JPH05310746A - Antibacterial antibiotic t-2636 compounds and their production - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide the new compound useful for the therapy of infectious diseases as a lankacidin group antibiotic. CONSTITUTION:T-2636P,Q,R,T,U of formula I (R<1> is O, OH, group of formula II; R<2> is H, OH; R<3> is H, COCH3) or their salts. The compounds are obtained by culturing a fungus belonging to the genus Streptomyces and capable of producing the T-2636 compounds to produce and accumulate the antibiotic in the cultured solution. The aqueous solution containing the antibiotic is mixed with a cyclodextrin compound (e.g. B-CyD), purified with an adsorptive resin and collected. The T-2636 compounds exhibit a strong antibacterial property against gram-positive bacteria including multiple-resistant bacteria.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は病原微生物による感染症
の治療剤として有用な新規化合物に関する。さらに詳し
くは、本発明はランカシジン（Lankacidin）群抗生物質
に属する新規化合物を感染症治療剤として応用するもの
である。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel compound useful as a therapeutic agent for infectious diseases caused by pathogenic microorganisms. More specifically, the present invention is to apply a novel compound belonging to the Lankacidin group antibiotics as a therapeutic agent for infectious diseases.

【０００２】[0002]

【従来の技術】ランカシジン群抗生物質は、微生物たと
えばストレプトミセス・ロチエイ・バール・ボルビリス
（Streptomyces rochei var. volubilis）（ＡＴＣＣ−
２１２５０，ＦＥＲＭ Ｐ−６１５５，ＩＦＯ １２５
０７）に代表される特開昭５８−１７９４９６号公報に
記載の菌により生産されるか、該菌の生産物から微生物
学的〔特開昭５９−１８３６９５および６３−２４５６
８３号公報など〕または化学的手法で変換されることに
よって製造される下記一般式〔II〕,〔III〕および〔I
V〕で表される１７員環抗生物質の総称で、抗生物質Ｔ
−２６３６とも称される。これらの抗生物質およびエス
テル誘導体の製造法，物性，構造式，生体内運命，生物
活性などについては、武田研究所報，第４１巻，第８１
〜１１３頁（１９８２年）に総説として記載されてい
る。BACKGROUND OF THE INVENTION lankacidin group of antibiotics, microorganisms, for example, Streptomyces Rochiei Barr Borubirisu (Streptomyces rochei var. Volubilis) ( ATCC-
21250, FERM P-6155, IFO 125
No. 07), which is produced by the bacterium described in JP-A-58-179496, or from the product of the bacterium, microbiological [JP-A-59-183695 and 63-2456].
No. 83, etc.] or the following general formulas [II], [III] and [I] produced by conversion by a chemical method.
V] is a generic term for 17-membered ring antibiotics, and the antibiotic T
Also referred to as -2636. Regarding the manufacturing method, physical properties, structural formula, in vivo fate, biological activity, etc. of these antibiotics and ester derivatives, Takeda Research Institute, Vol. 41, No. 81.
~ 113 (1982) as a review article.

【化４】 [Chemical 4]

【化５】 [Chemical 5]

【化６】 [Chemical 6]

【０００３】[0003]

【発明が解決しようとする課題】細菌によって惹起され
る疾病は抗生物質投与による治療法の発達によってかな
り克服されている。しかし、従来の抗生物質を長期ある
いは大量に投与することによる起因菌の変化（菌交代現
象）あるいは耐性菌の出現（耐性化現象）は現在の感染
症医療分野で大きな問題となっている。これらの問題を
克服するために、当分野では常に新しいタイプの感染症
治療剤が求められている。Diseases caused by bacteria have been largely overcome by the development of therapeutic regimens by antibiotic administration. However, the change of the causative bacteria (bacterial replacement phenomenon) or the emergence of resistant bacteria (resistance phenomenon) due to long-term or large-scale administration of conventional antibiotics has become a major problem in the current medical field of infectious diseases. In order to overcome these problems, there is a constant need in the art for new types of therapeutic agents for infectious diseases.

【０００４】[0004]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる現
状に鑑みて、新たな観点から研究を重ねた結果、Strept
omyces rochei var. volubilis に代表される特開昭５
８−１７９４９６号公報に記載の微生物が、新規抗菌性
抗生物質を産生していることを見い出し，脂溶性中性区
分からＴ−２６３６ＰおよびＲを，脂溶性酸性区分から
Ｔ−２６３６ＴおよびＵを単離した。さらに、Streptom
yces rochei var. volubilis の発酵液中に存在する酵
素によって、Ｔ−２６３６ＰおよびＲの１４位が脱アセ
チル化したＴ−２６３６ＱおよびＳを得た。以上述べた
化合物の物理化学的および生物学的性質から、該化合物
が天然物としては全て新規物質であることを確かめた。
本発明者らは、これらの知見に基づいてさらに研究を重
ね、本発明を完成した。すなわち本発明は、（１）下記
式〔I〕で示される抗菌性抗生物質Ｔ−２６３６Ｐ，
Ｑ，Ｒ，ＴあるいはＵ，またはそれらの塩、（２）スト
レプトミセス属に属し、下記式〔I〕で示される抗菌性
抗生物質Ｔ−２６３６Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，ＴあるいはＵを
生産しうる菌を培地に培養し、培養物中に該抗生物質の
一種または二種以上を生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする抗菌性抗生物質Ｔ−２６３６Ｐ，Ｑ，
Ｒ，Ｓ，ＴあるいはＵの製造法、（３）抗菌性抗生物質
Ｔ−２６３６Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，ＴあるいはＵを採取する
工程において、該抗生物質を含有する水溶液中にシクロ
デキストリン系化合物を添加し、吸着性樹脂を用いて、
該水溶液から該抗生物質を精製することを特徴とする上
記（２）項に記載の製造法、および（４）ランカシジン
群抗生物質を含有する水溶液中にシクロデキストリン系
化合物を添加し、吸着性樹脂を用いて、該水溶液からラ
ンカシジン群抗生物質を採取することを特徴とするラン
カシジン群抗生物質の精製法に関する。Means for Solving the Problems In view of the present situation, the present inventors have conducted research from a new perspective, and as a result, Strept
Japanese Patent Laid- Open No. 5 represented by omyces rochei var. volubilis
It was found that the microorganism described in Japanese Patent Publication No. 8-179496 produces novel antibacterial antibiotics, and T-2636P and R from the fat-soluble neutral category and T-2636T and U from the fat-soluble acidic category were isolated. Released. In addition, Streptom
Enzymes present in the fermentation liquor of yces rochei var. volubilis gave T-2636Q and S in which the 14-position of T-2636P and R was deacetylated. From the physicochemical and biological properties of the compounds described above, it was confirmed that the compounds were all novel substances as natural products.
The present inventors have conducted further research based on these findings and completed the present invention. That is, the present invention provides (1) an antibacterial antibiotic T-2636P represented by the following formula [I],
Q, R, T or U, or a salt thereof, (2) Producing an antibacterial antibiotic T-2636P, Q, R, S, T or U represented by the following formula [I] , An antibacterial antibiotic T-2636P, Q, characterized in that one or more kinds of the antibiotics are produced and accumulated in the culture, and the collected bacteria are collected.
Method for producing R, S, T or U, (3) In the step of collecting antibacterial antibiotic T-2636P, Q, R, S, T or U, a cyclodextrin compound in an aqueous solution containing the antibiotic Is added, and using the adsorptive resin,
The production method according to the above item (2), characterized in that the antibiotic is purified from the aqueous solution, and (4) a cyclodextrin compound is added to an aqueous solution containing a lancacidin group antibiotic to obtain an adsorptive resin. The present invention relates to a method for purifying a lancacidin group antibiotic, which comprises collecting a lancacidin group antibiotic from the aqueous solution using

【化７】 （ａ）Ｔ−２６３６Ｐ：上記式〔I〕中、Ｒ¹はＯを示
し、Ｒ²はＯＨを示し、Ｒ³は−ＣＯＣＨ₃を 示す。 （ｂ）Ｔ−２６３６Ｑ：上記式〔I〕中、Ｒ¹はＯを示
し、Ｒ²はＯＨを示し、Ｒ³は−Ｈを示す。 （ｃ）Ｔ−２６３６Ｒ：上記式〔I〕中、Ｒ¹はＨおよび
ＯＨ（２'位はＲ（rectus）を示す）を示し、Ｒ²はＨを
示し、Ｒ³は−ＣＯＣＨ₃を示す。 （ｄ）Ｔ−２６３６Ｔ：[Chemical 7] (A) T-2636P: In the above formula [I], R ¹ represents O, R ² represents OH, and R ³ represents —COCH ₃ . (B) T-2636Q: In the above formula [I], R ¹ represents O, R ² represents OH, and R ³ represents —H. (C) T-2636R: In the above formula [I], R ¹ represents H and OH (the 2 ′ position represents R (rectus)), R ² represents H, and R ³ represents —COCH ₃ . .. (D) T-2636T:

【化８】 （ｅ）Ｔ−２６３６Ｕ：[Chemical 8] (E) T-2636U:

【化９】 （ｆ）Ｔ−２６３６Ｓ：上記式〔I〕中、Ｒ¹はＨおよび
ＯＨ（２'位はＲ（rectus）を示す）を示し、Ｒ²はＨを
示し、Ｒ³は−Ｈを示す。（Ｔ−２６３６ＴおよびＵは
２'，５''−位のジアステレオマーである。） 本件の抗菌性抗生物質を得るためには、例えば特開昭５
８−１７９４９６号公報などに記載されているＴ−２６
３６類抗生物質を生産しうる菌（Ｔ−２６３６Ｐ，Ｑ，
Ｒ，Ｓ，ＴあるいはＵを生産しうる菌を含む）であれば
いずれの菌を用いても良いが、なかでもストレプトミセ
ス属菌が好ましく、特に Streptomycesrochei var. vol
ubilis の１菌株を用いて発酵させると最も効率的にＴ
−２６３６類を含む培養液が得られる。[Chemical 9] (F) T-2636S: In the above formula [I], R ¹ represents H and OH (the 2 ′ position represents R (rectus)), R ² represents H, and R ³ represents —H. (T-2636T and U are diastereomers at the 2 ′, 5 ″ -position.) To obtain the antibacterial antibiotic of the present invention, for example, Japanese Patent Laid-Open Publication No.
T-26 described in, for example, JP-A-8-179496
Bacteria capable of producing 36 class antibiotics (T-2636P, Q,
Any bacterium can be used as long as it includes a bacterium capable of producing R, S, T or U), but Streptomyces bacterium is particularly preferable, and Streptomyces rochei var. Vol .
Fermentation with one ubilis strain was most efficient
A culture solution containing -2636s is obtained.

