JPH05287266A - Fluorescent labeling dye, biogenic substance labeled with the dye, and reagent containing them - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To realize the measurement with a small-scale semiconductor laser without being affected by biogenic substances present in the blood by using a specified compound as the constituent. CONSTITUTION:A fluorescent labeling dye of the formula [wherein A<2> and A<2> are each an aromatic ring consisting of C and H, or an aromatic ring consisting of C, H, N and/or O and/or S; R<1> R<2> and R<3> are each alkyl, a heterocyclic ring residue, alkoxy, aryloxy, alkylthio, etc., or alkyl having these groups as substituents, or H; X<1> is S, O, Se or NR<4> (wherein R<4> is R<1>, R<2> or R<3>); and L is polymethylene]. The functional groups, such as amino or hydroxyl groups, in a biogenic substance are bonded directly or through an ionic or covalent bond to the functional groups, such as carboxyl or sulfo groups, of the dye.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、蛍光標識用色素、蛍光
標識用色素で標識された生物由来物質、及びそれらを含
有する試薬に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a fluorescent labeling dye, a biological substance labeled with the fluorescent labeling dye, and a reagent containing them.

【０００２】[0002]

【従来の技術】フタロシアニン類は種々の免疫分析に使
用できることが種々報告されている（ＵＳ特許第４,１
６０,６４５号公報、ＵＳ特許第４,１９３,９８３号公
報、ＵＳ特許第４,２２０,４５０号公報、ＵＳ特許第
４,２３３,４０２号公報、ＵＳ特許第４,２３５,８６９
号公報、ＵＳ特許第４,２５６,８３４号公報、ＵＳ特許
第４,２７７,４３７号公報、ＵＳ特許第４,３１８,７０
７号公報、ＵＳ特許第４,４８３,９２９号公報、ＵＳ特
許第４,５４０,６６０号公報、ＵＳ特許第４,５４０,６
７０号公報、ＵＳ特許第４,５６０,５３４号公報、ＵＳ
特許第４,６５０,７７０号公報、ＵＳ特許第４,６５６,
１２９号公報、ＵＳ特許第４,６５９,６７６号公報）。It has been reported that phthalocyanines can be used in various immunoassays (US Pat. No. 4,1).
60,645, US Patent 4,193,983, US Patent 4,220,450, US Patent 4,233,402, US Patent 4,235,869.
U.S. Pat. No. 4,256,834, U.S. Pat. No. 4,277,437, U.S. Pat. No. 4,318,70.
No. 7, US Pat. No. 4,483,929, US Pat. No. 4,540,660, US Pat. No. 4,540,6.
70, US Pat. No. 4,560,534, US
Patent 4,650,770, US Pat. No. 4,656,
129, US Pat. No. 4,659,676).

【０００３】更に、フタロシアニン類は、化学発光免疫
分析系で触媒として使用されている〔Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．第５６巻、２９６５−２９６８頁
（１９８３）、同第５６巻、２２６７−２２７１頁（１
９８３）、同第５７巻、５８７−５８８頁（１９８
４）、同第５７巻、３００９−３０１０頁（１９８
４）、同第５８巻、１２９９−１３０３頁（１９８
５）〕。原らは、ルミノールと過酸化水素とのあいだの
化学発光反応の触媒として鉄フタロシアニンを用いて、
化学発光のシグナル量から、テストサンプル中の分析対
象を定量している。彼らは鉄及びコバルトのフタロシア
ニン並びに鉄、パラジウム、白金、マンガン及びスズの
ポルフィリン錯体について検討し、鉄フタロシアニンが
最も優れた触媒作用を示し、かつ高感度であることを報
告した。Further, phthalocyanines have been used as catalysts in chemiluminescent immunoassay systems [Bull. Che
m. Soc. Jpn. 56, 2965-2968 (1983), 56, 2267-2271 (1)
983), ibid., 57, 587-588 (198).
4), ibid. 57, 3009-3010 (198).
4), Vol. 58, p. 1299-1303 (198).
5)]. Hara et al. Have used iron phthalocyanine as a catalyst for the chemiluminescent reaction between luminol and hydrogen peroxide,
The analyte in the test sample is quantified from the amount of chemiluminescence signal. They investigated phthalocyanines of iron and cobalt and porphyrin complexes of iron, palladium, platinum, manganese and tin, and reported that iron phthalocyanine showed the best catalytic action and high sensitivity.

【０００４】免疫分析で着色物質のほかに螢光物質が広
く利用されているが、さらに、酵素免疫分析において
も、螢光物質は感度を上げることができるので着色物質
よりも好んで使用されるようになってきている。よく知
られた螢光物質−酵素対はアルカリホスファターゼ（al
kaline phosphatase）と４−メチルウムベリフェリルホ
スフェート（4-methylumbelliferyl phosphate）、β−
ガラクトシダーゼ（β−galactosidase）と４−メチル
ウムベリフェリル−Ｄ−ガラクトピラノシド（４-methy
lumbelliferyl-D-galactopyranoside）、西洋ワサビの
パーオキシダーゼ（horse radish peroxidase）とｐ−
ヒドロキシフェニル酢酸（p-hydroxyphenyl acetic aci
d）等があり、これらの系の検出感度は１０^-15 Ｍであ
る。しかし検出感度をさらに上げようとしても生成する
螢光体の分析特性には限界がある。Fluorescent substances are widely used in addition to coloring substances in immunoassays. Furthermore, in enzyme immunoassay, fluorescent substances can be used more favorably than coloring substances because they can increase the sensitivity. Is becoming. The well-known fluorophore-enzyme pair is the alkaline phosphatase (al
kaline phosphatase) and 4-methylumbelliferyl phosphate, β-
Galactosidase (β-galactosidase) and 4-methylumbelliferyl-D-galactopyranoside (4-methy
lumbelliferyl-D-galactopyranoside), horseradish peroxidase and p-
P-hydroxyphenyl acetic aci
d) etc., and the detection sensitivity of these systems is 10 ⁻¹⁵ M. However, even if the detection sensitivity is further increased, the analytical characteristics of the fluorescent substance produced are limited.

【０００５】最近、蛍光量子収率が高く、水に対して高
い溶解性を示すフタロシアニン類を用いた試薬が提案さ
れた（ＷＯ特許第８８／０４７７７号公報、ＷＯ特許第
９０／０２７４７号公報、特開平１−２３３２２２号公
報）。Recently, reagents using phthalocyanines having a high fluorescence quantum yield and high solubility in water have been proposed (WO Patent 88/04777, WO 90/02747, and WO 90/02747). JP-A-1-233222).

