JPH05244997A - Ｄｎａまたはｒｎａの塩基配列決定法 - Google Patents
Ｄｎａまたはｒｎａの塩基配列決定法Info
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- JPH05244997A JPH05244997A JP4046687A JP4668792A JPH05244997A JP H05244997 A JPH05244997 A JP H05244997A JP 4046687 A JP4046687 A JP 4046687A JP 4668792 A JP4668792 A JP 4668792A JP H05244997 A JPH05244997 A JP H05244997A
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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Abstract
(57)【要約】
【目的】各塩基に対して水素結合する標識分子で修飾し
た（水素結合標識法：ＨＢＬ法）ＤＮＡまたはＲＮＡの
塩基配列を、ＳＥＭ，ＳＴＭ，またはＡＦＭを用いて、
真空中、大気中、水溶液中で外形を直接観察する。 【構成】目的のＤＮＡまたはＲＮＡに各塩基と直接水素
結合する標識分子を添加し、結合させる。そして、上記
の試料を平滑な基板の上に展開し、必要に応じて真空乾
燥させてＳＥＭ、ＳＴＭ、またはＡＦＭでＤＮＡまたは
ＲＮＡの外形を観察し塩基配列を決定する。
た（水素結合標識法：ＨＢＬ法）ＤＮＡまたはＲＮＡの
塩基配列を、ＳＥＭ，ＳＴＭ，またはＡＦＭを用いて、
真空中、大気中、水溶液中で外形を直接観察する。 【構成】目的のＤＮＡまたはＲＮＡに各塩基と直接水素
結合する標識分子を添加し、結合させる。そして、上記
の試料を平滑な基板の上に展開し、必要に応じて真空乾
燥させてＳＥＭ、ＳＴＭ、またはＡＦＭでＤＮＡまたは
ＲＮＡの外形を観察し塩基配列を決定する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はＤＮＡまたはＲＮＡの塩
基配列の決定方法に関するもので遺伝子工学の分野にお
ける強い要請に応えることのできるものである。
基配列の決定方法に関するもので遺伝子工学の分野にお
ける強い要請に応えることのできるものである。
【０００２】
【従来の技術】ＤＮＡまたはＲＮＡの分析手段として、
たとえば、電気泳動を用いた塩基配列決定法（たとえ
ば、マクサム−ギルバ−ト法や、ジデオキシ法など）が
知られているが、この方法では、感度の最も高いラジオ
アイソト−プを検出手段として用いた場合でも、一試行
あたり１pmole以上のＤＮＡまたはＲＮＡが必要であ
る。また、工程が複雑で、解析に数時間以上かかる。従
って、人間の全ＤＮＡまたはＲＮＡの塩基配列のような
膨大な塩基数を有するものには不向きである。また、ラ
ジオアイソト−プ法、蛍光法以外の塩基への標識法に
は、重原子標識法（S.L.Commerford, Biochemistry, 1
0, 1993(1971)参考)が知られているが、各塩基固有の標
識法ではないため、塩基配列決定法としては、発展しな
かった。また、この重原子標識法は、透過電子顕微鏡を
用いるので、大気中、水溶液中での直接観察は、無理で
ある。
たとえば、電気泳動を用いた塩基配列決定法（たとえ
ば、マクサム−ギルバ−ト法や、ジデオキシ法など）が
知られているが、この方法では、感度の最も高いラジオ
アイソト−プを検出手段として用いた場合でも、一試行
あたり１pmole以上のＤＮＡまたはＲＮＡが必要であ
る。また、工程が複雑で、解析に数時間以上かかる。従
って、人間の全ＤＮＡまたはＲＮＡの塩基配列のような
膨大な塩基数を有するものには不向きである。また、ラ
ジオアイソト−プ法、蛍光法以外の塩基への標識法に
は、重原子標識法（S.L.Commerford, Biochemistry, 1