【０００５】培養物から目的とする化合物Ｔ−２６３６
類の各成分を採取する方法を以下に述べる。該化合物は
脂溶性を示すため、この性質を利用する一般的手段を用
いればよい。培養物中Ｔ−２６３６類は主としてろ液中
に含まれるので、まず培養液をｐＨ１.５ないし１１，
好ましくはｐＨ３ないし７に調整後、ろ過助剤を加えて
ろ過、あるいは遠心分離によって菌体を除去し、得られ
た培養ろ液に水と混和しない有機溶媒（たとえば、クロ
ロホルム、酢酸エチル、メチルイソブチルケトンあるい
はイソブタノールなど）を加え、Ｔ−２６３６類を抽出
する。抽出液を重曹水および水で洗浄後、有機溶媒層を
濃縮するとＴ−２６３６類の中性脂溶性成分を含有する
粗物質が得られる。また、重曹水溶液を再び酸性（ｐＨ
２ないし３）とし有機溶媒で抽出すると酸性脂溶性成分
が得られる。この粗物質をさらに精製し、純粋なＴ−２
６３６類の各成分を得るには種々のクロマトグラフィー
法が有利に用いられる。担体としてはシリカゲル、結晶
セルロース、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア
社製、スウェーデン）などが用いられ、これらは通常カ
ラムクロマトグラフィー法で行なわれる。カラムから活
性物質を溶出するには適当な有機溶媒（たとえば、ｎ−
ヘキサン、クロロホルム、トルエン、酢酸エチル、ジク
ロロエタン、アセトン、メタノールなど）が単独で、あ
るいは混合して用いられる。Compound of interest T-2636 from culture
The method of collecting each component of the class is described below. Since the compound exhibits lipophilicity, general means utilizing this property may be used. Since T-2636s in the culture are mainly contained in the filtrate, the culture broth was first adjusted to pH 1.5 to 11,
After adjusting the pH to 3 to 7, preferably, a filter aid is added to filter or centrifuge to remove the cells, and the obtained culture filtrate contains an organic solvent immiscible with water (eg, chloroform, ethyl acetate, methyl isobutyl). Ketone or isobutanol) is added to extract T-2636s. The extract is washed with aqueous sodium hydrogen carbonate and water and then the organic solvent layer is concentrated to obtain a crude substance containing a neutral fat-soluble component of T-2636. In addition, the sodium bicarbonate solution is acidified (pH
The acidic fat-soluble component is obtained by extraction with 2 to 3) with an organic solvent. This crude material was further purified to give pure T-2.
Various chromatographic methods are advantageously used to obtain each component of the 636 class. As the carrier, silica gel, crystalline cellulose, Sephadex LH-20 (Pharmacia, Sweden) and the like are used, and these are usually carried out by a column chromatography method. To elute the active substance from the column, a suitable organic solvent (for example, n-
Hexane, chloroform, toluene, ethyl acetate, dichloroethane, acetone, methanol, etc.) may be used alone or as a mixture.

【０００６】しかし、この方法は実験室的には適当であ
るが、大量生産には適さない。そこで、本発明者らは、
ランカシジン群抗生物質を含有する水溶液中にシクロデ
キストリン（ＣyＤと略称することもある）系化合物
〔シクロデキストリンまたは親水性シクロデキストリン
誘導体〕（好ましくは、β−ＣyＤ）を添加し、吸着性
樹脂を用いて、該水溶液からランカシジン群抗生物質を
採取する方法を見い出した。すなわち、担体としては吸
着性樹脂、例えば、ダイアイオン ＨＰ−２０およびＳ
Ｐ−２０７（三菱化成社製），アンバーライトＸＡＤ−
ＩおよびII（ローム．アンド．ハース社製，米国）など
が有利に用いられる。担体は適当量のシクロデキストリ
ン系化合物（ＣyＤ類）によってあらかじめ処理され、
通常カラムクロマトグラフィー法で行なわれる。カラム
から活性物質を溶出するには、適当量のＣyＤ類を含有
する水あるいは適当な有機溶媒（たとえば、アセトン、
アセトニトリルあるいはメタノールなど）と水との混合
溶媒が用いられる。溶出画分の有機溶媒を除去後、水と
混和しない有機溶媒（たとえばクロロホルム、酢酸エチ
ル、メチルイソブチルケトンまたはブタノールなど）で
目的物を抽出する。抽出液を水で洗浄後、有機溶媒層を
濃縮すると目的物を含有する粗結晶が得られる。粗結晶
をさらに精製し、純粋な目的物を得るには再結晶法が有
利に用いられる。再結晶溶媒としては、例えば、ジエチ
ルエーテル、酢酸エチル、アセトン、メタノールあるい
はエタノールなどが有利に用いられる。また、分取用高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によっても精製
することができる。担体としてはオクタデシルシラン
（ＯＤＳ）系およびシリカゲル系のものが有利に用いら
れる。例えばＯＤＳの場合、移動相としてはメタノール
あるいはアセトニトリルと塩類含有水溶液の混合溶液が
有利に用いられる。この場合、化合物の安定化のため
に、適当量のＣyＤ類を添加してもよい。目的物を含む
溶出液を水と混和しない適当な有機溶媒で抽出し、抽出
液を濃縮、残渣を上述の適当な有機溶媒などから結晶化
あるいは粉末化して目的物を得る。However, although this method is suitable for the laboratory, it is not suitable for mass production. Therefore, the present inventors
A cyclodextrin (sometimes abbreviated as CyD) compound (cyclodextrin or hydrophilic cyclodextrin derivative) (preferably β-CyD) was added to an aqueous solution containing a lancacidin group antibiotic, and an adsorptive resin was used. And found a method for collecting Lancacidin group antibiotics from the aqueous solution. That is, as the carrier, an adsorptive resin such as DIAION HP-20 and S
P-207 (manufactured by Mitsubishi Kasei), Amberlite XAD-
I and II (Rohm and Haas Co., USA) are advantageously used. The carrier is pretreated with an appropriate amount of a cyclodextrin compound (CyDs),
Usually, it is carried out by a column chromatography method. To elute the active substance from the column, water containing a suitable amount of CyDs or a suitable organic solvent (eg, acetone,
A mixed solvent of acetonitrile and methanol) and water is used. After removing the organic solvent in the eluted fraction, the target product is extracted with an organic solvent immiscible with water (eg, chloroform, ethyl acetate, methyl isobutyl ketone, butanol, etc.). After washing the extract with water, the organic solvent layer is concentrated to obtain crude crystals containing the desired product. The recrystallization method is advantageously used to further purify the crude crystal to obtain a pure target product. As the recrystallization solvent, for example, diethyl ether, ethyl acetate, acetone, methanol or ethanol is advantageously used. It can also be purified by preparative high performance liquid chromatography (HPLC). As the carrier, octadecylsilane (ODS) type and silica gel type carriers are advantageously used. For example, in the case of ODS, a mixed solution of methanol or acetonitrile and a salt-containing aqueous solution is advantageously used as the mobile phase. In this case, an appropriate amount of CyDs may be added to stabilize the compound. The eluate containing the desired product is extracted with a suitable organic solvent immiscible with water, the extract is concentrated, and the residue is crystallized or powdered from the aforementioned suitable organic solvent to obtain the desired product.

【０００７】本明細書におけるシクロデキストリン系化
合物とは、非修飾型のα−，β−，γ−またはδ−Ｃｙ
Ｄ（PHARM TECH JAPAN, ４，１８３−１８８（１９８
８），Anegew. Chem. Int. Ed. Engl., １９，３４４−
３６２（１９８０）等参照）、およびシクロデキストリ
ンに種々の有機化合物を結合させ、水溶性などをさらに
増大させた修飾型のシクロデキストリンなどを指す。後
者は、親水性シクロデキストリン誘導体とも称される。
非修飾型のＣｙＤの中では、β−ＣｙＤが好ましく、親
水性シクロデキストリン誘導体としては、ランカシジン
群抗生物質を包接しうる親水性のＣyＤ誘導体であれば
いずれでもよいが、なかでもβ−シクロデキストリンの
親水性誘導体が好ましく、例えば水酸基で置換されてい
てもよい炭素数１〜４のアルキル基１〜３個で修飾され
たシクロデキストリン〔例、ジメチル（ＤＭ）−β−Ｃ
yＤ，トリメチル（ＴＭ）−β−ＣyＤなどのアルキル化
シクロデキストリン、ヒドロキシエチル（ＨＥ）−β−
ＣyＤ，２−ヒドロキシプロピル（２−ＨＰ）−β−Ｃy
Ｄ，３−ヒドロキシプロピル（３−ＨＰ）−β−ＣyＤ
などのヒドロキシアルキル化シクロデキストリンな
ど〕，糖残基なかでもグリコシル基１〜６個（とりわ
け、１〜２個）で修飾されたシクロデキストリン〔例、
グリコシル（Ｇ₁）−β−ＣyＤ，マルトシル（Ｇ₂）−
β−ＣyＤ，ジマルトシル（（Ｇ₂）₂）−β−ＣyＤなど
の分枝シクロデキストリンなど〕などのエーテル型親水
性シクロデキストリン誘導体が挙げられる。なお、マル
トシル化シクロデキストリンは、ランカシジン群抗生物
質以外の水に難溶性の抗生物質との包接体を形成させる
こともできる。In the present specification, the cyclodextrin compound is an unmodified α-, β-, γ- or δ-Cy.
D (PHARM TECH JAPAN, 4 , 183-188 (198
8), Anegew. Chem. Int. Ed. Engl., 19 , 344-.
362 (1980), etc.), and modified cyclodextrins in which various organic compounds are bound to cyclodextrins to further increase water solubility and the like. The latter is also called a hydrophilic cyclodextrin derivative.
Among the unmodified CyDs, β-CyD is preferable, and the hydrophilic cyclodextrin derivative may be any hydrophilic CyD derivative capable of including a Lancacidin group antibiotic, and among them, β-cyclodextrin is particularly preferable. Is preferred, for example, cyclodextrin modified with 1 to 3 alkyl groups having 1 to 4 carbon atoms which may be substituted with a hydroxyl group [eg, dimethyl (DM) -β-C
Alkylated cyclodextrins such as yD, trimethyl (TM) -β-CyD, hydroxyethyl (HE) -β-
CyD, 2-hydroxypropyl (2-HP) -β-Cy
D, 3-Hydroxypropyl (3-HP) -β-CyD
Such as hydroxyalkylated cyclodextrin], cyclodextrin modified with 1 to 6 (particularly 1 to 2) glycosyl groups among sugar residues [eg,
Glycosyl (G ₁ ) -β-CyD, maltosyl (G ₂ )-
β-CyD, dimaltosyl ((G ₂ ) ₂ ) -β-CyD and other branched cyclodextrins] and the like, and ether type hydrophilic cyclodextrin derivatives. The maltosylated cyclodextrin can also form an inclusion body with a poorly water-soluble antibiotic other than the Lancacidin group antibiotics.

【０００８】本件の抗菌性抗生物質の培養液中には、ラ
ンカシジン群抗生物質のＣ−１４位をエステル化および
脱アシル化する酵素が生産されており、１４−位に水酸
基を有する化合物はエステル体に、１４−位にエステル
基を有する化合物は脱エステル体に変換されうる。例え
ば、Ｔ−２６３６ＰおよびＱ，またはＴ−２６３６Ｒお
よびＳはこの酵素によってアシル基の授受を行ない、相
互に変換される。なお、これらエステル変換の反応条件
などは文献〔ジャーナル．オブ．アンチビオテクス（J.
Antibiotics），２６巻，６４７頁，１９７３年〕中に
記載されている。In the culture solution of the antibacterial antibiotic of the present invention, an enzyme for esterifying and deacylating the C-14 position of the Lancacidin group antibiotics is produced, and a compound having a hydroxyl group at the 14-position is an ester. A compound having an ester group at the 14-position can be converted to a deesterified product. For example, T-2636P and Q, or T-2636R and S exchange acyl groups by this enzyme and are converted to each other. The reaction conditions for these ester conversions are described in the literature [Journal. of. Antibiotex (J.
Antibiotics), 26, 647, 1973].

【０００９】次に、Ｔ−２６３６類の各成分の高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）上の保持時間（Ｒt）
は〔表１〕に示す通りである。Next, the retention time (Rt) of each component of T-2636s on high performance liquid chromatography (HPLC).
Is as shown in [Table 1].

【表１】 また、各成分の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）上の
Ｒf値は〔表２〕に示す通りである。[Table 1] The Rf values of each component on thin layer chromatography (TLC) are as shown in [Table 2].