【０００６】[0006]

【発明が解決しようとする課題】しかし、フタロシアニ
ン類は、そのＱ−バンドの吸収域及び蛍光発光域が６５
５〜７００ｎｍの領域にあって、生体内物質として存在
する血液中のヘム等の吸収域（＜７００ｎｍ）と重なっ
ているため、その妨害を受ける欠陥がある。However, phthalocyanines have an absorption region and a fluorescence emission region of the Q-band of 65 or less.
Since it is in the region of 5 to 700 nm and overlaps with the absorption region (<700 nm) of heme and the like in the blood existing as an in-vivo substance, there is a defect that interferes with it.

【０００７】また、放射線光源は今後安価で小型の半導
体レーザ（６７０〜７８０ｎｍ）が主流になると考えら
れるが、６７０〜６９０ｎｍの半導体レーザで励起する
場合に、フタロシアニン類は蛍光発光領域がこれと同様
の波長域にあるため、照射レーザ光からの散乱光と蛍光
発光を区別することが困難であるだけでなく、７００〜
７８０ｎｍの半導体レーザで励起する場合には、フタロ
シアニン類は光を吸収できないため励起されず、したが
って検出薬としての役目を果たさない。更に、フタロシ
アニン類は大きなπ共役系を有するために会合しやすい
性質があり、会合体が生成すると蛍光量子収率が著しく
低下する欠点がある。It is considered that inexpensive and small semiconductor lasers (670 to 780 nm) will become the mainstream of radiation sources in the future, but when excited by a semiconductor laser of 670 to 690 nm, phthalocyanines have a fluorescent emission region similar to this. It is difficult to distinguish scattered light from the irradiation laser light and fluorescence emission because it is in the wavelength range of 700-700.
When excited with a semiconductor laser of 780 nm, the phthalocyanines are not excited because they cannot absorb light, and therefore do not serve as detection agents. Further, since phthalocyanines have a large π-conjugated system, they have a property of easily associating with each other, and there is a drawback that the fluorescence quantum yield is remarkably lowered when the associated product is formed.

【０００８】本発明は、血液中に存在するヘム等の生体
内物質に影響されず、また、将来主流になると予想され
る安価で小型の半導体レーザ（６７０〜７８０ｎｍ）を
用いて測定するための、血液中の種々の抗原、薬物の分
析やあるいはＤＮＡの塩基配列の分析等に有用な試薬又
は臨床検査試薬を提供することを目的とする。The present invention is for measuring by using an inexpensive and small semiconductor laser (670 to 780 nm), which is not affected by in-vivo substances such as heme existing in blood and is expected to become the mainstream in the future. Another object of the present invention is to provide a reagent or a clinical test reagent useful for analysis of various antigens and drugs in blood, analysis of DNA base sequence, and the like.

【０００９】[0009]

【課題を解決するための手段】本発明は下記（１）〜
（６）に関するものである。すなわち、 （１）一般式（Ｉ）The present invention provides the following (1) to
It relates to (6). That is, (1) general formula (I)

【化２】 〔一般式（Ｉ）中、Ａ¹及びＡ²は、それぞれ独立に、炭
素原子及び水素原子から成る芳香環、又は炭素原子及び
水素原子のほかに窒素原子及び／又は酸素原子及び／又
は硫黄原子から成る芳香環を示し、Ｒ¹、Ｒ²及びＲ
³は、それぞれ独立に、アルキル基、複素環残基、アル
コキシ基、アリーロキシ基、アルキルチオ基、アリール
チオ基、アリール基、アラルキル基、アルキルカルボニ
ルオキシ基、アルキルカルボニル基、アリールカルボニ
ル基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルアミド
基、アルキルスルフォンアミド基、アルコキシカルボニ
ル基、アリーロキシカルボニル基、アリールカルボニル
オキシ基、アリールアミド基、アルキルアミノ基、アル
キルカルバモイル基、アルキルスルファモイル基、アリ
ールカルバモイル基、アリールアミノ基、アリールスル
フォニル基、アリールスルフォンアミド基、水酸基、カ
ルボキシ基、ハロゲン原子、アリールスルファモイル
基、シアノ基、ニトロ基、スルフォン酸、スルフォン酸
塩、カルボン酸塩、これらを置換基にもつアルキル基、
又は水素原子を示し、Ｘ¹は、硫黄原子、酸素原子、セ
レン原子、ＮＲ⁴（ただし、Ｒ⁴はＲ¹〜Ｒ³と同じ意味）
を示し、Ｌは、ポリメチレン基を示す。〕で表される蛍
光標識用色素。 （２）上記（１）の蛍光標識用色素を含有する試薬。 （３）上記（１）の蛍光標識用色素で標識された生物由
来物質。 （４）上記（３）の生物由来物質を含有する試薬。 （５）生物由来物質がビタミン、アルカロイド又はヌク
レオチドである上記（３）の生物由来物質。 （６）生物由来物質がビタミン、アルカロイド又はヌク
レオチドである上記（４）の試薬。[Chemical 2] [In the general formula (I), A ¹ and A ² are each independently an aromatic ring composed of a carbon atom and a hydrogen atom, or a nitrogen atom and / or an oxygen atom and / or a sulfur atom in addition to the carbon atom and the hydrogen atom. An aromatic ring consisting of R ¹ , R ² and R
³ are each independently an alkyl group, a heterocyclic residue, an alkoxy group, an aryloxy group, an alkylthio group, an arylthio group, an aryl group, an aralkyl group, an alkylcarbonyloxy group, an alkylcarbonyl group, an arylcarbonyl group, an alkyloxycarbonyl group. , An alkylamide group, an alkylsulfonamide group, an alkoxycarbonyl group, an aryloxycarbonyl group, an arylcarbonyloxy group, an arylamide group, an alkylamino group, an alkylcarbamoyl group, an alkylsulfamoyl group, an arylcarbamoyl group, an arylamino group, Aryl sulfonyl group, aryl sulfonamide group, hydroxyl group, carboxy group, halogen atom, aryl sulfamoyl group, cyano group, nitro group, sulfonic acid, sulfonate, carboxylate, this An alkyl group having these substituents,
Or a hydrogen atom, X ¹ is a sulfur atom, an oxygen atom, a selenium atom, NR ⁴ (provided that R ⁴ has the same meaning as R ^{1 to} R ³ )
And L represents a polymethylene group. ] The fluorescent labeling dye represented by (2) A reagent containing the fluorescent labeling dye of (1) above. (3) A biological substance labeled with the fluorescent labeling dye of (1) above. (4) A reagent containing the biological substance of (3) above. (5) The biological substance of (3) above, wherein the biological substance is a vitamin, an alkaloid or a nucleotide. (6) The reagent according to (4) above, wherein the biological substance is a vitamin, an alkaloid or a nucleotide.