0, 1993(1971)参考)が知られているが、各塩基固有の標
識法ではないため、塩基配列決定法としては、発展しな
かった。また、この重原子標識法は、透過電子顕微鏡を
用いるので、大気中、水溶液中での直接観察は、無理で
ある。
【０００３】走査トンネル顕微鏡（ＳＴＭ）、又は原子
間力顕微鏡（ＡＦＭ）を用いた核酸の塩基配列決定に
は、S.M.Lindsayらの電気電導度の差違を用いた方法(特
開平3-198798）があるが、塩基特異的標識法は、全く利
用されておらず、配列決定には至っていない。
間力顕微鏡（ＡＦＭ）を用いた核酸の塩基配列決定に
は、S.M.Lindsayらの電気電導度の差違を用いた方法(特
開平3-198798）があるが、塩基特異的標識法は、全く利
用されておらず、配列決定には至っていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ＤＮＡまた
はＲＮＡの塩基配列決定のために、水素結合標識法(Hyd
rogen bond Label：ＨＢＬ法）という、核酸の特性を利
用した簡便な操作による非破壊的な標識法とそれによる
塩基配列決定法を実現することである。
はＲＮＡの塩基配列決定のために、水素結合標識法(Hyd
rogen bond Label：ＨＢＬ法）という、核酸の特性を利
用した簡便な操作による非破壊的な標識法とそれによる
塩基配列決定法を実現することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明では、核酸の本質
的構造特性である相補的水素結合を利用した標識法（Ｈ
ＢＬ法）を用いる。二本鎖ＤＮＡにおいて、塩基種の一
つアデニンＡはチミンＴと、また、グアニンＧはシトシ
ンＣとの水素結合により、２本の相補的一本鎖同士が結
合している。
的構造特性である相補的水素結合を利用した標識法（Ｈ
ＢＬ法）を用いる。二本鎖ＤＮＡにおいて、塩基種の一
つアデニンＡはチミンＴと、また、グアニンＧはシトシ
ンＣとの水素結合により、２本の相補的一本鎖同士が結
合している。
【０００６】ＤＮＡは、二本鎖と一本鎖との間を可逆的
に変化することができるので、試料を熱し、上記のＡ−
Ｔ結合を解離させた（ＤＮＡの変性）後、アデニンＡに
対する標識分子として、チミンＴの化学基を含有した化
学種（例えば、チミジン三りん酸（ＴＴＰ））を、先の
変性ＤＮＡの再生（徐冷）中に溶液中に過剰に添加する
と、Ａ−Ｔ結合の再生ではなく、Ａ−ＴＴＰ結合が生じ
る。
に変化することができるので、試料を熱し、上記のＡ−
Ｔ結合を解離させた（ＤＮＡの変性）後、アデニンＡに
対する標識分子として、チミンＴの化学基を含有した化
学種（例えば、チミジン三りん酸（ＴＴＰ））を、先の
変性ＤＮＡの再生（徐冷）中に溶液中に過剰に添加する
と、Ａ−Ｔ結合の再生ではなく、Ａ−ＴＴＰ結合が生じ
る。
【０００７】従って、一旦、変性したＤＮＡは、本来の
二本鎖には戻らない。他の塩基（チミンＴ、グアニン
Ｇ）にも同様に各塩基に特異的に水素結合し、かつ互い
に形（特に分子の長さ）の異なる側基を持った標識分
子、例えば、デオキシアデノシン二りん酸ｄＡＤＰ、デ
オキシシトシン一りん酸ｄＣＭＰを添加することで、Ｔ
−ｄＡＤＰ、Ｇ−ｄＣＭＰ結合を生じさせる。塩基配列
決定の際は、塩基は四種類なので、標識化学種は、三種
類で充分であり、この場合シトシンＣは無標識でよい。
さらにアデニンＡを標識しない場合、チミンＴを標識し
ない場合、あるいはグアニンＧを標識しない場合のよう
に、使用する標識化学種によって任意の組合せで特異的
標識が可能である。
二本鎖には戻らない。他の塩基（チミンＴ、グアニン
Ｇ）にも同様に各塩基に特異的に水素結合し、かつ互い
に形（特に分子の長さ）の異なる側基を持った標識分
子、例えば、デオキシアデノシン二りん酸ｄＡＤＰ、デ
オキシシトシン一りん酸ｄＣＭＰを添加することで、Ｔ
−ｄＡＤＰ、Ｇ−ｄＣＭＰ結合を生じさせる。塩基配列