【表２】 [Table 2]

【００１０】後述の実施例によって得られたＴ−２６３
６Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ．ＴおよびＵの物理化学的性状を以下
に示す。なお、 呈色反応は全てのサンプルでＴ−２６３
６Ｐと同じである。Ｔ−２６３６Ｐ (１)外観：白色粉末 (２)旋光度：−１９７°（ｃ ０.５５, EtOH）（２４
℃） (３)分子量：m／z ５１７（Ｍ⁺），（ＥＩ マス．スペ
クトルより） (４)元素分析値：（％）（水分１モルとして計算） 実測値：Ｃ，60.80； Ｈ，7.04； Ｎ，2.48 計算値：Ｃ，60.55； Ｈ，6.96； Ｎ，2.62； Ｏ，2
9.87 (５)分子式：Ｃ₂₇Ｈ₃₅ＮＯ₉（５１７） (６)紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：ＭeＯＨ中， 極大値：２２８nm （ε５０,８００） (７)赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル：KBr錠剤中，主な
吸収を示す（波数,cm^-1） 3400, 1730, 1710, 1680, 1510, 1360, 1250, 1050, 10
20, 970（〔図１〕参照） (８)¹³Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５MHz, d
₆-DMSO中，δppm 210.5(s), 196.4(s), 170.1(s), 169.4(s), 159.6(s),
140.2(d),137.6(s), 134.8(d), 134.6(d), 133.1(s), 1
29.9(d), 125.0(d),124.5(d), 77.2(d), 74.4(d), 7
1.7(d), 71.3(d), 56.1(s),51.3(d), 45.7(d), 33.
7(t), 24.4(q), 21.0(q), 20.3(q),12.8(q), 12.2
(q), 8.9(q) （〔図２〕参照） (９)呈色反応： 陽性；リンモリブデン酸，硫酸，過マンガン酸カリウ
ム，よう素 陰性；坂口，ドラーゲンドルフT-263 obtained by the examples described below
6P, Q, R, S. The physicochemical properties of T and U are shown below. The color reaction was T-263 for all samples.
It is the same as 6P. T-2636P (1) Appearance: White powder (2) Optical rotation: -197 ° (c 0.55, EtOH) (24
(° C) (3) Molecular weight: m / z 517 (M ⁺ ), (from EI mass spectrum) (4) Elemental analysis value: (%) (calculated as 1 mol of water content) Actual value: C, 60.80; H, 7.04 N, 2.48 Calculated: C, 60.55; H, 6.96; N, 2.62; O, 2
9.87 (5) Molecular formula: C ₂₇ H ₃₅ NO ₉ (517) (6) Ultraviolet absorption (UV) spectrum: Maximum value in MeOH: 228 nm (ε50,800) (7) Infrared absorption (IR) spectrum: KBr Main absorption in tablets (wavenumber, cm ^-1 ) 3400, 1730, 1710, 1680, 1510, 1360, 1250, 1050, 10
20, 970 (See [Fig. 1]) (8) ¹³ C Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectrum: 75MHz, d
_6- DMSO, δppm 210.5 (s), 196.4 (s), 170.1 (s), 169.4 (s), 159.6 (s),
140.2 (d), 137.6 (s), 134.8 (d), 134.6 (d), 133.1 (s), 1
29.9 (d), 125.0 (d), 124.5 (d), 77.2 (d), 74.4 (d), 7
1.7 (d), 71.3 (d), 56.1 (s), 51.3 (d), 45.7 (d), 33.
7 (t), 24.4 (q), 21.0 (q), 20.3 (q), 12.8 (q), 12.2
(q), 8.9 (q) (See [Fig.2]) (9) Color reaction: positive; phosphomolybdic acid, sulfuric acid, potassium permanganate, iodine negative; Sakaguchi, Dragendorff

【００１１】Ｔ−２６３６Ｑ (１)外観：白色粉末 (２)旋光度：−１７４°（ｃ ０.３５, EtOH）（２５
℃） (３)分子量：m／z ４７６（Ｍ＋Ｈ）⁺，（ＳＩ マス．
スペクトルより） (４)元素分析値：（％）（水分０.２５モルとして計
算） 実測値：Ｃ，62.71； Ｈ，7.53； Ｎ，2.77 計算値：Ｃ，62.55； Ｈ，7.03； Ｎ，2.92； Ｏ，2
7.50 (５)分子式：Ｃ₂₅Ｈ₃₃ＮＯ₈（４７５） (６)ＵＶスペクトル：ＭeＯＨ中， 極大値：２２８nm （ε４７,３００） (７)ＩＲスペクトル：ＫＢr錠剤中，主な吸収を示す
（波数,cm^-1） 3400, 1740, 1710, 1680, 1640, 1510, 1360, 1260, 10
50, 1010, 970（〔図３〕参照） (８)¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５MHz, d₆-DMSO中，δ
ppm 211.0(s), 196.5(s), 170.2(s), 159.6(s), 137.5(s),
135.6(d),134.6(d), 133.6(s), 132.5(d), 131.3(d), 1
30.0(d), 124.5(d),77.4(d), 74.9(d), 71.8(d), 6
7.8(d), 56.0(s), 51.1(d),45.7(d), 37.1(t), 24.
4(q), 20.3(q), 13.0(q), 12.3(q),9.1(q) （〔図
４〕参照） T-2636Q (1) Appearance: White powder (2) Optical rotation: -174 ° (c 0.35, EtOH) (25
(° C.) (3) Molecular weight: m / z 476 (M + H) ⁺ , (SI mass.
(From spectrum) (4) Elemental analysis value: (%) (calculated as 0.25 mol of water content) Actual value: C, 62.71; H, 7.53; N, 2.77 Calculated value: C, 62.55; H, 7.03; N, 2.92 ; O, 2
7.50 (5) Molecular formula: C ₂₅ H ₃₃ NO ₈ (475) (6) UV spectrum: in MeOH, maximum value: 228 nm (ε47,300) (7) IR spectrum: KBr tablets show major absorption (wavenumber , cm ^-1 ) 3400, 1740, 1710, 1680, 1640, 1510, 1360, 1260, 10
50, 1010, 970 (see FIG. 3) (8) ¹³ C NMR spectrum: 75 MHz, in d ₆ -DMSO, δ
ppm 211.0 (s), 196.5 (s), 170.2 (s), 159.6 (s), 137.5 (s),
135.6 (d), 134.6 (d), 133.6 (s), 132.5 (d), 131.3 (d), 1
30.0 (d), 124.5 (d), 77.4 (d), 74.9 (d), 71.8 (d), 6
7.8 (d), 56.0 (s), 51.1 (d), 45.7 (d), 37.1 (t), 24.
4 (q), 20.3 (q), 13.0 (q), 12.3 (q), 9.1 (q) (See [Fig.4])

【００１２】Ｔ−２６３６Ｒ (１)外観：無色針状晶 (２)融点：１６２−１６３℃（dec） (３)旋光度：−２１５°（ｃ ０.４９, EtOH）（２５
℃） (４)分子量：m／z ３９９（Ｍ⁺−ＣＯ₂−ＡcＯ），（Ｅ
Ｉ マス．スペクトルより） (５)元素分析値：（％）（水分０.５モルとして計算） 実測値：Ｃ，63.42； Ｈ，7.45； Ｎ，2.68 計算値：Ｃ，63.26； Ｈ，7.47； Ｎ，2.73； Ｏ，2
6.53 (６)分子式：Ｃ₂₇Ｈ₃₇ＮＯ₈（５０３） (７)ＵＶスペクトル：ＭeＯＨ中， 極大値：２２８nm （ε５２,１００） (８)ＩＲスペクトル：ＫＢr錠剤中，主な吸収を示す
（波数,cm^-1） 3390, 1740, 1710, 1660, 1520, 1450, 1370, 1320, 12
40, 1020, 960（〔図５〕参照） (９)¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５MHz, d₆-DMSO中，δ
ppm 210.6(s), 173.7(s), 170.4(s), 169.4(s), 140.6(d),
136.8(s),134.6(s), 132.8(d), 131.9(d), 130.2(d), 1
25.2(d), 123.9(d),74.3(d), 72.8(d), 71.4(d), 6
7.0(d), 56.3(s), 50.4(d),45.7(d), 37.2(t), 33.
7(t), 21.0(q), 20.7(q), 20.2(q),12.3(q), 11.9
(q), 8.9(q) （〔図６〕参照） T-2636R (1) Appearance: colorless needle crystals (2) Melting point: 162-163 ° C (dec) (3) Optical rotation: -215 ° (c 0.49, EtOH) (25
(° C) (4) Molecular weight: m / z 399 (M ⁺ -CO ₂ -AcO), (E
I trout. (From spectrum) (5) Elemental analysis value: (%) (calculated as water content: 0.5 mol) Actual value: C, 63.42; H, 7.45; N, 2.68 Calculated value: C, 63.26; H, 7.47; N, 2.73 ; O, 2
6.53 (6) Molecular formula: C ₂₇ H ₃₇ NO ₈ (503) (7) UV spectrum: in MeOH, maximum value: 228 nm (ε 52,100) (8) IR spectrum: KBr tablets show major absorption (wavenumber , cm ^-1 ) 3390, 1740, 1710, 1660, 1520, 1450, 1370, 1320, 12
40, 1020, 960 (see [FIG. 5]) (9) ¹³ C NMR spectrum: 75 MHz, in d ₆ -DMSO, δ
ppm 210.6 (s), 173.7 (s), 170.4 (s), 169.4 (s), 140.6 (d),
136.8 (s), 134.6 (s), 132.8 (d), 131.9 (d), 130.2 (d), 1
25.2 (d), 123.9 (d), 74.3 (d), 72.8 (d), 71.4 (d), 6
7.0 (d), 56.3 (s), 50.4 (d), 45.7 (d), 37.2 (t), 33.
7 (t), 21.0 (q), 20.7 (q), 20.2 (q), 12.3 (q), 11.9
(q), 8.9 (q) (See [Fig.6])

【００１３】Ｔ−２６３６Ｓ (１)外観：白色粉末 (２)旋光度：−１８６°（ｃ ０.５７, EtOH）（２５
℃） (３)分子量：m／z ４６２（Ｍ＋Ｈ）⁺，（ＳＩ マス．
スペクトルより） (４)元素分析値：（％）（水分０.５モルとして計算） 実測値：Ｃ，63.60； Ｈ，7.85； Ｎ，2.97 計算値：Ｃ，63.81； Ｈ，7.71； Ｎ，2.98； Ｏ，2
5.50 (５)分子式：Ｃ₂₅Ｈ₃₅ＮＯ₇（４６１） (６)ＵＶスペクトル：ＭeＯＨ中， 極大値：２２７nm （ε４８,９００） (７)ＩＲスペクトル：ＫＢr錠剤中，主な吸収を示す
（波数,cm^-1） 3400, 1740, 1710, 1650, 1520, 1450, 1380, 1270, 10
10, 970（〔図７〕参照） (８)¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５MHz, d₆-DMSO中，δ
ppm 211.1(s), 173.7(s), 170.5(s), 136.7(s), 135.9(d),
135.0(s),132.8(d), 131.9(d), 130.3(d), 127.6(d), 1
25.2(d), 74.9(d),73.0(d), 67.9(d), 67.0(d), 5
6.3(s), 50.2(d), 45.8(d),37.2(t), 37.2(t), 20.
7(q), 20.1(q), 12.3(q), 12.2(q),9.1(q) （〔図
８〕参照） T-2636S (1) Appearance: White powder (2) Optical rotation: -186 ° (c 0.57, EtOH) (25
(° C) (3) Molecular weight: m / z 462 (M + H) ⁺ , (SI mass.
(From spectrum) (4) Elemental analysis value: (%) (calculated as 0.5 mol of water content) Actual value: C, 63.60; H, 7.85; N, 2.97 Calculated value: C, 63.81; H, 7.71; N, 2.98 ; O, 2
5.50 (5) Molecular formula: C ₂₅ H ₃₅ NO ₇ (461) (6) UV spectrum: in MeOH, maximum value: 227 nm (ε48,900) (7) IR spectrum: KBr tablets show major absorption (wavenumber , cm ^-1 ) 3400, 1740, 1710, 1650, 1520, 1450, 1380, 1270, 10
10, 970 (see FIG. 7) (8) ¹³ C NMR spectrum: 75 MHz, in d ₆ -DMSO, δ
ppm 211.1 (s), 173.7 (s), 170.5 (s), 136.7 (s), 135.9 (d),
135.0 (s), 132.8 (d), 131.9 (d), 130.3 (d), 127.6 (d), 1
25.2 (d), 74.9 (d), 73.0 (d), 67.9 (d), 67.0 (d), 5
6.3 (s), 50.2 (d), 45.8 (d), 37.2 (t), 37.2 (t), 20.
7 (q), 20.1 (q), 12.3 (q), 12.2 (q), 9.1 (q) (See [Fig.8])