【００１０】本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物に
おいて、Ａ¹及びＡ²の炭素原子及び水素原子から成る芳
香環の具体例としては、ベンゼン、ナフタレン、アント
ラセン、フェナントレン等があり、炭素原子及び水素原
子のほかに窒素原子及び／又は酸素原子及び／又は硫黄
原子から成る芳香環の具体例としては、ピリジン、１，
２−ジアジン、１，３−ジアジン、１，４−ジアジン、
キノリン、イソキノリン、キノキサリン、１，３−ベン
ゾジアジン、２，３−ベンゾジアジン、１，８−ジアザ
ナフタレン、１，５−ジアザナフタレン、１，７−ジア
ザナフタレン、１，６−ジアザナフタレン、ピロール、
イミダゾール、チオフェン、フラン等がある。これらの
芳香環は任意の可能な位置で縮環できる。In the compound represented by the general formula (I) of the present invention, benzene, naphthalene, anthracene, phenanthrene and the like are specific examples of the aromatic ring composed of carbon atoms and hydrogen atoms of A ¹ and A ² . Specific examples of the aromatic ring composed of a nitrogen atom and / or an oxygen atom and / or a sulfur atom in addition to the carbon atom and the hydrogen atom include pyridine, 1,
2-diazine, 1,3-diazine, 1,4-diazine,
Quinoline, isoquinoline, quinoxaline, 1,3-benzodiazine, 2,3-benzodiazine, 1,8-diazanaphthalene, 1,5-diazanaphthalene, 1,7-diazanaphthalene, 1,6-diazanaphthalene, Pyrrole,
Examples include imidazole, thiophene and furan. These aromatic rings can be fused at any possible position.

【００１１】本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物に
おいて、Ｒ¹〜Ｒ³中、及びＸ¹のＮＲ⁴中、アルキル基又
はアルキル基を含む基のアルキル基の具体例としては、
メチル基、エチル基、プロピル基、ｓｅｃ−プロピル
基、ｎ−ブチル基、ｉｓｏ−ブチル基、ｔ−ブチル基、
ペンチル基、ヘキシル基等があり、アリール基又はアリ
ール基を含む基のアリール基の具体例としては、フェニ
ル基、ナフチル基、アントラニル基、フェナントレニル
基等があり、複素環残基の具体例としてはピリジル基、
ピリダジル基、ピリミジル基、ピラジル基、キノリル
基、イソキノリル基、キノキサリル基、ベンゾピリミジ
ル基、ベンゾピリダジル基、ジアザナフチル基、ピロリ
ル基、イミダジル基、チエニル基、フリル基等がある。In the compound represented by the general formula (I) of the present invention, specific examples of the alkyl group or the alkyl group-containing group in R ^{1 to} R ³ and NR ^{4 of} X ¹ are:
Methyl group, ethyl group, propyl group, sec-propyl group, n-butyl group, iso-butyl group, t-butyl group,
There is a pentyl group, a hexyl group, and the like, and specific examples of the aryl group of the aryl group or a group containing an aryl group include a phenyl group, a naphthyl group, an anthranyl group, a phenanthrenyl group, and the like. A pyridyl group,
Pyridazyl group, pyrimidyl group, pyrazyl group, quinolyl group, isoquinolyl group, quinoxalyl group, benzopyrimidyl group, benzopyridazyl group, diazanaphthyl group, pyrrolyl group, imidazolyl group, thienyl group, furyl group and the like.

【００１２】Ｌで表されるポリメチレン基としては、次
の化３で表される基等がある。Examples of the polymethylene group represented by L include the groups represented by the following chemical formula 3.

【化３】 [Chemical 3]

【００１３】化３中、ｍ及びｎは０〜５の整数であり、
Ｙは水素原子、メチル基等の低級アルキル基、メトキシ
基等の低級アルコキシ基、ジメチルアミノ基、ジフェニ
ルアミノ基、メチルフェニルアミノ基、モルフォリノ
基、イミダゾリジン基及びエトキシカルボニルピペラジ
ン基等のジ置換アミノ基、アセトキシ基等のアルキルカ
ルボニルオキシ基、メチルチオ基等のアルキルチオ基、
シアノ基、ニトロ基、又はハロゲン原子等であり、ま
た、Ｚは二重結合を共役させるための基で、具体的に
は、−ＣＨ−、シクロヘキサジエン、シクロペンタジエ
ン、インデン、１，４−ジヒドロナフタレン、１，２−
ジヒドロナフタレン、５，８−ジヒドロキノキサリン、
５，６−ジヒドロキノキサリンのほか、化４に示す基な
どが挙げられる。In the chemical formula 3, m and n are integers of 0 to 5,
Y is a hydrogen atom, a lower alkyl group such as a methyl group, a lower alkoxy group such as a methoxy group, a dimethylamino group, a diphenylamino group, a methylphenylamino group, a morpholino group, an imidazolidine group and an ethoxycarbonylpiperazine group. Group, alkylcarbonyloxy group such as acetoxy group, alkylthio group such as methylthio group,
It is a cyano group, a nitro group, a halogen atom or the like, and Z is a group for conjugating a double bond, specifically, -CH-, cyclohexadiene, cyclopentadiene, indene, 1,4-dihydro. Naphthalene, 1,2-
Dihydronaphthalene, 5,8-dihydroquinoxaline,
In addition to 5,6-dihydroquinoxaline, the groups shown in Chemical formula 4 and the like can be mentioned.

【化４】 ただし、化４中、Ｘ²はＮ−Ｒ⁵（ただし、Ｒ⁵はアルキ
ル基を示す）、硫黄原子又は酸素原子である。[Chemical 4] However, in Chemical formula 4, X ² is N—R ⁵ (wherein R ⁵ represents an alkyl group), a sulfur atom or an oxygen atom.

【００１４】本発明において、一般式（Ｉ）で表される
化合物は、例えば、「大有機化学、含窒素複素環化合物
Ｉ」４３２ページ（朝倉書店）等の参考書に記載された
方法によって合成できる。一般式（Ｉ）で表される化合
物の例を表１に示す。In the present invention, the compound represented by the general formula (I) is synthesized by the method described in a reference book such as “Large Organic Chemistry, Nitrogen-containing Heterocyclic Compound I”, page 432 (Asakura Shoten). it can. Table 1 shows examples of the compound represented by the general formula (I).