決定の際は、塩基は四種類なので、標識化学種は、三種
類で充分であり、この場合シトシンＣは無標識でよい。
さらにアデニンＡを標識しない場合、チミンＴを標識し
ない場合、あるいはグアニンＧを標識しない場合のよう
に、使用する標識化学種によって任意の組合せで特異的
標識が可能である。
【０００８】標識分子に要求される要件は、アデニン
Ａ、シトシンＣ、グアニンＧ、チミンＴの各塩基に安定
に水素結合する化学種と、互いに形の異なる側鎖を持っ
ていること、そして、標識分子の大きさが、隣の塩基に
対する標識を空間的に阻害しないものであれば、特に限
定されない。認識すべき塩基についての標識としては最
も単純には、長さのことなるものとするのが良い。
Ａ、シトシンＣ、グアニンＧ、チミンＴの各塩基に安定
に水素結合する化学種と、互いに形の異なる側鎖を持っ
ていること、そして、標識分子の大きさが、隣の塩基に
対する標識を空間的に阻害しないものであれば、特に限
定されない。認識すべき塩基についての標識としては最
も単純には、長さのことなるものとするのが良い。
【０００９】しかし、ＨＢＬ処理において、加熱処理を
行う場合があるのでその熱的ダメ−ジにより分子が破壊
または一部結合が切断するようなものは、標識分子とし
ては適さない。他にも例えば、ヌクレオチド的な構造を
持っている補酵素や、上記の条件を満たす人工分子など
観側手段の空間分解能以上の構造的差違をもって塩基毎
に標識できる分子であれば標識分子になり得る。
行う場合があるのでその熱的ダメ−ジにより分子が破壊
または一部結合が切断するようなものは、標識分子とし
ては適さない。他にも例えば、ヌクレオチド的な構造を
持っている補酵素や、上記の条件を満たす人工分子など
観側手段の空間分解能以上の構造的差違をもって塩基毎
に標識できる分子であれば標識分子になり得る。
【００１０】標識は、一本鎖ＤＮＡに対してだけではな
く、ニ本鎖ＤＮＡに対しても可能である。その場合、新
たにHoogstreenタイプの水素結合が形成され、ＤＮＡは
水素三本鎖ＤＮＡを形成することになる。
く、ニ本鎖ＤＮＡに対しても可能である。その場合、新
たにHoogstreenタイプの水素結合が形成され、ＤＮＡは
水素三本鎖ＤＮＡを形成することになる。
【００１１】ＨＢＬ処理して標識されたＤＮＡは、走査
電子顕微鏡（ＳＥＭ）、走査トンネル顕微鏡（ＳＴ
Ｍ）、又は原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）でその形を直接観
察する。ＤＮＡを構成する各塩基ごとに水素結合した形
の異なる標識分子の外形が観察される。ニ本鎖ＤＮＡを
試料とした場合、一般的には、二種類の被標識一本鎖Ｄ
ＮＡ分子が観測される。これらは互いに相補的なので、
共に観測し、配列解析に供する。標識試料をＳＴＭ、あ
るいはＡＦＭで観測する場合は、大気中、水溶液中でも
観察できる。
電子顕微鏡（ＳＥＭ）、走査トンネル顕微鏡（ＳＴ
Ｍ）、又は原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）でその形を直接観
察する。ＤＮＡを構成する各塩基ごとに水素結合した形
の異なる標識分子の外形が観察される。ニ本鎖ＤＮＡを
試料とした場合、一般的には、二種類の被標識一本鎖Ｄ
ＮＡ分子が観測される。これらは互いに相補的なので、
共に観測し、配列解析に供する。標識試料をＳＴＭ、あ
るいはＡＦＭで観測する場合は、大気中、水溶液中でも
観察できる。
【００１２】ＨＢＬ処理されたＤＮＡは、実施例の中で
示す通り、非常に特異的な外形をしているので、ＤＮＡ
以外のものと区別できる。
示す通り、非常に特異的な外形をしているので、ＤＮＡ
以外のものと区別できる。
【００１３】
【作用】本発明のＨＢＬ法は、水素結合を介して、化学
種を各塩基に結合させ、その標識分子の固有の形（例え
ば、長さなど）を走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）、走査トン