【００１４】Ｔ−２６３６Ｔ (１)外観：無色結晶 (２)融点：１７２−１７４℃（ｄｅｃ.） (３)旋光度：−１７２°（ｃ ０.６０, EtOH）（２４
℃） (４)分子量：m／z ６５８（Ｍ＋Ｈ）⁺，（ＳＩ マス．
スペクトルより） (５)元素分析値：（％）（水分０.５モルとして計算） 実測値：Ｃ，61.08； Ｈ，6.71； Ｎ，2.05 計算値：Ｃ，61.25； Ｈ，6.65； Ｎ，2.10； Ｏ，3
0.00 (６)分子式：Ｃ₃₄Ｈ₄₃ＮＯ₁₂（６５７） (７)ＵＶスペクトル：ＭeＯＨ中， 極大値：２２８nm （ε５６,６００） (８)ＩＲスペクトル：ＫＢr錠剤中，主な吸収を示す
（波数,cm^-1） 3420, 1760, 1700, 1660, 1530, 1250（〔図９〕参照） (９)¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５MHz, DMSO中，δppm 210.9(s), 173.2(s), 173.0(s), 171.5(s), 170.2(s),
169.4(s),146.1(d), 140.5(d), 137.1(s), 134.5(s), 1
32.7(s), 132.7(d),132.0(d), 130.1(d), 124.9(d), 1
23.9(d), 84.8(d), 74.8(s),74.4(d), 72.8(d), 7
1.4(d), 56.1(s), 50.8(d), 45.7(d),37.2(t), 33.
7(t), 31.2(t), 23.3(q), 21.0(q), 20.3(q),20.3
(t), 12.3(q), 11.9(q), 8.9(q) （〔図１０〕参
照） T-2636T (1) Appearance: colorless crystals (2) Melting point: 172-174 ° C. (dec.) (3) Optical rotation: -172 ° (c 0.60, EtOH) (24
(° C) (4) Molecular weight: m / z 658 (M + H) ⁺ , (SI mass.
(From spectrum) (5) Elemental analysis value: (%) (calculated as 0.5 mol of water) Actual value: C, 61.08; H, 6.71; N, 2.05 Calculated value: C, 61.25; H, 6.65; N, 2.10 ; O, 3
0.00 (6) Molecular formula: C ₃₄ H ₄₃ NO ₁₂ (657) (7) UV spectrum: in MeOH, maximum value: 228 nm (ε56,600) (8) IR spectrum: KBr tablets show major absorption (wavenumber , cm ^-1 ) 3420, 1760, 1700, 1660, 1530, 1250 (see [Fig. 9]) (9) ¹³ C NMR spectrum: 75MHz, in DMSO, δppm 210.9 (s), 173.2 (s), 173.0 (s) ), 171.5 (s), 170.2 (s),
169.4 (s), 146.1 (d), 140.5 (d), 137.1 (s), 134.5 (s), 1
32.7 (s), 132.7 (d), 132.0 (d), 130.1 (d), 124.9 (d), 1
23.9 (d), 84.8 (d), 74.8 (s), 74.4 (d), 72.8 (d), 7
1.4 (d), 56.1 (s), 50.8 (d), 45.7 (d), 37.2 (t), 33.
7 (t), 31.2 (t), 23.3 (q), 21.0 (q), 20.3 (q), 20.3
(t), 12.3 (q), 11.9 (q), 8.9 (q) (See [Fig. 10])

【００１５】Ｔ−２６３６Ｕ (１)外観：無色結晶 (２)融点：１７４−１７６℃（ｄｅｃ.） (３)旋光度：−１４１°（ｃ ０.５４, EtOH）（２４
℃） (４)分子量：m／z ６５８（Ｍ＋Ｈ）⁺，（ＳＩ マス．
スペクトルより） (５)元素分析値：（％） 実測値：Ｃ，61.81； Ｈ，6.63； Ｎ，2.11 計算値：Ｃ，62.09； Ｈ，6.59； Ｎ，2.13； Ｏ，2
9.19 (６)分子式：Ｃ₃₄Ｈ₄₃ＮＯ₁₂（６５７） (７)ＵＶスペクトル：ＭeＯＨ中， 極大値：２２８nm （ε５９,２００） (８)ＩＲスペクトル：ＫＢr錠剤中，主な吸収を示す
（波数,cm^-1） 3400, 1750, 1730, 1710, 1680, 1520, 1240（〔図１
１〕参照） (９)¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル：７５MHz, DMSO中，δppm 210.9(s), 173.2(s), 172.6(s), 172.0(s), 170.3(s),
169.4(s),145.6(d), 140.5(d), 137.0(s), 134.6(s), 1
33.7(s), 132.7(d),132.0(d), 130.1(d), 125.0(d), 12
4.0(d), 84.4(d), 74.4(s),74.4(d), 72.8(d), 71.
4(d), 56.4(s), 50.7(d), 45.7(d),37.3(t), 33.7
(t), 31.3(t), 21.8(q), 21.0(q), 20.5(t),20.2
(q), 12.4(q), 11.9(q), 8.9(q) （〔図１２〕参
照） T-2636U (1) Appearance: colorless crystals (2) Melting point: 174-176 ° C. (dec.) (3) Optical rotation: -141 ° (c 0.54, EtOH) (24
(° C) (4) Molecular weight: m / z 658 (M + H) ⁺ , (SI mass.
(5) Elemental analysis value: (%) Actual value: C, 61.81; H, 6.63; N, 2.11 Calculated value: C, 62.09; H, 6.59; N, 2.13; O, 2
9.19 (6) Molecular formula: C ₃₄ H ₄₃ NO ₁₂ (657) (7) UV spectrum: in MeOH, maximum value: 228 nm (ε 59,200) (8) IR spectrum: KBr tablets show major absorption (wavenumber , cm ^-1 ) 3400, 1750, 1730, 1710, 1680, 1520, 1240 ([Fig. 1
1)) (9) ¹³ C NMR spectrum: 75 MHz, in DMSO, δppm 210.9 (s), 173.2 (s), 172.6 (s), 172.0 (s), 170.3 (s),
169.4 (s), 145.6 (d), 140.5 (d), 137.0 (s), 134.6 (s), 1
33.7 (s), 132.7 (d), 132.0 (d), 130.1 (d), 125.0 (d), 12
4.0 (d), 84.4 (d), 74.4 (s), 74.4 (d), 72.8 (d), 71.
4 (d), 56.4 (s), 50.7 (d), 45.7 (d), 37.3 (t), 33.7
(t), 31.3 (t), 21.8 (q), 21.0 (q), 20.5 (t), 20.2
(q), 12.4 (q), 11.9 (q), 8.9 (q) (See [Fig.12])

【００１６】以上のデータおよびＮＭＲスペクトラムの
詳細な検討などから、上記化合物の構造式は下記と推定
される。From the above data and detailed examination of the NMR spectrum, the structural formula of the above compound is presumed to be as follows.

【化１０】 [Chemical 10]

【化１１】 なお上述したデータから明らかなように，Ｔ−２６３６
Ｋ，ＴおよびＵは２',５''−位のジアステレオマーであ
る（Ｔ−２６３６Ｋについては特開昭５８−５２２８５
号公報参照）。次に、これらの抗生物質の生物活性につ
いて述べる。〔表３〕にＴ−２６３６ＱおよびＳの各種
病原細菌に対する抗菌力を示す。[Chemical 11] As is clear from the above data, T-2636
K, T and U are diastereomers in the 2 ', 5''-position (for T-2636K, JP-A-58-52285).
(See the official gazette). Next, the biological activity of these antibiotics will be described. [Table 3] shows the antibacterial activity of T-2636Q and S against various pathogenic bacteria.

【００１７】[0017]

【表３】 *1 バクト・アンティビオティック・メディウム３（デ
ィフコ・ラボラトリーズ，米国）１７.５ｇ，バクト・
イースト・エキストラクト（ディフコ・ラボラトリー
ズ，米国）５.０ｇ，蒸留水１０００ml（ｐＨ無調製）
からなる培地を用い、接種菌液として約１０⁶ＣＦＵ／m
lを用い、寒天希釈法によって測定した。さらに、Ｔ−
２６３６Ｑの腹腔内投与による急性毒性をマウスを用い
て調べたところ４００mg／kgの投与量でも全く死亡例が
認められなかった。これらのデータから明らかなよう
に、上述したランカシジン群（Ｔ−２６３６）抗生物質
は多剤耐性菌を含むグラム陽性菌に対して強い抗菌性を
示し、ほ乳動物に対する毒性が極めて弱い。従って、該
抗生物質はほ乳類の病原微生物による感染症の治療など
に広く用いることができる。[Table 3] * 1 Bact Antibiotic Medium 3 (Difco Laboratories, USA) 17.5g, Bact
Yeast Extract (Difco Laboratories, USA) 5.0 g, distilled water 1000 ml (no pH adjustment)
About 10 ⁶ CFU / m as inoculum
It was measured by the agar dilution method using l. Furthermore, T-
When the acute toxicity of intraperitoneal administration of 2636Q was examined using mice, no death was observed even at a dose of 400 mg / kg. As is clear from these data, the above-mentioned Lancacidin group (T-2636) antibiotics show strong antibacterial activity against Gram-positive bacteria including multidrug-resistant bacteria, and have extremely weak toxicity to mammals. Therefore, the antibiotic can be widely used for treatment of infectious diseases caused by pathogenic microorganisms in mammals.