【表１】 表１ 一般式（Ｉ）で表される化合物の例 ──────────────────────────────────── No. Ａ¹ Ｘ¹ Ｒ¹ Ｌ Ａ² Ｒ² Ｒ³ ──────────────────────────────────── 1 化5 H₅C₂-N - 化12 化5 - (CH₂)₃SO₃Na 2 化5 H₅C₂-N SO₃Na 化12 化5 - C₂H₅ 3 化6 H₅C₂-N - 化12 化6 - (CH₂)₃SO₃Na 4 化7 H₅C₂-N - 化12 化7 - (CH₂)₃SO₃Na 5 化5 H₅C₂-N CO₂Na 化13 化5 - C₂H₅ 6 化5 化9 - 化12 化5 - (CH₂)₄SO₃Na 7 化5 化9 NO₂ 化13 化5 NO₂ (CH₂)₄SO₃Na 8 化5 化9 化10 化13 化5 化10 (CH₂)₄SO₃Na 9 化8 化9 OC₂H₅ 化13 化8 OC₂H₅ (CH₂)₄SO₃Na 10 化5 化9 化11 化12 化5 化11 (CH₂)₄SO₃Na 11 化5 化9 CN 化12 化5 CN (CH₂)₄SO₃Na 12 化5 化9 F 化12 化5 F (CH₂)₄SO₃Na ──────────────────────────────────── ただし、表１中、化５〜化１３は下記の基を示す。[Table 1] Table 1 Examples of compounds represented by the general formula (I) ───────────────────────────────── ──── No. A ¹ X ¹ R ¹ L A ² R ² R ³ ──────────────────────────────── ───── 1C 5 H ₅ C ₂ -N-12C 5-(CH ₂ ) ₃ SO ₃ Na ₂ 5H ₅ C ₂ -N SO ₃ Na 12C 5-C ₂ H ₅ 3 Chemical formula 6 H ₅ C ₂ -N-Chemical formula 12 Chemical formula 6-(CH ₂ ) ₃ SO ₃ Na 4 Chemical formula 7 H ₅ C ₂ -N-Chemical formula 12 Chemical formula 7-(CH ₂ ) ₃ SO ₃ Na 5 Chemical formula 5 H ₅ C ₂ -N CO ₂ Na-Chemical 13-Chemical 5-C ₂ H ₅ 6-Chemical 5-Chemical 9-Chemical 12-Chemical 5-(CH ₂ ) ₄ SO ₃ Na 7 Chemical 5-Chemical 9 NO _2- Chemical 13-Chemical 5 NO ₂ (CH ₂ ) ₄ SO ₃ Na 8 C ₅ C ₁₀ C 13 C ₅ 10 (CH ₂ ) ₄ SO ₃ Na 9 C 8 C 9 OC ₂ H ₅ C 13 C 8 OC ₂ H ₅ (CH ₂ ) ₄ SO ₃ Na 10 5 5 9 11 11 12 5 11 (CH ₂ ) ₄ SO ₃ Na 11 5 9 CN 12 12 5 CN (CH ₂ ) ₄ SO ₃ Na 12 5 9 9 F 12 of _{5 F (CH 2) 4 SO} 3 Na ────────────────────── ───────────── However, in Table 1, of 5 of 13 exhibits the following groups.

【化５】 [Chemical 5]

【化６】 [Chemical 6]

【化７】 [Chemical 7]

【化８】 [Chemical 8]

【化９】ＮａＯ₃Ｓ−（ＣＨ₂）₄−ＮEmbedded image NaO ₃ S— (CH ₂ ) ₄ —N

【化１０】 [Chemical 10]

【化１１】 [Chemical 11]

【化１２】（ＣＨ＝ＣＨ）₂−ＣＨEmbedded image (CH═CH) ₂ —CH

【化１３】 [Chemical 13]

【００１５】本発明において用いられる生物由来物質と
しては、動物、植物、微生物（ウイルスを含む）等の生
物から得られるタンパク質・ペプチド、ヌクレオチド、
糖類、脂質、ホルモン、ビタミン、アルカロイド、抗生
物質、それらの複合物等があり、これらは、天然から抽
出したもの、人工的に完全合成したもの、あるい人工的
に半合成したもののいずれであってもよい。The biological substances used in the present invention include proteins / peptides, nucleotides obtained from organisms such as animals, plants, microorganisms (including viruses),
There are sugars, lipids, hormones, vitamins, alkaloids, antibiotics, and their composites. These are extracted from nature, artificially completely synthesized, or artificially semi-synthesized. May be.