ネル顕微鏡（ＳＴＭ）、又は原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）
で直接観察するものである。また、ＨＢＬ法は、可逆的
な標識法なので、標識分子の取外しが可能であり、同一
試料の再利用ができる。
種を各塩基に結合させ、その標識分子の固有の形（例え
ば、長さなど）を走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）、走査トン
ネル顕微鏡（ＳＴＭ）、又は原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）
で直接観察するものである。また、ＨＢＬ法は、可逆的
な標識法なので、標識分子の取外しが可能であり、同一
試料の再利用ができる。
【００１４】直接観察であるＨＢＬ法では、試料量は、
１fmole以下でも充分であり、既存の塩基配列決定法に
比べ、極端に少なくて済む。
１fmole以下でも充分であり、既存の塩基配列決定法に
比べ、極端に少なくて済む。
【００１５】
【実施例】本発明をさらに詳細に説明するために以下に
実施例を示す。しかし、本発明は、これに限定されな
い。
実施例を示す。しかし、本発明は、これに限定されな
い。
【００１６】本実施例で用いたＤＮＡは、ΦＸ１７４(5
386塩基対（bp）)を、制限酵素ＨｉｎｃIIで切断して生
じた７９bp断片を0.1 nmole/mlに精製した(pH7.0)もの
である。その水溶液10μｌ（ＤＮＡは1 pmole）を、95
℃まで加熱し、ＤＮＡを変性させた後、室温まで徐冷す
る。その際、75℃の時点で、予熱しておいたデオキシシ
トシン三りん酸ｄＡＴＰ、デオキシシトシン二りん酸ｄ
ＧＤＰ、及びデオキシシトシン一りん酸ｄＣＭＰをＤＮ
Ａと同mole量か一桁多い程度添加する（ＨＢＬ処理）。
386塩基対（bp）)を、制限酵素ＨｉｎｃIIで切断して生
じた７９bp断片を0.1 nmole/mlに精製した(pH7.0)もの
である。その水溶液10μｌ（ＤＮＡは1 pmole）を、95
℃まで加熱し、ＤＮＡを変性させた後、室温まで徐冷す
る。その際、75℃の時点で、予熱しておいたデオキシシ
トシン三りん酸ｄＡＴＰ、デオキシシトシン二りん酸ｄ
ＧＤＰ、及びデオキシシトシン一りん酸ｄＣＭＰをＤＮ
Ａと同mole量か一桁多い程度添加する（ＨＢＬ処理）。
【００１７】修飾ＤＮＡ溶液が室温になった状態で1.5
μｌ（150fmole/ml相当）マイクロピペットで、雲母
（金を200nm蒸着済）上に滴下し、真空乾燥させる。上
記試料量は、本塩基配列決定法の試料量限界ではない。
本決定法は、原理的に１本のＤＮＡがあれば塩基配列決
定が可能となる。上記濃度は、１cm2内に標識されたＤ
ＮＡがほぼ１層吸着する濃度であり、これにより観察が
効率的に行えた。
μｌ（150fmole/ml相当）マイクロピペットで、雲母
（金を200nm蒸着済）上に滴下し、真空乾燥させる。上
記試料量は、本塩基配列決定法の試料量限界ではない。
本決定法は、原理的に１本のＤＮＡがあれば塩基配列決
定が可能となる。上記濃度は、１cm2内に標識されたＤ
ＮＡがほぼ１層吸着する濃度であり、これにより観察が
効率的に行えた。
【００１８】本実施例で塩基の長さを７９bpにしたの
は、30nm×30nm程度の視野の中にＤＮＡの全体像を入れ
たかったためと、ヘアピン構造の形成など一本鎖ＤＮＡ
内での高次構造の形成をできるだけ防いで修飾されたＤ
ＮＡが２次元的に展開しやすいようにしたためである。
原理的には、かなり長い塩基を増幅処理せずに、そのま
ま標識することが可能である。
は、30nm×30nm程度の視野の中にＤＮＡの全体像を入れ
たかったためと、ヘアピン構造の形成など一本鎖ＤＮＡ
内での高次構造の形成をできるだけ防いで修飾されたＤ
ＮＡが２次元的に展開しやすいようにしたためである。
原理的には、かなり長い塩基を増幅処理せずに、そのま
ま標識することが可能である。