【００１８】本発明の化合物を有効成分とする抗菌剤
は、ほ乳類の病原微生物による感染症の予防および治療
薬として有用であり、該化合物を薬理学的に許容される
担体と混合することにより得られる。本剤は、非経口剤
（たとえば、注射剤，点滴剤，液剤，懸濁液剤および坐
剤）あるいは経口剤（たとえば、カプセル剤，錠剤，シ
ロップ剤，散剤および顆粒剤）またはそのほかの医薬と
して適切な剤型で提供できる。非経口剤，例えば注射剤
を製造する際には等張化剤（例、グルコース，ソルビト
ール，マンニトール，塩化ナトリウムなど），保存剤
（例、ベンジルアルコール，クロロブタノール，パラヒ
ドロキシ安息香酸メチルなど），抗凝固剤（例、デキス
トラン硫酸，ヘパリンなど），溶解補助剤（例、シクロ
デキストリン類，ツイーンなど），安定化剤（例、ポリ
エチレングリコール，ポリ乳酸など）などが含まれてい
てもよい。投与に当たっては、これらの抗生物質を慣用
の水性希釈剤中に溶解し、液剤として用いる。希釈剤と
してはぶどう糖水溶液，生理食塩水，リンゲル液，栄養
補給剤液などが含まれる。また、経口剤には添加剤（た
とえば、賦形剤，結合剤，崩壊剤，滑沢剤，着色剤，矯
味剤，安定化剤など）が含まれていてもよい。これらの
製剤は経口的あるいは非経口的に投与され、ヒトに用い
る場合の投与量は対象疾病の種類，程度，患者の年齢な
どで変動し得るが、通常、抗生物質含量として、１日成
人１人当たり約０.１ｇ〜５ｇ、とりわけ０.２ｇ〜２ｇ
が疾患の治療に用いられることが好ましい。The antibacterial agent containing the compound of the present invention as an active ingredient is useful as a preventive and therapeutic agent for infectious diseases caused by pathogenic microorganisms of mammals, and is obtained by mixing the compound with a pharmacologically acceptable carrier. Be done. This drug is suitable as a parenteral agent (eg, injection, drip, solution, suspension and suppository) or oral agent (eg, capsule, tablet, syrup, powder and granule) or other pharmaceuticals. Can be provided in various dosage forms. Parenteral agents such as isotonic agents (eg, glucose, sorbitol, mannitol, sodium chloride) when producing injections, preservatives (eg, benzyl alcohol, chlorobutanol, methyl parahydroxybenzoate, etc.), Anticoagulants (eg, dextran sulfate, heparin, etc.), solubilizing agents (eg, cyclodextrins, tween, etc.), stabilizers (eg, polyethylene glycol, polylactic acid, etc.) and the like may be contained. For administration, these antibiotics are dissolved in a conventional aqueous diluent and used as a solution. Diluents include dextrose aqueous solution, physiological saline, Ringer's solution, nutritional supplement solution, etc. The oral preparation may also contain additives (eg, excipients, binders, disintegrants, lubricants, coloring agents, corrigents, stabilizers, etc.). These preparations are orally or parenterally administered, and when used in humans, the dose may vary depending on the type and degree of target disease, the age of the patient, etc. About 0.1g to 5g per person, especially 0.2g to 2g
Are preferably used for the treatment of diseases.

【００１９】以下実施例によって本発明の内容をさらに
具体的に説明するが、これによって本発明が限定される
ものではない。なお、培地におけるパーセントは、特に
断りのない限り重量／容量パーセント（％）を表す。 実施例１ グルコース３％，プロフロ（トレーダー・オイル社製，
米国）１％，コーン・スチープ・リカー３.５％，硫酸
マグネシウム０.０２％，燐酸第二カリウム０.１％，β
−シクロデキストリン１％，炭酸カルシウム１.５％，
硫酸第二鉄０.０１４％，アクトコール（武田薬品工業
株式会社製）０.０５％からなる培地５０ ０mlを１０％
かせいソーダ水溶液でｐＨ６.５に調整したのち、２リ
ットル容坂 口フラスコに分注し、綿栓をしてから滅菌
した。これにStreptomyces rocheivar. volubilis （Ｉ
ＦＯ−１２５０７）の凍結保存菌を接種したのち、２８
℃で ４８時間往復振盪培養機上で培養した。２００リ
ットル容発酵槽に上記の坂口フラスコ培養培地と同じ組
成の培地７０リットルを調整，滅菌したのち、上記坂口
フラスコ培養液１０mlを接種し、通気量０.５vvm（単位
当たりの毎分の通気容量），撹拌回転数１９０rpmで２
８℃，２４時間培養して種培養とした。２００リ ット
ル容発酵槽にデキストリン１４％，プロフロ０.５％，
コーン・スチープ・ リカー１.５％，コーン・グルテン
・ミール１.５％，脱脂大豆粉培地（商品名，日本大豆
製油社製）２％，硫安０.５％，食塩０.５％，硫酸第一
鉄０.１％，Ｆ ＳアンチフォームＦ−２０（ダウコーニ
ング社製，米国）０.２％，β−ＣyＤ２.４％からなる
培地を、１０％かせいソーダ水溶液でｐＨ７.７に調
整，滅菌することにより、８０リットルの主発酵培地を
調製した。これに、上記種培養液５リットルを移植し、
通気量１vvm，撹拌回転数１９０rpm，温度２４℃で２１
６時間培養した。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereto. The percentage in the medium represents weight / volume percentage (%) unless otherwise specified. Example 1 Glucose 3%, Proflo (trader oil company,
(US) 1%, corn steep liquor 3.5%, magnesium sulfate 0.02%, dibasic potassium phosphate 0.1%, β
-Cyclodextrin 1%, calcium carbonate 1.5%,
10% of 500 ml of a medium consisting of 0.014% ferric sulfate and 0.05% ACTCOL (manufactured by Takeda Pharmaceutical Co., Ltd.)
After adjusting the pH to 6.5 with an aqueous solution of caustic soda, the mixture was dispensed into a 2-liter Sakaguchi flask, covered with a cotton plug, and then sterilized. This in Streptomyces rochei var. Volubilis (I
After inoculating the cryopreserved bacteria (FO-12507), 28
It was cultivated on a reciprocal shaker at 48 ° C. for 48 hours. A 200-liter fermentor was prepared and sterilized with 70 liters of a medium having the same composition as the Sakaguchi flask culture medium described above, and then 10 ml of the Sakaguchi flask culture solution was inoculated to give an aeration volume of 0.5 vvm (aeration volume per minute per unit). ), 2 at a stirring speed of 190 rpm
Seed culture was performed by culturing at 8 ° C. for 24 hours. In a 200-liter fermentor, dextrin 14%, proflo 0.5%,
Corn steep liquor 1.5%, corn gluten meal 1.5%, defatted soybean flour medium (trade name, manufactured by Nippon Soybean Oil Co., Ltd.) 2%, ammonium sulfate 0.5%, salt 0.5%, sulfuric acid A medium containing 0.1% ferrous iron, 0.2% Fs antifoam F-20 (Dow Corning, USA) and 2.4% β-CyD was adjusted to pH 7.7 with 10% caustic soda solution. , 80 liter of main fermentation medium was prepared by sterilization. To this, 5 liters of the above seed culture solution was transplanted,
Aeration rate 1 vvm, stirring speed 190 rpm, temperature 24 ℃ 21
Cultured for 6 hours.

【００２０】実施例２ 実施例１のようにして得られた培養液（１１リットル）
中に水（１０リットル）とβ−ＣyＤ（５６ｇ）を加
え、ハイフロスーパーセル（約１kg，ジョンズ・マンビ
ル社製，米国）を加えてろ過し、ろ液（２１リットル）
を得た。このろ液に酢酸エチル（１０リットル）を加え
て、４０℃で２０分間撹拌したのち、無水酢酸（１００
ml）を添加し、さらに４０℃で２０分間撹拌した。反応
液を遠心分離（２０００×ｇ，１０分）し、酢酸エチル
画分を得た。得られた酢酸エチル画分を８％重炭酸ナト
リウム水溶液（２リットル）および水（２リットル×
２）で洗浄した。かくして得られた抽出液（８.４リッ
トル）を、減圧濃縮し、濃縮液をろ過後、ろ液をさらに
減圧濃縮し、濃縮液（２４０ml）を得た。この濃縮液に
水（４８０m）を加え、減圧濃縮して残留溶媒を除去
し、Ｔ−２６３６Ａの結晶を晶出させた。得られた晶出
液に重炭酸ナトリウム（１９.２ｇ）を加えて、３０℃
で１時間混合しつつ放置する。結晶をろ取後、水（１７
００ml）により洗浄し、結晶を５０℃で４０時間減圧乾
燥して、Ｔ−２６３６Ａを含む粗結晶（６３ｇ）を得
た。Example 2 Culture solution (11 liters) obtained as in Example 1
Water (10 liters) and β-CyD (56 g) were added, Hyflo Supercell (about 1 kg, manufactured by Johns Manville, USA) was added and filtered, and the filtrate (21 liters) was added.
Got Ethyl acetate (10 liters) was added to this filtrate, and the mixture was stirred at 40 ° C. for 20 minutes, and then acetic anhydride (100
ml) was added, and the mixture was further stirred at 40 ° C. for 20 minutes. The reaction solution was centrifuged (2000 xg, 10 minutes) to obtain an ethyl acetate fraction. The resulting ethyl acetate fraction was treated with 8% aqueous sodium bicarbonate solution (2 liters) and water (2 liters x
It was washed in 2). The extract (8.4 liter) thus obtained was concentrated under reduced pressure, the concentrated liquid was filtered, and the filtrate was further concentrated under reduced pressure to obtain a concentrated liquid (240 ml). Water (480 m) was added to this concentrated solution, and the mixture was concentrated under reduced pressure to remove the residual solvent, and crystals of T-2636A were crystallized. Sodium bicarbonate (19.2 g) was added to the obtained crystallized solution, and the temperature was 30 ° C.
Let stand for 1 hour while mixing. After collecting the crystals by filtration, water (17
The crystals were dried under reduced pressure at 50 ° C. for 40 hours to obtain crude crystals (63 g) containing T-2636A.

【００２１】実施例３ 実施例２のようにして得られた粗結晶（５.２ｇ）をシ
リカゲルクロマトグラフィー（５００ml，キーゼルゲル
６０，７０−２３０メッシュ，エー・メルク社製，独）
に付し、トルエン中にアセトンを順次添加した溶出液に
溶出した。４０％アセトン溶出画分を濃縮後、酢酸エチ
ル−エーテルから結晶化し、Ｔ−２６３６Ｒ（２３５m
g）を無色針状晶として得た。この母液の結晶化粉末
（４８５mg）を再びシリカゲルクロマトグラフィー（５
０ml）に付し、トルエン中にアセトンを順次添加した溶
出液にて展開し、２０％アセトン溶出画分よりＴ−２６
３６Ｐの粗物質（１９７mg）を得た。さらに、分取ＨＰ
ＬＣ〔カラム：ＹＭＣ ＰackＤ−ＯＤＳ−５（山村化
学研究所製），溶離液：５０％ ＭeＯＨ／０.０２Ｍり
ん酸緩衝液ｐＨ７.５，流速：１０ml／min〕にて分画
し、活性画分を集め、メタノールを除去後、酢酸エチル
で抽出した。酢酸エチル層を水洗後、無水硫酸ナトリウ
ムで脱水，濃縮し、Ｔ−２６３６Ｐ（１２４mg）を白色
粉末として得た。Example 3 The crude crystal (5.2 g) obtained as in Example 2 was subjected to silica gel chromatography (500 ml, Kieselgel 60, 70-230 mesh, manufactured by A Merck, Germany).
The product was eluted with an eluent obtained by sequentially adding acetone to toluene. The 40% acetone-eluted fraction was concentrated and crystallized from ethyl acetate-ether to give T-2636R (235 m
g) was obtained as colorless needles. The crystallized powder (485 mg) of this mother liquor was again subjected to silica gel chromatography (5
0 ml) and developed with an eluate in which acetone was sequentially added to toluene. T-26 was extracted from the 20% acetone elution fraction.
36P of crude material (197 mg) was obtained. Furthermore, preparative HP
Fractionation with LC [column: YMC Pack D-ODS-5 (manufactured by Yamamura Chemical Laboratory), eluent: 50% MeOH / 0.02 M phosphate buffer pH 7.5, flow rate: 10 ml / min], active fraction The fractions were collected, methanol was removed, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to give T-2636P (124 mg) as a white powder.

【００２２】実施例４ 実施例３で得られたＴ−２６３６Ｐ（２００mg，０.３
８７mmol）をメタノール（２ml）に溶解し、水（８m
l），Streptomyces rochei var. volubilis（ＩＦＯ−
１２５０７）の培養液から調製されたエステラーゼ（４
０mg），β−ＣyＤ（５２０mg，０.４５８mmol）をそれ
ぞれ加え、室温にて３時間撹拌した。反応液をイソブタ
ノール（２００ml×３）で抽出後、イソブタノール層を
水（１００ml×２）で洗浄した。イソブタノール層を濃
縮乾固後、メタノール／ジエチルエーテルから粉末化
し、Ｔ−２６３６Ｑ（７３mg）を白色粉末として得た。Example 4 T-2636P (200 mg, 0.3) obtained in Example 3
87 mmol) was dissolved in methanol (2 ml) and water (8 m
l), Streptomyces rochei var. volubilis (IFO-
12507) esterase (4
0 mg) and β-CyD (520 mg, 0.458 mmol) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. After the reaction solution was extracted with isobutanol (200 ml × 3), the isobutanol layer was washed with water (100 ml × 2). The isobutanol layer was concentrated to dryness and then pulverized from methanol / diethyl ether to obtain T-2636Q (73 mg) as a white powder.