【００１６】タンパク質・ペプチドの具体例としては、
血清アルブミン、ＩｇＧ・ＩｇＡ・ＩｇＭ・ＩｇＤ・Ｉ
ｇＥ等の免疫グロブリン、種々のタンパク質や白血球の
膜抗原に対するモノクローナル抗体、パーオキシダー
ゼ、グルコースオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ
等の酵素等が挙げられ、ヌクレオチドの具体例としては
ＤＮＡ、ＲＮＡ、合成オリゴヌクレオチド、合成ポリヌ
クレオチド、ＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰ、ＴＴＰ、ＵＴ
Ｐ、ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＵＴ
Ｐ、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、ｄｄＴＴ
Ｐ、ｄｄＵＴＰ、あるいはそれらの誘導体等が挙げら
れ、糖類の具体例としては、グリコーゲン、デンプン、
マンナン等の多糖類のほかオリゴ糖やグルコース、マン
ノース等の単糖類が挙げられ、脂質としては、ホスファ
チジルコリン、ホスファチジルエタノラミン、脂肪、脂
肪酸等が挙げられ、ホルモンとしてはインシュリン、成
長ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、セクレチ
ン、上皮細胞成長因子、ガストリン、グルカゴン、カル
シトニン等のペプチド性ホルモン、アンドロゲン、エス
トロゲン、ハイドロコーチゾン等のステロイドホルモ
ン、アドレナリン、ノルアドレナリン等のカテコラミン
類等が挙げられ、ビタミンとしてはビタミンＡ、ビタミ
ンＢ₁、Ｂ₂、Ｂ₆、Ｂ₁₂、ｐ−アミノ安息香酸（以下、
ＰＡＢＡという）、ビオチン、葉酸、ビタミンＣ、ビタ
ミンＤ、ビタミンＥ等の各種ビタミンが挙げられ、アル
カロイドとしてはモルフィン等のアヘンアルカロイド、
アトロピン、スコポラミン等のトロパンアルカロイド、
ビンブラスチン、ビンクリスチン等のインドールアルカ
ロイド、オウレン等のイソキノリンアルカロイド等が挙
げられ、抗生物質としては、ペニシリン、セファロスポ
リン、カナマイシン、エリスロマイシン、クロラムフェ
ニコール等が挙げられる。Specific examples of proteins / peptides include:
Serum albumin, IgG / IgA / IgM / IgD / I
Examples thereof include immunoglobulins such as gE, monoclonal antibodies against various proteins and leukocyte membrane antigens, enzymes such as peroxidase, glucose oxidase, and alkaline phosphatase. Specific examples of nucleotides include DNA, RNA, synthetic oligonucleotides, and synthetic polynucleotides. Nucleotides, ATP, CTP, GTP, TTP, UT
P, dATP, dCTP, dGTP, dTTP, dUT
P, ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTT
P, ddUTP, derivatives thereof, and the like. Specific examples of the saccharide include glycogen, starch,
In addition to polysaccharides such as mannan, oligosaccharides, glucose, monosaccharides such as mannose are listed, lipids include phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, fats and fatty acids, and hormones include insulin, growth hormone, oxytocin, vasopressin. , Peptide hormones such as secretin, epidermal growth factor, gastrin, glucagon and calcitonin, steroid hormones such as androgen, estrogen and hydrocortisone, and catecholamines such as adrenaline and noradrenaline. ₁ , B ₂ , B ₆ , B ₁₂ , p-aminobenzoic acid (hereinafter,
PABA), biotin, folic acid, vitamin C, vitamin D, vitamin E, and various other vitamins. Alkaloids include opium alkaloids such as morphine,
Tropane alkaloids such as atropine and scopolamine,
Examples include indole alkaloids such as vinblastine and vincristine, isoquinoline alkaloids such as lauren, and the like, and antibiotics include penicillin, cephalosporin, kanamycin, erythromycin, chloramphenicol, and the like.

【００１７】生物由来物質に蛍光標識用色素を結合させ
るためには、生物由来物質中のアミノ基、水酸基等の官
能基と蛍光標識用色素中のカルボキシル基、スルフォン
基等の官能基を利用して直接、イオン結合的又は共有結
合的に直接結合させるか、あるいは蛍光標識用色素が反
応できるように、生物由来物質の一部に結合基（リンカ
ー）を付加する等の化学修飾を施したのち、反応させれ
ばよい。蛍光標識用色素で標識された生物由来物質はク
ロマトグラフィー、再結晶等の慣用の分離手段により精
製することができる。In order to bind the fluorescent labeling dye to the biological substance, functional groups such as amino groups and hydroxyl groups in the biological substance and functional groups such as carboxyl group and sulfone group in the fluorescent labeling dye are used. Directly or ionically or covalently directly, or after chemical modification such as adding a linking group (linker) to a part of the biological substance so that the fluorescent labeling dye can react. , Just react. The biological substance labeled with the fluorescent labeling dye can be purified by a conventional separation means such as chromatography or recrystallization.

【００１８】一般式（Ｉ）で表される化合物は、芳香環
やポリメチレン基を種々変えることにより、長波長域
（７００ｎｍ以上）の任意の波長域に吸収又は蛍光極大
を移動させ、生体中の種々のスペクトル的妨害因子の影
響を除くことができるので、血液中の種々の抗原、薬物
の分析やあるいはＤＮＡの塩基配列の分析等に有用な試
薬又は臨床検査試薬として利用できる。The compound represented by the general formula (I) has various absorption rings or fluorescence maximums in a long wavelength region (700 nm or more) by changing the aromatic ring or the polymethylene group, so that the maximum in the living body can be obtained. Since it is possible to eliminate the influence of various spectral interference factors, it can be used as a reagent or a clinical test reagent useful for analysis of various antigens and drugs in blood, analysis of nucleotide sequences of DNA, and the like.

【００１９】[0019]

【実施例】以下、実施例により更に具体的に本発明を説
明する。ただし、化合物Ｎｏ．は表１に示した化合物Ｎ
ｏ．に対応する。 実施例１ 化合物Ｎｏ．１のＰＡＢＡ付加体の合成 文献（大有機化学、含窒素複素環化合物Ｉ、４３２ペー
ジ（朝倉書店））に記載の方法を参考にして、化合物Ｎ
ｏ．１を合成した。得られた化合物Ｎｏ．１を４８０ｍ
ｇとり、クロロホルムに溶かし、２５℃でオギザリルク
ロリド２．０ｍｌを滴下し、室温で６時間撹拌したの
ち、溶媒を除去し、化合物Ｎｏ．１のスルホニルクロラ
イド誘導体（化１４）を得た。EXAMPLES The present invention will be described in more detail below with reference to examples. However, compound No. Is the compound N shown in Table 1.
o. Corresponding to. Example 1 Compound No. Synthesis of PABA adduct of 1 Compound N was prepared with reference to the method described in the literature (large organic chemistry, nitrogen-containing heterocyclic compound I, page 432 (Asakura Shoten)).
o. 1 was synthesized. Obtained compound No. 1 for 480 m
g, dissolved in chloroform, 2.0 ml of oxalyl chloride was added dropwise at 25 ° C., and the mixture was stirred at room temperature for 6 hours, then, the solvent was removed and Compound No. The sulfonyl chloride derivative (Chemical formula 14) of 1 was obtained.

【化１４】 更に、水１．７ｍｌに炭酸ナトリウム１０２ｍｇ及びｐ
−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）６２ｍｇを加え、８０℃
に加熱して溶かした液に、上記の化１４のスルホニルク
ロライド誘導体５４ｍｇを加え、８０℃で６時間撹拌
後、溶媒を除去し、得られた固体を、１０重量％ＮＨ₄
ＯＨを含むメタノールに溶かし、再度濃縮して、化合物
Ｎｏ．１のＰＡＢＡ付加体を得た。[Chemical 14] Further, in 1.7 ml of water, 102 mg of sodium carbonate and p
-Adding 62 mg of aminobenzoic acid (PABA), 80 ° C
54 mg of the sulfonyl chloride derivative of the above-mentioned chemical formula 14 was added to the solution heated by heating to 80 ° C., the mixture was stirred at 80 ° C. for 6 hours, the solvent was removed, and the obtained solid was mixed with 10 wt% NH ₄
It was dissolved in methanol containing OH and concentrated again to give compound No. A PABA adduct of 1 was obtained.

