pad and a water absorption pad.
【図３】図２の装置の側面図である。3 is a side view of the device of FIG.
【図４】ハウジングを備えた本発明の装置の平面図であ
る。FIG. 4 is a plan view of the device of the present invention with a housing.
【図５】図４の装置の側面の断面図である。5 is a side cross-sectional view of the device of FIG.
１ 標識化抗体含浸部位 ２ 反応部位 ３ クロマトグラフ媒体 ４ サンプルパッド ５ ハウジング ６ 吸水パッド ７ 粘着シート 1 labeled antibody impregnation site 2 reaction site 3 chromatographic medium 4 sample pad 5 housing 6 water absorption pad 7 adhesive sheet
Claims (5)
ヒトヘモグロビンと特異的に結合する第１の抗体が含浸
された部位（１）および同じく試料中のヒトヘモグロビ
ンと特異的に結合する第２の抗体が固定化された反応部
位（２）を有する多孔性マトリックスよりなるクロマト
グラフ媒体（３）からなる便懸濁液試料中のヒトヘモグ
ロビンの有無を判定するための検出装置であって、第１
の抗体が含浸された部位（１）と第２の抗体が固定化さ
れた反応部位（２）との距離が0.5cm 以上４cm以下であ
る装置。1. A site (1) impregnated with a first antibody which is labeled with colored particles and which specifically binds to human hemoglobin in a sample, and a first antibody which also specifically binds to human hemoglobin in a sample. A detection device for determining the presence or absence of human hemoglobin in a stool suspension sample consisting of a chromatographic medium (3) consisting of a porous matrix having a reaction site (2) to which the antibody 2 is immobilized, First
An apparatus in which the distance between the antibody-impregnated site (1) and the reaction site (2) on which the second antibody is immobilized is 0.5 cm or more and 4 cm or less.
ッドからなる請求項１記載の装置。2. The device according to claim 1, wherein the impregnated portion of the first antibody comprises a non-woven pad.
ーからなる請求項１または２記載の装置。3. The device according to claim 1, wherein the porous matrix comprises a glass filter.
料を一時的に吸収、濾過するためのサンプルパッド
（４）を有する請求項１、２または３記載の装置。4. A device according to claim 1, 2 or 3 having a sample pad (4) for temporarily absorbing and filtering the stool suspension sample when it is applied to the device.
ハウジング（５）を有する請求項１、２、３または４記
載の装置。5. Device according to claim 1, 2, 3 or 4, comprising a housing (5) for preventing the stool suspension sample from leaking out.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06568692A JP3448071B2 (en) | 1992-03-24 | 1992-03-24 | Fecal hemoglobin detection device |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06568692A JP3448071B2 (en) | 1992-03-24 | 1992-03-24 | Fecal hemoglobin detection device |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002164922A Division JP3544968B2 (en) | 2002-06-05 | 2002-06-05 | Human hemoglobin detector |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05312806A true JPH05312806A (en) | 1993-11-26 |
| JP3448071B2 JP3448071B2 (en) | 2003-09-16 |
Family
ID=13294146
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06568692A Expired - Lifetime JP3448071B2 (en) | 1992-03-24 | 1992-03-24 | Fecal hemoglobin detection device |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3448071B2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003511697A (en) * | 1999-10-12 | 2003-03-25 | コンネクス・ゲゼルシャフト・ツーア・オプティミエルング・フォン・フォルシュング・ウント・エントヴィックルング・エムベーハー | Rapid immunochromatographic test for detecting acid-resistant microorganisms in stool |
-
1992
- 1992-03-24 JP JP06568692A patent/JP3448071B2/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003511697A (en) * | 1999-10-12 | 2003-03-25 | コンネクス・ゲゼルシャフト・ツーア・オプティミエルング・フォン・フォルシュング・ウント・エントヴィックルング・エムベーハー | Rapid immunochromatographic test for detecting acid-resistant microorganisms in stool |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3448071B2 (en) | 2003-09-16 |
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