【００２３】実施例５ 実施例３で得られたＴ−２６３６Ｒ（５００mg，０.９
９４mmol）をメタノール（２０ml）に溶解し、水（８０
ml），実施例４に記載のエステラーゼ（１００mg）を加
え、室温にて３時間撹拌した。反応液をイソブタノール
（３００ml×３）で抽出後、イソブタノール層を水洗
（２００ml）した。イソブタノール層を濃縮乾固後、シ
リカゲルクロマトグラフィー（１００ml）に付し、トル
エン中にアセトンを順次添加した溶出液で溶出した。５
０％アセトン溶出画分を濃縮後、ｎ−ヘキサン／酢酸エ
チルより粉末化し、Ｔ−２６３６Ｓ（１７５mg）を白色
粉末として得た。Example 5 T-2636R (500 mg, 0.9) obtained in Example 3
94 mmol) was dissolved in methanol (20 ml) and water (80 mmol) was added.
ml) and esterase (100 mg) described in Example 4 were added, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The reaction solution was extracted with isobutanol (300 ml × 3), and the isobutanol layer was washed with water (200 ml). The isobutanol layer was concentrated to dryness, subjected to silica gel chromatography (100 ml), and eluted with an eluent obtained by sequentially adding acetone to toluene. 5
The 0% acetone-eluted fraction was concentrated and then powdered from n-hexane / ethyl acetate to obtain T-2636S (175 mg) as a white powder.

【００２４】実施例６ グルコース３％，プロフロ１％，コーン・スチープ・リ
カー３.５％，硫酸マグネシウム０.０２％，燐酸第二カ
リウム０.１％，β−ＣyＤ１％，炭酸カルシウム１.５
％，硫酸第二鉄０.０１％，アクトコール０.０５％から
なる培地５００mlを１０％かせいソーダ水溶液でｐＨ
６.８に調整したのち、２リットル容坂口フラスコに分
注し、綿栓をしてからオートクレーブで滅菌した。これ
にStreptomyces rochei var. volubilis （ＩＦＯ−１
２５０７）の凍結保存菌を接種したのち、２８℃で４８
時間往復振盪培養機上で培養した。２００リットル容発
酵槽に上記の坂口フラスコ培養培地と同じ組成の培地７
０リットルを調整，滅菌したのち、上記坂口フラスコ培
養液１０mlを接種し、通気量０.５vvm，撹拌回転数１９
０rpmで２６℃，２４時間培養して種培養とした。２０
０リットル容発酵槽にデキストリン１４％，プロフロ
０.５％，コーン・スチープ・リカー１.３％，コーン・
グルテン・ミール０.５％，脱脂大豆粉培地３％，硫安
０.３％，食塩０.５％，硫酸第一鉄０.１％，ＦＳアン
チフォームＦ−２０ ０.０１％，β−ＣyＤ２.４％か
らなる培地を、１０％かせいソーダ水溶液でｐＨ６.６
に調整，滅菌することにより、１１５リットルの主発酵
培地を調製した。これに上記種培養液５リットルを移植
し、通気量０.５vvm，撹拌回転数１９０〜２３０rpm，
ｐＨ５，温度２５℃で１３８時間培養した。Example 6 Glucose 3%, Proflo 1%, Corn steep liquor 3.5%, Magnesium sulfate 0.02%, Dibasic potassium phosphate 0.1%, β-CyD 1%, Calcium carbonate 1.5
%, Ferric sulfate 0.01%, actocol 0.05%, 500 ml of a medium was added to a 10% caustic soda solution to adjust the pH.
After adjusting to 6.8, the mixture was dispensed into a 2-liter Sakaguchi flask, covered with a cotton plug, and then sterilized by an autoclave. This in Streptomyces rochei var. Volubilis (IFO- 1
2507), after inoculating with the cryopreserved bacteria,
The cells were cultivated on a reciprocal shaking incubator. In a 200 liter fermentor, a medium 7 having the same composition as the above Sakaguchi flask culture medium
After adjusting and sterilizing 0 liter, 10 ml of the above Sakaguchi flask culture solution was inoculated, the aeration rate was 0.5 vvm, and the stirring speed was 19
Seed culture was carried out at 0 rpm at 26 ° C. for 24 hours. 20
In a 0 liter fermenter, dextrin 14%, proflo 0.5%, corn steep liquor 1.3%, corn
Gluten meal 0.5%, defatted soybean flour medium 3%, ammonium sulfate 0.3%, salt 0.5%, ferrous sulfate 0.1%, FS antiform F-20 0.01%, β-CyD2. The pH of the medium containing 0.4% was adjusted to 6.6 with 10% caustic soda solution.
The main fermentation medium of 115 liters was prepared by adjusting and sterilizing. The above seed culture solution (5 liters) was transplanted to this, the aeration rate was 0.5 vvm, the stirring rotation speed was 190 to 230 rpm,
The cells were cultured at pH 5 and a temperature of 25 ° C. for 138 hours.

【００２５】実施例７ 実施例６のように処理して得られた培養液（１２５リッ
トル）に、β−ＣyＤ（３kg），水（１５０リットル）
を加え、１時間撹拌した後、ラジオライトＮo.６００
（昭和化学工業社製）にてろ過した。ろ液（２２５リッ
トル）をメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ，７５リッ
トル×３）で抽出、ＭＩＢＫ層を２％炭酸水素ナトリウ
ム水（５５リットル×２）で、さらに水（７０リットル
×２）で洗浄した。洗ＭＩＢＫ層を濃縮乾固した後、酢
酸エチル（２０リットル）に溶解し、濃縮，酢酸エチル
から結晶化し、Ｔ−２６３６Ｃ（６２８ｇ）を無色結晶
として得た。Example 7 A culture solution (125 liters) obtained by treating as in Example 6 was added with β-CyD (3 kg) and water (150 liters).
Was added and stirred for 1 hour, and then Radiolite No. 600
(Manufactured by Showa Chemical Industry Co., Ltd.). The filtrate (225 liters) was extracted with methyl isobutyl ketone (MIBK, 75 liters x 3), and the MIBK layer was washed with 2% aqueous sodium hydrogen carbonate solution (55 liters x 2) and further with water (70 liters x 2). The washed MIBK layer was concentrated to dryness, dissolved in ethyl acetate (20 liters), concentrated and crystallized from ethyl acetate to obtain T-2636C (628 g) as colorless crystals.

【００２６】実施例８ 実施例７で得たＴ−２６３６Ｃの粗結晶（２１５ｇ，純
度８２％）に、β−ＣyＤ（６５０ｇ），水（１７リッ
トル）を加え、４℃にて１時間撹拌した。ろ紙（Ｎo.
２，東洋濾紙社製）にてろ過後、あらかじめ０.０１Ｍ
β−ＣyＤ水溶液（１４リットル）で処理されたダイヤ
イオンＨＰ−２０（７リットル，三菱化成工業社製）の
カラムクロマトグラフィーに付し、０.０１Ｍβ−ＣyＤ
水溶液（１４リットル）および１０％メタノール／０.
０１Ｍβ−ＣyＤ水溶液（１５リットル）にて水洗後、
６０％メタノール／０.０１Ｍβ−ＣyＤ水溶液（４２リ
ットル）にて溶出した。溶出液を１４リットルにまで濃
縮後、酢酸エチル（５リットル×４）抽出し、酢酸エチ
ル層を水洗（６リットル×３）し、無水硫酸ナトリウム
で脱水した。ろ過後、酢酸エチル層を濃縮すると、Ｔ−
２６３６Ｃが晶出した。これをろ取して粗結晶（１４４
ｇ）が得られた。これを酢酸エチルから再結晶化し、Ｔ
−２６３６Ｃが無色結晶（１３２ｇ）として得られた。 融点 １９７−１９９℃（dec.） 比旋光度：〔α〕_D −２２８°（ｃ ０.５７，Ｍe
ＯＨ）（２７℃） 元素分析：分子式Ｃ₂₅Ｈ₃₃ＮＯ₇ 計算値， Ｃ 65.30 Ｈ 7.20 Ｎ 3.13 実測値， Ｃ 65.34 Ｈ 7.24 Ｎ 3.05 ＵＶ：２２６nm（ε46,800） ＩＲ（KBr）：1750, 1710, 1680cm^{-1 13} Ｃ ＮＭＲ（75MHz）：δppm (DMSO-d₆中)，9.1(q),
12.2(q), 12.3(q),20.3(q), 24.4(q), 37.2(t), 37.2
(t), 45.8(d), 51.1(d), 56.2(s), 67.9(d),72.9(d), 7
5.0(d), 124.0(d), 127.6(d), 130.3(d), 132.3(d), 13
2.5(d),135.1(s), 135.9(d), 137.5(s), 159.5(s), 17
0.2(s), 196.5(s), 211.0(s)Example 8 To the crude crystals of T-2636C (215 g, purity 82%) obtained in Example 7, β-CyD (650 g) and water (17 liters) were added, and the mixture was stirred at 4 ° C. for 1 hour. .. Filter paper (No.
(2, manufactured by Toyo Roshi Kaisha, Ltd.) and then 0.01 M in advance.
It was subjected to column chromatography of Diaion HP-20 (7 liters, manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.) treated with a β-CyD aqueous solution (14 liters) to give 0.01 M β-CyD.
Aqueous solution (14 liters) and 10% methanol / 0.
After washing with 01Mβ-CyD aqueous solution (15 liters),
Elution was performed with 60% methanol / 0.01 M β-CyD aqueous solution (42 liters). The eluate was concentrated to 14 liters, extracted with ethyl acetate (5 liters x 4), the ethyl acetate layer was washed with water (6 liters x 3), and dehydrated with anhydrous sodium sulfate. After filtration, the ethyl acetate layer was concentrated to give T-
2636C crystallized out. This was collected by filtration to give crude crystals (144
g) was obtained. This was recrystallized from ethyl acetate to give T
-2636C was obtained as colorless crystals (132g). Melting point 197-199 ° C (dec.) Specific rotation: [α] _D -228 ° (c 0.57, Me)
OH) (27 ° C.) Elemental analysis: molecular formula C ₂₅ H ₃₃ NO ₇ calculated value, C 65.30 H 7.20 N 3.13 measured value, C 65.34 H 7.24 N 3.05 UV: 226 nm (ε 46,800) IR (KBr): 1750, 1710 , 1680 cm ^{-1 13} C NMR (75 MHz): δppm (in DMSO-d ₆ ), 9.1 (q),
12.2 (q), 12.3 (q), 20.3 (q), 24.4 (q), 37.2 (t), 37.2
(t), 45.8 (d), 51.1 (d), 56.2 (s), 67.9 (d), 72.9 (d), 7
5.0 (d), 124.0 (d), 127.6 (d), 130.3 (d), 132.3 (d), 13
2.5 (d), 135.1 (s), 135.9 (d), 137.5 (s), 159.5 (s), 17
0.2 (s), 196.5 (s), 211.0 (s)