【００２０】実施例２ 化合物Ｎｏ．２のＰＡＢＡ付加
体の合成 実施例１に記載した文献の方法を参考にして、化合物Ｎ
ｏ．２を合成した。得られた化合物Ｎｏ．２を３９３ｍ
ｇとり、クロロホルムに溶かし、２５℃でオギザリルク
ロリド１．８ｍｌを滴下し、室温で６時間撹拌したの
ち、溶媒を除去し、化合物Ｎｏ．２の固体状スルホニル
クロライド誘導体（化１５）を得た。Example 2 Compound No. Synthesis of PABA adduct of 2 Compound N was prepared with reference to the literature method described in Example 1.
o. 2 was synthesized. Obtained compound No. 2 to 393 m
g, dissolved in chloroform, 1.8 ml of oxalyl chloride was added dropwise at 25 ° C., and the mixture was stirred at room temperature for 6 hours, then, the solvent was removed and Compound No. A solid sulfonyl chloride derivative (Chemical Formula 15) of 2 was obtained.

【化１５】 更に、水１．７ｍｌに炭酸ナトリウム１０２ｍｇ及びｐ
−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）５６ｍｇを加え、８０℃
に加熱して溶かした液に、上記の化１５のスルホニルク
ロライド誘導体５０ｍｇを加え、８０℃で６時間撹拌
後、溶媒を除去し、得られた固体を、１０重量％ＮＨ₄
ＯＨを含むメタノールに溶かし、再度濃縮して、化合物
Ｎｏ．２のＰＡＢＡ付加体を得た。[Chemical 15] Further, in 1.7 ml of water, 102 mg of sodium carbonate and p
-Add 56 mg of aminobenzoic acid (PABA), and add at 80 ° C.
50 mg of the sulfonyl chloride derivative of the above Chemical formula 15 was added to the solution dissolved by heating to 80 ° C., the mixture was stirred at 80 ° C. for 6 hours, the solvent was removed, and the obtained solid was mixed with 10 wt% NH ₄
It was dissolved in methanol containing OH and concentrated again to give compound No. A PABA adduct of 2 was obtained.

【００２１】実施例３ 化合物Ｎｏ．３のＰＡＢＡ付加
体の合成 実施例１に記載した文献の方法を参考にして、化合物Ｎ
ｏ．３を合成した。得られた化合物Ｎｏ．３を２９７ｍ
ｇとり、クロロホルムに溶かし、２５℃でオギザリルク
ロリド１．０ｍｌを滴下し、室温で６時間撹拌したの
ち、溶媒を除去し、化合物Ｎｏ．３のスルホニルクロラ
イド誘導体（化１６）を得た。Example 3 Compound No. Synthesis of PABA adduct of 3 Compound N was prepared with reference to the literature method described in Example 1.
o. 3 was synthesized. Obtained compound No. 3 to 297 m
g, dissolve in chloroform, add dropwise 1.0 ml of oxalyl chloride at 25 ° C., stir at room temperature for 6 hours, remove the solvent, and remove compound No. A sulfonyl chloride derivative (Chemical Formula 16) of 3 was obtained.

【化１６】 更に、水１．７ｍｌに炭酸ナトリウム１０２ｍｇ及びｐ
−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）６０ｍｇを加え、８０℃
に加熱して溶かした液に、上記の化１６のスルホニルク
ロライド誘導体５６ｍｇを加え、８０℃で６時間撹拌
後、溶媒を除去し、得られた固体を、１０重量％ＮＨ₄
ＯＨを含むメタノールに溶かし、再度濃縮して、化合物
Ｎｏ．３のＰＡＢＡ付加体を得た。[Chemical 16] Further, in 1.7 ml of water, 102 mg of sodium carbonate and p
-Add 60 mg of aminobenzoic acid (PABA), and add 80 ° C.
The solution and dissolved by heating to a sulfonyl chloride derivative 56mg of the above Formula 16 added and after 6 h stirring at 80 ° C., the solvent was removed and the resulting solid, 10 wt% NH ₄
It was dissolved in methanol containing OH and concentrated again to give compound No. A PABA adduct of 3 was obtained.

【００２２】実施例４ 化合物Ｎｏ．６のＰＡＢＡ付加
体の合成 実施例１に記載した文献の方法を参考にして、化合物Ｎ
ｏ．６を合成した。得られた化合物Ｎｏ．６を３９８ｍ
ｇとり、クロロホルムに溶かし、２５℃でオギザリルク
ロリド１．９ｍｌを滴下し、室温で６時間撹拌したの
ち、溶媒を除去し、化合物Ｎｏ．６のスルホニルクロラ
イド誘導体（化１７）を得た。Example 4 Compound No. Synthesis of PABA adduct of 6 Compound N referring to the literature method described in Example 1
o. 6 was synthesized. Obtained compound No. 6 to 398 m
g, dissolved in chloroform, 1.9 ml of oxalyl chloride was added dropwise at 25 ° C., and the mixture was stirred at room temperature for 6 hours, then, the solvent was removed, and Compound No. A sulfonyl chloride derivative (Chemical formula 17) of 6 was obtained.

【化１７】 更に、水１．７ｍｌに炭酸ナトリウム１０２ｍｇ及びｐ
−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）６０ｍｇを加え、８０℃
に加熱して溶かした液に、上記の化１７のスルホニルク
ロライド誘導体５８ｍｇを加え、８０℃で６時間撹拌
後、溶媒を除去し、得られた固体を、１０重量％ＮＨ₄
ＯＨを含むメタノールに溶かし、再度濃縮して、化合物
Ｎｏ．６のＰＡＢＡ付加体を得た。[Chemical 17] Further, in 1.7 ml of water, 102 mg of sodium carbonate and p
-Add 60 mg of aminobenzoic acid (PABA), and add 80 ° C.
58 mg of the sulfonyl chloride derivative of the above Chemical formula 17 was added to the solution dissolved by heating to 80 ° C., the mixture was stirred at 80 ° C. for 6 hours, the solvent was removed, and the obtained solid was mixed with 10 wt% NH ₄
It was dissolved in methanol containing OH and concentrated again to give compound No. A PABA adduct of 6 was obtained.