【００１９】次に、上記サンプルの外形をＳＥＭ、ＳＴ
ＭまたはＡＦＭで観察する。図１に模式的観察像を示
す。図１に示す通り、デオキシシトシン三りん酸ｄＡＴ
Ｐ、デオキシシトシン二りん酸ｄＧＤＰ、及びデオキシ
シトシン一りん酸ｄＣＭＰの標識分子内にあるアデニン
Ａ、シトシンＣおよびグアニンＧの塩基部分の詳細な構
造は区別がつかなくとも、これに続くりん酸基部分の長
さの差違は明確であるから、標識分子と相補的であるＤ
ＮＡの塩基を同定することができ、ＤＮＡ塩基配列を直
接決定できる。また、この時の一本鎖ＤＮＡと相補関係
にある一本鎖ＤＮＡの標識状態を図２に示す。
ＭまたはＡＦＭで観察する。図１に模式的観察像を示
す。図１に示す通り、デオキシシトシン三りん酸ｄＡＴ
Ｐ、デオキシシトシン二りん酸ｄＧＤＰ、及びデオキシ
シトシン一りん酸ｄＣＭＰの標識分子内にあるアデニン
Ａ、シトシンＣおよびグアニンＧの塩基部分の詳細な構
造は区別がつかなくとも、これに続くりん酸基部分の長
さの差違は明確であるから、標識分子と相補的であるＤ
ＮＡの塩基を同定することができ、ＤＮＡ塩基配列を直
接決定できる。また、この時の一本鎖ＤＮＡと相補関係
にある一本鎖ＤＮＡの標識状態を図２に示す。
【００２０】図１、図２から明らかなようにＤＮＡの塩
基に対応して標識の長さが異なるから、これを観察すれ
ば、容易に塩基の同定が出来る。
基に対応して標識の長さが異なるから、これを観察すれ
ば、容易に塩基の同定が出来る。
【００２１】ＳＥＭによる観測は、基板とのコントラス
トを明瞭にするために低速（〜１KeV）加速電圧で行っ
た。また、さらに明瞭なコントラストを得るため試料に
金属（白金）コ−テングを施した。真空中、あるいは大
気中でのＳＴＭ、ＡＦＭ観測では、ＳＥＭと異なり試料
表面を汚染することがなく、また、簡単にＤＮＡ像が得
られる。特に、ＳＴＭの場合は、ＤＮＡの膜厚が約3nm
以上厚い場合は、測定が不可能となるが、ＡＦＭの場合
は、ＤＮＡの膜厚が3nm以上厚い場合でも観測可能であ
る。
トを明瞭にするために低速（〜１KeV）加速電圧で行っ
た。また、さらに明瞭なコントラストを得るため試料に
金属（白金）コ−テングを施した。真空中、あるいは大
気中でのＳＴＭ、ＡＦＭ観測では、ＳＥＭと異なり試料
表面を汚染することがなく、また、簡単にＤＮＡ像が得
られる。特に、ＳＴＭの場合は、ＤＮＡの膜厚が約3nm
以上厚い場合は、測定が不可能となるが、ＡＦＭの場合
は、ＤＮＡの膜厚が3nm以上厚い場合でも観測可能であ
る。
【００２２】図１の場合の塩基と標識分子の関係は、チ
ミンＴに対してデオキシシトシン三りん酸ｄＡＴＰ、シ
トシンＣに対してデオキシシトシン二りん酸ｄＧＤＰ、
グアニンＧに対してデオキシシトシン一りん酸ｄＣＭ
Ｐ、そしてアデニンＡに対しては標識分子なしという組
合せであったが、各塩基が区別されれば良いのであるか
ら、他にも多くの組合せが考えられる。
ミンＴに対してデオキシシトシン三りん酸ｄＡＴＰ、シ
トシンＣに対してデオキシシトシン二りん酸ｄＧＤＰ、
グアニンＧに対してデオキシシトシン一りん酸ｄＣＭ
Ｐ、そしてアデニンＡに対しては標識分子なしという組
合せであったが、各塩基が区別されれば良いのであるか
ら、他にも多くの組合せが考えられる。
【００２３】以下に、もう１つの例を示す。図３では、
アデニンＡに対してのみ標識分子チミジン一りん酸ＴＭ
Ｐを結合させた。この例はある塩基種のみの位置を確認
することを目的にしたのである。この場合のように特定
の塩基に対してのみＨＢＬ処理をすることも可能であ
る。
アデニンＡに対してのみ標識分子チミジン一りん酸ＴＭ
Ｐを結合させた。この例はある塩基種のみの位置を確認
することを目的にしたのである。この場合のように特定
の塩基に対してのみＨＢＬ処理をすることも可能であ
る。
【００２４】
【発明の効果】本発明によれば、遺伝子のクロ−ニング
や増幅処理、さらには繁雑な酵素処理や分析処理なしに
ＤＮＡの塩基配列決定が可能になるので、人間のゲノム