【００２７】実施例９ 実施例２で得られたＴ−２６３６Ａの粗結晶（１０５
ｇ，純度９２％）をメタノール（６００ml）に懸濁し、
β−ＣyＤ（２９６ｇ），水（２.４リットル）を加え、
３７℃にて３０分間撹拌後、実施例４に記載のエステラ
ーゼ（１２.５ｇ）を加え、３７℃で３時間撹拌した。
反応液に水（７.２リットル），β−ＣyＤ（５９.２
ｇ）を加え、さらに３０分間室温にて撹拌した。次に限
外ろ過によりろ 過液（２１リットル）を得た。これを
あらかじめ０.０１Ｍβ−ＣyＤ水溶液（８リットル）で
処理されたダイヤイオンＨＰ−２０（４リットル）のク
ロマトグラフィーに付し、０.０１Ｍβ−ＣyＤ水溶液
（１２リットル），２０％メタノール／０.０１Ｍβ−
ＣyＤ水溶液（１２リットル）にてそれぞれ洗浄した
後、６０％メタノール／０.０１Ｍβ−ＣyＤ水溶液（２
１リットル）にて溶出した。溶出液は（９リットル）に
まで濃縮した後、酢酸エチル（３リットル×３）で抽出
し、酢酸エチル層は、水洗（３リットル×３）後、無水
硫酸ナトリウムにて脱水した。ろ過後、濃縮，アセトン
−酢酸エチルから結晶化するとＴ−２６３６Ｃ（５３
ｇ）が無色結晶として得られた。Example 9 The crude crystal of T-2636A (105 obtained in Example 2)
g, purity 92%) in methanol (600 ml),
β-CyD (296 g) and water (2.4 liters) were added,
After stirring at 37 ° C. for 30 minutes, the esterase described in Example 4 (12.5 g) was added, and the mixture was stirred at 37 ° C. for 3 hours.
Water (7.2 liters) and β-CyD (59.2) were added to the reaction solution.
g) was added and the mixture was further stirred for 30 minutes at room temperature. Then, the filtrate (21 liters) was obtained by ultrafiltration. This was chromatographed on Diaion HP-20 (4 liters) which had been previously treated with a 0.01 M β-CyD aqueous solution (8 liters), and a 0.01 M β-CyD aqueous solution (12 liters), 20% methanol / 0. 01Mβ-
After washing each with a CyD aqueous solution (12 liters), 60% methanol / 0.01M β-CyD aqueous solution (2
It was eluted with 1 liter). The eluate was concentrated to (9 liters) and then extracted with ethyl acetate (3 liters x 3). The ethyl acetate layer was washed with water (3 liters x 3) and dehydrated with anhydrous sodium sulfate. After filtration, concentration and crystallization from acetone-ethyl acetate gave T-2636C (53
g) was obtained as colorless crystals.

【００２８】実施例１０ 実施例２で得られたＴ−２６３６Ａの粗結晶（１０ｇ，
純度９２％）に、β−ＣyＤ（９３ｇ），水（５リット
ル）を加え、室温にて１時間撹拌した。ろ紙（Ｎo.２，
東洋濾紙社製）にてろ過後、あらかじめ０.０１Ｍβ−
ＣyＤ水溶液（０. ８リットル）で処理されたダイヤイ
オンＨＰ−２０（０.４リットル，三菱化成 工業社製）
のカラムクロマトグラフィーに付し、０.０１Ｍβ−Ｃy
Ｄ水溶液（０.８リットル）および２０％メタノール／
０.０１Ｍβ−ＣyＤ水溶液（１.２リットル）にて洗浄
後、６０％メタノール／０.０１Ｍβ−ＣyＤ水溶液
（２.４リッ トル）および８０％メタノール／０.０１
Ｍβ−ＣyＤ水溶液（２リットル）にて溶出した。溶出
液を０.９リットルにまで濃縮後、酢酸エチル（０.３リ
ットル×２）抽出し、酢酸エチル層を水洗（０.２リッ
トル×２）し、無水硫酸ナトリウ ムで脱水した。ろ過
後、酢酸エチル層を濃縮すると、Ｔ−２６３６Ａが晶出
した。これをろ取して粗結晶（６.２ｇ）が得られた。
このうち１ｇを酢酸エチル， エーテルから再結晶化
し、Ｔ−２６３６Ａが無色結晶（０.５８ｇ）として得
ら れた。Example 10 Crude crystals of T-2636A obtained in Example 2 (10 g,
Β-CyD (93 g) and water (5 liters) were added to a purity of 92%), and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Filter paper (No. 2,
After filtering with Toyo Roshi Kaisha, Ltd., 0.01 Mβ-
Diaion HP-20 (0.4 liter, manufactured by Mitsubishi Kasei Kogyo Co., Ltd.) treated with a CyD aqueous solution (0.8 liter).
Column chromatography of 0.01M β-Cy
D aqueous solution (0.8 liter) and 20% methanol /
After washing with 0.01M β-CyD aqueous solution (1.2 liters), 60% methanol / 0.01M β-CyD aqueous solution (2.4 liters) and 80% methanol / 0.01.
It was eluted with an Mβ-CyD aqueous solution (2 liters). The eluate was concentrated to 0.9 liter, extracted with ethyl acetate (0.3 liter × 2), the ethyl acetate layer was washed with water (0.2 liter × 2), and dehydrated with anhydrous sodium sulfate. After filtration, the ethyl acetate layer was concentrated to crystallize T-2636A. This was collected by filtration to give crude crystals (6.2 g).
1 g of this was recrystallized from ethyl acetate and ether to give T-2636A as colorless crystals (0.58 g).

【００２９】実施例１１ グルコース３％，プロフロ１％，コーン・スチープ・リ
カー３.５％，硫酸マグネシウム０.０２％，燐酸第二カ
リウム０.１％，Ｇ₂−β−ＣyＤ１.３％，炭酸カルシウ
ム１.５％，硫酸第二鉄０.０１％，アクトコール０.０
５％からなる培地（５００ml）を１０％かせいソーダ水
溶液でｐＨ６.８に調整したのち、２リットル容坂口フ
ラスコに分注し、綿栓をしてからオートクレーブで滅菌
した。これにStreptomyces rochei var. volubilis（Ｉ
ＦＯ−１２５０７）の凍結保存菌を接種したのち、２８
℃で４８時間往復振盪培養機上で培養した。２００リッ
トル容発酵槽に上記の坂口フラスコ培養培地と同じ組成
の培地７０リットルを調整，滅菌したのち、上記坂口フ
ラスコ培養液１０mlを接種し、通気量０.５vvm，撹拌回
転数１９０rpmで２６℃，２４時間培養して種培養とし
た。２００リットル容発酵槽にデキストリン１４％，プ
ロフロ０.５％，コーン・スチープ・リカー１.３％，コ
ーン・グルテン・ミール０.５％，脱脂大豆粉培地３
％，硫安０.３％，食塩０.５％，硫酸第一鉄０.１％，
ＦＳアンチフォームＦ−２０ ０.０１％，Ｇ₂−β−Ｃ
yＤ３.１％からなる培地を、１０％かせいソーダ水溶液
でｐＨ６.６に調整，滅菌することにより、１１５リッ
トルの主発酵培地を調製した。これに上記種培養液５リ
ットルを移植し、通気量０.５vvm，撹拌回転数１９０〜
２００rpm，ｐＨ５，温度２５℃で１３８時間培養し
た。Example 11 Glucose 3%, Proflo 1%, Corn steep liquor 3.5%, Magnesium sulfate 0.02%, Dibasic potassium phosphate 0.1%, G ₂ -β-CyD 1.3%, Calcium carbonate 1.5%, ferric sulfate 0.01%, ACTCOL 0.0
A 5% medium (500 ml) was adjusted to pH 6.8 with a 10% caustic soda solution, dispensed into a 2 liter Sakaguchi flask, covered with a cotton plug, and then sterilized by an autoclave. This in Streptomyces rochei var. Volubilis (I
After inoculating the cryopreserved bacteria (FO-12507), 28
The cells were cultured on a reciprocal shaker at 48 ° C for 48 hours. After adjusting and sterilizing 70 liters of a medium having the same composition as the Sakaguchi flask culture medium in a 200 liter fermentor, 10 ml of the Sakaguchi flask culture solution was inoculated, and the aeration rate was 0.5 vvm and the stirring speed was 190 rpm at 26 ° C. Cultivation was performed for 24 hours to obtain a seed culture. In a 200 liter fermenter, dextrin 14%, proflo 0.5%, corn steep liquor 1.3%, corn gluten meal 0.5%, defatted soybean flour medium 3
%, Ammonium sulfate 0.3%, salt 0.5%, ferrous sulfate 0.1%,
FS Antifoam F-20 0.01%, G ₂ -β-C
A medium consisting of yD 3.1% was adjusted to pH 6.6 with a 10% caustic soda aqueous solution and sterilized to prepare 115 liters of the main fermentation medium. The above seed culture solution (5 liters) was transplanted to this, the aeration rate was 0.5 vvm, and the stirring speed was 190-
The cells were cultured at 200 rpm, pH 5, and temperature of 25 ° C. for 138 hours.

【００３０】実施例１２ 実施例１１のように処理して得られた培養液（１００リ
ットル）にＧ₂−β−ＣyＤ（３.９kg），水（１５０リ
ットル）を加え、１時間撹拌した後、ラジオライトＮo.
６００（９.０kg）にてろ過 した。ろ液（２３１リット
ル）をさらに分子量１０,０００の限外ろ過膜（ミリ ポ
ア社製）でろ過し、ろ液（２７３リットル）を得た。Ｈ
ＰＬＣ（〔表１〕に記載の条件）で活性代謝物の生産量
を調べたところ、Ｔ−２６３６Ｃが６１０ｇ，Ｔ−２６
３６Ｆが２１０ｇ生産されていた。Example 12 G ₂ -β-CyD (3.9 kg) and water (150 liters) were added to the culture solution (100 liters) obtained by treating as in Example 11 and stirred for 1 hour. , Radio Light No.
It was filtered at 600 (9.0 kg). The filtrate (231 liters) was further filtered with an ultrafiltration membrane having a molecular weight of 10,000 (manufactured by Millipore) to obtain a filtrate (273 liters). H
When the production amount of the active metabolite was examined by PLC (conditions described in [Table 1]), T-2636C was 610 g and T-26.
210g of 36F was produced.