【００２３】実施例５ 化合物Ｎｏ.１、Ｎｏ.２、Ｎ
ｏ.３又はＮｏ.６で標識されたモルフィンの合成 実施例１で得た化合物Ｎｏ．１のＰＡＢＡ付加体（８２
ｍｇ）のトリエチルアミン（１．０ｍｌ）溶液に、０℃
でクロロギ酸エチル１０ｍｌを撹拌しながら加えた。５
分間撹拌後、３−（４−アミノブチル）モルフィン３５
ｍｇを加え、室温で８時間撹拌して、化合物Ｎｏ．１で
標識されたモルフィンを得た。同様にして、化合物Ｎ
ｏ．１のＰＡＢＡ付加体の代わりに、化合物Ｎｏ.２、
Ｎｏ.３及びＮｏ.６のＰＡＢＡ付加体を用いて反応を行
い、それぞれ化合物Ｎｏ.２、Ｎｏ.３及びＮｏ.６で標
識されたモルフィンを得た。Example 5 Compounds No. 1, No. 2 and N
Synthesis of morphine labeled with o.3 or No. 6 Compound No. 3 obtained in Example 1 PABA adduct of 1 (82
mg) in a solution of triethylamine (1.0 ml) at 0 ° C.
At 10 ml ethyl chloroformate was added with stirring. 5
After stirring for 3 minutes, 3- (4-aminobutyl) morphine 35
mg, and stirred at room temperature for 8 hours to give compound No. The morphine labeled with 1 was obtained. Similarly, compound N
o. Instead of the PABA adduct of 1, compound No. 2,
Reactions were carried out using the PABA adducts of No. 3 and No. 6 to obtain morphine labeled with compounds No. 2, No. 3 and No. 6, respectively.

【００２４】実施例６ 抗モルフィンモノクローナル抗
体に対する親和性試験 モルフィン、アミノモルフィン及び化合物Ｎｏ.１、Ｎ
ｏ.２、Ｎｏ.３もしくはＮｏ.６で標識されたモルフィ
ンについて、抗モルフィンモノクローナル抗体に対する
親和性（モルフィンに対する親和性を１．０とし、相対
値で表す）をトリチウムをラベルしたモルフィンとの競
争反応により測定した。測定結果を表２に示す。Example 6 Affinity test for anti-morphine monoclonal antibody Morphine, aminomorphine and compound No. 1, N
o. No. 2, No. 3 or No. 6 morphine competition with tritium-labeled morphine in its affinity for anti-morphine monoclonal antibody (relative value, with affinity for morphine being 1.0) It was measured by the reaction. The measurement results are shown in Table 2.

【表２】 表２ 抗体に対する標識化モルフィンの相対親和性 ────────────────────────── 化合物（抗原） 相対親和性 ────────────────────────── モルフィン １．０ アミノモルフィン １．０ 化合物Ｎｏ．１標識化モルフィン １．０ 化合物Ｎｏ．２標識化モルフィン ０．９ 化合物Ｎｏ．３標識化モルフィン １．０ 化合物Ｎｏ．６標識化モルフィン １．０ ──────────────────────────[Table 2] Table 2 Relative affinity of labeled morphine for antibody ────────────────────────── Compound (antigen) Relative affinity ── ──────────────────────── Morphine 1.0 Aminomorphine 1.0 Compound No. 1-labeled morphine 1.0 Compound No. 2 labeled morphine 0.9 Compound No. 3 Labeled morphine 1.0 Compound No. 6 Labeled morphine 1.0 ───────────────────────────

【００２５】表２の結果から、化合物（抗原）による親
和性の違いはほとんどみられず、式（Ｉ）で表される化
合物でモルフィンを標識しても抗体との親和性はほとん
ど変わらないことが分かった。From the results shown in Table 2, there is almost no difference in the affinity depending on the compound (antigen), and even if morphine is labeled with the compound represented by the formula (I), the affinity with the antibody hardly changes. I understood.

【００２６】実施例７ 化合物Ｎｏ．１で標識されたオ
リゴヌクレオチド・プライマーの合成とＤＮＡ塩基配列
の分析への応用 （１）リンカーが結合したオリゴヌクレオチド・プライ
マーの合成 固相ＣＥＤ−フォスフォラミド法を用いた自動ＤＮＡ合
成装置によりプライマー（５’−ＧＴＴＴＣＣＣＡＧＴ
ＣＡＣＧＡＣ−３’）を合成した。合成したプライマー
のリン酸化は、５０ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７．６）、
１０ｍＭ塩化マグネシウム、１０ｍＭジチオスレイトー
ル、３ｍＭ ＡＴＰ、Ｔ₄−ヌクレオチドカイネースを含
む１００μｌの反応液中で３７℃、１時間保温して行っ
た。リン酸化されたプライマーは、ゲル濾過用カラムを
使用して高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分
離し、リン酸化されたプライマーのピークを集め、凍結
乾燥で溶媒を除いた。Example 7 Compound No. Synthesis of oligonucleotide primer labeled with 1 and application to analysis of DNA base sequence (1) Synthesis of oligonucleotide primer to which linker is bound Primer (5 by an automatic DNA synthesizer using solid phase CED-phosphoramide method '-GTTTCCCAGT
CACGAC-3 ′) was synthesized. Phosphorylation of the synthesized primer was performed using 50 mM Tris-HCl (pH 7.6),
The incubation was carried out at 37 ° C. for 1 hour in a 100 μl reaction solution containing 10 mM magnesium chloride, 10 mM dithiothreitol, 3 mM ATP, and T ₄ -nucleotide kinase. The phosphorylated primer was separated by high performance liquid chromatography (HPLC) using a gel filtration column, the peaks of the phosphorylated primer were collected, and the solvent was removed by freeze-drying.

【００２７】次に、これを２５０ｍＭの１，２−ジアミ
ノエタン（ｐＨ６．０），２００ｍＭのエチル−３（３
−ジエチルアミノプロピル）カルボジイミド及び１００
ｍＭのＮ−メチルイミダゾール（ｐＨ６．０）を含む反
応液１００μｌ中、２５℃で一晩保温して５’末端のグ
アノシンのリン酸部にリンカー〔ＮＨ₂−（ＣＨ₂)₂−Ｎ
Ｈ−〕を結合させた。Next, this was mixed with 250 mM 1,2-diaminoethane (pH 6.0) and 200 mM ethyl-3 (3).
-Diethylaminopropyl) carbodiimide and 100
In 100 μl of a reaction solution containing mM N-methylimidazole (pH 6.0), the mixture was kept at 25 ° C. overnight and the linker [NH ₂ — (CH ₂ ) ₂ —N was added to the phosphate moiety of guanosine at the 5 ′ end.
H-] was attached.