解析（ヒトゲノム解析）が、現行の方法（マクサム−ギ
ルバ−ト法や、ジデオキシ法など）より、迅速化され
る。また、ＤＮＡまたはＲＮＡの基本特性の学術的研究
においても、汎用性のある（ＤＮＡにとって無害で、可
逆的ラベル分子の使用）標識法として利用される。
や増幅処理、さらには繁雑な酵素処理や分析処理なしに
ＤＮＡの塩基配列決定が可能になるので、人間のゲノム
解析（ヒトゲノム解析）が、現行の方法（マクサム−ギ
ルバ−ト法や、ジデオキシ法など）より、迅速化され
る。また、ＤＮＡまたはＲＮＡの基本特性の学術的研究
においても、汎用性のある（ＤＮＡにとって無害で、可
逆的ラベル分子の使用）標識法として利用される。
【図１】制限酵素ＨｉｎｃIIで切断したΦＸ１７４の７
９bp部分の一部にＨＢＬ処理を施したモデル図。
９bp部分の一部にＨＢＬ処理を施したモデル図。
【図２】図１で示した一本鎖ＤＮＡと相補的なＤＮＡに
ＨＢＬ処理を施したモデル図。
ＨＢＬ処理を施したモデル図。
【図３】制限酵素ＨｉｎｃIIで切断したΦＸ１７４の７
９bp部分の一部に他の異なった形のＨＢＬ処理を施した
モデル図。
９bp部分の一部に他の異なった形のＨＢＬ処理を施した
モデル図。
Claims (3)
- 【請求項１】デオキシリボ核酸ＤＮＡまたはリボ核酸Ｒ
ＮＡの塩基配列を決定する方法において、これらを構成
する各塩基種を水素結合を介して、塩基特異的な化学種
で標識した後、ＤＮＡあるいはＲＮＡの個々の塩基と化
学種の結合状態の外形を観測することを特徴とする塩基
配列決定法。 - 【請求項２】標識化学種として、ＤＮＡならば、アデニ
ン、シトシン、グアニン、チミンのいずれかと、ＲＮＡ
ならばアデニン、シトシン、グアニン、グリシンのいず
れかと水素結合を形成する能力を有する化学種を使用す
ることを特徴とする請求項１記載の塩基配列決定法。 - 【請求項３】観測手段として走査型電子顕微鏡、走査型
トンネル顕微鏡または原子間力顕微鏡を使用することを
特徴とする請求項１記載の塩基配列決定法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4046687A JPH05244997A (ja) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | Ｄｎａまたはｒｎａの塩基配列決定法 |
| US08/025,997 US5470707A (en) | 1992-03-04 | 1993-03-04 | Hydrogen bond labeling and base sequence determination methods for DNA or RNA |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4046687A JPH05244997A (ja) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | Ｄｎａまたはｒｎａの塩基配列決定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05244997A true JPH05244997A (ja) | 1993-09-24 |
Family
ID=12754292
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4046687A Pending JPH05244997A (ja) | 1992-03-04 | 1992-03-04 | Ｄｎａまたはｒｎａの塩基配列決定法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5470707A (ja) |
| JP (1) | JPH05244997A (ja) |
Cited By (2)
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