【００３１】実施例１３ 実施例６のように処理して得られた培養液（１１０リッ
トル）にβ−ＣyＤ（２.０ｋｇ，日本食品化工社製）お
よび水（１００リットル）を加え３０分撹拌後、ラジオ
ライト ６００（９.０kg，昭和化学工業社製）にてろ過
した。ろ液（２５３リットル）をｐＨ５.７に調整後、
酢酸エチル（８０リットル×３）で抽出、 酢酸エチル
層（２２４リットル）を２％炭酸水素ナトリウム水（８
０リットル×２）で転溶した。炭酸水素ナトリウム層
（１６３リットル）は、ｐＨ３.０に調 整後、酢酸エチ
ル（６０リットル×２）で再抽出、酢酸エチル層（１１
７リットル）は水（４０リットル×２）で洗浄後、濃縮
乾固し、粗物質（３７.９ｇ）を 得た。粗物質を酢酸エ
チル（２.０リットル）に溶解後、２％炭酸水素ナトリ
ウ ム水（０.７リットル×３）で転溶した。転溶液をｐ
Ｈ６.８に調整し、酢酸エチルを除去後、β−ＣyＤ（２
２.７ｇ）を加え３０分間撹拌した。これをあらかじめ
０.０１Ｍ β−ＣyＤ水溶液（２リットル）で処理され
たダイヤイオン ＨＰ−２０（１.０リットル，三菱化成
工業社製）のカラムクロマトグラフィーに付し、０.０
１Ｍ β−ＣyＤ水溶液（２.０リットル）にて洗浄後、
２０％メタノール／０.０１Ｍ β−ＣyＤ水溶液（３.０
リットル）および５０％メタノール／０.０ １Ｍ β−
ＣyＤ水溶液（６.０リットル）にて溶出した。溶出液の
メタノールを 除去し、ｐＨ３.０に調整後、酢酸エチル
（１.６リットル×２）で抽出した。酢酸エチル層を水
洗（０.５リットル×２）し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥後、濃 縮乾固し、粗粉末（１７.５ｇ）を得た。これ
をシリカゲルカラムクロマトグラ フィー（０.６リット
ル，キーゼルゲル６０，７０−２３０メッシュ，エー・
メ ルク社製，ドイツ）に付し、トルエン中にアセトン
を順次添加した溶出液にて展開し、５０％アセトン溶出
画分からＴ−２６３６Ｔを含む粗画分（３．４９ｇ）
を，７０％アセトン（１％酢酸含有）溶出画分からＴ２
６３６−Ｕを含む粗画分（３．６４ｇ）を得た。Ｔ−２
６３６Ｔを含む粗画分は、分取高速液体クロマトグラフ
ィー（カラム：ＹＭＣ Ｐack Ｓ−３４３ Ｓ−１５ Ｏ
ＤＳ（山村化学研 究所製），溶離液：２８％メタノー
ル／０.０２Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７.５，流速：１０ｍｌ
／ｍｉｎ）にて分画し、保持時間４８分から６８分のピ
ークを集め、メタノールを除去し、ｐＨ３.０に補正
後、酢酸エチル抽出した。水洗後、無水 硫酸ナトリウ
ムにて脱水し、濃縮後、酢酸エチル，エーテルから結晶
化し、Ｔ−２６３６Ｔ（５８０ｍｇ）を無色結晶として
得た。また、Ｔ−２６３６Ｕを含む粗画分は、分取高速
液体クロマトグラフィー（カラム：ＹＭＣ Ｐack Ｓ−
３４ ３ Ｓ−１５ ＯＤＳ（山村化学研究所製），溶離
液：２８％メタノール／０.０ ２Ｍリン酸緩衝液ｐＨ
７.５，流速：１０ｍｌ／ｍｉｎ）にて分画し、保持時
間 ７２分から９０分のピークを集め、メタノールを除
去し、ｐＨ３.０に補正後、 酢酸エチル抽出した。水洗
後、無水硫酸ナトリウムにて脱水し、濃縮後、酢酸エチ
ル，エーテルから結晶化し、Ｔ−２６３６Ｕ（４７０ｍ
ｇ）を無色結晶として得た。Example 13 β-CyD (2.0 kg, manufactured by Nihon Shokuhin Kako Co., Ltd.) and water (100 liters) were added to the culture solution (110 liters) obtained by treating as in Example 6 and stirred for 30 minutes. Then, it was filtered with Radiolite 600 (9.0 kg, Showa Chemical Industry Co., Ltd.). After adjusting the pH of the filtrate (253 liters) to 5.7,
Extracted with ethyl acetate (80 liters x 3), the ethyl acetate layer (224 liters) was added with 2% aqueous sodium hydrogen carbonate (8
It was redissolved in 0 liter x 2). The sodium hydrogen carbonate layer (163 liters) was adjusted to pH 3.0 and then re-extracted with ethyl acetate (60 liters × 2).
(7 liters) was washed with water (40 liters × 2) and then concentrated to dryness to obtain a crude substance (37.9 g). The crude material was dissolved in ethyl acetate (2.0 liter) and then redissolved in 2% aqueous sodium hydrogen carbonate (0.7 liter × 3). P.
After adjusting to H6.8 and removing ethyl acetate, β-CyD (2
2.7 g) was added and stirred for 30 minutes. This was subjected to column chromatography of Diaion HP-20 (1.0 liter, manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.) which had been treated with 0.01M β-CyD aqueous solution (2 liter) in advance, and was subjected to 0.0.
After washing with 1M β-CyD aqueous solution (2.0 liters),
20% methanol / 0.01M β-CyD aqueous solution (3.0
Liter) and 50% methanol / 0.0 1M β-
Elution was carried out with a CyD aqueous solution (6.0 liter). Methanol in the eluate was removed, the pH was adjusted to 3.0, and the mixture was extracted with ethyl acetate (1.6 liter x 2). The ethyl acetate layer was washed with water (0.5 liter × 2), dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated to dryness to give a crude powder (17.5 g). Silica gel column chromatography (0.6 liter, Kieselgel 60, 70-230 mesh, A.
Developed by the eluate in which acetone was sequentially added to toluene, and the crude fraction (3.49 g) containing T-2636T was eluted from the 50% acetone elution fraction.
From the fraction eluted with 70% acetone (containing 1% acetic acid) to T2.
A crude fraction containing 636-U (3.64 g) was obtained. T-2
The crude fraction containing 636T was subjected to preparative high performance liquid chromatography (column: YMC Pack S-343 S-15 O).
DS (manufactured by Yamamura Chemical Research Institute), eluent: 28% methanol / 0.02M phosphate buffer pH 7.5, flow rate: 10 ml
/ Min), and the peaks with a retention time of 48 minutes to 68 minutes were collected, methanol was removed, the pH was adjusted to 3.0, and the mixture was extracted with ethyl acetate. After washing with water, dehydration over anhydrous sodium sulfate, concentration, and crystallization from ethyl acetate and ether to obtain T-2636T (580 mg) as colorless crystals. The crude fraction containing T-2636U was subjected to preparative high performance liquid chromatography (column: YMC Pack S-
34 3 S-15 ODS (manufactured by Yamamura Chemical Research Institute), eluent: 28% methanol / 0.02M phosphate buffer pH
Fractionation was performed at a flow rate of 10 ml / min, and peaks with a retention time of 72 minutes to 90 minutes were collected, methanol was removed, the pH was adjusted to 3.0, and the mixture was extracted with ethyl acetate. After washing with water, dehydration with anhydrous sodium sulfate, concentration, crystallization from ethyl acetate and ether, and T-2636U (470 m
g) was obtained as colorless crystals.

【発明の効果】本発明によって得られる抗菌性抗生物質
Ｔ−２６３６Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，ＴおよびＵは、病原微生
物による感染症の予防・治療に有利に用いることができ
る。INDUSTRIAL APPLICABILITY The antibacterial antibiotics T-2636P, Q, R, S, T and U obtained by the present invention can be advantageously used for the prevention and treatment of infectious diseases caused by pathogenic microorganisms.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】はＴ−２６３６ＰのＩＲスペクトラムを示す。FIG. 1 shows an IR spectrum of T-2636P.

【図２】はＴ−２６３６Ｐの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトラム
を示す。FIG. 2 shows a ¹³ C-NMR spectrum of T-2636P.

【図３】はＴ−２６３６ＱのＩＲスペクトラムを示す。FIG. 3 shows an IR spectrum of T-2636Q.

【図４】はＴ−２６３６Ｑの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトラム
を示す。FIG. 4 shows a ¹³ C-NMR spectrum of T-2636Q.

【図５】はＴ−２６３６ＲのＩＲスペクトラムを示す。FIG. 5 shows an IR spectrum of T-2636R.

【図６】はＴ−２６３６Ｒの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトラム
を示す。FIG. 6 shows a ¹³ C-NMR spectrum of T-2636R.

【図７】はＴ−２６３６ＳのＩＲスペクトラムを示す。FIG. 7 shows an IR spectrum of T-2636S.

【図８】はＴ−２６３６Ｓの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトラム
を示す。FIG. 8 shows a ¹³ C-NMR spectrum of T-2636S.

【図９】はＴ−２６３６ＴのＩＲスペクトラムを示す。FIG. 9 shows an IR spectrum of T-2636T.

【図１０】はＴ−２６３６Ｔの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトラ
ムを示す。FIG. 10 shows a ¹³ C-NMR spectrum of T-2636T.

【図１１】はＴ−２６３６ＵのＩＲスペクトラムを示
す。FIG. 11 shows an IR spectrum of T-2636U.

【図１２】はＴ−２６３６Ｕの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトラ
ムを示す。FIG. 12 shows a ¹³ C-NMR spectrum of T-2636U.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁵ Identification code Internal reference number FI technical display location C12R 1: 465) 7804-4B

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】下記式〔I〕で示される抗菌性抗生物質Ｔ
−２６３６Ｐ，Ｑ，Ｒ，ＴあるいはＵ，またはそれらの
塩。 【化１】 （ａ）Ｔ−２６３６Ｐ：上記式〔I〕中、Ｒ¹はＯを示
し、Ｒ²はＯＨを示し、Ｒ³は−ＣＯＣＨ₃を示す。 （ｂ）Ｔ−２６３６Ｑ：上記式〔I〕中、Ｒ¹はＯを示
し、Ｒ²はＯＨを示し、Ｒ³は−Ｈを示す。 （ｃ）Ｔ−２６３６Ｒ：上記式〔I〕中、Ｒ¹はＨおよび
ＯＨ（２'位はＲ（rectus）を示す）を示し、Ｒ²はＨを
示し、Ｒ³は−ＣＯＣＨ₃を示す。 （ｄ）Ｔ−２６３６Ｔ： 【化２】 （ｅ）Ｔ−２６３６Ｕ： 【化３】 1. An antibacterial antibiotic T represented by the following formula [I]:
-2636 P, Q, R, T or U, or a salt thereof. [Chemical 1] (A) T-2636P: In the above formula [I], R ¹ represents O, R ² represents OH, and R ³ represents —COCH ₃ . (B) T-2636Q: In the above formula [I], R ¹ represents O, R ² represents OH, and R ³ represents —H. (C) T-2636R: In the above formula [I], R ¹ represents H and OH (the 2 ′ position represents R (rectus)), R ² represents H, and R ³ represents —COCH ₃ . .. (D) T-2636T: (E) T-2636U: 【請求項２】ストレプトミセス属に属し、抗菌性抗生物
質Ｔ−２６３６Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，ＴあるいはＵを生産し
うる菌を培地に培養し、培養物中に該抗生物質の一種ま
たは二種以上を生成蓄積せしめ、これを採取することを
特徴とする抗菌性抗生物質Ｔ−２６３６Ｐ，Ｑ，Ｒ，
Ｓ，ＴあるいはＵの製造法。 （ｆ）Ｔ−２６３６Ｓ：上記式〔I〕中、Ｒ¹はＨおよび
ＯＨ（２'位はＲ（rectus）を示す）を示し、Ｒ²はＨを
示し、Ｒ³は−Ｈを示す。2. A bacterium belonging to the genus Streptomyces and capable of producing the antibacterial antibiotics T-2636P, Q, R, S, T or U is cultured in a medium, and one or two of the antibiotics is added to the culture. Antibacterial antibiotics T-2636P, Q, R, characterized by producing and accumulating more than one species and collecting them
Manufacturing method of S, T or U. (F) T-2636S: In the above formula [I], R ¹ represents H and OH (the 2 ′ position represents R (rectus)), R ² represents H, and R ³ represents —H. 【請求項３】抗菌性抗生物質Ｔ−２６３６Ｐ，Ｑ，Ｒ，
Ｓ，ＴあるいはＵを採取する工程において、該抗生物質
を含有する水溶液中にシクロデキストリン系化合物を添
加し、吸着性樹脂を用いて、該水溶液から該抗生物質を
精製することを特徴とする請求項２記載の製造法。3. An antibacterial antibiotic T-2636P, Q, R,
In the step of collecting S, T or U, a cyclodextrin compound is added to an aqueous solution containing the antibiotic, and the antibiotic is purified from the aqueous solution using an adsorptive resin. Item 2. The production method according to Item 2. 【請求項４】ランカシジン群抗生物質を含有する水溶液
中にシクロデキストリン系化合物を添加し、吸着性樹脂
を用いて、該水溶液からランカシジン群抗生物質を採取
することを特徴とするランカシジン群抗生物質の精製
法。4. A lancacidin group antibiotic is obtained by adding a cyclodextrin compound to an aqueous solution containing a lancacidin group antibiotic and collecting the lancacidin group antibiotic from the aqueous solution using an adsorptive resin. Purification method.