【００２８】（２）化合物Ｎｏ．１で標識されたオリゴ
ヌクレオチド・プライマーの合成 化合物Ｎｏ．１で標識されたモルフィンと上記（１）で
合成した５’末端グアノシンのリン酸部にリンカーが結
合したオリゴヌクレオチド・プライマーを、０．２Ｍ炭
酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．３）中で混合し、２５℃
で一晩、暗所に保温したのち、ＨＰＬＣで精製すること
により、リンカーを介して化合物Ｎｏ．１が結合したプ
ライマーを得た。(2) Compound No. Synthesis of oligonucleotide primer labeled with compound No. 1 Morphine labeled with 1 and an oligonucleotide primer having a linker bound to the phosphate moiety of the 5'-terminal guanosine synthesized in (1) above are mixed in a 0.2 M sodium carbonate buffer (pH 9.3), 25 ° C
After overnight incubation in the dark in the dark, it was purified by HPLC to give compound No. 1 via the linker. A primer to which 1 was bound was obtained.

【００２９】（３）ＤＮＡの塩基配列の分析 既知の塩基配列のＤＮＡをサンプルとし、リンカーを介
して化合物Ｎｏ．１が結合したプライマーを用いて、そ
れぞれ４種の塩基でサンガー反応を行ったのち、それぞ
れ別々のレーンで電気泳動分離し、７８０ｎｍの発振波
長の半導体レーザーを搭載したＤＮＡシークエンサーで
分析した。その結果、ＤＮＡの３００塩基までを９９％
の精度で決定できた。(3) Analysis of DNA base sequence A DNA having a known base sequence was used as a sample and compound No. Sanger reaction was carried out with each of the four bases using the primer to which 1 was bound, followed by electrophoretic separation in separate lanes and analysis with a DNA sequencer equipped with a semiconductor laser with an oscillation wavelength of 780 nm. As a result, 99% of DNA up to 300 bases
Could be determined with the accuracy of.

【００３０】[0030]

【発明の効果】本発明により、血液中に存在するヘム等
の生体内物質に影響されず、また、将来主流になると予
想されるに小型の半導体レーザ（６７０〜７８０ｎｍ）
を用いて測定するための、種々の抗原、薬物の分析やあ
るいはＤＮＡの塩基配列の分析等に有用な試薬又は臨床
検査試薬を提供できた。Industrial Applicability According to the present invention, a semiconductor laser (670 to 780 nm) which is not affected by in-vivo substances such as heme existing in blood and which is expected to become the mainstream in the future is required.
It was possible to provide a reagent or a clinical test reagent useful for the analysis of various antigens and drugs, the analysis of DNA base sequences, etc.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 21/78 Ｃ 7906−2Ｊ 33/533 8310−2Ｊ ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. ⁵ Identification number Office reference number FI technical display location G01N 21/78 C 7906-2J 33/533 8310-2J

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】一般式（Ｉ） 【化１】 〔一般式（Ｉ）中、 Ａ¹及びＡ²は、それぞれ独立に、炭素原子及び水素原子
から成る芳香環、又は炭素原子及び水素原子のほかに窒
素原子及び／又は酸素原子及び／又は硫黄原子から成る
芳香環を示し、 Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は、それぞれ独立に、アルキル基、複
素環残基、アルコキシ基、アリーロキシ基、アルキルチ
オ基、アリールチオ基、アリール基、アラルキル基、ア
ルキルカルボニルオキシ基、アルキルカルボニル基、ア
リールカルボニル基、アルキルオキシカルボニル基、ア
ルキルアミド基、アルキルスルフォンアミド基、アルコ
キシカルボニル基、アリーロキシカルボニル基、アリー
ルカルボニルオキシ基、アリールアミド基、アルキルア
ミノ基、アルキルカルバモイル基、アルキルスルファモ
イル基、アリールカルバモイル基、アリールアミノ基、
アリールスルフォニル基、アリールスルフォンアミド
基、水酸基、カルボキシ基、ハロゲン原子、アリールス
ルファモイル基、シアノ基、ニトロ基、スルフォン酸、
スルフォン酸塩、カルボン酸塩、これらを置換基にもつ
アルキル基、又は水素原子を示し、 Ｘ¹は、硫黄原子、酸素原子、セレン原子、ＮＲ⁴（ただ
し、Ｒ⁴はＲ¹〜Ｒ³と同じ意味）を示し、 Ｌは、ポリメチレン基を示す。〕で表される蛍光標識用
色素。1. A compound represented by the general formula (I): [In the general formula (I), A ¹ and A ² are each independently an aromatic ring composed of a carbon atom and a hydrogen atom, or a nitrogen atom and / or an oxygen atom and / or a sulfur atom in addition to the carbon atom and the hydrogen atom. R ¹ , R ² and R ³ are each independently an alkyl group, a heterocyclic residue, an alkoxy group, an aryloxy group, an alkylthio group, an arylthio group, an aryl group, an aralkyl group, an alkylcarbonyloxy group. Group, alkylcarbonyl group, arylcarbonyl group, alkyloxycarbonyl group, alkylamide group, alkylsulfonamide group, alkoxycarbonyl group, aryloxycarbonyl group, arylcarbonyloxy group, arylamide group, alkylamino group, alkylcarbamoyl group, Alkylsulfamoyl group, arylcarbamoyl group, Arylamino group,
Arylsulfonyl group, arylsulfonamide group, hydroxyl group, carboxy group, halogen atom, arylsulfamoyl group, cyano group, nitro group, sulfonic acid,
A sulfonate, a carboxylate, an alkyl group having these as a substituent, or a hydrogen atom, X ¹ is a sulfur atom, an oxygen atom, a selenium atom, or NR ⁴ (wherein R ⁴ is R ^{1 to} R ³ ; (Same meaning) and L represents a polymethylene group. ] The fluorescent labeling dye represented by 【請求項２】請求項１記載の蛍光標識用色素を含有する
試薬。2. A reagent containing the fluorescent labeling dye according to claim 1. 【請求項３】請求項１記載の蛍光標識用色素で標識され
た生物由来物質。3. A biological substance labeled with the fluorescent labeling dye according to claim 1. 【請求項４】請求項３の生物由来物質を含有する試薬。4. A reagent containing the biological substance of claim 3. 【請求項５】生物由来物質がビタミン、アルカロイド又
はヌクレオチドである請求項３記載の生物由来物質。5. The biological substance according to claim 3, which is a vitamin, an alkaloid or a nucleotide. 【請求項６】生物由来物質がビタミン、アルカロイド又
はヌクレオチドである請求項４記載の試薬。6. The reagent according to claim 4, wherein the biological substance is a vitamin, an alkaloid or a nucleotide.